Оптимізація умов культивування Chlamydia trachomatis та Chlamydophila pneumoniae на перещеплюваних лінійних культурах

21. Джораєва С. К. Культуральні особливості C.trachomatis та C.pneumoniae / С. К. Джораєва // Актуальні питання гігієни, екології, епідеміології та держсанепіднагляду на сучасному етапі : матеріали Х підсумкової науково-практичної конференції Державної санітарно-епідеміологічної служби Полтавської області. - Полтава, 2008. - С. 152.

АНОТАЦІЯ

Джораєва С.К. Оптимізація умов культивування Chlamydia trachomatis та Chlamydophila pneumoniae на перещеплюваних лінійних культурах. - Рукопис.

Дисертація на здобуття наукового ступеня кандидата медичних наук за спеціальністю 03.00.07 - мікробіологія. - ДУ „Інститут мікробіології та імунології ім.І.І.Мечникова Академії медичних наук України”, Харків, 2010.

Дисертацію присвячено вирішенню сучасної наукової задачі, яка полягає у підвищенні ефективності інтродукції, виявлення, виділення та пасивування збудників хламідіозів з урахуванням виду мікроорганізму, особливостей уражень органів та систем організму людини, циклу розвитку мікробу шляхом оптимізації умов культивування на стабільних перещеплюваних клітинних лініях. Розроблено та впроваджено у практику обґрунтовані методи бактеріологічної діагностики хламідійних інфекцій, в залежності від осередку ураження та видової належності збудників.

Ключові слова: хламідії, клітинні лінії L929, McCoy та Hep-2, біологічний матеріал, виділення збудника, умови культивування мікроорганізму.

АННОТАЦИЯ

Джораева С.К. Оптимизация условий культивирования Chlamydia trachomatis и Chlamydophila pneumoniae на перевиваемых линейных культурах. - Рукопись.

Диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук по специальности 03.00.07 - микробиология. - ГУ «Институт микробиологии и иммунологии им. И.И.Мечникова АМН Украины», Харьков, 2010.

Диссертация посвящена решению современной научной задачи, которая заключается в повышении эффективности интродукции, выявления, выделения и культивирования возбудителей хламидийных инфекций с учетом особенностей поражения органов и систем организма, цикла развития и условий культивирования микроорганизма на перевиваемых клеточных культурах линий L929, McCoy и Hep-2.

Анализ литературных данных показал значительную распространенность заболеваний, вызванных хламидиями, которые характеризуются вариабельностью клинических проявлений, образованием множественных очагов поражения различных органов и систем организма, склонностью к бессимптомному течению и формированию хронических форм. Все это обуславливает поиск новых подходов к культуральной диагностике хламидиозов, которые позволяют не только установить этиологию воспалительного процесса, но и способствуют раскрытию механизмов взаимодействия между возбудителем и организмом.

Установлена целесообразность использования 3% раствора альбуцида для дезагрегации и элиминации клеточного монослоя линий L929 и Нер-2 с поверхности стеклянного субстрата. Показано, что 3% раствор альбуцида не проявляет выраженного цитотоксического действия по отношению к клеткам, активизирует скорость формирования монослоя, снижает количество клеток с морфологическими дефектами, а благодаря выраженному бактерицидному и бактериостатическому действию способствует деконтаминации клеточной культуры.

Экспериментально определена оптимальная доза синовиальной жидкости и инфицированных желточных мешков куриных эмбрионов для внесения в клеточный монослой для выделения возбудителя.

Доказано, что продуктивным способом для выделения возбудителя и накопления его биомассы стало использование питательной среды, содержащей L-цистеин-HCl (2,5 мг/л) и L-триптофан (20 мг/л). Количество клеток, содержащих морфологические структуры возбудителя, для тест-штамма C.trachomatis UGC, возросла до 86,6% (в контроле 35,6%; р<0,001) Культивирование хламидий на указанной питательной среде достоверно уменьшает количество клеток с признаками дегенерации (за счет действия циклогексимида) до 60,0% (контроль 78,4%; р<0,05).

Обоснована эффективность культивирования возбудителя на питательной среде 199 с дополнительным внесением в питательную среду L-триптофана (30 мг/л) и ZnSO4x7H20 (10-9 Моль/л). Количество клеток, содержащих включения возбудителя тест-штамма C.trachomatis UGC, составило 75,6% (в контроле 35,0%; р<0,001).

Показано, что лабораторный штамм C.trachomatis UGC обладает выраженным антиапоптозным действием в начале цикла развития возбудителя (0-24 часа). На более поздних сроках инфицирования (48-72 часа) выявлена резкая индукция апоптоза. Лабораторный штамм C.pneumoniae K 6 проявляет выраженный антиапоптозный эффект на протяжении 96 часов культивирования.

С помощью молекулярно-биологических и электронно-микроскопических методов исследования определена видовая принадлежность и морфологические особенности изолятов, выделенных из урогенитального тракта и экстрагенитальных очагов поражения. Доказано, что хламидии, выделенные из урогенитального тракта и синовиальной жидкости коленного сустава, относятся к представителям вида С. trachomatis. Хламидии, выделенные из операционного сегмента аорты и магистральных сосудов нижних конечностей, принадлежат к виду С. рneumoniae.

Разработанные способы выделения и культивирования возбудителя на стабильных перевиваемых клеточных культурах с учетом биологических свойств микроба, цикла его развития, особенностей биотопа вегетирования и проявления патогенного действия позволяют повысить эффективность бактериологической диагностики хламидийной инфекции.

Ключевые слова: хламидии, клеточные линии L929, McCoy и Hep-2, биологический материал, выделение возбудителя, условия культивирования микроорганизма.

SUMMARY

Dzhoraeva S.K. Cultivation condition optimization of Chlamydia trachomatis and Chlamydophila pneumoniae using the interweaving cells. - Manuscript.

The thesis for the competition of the scientific degree of the candidate of medical science on speciality 03.00.07 - microbiology. - State Establishment «Institute of microbiology and immunology of I.I.Mechnikov of the Academy of medical science of Ukraine», Kharkiv, 2010.

The thesis is devoted to the solution of the contemporary scientific problem consisting in the increase of the effectiveness of the invasion, detection, isolation and cultivation of the agents of chlamydial infection depending on the species, the particular features of the lesion of organs and the systems of organism, the cycle of development by cultivation condition optimization of the microorganism in the system of interweaving cell cultures lines L 929, McCoy and Hep-2. Scientifically proved methods of the bacteriological method diagnosis of chlamydial infection taking into consideration the features of the lesion and the specific belongings of agents have been elaborated and put into practice.

Key words: chlamydiae, cell lines L929, McCoy and Hep-2, biological material, agent isolation, conditions of microorganism cultivation.

Размещено на Allbest.ru