Главная Коллекция "Revolution" Биология и естествознание Гігієнічна оцінка антимікробної дії композитів з наночастками срібла

Гігієнічна оцінка антимікробної дії композитів з наночастками срібла

Методи дослідження антимікробної активності наночасток срібла та композитів на їх основі. Антимікробна дія та фізичні параметри композиту на основі каоліну та наночасток срібла. Оцінка ефективності антимікробної дії композитів з наночастками срібла.

Рубрика	Биология и естествознание
Вид	диссертация
Язык	русский
Дата добавления	02.12.2017
Размер файла	1,5 M

посмотреть текст работы

скачать работу можно здесь

полная информация о работе

весь список подобных работ

Отправить свою хорошую работу в базу знаний просто. Используйте форму, расположенную ниже

Студенты, аспиранты, молодые ученые, использующие базу знаний в своей учебе и работе, будут вам очень благодарны.

Страница:

Серед багатьох мінералів, які застосовуються в композитах з наносріблом, до найбільш перспективних слід віднести білу глину. Біла глина (Bolus alba) (каолін, або китайська глина) справедливо розглядається як природний нанооб'єкт. Серед численних різновидів глин тільки білі каолінітові глини безпечні за своєю структурою та енергетикою для слизової шлунково-кишкового тракту та раньових поверхонь. Завдяки своїй м'якій, щадній дії білі глини були дозволені Фармакологічним комітетом колишнього СРСР (ГФ СССР, изд. 10-е, М., 1969, с. 140, № 109 Bolus alba) та інших країн для внутрішнього вживання. Це відкриває широку дорогу до застосування білої глини в медицині.

З фізичної точки зору доцільно використання високодисперсних фракцій глини, а також розробка методів для отримання якомога більше нанорозмірних часток в її гранулометричному складі. Звідси витікають перспективи використання каоліну в різних галузях нонотехнології з перевагою його як природної сполуки, хімічний склад якої та біоенергетична властивість споріднені з організмом людини. Крім того, глинисті мінерали мають високу адсорбційну та іонообмінну активність, що відповідає вимогам до ентеросорбентів [119]. В сучасній медицині ентеросорбції приділяється велика увага як природному методу зв'язування та видалення з організму екзо- та ендотоксинів.

Біла глина - це суміш різних мінералів які відносяться до алюмосилікатів. Її основний компонент - каолініт (85,0 - 95,0 %), в якому співвідношення SiO₂ та Al₂O₃ найменше (близько 1:2). Крім каолініту глина, як правило, у своєму складі має монтморилоніт, кварц, слюду, а також може містити польовий шпат, іліт, ілменіт, гематит, боксит та інші компоненти в незначних кількостях. Крім кремнію та алюмінію до складу білої глини входять магній, залізо, кальцій, фосфор, цинк, літій, мідь, берилій, кобальт, молібден та деякі інші мікроелементи, необхідні живому організму.

Основна складова каоліну - каолініт. Сформований із гірських порід під впливом атмосферних факторів. Має білий, сіро-білий або злегка забарвлений колір. Складається з тонких, гнучких пластинок триклинного кристалу з діаметром 0,2-12 мкм. З урахуванням такої високої дисперсності глину відносять до природних наноматеріалів. Питома поверхня 1 г глини досягає 150 м². Кристали каоліну складаються з багатьох шарів декількох видів накладання та мають два типи зарядів: позитивний і негативний.

Глина має значний катіонний обмін, об'єм якого залежить від розміру часток, в той же час швидкість обміну дуже висока, майже миттєва. Але при наявності високодисперсних фракцій ємність катіонного обміну не залежить від розміру часток, оскільки їх певна кількість представлена домішками монтморилоніту, що володіє великою обмінною ємністю та адсорбційною активністю. Крім того, високодисперсні фракції значно підвищують загальну площу часток. Каолін активно адсорбує невеликі молекули, такі як лецитин, хінолін, паракват, дикват, а також протеїни, поліакрилонітрил, бактерії і віруси [120 - 126]. Адсорбовані речовини і мікроорганізми можуть бути легко видалені з більшості видів глин, оскільки адсорбція здійснюється поверхневими структурами часток глини.

Специфічність взаємодії мікроорганізмів і часток адсорбенту залежить від багатьох факторів: величини заряду, просторової орієнтації і характеру структурних груп обох об'єктів. До складу бактеріальної клітинної стінки входять пептидоглікани, частина з яких має позитивний заряд, що забезпечує їх взаємодію (адсорбцію) з неорганічними частинами глини, оскільки кристали каолініту, як було вказано вище, мають два заряди - позитивний та негативний.

Глину відносять до універсальних лікувальних факторів, які застосовували з давніх-давен при різноманітних захворюваннях поверхневих покривів людини, опорно-рухового апарату, внутрішніх органів як соматичного, так й інфекційного походження. Глину застосовують у вигляді зовнішніх аплікацій, ванн та шляхом прийому всередину в якості ентеросорбенту. Глина виконує не тільки роль детоксиканта, а й постачальника кремнію та багатьох мікроелементів [127].

Глини як ефективні адсорбенти проявляють фізичну і хімічну взаємодію з мікроорганізмами. Вони адсорбують практично всі види мікроорганізмів. При цьому потрібно розмежувати глини, які є антибактеріальними і неантибактеріальними. Під час взаємодії часток глини з поверхнею мікробної клітини відбувається, перш за все, фізичний процес адсорбції - це виявлення дії електростатичних сил. Цей процес зворотній, і мікроорганізм зберігає свою життєздатність. Але така взаємодія може привести і до порушення життєво важливих функцій мікроба (утруднити пасивне і активне поглинання необхідних поживних речовин, пошкодити клітинну оболонку, послабити вихід метаболітів). В дослідженнях МО не гинули при простій фізичній взаємодії з глиною [128]. Коли сухі глини накладали на колонії мікроорганізмів, вони залишалися життєздатними. Але деякі з досліджених глин ставали антибактеріальними, коли вони були гідратовані: E. coli гинули від взаємодії розчинних складових глини, токсичних для бактерій. За даними літератури, лише деякі родовища містять бактерицидні глини. Кожне родовище антибактерільних глин відрізняється за мінеральним складом, але у всіх є спільне - наявність розчинних мінералів і збагачення залізом. Середній діаметр кристала антибактеріальних глин < 200 нм, що на порядок менше за стандартні еталонні зразки. Автори відмічають складність хімічних і біохімічних реакцій, які призводять до загибелі мікроорганізмів. Метали, які входять до складу глин і розчинені у глиняних суспензіях, мають різну біодоступність. Процес переносу елементів глини через клітинну мембрану супроводжується багаточисельними хімічними реакціями і формуванням високо реактивних проміжних радикалів, які залежать від мінералогії і будови оболонки клітини. Один з механізмів бактерицидності обумовлений тим, що бактерицидні глини постачають додатковий йон Fe²⁺у бактеріальну клітину, де відбувається його окиснення, і це супроводжується продукцією гідроксильних радикалів, які викликають деструктивні зміни в клітині [129].

Продукування гідроксильних радикалів може бути посилене далі через біохімічне відновлення Fe³⁺. Kohanski et al. [130] показали, що продукування внутрішньоклітинніх гідроксильних радикалів є основним механізмом загибелі клітин за дії синтетичних антибіотиків. Зроблено припущення, що глини діють подібним чином.

Williams L.B., Haydel S.E. et al. [131] також відмічають, що бактерицидний механізм дії глин не є фізичним, а хімічним (перенос електронів, хімічна реакція тощо). Хімічні зміни все ще знаходяться в стадії вивчення. Зокрема, експерименти з катіонного обміну (одна з важливих властивостей глини) показали, що антибактеріальний ефект глини може бути зміненим, якщо використовувати взаємозамінні катіони. В результаті автори роблять висновок, що рН та окисно-відновні реакції, які відбуваються в суспензії глини і клітинній оболонці бактерій, є ключовими у механізмі антимікробної дії.

Більшість антибактеріальних глин спричиняє деструктивну дію на широкий спектр бактерій: E. coli, P. aeruginosa, S. aureus, S. typhimureum та їх антибіотикостійкі варіанти. Так, спостерігали загибель E. coli з широким спектром бета-лактамази а також S. aureus, стійкого до метициліну [132 - 134]. Чутливість антибіотикорезистентних бактерій до антимікробних глин робить їх застосування в медицині досить перспективним. Зокрема, для лікування ран. Регенерація тканини при одночасній дії антибактеріальної глини залишається досі на з'ясованою [135]. Перспективним є використання таких глин для лікування інфекцій, до яких немає ефективних антибіотиків, наприклад, виразки Бурулі [136], а також при інфекціях, що викликані не тільки антибіотикорезистентними збудниками, а більш широко - при багатьох інфекційних процесах, особливо якщо врахувати відносну дешевизну глини порівняно з антибіотиками, відсутність токсичності і одночасне збагачення організму кремнієм і багатьма мікроелементами.

Спостерігалась також задовільна адсорбція фагів Т7 смектитовою глиною, в основному дрібнодисперсними фракціями [137]. Бактеріофаги MS2 і Phix 174 добре адсорбувалися кремнієм бетонітом в умовах статики і динаміки за (4+1) °С і (25+1) °С. Автори зробили висновок, що глини перспективні для видалення вірусів з водних розчинів. Більш широко використання глин для очистки води представлено в монографії Ю.І. Тарасевич [138].

В наш час білу глину розглядають також як складову нанокомпозитів завдяки малим розмірам та наявності пор між контактуючими частинками каолініту. Прикладом може бути композит з наночастинками срібла [139]. Адсорбція бактерицидних елементів (Ag, Cu, Co, Zn) на кристалічних поверхнях часток глини також надає їй антимікробної властивості [140, 141].

Таким чином, наведені відомості наукової літератури наочно демонструють зацікавленість вчених багатьох країн до розробки та застосування композитів різного складу з органічними та неорганічними наповнювачими антимікробної направленості, як правило за рахунок наносрібла.

З проаналізованих нами даних щодо складу композитів надано перевагу сполукам срібла з мінералами, оскільки обидві складові виконують важливі функції: антимікробну, дезінфекційну та постачальника в організм мікро- та макроелементів. На сьогодні вже є всі підстави більш широко вивчати застосування таких композитів не тільки при патологічних процесах шкіри та слизових оболонок, а й як ентеросорбентів при багатьох захворюваннях різної етіології.

РОЗДІЛ 2. ОБ'ЄКТИ І МЕТОДИ ДОСЛІДЖЕННЯ

2.1 Об'єкти дослідження

В роботі були досліджені антимікробні властивості композитів з НЧ срібла «Срібний щит-1000» та антибіотиками, тканин, імпрегнованих НЧ срібла і міді, та зразки композиційних систем на основі наночасток срібла і каоліну торгової марки «Кремневіт».

Композити на основі наночасток срібла та антибіотиків.

Складові композиту:

- антибіотик «Стрептоміцин» - порошок для розчину для ін'єкцій по 1,0 г, виробництва ВАТ «Київмедпрепарат», серія 200411, строк зберігання до 05.2014 р.;

- антибіотик «Канаміцин» - порошок для розчину для ін'єкцій по 1,0 г, виробництва ВАТ «Київмедпрепарат», серія 621010, строк зберігання до 11.2013 р.;

- антимікробний препарат «Офлоксацин» - розчин для інфузій, 2 мг/см³, виробництва «Юнік Фармасьютикал Лабораторіз», Індія, серія PFV 1003;

- антибіотик «Азитроміцин» - порошок ліофілізований для приготування розчину для інфузій 500 мг, виробництва «АЛЕМБІК ЛІМІТЕД», Індія, серія 10270011;

- антибіотик «Цефазолін» - порошок для розчину для ін'єкцій по 1,0 г, виробництва ТОВ «Авант», серія 10661010;

- концентрований колоїдний розчин наносрібла в гліцерині «Срібний щит-1000», в основі якого - металеве срібло (Ag, ГОСТ 6836-2002), дисперговано за допомогою модуля плазмового диспергування. «Срібний щит-1000» розроблено в Інституті надтвердих матеріалів ім. В.М. Бакуля НАНУ та отримано одностадійним фізичним способом приготування висококонцентрованих колоїдних розчинів ультрадисперсних часток електропровідних матеріалів на основі водорозчинних і неводорозчинних речовин та розчинник гліцерин (C₃H₇O₃) [142]. Концентрований колоїдний розчин «Срібний щит-1000» - темно-сіра прозора рідина з концентрацією наночасток срібла 60 мг/л та розміром часток срібла 10-80 нм. Випуск розчину проводять у відповідності до вимог ТУУ 05417377-13-09. Клас безпеки розчину, за ДСТУ 12.1.007-76, - 4, згідно з Токсиколого-гігієнічним паспортом МОЗ України від 04.06.09 р. (при введенні у шлунок та нанесенні на шкіру не представляє небезпеки).

Мінімальну інгібуючу концентрацію антимікробного препарату «Офлоксацин» визначали серед розчинів з концентраціями препарату 200, 20, 2,0, 0,2, 0,1, 0,05, 0,25 та 0,0125 мкг/см³.

Мінімальну інгібуючу концентрацію антимікробного препаратів «Азитроміцин» та «Цефазолін» визначали серед розчинів з концентраціями антибіотика 200, 100, 25, 12,5, 6,25, 3,125, 1,56, 0,78, 0,39 мкг/см³.

Антимікробну дію концентрованого колоїдного розчину срібла в гліцерині «Срібний щит-1000» визначали в розбавленнях препарату 1 : 2; 1 : 3, 1 : 4, 1 : 5, 1 : 8, 1 : 16, 1 : 32, 1 : 64 (30,0 мкг/см³, 20,0, 15,0, 12,0, 7,5, 3,75, 1,87, 0,937 відповідно).

В комбінаціях використовували всі вказані концентрації антимікробних препаратів та розведення срібла.

Вивчення антимікробних властивостей антимікробних препаратів проводили методом серійних розведень у рідких живильних середовищах. Робочі розведення зразків готували з використанням буферного розчину рН 7,0. Температура розчинів всіх дослідних зразків становила (20,0 ± 1) °С.

Тканини, імпрегновані наночастками срібла або міді

Імпрегновані НЧ срібла та міді тканини були отримані науковцями Інституту хімії поверхні ім. О.О. Чуйка НАНУ у співавторстві із співробітниками ДУ ІГМЕ НАМНУ [143, 144].

Бактерицидний матеріал з НЧ Ag або Cu отримано шляхом термічного відновлення іонів срібла або міді на поверхні бавовняних тканин. Спосіб одержання бактерицидного матеріалу з НЧ реалізувався в три етапи. Перший етап включав в собі приготування водних розчинів нітратів срібла або сульфату міді у концентраціях 10786,82 мг/л, 1078,68 мг/л, 107,86 мг/л, 10,78 мг/л (10,79, 1,08, 0,11, 0,01 мг/см³ відповідно). Другий етап - вимочування тканин у відповідних розчинах протягом 15 хвилин. Третій етап - термообробка тканини металевою поверхнею, розігрітою від 205 до 225 єС до появи жовтого кольору тканини. Процес термообробки не є довготривалим. В умовах отримання невеликої кількості бактерицидного матеріалу термообробка бавовняних тканин, просочених водними розчинами нітратів Ag або Cu, проводилася побутовою праскою.

Композит на основі наночасток срібла та «Кремневіту»

Об'єктом дослідження був зразок каоліну торгової марки «Кремневіт» [145]. Зразок за якістю відповідав вимогам Державної фармакопеї України, перше видання, 2011 р.

«Кремневіт» був підданий глибокій очистці шляхом застосування технічного прийому, який дозволяє виловлювати частки, що наближаються до нанорозмірів, та максимально зменшує концентрацію домішок кварцу та слюди.

Каолін (біла глина) являє собою полідисперсну систему з вираженою електростатичною взаємодією часток, за рахунок чого утворюються агломерати з поліморфною структурою. Для визначення гранулометричного складу «Кремневіту» готували суспензії на фосфатно-буферному розчині з рН 8,2 у концентраціях 1,0; 0,1 і 0,01 %. Зразки обробляли ультразвуком на приладі УЗДНА-А з робочою частотою генератора та випромінювача 22 кГц протягом 3 та 5 хв, інтенсивність - 7, синхронізація - 7.

Визначення розмірів частинок проводили співробітники Національного університету харчових технологій НАНУ на аналізаторі Zetasizes NanoZS, використовуючи для розсіювання світла лазер He-Ne, 4 мВт, 633 нм, крім цього, визначено фазовий склад «Кремневіту» на дифрактометрі ДРОН-3, з використанням Сr_ka випромінювання методом рентгенофазного аналізу.

Для отримання НЧ Ag був використаний фізичний метод випаровування і конденсації металевого срібла у вакуумі, розроблений в Інституті електрозварювання ім Е.О. Патона НАНУ.

Композит з НЧ Ag та каоліну розроблено співробітниками ДУ ІГМЕ НАМНУ та отримано в Міжнародному Центрі електронно-променевих технологій при Інституті електрозварювання ім Е.О. Патона НАНУ [146]. Нагрівання срібла та високодисперсне випаровування, проведене електронним променем, який генерувався електронно-променевою гарматою, з послідовним фізичним осадженням парової фази на підложку з препарату білої глини «Кремневіт».

Тест-штами мікроорганізмів

Дослідження проводили з використанням наступних тест-мікроорганізмів:

- Staphylococcus aureus ATCC 6538 (S. aureus);

- Escherіchіa colі K12 NCTC 10538 (E. coli);

- Pseudomonas aeruginosa ATCC 15442 (P. aeruginosa);

- Candida albicans ATCC 10231 (C. аlbicans).

В залежності від виду експерименту, для виготовлення робочих суспензій мікроорганізмів, у якості розчинника використовували фосфатний буферний розчин рН 7,0 або дистильовану воду.

Для культивування тест-штамів та проведення всіх експериментів були використані однакові живильні середовища, ростові властивості та стерильність яких були перевірені перед початком досліджень:

- триптон-соєвий агар (ТСА) виробництва HiMedia» (Індія) - для визначення кількості бактерій;

- агар Сабуро виробництва HiMedia» (Індія) - для визначення кількості грибів.

Кількість бактерій у вихідній суспензії при використанні суспензійного методу визначали за оптичною густиною з використанням фотоелектроколориметру (КФК -3) (довжина хвилі близько 620 нм, кювета довжиною 10 мм). Кількість клітин у вихідній суспензії становила від (1,5 · 10⁸) до (5,0 · 10⁸) КУО/см³(8,17 - 8,70 lg) для бактерій і від (1,5 · 10⁷) - до (5,0 · 10⁷) КУО/см³ (7,17 - 7,70 lg) - для грибів.

Посіви тест-штамів бактерій інкубували за температури (37,0 ± 1,0) °С протягом 24 - 48 год, дріжджеподібних грибів -за температури (30,0 ± 1,0) °С протягом 48 год.

2.2 Методи дослідження

Мікробіологічні методи дослідження.

Визначали бактерицидну активність композитів на основі наночасток срібла, антимікробних препаратів та складових композиційних систем, а саме: антимікробних препаратів «Офлоксацин» (група фторхінолони), «Азитроміцин» (група макроліди), «Цефазолін» (група цефалоспорини) - методом розбавлень; концентрованого колоїдного розчину наносрібла в гліцерині «Срібний щит-1000» - методом розведень, методом дифузії в агар, суспензійним методом.

Метод серійних розбавлень.

Метод серійних розбавлень [147] дає можливість визначити мінімальну інгібуючу та мінімальну бактерицидну концентрації випробуваного зразка для тест-мікроорганізмів, що характеризує його мікробіологічну активність.

Суть методу полягає у приготуванні ряду розбавлень у рідкому поживному середовищі із внесенням в усі розведення тест-мікроорганізму.

Інокулюм вносили в кожну пробірку так, щоб кінцева концентрація мікроорганізму в кожній пробірці досягала 10⁶- 10⁵ КУО/см³. Інокулюм вносили в пробірки з розбавляннями зразка не пізніше 15 хв з моменту його приготування.

Наявність або відсутність росту тест-штамів у присутності дослідних зразків здійснювали шляхом візуального контролю пробірок з помутнінням (наявності або відсутності росту мікроорганізмів) у поживному бульйоні.

За найменшу концентрацію препарату, яка гальмує ріст тест-культури (МІК), приймали останнє розбавлення дослідного зразка без помітних ознак помутніння рідкого поживного середовища, що свідчить про ріст мікроорганізмів

Для визначення бактерицидної концентрації із двох останніх пробірок з відсутністю видимого росту проводили посів на відповідне щільне поживне середовище. Через 24 години інкубації у термостаті за температури 35 °С відмічали ту найменшу концентрацію в пробірці, посів із якої не дав росту, яку й приймали за мінімальну бактерицидну концентрацію (МБК).

Метод дифузії в агар (метод лунок).

Метод дифузії в агар базується на здатності досліджуваного зразку, внесеного в лунки, дифундувати в агар в усіх напрямках [148]. Якщо на чашку з поживним середовищем, контамінованим тест-мікроорганізмом внести досліджуваний зразок, то навколо нього утворюється зона пригнічення росту.

Для визначення антимікробної дії зразків методом дифузії в агар розплавлене та охолоджене поживне середовище контамінували суспензією тест мікроорганізму. Мікробне навантаження складало 1 х 10⁷КУО/см³. По 20 см³контамінованого мікроорганізмами середовища розливали у чашки Петрі і залишали до застигання середовища. У товщі поживного середовища робили лунки за допомогою стерильного пробійника діаметром 8 мм. По 0,1 см³випробуваних зразків вносили в окремі лунки. Посіви інкубували в термостаті протягом 24 - 48 годин за температури 35є С. Після закінчення інкубації заміряли діаметри зон відсутності росту навколо лунок. Діаметр зони затримки росту залежить від здатності зразка дифундувати в агар, його концентрації та від чутливості тест-мікроорганізмів .

Визначення чутливості мікроорганізмів до антимікробних препаратів методом дифузії в агар (метод Кірбі-Бауера).

Середовище № 1 розливали по 20 см³у стерильні чашки Петрі (діаметр чашок 100 мм). Перед посівом поверхню середовища підсушували за кімнатної температури, для цього їх витримували при злегка відкритій чашці протягом 30-40 хв.

Для посіву використовували 18-20 - годинну агарову культуру бактерій. При використанні агарової культури її спочатку змивали невеликою (4-5 см³) кількістю фізіологічного розчину натрію хлориду. Необхідну концентрацію мікроорганізмів визначали на КФК-3, як викладено вище. Отриманий інокулят розводили в 10 разів ізотонічним розчином. Інокулят в об'ємі 1-2 см³наносили піпеткою на поверхню середовища, похитуючи чашку рівномірно розподіляли по всій поверхні середовища, надлишок інокуляту видаляли. Чашку підсушували протягом 10-15 хв та за допомогою пінцета накладали диски з антибіотиками. Культивували мікроорганізми за температури 35-37 °С протягом 18-20 год.

Для визначення результатів дослідження лінійкою вимірювали діаметр зони затримання росту мікроорганізмів з точністю до 1 мм, включаючи діаметр дисків. Результати оцінювали за розробленими стандартними таблицями, де зазначено межі значень діаметрів зон затримання росту мікроорганізмів для стійких, помірно стійких і чутливих штамів у міліметрах, а також значення мінімальних інгібуючих концентрацій (МІК) антибіотиків у мікрограмах на мілілітр розчину для помірно стійких і чутливих штамів мікроорганізмів.

Одержані значення діаметрів зон затримання росту мікроорганізмів порівнювали із зазначеними в таблиці й відносили досліджувані штами до однієї з трьох категорій чутливості.

Модифікований суспензійний метод [149].

Досвід вивчення антимікробної активності розчинів та готових до використання продуктів із вмістом наносрібла вказав на необхідність стандартизованого підходу щодо вибору мікробіологічного методу дослідження, в якому враховані фізико-хімічні властивості наночасток. Такий підхід дозволив провести об'єктивну оцінку та порівняльне вивчення антимікробної дії продуктів, що випускаються на основі наночасток. Отримання точних та відтворюваних результатів є одним з важливих елементів системи забезпечення якості випробувань. Дослідження розчинів з наносріблом необхідно проводити зважаючи на здатність наносрібла відновлюватись під дією світла, поєднуватись з хлорид-, фосфат- та білковими компонентами застосованих середовищ, утворюючи нерозчинні або малоактивні суміші.

Оптимальним методом визначення антимікробної активності розчинів з НЧ срібла виявився модифікований суспензійний метод. Перевагою останнього у порівнянні із досліджуваними методом розведень та методом дифузії в агар є використання у якості розчинника дистильованої води, що мінімізує інактивацію наночасток.

Випробування щодо визначення антимікробної активності розчинів з НЧ срібла суспензійним методом виконували за наступних умов. Розведення розчинів з наносріблом проводили стерильною дистильованою водою. Тестові мікроорганізми вирощували на щільних поживних середовищах, після чого розводили до суспензії з необхідною концентрацією, використовуючи стерильну дистильовану воду. До випробуваного зразка додавали суспензію тест-мікроорганізму у об'ємі, який забезпечував інокулум 10⁷ КУО/см³. Тривалість експозиції залежала від антимікробної активності зразка і складала від 5 хвилин до 24 годин. Експозицію та інкубацію експериментальних зразків проводили в затемненому місці із стабільним температурним режимом (18 - 25 ?С). Після закінчення терміну експозиції прововодився висів зразків поверхневим методом по 0,5 см³на відповідне щільне живильне середовище з основних розбавлень 10⁰, 10^-1 та додатковому - 10^-2- для зручності підрахунку отриманих результатів. У якості контролю тест-штамів використовували валідаційну суспензію із вмістом мікроорганізмів від (3,0 · 10²) до (1,6 · 10³) КУО /см³, що контролювалося висівом з розбавлення, отриманого таким чином, щоб кількість мікроорганізмів в 1 см³ становила від 30 до 160 КУО.

Підрахунок кількості мікроорганізмів виконували у разі наявності значимих результатів тестів на чашках, які не повині перевищувати 330 КУО. Підрахунок кількості тест-мікроорганізмів, які вижили в дослідній суміші в кінці експозиції, здійснювали шляхом розрахунку середніх значень двох чашок кожного з розведень в перерахунку на 1,0 см³.

Оцінка ефективності антимікробних тканин методом агарових пластин.

Наявність антимікробної дії у льняної тканини перевіряли методом агарових пластин» згідно Методы испытаний дезинфицирующих средств для оценки их безопасности и эффективности» (Москва, 1998 г.) [150].

В розтоплений та охолоджений до 45 єС ТСА вносили завісь тест-мікроорганізмів, яка містила 10 ⁸ КУО/см³, та розливали цю суміш у чашки Петрі. На поверхню застиглого агару накладали тест-зразки тканин розміром 2 x 2 см. Контролем слугували зразки тканин, які не містили антимікробних компонентів. Посіви поміщали в термостат за 37 єС. Облік результатів проводили через 24-48 годин. Оцінку антимікробної активності випробуваного матеріалу проводили за ступенем затримки росту мікроорганізмів на живильному агарі, вимірюваної від краю зразка до межі росту мікроорганізму (мм).

Визначення адсорбційної активності «Кремневіта» по відношенню до тест-мікроорганізмів.

Зразки Кремневіта в різних концентраціях у фізіологічному розчині з рН 7,2 ретельно струшували на змішувачі Vortex для отримання суспензії.

Адсорбційну активність зразків визначали по відношенню до E.coli та

S. aureus. Штами вирощували на стандартному живильному середовищі за (37±1) ⁰С протягом 18 год. Готували суспензії як вказано вище. В роботі використовували суспензію мікроорганізмів на рівні 10⁶ КУО/см³. У дослідних суспензіях глини і контролях створювали мікробне навантаження 10⁴ КУО/см³. Флакони з суспензіями глини і мікроорганізмами перемішували на Vortex при 1,0 тис. об/хв протягом однієї хв. На живильні середовища висівали по 0,1 см³отриманої суміші на дві паралельні чашки. Робили висіви з флаконів після перемішування суспензій (дослід) і контролів (фізіологічний розчин з мікроорганізмами), а також після центрифугування при 1000 об/хв протягом 10 хв.

Визначення впливу на адсорбційну активність «Кремневіту» концентрації зразку, наявності органічних сполук та концентрації водневих іонів (pH).

Мікробне навантаження визначали на рівні десятків тисяч E. coli та S. aureus в 0,1 см³0,1 % суспензії «Кремневіту». Досліди ставили як викладено вище.

Моделлю органічних сполук слугував альбумін коров'ячої сироватки, в концентраціях 0,03 та 0,3 %. Концентрація 0,3 %, за міжнародними стандартами, трактується як «високий рівень». До 0,1 % суспензії «Кремневіту» додавали 0,03 % чи 0,3 % альбуміну, струшували на Vortex 1 хв. Флакони з сумішшю залишали на 10 хв для контакту. Потім вносили той чи інший мікроорганізм, знову струшували і також залишали на 10 хв для взаємодії між частками глини, альбуміну та мікроорганізмами. В контрольний флакон «Кремневіт» не вносили. Виконували посів сумішей до та після центрифугування.

Для визначення впливу pH на адсорбцію «Кремневітом» мікроорганізмів, «Кремневіт» обробляли фосфатно-буферними розчинами з pH 2,0; 6,0; 7,0; 8,0; 9,0, значення яких відповідають pH різних відділів шлунково-кишкового тракту. Досліди ставили як зазначено вище. Контролем слугувала 0,1 % суспензія нативного «Кремневіту», контамінована тест-мікроорганізмами.

Паралельно визначали кількісний показник адсорбції «Кремневітом» альбуміну шляхом визначення перманганатної окислюваності у суміші, а також значення цього ж показника у водному розчині альбуміну.

Фізико-хімічні методи дослідження.

Електронно-мікроскопічні дослідження.

Електронно-мікроскопічні зображення композиту «Кремневіту» з НЧ срібла фіксували за допомогою проникаючого електронного мікроскопу (ПЕМ) JOEL JEM-100C з прискорюючою напругою 100 кВ. Програму Image J (NIH)⁴⁴ використовували для визначення розмірів кожної наночастинки на ПЕМ знімках. Аналізували, як правило, наночастки розміром від 14 до 1000 нм.

Отримані результати представлені у вигляді фотографій мікроструктур.

Електронно-мікроскопічні дослідження були виконані за сприяння Міжнародного Центру електронно-променевих технологій при Інституті електрозварювання ім. Е.О. Патона НАНУ.

Спектрометричний метод.

Спектри поглинання розчинів реєстрували в ультрафіолетовому випромінюванні (УФ) і видимій області за допомогою спектрофотометра Perkin-Elmer Lambda 35 у кварцевих кюветах завдовжки 1 см. Спектри дифузного відбиття зразків «Кремневіту» з НЧ срібла, реєстрували за допомогою спектрофотометру Perkin-Elmer Lambda 35 з інтегруючою сферою Labsphere RSA-PR-20 у діапазоні довжини хвиль 200 - 1000 нм. Як стандартний зразок порівняння використовували зразок «Кремневіту» без наночасток срібла. Спектри поглинання порошків були отримані з відповідних спектрів відбиття за формулою Кубелки-Мунка. Дослідження виконані в Інституті біохімії НАМНУ.

Концентрацію срібла визначали методом атомно-емісійної спектрометрії з індуктивно-звґязаною плазмою (АЕС-ИСП) на приладі Optima 2100 DV фирмы Perkin Elmer (США) за відповідним методом в Інституті медицини праці.

Визначення розмірів частинок «Кремневіту».

Визначення розмірів частинок «Кремневіту» проводили співробітники Національного університету харчових технологій НАНУ на аналізаторі Zetasizes NanoZS, використовуючи для розсіювання світла лазер He-Ne, 4 мВт, 633 нм.

РОЗДІЛ 3. ВИВЧЕННЯ ВЛАСТИВОСТЕЙ КОМПОЗИЦІЙ НА ОСНОВІ НАНОЧАСТОК СРІБЛА ТА АНТИБІОТИКІВ

3.1 Визначення антимікробної активності колоїдного розчину наносрібла «Срібний щит-1000» різними методами

За попередніми дослідженнями антимікробної активності композитів на основі наночасток срібла було встановлено, що на результати досліду впливають такі фактори, як властивості та концентрація самого наносрібла, фізико-хімічна характеристика та рН розчинника, рівень мікробного навантаження у досліді, наявність ростових та інгібуючих факторів середовища, яке використовується, тривалість та умови експозиції і інкубації тощо.

З метою встановлення оптимального методу, придатного для скринінгу антимікробної дії наночасток та композицій на їх основі, проведено порівняння мікробіологічних методів визначення бактерицидної активності моделі колоїдного розчину наносрібла «Срібний щит-1000».

3.1.1 Визначення бактерицидної активності колоїдного розчину наносрібла «Срібний щит-1000» методом розведень

Оскільки другою складовою композитів з наносріблом є антибіотики, для визначення бактерицидної активності колоїдного розчину наносрібла «Срібний щит-1000» був застосований метод визначення чутливості мікроорганізмів до антибіотиків - метод серійних розведень. Він дає можливість визначити мінімальну інгібуючу та мінімальну бактерицидну концентрації випробуваного зразка до тест-мікроорганізмів. Суть методу полягає у приготуванні ряду розведень у рідкому поживному середовищі із внесенням в усі розведення тест-мікроорганізму.

За узагальнюючими результатами досліджень, представленими в таблиці 3.1, МІК колоїдного розчину срібла «Срібний щит-1000» по відношенню до тест-штамів S. aureus, E. сoli, P. аeruginosa та C. albicans реєстрували при розведенні препарату у 3 рази (20 мкг/см³). Розведений у два рази розчин наносрібла (30 мкг/см³) володів МБК відносно тест-штамів S. aureus, E. сoli, P. аeruginosa, виключенням був тест-мікроорганізм C. аlbicans (при обліку результатів посіву на щільних поживних середовищах спостерігався ріст стійких колоній в незначній кількості).

Результати досліджень представлені в табл. 3.1.

Таблиця 3.1

Визначення антимікробної дії колоїдного розчину срібла «Срібний щит-1000» методом розведень

Розведення розчину «Срібний щит-1000», мкг/см³	Тест-штами
	S. aureus	E. coli	P. aeruginosa	C. albicans
	МІК	МБК	МІК	МБК	МІК	МБК	МІК	МБК
30,0	-*	-	-	-	-	-	-	+/-***
20,0	-	+	-	+	-	+	-	+
15,0	+**	+	+	+	+	+	+	+
12,0	+	+	+	+	+	+	+	+

Примітки:

1) * - відсутність росту тест-культур;

2) ** + наявність росту тест-культур;

3) *** +/- ріст стійких колоній в незначній кількості

У ході експериментів виявлено, що антимікробна дія колоїдного розчину срібла «Срібний щит-1000» має нестійкий характер по відношенню до використаних тест-штамів: результати серії експериментів мали деякі розбіжності та вказували на низьку бактерицидну активність. На нашу думку, НЧ срібла інактивувалися при зв'язуванні з хлоридами та білковими компонентами поживного середовища.

3.1.2 Визначення бактерицидної активності колоїдного розчину наносрібла «Срібний щит-1000» методом дифузії в агар

В умовах наших досліджень ми вважали за доцільне визначити придатність методу дифузії в агар для визначення антимікробної дії наносрібла при використанні наступних зразків:

- колоїдний розчин наносрібла «Срібний щит-1000»;

- розведення зразка колоїдного розчину наносрібла «Срібний щит-1000» 1 : 2 дистильованою водою (30 мкг/см³, рН 7,9);

- розведення зразка колоїдного розчину наносрібла «Срібний щит-1000» 1 : 2 фосфатним буферним розчином (30 мкг/см³, рН 8,1 );

- гліцерин (слугував контролем розчинника срібла).

Для визначення антимікробної дії колоїдного розчину наносрібла «Срібний щит-1000» використовували тест-мікроорганізм E. сoli АТСС 25922.

Результати досліджень представлені в таблиці 3.2.

Таблиця 3.2

Визначення антимікробної дії колоїдного розчину срібла «Срібний щит-1000» по відношенню до тест-мікроорганізму E. сoli методом дифузії в агар

Досліджуваний зразок	Зона затримки росту, мм
Колоїдний розчин наносрібла «Срібний щит-1000»	Відсутність зони
Розведення зразка колоїдного розчину наносрібла «Срібний щит-1000» 1 : 2 дистильованою водою (30 мкг/см3, рН 7,9 )	Відсутність зони
Розведення зразка колоїдного розчину наносрібла «Срібний щит-1000» 1 : 2 фосфатним буферним розчином (30 мкг/см3, рН 8,1 )	Відсутність зони
Гліцерин (контроль)	Відсутність зони

Як свідчать приведені в таблиці дані, в усіх досліджуваних зразках зони затримки росту були відсутні. Цей результат може свідчити про ускладнення дифундування в агар одного з компонентів колоїдного розчину наносрібла «Срібний щит-1000», який має в'язку консистенцію, пов'язану з гліцерином. Випробуваний метод не придатний для визначення бактерицидної активності колоїдного розчину наносрібла «Срібний щит-1000».

3.1.3 Визначення бактерицидної активності колоїдного розчину наносрібла «Срібний щит-1000» суспензійним методом

Суспензійний метод використовується для визначення специфічної активності дезінфекційних засобів відносно тест-мікроорганізмів. Нами протестовано можливість використання цього методу для визначення бактерицидної активності колоїдного розчину наносрібла «Срібний щит-1000»

Приготування робочих двократних розведень наносрібла здійснювали з використанням буферного розчину рН 7,0. В якості тест-мікроорганізму для визначення антимікробної дії колоїдного розчину наносрібла «Срібний щит-1000» використовували E. сoli у концентрації 10⁴ КУО/см³. Тривалість експозиції досліду складала 5 хв, 1, 2, 3 години. При проведенні випробування по 0,1 см³суспензії тест-мікроорганізму вносили у 5 см³кожної суміші робочих розведень. Зразки із розчинами інкубували за (20 ± 1) °С. Після закінчення часу експозиції прововодили висів зразків по 0,5 см³на дві чашки Петрі з щільним поживним середовищем ТСА, які інкубували при 36 °С протягом 24 годин. Для кожного розведення розраховували кількість КУО/см³. Результати випробувань колоїдного розчину наносрібла порівнювали з результатами контроля культури E. сoli, проведеного аналогічно досліду.

Результати досліджень представлені в таблиці 3.3.

Таблиця 3.3

Визначення антимікробної активності розчину «Срібний щит-1000» по відношенню до тест-мікроорганізму E. сoli суспензійним методом

Час експозиції	Концентрація наносрібла ( мкг/см3), КУО/см3	Контроль культури E. сoli
	30,0	15,0	7,5	3,75	1,875
5 хв	0	55	58	46	52	65
1 год	0	15	27	30	33	61
2 год	0	13	24	18	19	62
3 год	0	0	6	10	12	63

Проведені експериментальні дослідження з визначення антимікробної активності колоїдного розчину «Срібний щит-1000» показують, що тест-мікроорганізм E. сoli чутливий до дії нанопрепарату у концентраціях від 30 до 15 мкг/см³. Експозиція протягом 3 годин спичиняла бактерицидну дію на тест-мікроорганізм. У концентраціях 3,75 мкг/см³ та 1,875 мкг/см³ за цей час відбувалося стійке зниження мікробного навантаження.

3.2 Вивчення антимікробної дії композицій на основі наночасток срібла та антибіотиків

За результатами випробувань антимікробної дії колоїдного розчину срібла «Срібний щит-1000» оптимальним методом дослідження виявився суспензійний метод. Визначення МІК та МБК антимікробних препаратів як складових композиту проводили методом серійних розведень, який застосовується для визначення чутливості мікроорганізмів до антибіотиків.

Проведено оцінку та порівняння антимікробної діі колоїдного розчину наносрібла «Срібний щит-1000», антимікробних препаратів різних груп (аміноглікозиди, фторхінолони, макроліди, цефалоспорини) та композитів на їх основі. Досліджували композити: наносрібло + «Стрептоміцин», наносрібло + «Канаміцин», наносрібло + «Левофлоксацин», наносрібло + «Офлоксацин», наносрібло + «Азитроміцин», наносрібло + «Цефазолін».

За результатами досліджень антимікробної активності складових композитів, наносрібла та антимікробних препаратів, визначали концентрації для поєднання їх у композиційній суміші.

Композити отримували шляхом обґєднання розчинів колоїдного наносрібла та антибіотику у визначених концентраціях. У якості розчинника компонентів композиту використовували стерильну дистильовану воду.

3.2.1 Визначення антимікробної дії антибіотиків, як складових композитів

«Стрептоміцин», який відноситься до групи аміноглікозидів, є антибіотиком з широким спектром антибактеріальної дії. Він добре розчинний у воді та зберігає свою активність за рН розчинів від 4,0 до 7,0 протягом двох - трьох місяців. За даними літератури, пригнічення росту більшості грампозитивних та грамнегативних мікроорганізмів спостерігалося при концентраціях цього антибіотика 10 - 100 мкг/см³.

Антибіотик групи аміноглікозидів «Канаміцин» - також високоактивний відносно більшості грампозитивних і грамнегативних мікроорганізмів. Оптимальна дія канаміцину спостерігається за рН розчинів 7,6-8,0, необхідна концентрація для пригнічення росту мікроорганізмів 15 - 100 мкг/см³.

Антимікробну активність антимікробних препаратів «Офлоксацин», «Азитроміцин», «Цефазолін» (складових композитів) визначали, як було вказано, методом серійних розведень по відношенню до тест-мікроорганізмів

S. aureus та E. coli.

Фторхінолони, до яких відноситься «Офлоксацин», мають широкий спектр протимікробної дії щодо більшості грамнегативних мікроорганізмів. Серед грампозитивних мікроорганізмів Staphylococcus spp. є чутливішими до фторхінолонів, ніж Streptococcus spp., Enterococcus spp., Listeria spp. Механізм дії фторхінолонів - пригнічення ключового фермента бактеріальної клітини ДНК-гірази (топоізомерази ІІ), що причетна до процесу нормального синтезу ДНК і поділу клітини.

Макроліди, до яких належить «Азитроміцин», це антибіотики, які в основі молекули містять макроциклічне лактонне кільце, пов'язане з одним чи кількома вуглеводневими залишками. Макроліди є резервними антибіотиками, до яких чутливі грампозитивні, грамнегативні коки, мікоплазми, бруцели, рикетсії, клостридії, коринебактерії. Неактивні по відношенню до грамнегативних бактерій, вірусів, грибів. Діють бактеріостатично.

Цефазолін, який належить до групи цефалоспоринів, напівсинтетичний антибіотик, ядро молекули якого складає 7-аміноцефалоспоринова кислота. Це антибіотик широкого спектру дії. Подібно до групи препаратів пеніциліну, пригнічує біосинтез клітинної оболонки, але має більше точок для взаємодії на оболонці та виявляє бактерицидну дію.

Вивченя антимікробної дії антимікробних препаратів, як складових композитів, проводили суспензійним методом. Результати проведених досліджень представлені в таблицях 3.4 - 3.7.

Таблиця 3.4

Визначення антимікробної дії антибіотика «Стрептоміцин»

Концентрація антибіотика, мкг/см3	Тест-мікроорганізми
	S. aureus	E. coli	P. aeruginosa	C. albicans
	МІК	МБК	МІК	МБК	МІК	МБК	МІК	МБК
100,0	-*	-	-	-	-	-	-	-
25,0	-	+	-	+	-	+	-	+
10,0	+**	+	+	+	+	+	+	+
5,0	+	+	+	+	+	+	+	+
1,0	+	+	+	+	+	+	+	+
0,5	+	+	+	+	+	+	+	+
0,1	+	+	+	+	+	+	+	+

Примітки:

1) * - відсутність росту тест-культур;

2) ** + наявність росту тест-культур.

Як свідчать дані таблиці 3.4, МБК антибіотика «Стрептоміцин» -

100 мкг/см³ по відношенню до всіх використаних в експерименті тест-штамів, а МІК - на рівні 25 мкг/см³.

Таблиця 3.5

Визначення антимікробної дії антибіотика «Канаміцин»

Концентрація антибіотика, мкг/см3	Тест-мікроорганізми
	S. aureus	E. coli	P. aeruginosa	C. albicans
	МІК	МБК	МІК	МБК	МІК	МБК	МІК	МБК
100,0	-*	-	-	-	-	-	-	-
25,0	-	+	-	+	-	+	-	+
10,0	+**	+	+	+	+	+	+	+
5,0	+	+	+	+	+	+	+	+
1,0	+	+	+	+	+	+	+	+
0,5	+	+	+	+	+	+	+	+
0,1	+	+	+	+	+	+	+	+

Примітки:

1) * - відсутність росту тест-культур;

2) ** + наявність росту тест-культур.

Як свідчать дані таблиці 3.5, МБК антибіотика «Канаміцин» складає 100 мкг/см³ по відношенню до всіх використаних в експерименті тест-штамів, а МІК - на рівні 25,0 мкг/см³. Тобто, антимікробна дія обох антибіотиків групи аміноглікозидів рівнозначна стосовно використаних нами штамів мікроорганізмів.

Таблиця 3.6

Визначення антимікробної дії антимікробного препарата «Офлоксацин»

Концентрація зразка, мкг/см3	Антимікробний препарат / тест-мікроорганізми
	«Офлоксацин»
	S. aureus	E. coli
	МІК	МБК	МІК	МБК
200,0	-	-	-	-
20,0	-	-	-	-
2,0	-	-	-	-
0,2	-	-	-	-
0,1	-	-	-	-
0,05	-	+	-	+
0,025	-	+	-	+
0,0125	+	+	+	+

Примітки:

1) * - відсутність росту тест-культур;

2) ** + наявність росту тест-культур.

Наведені в таблиці 3.6 дані свідчать що МБК препарату «Офлоксацин» реєструється на рівні 0,1 мкг/см³ по відношенню до всіх використаних в експерименті тест-штамів, а МІК - на рівні 0,025 мкг/см³.

Таблиця 3.7

Визначення антимікробної дії антибіотиків «Азитроміцин» та «Цефазолін»

Концентрація антибіотика, мкг/см3	Антибіотики / тест-мікроорганізми
	«Азитроміцин»	«Цефазолін»
	S. aureus	E. coli	S. aureus	E. coli
	МІК	МБК	МІК	МБК	МІК	МБК	МІК	МБК
1	2	3	4	5	6	7	8	9
200,0	-*	+	-	+	-	-	-	-
100,0	-	+	-	+	-	-	-	-
25,0	-	+	-	+	-	-	-	-
12,5	-	+	-	+	-	+	-	+
6,25	-	+	-	+	-	+	-	+
3,125	-	+	+	+	-	+	-	+
1,56	+	+	+	+	-	+	+	+
0,78	+	+	+	+	+	+	+	+
0,39	+	+	+	+	+	+	+	+

Примітки:

1) * - відсутність росту тест-культур;

2) ** + наявність росту тест-культур.

Наведені в таблиці 3.7 дані свідчать, що МБК антибіотика «Цефазолін» визначається на рівні 25,0 мкг/см³ по відношенню до всіх використаних в експерименті тест-штамів, а МІК - на рівні 1,56 мкг/см³ по відношенню до тест-мікроорганізму S. aureus, та на рівні 3,125 мкг/см³ по відношенню до тест-мікроорганізму E. coli. У досліджуваного антибіотика «Азитроміцин» виявлено низьку МБК (> 200,0 мкг/см³). Тому, ми вважаємо, що даний зразок лікарського засобу не придатний для використання у якості компоненту композиту з наносріблом.

3.2.2 Визначення антимікробної активності композитів на основі наночасток срібла та антибіотиків

За результатами досліджень створювали композиційні суміші, до складу яких входили колоїдний розчин наносрібла «Срібний щит-1000» та антимікробні препарати «Стрептоміцин», «Канаміцин» «Офлоксацин» і «Цефазолін». Антимікробні препарати та колоїдний розчин срібла «Срібний щит-1000» поєднували у концентраціях на рівні МБК та нижчих.

Результати визначення антимікробної активності композитів на основі колоїдного розчину наносрібла «Срібний щит-1000» та антимікробних препаратів наведено в таблицях 3.8 - 3.12

...

Страница:

диссертация "Гігієнічна оцінка антимікробної дії композитів з наночастками срібла" скачать

Подобные документы

Значення газообміну для дітей 3-7 років
Обґрунтування особливостей газообміну в організмі дітей 3-7 років. Характеристика розвитку організму дитини дошкільного віку. Вікові особливості дихання дитини: будова, дихальні рухи, газообмін у легенях. Гігієнічна оцінка фізичного розвитку дитини.

курсовая работа [1,2 M], добавлен 25.09.2010
Дослідження динаміки зміни якості води у озері Басів Кут
Стан забруднення атмосферного повітря у Рівненський області. Оцінка екологічного стану озера Басів Кут. Вимоги до якості води і методи гідрохімічних досліджень визначення органолептичних властивостей води. Дослідження якості поверхневих вод озера.

учебное пособие [739,8 K], добавлен 24.10.2011
Біохімічне дослідження процесу стомлення у підлітків
Біологічне значення стомлення, методи його дослідження. Вивчення біохімічних основ стомлення у підлітків та його діагностування доступними засобами. Виявлення зміни в активності слини учнів внаслідок стомлення під час фізичних та розумових навантажень.

курсовая работа [116,8 K], добавлен 21.01.2017
Методи мікробіології
Взаємодія барвників із структурами бактеріальної клітини. Ріст і розмноження бактерій. Культивування вірусів в організмі тварин. Фізичні методи дезінфекції. Гетерогенність популяцій мікроорганізмів. Бактеріостатичний, бактерицидний ефект дії антибіотиків.

контрольная работа [60,4 K], добавлен 24.02.2012
Дослідження особливості пристосувань рослин для запилення комахами
Проведення дослідження особливостей пристосувань певних видів рослин до ентомофілії. Оцінка господарської цінності, значення та можливості використання комахозапилення у практичній діяльності людини. Вивчення взаємної адаптації квитків та їх запилювачів.

контрольная работа [3,0 M], добавлен 11.11.2014
Склад та продукція фітопланктону р. Случ Житомирської області
Історія вивчення автотрофної компоненти річки Случ. Видове та внутрішньовидове різноманіття водоростевих угруповань. Еколого-географічна характеристика фітопланктону та оцінка якості води. Оцінка інформаційного різноманіття екологічного стану річки.

дипломная работа [2,5 M], добавлен 22.01.2015
Ідентифікація Coleochlamys-подібних водоростей наземних біотопів Антарктиди
Фізико-географічна характеристика Антарктиди. Перші дослідження Coleochlamys-подібних водоростей, їх морфологічний і молекулярно-філогенетичний аналіз. Водорості наземних біотопів району дослідження, їх загальний опис та оцінка екологічного значення.

курсовая работа [1,8 M], добавлен 21.06.2014
Дослідження придатності закритих водойм півдня України для вирощування білого амура (на прикладі рибогосподарського ставка в с. Кам’яна Балка Миколаївського району Миколаївської області)
Дослідження екологічних умов обстежуваної водойми, вмісту біогенних елементів в донних відкладах. Оцінка видового складу риб обстежуваного ставка та можливої конкуренції між видами. Результати біометричних та анатомічних спостережень білого амура.

курсовая работа [4,4 M], добавлен 12.02.2016
Будова, функції та методи дослідження мітохондрій
Мітохонрдрії як органоїди клітини, їх будова та функції. Розміри, форма, загальна схема організації мітохондрій. Локалізація ферментної системи мітохондрій. Методи дослідження мітохондрій: електронна мікроскопія; інтерференційне мікроскопування.

курсовая работа [398,9 K], добавлен 21.09.2010
Інтродукція парків м. Миколаєва
Географічне положення та історико-культурний потенціал м. Миколаєва. Дослідження видового біорізноманіття та ареалів походження деревних листяних інтродуцентів парків і скверів міста. Оцінка рясності насаджень, успішності та перспективності інтродукції.

курсовая работа [156,7 K], добавлен 19.04.2015
Морфологічні властивості мікроорганізмів
Основні концепції виду в бактеріології. Особливості визначення систематичного положення мікроорганізмів. Значення морфологічних властивостей в сучасній систематиці мікроорганізмів. Механізм ідентифікації мікроорганізмів на основі морфологічних ознак.

курсовая работа [5,8 M], добавлен 30.01.2016
Концепція нескінченності й космологічна еволюція
Космологічні моделі Всесвіту, наукові роботи О. Фрідмана, Г. Гамова. Стандартна модель еволюції Всесвіту на основі рівняння теорії відносності Ейнштейна та уявлення про кривизну простору. Філософсько-світоглядні проблеми космологічної еволюції.

реферат [21,1 K], добавлен 19.06.2010
Характеристика видового складу тварин літоралі р. Случ в межах м. Березного
Природно-екологічні умови Березнівського району. Біологічні особливості видового складу тварин - гідробіонтів річки Случ. Облік водної ентомофауни. Кількісна оцінка видового складу тварин літоралі р. Случ. Методика дослідження тварин літоралі р. Случ.

дипломная работа [6,6 M], добавлен 29.11.2011
Роль гербарних зразків у розвитку біологічної науки на території України (друга половина ХІХ - початок ХХ ст.)
Історія гербарної справи та флористичних досліджень в Україні. Вивчення таксономічного складу синантропної флори на основі рослинних зразків Й.К. Пачоського. Гербарні колекції в природничих музеях, їх значення для науково-просвітницької діяльності.

статья [25,7 K], добавлен 07.08.2017
Умовні рефлекси
Основі регуляції різноманітної діяльності організму. Функції нервової та ендокринної систем. Реакція організму на будь-яке подразнення. Механізм утворення умовних рефлексів. Роль підкіркових структур та кори великого мозку. Гальмування умовних рефлексів.

реферат [30,7 K], добавлен 30.03.2012
Динаміка перельоту птахів
Загальна характеристика птахів: лелека білий, бусол, або чорногуз, гуска сіра, шпак звичайний, зозуля звичайна, ластівка сільська. Перельоти птахів та методи дослідження цього процесу. Аналіз спостережень за строками прильотів вказаних видів птахів.

реферат [28,1 K], добавлен 21.09.2010
Вищі водні рослини в системі рослинного світу
На основі вивчених еколого-біологічних властивостей рослин водних та прибережно-водних біоценозів проведення визначення стану їхніх ценозів русла річки Сіверський Донець. Визначення видів біоіндикаторів водного середовища, екологічні особливості видів.

курсовая работа [63,9 K], добавлен 07.05.2009
Черепно-мозкові нерви
Місцезнаходження ядер черепно-мозкових нервів. Місця входу та виходу на основі мозку черепно-мозкових нервів, зони їх іннервації. Нюховий, зоровий, окоруховий, блоковий, трійчастий та очний нерви. Гілки трійчастого нерва. Блукаючий та додатковий нерви.

презентация [304,7 K], добавлен 01.02.2014
Структурно-функціональні особливості легень у людини на етапах онтогенезу
Вивчення ембріогенезу легень та періодизації їх формування на основі даних макро-, мікро морфологічного і гістохімічного аналізів. Основні етапи розвитку легень у людини в постнатальному періоді, їх функціональні зміни. Легені на пізніх етапах онтогенезу.

курсовая работа [56,0 K], добавлен 06.11.2010
Зміна активності ферментів системи антиоксидантного захисту у нирках щура за дії гістаміну
Антиоксидантна система як захист проти вільних радикалів. Гістамін:історія вивчення, структура, шляхи синтезу і вивільнення. Визначення активності супероксиддисмутази, каталази, глутатіонпероксидази, вплив на неї наявності гістаміну в нирці щура.

курсовая работа [1,7 M], добавлен 22.06.2014

Другие документы, подобные "Гігієнічна оцінка антимікробної дії композитів з наночастками срібла"

весь список подобных работ

скачать работу можно здесь

сколько стоит заказать работу?

Работы в архивах красиво оформлены согласно требованиям ВУЗов и содержат рисунки, диаграммы, формулы и т.д.
PPT, PPTX и PDF-файлы представлены только в архивах.
Рекомендуем скачать работу.