Идентификация и характеристика биологических свойств белков суперсемейства иммуноглобулинов животных

В таблице 6 представлены данные о корреляции уровней основных изотипов иммуноглобулинов у ягнят в первые 6 месяцев жизни, полученных от овец второй группы. Установлена положительная корреляция между уровнями IgG и IgM (r=0,67), что подтверждает теорию корреляционных констант, являющиеся обязательным условием адекватного функционирования иммунной системы. Отсутствие данной корреляции или смена ее направленности показывает неустойчивое состояние ИС и возможность ее функционального срыва.

Таблица 6. Коэффициенты корреляции между количественными показателями иммуноглобулинов в крови и носовых секретах у ягнят.

Различные по направленности и величине коэффициенты корреляции между уровнями IgG и IgA, IgM и IgA, IgM и sIgA, IgA и sIgA свидетельствуют о нестабильности иммунной системы у молодых животных в данный период. Это может быть связано с механизмами индивидуального процесса развития и формирования иммунореактивности организма. Отрицательная корреляция между концентрациями IgG в сыворотке крови и секреторного IgА показывает относительную независимость системного иммунитета и иммунной системы слизистых оболочек.

На основании корреляционного анализа уровней основных изотипов иммуноглобулинов у клинически здоровых животных на различных этапах онтогенеза показана устойчивая корреляция между иммуноглобулинами G и М у всех исследуемых групп животных. Этот показатель может служить диагностическим критерием для оценки здоровья животного и качества иммунопрофилактики, так как изменение направленности корреляции между IgM-антителами первичного и IgG-антителами вторичного иммунного ответа является признаком нарушения иммунореактивности организма.

Представленные данные позволяют наметить перспективные пути в направлении поиска новых устойчивых корреляционных взаимосвязей между иммунологическими показателями с целью понимания механизмов, регулирующих работу иммунной системы животных.

Формы локализации sIg-рецепторов В-лимфоцитов в периферической крови коров и овец

В онтогенезе дифференцировка в зрелые Т- и В-клетки сопровождается изменением фенотипа поверхности лимфоцита, определяемого с помощью моно- и поликлональных антител методами иммуноцитохимии. Так экспрессия cIgM на поверхность клетки играет решающую роль в В-клеточном онтогенезе. Модуляция количества sIg или блокировка их антителами приводит к изменению характера иммунных реакций, поскольку именно sIg связывают антиген на поверхности В-лимфоцита для дальнейшего его процессирования в эндосомах и представления Т-клеткам.

В рамках исследования механизмов клеточной активации в процессе онтогенеза изучены формы локализации sIg на поверхности В-клеток в крови у телят и коров. В опытах использовали кровь крупного рогатого скота черно-пестрой породы в возрасте 4-5 лет.

Иммунопероксидазное окрашивание клеток позволяет определить количество sIg-клеток, изучить модуляцию рецепторного аппарата в процессе дифференцировки В-лимфоцита в плазматическую клетку.

Исследование форм локализации sIg представляет теоретический и практический интерес (Новиков В.В., 2007). Анализ литературных данных по изучению поверхностных рецепторов клеток показал, что под влиянием различных факторов, в том числе патогенных микроорганизмов, изменяется локализация рецепторов на поверхности клетки. По перераспределению рецепторов на мембране клетки можно судить о способности связывать антигены, т.е. характеризовать функциональную активность лимфоцита. (Артюхов В.Г.и др., 2006).

Изменение локализации рецепторов, их перераспределение в мембране, определяет роль В-лимфоцита, как антигенпредставляющей клетки в иммунном ответе. Поверхностные Ig взаимодействуя с антигеном, посредством эндоцитоза включают его в цитоплазматический компартмент, где он подвергается деградации.

В результате проведенных исследований нами установлено, что В-клетки в крови коров с окрашенной мембраной в форме «петч»/эндоцитоз составляют 68,9±3,9%, «петч» (неравномерное распределение sIg по периметру клетки) - 15,0±3,3%, «ринг» (равномерное распределение sIg по периметру клетки) - 10,5±3,3%, «кэп» - 5,6±1,9%. («кэппинг» - эффект - скопление sIg на одном из полюсов клетки) (рис. 9)

Следовательно, можно сделать вывод, что петч-эндоцитоз, а именно, перераспределение Ig - рецепторов в мембране с их погружением в цитоплазму клетки, является основным механизмом контроля поверхности В-лимфоцитов, т.е. таким образом, происходит считывание информации о микроокружении клетки.

Также при иммуноцитохимическом анализе в крови обнаружены клетки с цитоплазматическими I. Эти клетки не окрашиваются по периметру клетки, т.е. мембранные иммуноглобулины отсутствуют. Вероятно, что сIg-клетки являются плазматическими клетками, секретирующими IgG.

Таким образом, установлено, что в крови овец в возрасте одного года присутствуют В-клетки на разных стадиях дифференцировки.

В результате проведенных исследований показана возможность использования иммунопероксидазного метода для определения форм локализации Ig-рецепторов и количества В-лимфоцитов крупного рогатого скота и овец.

SIgM-клетки и IgM-антитела в развитии иммунной системы у телят

Важной задачей наших исследований являлась разработка специфичного метода для количественного определения В-лимфоцитов крупного рогатого скота и изучения механизма дифференцировки лимфоцитов из общей лимфоидной клетки-предшественницы, поскольку первыми IgSF, появляющимися в цитоплазме В-клетки, являются тяжелые цепи IgM (м-цепи). Распределение IgM в В-лимфоцитах крови у телят в возрасте 1 мес. определяли методом иммунопероксидазного окрашивания с использованием в качестве первых антител МкА к IgM крупного рогатого скота. Уровень иммуноглобулинов в сыворотке крови определяли методом простой радиальной иммунодиффузии по Манчини, используя для определения IgG и IgA моноспецифические антисыворотки, а для IgM - моноклональные антитела.

Уровень иммуноглобулинов в сыворотке крови телят в среднем равен: IgG - 12,3 мг/мл, IgM - 0,93 мг/мл, IgA - 0,44 мг/мл. (табл. 26). Этот период в жизни телят является критическим, так как материнские иммуноглобулины отсутствуют, синтез собственных - не достигает нормального уровня. В связи с чем, возникает предрасположение к воздействию патогенных микроорганизмов и неблагоприятных факторов внешней среды.

Количественные показатели В-системы на фоне нормальной фагоцитарной активности (42,4%) свидетельствуют о том, что иммунная система телят в возрасте одного месяца окончательно не сформирована и поэтому внешнее воздействие на организм в этот период может вызвать ее функциональный дисбаланс, что особенно негативно может проявиться у телят с пониженным содержанием иммуноглобулинов G.

При микроскопическом исследовании препаратов установлено, что клетки крови телят, экспрессирующие sIgM, составляют 19,2%. Кроме того, в крови обнаружены сIgM - клетки. Такие клетки могут быть пре-В-клетками с цитоплазматическими м-цепями или плазматическими клетками, секретирующими IgМ. В результате проведенных исследований показано, что в крови телят в возрасте одного месяца присутствуют В-клетки на разных стадиях дифференцировки.

Динамика Ig и ILT-рецепторных клеток у стельных коров

Несмотря на достижения в области иммунологии репродукции, многие аспекты этой важной проблемы изучены не в полной мере, например, каким образом иммунная система перестраивается, предотвращая иммунологический конфликт при беременности. Известно, что нормальная беременность характеризуется угнетением материнского клеточного иммунного ответа против эмбриона при наличии гуморального ответа на определенные антигены плода. Оценка показателей иммунного статуса стельных коров имеет важное значение в своевременной коррекции естественной резистентности организма, в связи с определенной иммуносупрессией иммунной системы. У коров с низкими показателями иммунного статуса в этот период возрастает риск рождения нежизнеспособных телят. На этом основании изучение количественной динамики параметров иммунной системы стельных коров представляет значительный интерес для характеристики взаимодействия между плацентой и иммунной системой, разработки практических приемов коррекции воспроизводительной функции животных.

Для оценки числа В-клеток использованы МкА к IgM рогатого скота в реакции непрямой иммунофлуоресценции (РНИФ). Уровень Ig в РИД.

В результате проведенных экспериментов нами установлено, что у коров в период от 3-4 мес. до 5-6 мес. стельности повышается как относительное (от 24,8% до 34,6%), так и абсолютное количество (от 0,9х10⁹/л до 1,7х10⁹/л) розеткообразующих клеток в крови. Данная тенденция наблюдается также в контрольной группе, но является менее выраженной (табл. 8). Известно, что молекула CD2 экспрессируется не только на Т-клетках, но и на НК-клетках. Супрессия специфического иммунного ответа матери компенсируется усилением естественного, врожденного иммунитета, в частности увеличивается количество натуральных киллеров. Следовательно, повышение в крови стельных коров розеткообразующих клеток в указанный период объяснится увеличением числа НК-клеток.

Одновременно в результате исследований зарегистрировано незначительное повышение относительного и абсолютного содержания В-лимфоцитов (от 26,8% до 29,2%), по-видимому, связанное с увеличением иммуноглобулинов в крови стельных коров.

Как видно из данных таблицы 7, в крови коров в период с 3-4 мес. до 5-6 мес. стельности увеличивается уровень иммуноглобулинов G с 21,6 мг/мл до 26,0 мг/мл, которые путем транссудации поступают в молочную железу и постнатально с молозивом передаются теленку.

Таблица 7. Динамика иммунологических показателей у стельных коров

Иммунная толерантность при беременности обусловлена продукцией блокирующих антител, вызывающих модуляцию иммунного ответа. Клеточные рецепторы для IgG - FcгR, экспрессируют макрофаги, НК-клетки, некоторые Т-клетки и нейтрофилы. Мономерный IgG связываясь с Fc-рецепторами иммунокомпетентных клеток может изменять их биологическую активность. Возможно, увеличение в крови стельных коров уровня IgG обусловлено выполнением им функции антител, участвующих в супрессии иммунного ответа на антигены плода.

Корреляционные взаимосвязи между различными изотипами иммуноглобулинов в сыворотках крови не стельных коров являются слабо положительными (r=0,3-0,5). Низкая степень сопряженности между показателями IgG и IgA косвенно подтверждает относительную независимость системного и местного иммунитета.

При исследовании в динамике смена слабой корреляционной взаимосвязи на сильную свидетельствует о возрастании функциональной активности иммунокомпетентных клеток (r=0,64 > r=0,84) и, соответственно, уровня иммуноглобулинов (r=0,27 > r=0,73).

Таблица 8. Корреляция иммунологических показателей в сыворотке крови стельных коров

Повышение степени сопряженности между показателями иммунной системы в 5-6 мес. стельности подтверждает большое функциональное напряжение иммунной системы у стельных коров по сравнению с контрольной группой (табл. 8). Смена слабых корреляционных взаимосвязей между иммунологическими параметрами на сильные свидетельствует об активизации клеточных и гуморальных звеньев иммунной системы в период плодоношения.

Таким образом, методом иммунофлуоресцентного анализа установлено, что крови коров лимфоциты, несущие на своей поверхности IgM составляют 25,3%-26,2%, а в период 5-6 мес. стельности количество их возрастает до 29,2%. Параллельно показано увеличение количества Т-клеток и уровня IgG в сыворотке крови коров второй половины стельности по сравнению с уровнем у коров со сроком стельности 3-4 месяца.

Изучение мембранноассоциированных и свободных форм иммуноглобулина М и других представителей суперсемейства Ig представляет значительный интерес для понимания эволюционного становления иммунной системы. Молекулы IgM появляются первыми в фило-, онто- и иммуногенезе и являются матрицей по которой строятся другие изотипы иммуноглобулинов по мере развития иммунной системы.

Функциональные свойства иммунокомпетентных ILT-рецепторных клеток у различных видов животных

Эволюционное развитие IgSF-рецепторов началось с возникновения шаперонов бактериальных клеток, имеющих Ig-fold (складчатое) строение, Thy-1 и Р₀ - молекул прокариот и одноклеточных эукариот. Многие из этих белков представляют собой различные полимеры, в которых гомологичные Ig-структуры разных цепей взаимодействуют между собой. Каждая такая структура кодируется отдельным экзоном. По-видимому, данное семейство генов ведет свое происхождение от гена, кодирующего одну гомологичную структуру, похожую на Thy-1 или в₂-микроглобулин. Новые члены семейства возникали путем дупликаций экзонов, генов и генных сегментов, кодирующих иммуноглобулиновые молекулы. Эти молекулы обеспечивали межклеточную адгезию посредством гомофильного взаимодействия. В процессе эволюции многоклеточных произошел переход от гомофильного межклеточного взаимодействия к более совершенному гетерофильному взаимодействию для распознавания чужеродных агентов (Галактионов В.Г., 2004).

Контактное взаимодействие иммунокомпетентных клеток посредством рецепторов является первым этапом в осуществлении антигенспецифических реакций. Кооперация клеток друг с другом определяется «адгезивным кодом», то есть определенным для каждой клетки набором мембранных белков. Определение этих белков для каждого клона лейкоцитов позволит понять механизмы ранней дифференцировки, филогенетической связи макрофагов, Т- и В-клеток в процессе становления иммунной системы. Поверхностные Ig-молекулы клеток являются чувствительной системой, реагирующей на изменения в макро- и микроокружении организма. В результате изучения и осмысления механизмов их многообразия и модуляции, возможно создание эффективных и безопасных препаратов против постоянно изменяющих свои поверхностные антигены патогенных микроорганизмов.

Заключительным этапом исследований было определение ILT-рецепторных клеток у различных видов животных (табл. 10).

Таблица 9. Относительное содержание субпопуляций лимфоцитов в крови здоровых животных (M±m)

Изучая феномен розеткообразования у животных, находящихся на различных ступенях эволюционной лестницы - костистые рыбы, птицы, млекопитающие, было показано, что их лимфоциты обладают рецепторами к эритроцитам барана. Несмотря на то, что у этих видов животных структура иммунной системы различна, основные клеточные и молекулярные компоненты врожденного иммунитета достаточно консервативны.

Как видно из данных таблицы 9, количественные соотношения клеток с иммуноглобулиноподобными рецепторами, такими как CD2 (Т-клетки), CD19 (В-клетки), CD4, CD8, у данных видов животных одинаковы: Т-клеток > В-клеток; Т-хелперов больше, чем цитотоксических лимфоцитов. Это доказывает функционально-рецепторный консерватизм Ig-подобных рецепторов лимфоцитов у различных видов животных. Анализ способности к розеткообразованию у исследуемых видов животных показывает различие рецепторной активности В-клеток. Это обусловлено тем, что В-система иммунитета в процессе эволюции развивалась позже Т-системы. У млекопитающих, птиц и рыб есть тимус - центральный орган иммунной системы, место дифференцировки Т-клеток до зрелых форм. Увеличение иммунорегуляторного индекса (соотношение CD4 Т-хелперов к цитотоксическим CD8 Т-клеткам) от 1,3 у рыб и 1,2 у птиц до 1,7 у норок показывает различие в процессах дифференцировки Т-лимфоцитов, основанное на структурных особенностях тимуса.

Возможно, что CD2-рецепторы, как адгезивные молекулы, появляются одними из первых в процессе филогенеза иммунокомпетентных клеток позвоночных животных. Еще П. Эрлих впервые указал на отсутствие видовой специфичности рецепторов у животных различных видов. А, по мнению Галактионова В.Г. (2004) филогенез клеток иммунной системы строится на рецепторной и функциональной общности клеток, участвующих в эволюционном процессе, в котором на пути от НК-клеток к Т-лимфоцитам сохранилось несколько общих рецепторов, указывающих на филогенетическую связь между этими клетками, в частности CD2.

В настоящее время не вызывает сомнений определяющее значение белков суперсемейства иммуноглобулинов в развитии адаптивного иммунитета, основанного на врожденных механизмах защиты от инфекций. Иммунная система, как система специфического распознавания чужеродных структур, на ранних этапах эволюции начала свое становление с появлением иммуноглобулиноподобных доменов, стабилизированных дисульфидными связями. Именно из этой молекулярной, конформационной структуры, свойственной только членам суперсемейства иммуноглобулинов, построены клеточные рецепторы, ответственные за распознавание антигена, а межклеточная кооперация с участием IgSF является ведущим фактором в развитии иммунных реакций, обуславливающих функционирование иммунной системы, распознавание и деструкцию структур, зондирующих защитные возможности организма. Проведенные исследования показали, что функциональная активность иммунокомпетентных клеток находится в тесной взаимосвязи с мембранными и растворимыми формами молекул иммуноглобулинов. Определив модуляцию IgSF в онто- и иммуногенезе и консерватизм в филогенезе была показана возможность оценки физиологических и молекулярных аспектов функционирования иммунной системы. В результате проведенных исследований было установлено, что ILT-рецепторный профиль иммунокомпетентных клеток определяет их функциональную активность и роль в иммунных реакциях различного генеза.

Выводы

1. Разработаны способы получения иммуноглобулинов A (S-IgA) крупного рогатого скота из молозива и носовых секретов животных и унифицирована технология получения и контроля моноспецифических реагентов к иммуноглобулинам крупного рогатого скота. Экспериментально установлена возможность использования полученных поли- и моноклональных антител в иммуноцитохимических реакциях для количественной оценки IgSF-содержащих клеток.

2. С использованием реакции непрямой иммунофлуоресценции на основе моноклональных антител установлено, что число sIgM-клеток в крови крупного рогатого скота составляет от 0,97±0,5 х10⁹/л до 1,0±0,7 х10⁹/л. При этом количество sIgM-клеток у стельных коров значительно выше и достигает значения 1,5±0,3 х10⁹/л.

3. Методом иммунопероксидазного окрашивания определено количество sIgM-клеток в крови телят 30-дневного возраста, находящееся в пределах 16,6±4,5% - 19,2±0,8%. Установлено, что в крови телят (возраст 1 мес.) и овец (возраст 1 год) присутствуют В-клетки с цитоплазматическими иммуноглобулинами М.

4. Показана практическая эффективность применения реакции антигенного розеткообразования и контактного взаимодействия с макрофагами для определения рецепторной активности иммунокомпетентных клеток в поствакцинальном иммунном ответе у лабораторных животных.

5. Разработан способ идентификации В-лимфоцитов крупного рогатого скота с применением иммунопероксидазного окрашивания клеток на основе моно- и поликлональных антител. Установлено, что мембранные иммуноглобулины В-клеток крови коров распределяются по периметру лимфоцита в форме «петч»/эндоцитоз на 68,9±3,9% клеток, «петч» (неоднородные скопления рецепторов) - 15,0±3,3%, «ринг» (равномерное распределение рецепторов по периметру клетки) - 10,5±3,3%, «кэп» (скопление рецепторов на одном из полюсов клетки) - 5,6±1,9%.

6. Показано, что наиболее эффективными для использования в РИД являются моноклональные антитела, распознающие антигенную детерминанту конформационного типа.

7. Установлено, что воздействие in vitro вакцины против рожи свиней на интактные лимфоциты мышей не оказывает значительного влияния на число CD2-молекул и рецепторов к С₃-компоненту комплемента на поверхности клеток. Аналогичное воздействие на лимфоциты вакцинированных животных, приводит к повышению уровня экспрессии Ig-подобных рецепторов иммуноцитов, при этом индекс стимуляции равен 2,5-3,3 (в контроле 1,0). Двойной антигенный сигнал (in vivo и in vitro) усиливает экспрессию иммуноглобулиноподобных рецепторов в первые 14 суток иммунного ответа, когда в организме сохраняется достаточное количество активированных лимфоцитов.

8. Определено, что иммунизация мышей вакциной против рожи свиней приводит к образованию многорецепторных Т-клеток в первые сутки в костном мозге, а в последующие - в тимусе; при использовании вирус-вакцины аналогичные лимфоциты обнаружены в костном мозге на 14-е сутки. Показана ведущая роль костного мозга в индукции CD2-рецепторной активности Т-клеток в поствакцинальном иммунном ответе.

9. Установлено продолжительное влияние антигенов бактериальной этиологии на процесс активации макрофагов. Так количество тимоцитов, взаимодействующих с перитонеальными макрофагами мышей на 2-10-14 сутки после введения вакцины против рожи свиней составило 212,3±30,4, 260,3±35,9 и 125,5 ±15,8 клеток/100 макрофагов соответственно (в контроле - 26,0±0,5).

10. Показано, что вторичный иммунный ответ на введение Т-независимого антигена 2 типа (ТН-2) характеризуется увеличением количества В-клеток костного мозга и селезенки. Установлено увеличение количества IgG1 в селезенке, что подтверждает участие Т-клеточных факторов в ТН-2-иммуногенезе.

11. Предложен диагностический алгоритм для изучения эффективности иммунотропных препаратов на модели лабораторных мышей, включающий следующие показатели: положительная корреляция ( 0,7) между розеткообразующей активностью клеток крови и лимфатических узлов; положительная корреляция между относительным содержанием лимфоцитов и розеткообразующих тимоцитов; отрицательная корреляция ( - 0,7) между нейтрофилами и Т-клетками тимуса. Разработанная схема позволяет определять уровень корреляционной связи по трем соотношениям, характеризующим сбалансированность иммунной системы.

12. Показано, что иммунный статус коров в период 3-6 мес. стельности характеризуется значительным повышением концентрации IgG, который затем переходит в молозиво, где является основным изотипом иммуноглобулинов и доминирующим фактором колострального иммунитета. Концентрация в сыворотке крови составляет IgG - 29,2± 5,9 мг/мл, IgM - 2,6 ±0,6 мг/мл, IgA - 1,0± 0,3 мг/мл.

13. Установлена филогенетически детерминированная рецепторная и функциональная общность CD2-рецепторных клеток у животных, находящихся на различных ступенях эволюционной лестницы и отличающихся строением иммунной системы. Показано, что основным фактором иммунитета у костистых рыб является фагоцитоз, т.е. врожденная система защиты организма, у кур - клеточные реакции, у млекопитающих - клеточно-гуморальные взаимодействия.

14. Показано, что белки суперсемейства иммуноглобулинов в мембраносвязанной и секретируемой формах (CD2, CD4, CD8, CD19, sIg, Ig, антитела) определяют функциональную активность лейкоцитов и играют ведущую роль в адаптивном иммунитете.

Практические рекомендации

Предложен комплексный методический подход к оценке Т- и В-клеточных звеньев иммунной системы крупного рогатого скота и лабораторных животных на основе определения биологических свойств белков суперсемейства иммуноглобулинов, который может быть использован для определения эффективности иммунотропных препаратов, используемых в ветеринарной практике РФ.

Получение иммунохимически чистых иммуноглобулинов класса G крупного рогатого скота рекомендуем с помощью ионообменной хроматографии в градиенте NaCl от 0,1 М до 0,4 М.

Для выделения секреторного IgA крупного рогатого скота рекомендуем носовые секреты, которые фракционируют методом гель-фильтрации на Sephacryl S-300-HR. В качестве элюанта используют 0,1 М Тris-HCl буфер рН 8,0 с 1,0 М NaCl.

С целью повышения специфичности реакции, для количественного определения иммуноглобулинов класса А методом радиальной иммунодиффузии по методу Манчини (РИД), следует использовать стандарт из гомологичного субстрата в связи с полиморфизмом данного изотипа.

Для количественного определения В-лимфоцитов крупного рогатого скота рекомендуем реакцию непрямой иммунофлуоресценции с использованием моноклональных антител к IgM.

Метод иммунопероксидазного окрашивания c поли- и моноклональными антителами к Ig может быть использован для определения форм распределения Ig-рецепторов на мембране клетки, что дает возможность изучения молекулярных аспектов иммуногенеза у животных.

Для оценки состояния здоровья крупного рогато скота на с/х предприятиях рекомендуем использовать индексные показатели и корреляционный анализ, которые более адекватно отражают состояние иммунной системы, чем отдельные его параметры, и что в значительной мере повысит диагностическую эффективность иммунологического мониторинга.

Разработанные методы могут быть использованы для оценки иммунного статуса животных, в том числе морских млекопитающих, в рамках программ по оценке здоровья популяций животных, обитающих в естественных условиях.

Список опубликованных работ

1. Ездакова И.Ю. Рецепторы иммунного узнавания у животных /И.Ю. Ездакова. - М.: Компания Спутник+, 2008. - 88 с.: ил.; Библиогр.:с. 72-73. - 500 экз. - ISBN 978-5-364-01149-7.

2. А.с. 1560549 СССР. Штамм гибридных культивируемых клеток животных Mus.musculus, используемый для получения моноклональных антител к IgМ рогатого скота / Федоров Ю.Н., Сологуб В.К., Феоктистова Т.А., Ездакова И.Ю. и др. - №4229427; заявл. 15.04.87; опубл. 3.01.90.

3. Оценка естественной резистентности сельскохозяйственных животных: методические рекомендации /П.Н. Смирнов, М.И. Гулюкин, Ю.Н. Федоров,… И.Ю. Ездакова… и др. - Россельхозакадемия, Сиб. отд-ние, ГНУ ИЭВС и ДВ, ГНУ ВИЭВ, ФГОУ НРИПК АПК МСХ РФ, НГАУ. - Новосибирск, 2003. - 32 с.

4. Пат. 2277421 Российская Федерация, МПК А61К 35/12, А61К 35/20. Способ получения секреторного иммуноглобулина А из молозива рогатого скота / Федоров Ю.Н., Ездакова И.Ю., Чеботарева Т.А.; заявитель и патентообладатель ГНУ ВИЭВ им. Я.Р. Коваленко. - №2005109539/15; заявл. 05.04.05; опубл. 10.06.06, Бюл. №16.-5 с.

5. Пат. 2288008 Российская Федерация, МПК А61К 39/395, А61К 35/12. Способ получения секреторного иммуноглобулина А из биологической жидкости животных / Федоров Ю.Н., Ездакова И.Ю., Чеботарева Т.А.; заявитель и патентообладатель ГНУ ВИЭВ им. Я.Р. Коваленко. - №2005109538/15; заявл. 05.04.05; опубл. 27.11.06, Бюл. №33.-4 с.

6. Федоров Ю.Н. Методические рекомендации по количественному определению и оценке функциональной активности иммунокомпетентных клеток животных / Федоров Ю.Н., Ездакова И.Ю. // Сборник «Новые методы исследований по проблемам ветеринарной медицины». - 2008. - 4. - С. 144-158

7. Пат. 2293330 Российская Федерация, МПК G01N 33/53. Способ определения антител/ Ездакова И.Ю.; заявитель и патентообладатель ГНУ ВИЭВ им. Я.Р. Коваленко. - №2005120538/15; заявл. 04.07.05; опубл. 10.02.07, Бюл. №4.-5 с.

8. Определение специфичности моноклональных антител к отдельным классам иммуноглобулинов крупного рогатого скота и свиньи методом «вестерн-блоттинга»/ Верховский О.А., Федоров Ю.Н., Феоктистова Т.А., Ездакова И.Ю. и др. // Сельскохозяйственная биология. - 1993. - №6. - С. 135-141.

9. Использование моноклональных антител для оценки антигенных свойств иммуноглобулинов животных / Верховский О.А., Федоров Ю.Н., Сологуб В.К. Феоктистова Т.А., Федорова И.П., Ездакова И.Ю. // Сельскохозяйственная биология. - 1995.- №4.-С. 94-99.

10. Изотипспецифические антителосекретирующие клетки у мышей в процессе иммуногенеза. /Жаданов А.И., Ездакова И.Ю., Верховский О.А., Федоров Ю.Н. // Ветеринария. - 2000. - №11. - С. 22-26.

11. Кинетика синтеза различных типов антителосекретирующих клеток костного мозга мышей в процессе иммуногенеза / Федоров Ю.Н., Верховский О.А., Жаданов А.И., Ездакова И.Ю. // Доклады Российской академии сельскохозяйственных наук. - 2000.- №5.-С. 42-44.

12. Ездакова И.Ю. Динамика количества Т-клеток и их взаимодействие с антигенпредставляющими клетками в процессе иммунного ответа / Ездакова И.Ю., Федоров Ю.Н., Жаданов А.И. // Цитология. - 2001. - Т. 43. - №9- С. 858.

13. Количественное определение иммуноглобулинов А-класса в биологических жидкостях крупного рогатого скота методами иммуноферментного анализа и радиальной иммунодиффузии / Ездакова И.Ю., Борзенко Е.В., Феоктистова Т.А., Федоров Ю.Н. // Сельскохозяйственная биология. - 2002.- №2.-С. 118-122.

14. Ездакова И.Ю. Влияние Trypanosoma sp. на иммунокомпетентные клетки серебряного карася /Ездакова И.Ю., Борисова М.Н., Дьяконов Л.П. // Ветеринария. - 2005.- №12.-С. 28-31.

15. Ездакова И.Ю. Влияние зимозана на клетки крови серебряного карася (Carassius auratus gibelio)/ Ездакова И.Ю., Борисова М.Н. // Ветеринарная патология. - 2007.- №2. - С. 205-207.

16. Ездакова И.Ю. Динамика иммунологических показателей стельных коров/ Ездакова И.Ю. // Ветеринарная патология. - 2007.- №2.-С. 148-151.

17. Ездакова И.Ю. Изучение морских млекопитающих - новое направление экологической иммунологии / Ездакова И.Ю., Соколова О.В. // Веткорм. - 2008.- №4. - С. 14-15.

18. Ездакова И.Ю. Динамика розеткообразующих клеток кур в онтогенезе / Ездакова И.Ю., Чуйко О.М., Чадина Е.О. // Ветеринарная патология. - 2008.- №2.-С. 62-64.

19. Ездакова И.Ю. Локализация IgМ в В-клетках периферической крови крупного рогатого скота/ Ездакова И.Ю. // Аллергология и иммунология. - 2008. - Т. 9. - №3.-С. 274.

20. Ездакова И.Ю. Корреляционный анализ иммунологических показателей при введении иммунотропных препаратов / Ездакова И.Ю. // Веткорм. - 2009. - №2.-С. 18-19.

21. Ездакова И.Ю. Динамика sIgM-клеток и IgM-антител в периферической крови коров в период плодоношения / Ездакова И.Ю. // Аллергология и иммунология. - 2009. - Т. 10. - №2.-С. 295.

22. Ездакова И.Ю. Взаимосвязи между основными изотипами иммуноглобулинов у овец/ Ездакова И.Ю., Степнова С.Н. // Доклады Российской академии сельскохозяйственных наук. - 2010. - №5.-С. 44-47 (Russian agricultural science. - 2010. - Vol.36. - №5).

23. Иммуноферментный метод количественного определения IgA-изотипа в биологических жидкостях крупного рогатого скота / Феоктистова Т.А., Ездакова И.Ю., Федоров Ю.Н., Борзенко Е.В. // Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов: Сб. науч. тр. - Щелково: ВНИиТИБП. - 2000. - C. 279-281.

24. Разработка и совершенствование методов оценки В-системы иммунитета у животных / Верховский О.А., Феоктистова Т.А., Федоров Ю.Н, Ездакова И.Ю. и др. // Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов: Сб. науч. тр. - Щелково: ВНИиТИБП. - 2000. - C. 273-275.

25. Quantitation of total IgG-, IgM-, and IgA-secreting cells in mice immunized with live erysipelas vaccine and challenged with the virulent strain of Erysipelothrix rhusiopathiae/ Fedorov Yu.N., Zhadanov A.I., Verkhovsky O.A., Ezdakova I. Yu. //Sixth International Veterinary Immunology Symposium: Abstracts book. - 2001. - 206. - Р.174.

26. Количественная характеристика иммуноглобулинов А-класса в биологических жидкостях крупного рогатого скота методами иммунохимического анализа /Борзенко Е.В., Ездакова И.Ю., Федоров Ю.Н., Феоктистова Т.А. // Труды ВИЭВ. - 2003. - Т. 73. - С. 217-221.

27. Ездакова И.Ю. Оценка иммуномодулирующей активности вакцины против рожи свиней (ВР-2) в процессе иммуногенеза / Ездакова И.Ю., Федоров И.Ю., Третьякова И.В. // Труды ВИЭВ. - 2003. - Т.73. - С. 200-204.

28. Моноклональные антитела к иммуноглобулинам класса А рогатого скота: получение, характеристика, применение / Феоктистова Т.А., Федоров Ю.Н., Ездакова И.Ю., Сологуб В.К. // Труды ВИЭВ. - 2003. - Т. 73. - С. 197-200.

29. Ездакова И.Ю. Динамика показателей клеточного иммунитета при введении препаратов с иммунотропной активностью / Ездакова И.Ю., Третьякова И.В. // Материалы Международной учебно-методической и научно-практической конференции, посвященной 85-летию МГАВМ и Б им. К.И. Скрябина. - М: МГАВМиБ. - 2004.-С. 190-194.

30. Влияние иммунотропных препаратов на иммуногенез при вакцинации. / Ездакова И.Ю., Федоров Ю.Н., Ханис А.Ю., Боряев Г.И. // «Ветеринарная биотехнология: настоящее и будущее»: Сб.науч. тр. - Щелково: ВНИиТИБП. - 2004. - С. 47-52.

31. Sokolova O.V. Adaptive changes of the serum immunoglobulins level in the black sea bottlenose dolphin (Tursiops truncates)/ Sokolova O.V., Denisenko T.E., Ezdakova I. Yu. // Marine Mammals and man in coastal ecosystem: Can they co-exist?: Abstracts book.-Gdynia:ECS. - 2006. - P.180.

32. Ездакова И.Ю. Динамика мембранных s-Ig лимфоцитов мышей в процессе иммуногенеза /Ездакова И.Ю. // «Актуальные проблемы инфекционной патологии и иммунологии животных»: Сб. науч. тр.-М:ВИЭВ. - 2006. - С. 472-474.

33. Ездакова И.Ю. Фагоцитарная активность иммунокомпетентных клеток серебряного карася / Ездакова И.Ю. // «Актуальные проблемы инфекционной патологии и иммунологии животных»: Сб. науч. тр.-М:ВИЭВ. - 2006. - С. 475-477.

34. Ездакова И.Ю. Выявление иммуноглобулинов на мононуклеарных клетках лимфоидных органов мышей / Ездакова И.Ю. // «Актуальные проблемы ветеринарии в современных условиях»: Сб. науч. тр.-Краснодар. - 2006. - С. 400-403.

35. Ездакова И.Ю. Определение уровня адгезивной активности лимфоцитов периферической крови крупного рогатого скота / Ездакова И.Ю. // «Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов»: Сб. науч. тр. - Щелково: ВНИиТИБП. - 2006. - С. 157-160.

36. Ездакова И.Ю. Изучение иммунного статуса лабораторных мышей под влиянием пробиотиков / Ездакова И.Ю., Субботин В.В. // «Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов»: Сб. науч. тр. - Щелково: ВНИиТИБП. - 2006. - С. 182-187.

37. Данилевская Н.В. Фармакологические эффекты пробиотика Лактобифадол при его назначении глубокостельным коровам / Данилевская Н.В., Ездакова И.Ю., Кудинов В.В. // Веткорм. - 2006.- №6. - С. 24-25.

38. Ездакова И.Ю. Динамика иммунокомпетентных клеток в процессе иммунного ответа на Т-независимые и Т-зависимые антигены / Ездакова И.Ю. // Ветеринарная медицина. - 2007.- №1.-С. 11-12.

39. Ездакова И.Ю. Определение показателей В-системы иммунитета телят/ Ездакова И.Ю. // Ветеринарная медицина. - 2007.- №4.-С. 10-11.

40. Ездакова И.Ю. Поверхностные иммуноглобулины В-клеток крови крупного рогатого скота / Ездакова И.Ю. // Ветеринарная медицина. - 2007.- №4.-С. 11-13.

41. The cross-reactivity of the blood serum albumens from Steller sea lion pups (EUMETOPIAS JUBATUS) / Ezdakova I. Yu., Sokolova O.V., Denisenko T.E., Burkanov V.N. // Marine mammals in time: past, present and future: Abstract book.-Egmond aan Zee:ECS - 2008. - P. 191-192.

42. The Ladoga ringed seal (Pusa hispida ladogensis) as a species - indicator of the influence of global warming on the wild population of the marine mammals/ Sokolova O.V., Lisitsina T. Yu., Ezdakova I. Yu., Denisenko T.E. // Marine mammals in time: past, present and future: Abstract book. - Egmond aan Zee:ECS. - 2008. - P. 151-152.

43. Ездакова И.Ю. Иммуноцитохимический метод определения В-лимфоцитов / Ездакова И.Ю. // «Современное состояние и перспективы исследований по инфекционной и протозойной патологии животных, рыб и пчел»: Сб. науч. тр.-М:ВИЭВ. - 2008. - С. 329-332.

44. Ездакова И.Ю. Динамика адгезивной активности перитонеальных макрофагов мышей при вакцинации/ Ездакова И.Ю. // Труды ВИЭВ. - 2009. - Т. 75. - С. 235-238

45. Ездакова И.Ю Фагоцитарная активность клеток крови рыб семейства карповых / Ездакова И.Ю., Дьяконов Л.П. // Труды ВИЭВ. - 2009. - Т. 75. - С. 239-241

Размещено на Allbest.ru