Пуринергическая регуляция сердца крыс в постнатальном онтогенезе

Размещено на http://www.allbest.ru/

ГОСУДАРСТВЕННОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ

ВЫСШЕГО ПРОФЕССИОНАЛЬНОГО ОБРАЗОВАНИЯ

«ТАТАРСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ ГУМАНИТАРНО-ПЕДАГОГИЧЕСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ»

ПУРИНЕРГИЧЕСКАЯ РЕГУЛЯЦИЯ СЕРДЦА КРЫС В ПОСТНАТАЛЬНОМ ОНТОГЕНЕЗЕ

03.00.13 -физиология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени

доктора биологических наук

АНИКИНА ТАТЬЯНА АНДРЕЕВНА

Казань 2009

Работа выполнена на кафедре анатомии и физиологии Государственного образовательного учреждения Высшего профессионального образования «Татарский государственный гуманитарно-педагогический университет»

Научный консультант доктор биологических наук, профессор Ситдиков Фарит Габдулхакович

Официальные оппоненты доктор биологических наук, профессор Раевский Владимир Вячеславович

доктор биологических наук, профессор Нигматуллина Разина Рамазановна

доктор медицинских наук, профессор Азин Александр Леонидович

Ведущая организация: ГОУ ВПО Московский государственный университет им. В.М.Ломоносова, факультет фундаментальной медицины.

Защита состоится «____» __________2009 г. в «_____» на заседании диссертационного совета Д 212.078.02 при ГОУ ВПО «Татарский государственный гуманитарно-педагогический университет» по присуждению ученой степени доктора биологических наук по специальности 03.00.13-физиология по адресу: г.Казань, ул.Татарстан, д.2.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО «Татарский государственный гуманитарно-педагогический университет» по адресу: 420021, г. Казань, ул. Татарстан, д.2.

Автореферат разослан «_____»____________2009 года

Ученый секретарь диссертационного Совета

доктор медицинских наук, профессор Зефиров Т.Л.

ОСНОВНАЯ ЧАСТЬ

Актуальность исследования. Недавно установленные функции внеклеточной АТФ как трансмиттера и котрансмиттера, регулирующего разнообразные функции организма, в настоящее время находят все новые подтверждения и общее признание. Сегодня трудно найти клетку, в которой нет рецепторов для внеклеточной АТФ. А разнообразие и количество этих рецепторов превышает все известные подтипы рецепторов для «классических» нейромедиаторов и гормонов.

Одним из объектов, в котором пуриновые соединения могут играть важную роль является сердце. АТФ проявляет множество эффектов в сердечно-сосудистой системе, включая хронотропный, инотропный и сосудистый. Иммуногистохимический анализ тканей сердца показал широкое распространение чувствительных к внеклеточной АТФ Р2-рецепторов на сарколемме проводящих и сократительных кардиомиоцитах (T.Webb et al., 1996; M.Hansen et al., 1999). В сердце крысы обнаружены ионотропные Р2Х_1,2,4,5 и метаботропные Р2У_1,2,4,6,11 - подтипы пуринорецепторов (G.Vassort, 2001).

Интерес к изучению влияния АТФ на деятельность сердца основывается на различных, нередко противоположных результатах. По-прежнему остается нерешенным вопрос том, какое именно соединение оказывает эффект на пуринорецепторы сердца: АТФ или продукт ее гидролиза аденозин? Результаты ранее проведенных исследований привели к убеждению, что механизм действия АТФ основан на непрямом эффекте, наступающем в результате гидролиза АТФ до активного аденозина, действующего на собственные Р1-рецепторы (G. Burnstock and P. Meghji, 1983; G. Froldi et al., 1994, 1997; L.Ren et al., 2003). Согласно последним литературным данным вероятность собственного эффекта АТФ высока.

Действие АТФ может быть реализовано ее прямым влиянием на кардиомиоциты и изменением активности регуляторных каналов сердца. Механизмы положительного хронотропного и инотропного влияния экзогенной АТФ при стимуляции Р2-рецепторов представлены в работах Benham et al., 1987; F.Scamps et al., 1990; J.Zheng et al., 1992; A. Qi and Y.Kwan, 1996; M.Pucйat and G.Vassort, 1996; M. Shoda et al., 1997; M.Jaconi et al., 2000; Q.Liu, R.Rosenberg, 2001; Q.Mei, B.Liang, 2001; J.Shen et al., 2007. В настоящее время известно, что АТФ находится в везикулах вместе с АХ или НА и участвует в передаче нервных импульсов, выполняя функции котрансмиттера (G.Burnstock et al., 1989, 1999, 2006, 2009; L.Fieber et al., 1991; A.Pelleg et al., 1997). Исследования подтверждают наличие совместной секреции норадреналина, ацетилхолина и АТФ из симпатических и парасимпатических нервов и способность АТФ модулировать нервную передачу в сердце, увеличивая или ослабляя эффекты, производимые классическими медиаторами (S.Ennion 2000; C.Sesti et al., 2002; S.Boehm et al., 2003). Показано, что АТФ ингибирует освобождение НА через пресинаптические Р2У-рецепторы и ослабляет положительный инотропный эффект при стимуляции симпатических нервов в предсердиях крыс, (I. Kugelgen et al., 1996; B.Sperlagh et al., 2000; D.McKitrick, 2000). Известно, что внеклеточная АТФ вызывает депрессорные рефлексы и брадикардию сердца за счет стимуляции Р2Х-рецепторов, расположенных на вагусных афферентных волокнах, что имеет важное значение при ишемии и гипоксии сердца (G.Katchanov, 1996; A.Pelleg et al., 1997; Z.Xiang, 1998; J.Xu, 2005).

Представление о физиологической роли пуриновых рецепторов будет неполным, если не рассмотреть их взаимоотношения с рецепторами для других нейромедиаторов. В литературе имеются сведения о функциональном взаимодействии пуриновых рецепторов с холинорецепторами (A.Шакирзянова и др., 2005; E.Silinsky, R.Redman, 1994; R.Giniatullin, E.Sokolova, 1998; T.Searl, 1998). Исследования, проведенные на кардиомиоцитах предсердий, показали, что экзогенная АТФ на фоне карбахолина двухфазно изменяет длительность потенциала действия, что подтверждает способность АТФ модулировать эффекты основного медиатора (Y.Hara, H.Nakaya, 1997). Взаимодействие между адренорецепторами и пуринорецепторами в сердце может проявляться и при активации внутриклеточных сигнальных путей (M.Pucйat et al., 1998).

Согласно гипотезе Д. Бернстока (1972) функцию медиатора АТФ начала выполнять еще на начальных этапах эволюции, задолго до появления основных медиаторов. АТФ считается одним из наиболее филогенетически древних нейромедиаторов. Подтверждением этой гипотезы является тот факт, что внеклеточный эффект АТФ обнаруживается у примитивных организмов, включающих бактерии и диатомовые морские водоросли (G.Burnstock, 1996). Известно, что и в онтогенезе пуринорецепторы появляются одними из первых. Внеклеточные рецепторы к АТФ, наряду с М-холинорецепторами являются первыми функционально активными мембранными рецепторами, выявляемыми в период формирования зародыша (J.Liou, 1995; L.Sun et al., 1996; J.Shacher, 1997).

На сегодняшний день изучение пуринергической регуляции сердца в онтогенезе затрагивает только неонатальный период развития (T.Webb et al., 1996; Y.Bogdanov et al., 1998; M.Hansen et al., 1999; K.Cheung et al., 2003). Многие аспекты функционирования Р2-рецепторов на важнейших этапах раннего постнатального онтогенеза остаются малоизученными, а постсинаптические эффекты АТФ отличаются в различных тканях и на разных этапах онтогенеза. (G.Vassort, 2001).

Правомерно было бы предположить, что на ранних этапах постнатального онтогенеза, в условиях незрелости симпатических и парасимпатических регуляторных влияний на сердце, его рецепторного аппарата, возможны разные механизмы влияния АТФ на эффекты основных медиаторов и модулирующее влияние АТФ зависит от этапов биологического созревания организма.

Цель и задачи исследования

Целью исследования является определение семейства и подтипа Р2-пуриноцепторов, участвующих в регуляции сердечной деятельности и изучение влияния стойких аналогов АТФ на функциональную активность адрено- и холинорецепторов миокарда крыс в раннем постнатальном онтогенезе. сердце крыса пуриноцептор аденозинтрифосфат

В работе решались следующие задачи:

1. Установить дозозависимое влияние АТФ на показатели сердечной деятельности крыс 14-, 21-, 56-, 100-суточного возраста in vivo.

2. Изучить влияние АТФ на хронотропную функцию сердца при блокаде в-адренорецепторов и М-холинорецепторов сердца.

3. Изучить дозозависимое влияние стойкого аналога АТФ - б,в-метиленАТФ на показатели сердечной деятельности крыс 14-, 21-, 56-, 100-суточного возраста in vivo.

4. Определить влияние АТФ и б,в-метилен-АТФ на хронотропную реакцию сердца при блокаде Р2-, и Р2У- рецепторов.

5. Определить влияние б, в-метилен-АТФ на хронотропную реакцию сердца при блокаде Р2Х ₁ - рецепторов.

6. Установить дозозависимое влияние АТФ на сократимость миокарда крыс 14-, 21-, 56-, 100-суточного возраста in vitro.

7. Изучить дозозависимое влияние стойкого аналога АТФ - 2-метилтиоАТФ на сократимость миокарда крыс 14-, 21-, 56-, 100-суточного возраста in vitro.

8. Изучить влияние 2-метилтиоАТФ на сократимость миокарда крыс 14 - 100-суточного возраста при блокаде Р2Х и Р2У-рецепторов.

9. Изучить дозозависимое влияние агониста Р2Х₁-рецепторов вёг -метиленАТФ на показатели сердечной деятельности крыс 14-, 21-, 56-, 100-суточного возраста в условиях in vivo и in vitro.

10. Определить влияние вёг -метилен-АТФ на сократимость миокарда при блокаде Р2Х₁ - рецепторов.

11. Исследовать влияние совместного внутривенного введения б,в-метиленАТФ с норадреналином и ацетилхолином на показатели сердечной деятельности крыс 14-, 21-, 56-, 100-суточного возраста in vivo.

12. Исследовать совместное влияние 2-метилтио-АТФ и карбахолина, 2-метилтио-АТФ и изопротеренола на сократимость миокарда крыс 14-, 21-, 56-, 100-суточного возраста.

Положения, выносимые на защиту:

1. АТФ и ее стойкие аналоги повышают сократимость миокарда и частоту сердечных сокращений у крыс 14-100 - суточного возраста за счет активации Р2Х₁-рецепторов.

2. На ранних этапах постнатального онтогенеза наблюдается гетерохронное проявление функциональной активности разных подтипов Р2Х-рецепторов в предсердиях и желудочках сердца крыс. Роль Р2Х-рецепторов в положительном инотропном эффекте от 14- к 100-суточному возрасту в предсердиях снижается, а в желудочках возрастает.

3. Чувствительность сердца к агонистам Р2-пуриноцепторов от 14- к 100-суточному возрасту снижается.

4. Стойкие аналоги АТФ модулируют адренергическую и холинергическую регуляцию сократимости миокарда разнонаправленно на разных этапах раннего постнатального онтогенеза крыс.

Научная новизна

В работе впервые показано, что все используемые агонисты Р2-пуриноцепторов: АТФ, Ь,в -метиленАТФ, 2-метилтиоАТФ и в,г-метиленАТФ вызывают дозозависимое увеличение частоты сердечных сокращений и силы сокращения миокарда предсердий и желудочков. Концентрации агонистов, вызывающие положительный инотропный и хронотропный эффект от 14- к 100-суточному возрасту повышаются, что указывает на более высокую чувствительность миокарда к агонистам Р2Х- рецепторов на ранних этапах постнатального онтогенеза, это 14- и 21- суточные животные. Использование селективного агониста и блокатора Р2Х ₁ -пуриноцепторов в, г-метиленАТФ и TNP АТФ позволило установить подтип Р2Х-рецепторов, участвующих в повышении частоты сердечных сокращений и силы сокращения миокарда. Доказано, что в реализации положительного хронотропного и инотропного влияния принимают участие Р2Х₁-рецепторы.

Впервые показаны возрастные особенности реакции сократимости миокарда на стимуляцию агонистами Р2-пуринорецепторов. Максимальная реакция силы сокращения миокарда на 2-метилтиоАТФ и в,г-метиленАТФ наблюдается у 21- и 14-суточных крысят достоверно снижаясь к 100-суточному возрасту.

Проведенные серии экспериментов с использованием разнообразных агонистов и блокаторов позволили получить новые данные о возрастных особенностях реакции различных подтипов Р2-рецепторов в регуляции сократимости миокарда в постнатальном онтогенезе. Впервые показано гетерохронное проявление функциональной активности разных подтипов Р2Х - рецепторов в предсердиях и желудочках крыс в раннем постнатальном онтогенезе. Роль Р2Х - рецепторов в увеличении силы и длительности сокращения в предсердиях от 14- к 100-суточному возрасту снижается, а в желудочках возрастает. Участие Р2Х₄ -рецепторов в повышении сократимости миокарда желудочков на ранних этапах онтогенеза незначительно и проявляется только у 100-суточных крыс.

При изучении совместного влияния 2-метилтиоАТФ, карбахолина и изопротеренола выявлено, что АТФ модулирует адренергическую и холинергическую регуляцию сократимости миокарда разнонаправлено на разных этапах раннего постнатального онтогенеза крыс. У крыс 21- и 56- суточного возраста совместное действие агонистов в - адренорецепторов и Р2Х-рецепторов приводит к развитию однонаправленного, аддитивного эффекта в увеличении сократимости миокарда.

Эффект совместного влияния агонистов Р2-рецепторов 2-метилтио-АТФ и М₂-холинорецепторов карбахолина на сократимость миокарда может быть усиливающим или ингибирующим в зависимости от возраста крыс. У 21-суточных крысят 2-метилтиоАТФ снижает угнетающий эффект КХ на сократимость миокарда предсердий и желудочков и усиливает у 14-суточных.

Теоретическая и практическая значимость работы.

Полученные результаты значительно расширяют представление о физиологической роли внеклеточной АТФ, участии разных подтипов Р2Х-рецепторов в сердечной деятельности крыс в раннем постнатальном онтогенезе.

Результаты проведенного исследования углубляют имеющиеся на настоящее время сведения о роли АТФ в качестве модулятора эффектов классических медиаторов на ранних этапах постнатального онтогенеза крыс, в условиях незрелости регуляторных симпатических и парасимпатических влияний на сердце. Материалы исследований заслуживают внимания со стороны специалистов по возрастной и нормальной физиологии и кардиологии.

Апробация работы

Материалы исследований доложены на Всероссийской научной конференции «Физиология сердца» (Казань, 2005); I Съезде физиологов СНГ (Сочи, 2005); ХХ Съезде Физиологического Общества им. И.П. Павлова (Москва, 2007); VII Всероссийском научном симпозиуме «Растущий организм: адаптация к физической и умственной нагрузке», (Казань, 2006); Всероссийской конференции по физиологии кровообращения, ФФМ МГУ имени М.В. Ломоносова (Москва, 2008); VI Сибирском физиологическом съезде (Барнаул, 2008); IX Всероссийской научно-теоретической конференции «Физиологические механизмы адаптации растущего организма» (Казань, 2006, 2008); на заседании Татарского отделения Физиологического общества им. И.П.Павлова (Казань, 2009); Международной конференции «Физиология развития человека» Института возрастной физиологии РАО (Москва, 2009); на итоговых научных конференциях профессорско-преподавательского состава Татарского государственного гуманитарно-педагогического университета (2005-2008), на заседаниях кафедры анатомии, физиологии и охраны здоровья человека ТГГПУ (Казань, 2005-2009). Основное содержание работы отражено в 34 работах.

Структура и объем диссертации. Диссертационная работа объемом 290 страниц состоит из введения, обзора литературы, описания организации и методов исследования, результатов исследования и их обсуждения, заключения, выводов и списка литературы. Работа содержит 48 таблиц и 37 рисунков. Список литературы включает 474 источника, из них 110 отечественных и 365 зарубежных авторов.

ОРГАНИЗАЦИЯ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Эксперименты проводились в условиях in vivo и in vitro. Исследования проведены на 1052 разнополых лабораторных беспородных белых крысах стадного разведения. Исследовали 4 возрастные группы животных: 14-, 21-, 56-, и 100-суточного возраста.

Методика регистрации сократимости полосок миокарда. Сократительную активность миокарда в эксперименте in vitro изучали на полосках предсердий и желудочков. Определение реакции сократительной функции миокарда на действие агонистов проводили на установке "PowerLab" ("ADInstruments") с датчиком силы "MLT 050/D" ("ADInstruments"). Запись кривой регистрировали на персональном компьютере при помощи программного обеспечения "Chart 5.0". Рассчитывали абсолютные значения силы сокращения в граммах и общую длительность изометрического сокращения полосок миокарда в секундах, а также оценивали процент изменения на действие агониста в процентах от исходных показателей, которые принимали за 100%.

Из правого желудочка и предсердия при помощи специальных ножниц и пинцетов препарировали полоски. Длина полосок составляла 1,5-2 мм, ширина не превышала 1мм. Препарат фиксировали вертикально одним концом к датчику силы, другим -- к точке опоры, затем каждый препарат погружали в отдельный резервуар объемом 10 мл, в который подавался рабочий раствор. Состав раствора Кребса (в г/л): NaСl- 8 г; KCl- 0,3г; CaCl₂- - 3 мл; MgSO₄ -0,5 мл; NaH₂PO₄- 0,04 г; глюкоза - 2 г; Trizma HCl- 2.4-3.9 г/л; Trizma base- 0.25 г/л (Sigma). Раствор постоянно аэрировали карбогеном 95% O₂ и 5% CO₂, рН поддерживали в пределах 7.3-7.4

После погружения препаратов в резервуары следовал "период приработки" в течение 40-60 мин, в ходе которой мышечным полоскам постепенно придавалось оптимальное натяжение. По окончании приработки 10 мин регистрировали исходные параметры сокращения, затем в течение 20 мин с добавлением в рабочий раствор агониста одной из концентраций. Агонисты Р2-рецепторов: АТФ, 2-метилтиоАТФ, в,г-метиленАТФ добавляли в различных концентрациях и оценивали изменения сокращений полосок миокарда крыс. По окончании стимуляции агонистами препараты трехкратно отмывали рабочим раствором в течение 10 мин, затем регистрировали исходные показатели для каждой последующей дозы. Для изучения совместного влияния 2-метилтио-АТФ карбахолина и изопротеренола записывали влияние карбахолина или изопротеренола в контроле, затем полоски отмывали, записывали исходную сократимость в течение 10 мин, вновь добавляли карбахолин или изопротеренол и на 10 мин добавляли 2-метилтиоАТФ. Также проводили эксперименты с обратной последовательностью подачи веществ, когда карбахолин или изопротеренол добавляли на фоне действия 2-метилтиоАТФ.

Методика регистрации электрокардиограммы и реограммы. В экспериментах in vivo регистрировали ЭКГ на электрокардиографе ЭК1Т- 04, с которого сигналы через аналого-цифровой преобразователь передавались на ЭВМ и для визуального контроля параллельно поступали в осциллограф С1- 83. Для определения величины ударного объема крови сердца растущих крыс, применяли метод тетраполярной импедансной реоплетизмографии, разработанный Кубичеком с соавторами (W.Kubicek, 1974) в модификации Б.С. Кулаева и Р.А. Абзалова. Регистрация дифференцированной реограммы осуществлялась при естественном дыхании, параллельно с электрокардиограммой с помощью реоплетизмографа РПГ - 204. Статистической обработке подвергались ЧСС, УОК и 2 параметра вариационной пульсограммы - амплитуда моды (АМо) и вариационный размах (ДХ), отражающие активность симпатической и парасимпатической нервной системы.

Фармакологические препараты в условиях in vivo вводили в яремную или бедренную вену. В экспериментах использовали следующие вещества: агонисты Р2Х-пуринорецепторов аденозинтрифосфорную кислоту (АТФ) 10-⁴М (0,02 мг/кг); б,в-метилен АТФ 10-⁴М (0,02 мг/кг); в,г-метилен АТФ (Во, 2002); сурамин (20мг/кг) (McQueen, et al., 1998); реактив голубой-2 (5 мг/кг) (Kichenin et al., 2000); TNP-АТР (0,8 мг/кг) (King et al., 2004); ацетилхолин хлорид 10-⁴М (20 мкг/кг); норадреналин битартрат (3,2 мкг/кг). Препараты АТФ, б,в-метилен АТФ, сурамин, реактив голубой-2, РРADS, TNP-АТР, в,г-метилен АТФ, ацетилхолин, карбахолин, изопротеренол производства фирмы «Sigma». Все остальные вещества отечественного производства.

Достоверность различий в экспериментах в условиях in vitro определяли с использованием непараметрического парного и непарного критерия Стьюдента. В экспериментах in vivo достоверность различий в связанных группах устанавливали с использованием непараметрического критерия Вилкоксона. Достоверными считались результаты при р<0,05.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Влияние экзогенных АТФ и аденозина на деятельность сердца крыс в онтогенезе. Для определения влияния АТФ в зависимости доза-эффект животным внутривенно вводили растворы АТФ в концентрации 10^-3 -10^-6М объемом 0.075 мл (Рис. 1). Введение раствора АТФ в концентрации 10^-6М не оказало действия. АТФ в концентрации 10^-5М в течение 1 мин вызывала небольшое, но достоверное увеличение ЧСС. К концу 1-й минуты ЧСС возвращалась к исходным значениям и сохранялась на этом уровне в течение 10 мин наблюдения. Увеличение концентрации АТФ до 10^-4М (0,02мг/кг) привело к усилению хронотропного эффекта с 387±10,5 уд/мин до 415± 13,4 уд/мин (n=12; р<0,05). Также определяли дозозависмый эффект на введение АТФ животным 14-, 21-, 56- и 100-суточного возраста. Внутривенное введение АТФ в концентрации 10^-6М вызывает увеличение частоты сердечных сокращений без изменения ударного объема крови у 14- и 21-, -суточных крыс, а в концентрации 10^-4М у 56- и 100-суточных.

Наблюдаемые изменения ЧСС могли быть связаны как с прямым эффектом АТФ на сердце, так и с действием аденозина, который образуется при гидролизе АТФ и может действовать через собственные Р1-рецепторы. Введение аденозина в концентрации 10^-4М не привело к изменению основных показателей работы сердца. Следовательно, увеличение ЧСС было вызвано прямым действием экзогенной АТФ.

Рис. 1 Изменение ЧСС при внутривенном введении АТФ разных концентраций животным 100 - суточного возраста; * - р ?0,05

Положительное хронотропное действие АТФ на сердце могло быть обусловлено как действием АТФ на миокард, так и изменением активности симпатических и парасимпатических каналов регуляции. В следующей серии экспериментов изучали влияние экзогенной АТФ на фоне блокады в- адренорецепторов обзиданом и М-холинорецепторов атропином.

При введении АТФ 10^-4М при блокаде в- адренорецепторов наблюдали такое же, как в контроле, увеличение ЧСС к 20секунде (р<0,05) (Рис.2). При воздействии АТФ на фоне блокады М-холинорецепторов атропином характер изменений ЧСС был таким же. Сохранение положительного эффекта АТФ на фоне блокады как в- адренорецепторов, так и М-холинорецепторов, позволяет высказать предположение о прямом действии АТФ на сердце.

Рис. 2 Динамика ЧСС при введении АТФ на фоне блокады М-холинорецепторов и в-адренорецепторов сердца 100 - сут. животным

Влияние б,в - метиленАТФ на деятельность сердца крыс в онтогенезе. Известно, что АТФ является не стойким веществом и в присутствии экто-АТФазы быстро разрушается до аденозина при однократном прохождении через сердце (G. Vassort, 2001). Поэтому в следующей серии экспериментов был использован стойкий аналог АТФ - б,в - метиленАТФ.

Устойчивый к энзиматическому распаду б,в - метиленАТФ является агонистом преимущественно для Р2Х-рецепторов. Для определения зависимости доза-эффект использовали растворы б,в - метиленАТФ в концентрации 10^-11 -10^-4М. Стойкий аналог АТФ б,в-метилен АТФ увеличивает ЧСС в концентрациях 10^-10М у 14 -суточных крысят, 10^-7М у 21- и 56-суточных и 10^-4М - у 100- суточных.

Эффект экзогенного б,в - метиленАТФ был кратковременным, таким же как действие АТФ, что, возможно, вызвано быстрой десенситизацией Р2-рецепторов сердца. Известно, что б,в - метилен АТФ селективно снижает чувствительность Р2Х-рецепторов к агонистам (V.Ralevic et all., 1998).

Влияние сурамина на показатели сердечной деятельности крыс. Для подтверждения влияния АТФ и ее аналогов на Р2-рецепторы в следующей серии экспериментов изучали влияние экзогенных пуринов на сердечную деятельность в условиях их блокады. Неселективным блокатором Р2-рецепторов является сурамин. Блокада сурамином Р2-рецепторов в концентрации 20 мг/кг при внутривенном введении длится более часа (McQueen et al., 1998). Внутривенное введение экзогенных АТФ и б,в-метилен АТФ на фоне неселективного антагониста Р2-рецепторов сурамина не вызывает достоверных изменений ЧСС, УОК у крыс 14 - 100-суточного возраста. Следовательно, положительное хронотропное влияние экзогенных АТФ и б,в-метилен АТФ осуществляется через Р2-рецепторы сердца крыс.

Влияние АТФ и б,в - метиленАТФ на показатели деятельности сердца при блокаде Р2У-рецепторов. Для определения семейства Р2-рецепторов, участвующих в положительном хронотропном эффекте использовали селективный блокатор Р2-рецепторов реактив голубой-2 с преимущественным действием на Р2У-рецепторы. Свой блокирующий эффект реактив голубой-2 (производное антрахиносульфаниловой кислоты) проявляет в узком диапазоне концентраций и коротком времени инкубации, которая длиться не более 60 минут (A.Зиганшин и др., 1999; Hopwood, 1987). Для Р2-рецепторов сердца крысы, подтверждено существование эффективной блокады Р2У-рецепторов реактивом голубым-2 (G.Burnstock, 2006).

Введение АТФ в концентрации 10^-6 - 10^-4 М, б,в-метилен АТФ в концентрации 10^-10 - 10 ^-4М животным 14 - 100-суточного возраста на фоне реактива голубого-2 увеличивает ЧСС к 15-17 секунде после введения во всех возрастных группах. Введение б,в-метилен АТФ в концентрации 10^-10М на фоне реактива голубого-2 14-суточным крысятам увеличивает ЧСС с 357±3,6 уд/мин до 369 ± 4,1 уд/мин (р<0,05). У 21-суточных крысят положительный хронотропный эффект с 438 ±2,2 до 450 ±3,3 уд/мин (р<0,05) возникает при введении б,в-метиленАТФ в концентрации 10^-7М (р<0,05). Введение б,в-метилен АТФ в концентрации 10^-4М на фоне реактива голубого-2 у 56-суточных крыс увеличивает ЧСС с 394±2,8 уд/мин до 405±2,3 уд/мин (р<0,05) и 100-суточных с 354±3.0 уд/мин до 364±2,7 уд/мин (р<0,05). Таким образом, появление положительного хронотропного эффекта у крыс всех возрастных групп при введении АТФ и б,в-метиленАТФ на фоне блокады Р2У-рецепторов указывает на активацию Р2Х-рецепторов.

Влияние б,в - метиленАТФ на показатели сердечной деятельности крыс при блокаде Р2Х ₁ -рецепторов. Для определения подтипа Р2Х-рецепторов, участвующих в положительной хронотропной реакции при влиянии АТФ и ее аналогов использовали селективный блокатор TNP-АТФ (2ґ,3ґ-о-(2,4,6-тринитрофенил) аденозин- 5 - трифосфат), который является производным АТФ. Это сильный и неконкурентный антагонист Р2Х₁- пуриноцепторов сердца (G.Vassort, 2001; P.Honore et al., 2002; J. Xu et al., 2004). Он используется для характеристики нативных Р2Х₁- Р2Х_2/3- и Р2Х_3-рецепторов в низкой наномолярной концентрации (E.Burgard et al., 2000). Длительность ингибирующего эффекта TNP-АТФ в концентрации 0,8 мг/кг составляет более 15 минут (K.King еt al., 2004). Внутривенное введение б,в-метилен-АТФ в концентрации 10^-10М 14-суточным и в концентрации 10^-7М 21-суточным крысятам на фоне TNP-АТФ не приводит к изменению основных показателей деятельности сердца. Введение б,в-метилен-АТФ в концентрации 10^-4М 56- и 100- суточным крысам на фоне TNP-АТФ не вызывает изменений ЧСС, УОК, АМо и ?Х.

Влияние агониста Р2Х₁ -рецепторов на деятельность сердца крыс в онтогенезе. Синтетическим аналогом АТФ является в,г-метиленАТФ. В некоторых литературных источниках его определяют как селективный агонист Р2Х₁-пуринорецепторов (X.Bo, 2002; B. Hu et al., 2002). Другие исследователи считают, что к нему чувствительны Р2Х₁-, Р2Х₃- и Р2Х _2/3 -рецепторы (A.Nort, 2002). Этот агонист является нестойким соединением и во многих тканях распад в,г-метиленАТФ до аденозинового аналога происходит за 1 мин (A.Nort., 2002), поэтому введение препарата проводили в яремную вену. В доступной нам литературе не удалось найти ссылок на дозировку используемого агониста, рекомендуемую в опытах in vivo. Влияние агониста на деятельность сердца изучали в большом диапазоне концентраций с 10^-14 по 10^-4М (рис3). Нами установлено, что в,г-метилен-АТФ в концентрации 10^-13-10^-8М вызывает дозозависимое увеличение ЧСС в зависимости от возраста крыс. Внутривенное введение агониста к 15-17 секунде повышает ЧСС 14-сут. животным в концентрации 10^-13М эксперимента, 21-суточным крысятам в концентрации 10^-11М, 56-и 100 - суточным крысам в концентрации 10^-8М (р<0,05). Полученные результаты подтверждают участие Р2Х₁-пуриноцепторов в реализации положительного хронотропного эффекта.

ЧСС уд/мин



ЧСС уд/мин

Рис. 3 Изменение частоты сердечных сокращений 14- (А) и 56 -суточных крыс (Б) при внутривенном введении раствора различных концентраций в,г-метилен АТФ

* достоверно по сравнению с исходным значением *р<0,05

Таким образом, все используемые агонисты Р2-пуриноцепторов: АТФ, б,в-метилен-АТФ и в,г-метилен-АТФ вызывают дозозависимое от возраста увеличение ЧСС. От 14 к 100-суточному возрасту концентрации АТФ и ее аналогов, вызывающие положительную хронотропную реакцию снижаются. Полученные результаты указывают на более высокую чувствительность сердца к агонистам Р2Х -рецепторов на ранних этапах постнатального онтогенеза. Все агонисты Р2Х-рецепторов вызывают кратковременное, но достоверное увеличение ЧСС у 14-100 суточных крыс. Данный эффект развивается быстро и длится недолго. В основе механизма положительного хронотропного эффекта АТФ лежит возбуждение Р2Х-рецепторов и активация неселективных катионных токов с преобладанием проницаемости для ионов кальция. Последующая деполяризация клетки является достаточной для активации потенциалзависимых Са²⁺ каналов и дополнительному току Са²⁺ внутрь клетки. В ряде работ показана значительная роль внеклеточной АТФ в появлении кальциевых токов и развитии ПД в клетках синусно-предсердного узла (F.Scamps and G. Vassort, 1990; A.Christie, 1992; Y.Qi and Y.Kwan, 1996). С другой стороны, трудно ожидать значительный эффект на ритм синусного узла, потому что внеклеточная АТФ активирует независимый от времени, слабо входящий неселективный катионный ток (M.Shoda et al., 1997). Таким образом, АТФ-вызванные неспецифические катионные токи деполяризуют клеточную мембрану и вызывают спонтанную автоматию.

Влияние совместного введения норадреналина и б, в-метилен-АТФ на показатели сердечной деятельности крыс в онтогенезе. Введение НА в концентрации 10^-5М 14-суточным крысятам увеличивает ЧСС на 5%, УОК достоверно не меняется. Совместное введение НА и бёв-метиленАТФ приводит к увеличению ЧСС на 20% (р<0,005) и не изменяет УОК (Рис. 4). Введение НА 21-сут. крысам увеличивает ЧСС на 21%, УОК на 12% (р<0,005). Совместное введение НА и бёв-метиленАТФ приводит также к достоверному увеличению ЧСС и УОК на 17%. Введение НА 56-сут. животным увеличивает ЧСС на 14%, УОК на 47% (р<0,005). Совместное введение НА и бёв-метилен-АТФ приводит к увеличению хронотропной реакции на 18% и увеличению УОК на 75% (р<0,005). У 100-сут. крыс введение НА увеличивает ЧСС на 20%, УОК на 42% (р<0,005). Совместное введение НА и бёв-метилен-АТФ повышает ЧСС только на 7% (р<0,05), УОК при этом не изменяется (Рис. 5). Хронотропная реакция сердца на введение НА меняется в постнатальном онтогенезе. Минимальная реакция ЧСС наблюдается у 14-сут. животных (р<0,05), которые не имеют сформированную симпатическую иннервацию сердца и максимальная у 21- и 100-суточных животных. Совместное введение б,в-метилен-АТФ и норадреналина достоверно уменьшает хронотропный ответ у 100-суточных крыс на 13% (р<0,05) и увеличивает его у 14- суточных на 15% (р<0,05) по сравнению с введением норадреналина.



Рис. 4 Изменение ЧСС у 14-суточных крыс при внутривенном введении растворов НА 10^-5М и НА с б,в -метилен АТФ 10^-10М

* достоверно по сравнению с исходным значением *р<0,05.

Рис. 5 Изменение показателей сердечной деятельности 100-суточных крыс при внутривенном введении растворов НА 10^-5М и НА с б,в -метилен АТФ 10^-4М

* достоверно по сравнению с исходным значением *р<0,05, **р<0,005

Влияние совместного введения ацетилхолина и б,в-метиленАТФ на показатели сердечной деятельности крыс в онтогенезе. У 14-суточных крысят введение АХ в концентрации 10^-4М увеличивает ЧСС на 8% и уменьшает УОК на 12% (р<0,05). Совместное введение АХ и б,в-метилен-АТФ приводит к положительному хронотропному эффекту, который составляет 4% и отсутствию изменений УОК. Максимальное снижение ЧСС и УОК на введение АХ наблюдается у 21-суточных крысят и составляет 12% и 16% соответственно. Совместное введение АХ и б,в-метиленАТФ уменьшает ЧСС на 3% и УОК на 2% (Табл. 1, 2). У 56-суточных крыс введение АХ снижает ЧСС на 4%, УОК на 18% (р<0,05). Совместное введение агонистов приводит к появлению положительной хронотропной реакции (5%) и снижению УОК на 18%. У 100-суточных животных введение АХ уменьшает ЧСС на 5% и повышает УОК на 13% (р<0,05). При совместном введении агонистов ЧСС уменьшается на 13%, а УОК повышается на 17% (р<0,05). В наших экспериментах влияние АХ вызывает разную реакцию на ЧСС и УОК в онтогенезе. Хронотропная реакция сердца при введении АХ снижается от 21 - к 100-суточному возрасту.

У 21-и 56-суточных крысят совместное введение АХ и б, в -метиленАТФ приводит к появлению кардиотропного эффекта АТФ. Ингибирующий эффект ацетилхолина уменьшается у 21-суточных, а у 56-суточных отрицательный хронотропный эффект АХ меняется на положительный (р<0,05). У 100-суточных животных совместное действие агонистов усиливает хронотропный эффект АХ и значительно повышает УОК (р<0,05).

Таблица 1

Показатели сердечной деятельности 21-суточных крыс при введении ацетилхолина 10^-4М

Показатели сердечной деятельности	время
	исх	15с	30с	45с	1мин	3мин	5мин	10мин
ЧСС, уд/мин	456±7,0	402±10,2 **	415±10,2	428±8,5	442±9,4	446±5,6	450±5,5	456±6,5
УОК мл	0,0143± 0,0007	0,0121± 0,0008 *	0,0147± 0,001	0,00144± 0,001	0,0145± 0,0008	0,0154± 0,001	0,0150± 0,001	0,0147± 0,0009

Таблица 2

Показатели сердечной деятельности 21-суточных крыс при совместном введении ацетилхолина 10^-4М и б,в-метилен АТФ 10^-7М

Показатели сердечной деятельности	время
	исх	15с	30с	45с	1мин	3мин	5мин	10мин
ЧСС, уд/мин	458±5,4	441±7,3 *	448±7,2	451±6,3	461±7,8	460±6,0	457±3,6	456±3,7
УОК мл	0,0145± 0,0008	0,0141± 0,0008	0,0148± 0,0009	0,0150± 0,001	0,0150± 0,001	0,0149 0,001	0,0148± 0,001	0,0144± 0,003

* - достоверно по сравнению с исходным значением *р<0,05, ** р<0,005

В экспериментах на целостном организме трудно разграничить сердечные и сосудистые влияния экзогенной АТФ. Известно, что АТФ регулирует сосудистый тонус, освобождаясь как котрансмиттер с НА из симпатических нервов, вызывая вазоконстрикцию и вазодилатацию при участии пуринорецепторов на гладкомышечных стенках сосудов и эндотелиальных клетках внутри просвета сосуда. Для изучения прямого влияния АТФ на сердце следующие серии экспериментов проводили в условиях in vitro - на полосках миокарда.

Влияние АТФ и аденозина на сократимость миокарда крыс в раннем постнатальном онтогенезе. АТФ является агонистом всех подтипов Р2-рецепторов. Однако, ее действие как агониста Р2-рецепторов очень кратковременно вследствие быстрого разрушения внеклеточными нуклеотидазами. АТФ в концентрации 10^-7М-10^-6М вызывает увеличение силы сокращения миокарда желудочков (Рис. 5). Увеличение концентрации АТФ до 10^-5 -10^-4М угнетает сократимость полосок миокарда. Чем же вызван отрицательный эффект высоких концентраций АТФ на сократимость миокарда? Долгое время влияние АТФ на сердце связывали с ее распадом до аденозина, который оказывает отрицательное хронотропное и инотропное действие через Р1-пуринорецепторы. Однако, существует ряд экспериментальных доказательств прямого действия АТФ на сердце через свои собственные Р2-рецепторы, независимо от ее превращения в аденозин. Поэтому в следующей серии экспериментов изучали влияние АТФ на сократимость полосок миокарда на фоне неселективного блокатора Р1-пуринорецепторов 8-фенилтеофелина в концентрации 10^-3М (A.Rubino et al., 1992). При блокаде Р1-рецепторов отрицательный инотропный эффект высоких концентраций АТФ в не сохраняется (Рис. 6). Следовательно, внеклеточная АТФ вызывает положительный инотропный эффект миокарда желудочков за счет активации Р2-пуринорецепторов.

Рис. 5 Влияние АТФ на сократимость миокарда желудочков растущих крыс

* - достоверно по сравнению с исходным значением: р<0,05

Рис. 6 Влияние АТФ на сократимость полосок желудочков миокарда крыс после блокады Р1 пуринорецепторов 8-фенилтеофеллином

*- достоверно по сравнению с исходным значением *р<0,05

Влияние 2-метилтио-АТФ на сократимость миокарда крыс в постнатальном онтогенезе. Подтипы Р2-рецепторов отличаются не только особенностями молекулярной структуры, но и чувствительностью к действию различных производных пуриновых и пиримидиновых нуклеотидов. Выбор препарата 2-метилтиоАТФ определялся тем, он является стойким аналогом АТФ, а также агонистом как Р2Х-, так и Р2Y₁-рецепторов сердца.

Установлено, что 2-метилтиоАТФ в концентрации 10^-10М-10^-6М вызывает дозозависимое увеличение силы сокращения полосок миокарда предсердий и желудочков 14-100 суточных крыс (Рис. 7; табл. 2). У 14-суточных 2-метилтиоАТФ в концентрации 10^-8М увеличивает сократимость предсердий на 15,4+2,06% (р<0.01), желудочков на 25,8+6,1% (р<0.01). У 21-дневных агонист в концентрации 10^-7М увеличивает силу сокращения предсердий и желудочков приблизительно на 31,3± 5,8 % (р<0.01). У 56-суточных при действии 2-метилтио-АТФ в концентрации 10^-9М сила сокращения миокарда предсердий и желудочков возрастает на 11,6+0,6% (р<0.05) и 13,3+0,8% (р<0.05). У 100-суточных крыс увеличение силы сокращения миокарда на 2-метилтиоАТФ в концентрации 10^-6М у 100-суточных крыс составило всего 6,5+0,2%. Длительность сокращения увеличивается у 14- и 21-суточных крысят (р<0.05).

Рис. 7 Влияние 2-метилтио-АТФ на силу сокращений миокарда желудочков сердца крыс

* - достоверно по сравнению с исходным значением *р<0,05

Таблица 2

Влияние 2-метилтиоАТФ на силу и длительность сокращения миокарда 14-100 суточных крыс

возраст	Концент рация		Fi исх (g)	Fiмах (g)	Tисх (с)	Тмах (с)
14 сут.	10-8М	желудочек	0,06400±0,001000	0,07900±0,004898*	2,21140±0,01500	1,86280±0,08757*
		предсердия	0,02890±0,00300	0,035374±0,00074*	0,64825±0,01490	0,55226±0,01200*
21сут.	10-7М	желудочек	0,14137±0,00285	0,18581±0,00424*	1,45158±0,07765	1,90302±0,01408*
		предсердия	0,10120±0,02000	0,11638±0,00593*	1,34695±0,01440	1,54337±0,06482*
56 сут.	10-9М	желудочек	0,14230±0,00436	0,16133±0,00543*	0,40634±0,07002	0,45347±0,00027
		предсердия	0,11186±0,00402	0,12483±0,00075*	1,18140±0,13050	1,05329±0,11900
100сут.	10-6М	желудочек	0,12978±0,01441	0,13834±0,01542	1,20444±0,03365	1,28272±0,002950
		предсердия	0,06187±0,00745	0,06588±0,00792	0,01940±0,00299	0,01981±0,003052

Примечание: * - достоверность по сравнению с исходным значением: р<0,05

Влияние 2-метилтиоАТФ на сократительную активность миокарда при блокаде Р2У-рецепторов. Для определения семейства Р2-рецепторов, участвующих в положительном хронотропном и инотропном эффекте, использовали селективные блокаторы Р2Х и Р2У-рецепторов.

Реактив голубой-2 - антагонист с преимущественным действием на Р2Y-пуринорецепторы. В нашем случае 2-метилтиоАТФ является агонистом Р2У₁-рецепторов сердца, а реактив голубой -2 показывает стойкий ингибирующий эффект по отношению к этим рецепторам (А. Hopwood, 1987). Блокатор добавляли в концентрации 1,5 мМ (G.Burnstock, 2006).

При блокаде Р2У-рецепторов 2-метилтио-АТФ достоверно увеличивает силу сокращения предсердий и желудочков во всех возрастных группах. Это доказывает участие в реализации положительного инотропного эффекта Р2Х-рецепторов сердца, однако, их функциональная активность на разных этапах онтогенеза различна. В наших экспериментах на изолированных полосках предсердий и желудочков 2-метилтиоАТФ при блокаде Р2У-рецепторов проявил разную эффективность в зависимости от возраста животных. Так, в предсердиях у 21-суточных крысят сила и общая длительность сокращения полосок миокарда предсердий на действие агониста достоверно выше, чем у 100-суточных (р<0,05) (Рис. 8). У 56- и 100-суточных животных сила сокращения миокарда желудочков на действие агониста выше, чем у 14-суточных (р<0,05). Следовательно, роль Р2Х-рецепторов в увеличении сократительной активности от 14-к 100-суточному возрасту в предсердиях снижается, а в желудочках возрастает. Возможно, это связано с более ранними сроками развития миокарда предсердий (Сосунов, 1988; Швалев и др.1992).

Влияние 2-метилтио-АТФ на сократительную активность миокарда при блокаде Р2Х-рецепторов. В настоящее время установлено, что PPADS является антагонистом всех рецепторов семейства Р2Х, кроме Р2Х₄ - и Р2Х₆ - подтипов, а в больших концентрациях угнетает Р2У₁-рецепторы (G. Сollo et al., 1996; M.Boarder et al., 2001; G.Vassort, 2001). Однако, однозначного ответа о выраженности блокирующего эффекта РРАDS по отношению к Р2У₁-рецепторам не существует. Показано, что этот агонист бывает инертен по отношению Р2У₁-опосредованному ответу (A/Зиганшин, 2004; Рычков, 2007; I. Chessel, 2001; G. Burnstock, 2009).

Рис. 8 Влияние 2-метилтио-АТФ на силу сокращений миокарда предсердий (А) и желудочков (Б) сердца растущих крыс после блокады Р2Y рецепторов RB2

* - достоверно по сравнению с исходным значением *р<0,05

В наших экспериментах РРАDS, блокатор Р2Х-рецепторов в концентрации 30 микроМ (A. Rubino, 1992) достоверно снижала эффекты 2-метилтиоАТФ у 14-, 21-и 56-суточных крысят. У 100-суточных животных РРАDS не устраняет положительного инотропного влияния 2-метилтио-АТФ на сократительную активность миокарда. Сила сокращения миокарда повышается на 21%, что указывает на участие Р2Х₄ -рецепторов (р<0,05; рис. 9). Таким образом, наблюдается гетерохронное проявление функциональной активности разных подтипов Р2Х-рецепторов в предсердиях и желудочках сердца крыс.

Рис. 9 Влияние 2-метилтио-АТФ на силу сокращения миокарда желудочков сердца растущих крыс после блокады Р2Х рецепторов PPADS

* - достоверно по сравнению с исходным значением *р<0,05

Иммуногистохимический анализ тканей сердца крысы показал присутствие Р2Х _1,2,4,5 -подтипов пуриноцепторов на сарколемме рабочих кардиомиоцитов (M.Hansen et al., 1999). Характер действия РРАDS и ответы агониста могут также косвенно указывать на участие в повышении сократимости и Р2У₁-рецепторов. Подтверждением выдвинутого предположения являются иммунигистохимические данные о возрастных особенностях локализации Р2У-рецепторов в сердце. Так, экспрессия Р2У-рецепторов в целом сердце и отдельных кардиомиоцитах меняется в онтогенезе и для Р2У₁-рецепторов она усиливается (T.Webb, 1996; G. Vassort, 2001).

Влияние агониста Р2Х ₁- рецепторов на сократимость миокарда. Для определения подтипа Р2Х-рецепторов, участвующего в реализации положительного инотропного эффекта использовали селективный агонист и антагонист этих рецепторов. Известно, что в, г-метиленАТФ оказывает свое преимущественное действие на Р2Х₁-пуринорецепторы сердца. В экспериментах на полосках миокарда нами установлено, что в, г метиленАТФ в концентрации 10^-13-10^-10М вызывает дозозависимое увеличение силы сокращения миокарда предсердий и желудочков крыс в постнатальном онтогенезе.

Рис. 10 Влияние бета, гамма- метилен АТФ на силу сокращения миокарда желудочков растущих крыс

*- достоверно по сравнению с исходным значением *р<0,05

При добавлении в,г-метиленАТФ сила сокращения предсердий возрастает в концентрации 10^-13М на 12,1±1,7% у 14-суточных и в концентрации 10^-12 -10^-11 М на 4,4±0,9% у 21-суточных (р<0,05). У 56-суточных крысят при добавлении агониста в концентрации 10^-12 М, максимальная сократительная активность миокарда предсердий составляет 7,7± 1,5% (р<0,05). А у 100-суточных в концентрации на два порядка ниже - 10^-10М сократимость увеличивается на 5,3% ±0,8% (р<0,05). Селективный агонист вызывает положительный инотропный эффект желудочков в каждом исследуемом возрасте в двух концентрациях. У 14- и 21-суточных крысят повышение сократительной активности происходит при действии в,г-метиленАТФ в концентрации 10^-12-10^-13М (Рис. 10). Максимальное увеличение силы сокращения желудочков при добавлении в,г-метиленАТФ в концентрации 10^-12М составляет у 14-суточных 31,2±4,7%, у 21-суточных 24,5±3,3% (р <0,01). У 56 - суточных животных оказываются эффективными концентрации в,г-метиленАТФ 10^-12 и 10^-11М. Наибольший сократительный эффект желудочков наблюдался в концентрации 10^-11М и составил 21,4±3,8 % (р<0,05). У 100-суточных крыс максимальный эффект в,г-метиленАТФ оказывает в концентрации 10^-10М, сократимость увеличивается на 13,6±1,8% (р<0,05). Увеличение концентрации в,г-метиленАТФ угнетает сократимость миокарда предсердий во всех исследуемых возрастных группах. Отрицательный эффект высоких концентраций в,г-метиленАТФ на сократимость полосок миокарда вызван его распадом до аденозина, который оказывает эффект через Р1-рецепторы.

Полученные результаты повышения сократимости миокарда, опосредованные Р2Х₁-рецепторами свидетельствуют о высокой чувствительности миокарда к агонистам Р2Х-рецепторов у 14- и 21-суточных крысят, особенно в желудочках.

Доказательством участия Р2Х₁- рецепторов служили эксперименты с селективным антагонистом Р2Х₁- Р2Х_2/3 -рецепторов TNP-АТФ. Добавление данного блокатора полностью предупреждает влияние в,г-метиленАТФ на сократимость миокарда предсердий и желудочков всех возрастных групп, что подтверждает участие Р2Х₁-рецепторов в реализации положительного инотропного эффекта.

Совместное влияние карбахолина и 2-метилтио-АТФ на сократимость миокарда крыс 14-100-суточного возраста. Изучение взаимодействия адренорецепторов, холинорецепторов и пуриноцепторов сердца является необходимым, так как исследуемые системы функционируют одновременно и имеют ярко выраженные возрастные особенности на ранних этапах постнатального онтогенеза.

Для определения возрастных особенностей чувствительности, активности М-холинорецепторов и в-адренорецепторов миокарда изучали дозозависимое влияние на сократимость миокарда карбахолина - агониста М₂-холинорецепторов и изопротеренола - агониста в_1,2 -адренорецепторов.

В наших экспериментах на изолированных полосках предсердий и желудочков карбахолин проявляет разную эффективность в зависимости от возраста животных, что позволяет судить о функциональной активности М₂-холинорецепторов в онтогенезе. Так, реакция М₂-ХР, определяющих сократимость предсердий и желудочков при действии КХ снижается от 14 к 100-суточному возрасту и является наименьшей у 14-сут. крысят (р<0,05). У 21-суточных животных реакция сократимости выше по сравнению с 100-сут. (р<0,05). Таким образом, реакция сократимости миокарда предсердий и желудочков на КХ снижается от 21- к 100-суточному возрасту.

...