Биологическое обоснование защиты от повторного заражения вирусами оздоровленного картофеля в Республике Татарстан
Анализ закономерностей распространения вирусной инфекции крылатыми тлями, определяющих нарастание степени повторной зараженности вирусами оздоровленного семенного картофеля. Обоснование принципов моделирования схем семеноводства картофеля в Татарстане.
Рубрика | Биология и естествознание |
Вид | автореферат |
Язык | русский |
Дата добавления | 26.12.2017 |
Размер файла | 296,8 K |
Отправить свою хорошую работу в базу знаний просто. Используйте форму, расположенную ниже
Студенты, аспиранты, молодые ученые, использующие базу знаний в своей учебе и работе, будут вам очень благодарны.
Размещено на http://www.allbest.ru/
ГНУ «Татарский научно-исследовательский институт сельского хозяйства Россельхозакадемии»
На правах рукописи
Автореферат
диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук
Биологическое обоснование защиты от повторного заражения вирусами оздоровленного картофеля в Республике Татарстан
Специальность 06.01.11 - защита растений, 06.01.05 - селекция и семеноводство
Замалиева Фания Файзрахмановна
Санкт-Петербург-2008
Диссертационная работа выполнена в ГНУ «Татарский научно-исследовательский институт сельского хозяйства Россельхозакадемии»
Официальные оппоненты: доктор сельскохозяйственных наук, профессор Элеонора Алексеевна Власова
доктор биологических наук Эрнст Валентинович Трускинов
доктор биологических наук, Владимир Александрович Колобаев
Ведущее учреждение: Всероссийский научно-исследовательский институт картофельного хозяйства им.Лорха
Защита диссертации состоится 2009 г. на заседании Диссертационного совета Д 006.015.01 при Всероссийском научно-исследовательском институте защиты растений по адресу: 196608 , г.Санкт-Петербург - Пушкин, шоссе Подбельского,д.3.
Факс (812)4705110; email vizrspb@mail333.com
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Всероссийского научно-исследовательского института защиты растений.
Автореферат разослан 2008 г.
Ученый секретарь диссертационного совета кандидат биологических наук Г.А. Наседкина.
Общая характеристика работы
Актуальность проблемы.
Отечественные сорта картофеля имеют низкую конкурентоспособность в связи с отсутствием качественного семенного материала (Анисимов, 2001). По этой основной причине в Россию в последние два десятилетия производится массовый завоз семенного картофеля из-за рубежа. Низкое качество отечественного семенного картофеля обусловлено высокой степенью зараженности его вирусами, вызывающими снижение потенциальной урожайности сорта на 50-80%. Способ семеноводства картофеля на оздоровленной от вирусов основе, успешно применяемый в зарубежных странах, в России начал бурно внедряться в 80-х годах. Однако, несмотря на первоначальные успехи, в 90-х годах внедрение нового способа семеноводства в большинстве регионов затормозилось. Основной проблемой стало быстрое повторное заражение вирусами оздоровленного материала в открытом грунте - уже на второй-третий год размножения степень скрытой зараженности вирусами возрастала до 30-80%.
Причиной подобных неудач стало отсутствие научно обоснованной системы защиты от повторного заражения вирусами в семеноводстве картофеля на оздоровленной основе, отсутствие технологии ускоренного размножения, обеспечивающей получение здорового материала. В странах с развитым картофелеводством для семеноводства предусмотрено использование побережий северных морей с низкой численностью основных переносчиков - крылатых тлей. В условиях Республики Татарстан с относительно высокой численностью крылатых тлей необходимо было найти дополнительные способы защиты от повторного заражения вирусами.
Эффективную систему защиты можно разработать только на основе предварительного изучения и тщательного анализа комплекса взаимосвязанных биологических процессов, происходящих в процессе повторного заражения вирусами семенного материала. Для этого необходимо определить источники инфицирования оздоровленного материала, выявить влияние на интенсивность нарастания зараженности вирусами степени исходной зараженности семенного материала, площади его выращивания, сроков созревания сорта и его устойчивости к заражению вирусами. Необходимо выявить зависимость нарастания повторной зараженности вирусами семенного материала от суммарной векторной интенсивности крылатых тлей, динамики их лета, совпадения сроков их массового лета с уязвимыми фазами роста растений картофеля. Необходимо более детально представлять процесс распространения вирусной инфекции крылатыми тлями в полевых условиях. В целом, назрела необходимость теоретического обоснования биологических процессов, сопровождающих нарастание степени повторной зараженности вирусами оздоровленного картофеля в зоне его выращивания.
Наиболее полное и достоверное выявление существующих взаимосвязей оказалось возможным в производственном размножении большого набора сортов, репродуцируемых на больших площадях в течение нескольких лет, выявление подобных закономерностей на небольших опытных делянках было усложнено.
С системой защиты неразрывно связана технология ускоренного размножения оздоровленного картофеля от пробирочных растений до товарных посадок, которая должна обеспечивать получение здорового семенного материала с низкой себестоимостью, в больших объемах, позволяющих при необходимости сократить длительность репродуцирования семенного материала в открытом грунте и снизить уровень повторной зараженности вирусами на конечном этапе.
В настоящее время нормы допустимой скрытой зараженности вирусами для семенного картофеля в российских ГОСТах существуют только для исходного материала (тепличного и полевого), необходимо их разработать для всей цепочки схемы семеноводства. В отечественных схемах семеноводства существует необходимость создания на законодательной основе возможности неоднократного выращивания репродукции в одном и том же классе, при соответствии его по степени скрытой зараженности вирусами соответствующим требованиям, что будет обеспечивать максимально полное использование потенциала оздоровленного материала.
Работа проводилась согласно Программе фундаментальных и приоритетных прикладных исследований по научному обеспечению агропромышленного комплекса Российской Федерации № Госрегистрации 15070.5027031284.06.8.002.1.
Цель и задачи исследований. Целью нашей работы являлось биологическое и фитопатологическое обоснование защиты от повторного заражения вирусами оздоровленного семенного картофеля в условиях Республики Татарстан.
Для достижения поставленной цели решали следующие задачи:
1. Выявить основные источники повторного заражения вирусами оздоровленного картофеля в защищенном и открытом грунтах.
2. Провести мониторинг основных переносчиков вирусов картофеля - крылатых тлей - за период с 1993 по 2007 гг и выявить возможности прогноза развития их численности в условиях текущего вегетационного периода.
3.Провести всесторонний анализ процесса повторного заражения вирусами оздоровленного материала в производственных условиях за период с 1997 по 2007гг.
4. Выявить закономерности распространения вирусной инфекции крылатыми тлями, определяющие нарастание степени повторной зараженности вирусами оздоровленного семенного картофеля.
5. Обосновать систему защиты оздоровленного семенного картофеля от повторного заражения вирусами в условиях Республики Татарстан.
6.Разработать ресурсосберегающую технологию ускоренного размножения оздоровленного картофеля в защищенном и открытом грунте, максимально обеспечивающую сохранение его в здоровом состоянии.
7. Обосновать принципы моделирования схем семеноводства картофеля, связанные с интенсивностью нарастания степени повторной зараженности вирусами оздоровленного материала.
Научная новизна.
Обоснованы причины опережающего распространения У- вируса картофеля и более низкой распространенности вируса скручивания листьев картофеля (ВСЛК) и вироида веретеновидности клубней картофеля (ВВКК) на посадках оздоровленного картофеля в условиях открытого грунта.
Показано, что основными источниками повторного заражения неперсистентными вирусами оздоровленного картофеля в открытом грунте являются внутренние источники в виде недостаточно оздоровленных сортов, сорные растения не имеют большого практического значения. Выявлено, что в защищенном грунте наибольшую опасность для повторного заражения оздоровленного картофеля представляет вирус метельчатости верхушки картофеля (ВМВК), переносчиком которого является почвенный гриб Spongospora subterranea Wallz.
Показано, что ведение семеноводства картофеля на оздоровленной основе в условиях республики усложнено в связи с высокой суммарной векторной интенсивностью основных переносчиков вирусов - крылатых тлей в течение вегетационного периода и ранними сроками наступления критического порога их численности. Выявлены критические погодные условия, существенно влияющие на размножение колоний тлей, позволяющие прогнозировать развитие численности крылатых тлей в течение вегетационного периода.
Выявлены закономерности, определяющие процесс нарастания степени повторной зараженности вирусами оздоровленного картофеля :
- при низкой (нулевой) степени исходной зараженности оздоровленного картофеля происходит снижение зависимости роста степени зараженности вирусами от векторной интенсивности крылатых тлей;
-исходная степень зараженности вирусами оздоровленного картофеля в течение вегетационного периода возрастает в кратных величинах - соответственно количеству зараженных от источника инфекции здоровых растений, коэффициент роста зараженности вирусами зависит от устойчивости сорта и векторной интенсивности крылатых тлей;
- рост степени зараженности вирусами, заносимыми от внешнего источника заражения, зависит от площади посадок оздоровленного картофеля;
- динамика роста повторной зараженности вирусами оздоровленного картофеля в репродукционном размножении представлена двумя этапами - длительным периодом скрытого роста до достижения 1-2%-го уровня и коротким периодом роста до полного 100% -го заражения.
Научно обоснована система семеноводства картофеля для Республики Татарстан. Показаны основные дополнительные приемы защиты от повторного заражения вирусами в условиях высокой векторной интенсивности крылатых тлей - достижение полного отсутствия внутренних источников заражения вирусами и увеличение площади посадок первого полевого поколения оздоровленного картофеля.
Разработана технология ускоренного размножения оздоровленного картофеля, снижающая опасность повторного заражения вирусами семенного материала. Выявлена закономерность сохранения стабильной долевой структуры урожая картофеля в определенных интервалах изменения массы посадочных клубней и густоты их посадки.
Обоснованы основные принципы моделирования перспективных схем семеноводства картофеля, учитывающие нарастание повторной зараженности вирусами оздоровленного материала.
Практическая значимость. Биологически обоснованная возможность выращивания оздоровленного семенного картофеля, удовлетворяющего по скрытой зараженности вирусами требованиям российских и международных стандартов, в условиях Республики Татарстан - с относительно высокой численностью переносчиков вирусов крылатых тлей, - что имеет теоретическое и практическое значение для применения в других региональных центрах России по производству оздоровленного семенного картофеля.
Внедрение системы семеноводства картофеля на оздоровленной основе в Республике Татарстан - при непосредственном участии Татарского НИИСХ в производстве оздоровленной суперэлиты и научном обеспечении внедрения, - способствовали полному обеспечению потребностей хозяйств республики в оздоровленном семенном картофеле с низкой скрытой зараженностью вирусами (по результатам ИФА менее 5%) и двукратному повышению средней урожайности картофеля с 11т/га в 2002 году до 23 т/га - в 2008 году. С 2005 года оздоровленный семенной материал отечественных сортов с низкой степенью скрытой зараженности вирусами и высоким потенциалом продуктивности, производимый в Татарском НИИСХ, поставляется в 16 регионов России и за пределы РФ - в страны СНГ.
Апробация результатов работы. Основные результаты исследований и выводы докладывались на научно-практической конференции «Новое в семеноводстве картофеля» (Минск, 2000, Сафиуллина Г.Ф., Назмиева Р.Р., Замалиева Ф.Ф. «Влияние густоты посадки и массы исходных семенных клубней на коэффициент размножения оздоровленного материала»), на Международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы защиты картофеля, плодовых и овощных культур от болезней, вредителей и сорняков» (Минск, 2005, Замалиева Ф.Ф., Назмиева Р.Р., Сафиуллина Г.Ф. «Семеноводство картофеля на оздоровленной основе в Среднем Поволжье»), на научно-практической конференции «Современное состояние и перспективы развития селекции и семеноводства картофеля». (Москва, 2006, Замалиева Ф.Ф., Сафиуллина Г.Ф., Назмиева Р.Р. «Внедрение системы семеноводства картофеля на оздоровленной основе в Республике Татарстан»), на Международной научно-практической конференции «Современное состояние картофелеводства и их научное обеспечение» (Алматы, 2006, Замалиева Ф.Ф., Назмиева Р.Р., Сафиуллина Г.Ф. «Внедрение в производство усовершенствованной системы семеноводства картофеля в РТ»), на Международном конгрессе «Картофель. Россия - 2007» (Москва, 2007, Замалиева Ф.Ф., Сташевски З., Сафиуллина Г.Ф., Назмиева Р.Р., Каримова В.Б., Салихова З.З., Пикалова И.В., Гимаева Е.А., Вологин С.Г., Прищепенко Е.А., Гаранина Л.А., Давлетшина Э.Ф., Кадырова Г.Д. «Семеноводство картофеля в Среднем Поволжье»), 17-th triennial Conference of European Association for Potato Research: Potato for a changing world (Brasov, 2008, Zamalieva F.F., Stasevski Z., Safiulina G.F. «Potato seed production in Tatarstan»: posters. Zamalieva F.F. «Soil-born viruses in Tatarstan»: posters).
Автор диссертации - лауреат Государственной премии РТ в области науки и техники 2005 года по теме: «Разработка и внедрение системы семеноводства картофеля на оздоровленной основе в Республике Татарстан».
Публикации. Материалы исследований изложены в 71 публикациях, в том числе 7 статей в изданиях, рекомендованных Перечнем ВАК РФ, 3 статьи - в зарубежных изданиях, изданы рекомендации по выращиванию оздоровленного семенного картофеля.
Основные положения, выносимые на защиту:
1.Основные причины интенсивного повторного заражения вирусами оздоровленного картофеля в условиях Республики Татарстан - наличие внутренних источников заражения в оздоровленном материале и высокая суммарная векторная интенсивность крылатых тлей.
2.Ведущие факторы защиты от повторного заражения вирусами оздоровленного картофеля в условиях республики - достижение полного отсутствия внутренних источников заражения вирусами и увеличение площади посадок первого полевого поколения оздоровленного материала, снижающие зависимость роста зараженности от векторной интенсивности крылатых тлей.
3.Принципы моделирования перспективных схем семеноводства, учитывающие нарастание степени повторной зараженности вирусами оздоровленного картофеля.
Диссертационная работа является обобщением двадцатилетних исследований по семеноводству картофеля, выполненных автором самостоятельно или при его непосредственном участии. В исследованиях принимали участие сотрудники Сафиуллина Г.Ф., Назмиева Р.Р., Гаранина Л.А., Прищепенко Е.А., Гарифуллина Ф., Богданова Г.В., Зайнуллин А.А.,Зайнуллина А.С., Пикалова И.В., Вологин С.Г.,Сташевски З., Каримова В.Б., Давлетшина Э.Ф., Гимаева Е.А., Кадырова Г.Д., Салихова З.З. Выражаю им искреннюю благодарность за совместную многолетнюю работу по семеноводству картофеля, результаты которой изложены в этой работе. Выражаю искреннюю благодарность Капитоновой Н.П. - создателю первой лаборатории биотехнологии картофеля на оздоровленной основе в Татарском НИИСХ в 1985-1990гг.
Особо большой вклад в развитие научной и материально-технической базы центра биотехнологии картофеля ТатНИИСХ, обеспечившего в дальнейшем переход на промышленные масштабы производства оздоровленного семенного картофеля, сделал Гареев Р.Г. (1949-2004гг) - директор Татарского НИИСХ с 1996 по 2004гг.
Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 328 страницах компьютерного текста и состоит из введения, 9 глав, выводов, предложений производству. Работа содержит 33 таблицы, 24 рисунка, 21 приложение. Список использованной литературы содержит 328 наименований, из них 64 на иностранном языке.
Содержание работы
Материал и методы проведения исследований
Разработка системы защиты оздоровленного картофеля от повторного вирусного заражения в условиях Республики Татарстан
Мониторинг вирусных болезней картофеля проводили на посадках картофеля в хозяйствах республики в 1993-2001гг. Листовые пробы для анализов отбирали в июле месяце по диагонали картофельного поля в количестве 50-100 штук. Серологический анализ проводили в лаборатории капельным методом и методом ИФА.
Мониторинг почвенных вирусов картофеля проводили в 1987-1995гг. Для идентификации вирусов использовали метод индикаторных растений, метод приманочных растений, ИФА, метод электронной микроскопии.
Изучение динамики нарастания повторного зараженности вирусными болезнями оздоровленного семенного картофеля проводили на производственных посадках оздоровленного семенного картофеля в условиях естественного инфекционного фона с 1997 по 2007 годы. Питомники размножения оздоровленного семенного картофеля находились в Лаишевском районе зоны Предкамья РТ: с 1993 по 2005 год - в стационарной точке учета «Сокуры», в 2006 году - в стационарной точке учета «Кабаны», расположенных на расстоянии 5 и 2 км от села Большие Кабаны, соответственно.
Оздоровленные меристемные линии сортов картофеля (сортолинии) получали в отделе сельскохозяйственной биотехнологии ТатНИИСХ и приобретали от других научных учреждений, после тестирования на отсутствие инфекций, размножали черенкованием в лабораторных условиях, получали в защищенном грунте от них тепличные миниклубни. Далее, в полевых условиях, оздоровленный семенной картофель выращивали в питомниках по следующей схеме: тепличные миниклубни - первое полевое поколение (ППП) - суперсуперэлита (ССЭ) - суперэлита (СЭ).
Питомники располагали с пространственной изоляцией - на расстоянии 1-3 км от населенных пунктов и от других картофельных посадок. Площади питомников и выращиваемые в них сорта, менялись ежегодно - они представлены в результатах работы.
Технология выращивания - голландская с использованием комплекта импортной полевой техники производства фирм Гримме, Амазоне. Нормы внесения минеральных удобрений определяли расчетно-балансовым методом на получение урожая 25 тонн/га на основе агрохимических анализов почвы. Посадку проводили в оптимально ранние сроки - обычно во второй декаде мая, удаление ботвы проводили механическим способом или химической десикацией реглоном - в момент достижения 80% клубней размера семенной фракции - 30-60мм - в наибольшем поперечном диаметре. Семенной материал выращивали с соблюдением всех рекомендованных защитных мероприятий от заражения болезнями, от вредителей и крылатых тлей.
Диагностику вирусных болезней картофеля проводили в секторе диагностики болезней картофеля ЦСХБ ТатНИИСХ. Листовые пробы для проведения ИФА отбирали по диагоналям картофельного поля в зависимости от размеров участка - по 50-200 листьев. Скрытую зараженность картофельных растений определяли до 2001 года капельно-серологическим методом (по М.С.Дунину и Н.Н.Поповой, 1967) - на вирусы M, X, S и Y и на M+X+S (поливалентная), с 2001 года - методом иммуноферментного анализа (ИФА) на диагностических наборах, изготовленных в лаборатории биотехнологии ВНИИКХ на вирусы - M+X+S (поливалентная) и YBK-вирус (по методикам И.Г.Атабекова,1985, А.Ф.Бобковой, 1983), с 2002 года - на диагностических наборах для ИФА фирмы Биореба (Швейцария).
Тестирование сорняков на скрытую зараженность У- вирусом картофеля проводили методом обратнотранскриптазной ПЦР в секторе диагностики ЦСХБ ТатНИИСХ. Применялись наборы коммерческой фирмы «Е» (г.Пущино,Россия), использовали оригинальные праймеры, разработанные сотрудником ЦСХБ Зайнуллиным А.А.
Мониторинг основных переносчиков вирусов картофеля - крылатых тлей - проводили на основании систематических наблюдений за динамикой лета и видовым составом крылатых тлей в питомнике размножения оздоровленного семенного картофеля Татарского НИИ сельского хозяйства с 1993 по 2007 годы.
Учеты крылатых тлей проводили методом желтых водных ловушек Мерике (А.Г. Зыкин, 1970; L.Broadbent. 1948; W.Moericke., 1951; H.Muller und Unger, 1955; Л.Иотов, 1967). На участке черного пара размером не менее 5х5метров рядом с картофельным участком устанавливали две пластмассовые чашки диаметром 24 см и высотой 7-8 см, окрашенные изнутри на 2 см от дна ярко-желтой краской. В чашки наливали воду (немного выше края желтой краски), добавляли щепотку стирального порошка. Сбор насекомых проводили через 1-2 дня. Уловы тлей определяли и классифицировали по видам в лаборатории ЦСХБ ТатНИИСХ по описаниям Г.Х.Шапошникова (1964), В.А.Шмыгли, Б.С.Герасимова, И.П. Дамрозе (1969,1975), А.Г. Зыкина (1970).
Определяли распространенность вирусной инфекции на сортовой репродукции (или степень зараженности вирусами репродукции) по формуле:
Р=n Ч100/ N
где P - распространенность болезни (%); N - общее количество растений в пробах; n - количество больных растений в пробах.
Средневзвешенную степень зараженности вирусами картофельного поля определяли по следующей формуле:
СВЗ= У SnPn/Sобщ
где СВЗ - средневзвешенная степень зараженности вирусами картофельного поля, Sn - площадь. занимаемая отдельным сортом, га; Pn - распространенность болезни на сорте, %; Sобщ - общая площадь картофельного поля, га. Необходимость в использовании СВЗ возникла при обсуждении коллекционных участков, в которых с различной, обычно небольшой площадью, высажено большое количество сортов, которые заражены в различной степени. СВЗ использована нами для создания объединенной характеристики поля - до и после процесса переноса инфекции.
При обсуждении результатов производственного размножения возникла необходимость применения сокращенных наименований часто используемых словосочетаний и применения показателей изменения вирусной зараженности в репродукциях семенного картофеля:
КРВЗ - коэффициент роста вирусной зараженности - кратность возрастания зараженности вирусами за определенный период. Определяли делением конечной степени зараженности сортовой репродукции в конце изучаемого периода на его первоначальную - в начале изучаемого периода.
КП - критический порог численности крылатых тлей, эквивалентный 50 экземплярам персиковой тли, определенный с помощью коэффициентов вредоносности по Банадысеву С.А.(2003), известных для отдельных видов тли, после достижения которого рекомендуется удалять ботву семенного картофеля в течение 10-12 дней.
СВИТ - суммарная векторная интенсивность крылатых тлей за вегетационный период - общее количество крылатых тлей - переносчиков вирусов картофеля, отловленных за вегетационный период, и переведенных при помощи коэффициентов вредоносности в единицы, эквивалентные персиковой тле.
ОСВИТ - общая суммарная векторная интенсивность крылатых тлей за несколько вегетационных периодов, в течение которых выращивался семенной картофель данной репродукции в открытом грунте.
Разработка технологии ускоренного размножения оздоровленного семенного картофеля в условиях Республики Татарстан
Факторы, повышающие коэффициенты размножения семенного картофеля, изучали на трех стадиях выращивания оздоровленного материала - пробирочные растения, тепличные миниклубни и клубни первого полевого поколения (исходный материал). Исследования проводили в 1998…2000 гг. в защищенном грунте - в марлевых изоляторах, находящихся на территории ТатНИИСХ, в открытом грунте - в питомнике размножения оздоровленного картофеля, расположенного вблизи н.п.Сокуры Лаишевского района.
Схема вегетационного опыта 1. Изучение влияния густоты посадки пробирочных растений картофеля сорта Невский на коэффициент размножения оздоровленного материала в условиях защищенного грунта:
1 вариант - густота посадки 25 растений/м2 (20х20 см)
2 вариант - густота посадки 50 растений/м2 (15х15 см)
3 вариант - густота посадки 100 растений/м2 (10х10 см)
Размножение и выращивание пробирочных растений проводили согласно «Методическим указаниям по оздоровлению и ускоренному размножению картофеля» (1976, 1985) и «Инструкции по технике проведения работ по микроклональному размножению картофеля» (1998). Был проведен структурный анализ полученного урожая тепличных миниклубней, с разделением на следующие фракции: 1 - 5 г; 6 - 10 г; 11 - 20 г и более 20 г.
Опыты по изучению коэффициентов размножения тепличных миниклубней и исходных клубней проводили в открытом грунте в питомнике размножения оздоровленного материала ТатНИИСХ. Почва опытного участка светло-серая лесная, средне-суглинистая. Удобрения вносили на планируемую урожайность 20 тонн. Посадку проводили вручную в предварительно нарезанные борозды. Агротехника выращивания картофеля - общепринятая для республики с элементами голландской технологии. Опыты двухфакторные, повторность четырехкратная. В каждой повторности высажено по 50 клубней сорта Невский. Размещение делянок систематическое.
Схема опыта 2. Изучение влияния густоты посадки и массы тепличных миниклубней на коэффициент размножения оздоровленного картофеля в открытом грунте:
Сорт Невский - тепличные миниклубни.
Фактор А - густота посадки: 48; 57; 72 ; 95 тыс. клубней на 1 га (схема посадки: 70 х 30, 70 х 25, 70 х 20 и 70 х 15 см соответственно).
Фактор В - масса тепличных миниклубней: 2; 6; 10; 15 г.
Схема опыта 3. Изучение влияния густоты посадки и массы исходных семенных клубней на коэффициент размножения оздоровленного картофеля в открытом грунте:
сорт Невский - исходные клубни ( клубни первого полевого поколения)
Фактор А - густота посадки: 45; 55; 65; 70 тысяч клубней на 1 га (схема посадки: 70 х 31, 70 х 26, 70 х 21, 70 х 20 см)
Фактор В - масса исходных клубней: 20; 40; 60; 80 г.
Опыты закладывали и проводили в соответствии с методическими указаниями Б.А.Доспехова (1985) и ВНИИКХ (1961). Уборка опытов проводилась в августе-сентябре месяцах вручную. Учет урожая проводился поделяночно: выкапывали 50 кустов, подсчитывали количество и взвешивали массу полученных клубней. Одновременно с учетом общей массы клубней определяли их фракционный состав. Полученные клубни были разделены на следующие фракции: менее 25 г; 25-50 г; 51-80 г; более 80 г. Статистическая обработка результатов исследований проведена методом дисперсионного анализа по Б.А. Доспехову (1985) с использованием компьютерных программ «Agros», по Г.Ф.Лакину (1990), расчеты экономической и энергетической эффективности - на основе технологических карт по действующим нормативам и расценкам.
Результаты исследований
Мониторинг источников повторного заражения вирусами оздоровленного семенного картофеля в Республике Татарстан
Для предотвращения повторного заражения вирусами оздоровленного семенного картофеля необходимы сведения об основных источниках инфекции в данной природно-климатической зоне. По расстоянию, на которое источники инфекции удалены от посадок картофеля их можно подразделить на внешние и внутренние. Внешние источники - производственные посадки картофеля с высокой степенью зараженности вирусами, личные подсобные участки; внутренние источники - больные растения внутри посадок оздоровленного семенного картофеля. В республике нами выявлены следующие возбудители вирусных болезней на картофеле: У- вирус картофеля (УВК), М- вирус картофеля (МВК), Х-вирус картофеля (ХВК), S-вирус картофеля ( SВК), вирус скручивания листьев картофеля (ВСЛК), вирус метельчатости верхушки картофеля (ВМВК), вирус погремковости табака (ВПТ), а также вироид веретеновидности клубней картофеля (ВВКК).
Анализируя данные по распространенности вирусов на производственных посадках картофеля в коллективных хозяйствах в 1993-2001гг, мы обнаружили, что до 1998 года отечественный семенной картофель в хозяйствах республики, практически независимо от репродукции, был заражен вирусами на 60-100%, причем, наиболее распространенными были ХВК и МВК, что совпадает с данными исследований, проведенных в республике в конце 60-х годов (Н.И.Благовещенский, Н.П.Капитонова, 1970). Оздоровленный семенной картофель, производимый лабораторией ТатНИИСХ и поступающий в хозяйства с 90-х годов, в последующие годы обнаруживал тенденцию к преобладающему заражению У-вирусом картофеля.
Два почвенных вируса были обнаружены нами на частных посадках картофеля: ВПТ (переносчики - нематоды семейства Trihodoridae )- в окрестностях г. Казани на участках с легкими по механическому составу почвами, ВМВК (переносчик - гриб Spongospora subterranea) - во всех обследованных районах - независимо от типа почв. На посадках общественного сектора почвенные вирусы были обнаружены в единичных случаях. Зараженность клубней ВПТ составляла на отдельных участках от 33 до 43%. При этом некротические повреждения, вызванные ВПТ, стабильно проявлялись в потомстве у 60-70% растений, но внутри клона некрозы проявлялись в среднем у 22-28% клубней. В отдельные годы признаки некрозов внутри клона полностью исчезали, но на следующий год могли вновь проявиться у 50% клубней. Наиболее чувствительным к заражению ВПТ оказался сорт Невский: на поверхности клубней наблюдались четкие кольца диаметром до 0,5 см и кольцевидные некротические узоры.
Симптомы ВМВК обычно наблюдали у 3-15% клубней. Реакция на заражение вирусом в виде четких кольцевых некрозов на поверхности клубней наблюдалась у сортов Бронницкий, Жуковский ранний, Невский, Резерв. Нами впервые на европейской территории был обнаружен и описан случай проявления на картофеле симптомов «птичьего глаза», вызываемого, по нашим данным, при первичном заражении ВМВК. В отдельные годы в январе наблюдалось массовое проявление симптомов «птичьего глаза» на клубнях, достигавшее уровня 50-60% выборки, что свидетельствует о высокой степени скрытой зараженности почвенным вирусом переносчика и картофеля в условиях Татарстана. Обнаружено, что в защищенном грунте может происходить заражение оздоровленных клубней вирофорным грибом Spongospora subterranea без видимых симптомов вирусного заражения. В этом случае симптомы имеют вид пустул без развития вокруг него волдыреобразного кольца. Поэтому первичные симптомы поражения ВМВК в защищенном грунте могут быть не замечены, проявляясь только на следующий год в поле в виде вторичных симптомов - кольцевых узоров на клубнях.
Вироид веретеновидности клубней картофеля (ВВКК) был обнаружен нами только на материале, выращенном из инфицированных пробирочных растений завозного происхождения. В условиях открытого грунта нами не отмечалось массового перезаражения оздоровленного материала от источников - зараженных вироидом растений. При инфицировании вироидом ВКК в условиях республики, происходит сильное угнетение растений картофеля, сопровождающееся снижением или полным отсутствием клубнеобразования, что вызывает в дальнейшем самоуничтожение потомства больных растений.
В производственном размножении мы также не наблюдали интенсивного повторного заражения оздоровленного семенного картофеля персистентным вирусом скручивания листьев картофеля (ВСЛК). Основной причиной этого являются низкая численность переносчика вируса - персиковой тли. Следующей причиной, по нашему мнению, является сильное угнетение зараженных растений картофеля, происходящее в континентальных условиях республики - как и в случае с ВВКК, что вызывает низкий коэффициент размножения больных растений и в итоге - самоуничтожение зараженных растений в потомстве.
«Внутренним» источником инфекции являются сорта, которые после прохождения всех этапов оздоровления методом апикальной меристемы, оказались больными.
В результате проведенной с 1997 по 2007гг проверки методом ИФА и ПЦР пробирочной коллекции растений картофеля из 70 сортов, представленных 165 линиями была выявлена зараженность вирусами X, S, M, У, L - у 41 линии (24,8%), вироидом веретеновидности клубней картофеля - у 44 линий (26,7%). Таким образом, было выбраковано 85 (51,5%) больных сортолиний, здоровыми оказались 80 (48,5%) сортолиний из коллекции пробирочных растений. Среди вирусных болезней в пробирочной коллекции наибольшее распространение имел У - вирус картофеля, достаточно часто обнаруживали МВК, значительно реже обнаруживали ХВК, ВСЛК и SВК.
В 2000-2002 гг на зараженность УBK методами ИФА и ПЦР были протестированы сорные растения с картофельного поля и дикорастущие древесные культуры, окружающие оздоровленные картофельные посадки, в том числе: осот полевой, куриное просо, вьюнок полевой, дикая редька, паслен черный, дуб, осина, сосна, береза, ольха. У-вирус картофеля в них не обнаружен. Наши данные подтвердили выводы, сделанные Ю.И.Власовым (1974), что дикорастущие растения, как источники У- вируса для картофеля не имеют большого практического значения.
Мониторинг основных переносчиков вирусов картофеля - крылатых тлей в условиях Республики Татарстан
Наибольшую численность - до 70-80% от общего количества крылатых тлей, отловленных на картофельном поле, составляли три вида - бобовая (до 68,8%), крушинная (до 27,6%) и крушинниковая тли (до 25,2%) (табл.1):
Таблица 1 Основные виды крылатых тлей - переносчиков вирусов картофеля, отловленные на стационарном участке в п.Сокуры Лаишевского района за период наблюдений с1993 по 2006гг
Вид тлей |
Относительная вредоносность |
Количество*, штук |
Доля от общего количества тлей, % |
|
Aphis fabae Scop. ( Бобовая тля) |
0,1 |
3- 2407 |
1,2-68,8 |
|
Aphis nasturtii Kltb. (Крушинная тля ) |
0,4 |
5-784 |
2,0-27,6 |
|
Aphis frangulae Kltb. (Крушинниковая тля) |
0,4 |
0-684 |
0-25,2 |
|
Aulacorthum solani Kltb. (Обыкновенная картофельная тля) |
0,4 |
0-45,3 |
0-9,8 |
|
Macrosiphum euphorbiae (Большая картофельная тля) |
0,1 |
0-20 |
0-9,7 |
|
Myzus persicae Sulz. (Персиковая тля) |
1,0 |
0-5 |
0 - 0,1 |
|
Всего: |
82-5233 |
100,0% |
*Представлен диапазон изменения численности крылатых тлей от минимума до максимума на одну ловчую чашку Мерике за период наблюдений с 1993 по 2006гг.
Отсутствие высокой численности персиковой тли в условиях республики объясняет ограниченное распространение ВСЛК. Стабильное присутствие в популяциях крушинной и крушинниковой тлей - представляет опасность распространения М и У вирусов картофеля. В условиях республики большое значение в заражении У -вирусом картофеля , наряду с крушинной и крушинниковой тлями, приобретает бобовая тля, которая обладает более низкой эффективностью передачи вируса, но имеет обычно самую высокую численность Общая численность крылатых тлей за изученный период колебалась от 82 до 5233 штук/чаш за сезон (табл.2).
Таблица 2 Сравнительные данные лета крылатых тлей в стационарной точке учета «Сокуры» Лаишевского района РТ за 1993 - 2006 гг
Годы |
Общее количество крылатых тлей за вегетационный период, шт. |
Суммарная векторная интенсивность крылатых тлей |
Сроки наступления критического порога численности тлей |
Общее количество крылатых тлей, попавших в чашку на момент наступления «КП», шт |
В том числе переносчиков вирусов картофеля |
|||
в единицах, эквивалентных персиковой тле |
Кратно КП |
штук |
% |
|||||
1993 |
244,0 |
12,0 |
0,2 |
Численность крылатых тлей ниже «критического порога» |
||||
1994 |
760,0 |
53,0 |
1,1 |
Начало I декады августа |
748 |
467 |
62 |
|
1995 |
82,0 |
10,0 |
0,2 |
Численность крылатых тлей ниже «критического порога» |
||||
1996 |
263,0 |
23,0 |
0,5 |
Численность крылатых тлей ниже «критического порога» |
||||
1997 |
3753,0 |
499,0 |
10,0 |
Начало III декады июня |
550 |
338 |
70 |
|
1998 |
1613,0 |
190,0 |
3,8 |
II декада июля |
438 |
351 |
80 |
|
1999 |
5233,0 |
831,0 |
16,6 |
I декада июля |
493 |
360 |
73 |
|
2000 |
514,0 |
27,0 |
0,55 |
Численность крылатых тлей ниже «критического порога» |
||||
2001 |
1627,0 |
128,0 |
2,56 |
Начало II декады июля |
809,5 |
525 |
65 |
|
2002 |
1132,0 |
45,0 |
0,9 |
Численность крылатых тлей ниже «критического порога» |
||||
2003 |
2137,0 |
219 |
4,4 |
Начало III декады июля |
1280 |
782 |
61 |
|
2004 |
205,0 |
45,6 |
0,9 |
Численность крылатых тлей ниже «критического порога» |
||||
2005 |
3022,0 |
525,0 |
10,5 |
III декада июня |
462,5 |
443 |
96 |
|
2006 |
201,0 |
40,0 |
0,8 |
Численность крылатых тлей ниже «критического порога» |
В 7 из 14 изученных лет, суммарная векторная интенсивность крылатых тлей была ниже критического порога. В годы с высокой численностью тлей суммарная векторная интенсивность лета тлей превышала КП численности (эквивалентный 50 экземплярам персиковой тли): 1997г - в 10 раз, 1998г - в 3,8 раза, 1999г - в 16,6 раз, 2001г - в 2,56 раз, 2003 г - в 4,4 раза, 2005г - в 10,5 раз. Критический порог численности тлей наступал чаще всего во 2-3 декадах июля, самое ранее наступление КП отмечалось в 3 декаде июня - в 1997 и 2005 годах.
Начало лета тлей в условиях республики зависит от стабильной температуры в мае-июне. Суммы эффективных температур на начало лета крылатых тлей, в годы без возвратных похолоданий в мае, находились в пределах 328-415°С. Самое раннее начало лета тлей наблюдалось в третьей декаде июня 1995 года, самое позднее - во второй декаде июля 1994 года.
Обнаружены два особо важных критических момента в развитии численности тлей в условиях республики: первый - это возвратные похолодания после теплых дней в мае месяце и второй - ливневые дожди или сильные ветра в период расселительного лета переносчиков с первичного хозяина, происходящего обычно в июне. Резкое снижение численности тлей, происходящее в этих случаях, мы связываем с тем, что гибель на начальных этапах размножения единичных перезимовавших особей тлей-родоначальниц, становится равноценной гибели сотен и тысяч экземпляров крылатых тлей на конечном этапе развития колоний. Таким образом, эти погодные условия предопределяют процессы размножения тлей на ранних этапах развития колоний и поэтому позволяют заранее прогнозировать развитие численности тлей в текущем вегетационном сезоне.
Учитывая, что по правилам семеноводства ботву семенного картофеля рекомендуется удалять не позднее, чем через 10-12 дней после достижения критического порога численности крылатых тлей - нам необходимо было ее удалять: в 1997 и 2005гг - 5-7 июля, в 1998 и 2001гг - 20-25 июля, в 1999 - 12-15 июля. Однако, эти сроки являются неприемлемыми в условиях республики, потому что клубнеобразование у картофеля начинается только во второй декаде июля. Поэтому в условиях республики возникает противоречие между сроками накопления хозяйственно значимого урожая семенного картофеля и сроками наступления критического порога численности крылатых тлей. Необходимо было найти дополнительные способы предотвращения повторного заражения вирусами оздоровленного картофеля, обеспечивающие получение здорового семенного картофеля, не сокращающие объемы производства семенной продукции.
Закономерности роста повторной зараженности вирусами оздоровленного картофеля в условиях Республики Татарстан
В таблице 3 представлена конечная степень зараженности вирусами сортов за два-три года размножения по схеме семеноводства от первого полевого поколения до ССЭ или СЭ и общая суммарная векторная интенсивность крылатых тлей за эти годы.
Общая суммарная векторная интенсивность крылатых тлей (ОСВИТ) за три года предварительного выращивания СЭ составила: в 2003 году - 7,8 КП, в 2004 году - 6,1 КП, в 2005 году - 15,7 КП, в 2006 и 2007гг - 12 КП. Таким образом, ОСВИТ с 2003-2004гг до 2005-2007гг возросла с уровня 6-7,8 КП до 12-15,7 КП. За этот период удалось снизить зараженность у СЭ сортов: Жуковский ранний - с 31,4% до 25%, Адретта - с 41,0% до 0, Удача - с 12,5% до 2,1%, Чародей - с 25% до 4-6,25%, Невский - с 45% до 1,7-2,3%, Ресурс - с 29% до 0-6,2%, Лорх - с 29-56% до 16,6%. Таким образом, с 2003 по 2007гг ОСВИТ повышалась, а зараженность вирусами суперэлиты сортов постепенно снижалась. То есть, в производственном размножении удалось постепенно снизить зависимость нарастания степени зараженности вирусами сортов от векторной интенсивности крылатых тлей.
Таблица 3 Степень повторной зараженности вирусами суперэлиты сортов картофеля в производственном размножении, %
№ |
Годы выращивания |
2001-2003 |
2002-2004 |
2003-2005 |
2004-2006 |
2005-2007 |
|
ОСВИТ |
7,8КП |
6,1КП |
15,7КП |
12,2 КП |
12 КП |
||
1 |
Жуковский ранний |
31,4* |
- |
- |
31,0 |
25,0 |
|
2 |
Весна |
- |
- |
- |
- |
20,8 |
|
3 |
Белоярский ранний |
27,0* |
- |
- |
- |
- |
|
4 |
Адретта |
41,0 |
- |
- |
- |
0 ** |
|
5 |
Удача |
- |
- |
12,5 |
- |
2,1** |
|
6 |
Розара |
- |
- |
4,0** |
12,5 |
- |
|
7 |
Юниор |
- |
- |
Выбракован* |
- |
- |
|
8 |
Елизавета |
- |
- |
25 |
- |
- |
|
9 |
Пранса |
- |
50,0 |
- |
- |
- |
|
10 |
Сантэ |
- |
6,25 |
- |
- |
- |
|
11 |
Чародей |
- |
25,0 * |
4,0** |
6,25 |
- |
|
12 |
Невский |
45,0 |
16,6 |
4,1** |
1,7** |
2,3** |
|
13 |
Рождественский |
- |
- |
25,0 |
- |
- |
|
14 |
Ресурс |
29,0 |
- |
- |
0** |
6,25 |
|
15 |
Луговской |
- |
- |
Выбракован* |
- |
Выбракован |
|
16 |
Лорх |
29,0 |
56,0 |
16,6 |
- |
- |
|
17 |
Скарб |
- |
- |
4,1** |
- |
- |
ОСВИТ - общая суммарная векторная интенсивность крылатых тлей за годы размножения семенного материала в открытом грунте, выраженная в кратных коэффициентах по отношению к критическому порогу; * - степень зараженности вирусами на стадии ССЭ; **- выделены положительные результаты, когда зараженность вирусами у СЭ составила не более 5%.
Мы проанализировали также коэффициенты роста вирусной зараженности у различных сортов в производственном размножении за период наблюдений с 2001 по 2006 годы (таблица 4). Нарастание вирусной зараженности от нуля до 1-2% проходит незаметно, так как мы пока неспособны обнаружить низкую степень зараженности, поэтому представленные в таблице коэффициенты роста определены после превышения указанного уровня степени зараженности. Из данных таблицы можно заметить, что в 2001 году коэффициенты роста повторной вирусной зараженности были высокими, что объясняется особыми условиями года, связанными с высокой векторной интенсивностью тлей и совпадением лета с активным ростом растений. В 2005 году высокий КРВЗ у сорта Леди Розетта связан с поздним сроком созревания сорта и растянутым летом многочисленных крылатых тлей. Можно отметить относительно более высокие КРВЗ у сортов Луговской и Юниор - 7,2 и 7,6, свидетельствующие о неустойчивости этих сортов к вирусному заражению. Остальные сорта имели следующие значения КРВЗ : Жуковский ранний - 1,7-3,8; Адретта - 1,2-2,5; Удача - 2,0; Розара - 2,0-6,0; Пранса - 3,0; Сантэ - 3,6; Невский - 1-3,7; Рождественский - 3,0-4,0; Лорх - 2,1-2,8; Чародей -1-6. Невысокие КРВЗ у большинства сортов после достижения 1-2% зараженности, свидетельствуют о том, что устойчивость этих сортов к вирусному заражению находится примерно на одном уровне с сортом Невский. Значит, высокую степень зараженности на конечном этапе получения суперэлиты (таблица 3) у сортов Жуковский ранний - 25%, Лорх - 16,6%, Розара, - 12,5%,Рождественский - 25% - можно объяснить только более быстрым ростом зараженности на предыдущих этапах процесса скрытого заражения (до достижения уровня 1-2%). Основным отличием этих сортов было то, что размножение большинства из них на стадии ППП, в отличие от Невского, проводилось на небольших площадях. То есть, здесь необходимо отметить, что площадь посадки на стадии ППП имеет определенное значение в процессе нарастания вирусной зараженности.
Таблица 4 Коэффициенты роста вирусной зараженности у оздоровленных сортов картофеля за период с 2001 по 2006гг
№ |
Годы |
2001 |
2002 |
2003 |
2004 |
2005 |
2006 |
|
СВИТ |
2,56 КП |
0,9 КП |
4,3 КП |
0,9КП |
10,5 КП |
0,8 КП |
||
1 |
Жуковский ранний |
- |
2,3 |
1,7 2,2 |
- |
- |
3,8 |
|
2 |
Белоярский ранний |
14,5* |
- |
- |
- |
- |
- |
|
3 |
Адретта |
- |
1,2 |
2,5 1,6 |
- |
- |
- |
|
4 |
Удача |
- |
- |
- |
- |
- |
2,0 |
|
5 |
Розара |
- |
- |
- |
- |
2,0 |
3,0 6,0 |
|
6 |
Юниор |
- |
- |
- |
7,6* |
- |
- |
|
7 |
Пранса |
- |
- |
- |
3,0 |
- |
- |
|
8 |
Сантэ |
- |
3,6 |
- |
- |
- |
- |
|
9 |
Невский |
- |
2,0 1,0 |
3,7 1,0 |
- |
- |
1,0 |
|
10 |
Рождественский |
- |
- |
3,0 |
- |
4,0 |
- |
|
11 |
Луговской |
- |
7,2* |
2,8 |
- |
- |
- |
|
12 |
Лорх |
- |
2,1 |
2,8 |
- |
- |
- |
|
13 |
Снегирь |
11,4* |
- |
- |
- |
- |
- |
|
14 |
Елизавета |
18,2* |
- |
- |
- |
- |
- |
|
15 |
Петербургский |
18,9* |
- |
- |
- |
- |
- |
|
16 |
Леди Розетта |
- |
- |
- |
- |
14,0* |
- |
|
17 |
Чародей |
- |
- |
1,0 |
6,0 |
СВИТ - суммарная векторная интенсивность крылатых тлей за вегетационный период, выраженная в кратных коэффициентах по отношению к критическому порогу;
*- повышенные значения коэффициентов роста вирусной зараженности.
Рассмотрим подробнее нарастание вирусной зараженности в репродукционном размножении от ППП до СЭ на примере сорта Невский, который занимал самые большие площади в производственном размножении на протяжении длительного времени. Из таблицы 5 видно, что циклы размножения оздоровленного сорта Невский, начатые в открытом грунте с 2001 и 2002 года заканчивались получением суперэлиты с высоким уровнем зараженности - в 2003г - 45,8%, в 2004 г - 20,8%, соответственно. Лишь циклы размножения, начатые в 2003 и 2004гг закончились получением суперэлиты с зараженностью на низком уровне (1,7-4,1%). На рисунке 1 представлены четыре трехлетних цикла размножения семенного картофеля сорта Невский - с 2001 по 2003гг, с 2002 по 2004гг, с 2003 по 2005гг, с 2004 по 2006гг. В каждом цикле можно увидеть динамику изменения вирусной зараженности оздоровленного семенного картофеля во время 3-хлетнего размножения от первого полевого поколения до суперсуперэлиты и далее до суперэлиты и сопуствующую ей векторную интенсивность тлей - по оси абсцисс показана численность переносчиков вирусов картофеля крылатых тлей в годы выращивания, выраженная в единицах, эквивалентных персиковой тле. Сопоставив все данные на рисунке, можно отметить три важных момента.
Во-первых, рост зараженности происходит у сорта Невский, чаще всего, в кратных коэффициентах, находящихся в интервале от 1 до 5. В годы с низкой численностью переносчиков (2002г, 2004г, 2006г) коэффициент роста вирусной зараженности небольшой - 1-2, в годы с высокой численностью переносчиков вирусов (2001г,2003г,2005г) коэффициент роста вирусной зараженности был выше - 3-5. Таким образом, рост вирусной зараженности сорта в течение вегетационного периода происходит с кратным коэффициентом, величина которого прямо пропорциональна векторной интенсивности крылатых тлей.
Таблица 5 Изменение вирусной инфицированности (ВИ) у сорта Невский в производственном размножении по репродукциям с 2001 по 2006 годы
Годы |
Векторная интенсивность Экв.ед. |
Репродукция |
Площадь, га |
Начальная заражен-ность, %m |
Конечная зараженность, %m |
Коэффициент роста вирусной зараженности |
|
2001 |
130 |
ППП |
0,8 |
5,2 2,2 |
20,8 4,1 |
4,0 |
|
С-с-э |
2,6 |
18,0 3,8 |
86,3 3,4 |
4,8 |
|||
С-э |
18,0 |
23,0 4,2 |
88,6 3,2 |
3,8 |
|||
2002 |
45 |
ППП |
1,0 |
2,2 1,5 |
4,1 2,0 |
2,0 |
|
С-с-э |
7,7 |
12,5 3,3 |
15,6 3,6 |
1,0 |
|||
С-э |
17,6 |
86,3 3,4 |
100,0 |
1,2 |
|||
2003 |
215 |
ППП |
1,7 |
0,0 |
0,0 |
неизвестен |
|
С-с-э |
5,0 |
4,1 2,0 |
16,6 3,7 |
4,0 |
|||
С-э |
41,0 |
12,5 3,3 |
45,8 5,0 |
3,7 |
|||
2004 |
45 |
ППП |
2,4 |
0,0 |
0,0 |
неизвестен |
|
С-с-э |
16,6 |
0,0 |
0,0 |
неизвестен |
|||