Теломерный механизм клеточного старения

Среди методов определения активности теломеразы наиболее распространен TRAP (протокол амплификации теломерных повторов), позволяющий, благодаря некоторым модификациям, проводить полуколичественный и количественный анализ. Существуют модификации, при которых повышается скорость анализа, радиоактивная метка заменяется немечеными соединениями, снижается количество побочных продуктов и т.д., например, методы сцинтилляционного анализа сближения, гибридизационной защиты, транскрипционной амплификации, экстракции магнитными шариками. Некоторые модификации дают возможность определять активность теломеразы даже в одной клетке. Протокол амплификации теломерных повторов можно разбить на три основных этапа: удлинение праймера, амплификация синтезированной теломеразой ДНК и детекция. На стадии удлинения теломерные повторы добавляются теломеразой, присутствующей в клеточном экстракте, к теломеримитирующему олигонуклеотиду. После этого проводят ПЦР- амплификацию синтезированной теломеразой ДНК с использованием специфических праймеров (теломеримитирующего и обратного). На этом этапе в синтезированную теломеразой ДНК могут включаться различные метки: радиоактивная, флуоресцентная, аффинная. Затем следует детекция (в оригинальном методе с электрофоретическим разделением продуктов ПЦР и фотографированием). Исходный метод TRAP не свободен от ряда недостатков. При амплификации продуктов ПЦР первоначально применяли олигонуклеотид СХ, имевший комплементарное перекрывание в несколько олигонуклеотидов с TS. Это приводило к образованию димеров праймеров и продуктов, возникающих из-за взаимодействия между праймерами. Даже при использовании оптимального праймера АСХ с некомплементарным TS- концом при анализе концентрированных экстрактов опухолевых тканей может появляться фоновый сигнал. Другая проблема состоит в том, что если использовать обратные праймеры, полностью соответствующие теломерным повторам, то праймеры отжигаются в ходе ПЦР не по краям матрицы (в силу периодичности теломер) и появляются ложные сигналы. Эту проблему решают, добавляя на края праймера дополнительные некомплементарные теломерам участки с 5'-концевым нетеломерным «довеском» из 6 нуклеотидов. Может использоваться комбинация нескольких праймеров, используемых в качестве обратных, для уменьшения неспецифических сигналов (подробнее о двухпраймерной системе далее, праймеры RP и RPC3 приведены в табл. 1). В смесь TRAP для оценки влияния стабилизирующих квадруплексы ингибиторов может добавляться олигонуклеотид TSG4 (табл. 1), который не требует синтеза теломеразой нескольких повторов до начала действия ингибитора. Более подробно преимущества и недостатки различных олигонуклеотидов, используемых в TRAP, рассмотрены в работе. Кроме того, если использовать ПЦР для амплификации сигнала, то на результат определения теломеразной активности могут влиять ингибиторы ПЦР, содержащиеся в образце. Первоначально в методе TRAP продукты ПЦР выявляли в полиакриламидном геле (ПААГ) по радиоактивной метке, которую вводили с помощью радиоактивно меченного праймера или встраивали в ДНК в ходе реакции. Метод позволяет качественно оценивать активность и процессивность теломеразы в экстрактах клеток и тканей, но, как уже сказано, нуждается в радиоактивных препаратах. ПЦР второй стадии TRAP позволяет получить достаточно ДНК для окрашивания в геле, например бромидом этидия (чувствительность невысокая), нитритом серебра (чувствительность, как при использовании радиоактивной метки, но метод более трудоемкий и сравнительно дорогой), Sybr Green и его аналогами (чувствительность, как при использовании радиоактивной метки, а мутагенность гораздо ниже, чем у бромида этидия, хотя он также является интеркалирующим красителем). Возможно также и флуоресцентное мечение олигонуклеотидов, используемых в TRAP. Получить экстракты опухолевых клеток или клеточных линий и определить в них теломеразную активность достаточно просто, тогда как ткани состоят из нескольких типов клеток и могут содержать вещества, влияющие на количественную и даже качественную оценку теломеразной активности. Поэтому возможны ложноположительные или ложноотрицательные результаты, которые могут повлиять на правильность диагноза и прогноз заболевания. Определение теломеразной активности могут затруднять и особенности биопсийных образцов: большие объемы жидкости (кровь и т.д.) или присутствие многочисленных нормальных клеток. В этих случаях возможна 30 экстракция синтезированной теломеразой ДНК при помощи модифицированных магнитных шариков. При этой процедуре ингибиторы ПЦР удаляются или сильно разбавляются. Метод TRAP с такой экстракцией состоит из трех основных этапов: удлинение субстратимитирующего олигонуклеотида теломеразой, выделение синтезированной теломеразой ДНК с помощью модифицированных магнитных шариков, амплификация. На этапе экстракции синтезированную теломеразой ДНК гибридизуют с С- богатым биотинилированным праймером 2 и выделяют ее из реакционной смеси с помощью покрытых стрептавидином магнитных шариков. Затем синтезированную теломеразой ДНК высвобождают из комплекса с помощью нагревания и проводят ПЦР. Эта модификация имеет на порядок меньшую чувствительность к ингибиторам ПЦР по сравнению со стандартным TRAP и несколько большую эффективность при анализе тканевых и других комплексных образцов. Вместо биотинилированного праймера и магнитных шариков можно использовать экстракцию фенолом и хлороформом, хотя при этом хуже удаляются примеси, хорошо растворимые в воде, а не в органических растворителях. В работе по определению теломеразной активности может быть использован метод детекции теломеразной активности, разработанный на кафедре химии природных соединений Химического факультета МГУ им. М.В. Ломоносова (Донцова О.А. и соавторы). Данный метод адаптирован под различные типы клеток, и основан на получении клеточного экстракта с сохранением активности теломеразы и реакции удлинения теломерного субстрата с окрашиванием продуктов реакции флуоресцентным красителем Sybr Green. Преимущества метода позволяют заменить окрашивание на основе радиоавтографии, общепринятое ранее, на более безопасную детекцию и использовать в качестве биологического материала малоинвазивный материал: лимфоцитарную фракцию периферической крови. Данная методика определения теломеразной активности основана на работе (Kim, N.W., et al, 1994) с некоторыми модификациями. Анализ проводится на чисто выделенной моноцитарной фракции клеток крови (примесь эритроцитов мешает анализу), 100000 клеток на анализ. Клетки моноцитов лизируются буфером с мягким детергентом, отделяется экстракт.

Глава 5. Влияние уровня физической активности на длину теломер и активность теломеразы

Одним из открытых вопросов спортивной науки на сегодня остается поиск биологических маркеров эффективности тренировок. Можно предположить, что изменения теломеразной активности, как маркер пролиферативного потенциала, может отражать эффективность тренировок. До настоящего времени проверялись, в основном, изменения теломеразной активности при долговременных тренировках. Предполагается, что активность в моноцитарной фракции крови может меняться сравнительно быстро в ходе тренировок (например, как результат выброса клеток депо крови с отличной от кровотока активностью или как результат повышения уровня теломеразы в клетках) и после отдыха. В этом случае, при определении динамики активации циркулирующих лейкоцитов при тренировке и последующем отдыхе, теломеразная активность может стать критерием оценки эффективности тренировки спортсменов. Другой очень важной проблемой является оценка предела, до которого можно наращивать интенсивность тренировки, в частности, чтобы не возникало синдромов перетренированности и миопатической усталости спортсменов. С целью поиска таких показателей можно предложить оценку средней длины теломер в скелетных мышцах либо в лейкоцитах крови, поскольку именно теломеры определяют резерв числа делений клеток. В целом установлено, что длина теломер положительно коррелирует с уровнем физической активности (главным образом, аэробной направленности) (Cherkas et al. 2008) и потреблением здоровых продуктов питания (Tiainen et al. 2012), и отрицательно взаимосвязана с возрастом и высоким потреблением животных жиров. Для получения образца мышечной ткани проводится микробиопсия: под местным обезболиванием над исследуемой мышцей делается разрез кожи и специальной иглой берется маленький кусочек мышцы объемом 2-3 мм. С другой стороны, любой биоптат является потенциально травмоопасным для спортсменов, поэтому основываясь на предположении, что длина теломер в клетках периферической крови отражает степень износа организма (известный эффект укорочения теломер при старении) в качестве модели для исследования может быть выбрана ДНК из клеток крови. При исследовании эффекта краткосрочных тренировок (21 день) на обычных мышах было показано более чем двукратное увеличение активности сердечной теломеразы, увеличение экспрессии теломеразной обратной транскриптазы (TERT; telomerase reverse transcriptase), теломерного повторсвязывающего фактора (TRF; telomere repeat binding factor) в сердце и инсулиноподобного фактора роста (IGF1) (Werner et al., 2008). С другой стороны, уровень экспрессии проапоптических факторов, таких как Chk2 (киназа контрольной точки клеточного цикла 2), p53 и p16, уменьшился. Вместе с тем, у мышей, нокаутных по генам TERT и eNOS, таких изменений не наблюдалось. Интересно отметить, что прием IGF1 увеличил активность теломеразы миокарда в 14 раз (Werner et al., 2008). Трехнедельные тренировки (бег внутри колеса) мышей приводят к увеличению активности теломеразы в циркулирующих лейкоцитах (моноцитах) и стенках сосудов брюшной аорты и к предотвращению укорочения теломер в них по сравнению с контрольной группой (Werner et al., 2009). Одновременно с этим, у тренированных мышей отмечена высокая экспрессия теломерного повтор-связывающего фактора 2 и Ku70 в стенках 17 сосудов, и снижение экспрессии факторов апоптоза клеток сосудов (киназа контрольной точки клеточного цикла 2, p16 и p53). Физические упражнения продолжительностью 4 месяца привели к значительному повышению теломеразной активности среди 64 участников реабилитационной программы, у которых диагностировали признаки синдрома хронической усталости (Ho et al. 2012). Ludlow и соавт. (2012) изучали влияние длительных тренировок (более года) на длину теломер у мышей с короткими теломерами (в результате селекции). Тренировки значительно замедляли дальнейшее укорочение теломер в клетках печени и миокарда (по сравнению с физически не активными мышами), в то время как теломеры скелетных мышц у них были подвержены укорочению в большей степени, чем у нетренированных мышей. С другой стороны, активность теломеразы скелетных мышц существенно возросла у тренированных мышей по сравнению с их малоподвижными сородичами. Результаты сравнительного анализа на выборке 44 женщин в возрасте 58,1 ± 6,8 лет показали, что физически активные женщины (выполнявшие физические упражнения более 60 минут за тренировку, не менее 3 раз в неделю и на протяжении не менее 12 месяцев) имели более длинные теломеры, большее число копий митохондриальной ДНК, более высокие значения циркулирующего адипонектина и липопротеидов высокой плотности по сравнению с женщинами, ведущими малоподвижный образ жизни (Kim et al. 2012). Было показано, что удлинение теломер у 9 физически активных мужчин после тренировки может происходить специфично в CD8+, но не CD4+ и CD3+ T- клетках (Simpson et al., 2010). Три месяца физической активности (ходьба не менее 30 минут в день, занятия йогой и психорелаксацией по 60 минут в день; 6 раз в неделю), и соблюдения правил рационального питания привели не только к 18 значительному улучшению здоровья 24 мужчин с раком простаты, но и к повышению теломеразной активности в лейкоцитах крови (Ornish et al. 2008). Чем выше была теломеразная активность у пациентов, тем ниже у них был уровень липопротеидов низкой плотности и лучше психологическое состояние.

Известно, что физическая активность благоприятно сказывается на здоровье человека. Cherkas и соавт. (2008) изучили влияние физической активности на длину теломер лейкоцитов (наблюдение более 12 месяцев) на большей выборке добровольцев (n = 2401). Было показано, что чем больше индивиды проявляли физическую активность, тем длиннее у них были длины теломер лейкоцитов (P < 0.001). У наиболее активных людей средние размеры теломер лейкоцитов были на 200 нуклеотидов длиннее, чем у наименее активных (7,1 против 6,9 килобаз; P = 0.006). У людей зрелого и пожилого возраста теломеры в моноцитарной фракции клеток крови были значительно длиннее при среднем уровне физической активности (991-2340 ккал/нед.), по сравнению с группами с низким (0-990 ккал/нед.) или очень высоким (>3541 ккал/нед.) уровнем физической активности (уровень физической активности определялся по опроснику среди 69 человек в возрасте 50-70 лет) (Ludlow et al., 2008). В работе Bendix и соавт. (2011) была выявлена положительная взаимосвязь между длиной теломер лейкоцитов у 548 пожилых людей (78,8±0,18 лет) и способностью выполнять разного рода физические нагрузки (подъем по лестнице, ношение тяжестей и т.п.; всего 11 параметров). Изучив историю жизни и длины теломер лейкоцитов 204 пожилых мужчин (средний возраст 76 лет), Savela и соавт. (2013) пришли к выводу, что те индивиды, которые проявляли умеренную физическую активность в 19 1974 году (уровень физической активности установили с помощью опросника, когда у испытуемых средний возраст составлял 47 лет) имели более длинные теломеры, чем те мужчины, которые проявляли низкую или высокую физическую активность. Афроамериканские подростки 14-18 лет имеют более длинные теломеры лейкоцитов, чем их ровесники европейского происхождения (Zhu et al. 2011). Кроме того, средняя длина теломер была значимо больше у девочек и девушек, чем у мальчиков и юношей той же возрастной группы. Вместе с тем, только у подростков женского пола длина теломер положительно коррелировала с уровнем физической активности (Zhu et al. 2011). В работе Puterman и соавт. (2010) определяли влияние стресса и уровня физической активности в группе, состоящей из 63 здоровых женщин. Было установлено, что чем больше женщины, ведущие малоподвижный образ жизни, испытывали стресс, тем короче у них были теломеры. Такой закономерности среди физически активных женщин обнаружено не было (Puterman et al. 2010). У 955 больных с сердечно-сосудистыми заболеваниями определяли уровень физической активности и длину теломер лейкоцитов (Krauss et al. 2011). Длина теломер положительно коррелировала с уровнем физической активности: 5349±3781 пар оснований в группе малоподвижных пациентов и 5566±3829 пар оснований в группе с высокой физической активностью.

Глава 6. Роль фармакологических препаратов в удлинении теломер

Ученые веками пытаются понять, от чего зависит продолжительность жизни человека, и как можно ее увеличить. Тем не менее, единственным неоспоримым фактом в биогеронтологии является зависимость процессов старения организма от состояния длины теломер -- концевых участков хромосом. Чем последние крупнее, тем дольше и лучше будет жить человек. Прежде ученые уже демонстрировали, что здоровый образ жизни способствует удлинению концов теломер и, следовательно, продлить жизнь пациента. Однако теперь команда из Стэнфордского университета показала, как можно использовать медицинское вмешательство извне для непосредственного увеличения концевых участков хромосом.

Исследователи провели мышечными клетками культура увеличилась втрое по сравнению с контрольной группой.

Активность теломеразы можно стимулировать. К некоторому повышению функции этого фермента, а значит и увеличению длины теломер, приводит умеренная физическая нагрузка, в меньшей степени - витамины и полиненасыщенные жирные кислоты, содержащиеся в здоровой пище.

В целом, длина теломер у людей, ведущих правильный образ жизни, значительно больше, чему тех, кто злоупотребляет алкоголем, курит, не следит за своим питанием и весом, ведет малоактивный образ жизни. К ее ускоренному сокращению ведут также стресс и вирусные заболевания.

Разумеется, с момента появления теломер-теломеразной гипотезы старения начались и поиски вещества, способного активировать теломеразу, с целью замедления процесса старения.

Вещество препарата была выделена из экстракта корня астрагала лекарственного растения, издавна применяющегося в китайской медицине как средство, предотвращающее развитие рака. В химическом составе данного экстракта содержится более 2000 молекул. И только одна из них способна активировать теломеразу клеток. Она была названа TA-65.

Сам процесс экстрагирования и очистки этой молекулы - технологически многоступенчатый процесс. Необходимо не только распознать ее среди остальных, но и добиться максимальной степени отделения от примесей. Запатентована и сама молекула и способ ее получения и переработки. Для изготовления минимальной партии ТА-65 необходимо переработать около 5-6 тонн корня астрагала. Очевидно, что доза активного веществаTA-65, находящаяся в 1 капсуле, сопоставима с несколькими литрами экстракта. Учитывая, что для получения выраженного эффекта необходим как минимум трехмесячный курс лечения, заменить его ежедневным приемом нескольких литров обычного экстракта корня астрагала невозможно.

Попадая в кровь, вещество проникает в клетку и включает ген, отвечающий за временную активацию теломеразы. Активированная теломераза начинает достраивать конечные участки хромосом, путем добавления нуклеотидных оснований. Нарастив таким способом теломеры, клетка получает дополнительную возможность делиться, функционировать и продолжать жить - по сути превращаясь из стареющей в молодую и активную. Весь этот процесс зеркально отражается и на организме в целом.

Первое документальное подтверждение обратимости возрастных изменений у млекопитающих под воздействием активатора теломеразы было опубликовано в журнале Nature в 2011 году. Подопытные мыши имели короткие теломеры и минимальную активность фермента теломеразы. У них наблюдались выраженные дегенеративные нарушения в органах, повреждения ДНК в хромосомах, сильно пострадал мозг. Мыши не имели потомства, быстро старели и жили в среднем 43 недели.

В возрасте 30-35 недель, т.е. уже весьма преклонном, им ежедневно в течение месяца вводился активатор теломеразы. В результате длительность жизни мышей увеличивалась до 80 недель. У них удлинялись теломеры, восстанавливалась активность теломеразы, уменьшались повреждения ДНК в хромосомах и дегенеративные изменения в органах: яичках, селезенке, кишечнике и мозге. Восстанавливалась способность давать потомство. Таким образом, наблюдалось очевидное и выраженное омоложение животных. При этом, ни у одной из мышей не развился рак.

В январе 2007 года была запущена программа PattonProtocol-1 («Протокол Паттона») с участием добровольцев. Активатор теломеразы ТА- 65 принимали 114 человек в возрасте63 ± 12 лет, 72% из которых были мужчины, 54% участников - носители цитомегаловирусной инфекции. Результаты исследования были опубликованы в журнале «Rejuvenation Research» в 2010 году.

В дополнение к очевидной положительной иммунной реконструкции, прием ТА-65 оказался способен улучшить показатели метаболизма углеводов и липидов, а также состояние сердечно-сосудистой и костной систем.

Рисунок 12. Схема восстановления укороченных теломер

TA-65 MD активирует теломеразу и увеличивает длину теломер у человека. Таким образом происходит улучшение функционирование иммунных клеток, увеличение плотности костей и других показателей важнейших биомаркеров.

Согласно результатам исследования, опубликованным в журнале «Journal of Nutritional» за октябрь 2011 г., уровень концентрации в плазме витамина B9 прямо пропорционален длине теломер. Фолиевая кислота, чрезвычайно полезная для профилактики депрессий, припадков и церебральной атрофии, также играет важную роль в поддержании целостности ДНК и оказывает влияние на процесс метилирования ДНК (от обоих этих факторов зависит длина теломер). Дефицит фолиевой кислоты может привести к повышенному уровню гомоцистеина, который, предположительно, является одной из основных причин ожирения, заболеваний сердца и болезни Альцгеймера.

Витамин B12 и В6 часто называют «витамином энергии». Причиной такой характеристики является его влияние на основные жизненные функции человеческого организма: выработку энергии, формирование крови, синтез ДНК и образование миелина (англ. myelin) ? защитной оболочки нервных волокон. Наличие в организме достаточного количества витамина B12 и В6 значительно улучшает качество жизни и является мощным барьером перед множеством изнурительных болезней, замедляет старение .

Результаты недавнего исследования показали, что токотриенол, менее известный из двух типов витамина Е - изомер, является настолько важным для организма, что его дефицит может привести к преждевременному укорачиванию теломерных участков хромосом и снижению продолжительности жизни. Ученые обнаружили что токотриенолы способствуют увеличению длины генетических молекулярных цепочек и защищают ДНК от повреждений, позволяя клеткам восстанавливаться и значительно снижая риск возникновения раковых мутаций, которые могут накапливаться в течение многих десятилетий. Это вещество содержится во многих продуктах , начиная от орехов и подсолнечного масла холодного отжима. Способность стимулировать восстановление повреждений ДНК, в особенности эпигенетических нарушений.

Цинк играет важную роль в функционировании и восстановлении ДНК. Недостаток цинка приводит к появлению большого количества разрывов цепочек ДНК. У пожилых людей недостаток цинка ассоциирован с короткими теломерами. Минимальное количество цинка, которое человек должен получать в день, составляет 15 мг, а оптимальные дозировки составляют около 50 мг в день для женщин и 75 мг - для мужчин. Получены данные, согласно которым новый цинкосодержащий антиоксидант карнозин уменьшает скорость укорочения теломер в фибробластах кожи, одновременно замедляя их старение. Карнозин также является важным антиоксидантом для мозга, что делает его хорошим помощников в борьбе со стрессом. Многие антиоксиданты способствуют защите и восстановлению ДНК. Например, установлено, что витамин С замедляет укорочение теломер в клетках сосудистого эндотелия человека.

Заключение

Старение животной клетки представляет собой комплекс изменений во множестве молекулярных и биохимических процессах. Невозможно однозначно связать причины возрастного ослабления структур и функций с тем или иным механизмом. Однако наибольшее экспериментальное подтверждение нашла теломерная теория старения, что в корне изменило общее представление о природе старения. На сегодняшний день существует целое направление, занимающееся исследованием природы старения на основании теломерных механизмов. Предпринимаются попытки остановить сокращение теломер путем безопасной активации теломеразы в клетках, где ее активность крайне низка или отсутствует вообще.

Переход к более здоровому образу жизни вызывает удлинение теломер -- выполняющих защитную функцию концевых участков хромосом -- в клетках организма, что фактически означает замедление процессов старения. Такие результаты были получены в ходе небольшого по составу участников исследования, проведенного сотрудниками Калифорнийского университета (Сан-Франциско). Работа опубликована в журнале The Lancet Oncology.

Известно, что теломеры укорачиваются при каждом делении клетки, это явление называется концевой недорепликацией. Их длина служит своего рода счетчиком клеточных делений: чем она короче, тем большее число делений прошло с момента рождения клетки-предшественницы. Таким образом, длина теломерных участков непосредственно связана с биологическим возрастом человека и является одним из факторов старения.

Предыдущие исследования обнаружили связь между укорачиванием теломер и стрессом, повышением риска возникновения инфекционных, сердечно-сосудистых, нейродегенеративных и онкологических заболеваний у пожилых людей, а также восприимчивостью к инфекционным заболеваниям у молодежи и людей среднего возраста.

В 2008 году Дин Орниш и его коллеги начали пилотное исследование, показавшее, что возможен и обратный эффект -- изменение образа жизни в сторону более здорового питания и большей физической нагрузки даже за сравнительно небольшой период времени увеличивает активность фермента теломеразы в клетках иммунной системы, от которого зависит структурная однородность и длина теломерных участков хромосом.

На сегодняшний день, недостаточно знаний, чтобы окончательно сделать вывод о причине и механизмах биологического старения. Интенсивность и масштабность исследований феномена старения во многих лабораториях мира, также накопленный материал по этой проблеме позволяют прогнозировать появление в скором будущем значительного качества результата, который выразится в появлении способов радикального продления жизни.

Выводы:

Изучены функции теломерного аппарата в развитии процессов старения.

Рассмотрены методы анализа длины теломер.

Рассмотрено влияние уровня физической активности на длину теломер и активность теломеразы.

Список литературы

1. Анисимов В.Н. Теории и модели старения и смертности // Молекулярные и физиологические механизмы старения. Спб.: «Наука». 2008. 481 с.

2. Альбертс Б., Брей Б., Льюис Дж. и др. Молекулярная биология клетки. М.: Мир, 1994. Т. 1-3.

3. Атлас по генетике под редакцией академика РАО проф., д.м.н. Н.В. Чебышева. Москва. 2008 год.

4. Акоев И.Г., Биофизика познает рак. М.: Наука, 1987. С.133-140.

5. Бласко и др., Активатор теломеразы ТА85 удлиняет короткие теломеры и увеличивает продолжительность жизни взрослых/старых мышей, не увеличивая частоту заболевания раком // Aging Cell. 2011. Т. 10, вып.

6. 4, P.604-621.

7. Биология. Углубленный курс. Учебник для бакалавров. Под редакцией академика РАМН, профессора В.Н. Ярыгина. Юрайт, 2013 г.

8. Биология. Учебное издание. Чебышев Н.В., Кузнецов С.В., Зайчикова С.Г., Гуленков С.И., Козарь М.В. Том 1. 2010 год.

9. Галицкий В.А. Эпигенетическая природа старения // Цитология Том 51, № 5. 2009. С. 388--397.

10. Грунченко Е.В., Что нам стоит многоклеточность. Новосибирск: Наука, 1985 (сибирское отделение). C. 49-56.

11. Гуо Н., Перри Э.М., Ли Л.С., Кэмбу Ф., Лодер Н. и др., Короткие теломеры подвергают риску передачу сигналов и долговечность b-клетки // Nature. 2011. 6(3), PloS ONE. P.17-21.

12. Дильман В.М., Четыре модели медицины. Ленинград: Медицина, 1987. C.244-247.

13. Дильман В.М., Большие биологические часы. М.: Знание, 1982. C. 57-68.

14. . Егоров Н.С., Олексин А.В., Самуилова В.Д., Биотехнология: Учебное издательство для вузов. Книга 1: Проблемы и перспективы. М.: Высшая школа, 1987. C. 130-136.

15. Йоку, Фурумото и др., Связанное со старением укорачивание теломер замедляется обогащением внутриклеточного витамина С путем подавления оксидазного стресса // Life Sci. 1996. 63(11). P.935-938.

16. Каминер Т., Гильхрест В.А. и др., Старение кожи // Principles of Geriatric Medicine and Gerontology. NewYork: McGrawHill, 1994. Вып. 3. Р. 411-429.

17. Канунго М., Биохимия старения. М.: Мир, 1982. C.128-129.

18. . Лоренц М., Сарецки Г., Ситте Н. и др., Фибробласты ВJ демонстрируют высокие оксидативные возможности и замедляют укорачивание теломер независимо от hTERTтрансферазы // Free Radic. Biol. Med. 2001. V.31. P.824- 831.

19. . Лэмб М., Биология старения. -- Москва: Мир, 1980. C.37-45.

20. . Милунски О., Знайте свои гены. -- Москва: Мир, 1881. -- 392.

21. . Майк Фоссель., Клетки, старение и заболевание человека.//Oxford University Press, 2004. 29-30.

22. . Ричард Г.А., Фарагер, Дэвид, Киплинг., Как репликативное старение может влиять на старение человека // Bioеssay. 1998, Des. Т. 20, вып.

23. 12. P.985-991.

24. . Сарецки Г., фон Цглиники., Репликационное старение, теломеры и оксидативный стресс // Ann. N. Acad. Sci. 2002. P. 24-29.

25. Теломера, теломераза, рак и старение // Биохимия. 1997. Т. 62, С. 11.

26. Фанк В.Д., Ванг С.К., Шелтон Д.Н., Шарли С.В. и др., Экспрессия теломеразы восстанавливает целостность кожи у состарившихся in vitro фибробластов в воссозданной модели кожи // Exp. Cell. Res.

27. 2000. V.258, P.270-278.

28. . Фаyce, Эфрос., Фармакологическое усиление антивирусной функции CDB+Тлимфоцитов на основе теломеразы // Immunology. 2008, Nov. 15. 181(10). P. 7400-7406.

29. Харли, Луи, Бласко и др., Натуральный продукт - активатор теломеразы как часть программы сохранения здоровья // Rejuvenation. 2010. Т. 14, № 1. P. 34-39.

30. Шей, Райт, Баур., Влияние положения теломеры в клетках человека // Sciense. 2001. Т. 292, N. 5524. P. 2075-2077.

31. Эффрос Р.Б., Старение и иммунная система. Восприимчивость и старение: причины и вмешательство / Novartis Foundation Symposium; еds G. Bock and J.A. Goods. John Willey & Son, Ltd., Chicherst, UK, 2008. P. 18-23.

32. Эргюнм, Сахин и др., Дисфункция теломеров вызывает метаболическую митохондриальную компроментацию // Nature. 2012. N.470. P.359-365.

33. Яар М., Гильхрест В.А., Старение кожи: теоретические допустимые механизмы и вытекающие из них изменения в структуре и функционировании // Clin. Geriatr. Med. 2001. N 17. 617-630.

34. https://ru.m.wikipedia.org/wiki/Клеточное_старение.

35. Kim N.W., Piatyszek M.A., Prowse K.R., Harley C.B., West M.D., Ho P.L., Coviello G.M., Wright W.E., Weinrich S.L., Shay J.W. Specific association of human telomerase activity with immortal cells and cancer // Science. 1994. V. 266. N 5193. P. 2011-2015.

Размещено на Allbest.ru