Патогенетические механизмы иммунной дисфункции у новорожденных с респираторными нарушениями

Размещено на http://www.allbest.ru/

На правах рукописи

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

Патогенетические механизмы иммунной дисфункции у новорожденных с респираторными нарушениями

«03.03.03 - иммунология»

Дударева Мария Васильевна

Ростов-на-Дону 2012

Диссертация выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении «Ростовский научно-исследовательский институт акушерства и педиатрии» Минздравсоцразвития России

Научный консультант: Сизякина Людмила Петровна доктор медицинских наук, профессор.

Официальные оппоненты: Пинегин Борис Владимирович доктор медицинских наук, профессор, зав. отделом иммунодиагностики и иммунокоррекции ФГБУ «ГНЦ Институт иммунологии» ФМБА России,

Кадагидзе Заира Григорьевна доктор медицинских наук, профессор, рук. Централизованного клинико-лабораторного отдела РОНЦ им. Н.Н.Блохина РАМН,

Сапожников Александр Михайлович доктор биологических наук, профессор, рук. лаборатории клеточных взаимодействий Института биорганической химии им. академиков М.М.Шемякина и Ю.А.Овчинникова РАН,

Ведущая организация: НИИ вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова РАМН.

Защита диссертации состоится 27 февраля 2013 г. в 14-00 часов на заседании Совета по защите докторских и кандидатских диссертаций Д 208.017.01 в ФГБУ «ГНЦ Институт иммунологии» ФМБА России по адресу: 115478, Москва, Каширское шоссе, 24, корп. 2.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБУ «ГНЦ Институт иммунологии» ФМБА России.

Автореферат разослан 2013 года.

Ученый секретарь Совета по защите докторских и кандидатских диссертаций доктор медицинских наук Сеславина Лия Сергеевна

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Иммунная система является одной из трех интегративных систем организма, которая вместе с нервной и эндокринной системами обеспечивает поддержание гомеостаза в условиях постоянного изменения характера влияний факторов внешней и внутренней среды. Благодаря фундаментальным исследованиям отечественных и зарубежных иммунологов были получены убедительные данные о роли иммунной системы в изменении иммунного статуса у новорожденных с респираторными нарушениями.

Синдром дыхательных расстройств является одной из основных причин заболеваемости и смертности как недоношенных, так и доношенных новорожденных не только в нашей стране, но и за рубежом (Дементьева Г.М. и соавт., 2001, 2002; Рюмина И.И., 2002; Байбарина Е.Н. и соавт., 2006; Сидельникова В.М. и соавт., 2006; Володин Н.Н., 2006, 2007; William D. Fraser et al., 2005; Carrie K. et al., 2008).

В течение нескольких десятилетий изучению данной патологии уделяется большое внимание (Гребенников В.А. и соавт., 1995; Шаламов В.Ю, 2000; Антонов А.Г., Володин Н.Н., Гребенников В.А. и соавт., 2002; Перепелица С.А., Голубев А.М., Мороз В.В., 2007; Avery M.E. et al., 1991; Carbine D.N., 2008).

Частота развития инфекционных осложнений при неотложных состояниях у новорожденных с дыхательными расстройствами остается одной из самых актуальных проблем современной медицины в силу неуклонной тенденции к росту заболеваемости и стабильно высокой летальности и составляет 30-50%, занимая одно из ведущих мест в структуре детской смертности (Вермель А.Е., 2003; Володин И.И., Антонов А.Г., Байбарина Е.Н., 2003; Самсыгина Г.А., 2003; Антонов А.Г., Байбарина Е.Н., Соколовская Ю.В., 2005; Мархулия Х.М. и соавт., 2005; Баранов А.А., 2007; Володин Н.Н. и соавт., 2007; Яцык Г.В., 2007; Голубев А.М. и соавт., 2008; Khemani E. et al., 2007; Olaciregui I. et al., 2009; Ramirez K. et al., 2010). В настоящее время ведутся интенсивные поиски универсальных клинико-лабораторных маркеров присоединения бактериальных инфекций у новорожденных с респираторными нарушениями, находящихся на искусственной вентиляции легких (Эстрин В.В. и соавт., 2006, 2007; Бирюкова Т.В. и соавт., 2007; Дегтярева М.В., 2008). Вместе с тем, иммунопатологические механизмы, определяющие исход и клиническое течение заболевания, развитие бактериальных осложнений у новорожденных, получающих респираторную поддержку, остаются мало изученными.

Анализируя в целом характер изменений иммунологических показателей при дыхательных расстройствах у новорожденных, находившихся на ИВЛ, следует отметить, что большинство научных исследований относится к оценке адаптивного иммунитета, тогда как данные о функционировании врожденного иммунитета практически отсутствуют. Между тем именно состояние иммунокомпетентных клеток, обеспечивающих врожденный иммунитет, является основополагающим фактором защиты от присоединения бактериальных осложнений и формирования иммунной дисфункции.

У новорожденных с респираторной патологией реперфузионные процессы, связанные с респираторной поддержкой, приводят к апоптозу тканей и стимуляции клеток иммунной системы, выходу больших количеств провоспалительных цитокинов и медиаторов воспаления, которые в свою очередь являются мощными апоптогенными факторами и, одновременно факторами способными генерировать свободнорадикальные реакции, индуцирующие апоптоз (Белобородова Н.В., Бачинская Е.Н, 2000). Таким процессам в большей степени подвержены клетки иммунной системы, что приводит к глубокому иммунодефицитному состоянию новорожденного и высокому риску присоединения нозокомиальной инфекции, появлению тяжелых гнойно-септических осложнений. Вместе с тем, эти иммунопатологические механизмы у новорожденных с респираторной патологией остаются практически не изученными. Детальное исследование механизмов клеточной альтерации иммунокомпетентных клеток у новорожденных открывает новые подходы к профилактированию инфекционных осложнений.

Кроме того, все еще недостаточно освещены вопросы динамики восстановления функциональной активности адаптивного и врожденного иммунитета у доношенных новорожденных с дыхательными расстройствами.

Согласно современным представлениям нарушения иммунной системы лежат в основе патогенеза респираторных нарушений. Однако конкретные патогенетические механизмы иммунных нарушений, способствующих манифестации и прогрессированию бактериальных осложнений при дыхательных расстройствах у новорожденных детей, на сегодняшний день не исследованы.

Учитывая вышеизложенное, приоритетным направлением является изучение патогенеза респираторных нарушений с позиций определения роли врожденного и адаптивного иммунитета, а также особенностей взаимодействия между ними, разработка ранней диагностики нарушений иммунологической адаптации и бактериальных осложнений у новорожденных с респираторной патологией.

Полученные данные позволят расширить существующие представления об иммунных процессах, которые имеют не только теоретическое, но и отчетливое прикладное значение.

Таким образом, необходимость изучения и решения вышеуказанных проблем, обеспечивают актуальность настоящей темы, приоритетность ее целей и задач. Цель исследования. Выявить патогенетические механизмы повреждения иммунной системы у новорожденных с респираторными нарушениями и разработать ранние критерии диагностики, прогноза течения и возникновения бактериальных осложнений при респираторных нарушениях.

Задачи исследования:

1. Исследовать уровень экспрессии маркеров позитивной активации CD25⁺, CD69⁺, CD71⁺, HLADR⁺ клеток иммунной системы у новорожденных детей с респираторными нарушениями, обусловленными мекониальной аспирацией и респираторным дистресс-синдромом.

2. Оценить влияние негативной активации клеток иммунной системы (экспрессия CD95⁺, AnnexinV⁺, AnnexinV⁺PI⁺) на клиническое течение заболевания и развитие бактериальных осложнений у новорожденных с респираторными нарушениями.

3. Изучить эффекторные функции иммунной системы, включая секрецию основных провоспалительных цитокинов IL-1в, IL-6, IL-8, TNF-б, а также включая секрецию IFN-б, IFN-г, TGF-в и оксида азота в сыворотке крови и бронхоальвеолярном лаваже у новорожденных детей с респираторными нарушениями.

4. Выявить особенности продукции хемокина RANTES и GM-CSF у новорожденных детей с респираторными нарушениями.

5. Определить роль параметров врожденного иммунитета TLR-2 (CD282⁺), TLR-4 (CD284⁺) и CD14⁺⁺, как возможных маркеров реализации бактериальных осложнений у новорожденных с респираторными нарушениями.

6. Исследовать экспрессию молекул адгезии ICAM-1 (CD54⁺), CD11в+, CD11c⁺, а также уровень экспрессии к Fc фрагментам IgG, и к С1 и С3 компонентам комплемента (CD64⁺, CD35⁺) у новорожденных детей с респираторными нарушениями.

7. Исследовать функции фагоцитов у новорожденных детей с респираторными нарушениями.

8. Провести анализ динамики показателей врожденного и адаптивного иммунитета у новорожденных с респираторной патологией.

9. Разработать иммунологические тесты, позволяющие прогнозировать исход заболевания и бактериальные осложнения у новорожденных детей с респираторными нарушениями, обусловленными мекониальной аспирацией и респираторным дистресс-синдромом.

Научная новизна работы. Впервые установлено, что у доношенных новорожденных с МАС и РДС развивается иммунологический дистресс-синдром, обусловленный усилением процессов апоптоза клеток иммунной системы, снижением концентрации GM-CSF, угнетением адаптивного иммунитета с одновременным угнетением цитотоксических реакций, вызванных естественными киллерами и цитотоксическими лимфоцитами.

Впервые получены данные о значительном снижении уровня фактора хемотаксиса RANTES в сыворотке крови, что отражает особенности течения респираторных нарушений у новорожденных.

Выявлена ведущая роль альтерации клеток иммунной системы в исходах критических состояний у доношенных новорожденных.

Впервые получены новые данные о дефектах в системе Toll-подобных рецепторов у новорожденных с респираторными нарушениями. Показаны различия в экспрессии CD14⁺⁺, TLR-2 (CD282⁺) и TLR-4 (CD284⁺) на моноцитах периферической крови здоровых новорожденных и новорожденных с респираторными нарушениями.

Установлено, что увеличение количества CD95⁺ -лимфоцитов и моноцитов у новорожденных с респираторными нарушениями может указывать на пролонгированное течение патологического процесса.

Установлено, что развитие респираторной патологии ассоциируется с активацией периферических лимфоцитов и моноцитов новорожденных.

Установлено, что при респираторной патологии нарушаются процессы распознавания и презентации антигена (АГ) периферическими моноцитами новорожденного. Установлено, что иммунные механизмы участвуют в патогенезе респираторных нарушений, проявляясь на системном уровне в виде дисбаланса реакций врожденного и адаптивного иммунитета.

Впервые установлено, что иммунная депрессия врожденного и адаптивного иммунитета у новорожденных с респираторными нарушениями сохраняется и в исходе заболевания, являясь основой для формирования иммуноопосредованной патологии.

Впервые разработан способ раннего прогнозирования септических осложнений у новорожденных с респираторной патологией, на основании повышенной экспрессией AnnexinV⁺ на моноцитах (Патент на изобретение №2414706 от 20 марта 2011 г.).

Впервые разработан способ ранней диагностики развития неонатального сепсиса у новорожденных с синдромом дыхательных расстройств и гипоксическим поражением ЦНС, на основании сниженной экспрессией HLA-DR⁺ на моноцитах периферической крови (Патент на изобретение №2374646 от 27 ноября 2009 г.).

Теоретическая и практическая значимость

1. Расширены представления о патогенетической роли изменений врожденного и адаптивного иммунитета при респираторных нарушениях у новорожденных, обусловленных нарушением процессов активации, дифференцировки, апоптоза и эффекторных функций иммунокомпетентных клеток и сопровождающихся нарушением экспрессии Toll-подобных рецепторов, как физиологических регуляторов врожденного и адаптивного иммунитета.

2. Практическая значимость работы заключается в разработке иммунологических критериев ранней диагностики присоединения вентилятор-ассоциированных инфекционно-воспалительных осложнений бактериальной природы у новорожденных с респираторной патологией, основанных на определении экспрессии AnnexinV⁺ на моноцитах (Патент на изобретение №2414706 от 20 марта 2011 г.) и экспрессии HLA-DR⁺ на моноцитах периферической крови (Патент на изобретение №2374646 от 27 ноября 2009 г.). 3. На основании собственных исследований установлены наиболее информативные показатели содержания цитокинов в бронхоальвеолярном лаваже (БАЛ) при респираторной патологии. Предложено использовать уровень IL-1, IL-6, IL-8 в БАЛ в качестве маркеров активности воспалительного процесса в бронхолегочной системе при респираторных нарушениях у доношенных новорожденных.

Положения, выносимые на защиту.

1. Иммунные нарушения играют важную роль в патогенезе респираторных расстройств и проявляются дисбалансом реакций врожденного и адаптивного иммунитета.

2. Наиболее выраженные изменения врожденного и адаптивного иммунитета регистрируются при респираторных нарушениях на 3-5-е сутки наблюдения. 3. Иммунная депрессия врожденного и адаптивного иммунитета при респираторных нарушениях сохраняется и на 20-е сутки, являясь основой для формирования иммуноопосредованной патологии.

4. Развитию бактериальных осложнений при респираторных нарушениях способствует нарушение презентации антигена и увеличение апоптоза лимфоцитов и моноцитов.

5. Ранняя диагностика иммунных дисфункций врожденного и адаптивного иммунитета позволит уменьшить количество бактериальных осложнений, а так же снизить раннюю неонатальную смертность.

Внедрение результатов работы в практику

Количественное определение уровней факторов как местного, так и системного иммунитета, молекул межклеточной адгезии и хемокинов в сыворотке крови и в бронхоальвеолярном лаваже у новорожденных с респираторной патологией внедрено в практическую деятельность отделения реанимации ФГБУ «Ростовский научно-исследовательский институт акушерства и педиатрии» Министерства здравоохранения и социального развития, используется в лекционных курсах на семинарах врачей ЮФО, на кафедре клинической иммунологии и аллергологии ФПК и ППС ГБОУ ВПО РостГМУ Минздравсоцразвития России.

Апробация работы Основные положения работы представлены:

- на Всероссийской междисциплинарной научно-практической конференции «Внутриутробные инфекции плода и новорожденного», Саратов, 2000 г.; на 4-ом Конгрессе Ассоциации Аллергологов и Клинических Иммунологов «Современные проблемы аллергологии, иммунологии и иммунофармакологии», Москва, 2001 г.; на международном конгрессе «Иммунитет и болезни - от теории к терапии», Москва, 2005 г.; на Всероссийском форуме «Мать и дитя», Москва, 2007, 2009, 2010г.г.; на национальной конференции «Аллергология и клиническая иммунология-междисциплинарные проблемы», Москва, 2008 г.; на I Всероссийском конгрессе «Анестезия и реанимация в акушерстве и неонатологии», Москва, 2008 г.; на X международном конгрессе «Современные проблемы аллергологии, иммунологии и иммунофармакологии», Казань, 2009 г.; на XVI съезде педиатров России «Актуальные проблемы педиатрии», Москва, 2009 г.; на IV ежегодном конгрессе специалистов перинатальной медицины «Современная перинатология: организация, технологии и качество», Москва, 2009 г.; на XIV международном конгрессе по реабилитации в медицине и иммунореабилитации, Израиль, 2009 г.; на XIV международном конгрессе по реабилитации в медицине и иммунореабилитации, Дубай, 2009 г.; на V Российском конгрессе «Педиатрическая анестезиология и интенсивная терапия», Москва, 2009 г.; на VII съезде союза аллергологов и иммунологов СНГ и Всемирном форуме по астме и респираторной аллергии, Санкт-Петербург, 2009 г; на Национальной конференции «Аллергология и клиническая иммунология - практическому здравоохранению», Москва, 2010 г.; на Межрегиональном форуме «Актуальные вопросы аллергологии и иммунологии - междисциплинарные проблемы», Санкт-Петербург, 2010 г.; на XV международном конгрессе по реабилитации в медицине и иммунореабилитации, Дубай, 2010 г.; на IX Российском конгрессе «Современные технологии в педиатрии и детской хирургии», Москва, 2010 г.; на V ежегодном конгрессе специалистов перинатальной медицины «Современная перинатология: организация, технологии и качество», Москва, 2010 г.; на XV конгрессе педиатров России с международным участием «Актуальные проблемы педиатрии», Москва, 2011 г.; на XI международном конгрессе «Современные проблемы аллергологии, иммунологии и иммунофармакологии», Москва, 2011 г.; на I международном конгрессе по перинатальной медицине, Москва, 2011 г.; на XVI международном конгрессе по реабилитации в медицине и иммунореабилитации, Париж, 2011 г.; на IV Всероссийском образовательном конгрессе “Анестезия и реанимация в акушерстве и неонатологии”, Москва, 2011 г.; на международном форуме “Сепсис 2011, Пекин”, Китай, Пекин, 2011г.; на Национальной конференции «Клиническая иммунология и аллергология - практическому здравоохранению», Москва, 2012 г.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 67 печатных работ, из них в изданиях, рекомендованных ВАК РФ для публикации материалов докторских и кандидатских диссертаций - 16 публикаций, получено 5 патентов на изобретение, 46 публикаций в материалах отечественных и международных конференций и конгрессов.

Объем и структура работы

Диссертация изложена на 311 страницах машинописного текста, содержит 107 таблиц, 29 рисунков, 2 схемы. Диссертация включает главы: «Введение», «Обзор литературы», «Материалы и методы», «Результаты исследований и их обсуждение», «Заключение», «Выводы», «Практические рекомендации», «Список литературы».

Библиографический указатель включает 305 работ, из них 158 отечественных и 147 иностранных источников литературы.

Материалы и методы исследования. Иммунологическое обследование детей проводили в объединенной клинико-диагностической лаборатории Ростовского научно-исследовательского института акушерства и педиатрии с использованием стандартных тестов в соответствии с разработанной там же схемой иммунологического обследования, рекомендованной ВОЗ. Исследование было одобрено локальным этическим комитетом института. Материалом для исследования послужили образцы крови и бронхоальвеолярного лаважа новорожденных детей, полученных сотрудниками анестезиолого-реанимационного и родильного отделений РНИИАП в процессе лечебного процесса и планового обследования.

Для решения поставленных задач было проведено первичное, комплексное иммунологическое обследование 479 доношенных новорожденных детей. Основную группу (441 ребенок) составили новорожденные, у которых в раннем периоде адаптации отмечались дыхательные расстройства, обусловленные мекониальной аспирацией и респираторным дистресс-синдромом, поступившие из родильных домов г. Ростова-на-Дону и Ростовской области, в отделение реанимации новорожденных Института акушерства и педиатрии г. Ростова-на-Дону за период с 2005 по 2009 гг.

Группу сравнения составили 38 условно-здоровых новорожденных ребенка, у которых отмечалось физиологическое течение раннего периода адаптации.

В процессе выполнения работы у новорожденных из основной группы проводилось 3-х кратное иммунологическое обследование в динамике катамнестического наблюдения. У детей группы сравнения обследование проводилось один раз сразу после рождения. Исследовались иммунологические показатели пуповинной крови.

Критерии включения новорожденных в исследование:

- имели респираторную патологию и перинатальное поражение ЦНС;

- гестационный возраст 38-41 неделя;

- вес при рождении не менее 2500 грамм;

- поступали в отделение реанимации на ИВЛ не позднее 7-х суток;

- при поступлении не имели клинических признаков внутриутробной инфекции, в том числе врожденной пневмонии.

Критерии исключения новорожденных в исследование:

- генетического нарушения гемопоэза;

- синдрома Дауна; Наличие у детей острой дыхательной недостаточности (ОДН) в сочетании с данными прямой ларингоскопии, обнаружившей меконий ниже голосовых связок, позволили поставить диагноз мекониально аспирационный синдром (МАС) у 186 новорожденных (42,2%). У остальных 255 новорожденных (57,8%), вошедших в исследование, имели место вторичные ателектазы легких, причиной которых в 2% случаев стал геморрагический синдром, а в 98% - перинатальное сочетанное поражение центральной нервной системы (ЦНС)- у них был диагностирован респираторный дистресс-синдром.

В процессе терапии течение основного заболевания новорожденных детей осложнялось развитием сепсиса (7,48%).

Ретроспективно все дети с МАС и РДС были разделены на 4 группы. В первых группах (МАС, n=155; РДС, n=212) заболевание закончилось благоприятно. Эти дети в дальнейшем, после стабилизации жизненно важных функций, для продолжения лечения были переведены в отделение патологии новорожденных. У новорожденных, составивших вторую группу (МАС, n=12; РДС, n=11), основное заболевание осложнилось присоединением септической инфекции и закончилось благоприятно с переводом в отделение патологии новорожденных. Третью группу (МАС, n=2; РДС, n=8) составили новорожденные с присоединившейся септической инфекцией и летальным исходом. У новорожденных, составивших четвертую группу (МАС, n=17; РДС, n=24), основное заболевание закончилось летально.

Исследование параметров иммунной системы проводилось на основе патогенетического принципа оценки иммунного статуса, разработанного в 1990 и дополненного в 1997 годах А.Н. Чередеевым и Л.В. Ковальчуком. В основу было положено изучение основных этапов функционирования клеток иммунной системы в процессе развития иммунного ответа, таких как распознавание, активация, пролиферация, дифференцировка и регуляция. Исследование иммунного статуса проводилось сразу после поступления детей в отделение реанимации и в динамике (на 3-5-е сутки и исходе заболевания (20-е сутки)). Большинство новорожденных поступало в первые 48 часов жизни, поэтому результаты этих исследований отражали исходное состояние иммунной системы.

Определяли количественные и функциональные показатели клеточного и гуморального иммунитета, иммунорегуляторного звена, системы фагоцитов, уровня апоптоза. При оценке клеточного звена иммунитета определяли популяционный и субпопуляционный состав лимфоцитов и моноцитов периферической крови (CD3⁺CD19^-, CD3^-CD19⁺, CD3⁺CD4⁺, CD3⁺CD8⁺, CD14⁺CD16⁺), уровень экспрессии маркеров активации лимфоцитов и моноцитов (CD3⁺CD25⁺, CD4⁺CD25⁺, CD16⁺CD25⁺, CD3⁺CD69⁺, CD3⁺CD71⁺, CD3⁺НLA-DR⁺, CD3⁺CD95⁺, CD14⁺CD69⁺, CD14⁺CD71⁺, CD14⁺НLA-DR⁺, CD14⁺CD95⁺), молекул адгезии (CD14⁺CD11b⁺, CD14⁺CD11c⁺, CD14⁺CD54⁺), TLR- рецепторов (CD14⁺⁺, CD14⁺CD282⁺, CD14⁺CD284⁺), а также CD3^-CD16⁺56⁺, CD3⁺CD16⁺56⁺, CD16⁺CD11b⁺, CD14⁺CD64⁺, CD14⁺CD35⁺, CD45-FITC/CD14-PE методом одно- и двухпараметрического фенотипирования, используя комбинации моноклональных антител к дифференцировочным и активационным маркерам фирмы IQProducts (Нидерланды), Caltag (США), Immunotex (Франция), HyCultbiotechnology (Нидерланды): FITC (изотиоцианат флуоресцеина) и PE (фикоэритрин)- меченые.

Клетки метили анти-CD45 и анти-CD14 МАТ для наложения оптимального окна дискриминации (гейта) для лимфоцитов и моноцитов/макрофагов на точечном графике прямого и бокового светорассеяния. При анализе лимфоцитарный гейт включал не менее 95-98% клеток с фенотипом CD45⁺CD14^-, моноцитарно-макрофагальный гейт включал не менее 93-96% клеток с фенотипом CD45⁺CD14⁺. В каждом образце анализировали не менее 10⁴ клеток.

Количество лимфоцитов и моноцитов, вступивших в апоптоз, выявляли с использованием диагностического набора, включающего Аннексин-V⁺, меченый FITC и пропидиум йодид (PI⁺), меченый PE (Caltag, США). Для удаления эритроцитов пробоподготовку проводили с использованием лизирующего раствора OptiLise C фирмы Immunotex (Франция) по прилагаемому протоколу.

Результаты учитывали на проточном цитофлюориметре BECKMAN COULTER EPICS XL-II (США), используя стандартные протоколы.

Определение количества лейкоцитов и дифференциальный подсчет лейкоцитов проводили на автоматическом гематологическом анализаторе МЕК 8222 (Япония). Исследовали периферическую кровь в режиме цельной крови. В анализаторе лейкоциты дифференцировались на популяции: лимфоциты, гранулоциты, моноциты, эозинофилы и базофилы.

Количественное содержание иммуноглобулинов в сыворотке крови определяли методом радиальной иммунодиффузии в геле (Manchini et al., 1965).

Спонтанный и индуцированный уровень продукции активных форм кислорода оценивали в НСТ-тесте по Пинегину Б.В. и соавт. (1989) методом спектрофотометрии.

Фагоцитарную активность нейтрофилов и моноцитов крови определяли с использование стандартизированных по размеру частиц монодисперсного латекса с диаметром 1,3 - 1,5 мкм (Тотолян А.А., Фрейдлин И.С., 2000).

Количественное определение содержания цитокинов в сыворотке крови и бронхоальвеолярном лаваже проводилось методом твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА = ELISA) с применением пероксидазы хрена в качестве индикаторного фермента. Реакцию проводили согласно рекомендациям фирмы - производителя. Определяли IL-1в, IL-6, IL-8, TNF-б, IFN-г, IFN-б, TGF-в1, RANTES, GM-CSF, NO с использованием тест-систем фирмы Biosource (США), Bender Medsistems (Австрия), R&D Systems (США). Учет реакции проводили на многофункциональном программируемом счетчике для иммунологических исследований с компьютером и программным обеспечением Multilabel Counter Victor - 2 1420 (Финляндия).

Количественную оценку результатов проводили методом построения калибровочной кривой, на которой отражена зависимость оптической плотности (ОП) от концентрации исследуемого цитокина. Результаты выражали в пг/мл и ммоль/л - оксид азота (NO).

Выделение альвеолярных макрофагов (АМ) проводили в пробах бронхоальвеолярного лаважа (БАЛ), полученного у новорождённых, находящихся на ИВЛ. Идентификацию клеток производили после окраски по Романовскому - Гимза на светооптическом микроскопе.

Статистическая обработка данных. При статистическом анализе полученных результатов:

При анализе различных несвязанных групп применялся критерий Манна-Уитни, а для связанных - критерий Вилкоксона. В расчет принимались случаи при максимальном уровне ошибки первого рода р<0,05. Показатели описательной статистики были представлены в виде выборочной средней и доверительного интервала.

При предварительном анализе данных для оценки тесноты связей отдельных показателей использовался коэффициент корреляции по Спирмену.

Для оценки связей значимых признаков применялся метод «деревьев решений», который позволил провести деление по категориальным предикторам.

Оценка точности, специфичности и чувствительности полученных методов разделения групп проводилась на основе контрольных выборок, которые не использовались при предварительном статистическом анализе.

новорожденный респираторный иммунитет клетка

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Известно, что наличие иммунной недостаточности у человека обуславливает различную дискоординацию иммунного реагирования на различные антигены (вирусы, микробы, грибы и т.д.). От эффективности защитно-приспособительных реакций зависит тяжесть и длительность заболевания, сроки выздоровления, хронизация воспалительных процессов, эффективность проводимой терапии. Нами был проведен сравнительный анализ среднестатистических параметров иммунного статуса при первичном иммунологическом обследовании новорожденных с мекониально-аспирационным синдромом (МАС) и здоровых новорожденных.

В результате анализа полученных данных нами было установлено, что у новорожденных с синдромом мекониальной аспирации, по сравнению со здоровыми новорожденными имелись следующие статистически обоснованные различия параметров иммунного статуса.

Результаты фенотипирования лейкоцитов методом проточной цитометрии показали, что у новорожденных с мекониальной аспирацией было достоверно снижено процентное и абсолютное содержание количества CD3⁺CD19^- (58,44±2,16% и 78,47±0,36%, 1,41±0,15 ·10⁹/л и 2,63±0,06·10⁹/л, соответственно), CD3⁺CD4⁺ (42,76±1,73% и 56,31±0,33%, 1,03±0,11·10⁹/л и 1,89±0,04·10⁹/л, соответственно), CD3⁺CD8⁺ (13,16±0,62% и 22,21±0,3%, 0,32±0,04·10⁹/л и 0,74±0,01·10⁹/л, соответственно), увеличение иммунорегуляторного индекса CD4/CD8 (3,53±0,22 и 2,54±0,04 у здоровых новорожденных) вследствие количественного дефицита CD3⁺CD8⁺ лимфоцитов, который является одним из основных показателей, характеризующий гармоничность функционирования иммунной системы (р<0,05). При этом особо значимым было снижение процентного и абсолютного количества CD3^-CD19⁺ лимфоцитов у новорожденных с МАС по сравнению со здоровыми новорожденными (2,98±0,9% и 11,39±0,38%, 0,06±0,01·10⁹/л и 0,38±0,01·10⁹/л, соответственно) (р<0,05). Спектр гуморальной защиты новорожденных с МАС оказался существенно ограничен за счет сниженной концентрации IgG (6,62±0,67 г/л, против 11,49±0,3 г/л) (р<0,05). Такой низкий уровень IgG у новорожденных рассматривается как свидетельство низкого уровня пассивного иммунитета, увеличивающего риск инфекционных осложнений в постнатальном периоде. Причем, отклонения иммунного статуса такого рода у обследованных новорожденных с МАС составляли от 40 и до 79% от уровня нормальных показателей, что можно трактовать как иммунную недостаточность. У новорожденных с МАС на 3-5 сутки динамического наблюдения достоверно снижалось абсолютное и относительное содержание CD3⁺CD19^- относительно 1-х суток (53,27±1,98% и 58,44±2,16%, соответственно, 1,33±0,15·10⁹/л и 1,41±0,15·10⁹/л, соответственно), относительное содержание CD3⁺CD4⁺ (40,33±1,65% и 42,76±1,73%, соответственно), абсолютного и относительного содержания CD3⁺CD8⁺ (9,17±0,4% и 13,16±0,62%, соответственно, 0,22±0,2·10⁹/л и 0,32±0,04·10⁹/л, соответственно), наблюдалось увеличение иммунорегуляторного индекса (4,67±0,24 и 3,53±0,22, соответственно) (р<0,05).

Анализ функционального состояния клеток иммунной системы показал, что у новорожденных с МАС по сравнению со здоровыми новорожденными достоверно повышалось абсолютное и относительное содержание лимфоцитов, экспрессирующих на своей поверхности маркеры ранней активации CD3⁺CD25⁺ и CD3⁺CD69⁺ (табл. 1).

Установлено достоверное снижение CD4⁺CD25⁺ и CD16⁺CD25⁺. Такое снижение регуляторных Т- клеток CD4⁺CD25⁺ приводит к осложненному течению воспалительного процесса инфекционной природы.

Известно, что лимфоциты в интактном состоянии не экспрессируют CD69⁺, но появляются после активации в течение 1-2 часов (Смолина Т.П., Запорожец Т.С., Горшкова Р.П. и соавт., 2009). По нашим данным у новорожденных с МАС уровень экспрессии CD3⁺CD69⁺ достигал значений, многократно (в 17 раз) превышающий уровни здоровых новорожденных.

Процентное содержание пролиферирующих клеток, несущих на своей поверхности трансферриновые рецепторы CD71⁺, имело достоверно высокий уровень у новорожденных детей с МАС. Аналогичные данные получены и по содержанию HLA-DR⁺, характеризующих поздние этапы активации лимфоцитов.

Как показали наши исследования, на 3-5 сутки у новорожденных с МАС регистрировалась достоверно повышенная, по сравнению с 1-ми сутками, абсолютная и относительная экспрессия молекул активации CD3⁺CD25⁺, CD3⁺CD69⁺, CD3⁺CD71⁺, CD3⁺HLA-DR⁺.

Таблица 1 Показатели функциональной активности лимфоцитов у новорожденных детей с МАС и здоровых новорожденных в динамике наблюдения

Показатель	1-е сутки	3-5-е сутки	20-е сутки (исход заболевания)	Здоровые
	n=155	n=155	n=155	n=38
CD3+CD25+ %	3,96±0,23*	4,9±0,18**	4,84±0,14***	1,37±0,12
CD3+CD25+ 109/л	0,09±0,01*	0,12±0,01**	0,14±0,01***	0,05±0,004
CD4+CD25+ %	1,1±0,12*	-	-	2,76±0,08
CD16+CD25+ %	0,51±0,1*	-	-	1,57±0,09
CD16+CD25+ 109/л	0,01±0,002*	-	-	0,02±0,001
CD3+CD69+ %	2,48±0,41*	5,63±0,33**	4,12±0,23***	0,14±0,02
CD3+CD69+ 109/л	0,05±0,01*	0,14±0,02**	0,12±0,01***	0,005±0,001
CD3+CD71+ %	3,34±0,57*	7,07±0,43**	4,78±0,24***	0,22±0,02
CD3+CD71+ 109/л	0,01±0,003*	0,004±0,001**	0,01±0,001	0,18±0,03
CD3+CDHLA-DR+ %	9,54±0,7*	17,46±0,87**	13,86±0,58***	3,4±0,18
CD3+HLA-DR+109/л	0,23±0,03*	0,44±0,05**	0,41±0,03***	0,11±0,01

Примечание: * - различия показателей новорожденных с МАС на 1-е сутки наблюдения по сравнению со здоровыми статистически обоснованы с ошибкой первого рода p<0,05 (критерий Манна-Уитни).

** - различия показателей новорожденных с МАС на 1-е сутки наблюдения по сравнению с 3-5-ми сутками статистически обоснованы с ошибкой первого рода p<0,05 (критерий Вилкоксона).

*** - различия показателей новорожденных с МАС на 1-е сутки наблюдения по сравнению с 20-ми сутками статистически обоснованы с ошибкой первого рода p<0,05 (критерий Вилкоксона).

Однако, и на 20-ые сутки заболевания, по сравнению с первыми сутками, активация лимфоцитов периферической крови оставалась статистически обоснованно высокой. Учитывая важное значение процессов апоптоза в поддержании гомеостаза, нами было проанализировано содержание лимфоцитов, экспрессирующих Fas рецептор CD95⁺, как маркер поздней активации, характеризующий готовность клеток к апоптозу (табл. 2).

Оказалось, что как абсолютное, так и относительное содержание CD3⁺CD95⁺ - клеток было повышено у новорожденных с МАС. У новорожденных с МАС на 3-5 сутки по сравнению с 1-ми сутками, отмечалось достоверное усиление экспрессии Fas-антигена как в абсолютном, так и относительном содержании.

На 20-е сутки заболевания по сравнению с 1-ми сутками достоверных различий обнаружено не было.

При исследовании реализации программированной клеточной гибели лимфоцитов в аннексиновом тесте у новорожденных нами было установлено, что у новорожденных с МАС по сравнению с контролем статистически достоверно увеличено содержание лимфоцитов периферической крови, находящихся в состоянии раннего Annexin V⁺ и позднего Annexin V⁺PI⁺ апоптоза.

Как показали наши исследования, на 3-5 сутки происходило достоверное повышение лимфоцитов, находящихся на ранней и поздней стадии апоптоза.

Таблица 2 Показатели апоптоза лимфоцитов у новорожденных детей с МАС и здоровых новорожденных в динамике наблюдения

Показатель	1-е сутки	3-5-е сутки	20-е сутки (исход заболевания)	Здоровые
	n=155	n=155	n=155	n=38
CD3+CD95+ %	8,2±0,6*	12,38±0,75**	7,97±0,45	2,27±0,18
CD3+CD95+ 109/л	0,2±0,02*	0,31±0,04**	0,23±0,02	0,08±0,01
Annexin V+ %	12,71±1,16*	17,48±1,17**	9,12±0,46***	3,87±0,13
Annexin V+ PI+ %	1,23±0,21*	1,79±0,23**	0,79±0,07***	0,15±0,01

Примечание: * - различия показателей новорожденных с МАС на 1-е сутки наблюдения по сравнению со здоровыми статистически обоснованы с ошибкой первого рода p<0,05 (критерий Манна-Уитни).

** - различия показателей новорожденных с МАС на 1-е сутки наблюдения по сравнению с 3-5-ми сутками статистически обоснованы с ошибкой первого рода p<0,05 (критерий Вилкоксона).

*** - различия показателей новорожденных с МАС на 1-е сутки наблюдения по сравнению с 20-ми сутками статистически обоснованы с ошибкой первого рода p<0,05 (критерий Вилкоксона).

Следует заключить, что на 20- сутки динамического наблюдения количество лимфоцитов в раннем и позднем апоптозе достоверно снижалось, но, не достигая нормальных значений, что делало новорожденных уязвимыми в плане инфекционных осложнений.

Важным информативным показателем состояния иммунной системы новорожденного в периоде адаптации является уровень продукции цитокинов, которые, являясь связующим звеном между иммунной системой, гемостазом, гемопоэзом и ангиогенезом, выступают в роли регуляторов всех основных этапов жизнедеятельности (Кузник Б.И., 2004; Александрова Ю. Н., 2007). Баланс про - и противовоспалительных цитокинов может быть ключевым моментом, обусловливающим клиническое состояние ребенка (Володин Н.Н., 2004).

При анализе профиля цитокинов нами было установлено, что содержание IL-1в, IL-6, IL-8, TNF-б у здоровых новорожденных при физиологическом течении родов низкое (табл. 3). Полученные данные свидетельствуют о повышении продукции IL-1в, IL-6, IL-8, TNF-б у новорожденных с МАС и в большей степени изменения касались уровней IL-6, IL-8. Уровень IL-6, IL-8 в плазме крови коррелировал с тяжестью состояния новорожденного ребенка с МАС.

Выявленные нарушения свидетельствуют о существенном вкладе провоспалительных цитокинов в патогенез мекониальной аспирации.

Изучение содержания IFN-г и IFN-б у новорожденных с МАС выявило разнонаправленный характер изменений - содержание IFN-г в сыворотке крови достоверно превышало показатели, характерные для группы здоровых новорожденных, в то время как содержание IFN-б было достоверно ниже по сравнению со здоровыми.

Обнаруженный низкий уровень IFN-б у новорожденных с МАС, по-видимому, свидетельствует о неполноценности этого защитного механизма и служит одной из причин частого возникновения тяжелого течения перинатальных инфекций, что свидетельствует в свою очередь о необходимости сочетания проводимого лечения с коррекцией функционирования системы интерферонов.

Таблица 3 Содержание провоспалительных цитокинов у новорожденных детей с МАС и здоровых новорожденных в динамике наблюдения

Показатель	1-е сутки	3-5-е сутки	20-е сутки (исход заболевания)	Здоровые
	n=155	n=155	n=155	n=38
IL-1в пг/мл	4,62±1,04*	9,24±1,4**	8,09±1,1***	1,79±0,46
IL-6 пг/мл	126,13±13,01*	169,77±15,54**	56,95±6,19***	5,26±0,95
IL-8 пг/мл	384,44±59,32*	458,02±65,76**	157,67±66,9***	14,07±2,12
TNF-б пг/мл	18,25±5,66*	46,62±8,8**	28,49±3,42***	8,98±1,17
IFN- б пг/мл	4,35±1,02*	5,16±0,73	5,43±0,75	11,28±0,4
IFN- г пг/мл	27,26±7,05*	11,82±2,44**	8,75±1,48***	3,95±1,21

Примечание: * - различия показателей новорожденных с МАС на 1-е сутки наблюдения по сравнению со здоровыми статистически обоснованы с ошибкой первого рода p<0,05 (критерий Манна-Уитни).

** - различия показателей новорожденных с МАС на 1-е сутки наблюдения по сравнению с 3-5-ми сутками статистически обоснованы с ошибкой первого рода p<0,05 (критерий Вилкоксона).

*** - различия показателей новорожденных с МАС на 1-е сутки наблюдения по сравнению с 20-ми сутками статистически обоснованы с ошибкой первого рода p<0,05 (критерий Вилкоксона). В процессе динамического наблюдения за новорожденными с МАС, установлено, что сывороточные уровни провоспалительных цитокинов IL-1в, IL-6, IL-8, TNF-б достоверно повышались к 3-5 суткам, а к 20-м суткам заболевания происходило достоверное снижение IL-6, IL-8, TNF-б по сравнению с 1-ми сутками.

Примечательно, что содержание IL-1в не снижалось к 20-ым суткам заболевания, а оставалось на достоверно высоком уровне по сравнению с 1-ми сутками наблюдения.

Как показали наши исследования, концентрация IFN- г достоверно снижалась в динамике наблюдения.

Таким образом, сохраняющаяся высокая концентрация провоспалительных цитокинов является неблагоприятным фактором, отражающим активность и тяжесть патологического процесса.

Нами было установлено, что TGF-в был достоверно повышен в группе новорожденных с МАС по сравнению с аналогичным показателем группы контроля, который в противовес провоспалительным цитокинам, супрессирует иммунный ответ путём деактивации моноцитов (табл. 4). В динамике наблюдения отмечено его достоверное снижение.

Нами впервые обнаружено достоверное снижение хемокина RANTES у новорожденных с МАС по сравнению со здоровыми новорожденными, что свидетельствует о его низкой активности при респираторной патологии, обусловленной МАС.

Сниженная секреция RANTES, возможно отражает дисфункцию эндотелиальных клеток. Вместе с тем, у этих детей отмечено достоверное повышение данного хемокина во все сроки динамического наблюдения.

Таблица 4 Содержание TGF-в, RANTES, GM-CSF, NO у новорожденных детей с МАС и здоровых новорожденных в динамике наблюдения

Показатель	1-е сутки	3-5-е сутки	20-е сутки (исход заболевания)	Здоровые
	n=155	n=155	n=155	n=38
TGF-в пг/мл	11526,34±1174,23*	8116±816**	5522,57±368,17***	2754,21±161,33
RANTES пг/мл	12326,37±1418,95*	16440±1402,11**	22054,28±1586,79***	35486±2045,85
GM-CSF пг/мл	0,06±0,03*	0,04±0,02**	1±0,08***	2,23±0,16
NO ммоль/л	8,81±0,82*	5,33±0,46**	13,54±0,59***	18,52±0,68

Примечание: * - различия показателей новорожденных с МАС на 1-е сутки наблюдения по сравнению со здоровыми статистически обоснованы с ошибкой первого рода p<0,05 (критерий Манна-Уитни).

** - различия показателей новорожденных с МАС на 1-е сутки наблюдения по сравнению с 3-5-ми сутками статистически обоснованы с ошибкой первого рода p<0,05 (критерий Вилкоксона).

*** - различия показателей новорожденных с МАС на 1-е сутки наблюдения по сравнению с 20-ми сутками статистически обоснованы с ошибкой первого рода p<0,05 (критерий Вилкоксона).

Анализ содержания ростового GM-CSF показал, что у новорожденных с МАС отмечалось достоверное снижение данного ростового фактора по сравнению с группой здоровых новорожденных. Значительное снижение содержания GM-CSF в сыворотке крови у новорожденных с МАС коррелирует с высокими значениями апоптоза лимфоцитов (r_s= 0,64, p=0,03).

Анализируя содержание оксида азота (NO), нам удалось установить, что у новорожденных с МАС по сравнению с группой здоровых новорожденных выявлено достоверное снижение NO в сыворотке крови. По-видимому, в условиях системного воспаления без присоединения инфекционного процесса, не происходит повышение синтеза индуцибельной NO-синтазы, и соответственно не возрастает уровень NO в крови. В динамике наблюдения отмечается достоверное снижение GM-CSF и NO на 3-5 сутки и достоверное повышение на 20-ые сутки наблюдения относительно первых суток.

В настоящее время изучение механизмов врожденного иммунитета стало одной из главных задач клинической иммунологии (Хаитов Р.М., Игнатьева Г.А. Сидорович И.Г., 2002; Lewis D.B., 2001). К системе врожденного иммунитета относят рецепторы семейства TLR (Taylor М.E. et al., 1990; Меджидов Р., Джаневей Ч., 2004). Экспрессируемые фагоцитами рецепторы семейства TLR способствуют вовлечению в процесс элиминации инфекции приобретенного звена иммунитета (Малиновская В.В., Дмитриева Е.В., Паршина О.И. и соавт., 2009). Паттерны, распознаваемые TLR, описаны у многих грамположительных и грамотрицательных бактерий, ряда оболочечных вирусов, некоторых грибов и отдельных простейших (Хаитов Р.М., Игнатьева Г.А. Сидорович И.Г., 2002; Байракова А.Л., Воропаева Е.А., Афанасьев С.С. и соавт., 2008).

У новорожденных с МАС выявляется статистически обоснованное снижение экспрессии CD14⁺⁺, TLR-2 (CD14⁺CD282⁺) и TLR-4 (CD14⁺CD284⁺) в сравнении со здоровыми новорожденными, а также на 3-5-е и 20-е сутки динамического наблюдения (табл. 5).

Следствием снижения уровня экспрессии на моноцитах рецепторов, распознающих патоген, может стать отсутствие адекватной реакции на проникновение чужеродных агентов, персистенция инфекции и хронизация процесса.

Таким образом, снижение экспрессии и функции TLR у новорожденных с МАС способствует усугублению иммунной дисфункции, на фоне которой могут, присоединятся инфекционно-воспалительными заболеваниями (Sabroe I., Read R.C., Whyte M.K.B. et al., 2003).

В нашем исследовании у новорожденных с МАС отмечалось достоверно значимое снижение абсолютного и относительного содержания натуральных киллеров - NK(CD3^-CD16⁺56⁺) (в 3,7 раза) и T-NK(CD3⁺CD16⁺56⁺) (в 4,1 раза) по сравнению с таковыми в группе здоровых новорожденных, а также на 3-5-е сутки по сравнению с первыми сутками.

Таблица 5 Показатели врожденного иммунитета у новорожденных детей с МАС и здоровых новорожденных в динамике наблюдения

Показатель	1-е сутки	3-5-е сутки	20-е сутки (исход заболевания)	Здоровые
	n=155	n=155	n=155	n=38
CD14++ %	74,35±1,89*	65,53±1,46**	65,51±1,43***	89,55±0,45
CD14+CD282+ %	54,98±0,78*	53,58±0,69**	53,3±0,83***	78±0,67
CD14+CD282+ 109/л	0,53±0,1*	0,36±0,06**	0,56±0,1	0,78±0,03
CD14+CD284+ %	44,11±0,98*	43,1±0,8**	42,89±0,7***	65,05±0,7
CD14+CD284+ 109/л	0,42±0,07*	0,29±0,04**	0,45±0,08	0,65±0,02
CD3-CD16+56+ %	1,98±0,22*	1,48±0,14**	2,09±0,14	7,44±0,31
CD3-CD16+56+ 109/л	0,05±0,01*	0,04±0,01	0,06±0,01	0,25±0,01
CD3+CD16+56+ %	0,61±0,04*	0,37±0,03**	0,54±0,06	2,52±0,06
CD3+CD16+56+109/л	0,014±0,002*	0,01±0,001	0,02±0,002	0,08±0,002

Примечание: * - различия показателей новорожденных с МАС на 1-е сутки наблюдения по сравнению со здоровыми статистически обоснованы с ошибкой первого рода р<0,05 (критерий Манна-Уитни).

** - различия показателей новорожденных с МАС на 1-е сутки наблюдения по сравнению с 3-5-ми сутками статистически обоснованы с ошибкой первого рода р<0,05 (критерий Вилкоксона).

*** - различия показателей новорожденных с МАС на 1-е сутки наблюдения по сравнению с 20-ми сутками статистически обоснованы с ошибкой первого рода р<0,05 (критерий Вилкоксона).

В целом, дефицит натуральных киллеров свидетельствует об участии этих клеток в иммунопатологических процессах у новорожденных с МАС, низкой резистентности иммунной системы новорожденного к инфекции, в первую очередь вирусной. Важнейшими рецепторами поверхностной мембраны моноцитов являются Fc- рецепторы, способные связывать иммунные комплексы и тем самым облегчать фагоцитоз патогенных агентов, которые соединились со специфическими антителами против их антигенов.

Анализ экспрессии СD14⁺СD64⁺ и СD14⁺СD35⁺ показал, что у новорожденных с МАС отмечалось достоверное снижение абсолютного и относительного содержания данных рецепторов, СD14⁺СD35⁺ в 2,9 раза, а СD14⁺СD64⁺ в 1,4 раза, что свидетельствует о неэффективном хемотаксисе и фагоцитозе (табл. 6).

Важную роль в иммунной регуляции играют молекулы межклеточного взаимодействия - молекулы адгезии, обеспечивающие клеткам способность к миграции, что способствует более эффективному взаимодействию с клетками-мишенями.

Таблица 6 Показатели функциональной активности моноцитов у новорожденных детей с МАС и здоровых новорожденных в динамике наблюдения

Показатель	1-е сутки	3-5-е сутки	20-е сутки (исход заболевания)	Здоровые
	n=155	n=155	n=155	n=38
CD14+CD11b+ %	17,48±0,96*	13,81±0,77**	14,39±0,97	42,44±1,11
CD14+CD11b + 109/л	0,1±0,02*	0,07±0,01	0,09±0,01	0,42±0,02
CD14+CD11с+ %	16,95±0,94*	13,76±1,04**	14,69±0,86	30,15±0,55
CD14+CD11с+ 109/л	0,1±0,02*	0,07±0,01	0,09±0,01	0,3±0,01
CD14+CD54+ %	8,58±1,14*	8,36±0,82	9,49±0,8	32,63±0,87
CD14+CD54+ 109/л	0,05±0,01*	0,05±0,01	0,06±0,01	0,32±0,01
CD14+CD64+ %	29,36±1,99*	25,91±1,24	26,86±1,49	41,81±0,82
CD14+CD64+109/л	0,15±0,03*	0,13±0,03	0,18±0,04	0,42±0,02
CD14+CD35+ %	12,35±1,47*	11,59±0,98	12,67±1,32	36,63±0,61
CD14+CD35+109/л	0,07±0,01*	0,05±0,01	0,08±0,02	0,36±0,01
CD14+CD69+ %	22,43±0,64*	29±0,67**	24,12±0,63	15,47±0,66
CD14+CD69+109/л	0,13±0,02*	0,16±0,03**	0,16±0,02	0,15±0,01
CD14+CD71+ %	23,55±0,83*	30,01±0,94**	24,52±0,98	17,47±0,37
CD14+CD71+109/л	0,14±0,02*	0,17±0,03	0,16±0,02	0,18±0,01
CD14+HLA-DR+ %	64,68±0,82*	46,35±1,36**	51,67±0,78***	86,07±0,92
CD14+CD16+ %	7,24±0,17*	11,05±0,33**	11,84±0,31**	5,51±0,15
CD14+CD16 + 109/л	0,06±0,01	0,07±0,01	0,09±0,01	0,06±0,003
CD16+CD11b+ %	1,82±0,19*	-	-	4,41±0,08
CD16+CD11b + 109/л	0,02±0,01*	-	-	0,04±0,002

Примечание: * - различия показателей новорожденных с МАС на 1-е сутки наблюдения по сравнению со здоровыми статистически обоснованы с ошибкой первого рода р<0,05 (критерий Манна-Уитни).

** - различия показателей новорожденных с МАС на 1-е сутки наблюдения по сравнению с 3-5-ми сутками статистически обоснованы с ошибкой первого рода р<0,05 (критерий Вилкоксона).

*** - различия показателей новорожденных с МАС на 1-е сутки наблюдения по сравнению с 20-ми сутками статистически обоснованы с ошибкой первого рода р<0,05 (критерий Вилкоксона).

Анализируя полученные данные, нами было установлено, что у новорожденных с МАС в периферической крови достоверно снижено содержание моноцитов, экспрессирующих маркеры адгезии CD14⁺CD11b⁺, CD14⁺CD11c⁺, CD14⁺CD54⁺, в том числе и на естественных киллерах CD16⁺CD11b⁺ по сравнению с группой контроля.

К 3-5-м суткам было достоверно снижено содержание CD14⁺CD11b⁺, CD14⁺CD11c⁺ по сравнению с 1-ми сутками наблюдения. Снижение адгезионных свойств моноцитов связано со снижением их функциональной активности.

У ново...