Таким образом, эксперименты на эритроцитах позволили нам сделать ряд существенных заключений. Во-первых, изученные фенольные липофильные антиоксиданты обладают определенным диапазоном эффективных концентраций, а в более высоких или более низких по отношению к этому диапазону концентрациях они перестают оказывать защитное действие и даже могут усиливать гемолиз эритроцитов. Во-вторых, циквалон оказался более эффективным антиоксидантом, препятствующим развитию реакций ПОЛ, чем BHT. И, наконец, в-третьих, в отличие от BHT, циквалон оказался способен

эффективно защищать эритроциты от накопления в них нефункциональной окисленной формы гемоглобина - метгемоглобина.

Анализ влияния сульфат меди в дозе 10 мг/ приводил к гибели 20% животных на первом дне, 50% на втором и 80% на третьем дне введения, поэтому проведение биохимических исследования было невозможно.

При интоксикации медью в дозе 5 мг/кг все крысы выжили. У них отмечено повышение концентрации меди(II) в печени, в мозге, в почках и в гемолизате эритроцитов. Одновременно обнаружено повышение продуктов перекисного окисления липидов (МДА) в плазме, и также проявление деструкции и дисфункции эритроцитарных мембран, как повышение сорбционной способности к метиленовому синему и повышение гемолиза эритроцитов.

Однако интоксикация медью (5 мг/кг) сопровождалась достоверной индукцией активности антиоксидантной системы, повышением активности антиоксидантных ферментов (ГП, КТ, СОД) в печени, в мозге и в почках и снижением активности церулоплазмина плазмы. Кроме того, отмечалось достоверное повышение общей антиоксидантной активности (АОА) в плазме животных и достоверное снижение АОА в печени.

Таким образом, установлено, что медь в субтоксической дозе вызывает повреждение клеточных мембран, и увеличивает концентрацию конечных продуктов ПОЛ. С другой стороны повышается активность антиоксидантных ферментов в тканях и эритроцитах. По-видимому, активация антиоксидантной системы не достаточна для ограничения ПОЛ что, требует дополнительного применения антиоксидантов.

Применение фенольного антиоксиданта циквалона (5 мг/кг) или купренила (100 мг/кг) при интоксикации медью в субтоксической дозе показало достоверное защитное действие.

Циквалон и купренил увеличивали активность антиоксидантной системы крыс, повышая активность антиоксидантных ферментов в изученных тканях (КТ, ГП, СОД, церулоплазмин) и уменьшая содержание конечных продуктов ПОЛ в плазме, уменьшая ССЭ крыс. Однако при этом циквалон проявлял мало выраженное действие на содержание меди, и, напротив, купренил снижал концентрацию меди в изученных тканях.

ВЫВОДЫ

1. На модели АБТС-тест установлено, что в диапазоне концентраций от 0,002 до 0,105 мМ BHT, циквалон и изоферуловая кислота способны ингибировать свободно-радикальное окисление АБТС. Антирадикальное действие изоферуловой кислоты было более слабым, чем BHT и циквалона.

2. В липосомальной модели циквалон в концентрациях до 10 мкМ по антиоксидантной активности не уступает BHT, в то время как феруловая и изоферуловая кислота в этих условиях проявляли прооксидантные свойства.

3. На модели медь-индуцированного гемолиза установлено, что циквалон и BHT способны эффективно ингибировать гемолиз эритроцитов лишь в ограниченном диапазоне концентраций: 0,002-0,02 мМ для циквалона и 0,02-0,2 мМ для BHT, с инверсией эффекта при повышении концентрации. При этом максимальный эффект был выше у циквалона.

4. Степень накопления ТБК-реактивных продуктов и образования метгемоглобина в образцах эритроцитов с BHT и циквалоном изменяются синфазно со степенью гемолиза. В концентрациях 0,1-0,2 мМ циквалон вызывал практически полное подавление образование метгемоглобина в клетках, в то время как максимальный защитный эффект BHT не превышал 50%.

5. При исследовании процесса ПОЛ и антиоксидантной системы на модели in vivo установлено, что сульфат меди(II) пентагидрат в дозе 5 мг/кг вызывает деструкцию и дисфункцию клеточных мембран:

· двукратно повышая сорбционную способность эритроцитов;

· пятикратно степень гемолиза эритроцитов;

· концентрацию конечных продуктов ПОЛ на 50%;

· повышает активность каталазы и глутатионпероксидазы в органах и тканях на 20 - 50 %.

· снижает антиокисдантную активность в печени до 10,5 % , но повышает ее до 60 % в плазме крови.

6. Циквалон в дозе 5 мг/кг индуцирует активность глутатионпероксидазы, каталазы, церулоплазмина и антиоксидантную активность тканей крыс, не влияя на сорбционную способность эритроцитов, содержание ТБК-реактивных продуктов и содержание меди в организме.

7. Купренил в дозе 100 мг/кг, наряду со специфическим снижением содержания ионов меди в тканях, индуцировал активность глутатионпероксидазы, каталазы, супероксиддисмутазы, церулоплазмина и общей антиоксидантной активности тканей крыс, и снижал сорбционную способность эритроцитов и содержание ТБК-реактивных продуктов.

8. Последовательное использование тестов трех различных уровней сложности (молекулярный, клеточный и организменный уровни организации), позволяет

· выявлять потенциальные антиоксиданты;

· находить диапазоны концентраций с антиоксидантным и прооксидантным эффектом

· оценивать целесообразность использования найденных веществ в качестве лекарственных препаратов.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Для скрининговой оценки эффективности антиоксидантного действия химических соединений, действующих на различные звенья процессов свободно-радикального окисления необходимо использовать тест-системы различного уровня сложности (молекулярного, клеточного и организменного уровня организации).

2. При доклиническом исследовании антиоксидантных веществ целеобразно определять диапазон концентрации, в которых они оказывают антиоксидантное и прооксидантное действие.

3. Циквалон является перспективным средством для применения при лечении интоксикации солями меди, а так же для терапии гемолитических кризов при болезни Вилсона-Коновалова.

СПИСОК ПЕЧАТНЫХ РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Диб Х. Влияние циквалона на процессы свободно-радикального окисления лецитина и АБТС / Х. Диб, И. Г. Суркова // Материалы научной конференции «Актуальные проблемы экспериментальной и клинической медицины» 62-й итоговой. ВолГМУ. - 2004. 19-23 апреля. -80 с.

2. Диб Х. Cu²⁺ индуцированный гемолиз эритроцитов как модель клеточного повреждения при эндотоксикозе / Х. Диб // Бюллетень Волгоградского научного центра РАМН. - 2005. Научно-практический, № 1. - С. 74-75.

3. Зайцев В.Г. Исследование модуляторов свободно-радикального окисления в модельных системах различного уровня сложности / В.Г. Зайцев, Х. Диб, И. Г. Суркова, О. В. Островский // Активные формы кислорода, оксид азот, антиоксиданты и здоровье человека. Российской национальной конференции с международным участием. Смоленск. 2005, 26-30 сентября. - С. 28-30.

4. Диб Х. Исследование антиоксидантных свойств циквалона на молекулярных и клеточных моделях / Х. Диб, И. Г. Суркова, М. А. Симонян, О. В. Островский и др // Активные формы кислорода, оксид азот, антиоксиданты и здоровье человека. Российской национальной конференции с международным участием. Смоленск, 2005. - С. 19-21.

5. Зайцев В.Г. Моделирование спонтанного и Cu²⁺-индуцируемого перекисного окисления липидов в незабуференной суспензии липосом / В.Г. Зайцев, Х. Диб, О. В. Островский // Вестник ВолГМУ. - 2006, №. 1.

6. Диб Х. Влияние циквалона и дибунола на гемолиз эритроцитов, индуцированного ионами меди и гидроперекисдом водорода / Х Диб, О.В Островский, В.Г Зайцев и др// Вестник. ВолГМУ. - 2005., №. 4. - С. 22-24.

7. Диб Х. Влияние ионов Cu ⁺² на активацию антиоксидантной системы белых беспородных крыс /Х. Диб // Материалы научной конференции «Актуальные проблемы экспериментальной медицины № 17» ВолГМУ. - 2005. 8-10 ноября. - С. 27-28.

8. Перфилова В.Н. Изучение мембрано-протекторного действия структурных аналогов ГАМК /В. Н. Перфилова, Х. Диб, С. А. Лебедова.// Материалы 4-ой международной конференции «Биологические основы индивидуальной чувствительности к психотропным средствам» д/о”Подмосковье”. 2006. 13-16 марта. - 59 с.

9. Синтез, антирадикальная и антиоксидантная активность производных 2,6-дибензилиденциклогексанона и дибунола / М.А. Симонян, Х. Диб, А.Н. Пашков и др// Хим.Фарм журнал (принято в печать).

СПИСОК УСЛОВНЫХ СОКРАЩЕНИЙ

АОС - антиоксидантная система

СРО - свободно-радикальное окисление

АОА - антиоксидантная активность

СРП - свободно-радикальный процесс

ПОЛ - перекисное окисление липидов

АО - антиоксидант

МДА - малоновый диальдегид

ДНФГ - 2,4-динитрофенилгидразин

ТБК-РВ - вещества, реагирующие с 2-тиобарбитуровой кислотой

АБТС - 2,2? -азино-бис-(3- этилбензтиазолин- 6-сульфоновая) кислота

ССЭ - сорбционная способность эритроцитов

ГП - глутатионпероксидаза

КТ - каталаза

СОД - супероксиддисмутаза

Размещено на Allbest.ru