Микробиологический и молекулярно-генетический мониторинг возбудителя чумы из природных очагов разного типа

Отмечены различия в кинетике и итоге взаимодействия с клеткой высоко вирулентных и менее вирулентных штаммов. Если слабовирулентные штаммы проявляли цитопатическое действие с активностью ТЦД₁₀₀ только при дозе 1^.10⁵ м.к., то высоковирулентные штаммы при заражающей дозе всего 1^.10² м.к.

Таким образом, модель клеток для создания тест-систем (с использованием монослоя клеток фибробластов цыплят) может быть использована для определения патогенности (уровня вирулентности) бактерий рода Yersinia в условиях бактериологических лабораторий in vitro.

Таблица 11 - Результаты испытания штаммов чумного микроба на модели культуры клеток (в процентах)

В результате проведенного мониторинга свойств штаммов чумного микроба нами разработана и внедрена схема, которая предусматривает применение классических микробиологических и молекулярно-генетических методов изучения.

Проводится скрининг фенотипических свойств штаммов традиционными микробиологическими методами и в результате отбираются штаммы типичные и атипичные по фенотипу. Для изучения свойств молекулярно-генетическими методами отбираются типичные штаммы от носителей и переносчиков (по одному штамму из каждого очага от каждого вида носителей и переносчиков). У этих штаммов изучается плазмидный профиль. В случае наличия всех трех плазмид (типичный плазмидный профиль) можно ограничиться исследованием в ПЦР на наличие только гена pFra. В случае отклонений в плазмидном профиле (отсутствие плазмид или наличие дополнительных плазмид) штаммы необходимо исследовать в мультилокусной ПЦР.

Несколько иной подход, по нашему мнению, должен применяться при изучении атипичных по фенотипу штаммов. Для полной характеристики все атипичные по фенотипу штаммы следует исследовать по развернутой методике. Эти штаммы подлежат и изучению методами протеинового профиля и Вестерн блота, позволяющие выявить возможные особенности протеинограмм и подтвердить наличие (отсутствие) F1. Штаммы также изучаются методами плазмидного профиля, и у исследователей появляется возможность сопоставления данных, полученных по вирулентности штаммов с плазмидным составом. И далее штаммы необходимо изучить в мультилокусной ПЦР с использованием трех пар праймеров в одной реакционной смеси для определения генов, локализованных на трех собственных плазмидах возбудителя чумы. Это увеличивает вероятность выявления штаммов, дефектных по каким-то плазмидам, повышая надежность и информативность исследований (рисунок 19).

Рисунок 19 - Схема изучения штаммов Y. pestis

Не вызывает сомнения необходимость проведения комплексного изучения штаммов стандартными и молекулярно-генетическими методами при эпидемиологических проявлениях чумы. Молекулярные методы диагностики микроорганизмов способны не только помочь проследить эпидемическую цепочку, но и решать общие задачи микробиологии, эпидемиологии и эволюции чумного микроба. Они не являются заменой традиционных микробиологических методик, а их существенным и необходимым дополнением.

Особую важность эти методы приобретают для быстрой диагностики в случаях актов биотерроризма и для определения происхождения возбудителя, так как позволяют дифференцировать генетические изменения в ДНК клеток, а при сопоставлении свойств, определить источник. Кроме того, применение молекулярных методов в комплексной системе мониторинга свойств штаммов чумного микроба - инструмент, который может использоваться для получения информации об этиологическом агенте, которая не может быть получена традиционными методами. Когда стандартные микробиологические методы будут не в состоянии изолировать жизнеспособную клетку, молекулярные тесты могут быть единственно способными подтвердить присутствие Y. pestis.

Комплексное изучение свойств штаммов Y. pestis, включающее классические микробиологические и молекулярно-генетические методы исследования, позволяет проводить полное эпидемиологическое слежение за распространенностью различных вариантов возбудителя чумы в природных очагах чумы, получая дополнительные характеристики свойств или обнаружить признаки, отличающие штаммы не только из разных очагов чумы, но и внутри одного очага.

Быстрота выполнения (5 - 6 часов) и высокая чувствительность ПЦР позволяют рекомендовать ее использование для прямого обнаружения Y. pestis в материале, используемом при лабораторном анализе на чуму (кровь, ткани, органы, блохи и др.).

В своей работе мы использовали молекулярно-генетические методы детекции чумного микроба в исследовании полевого материала. Для обнаружения возбудителя чумы методом использовали ПЦР тест-системы на основе одновременной амплификации генов плазмидной локализации caf1 гена (pFra), pla гена (pPst) и yop A гена (pCad).

При исследовании эмульсий органов грызунов из Северо-Приаральского автономного очага чумы методом ПЦР были обнаружены специфические для чумного микроба гены: c праймерами EC9-EC11; Pst3-Pst5; Rep1-Rep2; F1-1-F1-2 (рисунок 20).

Размещено на http://www.allbest.ru/

1 - молекулярный маркер; 2, 3 - отрицательные пробы; 4 - отрицательный контроль; 5 - положительный контроль; 6 - Y. pestis EV; 7 - Y. pseudotuberculosis; 8 -12 - положительные пробы

а - фрагмент c праймерами EC9-EC11; b - фрагмент с праймерами Pst3-Pst5; c - фрагмент c праймерами Rep1-Rep2; d - фрагмент c праймерами F1-1-F1-2

Рисунок 20 - Результаты ПЦР с эмульсиями органов большой песчанки из Северо-Приаральского автономного очага чумы

Полученные данные результатов ПЦР совпали с результатами эпизоотологического обследования данной территории, на которой были выделены культуры чумного микроба от большой песчанки.

Кроме того, методом ПЦР в пробе гамазовых клещей, снятых с очеса краснохвостой песчанки был получен положительный результат с праймерами PlaY1-PlaY2 при отрицательных результатах стандартных методов исследования (рисунок 21).

Размещено на http://www.allbest.ru/

1 - молекулярный маркер; 2-5; 6 - положительная проба эктопаразитов, 7-10 - отрицательные пробы эктопаразитов; 6-положительная проба эктопаразитов; 11 - положительный контроль; 12 - отрицательный контроль; а - фрагмент c праймерами PlaY1-PlaY2; b - фрагмент с праймерами F21-F22

Рисунок 21 - Результаты исследования методом ПЦР проб эктопаразитов на чуму в 2004 году в Северо-Приаральском автономном очаге

Применение ПЦР отражено в соответствующих приказах и инструкциях МЗ РК только при исследовании материала от больного на чуму. Полученные нами результаты позволяют рекомендовать скрининговые ПЦР исследования групповых эмульсий органов грызунов и эктопаразитов на новых территориях, что позволит получить в короткие сроки и с высокой чувствительностью и специфичностью предварительные данные о наличии (отсутствии) ДНК возбудителя чумы в пробах.

В случае положительных находок на эпидемически опасных территориях (наличие постоянного или временного населения, промышленное освоение территории) следует провести лабораторное исследование по традиционной схеме с применением стандартных методов диагностики для определения границ эпизоотии чумы и ее интенсивности.

Для целей микробиологического мониторинга Y. pestis с использованием ГИС-технологии нами создана электронная база данных по атипичным штаммам чумного микроба и созданы электронные карты территориального распределения атипичных по фенотипическим и генотипическим признакам штаммов чумного микроба. На рисунке 22 представлено территориальное распределение штаммов Y.pestis по результатам изучения плазмидного профиля в природных очагах чумы Республики Казахстан.

Рисунок 22 - Результаты изучения плазмидного профиля штаммов Y.pestis

Проведенные исследования позволяют сделать следующие выводы:

1. Штаммы чумного микроба, циркулирующие на территории Казахстана, в основном, имеют типичные свойства:

- в 1,2+0,01% случаев выделяются штаммы с измененными биохимическими свойствами по признаку ферментации сахарозы, глицерина, арабинозы, мальтозы, денитрифицирующей активности и пестициногенности. Как правило, выделение этих штаммов имеет нерегулярный характер;

- появление штаммов с измененной зависимостью в аминокислотах носит случайный характер, за исключением стабильного выделения на территории Прибалхашского автономного очага чумы вирулентных штаммов, зависимых от аргинина (20,5±1,8%);

- резистентных к антибиотикам штаммов не обнаружено. Изучение чувствительности штаммов различными методами дало сопоставимые результаты.

2. Выявлены особенности молекулярно-генетических характеристик штаммов Y. pestis, циркулирующих в природных очагах чумы Казахстана:

- доказана эффективность использования протеинового профиля и иммунохимических свойств основного белка капсульного антигена F1 для дифференциации штаммов иерсиний разных видов. Отмечена стабильность протеинового состава клеточных мембран вне зависимости от температурного режима и состава сред культивирования чумного микроба. Получен референс-спектр мембранных белков штаммов Y. pestis;

- скрининг штаммов Y. pestis показал преобладание типичного плазмидного профиля (110 kb, 70 kb, 9,5 kb), характерного для 93,6% штаммов. Создан каталог и коллекция штаммов Y. pestis с различным плазмидным профилем;

- использование ПЦР и мультилокусной ПЦР с высокой специфичностью позволяет идентифицировать атипичные штаммы возбудителя чумы и повышает информативность лабораторных исследований при характеристике популяций чумного микроба;

- электрофоретическая картина атипичных штаммов, исследованных методом ГЭИП, не идентична и отличается от электрофореграмм типичных казахстанских и эталонных американских штаммов чумного микроба;

- с помощью VNTR-анализа определены генотипы штаммов Y. pestis, построена дендрограмма генетических взаимоотношений штаммов и выделены 7 кластерных групп.

3. В очагах чумы Казахстана циркулируют высоковирулентные штаммы чумного микроба. Детерминанты вирулентности штаммов характеризуются стабильностью и не имеют достоверных различий в разных очагах чумы республики Казахстан. Наиболее вирулентные штаммы циркулируют в разгар эпизоотий.

Определение цитотоксического действия на монослой фибробластов цыплят, как модели для определения вирулентности штаммов Y. pestis, является альтернативой методам исследования вирулентности и токсигенности чумного микроба на модели лабораторных животных.

4. В 2,9±0,01% случаев из культур чумного микроба были выделены бактериофаги. Наибольшее число штаммов бактериофагов выделено в 1999-2008 гг. Штаммы бактериофагов, отличались степенью литической активности и специфичности. Исследование штаммов бактериофагов в ПЦР в 94,6+5,7% показало их гомологичность. Собранная коллекция бактериофагов в перспективе может быть использована при поиске более чувствительного и специфичного диагностического фага для серийного производства.

5. Разработана комплексная схема идентификации и молекулярного типирования штаммов Y. pestis, включающая классические микробиологические и молекулярно-генетические методы исследований, позволяющая:

- проводить полное эпидемиологическое слежение за распространенностью различных вариантов возбудителя чумы в природных очагах;

- дифференцировать штаммы не только из разных очагов чумы, но и внутри одного очага.

6. Предложена тактика применения скрининговых ПЦР исследований при эпизоотологическом исследовании на чуму.

7. На основе ГИС-технологии создана электронная база данных по атипичным штаммам чумного микроба и электронные карты их территориального распределения по фенотипическим и генотипическим признакам. Созданная база данных и использование ГИС позволяют:

- проводить сравнительные исследования свойств штаммов с целью регистрации новых штаммов и наблюдать за их распространением;

- накапливать и анализировать информацию о выделенных штаммах чумного микроба, оперативно находить нужные сведения и отображать их в удобном для использования виде;

- акцентировать внимание на тех участках, где выделяются наиболее эпидемически значимые (вирулентные) штаммы чумного микроба, что позволит своевременно и адекватно планировать проведение профилактических противоэпидемических мероприятий;

- изменить тактику лабораторной диагностики, повысить ее эффективность, что будет способствовать повышению эффективности профилактики чумы.

Практические рекомендации

1. Модифицированный метод ускоренного определения антибиотикочувствительности к химиопрепаратам в твердых питательных средах с глюкозой и индикатором бромтимоловым синим (В. И. Илюхин с соавт., 2007) рекомендуем для предварительного выбора антибактериальных препаратов для лечения чумы с последующей коррекцией по результатам исследования антибиотикограммы стандартными методами.

2. Рекомендуем HiComb™ MIC Test (ХайКомб МИК тест) для определения МИК штаммов чумного микроба в качестве стандартизованного экспресс-метода.

3. Определение цитотоксического действия на монослой фибробластов цыплят штаммов Y. pestis, как альтернативную модель методам исследования вирулентности и токсигенности чумного микроба.

4. Рекомендуем комплексную схему идентификации и молекулярного типирования штаммов Y. pestis, включающую стандартные микробиологические и молекулярно-генетические методы исследований.

5. При эпизоотологическом обследовании на чуму скрининговые ПЦР исследования групповых эмульсий органов грызунов и эктопаразитов.

6. Рекомендуем использование созданной электронной база данных по штаммам чумного микроба и электронных карт для накопления, анализа информации о выделенных штаммах чумного микроба, их пространственного распределения для эпидемиологического надзора при чуме.

Список опубликованных работ по теме диссертации

1 Овчаров В.И., Функ В.Г., Мека-Меченко Т.В., Картушин Е.П. Обнаружение пилей-адгезии у штаммов чумного микроба, выделенных на территории деятельности Араломорской противочумной станции в 1983 году //Матер. XII Межресп. конф. противочум. учрежд. Ср.Азии и Казахстана по проф. чумы. - Алма-Ата, 1985. - С. 28-29.

2 Степанов В.М., Функ В.Г., Мека-Меченко Т.В. Некоторые итоги изучения потребностей в факторах роста штаммов возбудителя чумы, выделенных в 1983-1986 гг. в автономных очагах, обследуемых Араломорской противочумной станцией //Биотехн., иммунол. и биохим. особо опасных инфекций. - Саратов, 1989. - С.113-117.

3 Функ В.Г., Мека-Меченко Т.В., Степанов В.М. Изучение чувствительности больших песчанок из Приаральско-Каракумского автономного очага при заражении штаммами возбудителя чумы с различными свойствами //Матер. III Всесоюзн. совещ. по большой песчанке. - Ташкент, 1989. - С.276-277.

4 Функ В.Г., Мека-Меченко Т.В., Степанов В.М. Характеристика бактериемии у больших песчанок, зараженных штаммами чумного микроба с разными свойствами // Матер. III Всесоюзн. совещ. по большой песчанке. - Ташкент, 1989. - С.277-280.

5 Степанов В.М., Некрасова Л.Е., Баканурская Т.Л., Темиралиева Г.А., Мека-Меченко Т.В. О выделении гладкого штамма чумного микроба в очаге чумы //Матер. межгосудар. научн. конф. "Проф. и меры борьбы с чумой", посвящ. 100-летию откр. возбуд. чумы. - Алматы, 1994. - С. 188-189.

6 Баканурская Т.Л., Некрасова Л.Е., Мека-Меченко Т.В., Красюков В.Ф. К изучению штаммов чумного микроба, выделенных в очагах чумы Приаралья в 19993 г. //Материалы научной конференции "Экологические аспекты эпизоотологии и эпидемиологии чумы и других особо опасных инфекций". - Алматы, 1996. - С.37.

7 Мека-Меченко Т.В., Некрасова Л.Е., Красюков В.Ф. Биологические свойства штаммов чумного микроба, выделенных на некоторых участках Среднеазиатского пустынного очага //Материалы научной конференции "Экологические аспекты эпизоотологии и эпидемиологии чумы и других особо опасных инфекций". - Алматы, 1996. - С.52.

8 Карпов А.А., Поле С.Б., Айкимбаев А.М., Мека-Меченко Т.В., Соколов П.Н., Стручкова Э.Н., Макушин Г.И. Обследование потенциально очаговых территорий и мониторинг пространственной структуры природного очага - как элемент совершенствования эпиднадзора по чуме //Материалы научной конференции, посвященной 100-летию образования противочумной службы России. - Саратов, 1997. - Том I, С.57.

9 Некрасова Л.Е., Степанов В.М., Бурделов С.А., Айкимбаев А.М., Мека-Меченко Т.В., Безрукова Л.С., Дерновая В.Ф., Цепко И.Н., Мека-Меченко В.Г., Радченко Г.А. Некоторые закономерности существования очагов чумы с другими природно-очаговыми инфекциями //Материалы научной конференции, посвященной 100-летию образования противочумной службы России. - Саратов, 1997. - Том I. - С.113-114.

10 Айкимбаев А.М., Карпов А.А., Поле С.Б., Агеев В.С., Мека-Меченко Т.В. Мониторинг природных очагов чумы Казахстана в условиях ограниченного финансирования // I (IV) съезд врачей Казахстана. - Алматы, 1997. - С.311.

11 Nekrassova L.E., Aikimbayev A.M., Meka-Mechenko T.V. Ectoparasites of Synantropic and Wild Rodents as Possible Carriers of Microbes Pathogenes to Man // III International Symposium on Fleas. - China, 1997. - P.13-14.

12 Atshabar B., Suleimenov B. M., Tugambaev T.I., Meka-Mechenko T.V., Nekrassova L.E. Natural Variability of Yersinia pestis //Nederlands Tijdschrift Voor, Medische Microbiologie, 7^th Internat. Congr. on Yersinia, Nijmegen, June 14-16, 1998, Congr. venue «Erica», Berg. en Dal, - Suppl. II. - Vol. 6.- Р.29.

13 Atshabar B.B., Suleimenov B.M., Tugambaev T.I., Meka-Mechenko T.V., Nekrasova L.E. Mechanism for Formation Population Level of Virulence of Yersinia pestis //Nederlands Tijdschrift Voor, Medische Microbiologie, 7^th Internat. Congr. on Yersinia, Nijmegen, June 14-16, 1998, Congr. venue «Erica», Berg. en Dal. - Suppl. II. - Vol. 6. - Р. 32.

14 Atshabar B.B., Suleimenov B.M., Tugambaev T.I., Meka-Mechenko T.V., Nekrasova L.E. Natural Plague Focus as Ecological System //Nederlands Tijdschrift Voor, Medische Microbiologie, 7^th Internat. Congr. on Yersinia, Nijmegen, June 14-16, 1998, Congr. venue «Erica», Berg. en Dal. - Suppl. II. - Vol. 6. - Р.32.

15 Некрасова Л.Е., Мека-Меченко Т.В., Атшабар Б.Б., Дерновая В.Ф., Тугамбаев Т. И. Изучение вирулентности иерсиний на биологических моделях //Сборник научной конференции Учреждений по борьбе и изучению природно-очаговых инфекций. - Улан-Батор, Монголия, 1999. - С.262-263.

16 Атшабар Б. Б., Айкимбаев А.М., Аубакиров С.А., Сулейменов Б.М., Бекенов Ж.Е., Кошенов У.А., Калжан К.К., Есмагамбетов Ж.О., Классовский Н.Л., Мека-Меченко Т.В., Некрасова Л.Е. Эпизоотологические и социальные предпосылки заболеваний чумой людей в 1999 г. в Казахстане и их клинико-эпидемиологические характеристики // Пробл. ООИ. - Саратов, 2000. - С.14-21.

17 Engelthaler D. M., Chu May С., Yockey B. M., Arakelyan I., Meka-Mechenko T., Carter L. G. Analysis of plague case-related Yersinia pestis isolates using multiplex PCR, plasmid profiling and pulsed-field gel electrophoresis //International Conference on Emerging Infectious Diseases Satellite scientific Meeting of the World Health Organization Collaborating Centers for Plague Research and Reference. - Atlanta Georgia, USA, 2000. - № 40. - Р. 70.

18 A. Aikimbaev, B. Atshabar, S. Aubakirov, B. Suleimenov, T. Meka-Mechenko, G. Stybayeva, L. Nekrassova Plague strain infectivity in Kazakhstan // The 44^th Annual Biological Safety Conference. - New Orleans, 2001. - P. 52.

19 Некрасова Л.Е., Темиралиева Г.А., Т.В. Мека-Меченко и др. Руководство по изучению штаммов чумного микроба. - Алматы,2001. - 39 с.

20 Сулейменов Б.М., Мека-Меченко Т.В., Кошенов У.А. и др. Ангинозно-бубонная форма чумы //Карантинные и зоонозные инфекции в Казахстане. - Алматы, 2001. - В 4. - С. 233.

21 Мека-Меченко Т.В., Некрасова Л.Е., Айманова О.Я., Аракелян И.С., Стыбаева Г.С., Атшабар Б.Б., Сулейменов Б.М., Тугамбаев Т.И. Первый опыт совместной работы специалистов Казахского научного центра карантинных и зоонозных инфекций им. М.Айкимбаева и лаборатории CDC (Форт Коллинз, США) //Вторая Международная научно-практическая конференция по взаимодействию стран-участников СНГ в области санитарной охраны территорий. - Алматы, 2001. - С.149-150.

22 Мека-Меченко Т.В., Стыбаева Г.С., Некрасова Л.Е., Аракелян И.С., Атшабар Б.Б., Результаты совместного изучения штаммов чумного микроба методами классической микробиологической диагностики и молекулярной эпидемиологии //Вторая Международная научно-практическая конференция по взаимодействию стран-участников СНГ в области санитарной охраны территорий. - Алматы, 2001.- С.150-152.

23 Meka-Mechenko T.V. Molecular Characteristic of natural S-forms of Yersinia pestis //8 ^th International Symposium on Yersinia. - Turku, Finland, 2002. - Р. 69-70.

24 Meka-Mechenko T.V. F1 negative Y.pestis strains //8^th International Symposium on Yersinia. - Turku, Finland, 2002. - Р. 84.

25 Meka-Mechenko T. V., Stubaeva G. S., Arakelyan I. S., Nekrassova L.E., Atshabar B. B. Study of plasmid profile of Y.pestis strains from the natural plague foci in Kazakhstan //8^th International Symposium on Yersinia.- Turku, Finland, 2002. - Р. 85.

26 Meka-Mechenko T. V. Comparison of pigmentsorbtion ability of Y.pestis strains and virulence in laboratory animals //8^th International Symposium on Yersinia. - Turku, Finland, 2002. - Р. 85.

27 Meka-Mechenko T.V., Nekrassova L.E., Atshabar B.B. Virulense of Y.pestis strains and of other Yersinia //8^th International Symposium on Yersinia. - Turku, Finland, 2002. - Р. 85.

28 Meka-Mechenko T. V., Stubaeva G.S., Atshabar B.B., Arakelyan I.S., Nekrassova L.E. Indentification of Yersinia pestis strains witch atypical plasmid profile using multiplex PCR assay //8^th International Symposium on Yersinia. - Turku, Finland, 2002. - Р. 85-86.

29 Meka-Mechenko T.V., Nekrassova L.E., Atshabar B.B. Biochemical properties and nutritional requirements of Y.pestis isolated from the different plague foci in Kazakhstan in 2002 //8^thInternational Symposium on Yersinia. - Turku, Finland, 2002. - Р. 109.

30 Meka-Mechenko T.V., Atshabar B.B., Aikimbayev A.M., Nekrassova L.E., Zakaryan S.B. System of Safety at field epizootological inspections of territory of the natural plague of Kazakhstan //45^th Annual Biological Safety Conf. - San Francisco, 2002. - Р. 65.

31 Nekrassov V.V., Atshabar B.B., Meka-Mechenko T.V., Nekrassova L.E., Begimbaeva E.B. Designing Database of especially dangerous microorganisms in M.Aikimbayev's Kazakh Scientific Center for Quarantine and Zoonotic Diseases. //45 ^th Annual Biological Safety Conf. - San Francisco, 2002. - Р. 51.

32 Meka-Mechenko T.V., Temiraliyeva G.A., Aikimbayev A.M., Tuganbayev T.I., Zakaryan S.B. Cell Line L-41 as Alternative Model for Medical Biological Researches in Case of Plague //7^th National Symposium on Biosafety. - Atlanta, 2002. - Р. 175.

33 Larissa E. Nekrassova, Bakyt B. Atshabar, Tatyana V. Meka-Mechenko, Bakhtiyar M. Suleimenov, Gulnara A. Temiraliyeva The Experience of Wild Rodens Using in Experiments on Plague in Kazakhstan //7^th National Symposium on Biosafety. -Atlanta, 2002. - Р. 115.

34 Некрасова Л.Е., Мека-Меченко Т.В., Темиралиева Г.А., Айманова О.Я. Совершенствование биологической безопасности и учета особо опасных патогенов в Казахском научном центре карантинных и зоонозных инфекций им. М. Айкимбаева //Материалы 4 Международной научно-практической конференции государств-участников СНГ «Современные технологии в диагностике особо опасных болезней». - Саратов, 2003. - С.112-113.

35 Stybaeyva G., Atshabar B., Meka-Mechenko T., Arakelyan I.S. Pesticin production and pesticin susceptibility of Y. pestis strains isolated in plague foci of Kazakhstan //58^th International Conference Diseases Nature Communicable to Man. - Northen Arizona, USA, 2003. - Р. 155.

36 Атшабар Б.Б., Мека-Меченко Т.В., Стыбаева Г.С., Айкимбаев А.М., Сулейменов Б.М., Закарян С.Б., Аракелян И.С., Жансарина А.Г., Карпук Н.В. Методы молекулярной эпидемиологии в диагностике чумного микроба //Медицина. - 2003. - № 5. - С. 75 - 78.

37 Aikimbayev A., Meka-Mechenko T., Temiralieya G., Bekenov J., Sagiyev Z., Kaljan K., Mukhambetova A. Plague peculiarities in Kazakhstan at present //XVI Polish Conference on Epidemiology. - Bialostok, Poland, 2003. - P.262-263.

38 Antolin M., Atshabar B., Chu M., Gage K., Lowell J., Meka-Mechenko T., Stanley M., Urich S. Phylogeographic and Epidemiologic Comparisons of Yersinia pestis Isolates Using a Variable-Number Tandem Repeat Method //American Society for Microbiology, General Meeting. - Washington, 2003. - Р. 1015.

39 Сагымбек У.А., Айкимбаев А.М., Мека-Меченко Т.В., Рапопорт Л.П. Избранные вопросы эпизоотологии на примере Мойынкумского автономного очага. - Алматы, 2003. - 203 с.

40 Meka-Mechenko T. F 1 negative natural Y. pestis strains // Plenum Publishers. - Turku, Finland, 2003. - P. 330-331.

41 Мека-Меченко Т. В. Свойства штаммов чумного микроба, выделенных в различные годы на территории природных очагов чумы Республики Казахстан //Гигиена, эпидемиология и иммунобиология. - Алматы, 2004. - Вып. 1-2. - С. 145-151.

42 Мека-Меченко Т. В. Изучение вирулентности возбудителя чумы на модели лабораторных животных и на культуре клеток тканей //Здоровье и болезнь.- Алматы, 2004. - Вып.1.- С. 76-80.

43 Мека-Меченко Т. В. Характеристика штаммов Y. pestis из Среднеазиатского пустынного очага чумы //Вестник сельскохозяйственной науки Казахстан. - Алматы, 2004. - Вып. - 5. - С.62-64.

44 Атшабар Б.Б., Мека-Меченко Т.В., Некрасова Л.Е. и др. Биоценотическое взаимодействие популяций носителя и возбудителя чумы в природных очагах. - Алматы, 2004. - 136 с.

45 Мека-Меченко Т.В., Сапожников В.И., Некрасова Л.Е., Ковалева Г.Г.Биологические свойства штаммов Y. pestis из Прибалхашского автономного очага чумы, выделенных в 2002 г. // Здоровье и болезнь.- Алматы, 2004. - Вып.6. - С. 83-84.

46 Мека-Меченко Т. В. Плазмидный профиль штаммов чумного микроба из некоторых природных очагов чумы Казахстана //Вестник Казахского государственного медицинского университета. - Алматы, 2004. - Вып. 4 (26). - С.18-22.

47 Мека-Меченко Т. В. Молекулярные методы в диагностике чумы //Карантинные и зоонозные инфекции в Казахстане. - Алматы, 2004. - Вып. № 2(10). - с.71-73.

48 Мека-Меченко Т. В., Некрасова Л. Е., Бегимбаева Э. Ж., Ковалева Г. Г., Уалиева Г. К., Силантьев В. В. Мониторинг вирулентности популяций штаммов чумного микроба, циркулирующих в природных очагах чумы Казахстана // Медицина. - Алматы, 2005. - № 10. - С.76-78.

49 Мека-Меченко Т. В., Некрасова Л. Е., Уалиева Г. К., Бегимбаева Э. Ж. Свойства штаммов Y. pestis из Зааральского автономного очага чумы» // Вестник сельскохозяйственной науки. - Алматы, 2005. - № 12. - С.59-60.

50 Meka-Mechenko T. V., Nekrassova L. E., Ualiyeva G. K., Begimbaeva E. Zh. Properties of Y. pestis strains from Zaaral Autonomous plague focus // The collection of scientific conference of Establishments on struggle and studying of nature-foci infections. - Ulan Bator, Mongolia, 2005. - P.262-263.

51 Мека-Меченко Т. В., Атшабар Б. Б. Методы молекулярной диагностики чумы //Материалы Международной научно-практической конференции «Геномные технологии в медицине и медицинское образование на рубеже веков. - Алматы, 2006. - С.76-78.

52 Мека-Меченко Т. В. Значение современных методов лабораторной диагностики инфекционных болезней //Материалы III съезда врачей и провизоров Казахстана «Конкурентоспособному Казахстану - здоровую нацию». - Астана, 2007. - Т. II. - С. 160-161.

53 Мека-Меченко Т. В. Методы лабораторной диагностики особо опасных инфекций // Сб. трудов I международной научно-практической конференции «Актуальные аспекты клинической микробиологии. Проблемы дисбактериоза». - Алматы, 2007. - С. 51-52.

54 Meka-Mechenko T., Tashmetov R., Atshabar B., Nekrassova L. The analysis Y. pestis strains from Kazakhstan and USA by PFGE method //17th European Congress of Clinical Microbiology and Infectious Diseases. - Munich, Germany, 2007. - P. 1850.

55 Nekrassova L., Meka-Mechenko T., Aikimbayev A., Temiraliyeva G. Antibiotic susceptibility of Yersinia strains in Kazakhstan //17th European Congress of C.linical Microbiology and Infectious Diseases. - Munich, Germany, 2007 - P. 51.

56 Мека-Меченко Т. В. Чувствительность к антибиотикам штаммов чумного микроба // Гигиена, эпидемиология и иммунология. - 2007. - № 4(34). - С. 74-79.

57 Мека-Меченко Т. В. Сравнительный анализ генетических характеристик штаммов чумного микроба //Гигиена, эпидемиология и иммунология, 2008. - № 1. - С. 58-64.

58 Meka-Mechenko T. V. Application of pulse-field gel elecrophoresis method for analysis plague strains (Y.pestis) //Zoonotic infectious diseases and tourism, Ulanbaatar, 2009. - № 17. - P.122 - 131.

59 Nekrassova L.E., Meka-Mechenko T.V., Isayeva S.B., Atshabar B. B., Ualiyeva G. K. Estimation of results of microbiological monitoring for population of plague microbe in the Pre-Aral-Karakum plague autonomous focus at height of epizooty of epizooty // Zoonotic infectious diseases and tourism. - Ulanbaatar, 2009. - № 17. - P. 147 - 154.

60 Meka-MechenkoT., Nekrassova L., Temiraliyeva G., Atshabar B., Kovaleva G. Antibiotic susceptibilities of 90 isolates of Yersinia pestis to 14 antimicrobial agents //19th European Congress of Clinical Microbiology and Infectious Diseases.- Helsinki, Finland, 2009. - P 1386.

61 Nekrassova L.E., Meka-Mechenko T.V., Isayeva S.B., Atshabar B. B., Ualiyeva G. K. Estimation of results of microbiological monitoring for population of plague microbe in the Pre-Aral-Karakum plague autonomous focus at height of epizooty of epizooty //Zoonotic infectious diseases and tourism.- Ulanbaatar, 2009. - Number 17. - P. 147 - 154.

62 Темиралиева Г. А., Мека-Меченко Т. В., Некрасова Л. Е., Избанова У. У. Эффективность различных методов определения антибиотикочувствительности //Материалы первой ежегодной конференции Ассоциации Биологической Безопасности Центральной Азии и Кавказа. - Алматы, 2009. - С. 69 -70.

63 Мека-Меченко Т. В., Некрасова Л. Е., Бегимбаева Э. Ж. Микробиологический мониторинг свойств штаммов чумного микроба, выделенных в очагах чумы Казахстана в 1998 -2000 гг. //Материалы первой ежегодной конференции Ассоциации Биологической Безопасности Центральной Азии и Кавказа. - Алматы, 2009. - С. 60.

64 Мека-Меченко Т. В., Стыбаева Г. С., Аракелян И. С. Некоторые результаты исследования штаммов Y. pestis из природных очагов чумы Казахстана методом полимеразной цепной реакции //Материалы первой ежегодной конференции Ассоциации Биологической Безопасности Центральной Азии и Кавказа. - Алматы, 2009. - С. 60- 61.

65 Meka-Mechenko T.V., Nekrassova L.E., Atshabar B. B., Deryabin P. N., Begimbayeva E. Zh, Shishkina T. S., Issaeyva S. B., Sarsebayeva B. T., Klimkova K. N., Chursina L. D., Belyak L. G. Results of complex study of properties Yersinia pestis strains isolatwed in 2008 in some plague foci of Kazakhstan // Current issues on zoonotic diseases.- Ulanbaatar, 2010. - Number 18. - P. 231 - 235.

Методические материалы

66 Некрасова Л.Е., Темиралиева Г.А., Мека-Меченко Т.В. и др. Руководство по изучению штаммов чумного микроба. - Алматы, 2001. - 39 с.

67 Некрасова Л. Е., Мека-Меченко Т. В., Бегимбаева Э. Ж. и др. Оптимальные средства и методы работы коллекций возбудителя чумы в противочумных учреждениях Республики Казахстан. Астана. - 2009. - 37с.

Изобретения

1 Патент РК № 34575. Штамм чумного микроба Yersinia pestis КА-7, используемый в качестве тест-объекта для генетических и микробиологических исследований Мека-Меченко Т. В., Некрасова Л. Е., Атшабар Б. Б. и др.; опубл.18.07.02.

2 Патент РК № 34567. Штамм чумного микроба Yersinia pestis КА-36, используемый в качестве тест-объекта для изучения внехромосомных элементов наследственности возбудителя чумы Мека-Меченко Т. В., Аракелян И. С., Атшабар Б. Б.; опубл.18.07.02.

Размещено на Allbest.ru