Размещено на http://www.allbest.ru/

Размещено на http://www.allbest.ru/

Реакции нуклеофильного замещения катехина и его производных

Содержание

• Введение
• Глава 1. Катехин и его производные как один из уникальных флавоноидов (литературный обзор)
• 1.1 Катехин и дигидрокверцетин (общая характеристика)
• 1.2 Триалкилсилильные защиты гидроксильных групп молекул флавоноидов
• 1.3 Катехин и дигидрокверцетин в реакциях ацилирования
• 1.3.1 Взаимодействие с ангидридами карбоновых кислот
• 1.3.2 Взаимодействие с хлорангидридами карбоновых кислот
• 1.3.3 Взаимодействие с карбоновыми кислотами
• 1.4 Катехин и дигидрокверцетин в реакциях фосфорилирования
• 1.4.1 Фосфорилирование реагентами трёхвалентного фосфора
• 1.4.2 Фосфорилирование реагентами пятивалентного фосфора
• 1.5 Катехин и дигидрокверцетин в реакциях силилирования
• Глава 2. Получение гидрфосфорильных производных катехина (обсуждение результатов)
• Глава 3. Экспериментальная часть
• Выводы
• Список литературы
• Приложения

Введение

Биофлавоноиды широко используются при получении витаминов, биологически активных добавок и некоторых фармакологических препаратов. К ним относят как химически чистые вещества и комплексы веществ, так и настойки, эликсиры, бальзамы и др. Одним из важнейших классов действующих соединений, содержащихся в лекарственном растительном сырье, являются флавоноиды.

Довольно высокий интерес к флавоноидам объяснён за счёт их сильной антиоксидантной активности. Также, стоит отметить, их биоразлагаемость, относительную доступность и не токсичность.

К сожалению, разнообразие функциональности флавоноидов всё ещё является затруднённой из-за индивидуальности их конструкции в практическом отношении задачей, которые удачно решаются лишь для определённых примеров.

К настоящему времени изучены очень многие производные флавоноидов, которые включают в себя различные группы атомов, такие как фосфорные, кремниевые производные и другие, которые уже зарекомендовали себя как очень сильные биологически активные соединения, способные, например, быть противораковыми препаратами, радиопротекторами, антивирусными препаратами, и поэтому интересно продолжать изучение этой тематики и получать новые модифицированные производные флавоноидов.

Целью данной работы являлось изучение химического поведения катехина и его производных в реакциях нуклеофильного замещения.

Дипломная работа изложена в трёх главах. В первой главе представлен обзор литературных источников по методам синтеза ацильных и фосфорсодержащих производных флавоноидов. Также кратко изложены работы по силилированию флавоноидов.

Вторая глава дипломной работы посвящена обсуждению результатов получения гидрофосфорильных производных катехина. В ней рассматриваются особенности этих процессов, строения полученных соединений, доказываемого на основе данных спектроскопии ЯМР ³¹P, ¹H и ¹³ C.

Третья глава содержит описание методик проведения экспериментов и полных спектральных характеристик всех синтезированный соединений, а также данные элементного анализа.

Глава 1. Катехин и его производные как один из уникальных флавоноидов (литературный обзор)

1.1 Катехин и дигидрокверцетин (общая характеристика)

Термин «флавоноиды», как правило, применяется для описания объёмного класса природных соединений, которые включают в себя C6-C3-C6 углеродный фрагмент. На сегодняшний день отожествлено и получено более 6500 флавоноидных соединений [1]. Проанализировав литературные источники, можно сделать вывод о том, что уже существует богатый фактический материал по их лекарственным и биологически активным свойствам. Флавоноиды обладают низкой токсичностью [2-4], представляют широкий спектр противоаллергической [5,6], антибактериальной [7,8], антиоксидантной [9-11], противоопухолевой [12-16] и противовоспалительной [17-19] активности, поэтому активно применяются в медицине [20,21], пищевой индустрии [22,23] и др.

Постоянное изучение о строении природных флавоноидов долгие годы проводили польские химики. Масштабную работу по исследованию антоцианов проводил Р.М. Вильштеттер. Изучением катехинов занимались А.Л. Курсанов, М.Н. Запраметов, К. Фрейденберг [24].

В 1936 г.Альберт де Сен-Дьёри, который является лауреатом Нобелевской премии по физиологии и медицине, издал первую работу, которая была приурочена возможной биологической значимости флавоноидов для людей.

В этой работе он высказал своё наблюдение, что полученный из венгерского красного перца флавоноид, очевидно, оказывает содействие укреплению ломких стенок кровеносных сосудов.

Сент-Дьёрди высказал предположение, что это соединение может относиться к витаминам и, соответственно, предложил для него название «витамин Р», которое в будущем не укоренилось [25].

Заинтересованность к флавоноидным соединениям особенно увеличилось в 1940 годах. После 1970 г. выделено более 1500 соединений, которые по сей день относятся к флавоноидам.

Возобновление интереса к флавоноидам пришло в 1990-х годах. Оно связано с открытием антиоксидантных свойств флавоноидов и их способности нейтрализовать свободные радикалы [26].

Так как в настоящей работе изучалось химическое поведение катехина и его производных, в частности дигидрокверцетина, то следует отметить, что модификация дигидрокверцетина (рис.1) имеет ряд особенностей, связанных с наличием в молекуле прочных внутримолекулярных водородных связей, которые приводят к различной реакционной способности гидроксильных групп молекулы: 7>4`>3`>5>3 [99]. Рентгеноструктурный анализ представлен на рисунке 2.

Рисунок 1

Рисунок 2 - Рентгеноструктурный анализ дигидрокверцетина

В то же время имеющийся библиографический материал показывает, что химические свойства практически не изучались. Этим объясняется достаточно ограниченное число литературных данных о химических свойствах флавоноидов, например, об их ацилировании.

В настоящем обзоре обобщены данные о возможности видоизменения флавоноидов по гидроксильным группам. Обзор разделён на части, которые посвящены методам синтеза из ацильных, фосфосодержащих и силильных производных.

1.2 Триалкилсилильные защиты гидроксильных групп молекул флавоноидов

В качестве защитных групп в синтезе труднодоступных производных флавоноидов применяются триалкилсилильные производные, которые с лёгкостью вводятся в первоначальные соединения, а затем с легкостью уходят из итоговых продуктов. Но в библиографии, к сожалению, присутствуют скромные данные о получении этих производных флавоноидов.

Установлено, что силилирование природных полифенолов происходит только при полном или частичном исключении экстаирующегося хлороводорода, а с таким органическим акцептором, как пиридин, получа.тся количественные выходы синтезируемых соединений.

Силилирование замещённого 5,7-ди-О-метилапигенина 1 было проведено корейскими исследователями [27] взаимодействием флавоноида с трет-бутилдиметилсилил- и трет-бутилдипропилсилилхлоридами в безводном пиридине с добавлением 4-диметиламинопиридина. Процесс протекания реакции по гидроксильной группе в положении 3 молекулы был единственный, поскольку начальное соединение обладает лишь одной свободной гидроксильной группой:



Образовавшиеся 3-О-силил-ди-О-алкилапигенины 2a-b были получны в индивидуальном виде и описаны методом спектроскопии ЯМР ¹Н и ¹³С.

Достаточно любопытной является работа (если на неё посмотреть региоселективности) по синтезу трет-бутилдиметилсилильных эфиров диадзеина из его моно- и дифенолятов[28].

При получении монофенолята к раствору диадзеина прибавили равное долю 2,6-лутидина. Через 15 минут, при постоянном перемешивании, в реакционную смесь добавили трет-бутилдиметилсилиловый эфир трифторметансульфоновой кислоты. Спустя 8 часов данный процесс полностью завершился:

При получении дифинолята, в котором 4'-гидроксильная группа более нуклеофильна, в сравнении с гидроксильной группой в положении 7, смесь флавоноида и избытка трет-бутилата калия выдерживали в течение 2 часов. После чего реакционную массу добавляли трет-бутилдиметилхлорсилан и оставили ещё на 10 часов.

Соединения 5 и 6 были получены с удовлетворительными выходами методом колоночной хроматографии на силикагеле. Строение этих веществ подтверждено и доказано физико-химическими методами.



Несмотря на это, появляются сомнения о получении соединения 6 с приемлемым выходом, так как трет-бутилдиметилхлорсилан представляет из себя активный ацилирующий реагент, а различие в нуклеофильности гидроксильных групп не критично, что приводит к образованию побочных продуктов и уменьшению выхода целевого продукта реакции.

В 1953 году Хенгель и Крамер в своей работе выяснили, что катехин 7 в отсутствие растворителя вступал в реакцию с триметилхлорсиланом, в результате чего были получены частично замещённые производные [29], из которых большую часть составляло соединение 8:

Исследователи в качестве сравнения проделали идентичную реакцию с добавлением растворителя, который представляет собой смесь пиридина и N, N-диметилформамида, в результате чего получили 3,5,7,3',4'- пентатриметилсилилфлаван (в виде белых кристаллов).

Также, в этом исследовании изучали процесс силилирования кверцетина 9, который вступал в реакцию с триметилхлорсиланом в дикетоформе только в смеси растворителей пиридин/N,N-диметилформамид. В результате этого процесса получили 3, 7, 3', 4'-тетратриметилсилил-3,4- диоксофлавана 10. Конечным продуктом было вязкое масло желтоватого цвета.

Тем ни менее в качестве доказательства получения этих соединений приведены только данные элементного анализа.

С образованием соединения 12 возможно избирательно по 7-ОН группе провести силилирование трет-бутилдиметилхлорсиланом флавоноида наригенина [30]:

Увы, автор этой работы не указал данные элементного анализа образующегося соединения.

Исходя из сказанного выше, стоит отметить, что производные флавоноидов, которые содержат кремний, носят фрагментный характер. Тем ни менее, не во всех исследованиях имеется достатоная информация, которая свидетельствует о строении полученных веществ. Вследствие чего необходимы вспомогательные исследования силилирования флавоноидов.

1.3 Катехин и дигидрокверцетин в реакциях ацилирования

Анализируя работы, которые были проведены за последнее время, можно сказать, что ранее изученные полигидроксильные соединения после их тщательного алкилирования или ацилирования способны быть достойными лекарственными препаратами. Так, этил-D-глюкофуранозид бензилируется с получением 3,5,6-трибензоилового производного (препарат

«Трибензоид»), используемое в фармакологии для предотвращения венозного кровообращения, трофических язв, флебитов и др. [31]. В свою очередь изучено ацилирование флавоноида кверцетина до пентаникотината, отличающегося эффективным противовоспалительным влиянием [32]. Нельзя не заметить, что в структурах отсутствие наличия упомянутых медицинских средств классических фармакофорных групп. Из этого следует, что производные определённых природных полиолов после добавления в их молекулы углеводородных радикалов или ацильных групп могут быть рассмотрены как возможные биологически активные конструкции нанотипа.

Химическая разновидность флавоноидов предполагает теоретический и практический интерес, так как первоначальные соединения, так и полученные на их основании видоизменённые производные зачастую имеют биоактивность. На практике между способами видоизменении флавоноидов значимое место представляет их ацилирование производными карбоновых кислот, прежде всего, из-за сравнительной лёгкости получения сложных эфиров флавоноидов и простоты ацилирующих реагентов.

1.3.1 Взаимодействие с ангидридами карбоновых кислот

Ангидриды карбоновых кислот являются функциональными ацилирующими агентами, которые вступают в реакции с фенолами невозратно. Более дешёвым, действенный и потому хорошо и свободно эксплуатированным реагентом представляется ангидрид уксусной кислоты.

Процессы ацилирования незащищённых флавоноидов 13, 14, 15 дабы создать возможные биоантиоксиданты из природных полифенолов осуществлял Симокорияма [33] без растворителя в соотношении реагентов флавоноид/уксусный ангидрид 1:10 и применении каталитических количеств пиридина. За 1-6 минут реакции прекращались:



Спецификой этихреакций представляется то, что гидроксильная группа в положении 5 остаётся нетронутой.

Увы, в данных работах [33], [34] исследователями не предоставлены факты строения полученных соединений.

Продолжая эти исследования, провели перацилирование флавоноидов. В ходе работы, оказалось требуемым ужесточить условия реакции, а именно: время реакции (как в случае дигидрокверцетина), тумпературу проведения процесса или воспользоваться избытком реагента [35].

Исходя их этого, целью исследования процессов не полного ферментативного гидролиза перацилированных флавоноидов были синтезированы перацетаты лютеолина, кемферола и кверцетина ацилированием должной конструкции уксусным ангидридом в пиридине 16a, 17a, 18a:

Строение полученных соединений было подтверждено методом спектроскопии ЯМР ¹Н, а состав доказан данными элементного анализа. [36]. В 1997 г. Клейманом былопринятно [37], что при взаимодействии с уксусным ангидридом дигидрокверцетина получался его пентаацетат, о котором говорилось ранее, и, что он не может кристаллизоваться [38-40].

Тем ни менее, установлено, что полученное соединение плавиться в пределах 1-2°С. Хотя в исследованиях [41-49] показаны весьма различные в зависимости друг от друга значения температур плавления (в интервале от 82 и до 148°С).

Кроме того, автором было основательно выяснено влияние природы растворителя и эксплуатированного катализатора на количественный состав, строение и выход целевого продукта.

Изначально синтезы проводили в отсутствие растворителя.

При отношении реагентов дигидрокверцетин/уксусный ангидрид 1:10 и прибавлении каталитических количеств пиридина на протяжении 30 мин основными продуктами получались: 3,3', 4',7-тетра-14a и 3, 3', 4',5,7-пента-19 ацетаты дигидрокверцетина:

Уменьшение времени реакции до 2-х минут приводило к образованию 26%, 3',4',7-триацетата 19 и 54% 3,3',4',7-тетраацетата 14a дигидрокверцетина, которые были отделены друг от друга хроматографически.

1.3.2 Взаимодействие с хлорангидридами карбоновых кислот

Метод ацилирования хлорангидридов представлеься одним из более используемых методов для синтезирования ацильных производных органических соединений. Обширное использование хлорангидридов карбоновых кислот предопределено, для начала, тем, что атом хлора в хлорангидридах отличается высокой подвижностью, доступностью этих ацилирующих реагентов и простым выделением ацильного фрагмента в флавоноидах. Почти все процессы протекают в инертных растворителях в присутствии основания для связывания хлороводорода, котроый, в свою очередь, выделяется.

Рао с сотрудниками [50] взаимодействием (-)-3',4',7,8-тетра-О- бензилмескитола 21 в хлористом метилене с соответствующим хлорангидрдом ароматической кислоты в присутствии триэтиламина получили ароматические эфиры (-)-мескитола. Впоследствии их дебензилирования были выделены соединения 21a-d с выходом 80%:

Все полученные конструкции обладали аналитическими и спектроскопическими данными в абсолютном сходстве с предполагаемой структурой. В данном случае первоначальная конструкция имела лишь одну свободную гидроксильную группу, поэтому процесс ацилирования происходил определённо, не вызывая каких-либо затруднений.

1.3.3 Взаимодействие с карбоновыми кислотами

В большинстве случаев, прямая этерификация фенолов карбоновыми кислотами не употребляется, ибо для сдвига равновесия между первоначальными и итоговыми реагентами в сторону последних и исхода реакции очень важно применять большое количество реагентов или устранять воду из сферы реакции. Впрочем, эти процессы выполнить можно, для этого предварительно проактивировать карбоксильную группу, проделывая реакцию, например, при дегидратирующих веществ, таких как карбодиимиды. Эти процессы проходят достаточно протяжно, потому что скорость ацилирования существенно увеличивается, если добавить в реакционную смесь 4-диметиламинопиридина (ДМАП) как со- катализатор. Выявлено, что реакции с применением ДМАП сопутствуются рацемизацией кислоты (при условии, что есть хиральный центр) или передвижением кратной связи (при её наличии). Для уменьшения рацемизации применяют гидроксибензотриазол HOBt. Его наличия хватит, чтобы реакция проходили хоть и протяжно, но без применения ДМАП.

Не так давно, научными исследователями из Индии, при влиянии на грамотрицательные и грамположительные микроорганизмы конденсацией с применением гидрохлорида 1-(3-диметиламинопропил)- 3-этилкарбодиимида (ДАЭК) и гидроксибензотриазола (HOBt) в смеси диметилформамида и хлористого метилена выявили ацильные производные ороксилина A (23a-j) [51]. При этом замещение протекало по 7-OH группе, не задействуя гидроксил в 5-ом положении.

Строение всех синтезированных соединений утверждено методом спектроскопии ЯМР ¹Н и ИК-спектроскопии.

Давно выявлено, что и амиды, и эфиры фосфорной кислоты имеют большое значение во множестве биологических процессах и возможна их гидролизация в соединениях, близких по составу и строению к соединениям, которые присутствуют в живых организмах. В медицине фосфорные эфиры разных модификаций часто применяются, как предшественники в синтезе для усиделния растворимости в воде, и, следовательно, биологической доступности реагентов [52].

Большинство авторов резюмируют сильную реакционную способность гидроксильной группы в положении 7, в сравнении с другими гидроксильными группами молекулы флавоноида и довольно пониженную реакционную способность 5-ОН группы, так как атом водорода этой группы образует прочную водородную связь с атомом кислорода карбонильной группы.

Стоит отметить тот факт, что в существующих литературных источниках присутствуют не доказанные данные о природе полученных продуктов, нет доказывающих факт их строения, мала сфера используемых методов физико-химического анализа, к тому же отсутствуют факты по синтезу перацильных флавоноидов (за исключением пентаацетатов). Посему, исследование дальнейшего изучения ацилирования флаваноидов, таких как дигидрокверцетини и катехин, представляется важным и значимым.

1.4 Катехин и дигидрокверцетин в реакциях фосфорилирования

1.4.1 Фосфорилирование реагентами трёхвалентного фосфора

Актуальный продукт лесохимии - флавоноид 2.3-дигидрокверцетин представляется активным антиоксидантом, и поэтому на данный момент применяется как эффективная пищевая добавка. В это же время, конструкция данного соединения не представляется родственной к биологической ткани человека, что усложняет его применение в медицинской практике как биорегулятор.

Исходя из сказанного выше, начали изучение вариаций дигидрокверцетина, вводя в его структуру биогенных фосфорных групп [53]. В виде фосфорилирующих средств использовали диамидофосфиты, которые снабжают податливое введение амидофосфитной группы в конструкцию применяемного субстрата [54]. Синтезированные амидофосфиты вводили в окислительные процессы, в связи с чем посчасливилось синтезировать действенные противораковые препараты.

Известно, что флавоноид 14 активно вступает в реакцию при 20°С с эквимолярной величиной фосфамида. Так получается диамидофосфит 24 по гидроксогруппе в положении 7. Синглет в спектре ЯМР 31Р (др 132.2 м.д.) реакционной смеси показывает, что диамидофосфит 24 приходится главным продуктом реакции. После окончания первичного фосфорилирования в реакцию прибавляли второй эквивалент фосфамида. Результатом этому оказалось образование нового синглета в спектре ЯМР 31Р (др 152.2 м.д.), который соответствует пирокатехинциклоамидофосфитному узлу. Отсюда следует, что был совершён вторичный акт фосфорилирования дигирокверцетина с приобретением дифосфита 25.

Фосфорилирование дигидрокверцетина протекало с применением триэтиламина, который выступил как акцептор выделяющегося хлористого водорода.

Реакционную смесь, которая включала в себя амидофосфитный продукт 25, вводили в реакции окисления, сульфуризации и селенизации. Таким образом были получены соответственные фосфат 26, тиофосфат 27 и селенофосфат 28.

Увы, выходы впервые синтезированных флавоноидных конструкций на данном этапе работы являются небольшими (10-20%). Основанием являются второстепенные процессы. К примеру, при первичном фосфорилировании флавоноида 14 в его амидофосфит 24 наблюдается параллельное получение диорганилфосфита 29.

Доказательством этого побочного пути представляется накопление в реакционной системе после первичного фосфорилирования соединения с синглетным сигналом в спектре ЯМР 31Р в области др 148 м.д., которое относится к соединению 29 и идентифицированного после сульфуризации методом масс-спектрометрии (MALDI-TOF). Тем не менее, получить в чистом виде это соединение не получилось. Итоговая часть работы была посвящена выявлению циклофосфорилированных пирокатехинов 26-28. Для этого провели гидролиз.



Стоит отметить, что раскрытие цикла ведёт к получению двух изомеров, спектральные данные которых похожи между собой. Разделить полученные продукты не получилось. Следствием изучения данного процесса представляется разработка получения неповторимых сложных производных флавоноида дигидрокверцетина методами современной химии фосфорорганических соединений.

Получение перфосфорилированных производных дигидрокверцетина с содействием диалкоксихлорфосфитов протекали при соотношении реагентов 1:5. В спектрах ЯМР ³¹Р соответствующих реакционных смесей вновь видели сигналы с разлным соотношением интегральных интенсивностей, что говорит об образовании смеси производных, разделить которую после сульфуризации методом колоночной хроматографии стало неосуществимо.

Было установлено, что функционализация свободного дигидрокверцетина хлорангидридами фосфористой кислоты представляется непростой в экспериментальном отношении задачей, которая ведёт к образованию продуктов сложной конструкции с неизбирательно замещенными фенольными и спиртовыми гидроксильными группами.

Фосфорилирование диамидоэфирами фосфористой кислоты.

В ходе исследований по синтезу фосфорсодержащих флавоноидов было выявлено фосфорилирование катехина диамидами фосфористой кислоты.

Для этого подобрали оптимальные условия для более действенного протекания реакций, где в качестве фосфорилирующих реагентов были применены этиловый, изопропиловый и бутиловый эфиры тетраэтиламида фосфористой кислоты.

В одной из работ [55] представлена методика фосфорилирования ДГК диамидами фосфористой кислоты. Исходя из неё процессы фосфорилирования были проведены с охлаждением реакционной смеси (10- 12°С) и концентрации первоначального флавоноида в диоксане 0.163 моль/л. Проводя попытки совершения этого исследования, но на примере катехина, было определено, что для лучшего протекания процессов ацилирования было необходимо достаточно большое разбавление реакционной смеси. Иначе выделяющийся в ходе реакции амин образовывал большое количество аддукта с катехином, который осаждался почти не вступал далее в реакции фосфорилирования. А охлаждение реакционной смеси содействовало этим процессам.

Реакции протекали при комнатной температуре в течение 2-х часов и достаточно большом разбавлении реакционной смеси (Скат. 0.01М). В спектре ЯМР ³¹Р реакционной смеси присутствовали синглеты с химическими сдвигами 144.8 м.д. (31а), 146.3 м.д. (31b) и 145.2 м.д. (31с).

Полученные производные трехвалентного фосфора на основе катехина 31 а-с, не выделяя из реакционной смеси преобразовывали в тион- и селенонфосфаты 32 а-с и 33 а-с и выделяли методом колоночной хроматографии.

Строение выделенных соединений доказано методом спектроскопии ЯМР 1Н, а состав подтверждён данными элементного анализа. В спектре присутствовали все необходимые сигналы протонов молекулы флавоноида и заместителей.

Фосфорилирование моноамидодиэфирами фосфористой кислоты.

Фосфорилирование эквимолярным количеством неопентилендиэтиламидофосфита в диоксане при охлаждении проходило медленно - порядка 35 часов. Несмотря на это, в спектре ЯМР ³¹Р видели синглет с химическим сдвигом 115.3 м.д.:

Выдерживание реакционной смеси при 40°С дало уменьшить время реакции до 7 часов. Повышение температуры до 60°С сопутствовало фосфорилированием спиртовой гидроксильной группы, о чём говорит появление нового синглета в фосфорном спектре с химическим сдвигом 122.2 м.д. При увеличении же температуры происходили деструктивные процессы.

Вещество 34 из реакционной смеси не стали выделять, так как оно склонно к распаду, и сразу вводили его во взаимодействие с серой и селеном.

После сульфуризации и селенизации, протекавших в течение 3 ч и нагревании до 40°С, в реакционной смеси наблюдали синглеты с химическими сдвигами 53.8 м.д. (35а) и 66.2 м.д. (35b).

Подобрали приемлемые условия фосфорилирования дигидроквердетина иными моноамидодиэфирами фосфористой кислоты. Взаимодействие дигидроквердетина с N-метил, N-фенилнеопентилен- и N- метил,N-фенилдиэтиламидофосфитами протекало при эквимолярном соотношении реагентов и нагревании до 50°С на протяжении 9 часов.

Фосфорилирование катехина амидоэфирами фосфористой кислоты не было избирательным, как в случае дигидрокверцетина [56]. Видимо это связано с подобной нуклеофильностью всех гидроксильных групп в молекуле флавоноида. После хроматографической очистки было выделено соединение 41.

1.4.2 Фосфорилирование реагентами пятивалентного фосфора

Исходя из результатов многих экспериментов, синтезирование фосфатов дигидрокверцетина путем окисления трехвалентных производных данного флавоноида с приемлемыми выходами представляло собой сложную задачу. Поэтому было проведено исследование фосфорилирования свободного полифенола хлорангидридами кислот пятивалентного фосфора.

При добавлении дигидрокверцетина к хлорангидриду фосфорной кислоты на протяжении 48-96 часов были получены производные 28а-с:

Повышение температуры протекания процесса способствовало появлению побочных продуктов, но применение микроволнового излучения помогло сократить время протекания процесса до 3-4 часов, почти не влияя на выход продукта.

Взаимодействие дигидрокверцетина с хлорангидридом дифенил фосфористой кислоты протекало на протяжении 6 часов при соотношении 1:1.

1.5 Катехин и дигидрокверцетин в реакциях силилирования

При исследовании процессов фосфорилирования дигидрокверцетина кроме научного интереса присутствует и практическое значение, так как в результате взаимодействия получаются новые органические конструкции, которые могут быть потенциальными антиоксидантами, противовоспалительными и противоопухолевыми препаратами. Значимым являлось исследование процессов фосфорилирования дигидрокверцетина с применением силильной защиты более реакционноспособных гидроксильных групп.

Силильные эфиры свободно используются как промежуточные конструкции в синтезе производных флавоноидов, которые, в свою очередь, труднодоступны. Как защитные применялись триалкилсилильные группы. В процессе работы выявлено, что при воздействии на флавоноид триметилхлорсилана (соотношение реагентов 1:1) или гексаметилдисилазана (соотношение реагентов 2:1) получалась смесь продуктов реакции, разделелить которую методом колоночной хроматографии не получилось, так как триметилсилильные эфиры слишком восприимчивы к силикагелю. Поэтому во время хроматографической очистки это привело к разложению.

В следствии этому удобнее всего применять персилилированный дигидрокверцетин, выделить который было бы возможно, при этом не применяя колоночную хроматографию. Соединение особенно интересно для получения новых производных дигидрокверцетина в будущих работах по их изучению. Для синтеза персилилированного дигидрокверцетина, к раствору одного эквивалента флавоноида в пиридине прибавили 6 эквивалентов (небольшой избыток) триметилхлорсилана.

Действием на дигидрокверцетин избытка гексаметилдисилазана при 110°С в отсутствии растворителя также получали пентазамещенное производное 44. При понижении температуры проведения реакции до 60°С в похожих условиях получали тетрасилилированный продукт 45:



Строение синтезированных соединений доказано физико-химическими методами. К сожалению, они неустойчивы и с лёгкостью гидролизовались влагой воздуха.

Многообещающим для регионаправленного замещения представляется пространственно затрудненный силилирующий реагент - трет- бутилдиметилхлорсилан.

Обработкой дигидрокверцетина эквимолярным количеством данного реагента при температуре до 5°С было проведено селективное силилирование с получением производного 46:

Незначительное увеличение температуры протекания процесса содействовало дальнейшему силилированию 4'-ОН группы, что значительно снижало выход продукта.

При повышении концентрации силилирующего реагента в два раза довольно легко при комнатной температуре образовывался 7,4'-ди-трет- бутилдиметилсилилдигвдрокверцетин 47:

Повышение температуры протекания реакции уменьшало время протекания реакции, но не действовало на количество выхода реакции.

Продукты 46 и 47 были выделены методом колоночной хроматографии. Соединение 46 имело вид порошка желтого цвета, соединение 47 - маслообразную жидкость, которая хорошо растворяется в органических растворителях. Используя этот реагент, производные с большей степенью замещения не получались, за счёт стерических затруднений.

Глава 2. Получение гидрофосфорильных производных катехина (обсуждение результатов)

Сочетание биологические активного субстрата и одного или нескольких фармакофорных фрагментов может привести к усилению или появлению новых видов биологической активности. Гидрофосфорильные соединения применяются как полупродукты для получния производных кислот пятивалентного фосфора, которые представляют собой интерес как подобие природных биоактивных конструкций. Это заставило нас изучить возможность получения гидрофосфорильных соединений на основе катехина.

Получение кислых фосфитов можно выполнить двумя путями. Первое направление состоит в фосфорилировании катехина тетраалкилдиамидами фосфористой кислоты, которые исконно заключают в своей структуре гидрофосфорильную группу; второе направление - в фосфорилировании субстрата производными фосфористой кислоты с последующим гидролизом синтезированных конструкций.

Проводя реакцию по первому направлению к флавоноиду I добавили тетраэтилдиамидом фосфористой кислоты. Реакция завершилась за 7 ч. В спектре ЯМР 31P реакционной смеси присутствовал сигнал в области 19.5 м.д. (1JPH 572.2 Гц):

Реакционную массу анализировали с помощью метода тонкослойной хроматографии на пластинках силуфола в системах бензол:диоксан 3:1 (А), гексан:диоксан 1:3 (В). На хроматограмме наблюдали два пятна с Rf = 0,4 в системе (А) и Rf = 0,6 в системе (В). В системе (В) наблюдали пятно на старте и с Rf = 0,5. Продукт реакции II выделяли осаждением гексаном. Выпадающее жёлтое масло отделяли от реакционной массы на делительной воронке, промывали гексаном и сушили в вакууме.

Строение полученного соединения было доказано физико- химическими методами. В протонном спектре присутствовали все необходимые сигналы протонов флавоноидной матрицы и фосфосодержащего заместителя (1.08 т, (6Н, CH3 3JHH 6,95), 2.35 м (3.2 м (4Н, СН3СH2N)). К сожалению, продукт реакции склонен к гидролизу влагой воздуха и достаточно быстро разлагается.

Далее мы проводили реакции по второму направлению, где в качестве фосфорилирующих реагентов были использованы этиловый, бутиловый и изопропиловый эфиры тетраэтиламида фосфористой кислоты.

В одной из работ [55] представлена методика фосфорилирования ДГК диамидами фосфористой кислоты. Исходя из неё процессы фосфорилирования были проведены с охлаждением реакционной смеси (10- 12°С) и концентрации первоначального флавоноида в диоксане 0.163 моль/л. Проводя попытки совершения этого исследования, но на примере катехина, было определено, что для лучшего протекания процессов ацилирования было необходимо достаточно большое разбавление реакционной смеси. Иначе выделяющийся в ходе реакции амин образовывал большое количество аддукта с катехином, который осаждался почти не вступал далее в реакции фосфорилирования. А охлаждение реакционной смеси содействовало этим процессам.

Индивидуальность продуктов подтверждали данными ТСХ, а строение данными спектроскопии ЯМР и элементного анализа. В спектрах ЯМР 31Р соединений наблюдали синглеты с химическими сдвигами в районе 140 м.д. (см. табл. 1).

Не выделяя это соединения из реакционной смеси, из-за довольно высокой лабильности, мы добавляли воду. Взаимодействие протекало в растворе диоксана при 40°С. Образование соответствующего алкилфосфита катехина происходило в течение 14 ч. Выход целевого продукта оказался мал, так как в результате длительного нагрева было замечено веское осмоление реакционной смеси. Индивидуальность полученных соединений подтверждено методом ТСХ.

В спектре ЯМР ³¹Р реакционной смеси надлюдали дублеты с химическими сдвигами в районе 2 м.д. Продукты реакций выделяли осаждением гексаном. В результате чего получили масло жёлтого цвета, которое отделяли от реакционной массы на делительной воронке, многократно промывали гексаном и сушили в вакууме. Выходы составляли 9-18%.

В спектре ЯМР ³¹Р реакционной смеси регистрировали дублеты с химическими сдвигами 2.8 м.д., ¹JPH 646 Гц, (IVa), 2.1 м.д., ¹JPH 619.5 Гц, (IVb) и 1.3 м.д., ¹JPH 589.5 Гц, (IVc) (см. табл. 1).

Таблица 1 - Выход и физико-химические характеристики фосфорсодержащих производных катехина

Номер соединения	Название соединения	Выход продукта, %	R * f	Спектр ЯМР 31 Р, д,м.д. (с)
II	7- диэтиламидогидрофосфат катехина	8	0.4 (А), 0.6 (Б)	19.5 д (1JPH 572.2Гц)
IVa	7-этилфосфит катехина	16	0.6(А), 0.7(В)	2.8 д (1JPH 646 Гц)
IVb	7-изопропилфосфит катехина	18	0.6(А), 0.7(В)	2.1 д (1JPH 619.5 Гц)
IVc	7-бутилфосфит катехина	9	0.5(А), 0.6(В)	1.3 д (1JPH 589.5 Гц)

*-системы элюентов см. в Экспериментальной части

Строение полученных гидрофосфорильных производных катехина доказано методом спектроскопии ЯМР на ядрах ¹Н и ¹³С, а состав подтверждён данными элементного анализа. В спектрах ¹Н и ¹³С имелись сигналы от всех типов протонов и атомов углерода, входящих в состав молекулы. Наличие констант спин-спинового взаимодействия ²JC7P (0.96 Гц -IVa, 0.88 Гц - IVb, 0.93 Гц- IVc) также свидетельствовало получению допускаемых структур.

Мы получили продукты реакций катехина, которые были выделены с небольшими выходами (до 20%) (см. табл. 1), в отличие от опытов, которые проводились на основе дигидрокверцетина.

Дополнительно исследовали химические свойства полученных алкилфосфитов катехина. Были проведены хорошо известные реакции - Пудовика, Кабачника-Филдса и Абрамова. Методом спектроскопии ЯМР ³¹Р установлено наличие в реакционной смеси исходных гидрофосфорильных соединений.

Похожие результаты присутствуют в работе [57] при изучении химических свойств кислого фосфита на основе краунэфира. Исследователями показано, что данное вещество существенно различалось по реакционной способности от своего близкого аналога - дифенилфосфита. Если присоединение дифенилфосфита по кратной связи, в частности, C=N бензальанилина [58] проходило свободно при комнатной температуре, то повторить эту реакцию в подобных условиях с исслудуемым фосфитом не получилось. При повышении температуры реакционной смеси происходило дезарилирование. Авторы не смогли выполнить взаимодействие фосфита с акрилонитрилом и параформом в присутствии метилата натрия. Тем не менее, объяснить полученные факты они не смогли.

Судя по всему, низкая реакционная способность кислых фосфитов представляется результатом присутствия объёмного заместителя ароматической природы около атома фосфора, что подвергло к дополнительной делокализации электронной плотности и из-за этого к большей стабилизации молекулы.

Ещё можно допустить, что связь Р-С образуется, но она очень непрочна. Абрамовым В.С. [59] представлено, что её расщепление шло настолько легко, что теплота, которая выделяется при протекании реакции, совершала и обратный процесс.

Тем самым установлено, что классические реакции кислых фосфитов с применением алкилфосфитов катехина не идут, а повышение температуры в реакционной смеси ведёт к деструкции и продуктов реакции, и первоначальных соединений.

катехин дигидрокверцетин флавоноид фосфор

Глава 3. Экспериментальная часть

Спектры ЯМР ³¹Р получены на спектрометрах Bruker WP-80SY (32.4 МГц) и JNM-ECX 400 (161.83 МГц) фирмы JEOL относительно внешнего стандарта - 85%-ной фосфорной кислоты.

Спектры ЯМР ¹Н получены на спектрометрах Bruker AC-250 (250 МГц) относительно ТМС (внутренний стандарт).

Спектры ЯМР ¹³С зарегистрировали на спектрометрах Bruker AC-200 (50.32 МГц) и JNM - ECX 400 (400 МГц) фирмы JEOL, химические сдвиги приведены относительно ТМС (внутренний стандарт).

Для элементного анализа использовали анализатор Perkin-Elmer 2400.

Все синтезы с участием соединений трёхвалентного фосфора проводили в атмосфере сухого азота в абсолютных растворителях, осушённых по стандартным методикам.

Анализ методом ТСХ проводили на пластинках Silufol с системами: бензол-диоксан 3:1 (А), гексан-диоксан, 1:1 (Б), гексан-диоксан, 1:3 (В). Обнаружение веществ осуществляли парами йода и прожиганием.

7-Диэтиламидогидрофосфат катехина (II). К раствору 0.305 г (1 ммоль) катехина в 30 мл диоксана при постоянном перемешивании в атмосфере инертного газа и комнатной температуре добавляли 0.193 г (1 ммоль) тетраэтилдиамида фосфористой кислоты. Реакционную смесь выдерживали 6,5 ч. На хроматограмме наблюдали два пятна с Rf=0,4 в системе (А) и Rf = 0,6 в системе (Б). В системе (В) наблюдали пятно на старте с Rf = 0,3. Продукт реакции выделяли осаждением гексаном. В результате реакции получили жёлтое масло, которое отделяли от реакционной массы на делительной воронке, промывали гексаном и сушили в вакууме.

Выход продукта: 0.03 г (8%). Спектр ЯМР 1Н (CDCl3), д, м.д.:1,08 т (6Н, CH3CH2N, 3JHH 6,94), 2.51, 2.81 м (2Н, С4Н2), 3.2 м (4Н, СН3СН2N), 4.21 д (1Н, С3Н, 3JHH 10.8 Гц), 4.96 д (1Н, С2Н, 3JHH 10.8 Гц), 5.49 с (1Н, 3JPH 572.1 Гц), 5.82 д (1Н, С8Н, 4JHH 1.83 Гц), 5.84 д (1Н, С6Н, 4JHH 1.83 Гц), 6.76 с (2Н, С5'H и C6'H), 6.87 c (1H, C2'H), 9.2 уш.с. (2Н, С3'OH, C 4'OH), 1.21 c (1H, C5OH). Спектр ЯМР 31Р (CDCl3), д, м.д.: 19.4 д (1JPH 572.2 Гц). Найдено, %: С 55.19; Н 5.85; N 3.39 С19Н24NO7P. Вычислено, %: С 55.75; Н 5.91; N 3.42.

7-О-диэтиламидо-этилфосфит катехина (IVa). К раствору 0.305 г (1 ммоль) катехина в 100 мл диоксана при комнатной температуре и постоянном перемешивании добавляли 0.21 г (1 ммоль) N, N- тетраэтиламидоэтилфосфита в 10 мл диоксана. Реакционную смесь выдерживали 2 часа при комнатной температуре. Продукт из реакционной смеси не выделяли. Спектр ЯМР 31Р (CDCl3), д, м.д.: 144.8 м.д.

7-О-диэтиламидо-изопропилфосфит катехина (IVb). Получен аналогично соединению IVa, из 0.305 г (1 ммоль) катехина и 0.232 г (1 ммоль) N, N-тетраэтиламидоэтилфосфита. Спектр ЯМР 31Р (CDCl3), д, м.д.: 146.3 м.д.

7-О-диэтиламидо-бутилфосфит катехина (IVc). Получен аналогично соединению IVa, из 0.305 г (1 ммоль) катехина и 0.247 г (1 ммоль) N, N- тетраэтиламидоэтилфосфита. Спектр ЯМР 31Р (CDCl3), д, м.д.: 145.2 м.д.

7-Этилфосфит катехина (Vа). К раствору 0.452 г (1 ммоль) соединения IVа в 50 мл диоксана добавили 0.017 г (1 ммоль) воды. Взаимодействие проводили при температуре 40°С. Образование соответствующего алкилфосфита происходило в течение 13 часов. Продукты реакции выделяли осаждением гексаном. В результате реакции получили масло, которое отделяли от реакционной массы на делительной воронке. Многократно промывали гексаном и сушили в вакууме.

Выход: 0.06 г (16%). Rf = 0,6 (А) и Rf = 0,7 (В). Спектр ЯМР 1Н (ацетон-d6), д, м.д.: 1.13 т (3Н, СН3, 3JHH 14.5 Гц), 2.51, 2.81 м (2Н, С4Н2), 3.67 м (2Н, СН2, 2JPH 8.67 Гц, 3JHH 11.73 Гц), 4.43 д (1Н, С3Н, 3JHH 11.73 Гц), 4.93 д (1Н, С2Н, 3JHH 11.74 Гц), 5.82 д (1H, С8Н, 4JHH 2.8 Гц), 6.01 д (1Н, С6Н, 4JHH 2.7 Гц), 6.56 д (1Н, 2JPH580 Гц), 6.73 д (1H, C5'H, 3JHH 5.2 Гц), 6.77 д (1Н, С6'Н,

3JHH 5.2 Гц), 6.83 с (1Н, С2'Н), 9.1 уш.с. (2Н, С3'OH, C4'OH), 11.78 c (1H, C5OH). Спектр ЯМР 13С (ацетон-d6), д, м.д.: 17.16 с (СН3), 27.73 (С4), 58.68 д (СН2, 2JCP 8.8 Гц), 72.1 (С3), 83.55 (С2), 95.56 (С8), 96.55 (С6), 100.82 (С10), 115.65 (С5'), 115.92 (С2'), 119.7 (C6'), 128.85 (C1'), 145.51 (С3'), 146.33 (С4'), 163.82 (С5), 167.81 д (С7, 2JCP 0.96 Гц). Спектр ЯМР 31Р (ацетон-d6), д, м.д.: 2.7 д (1JPH 646 Гц). Найдено, %: С 52.88; Н 4.96 С17Н19О8Р. Вычислено, %: С 53.41; Н 5.01.

7-Изопропилфосфит катехина (Vb). Получен аналогично соединению Va, из 0.464 г (1 ммоль) соединения IVb и 0.017 г (1 ммоль) воды.

Выход: 0.07 г (18%). Rf = 0,6 (А) и Rf = 0,7 (В). Спектр ЯМР 1Н (ацетон- d6) (приложение В), д, м.д.: 1.16 т (6Н, СН3, 3JНН 12.6 Гц), 2.51, 2.81 м (2Н, С4Н2), 3.51 м (2Н, СН2, 2J 8.18 Гц, 3JHH 12.6Гц), 4.45 д (1Н, С3Н, 3JHH 11.6 Гц), 4.82 д (1Н, С2Н, 3JHH 11.6 Гц), 5.79 д (1Н, С8Н, 4JHH 2.7 Гц), 5.83 д (1Н, С6Н,

4JHH 2.7 Гц), 6.62 д (1Н, 2JPH 582,6 Гц), 6.68 c (1Н, С5'H, С6'H), 6.81 с (1Н, С2'Н), 9.04 уш.с. (2Н, С3'OH, C4'OH), 11.64 c (1H, C5OH). Спектр ЯМР 13С (ацетон-d6) (приложение Г), д, м.д.: 25.5 с (СН3), 27,73 (С4), 199.51( С4) 58.28 д (СН2 2JCP 9.4 Гц), 72.1 (С3), 84.16 (С2), 96.12 (С8), 97.32 (С6), 101.01 (С10), 115.05 (С5'), 115.38 (С2'), 118.72 (С6'), 127.97 (С1'), 144.91 (С3'), 145.85 (С4'), 162.86 (С9), 163.46 (С5), 168.23 д (C7, 2JCP 0.88 Гц) . Спектр ЯМР 31Р (ацетон-d6), д, м.д.: 2.1 д (1JPH 618 Гц). Найдено, %: С 54.01; Н 5.29 С18Н21О8Р. Вычислено, %: С 54.55; Н 5.34.

7-Бутилфосфит катехина (Vc). Получен аналогично соединению Va, из 0.478 г (1 ммоль) соединения IVс и 0.017 г (1 ммоль) воды.

Выход: 0.046 г (11%). Rf = 0,5(А) и Rf = 0,6 (В). Спектр ЯМР 1Н (ацетон-d6), д, м.д.: 0.82 т (3Н, СН3, 1.11 м (2H, CH3CH2CH2CH2), 1.13 м (2H, CH3CH2CH2CH2), 2.51, 2.81 м (2Н, С4Н2), 3.51 м (2Н, CH3CH2CH2CH2), 4.46 д (1Н, С3Н, 3JНН 11.4 Гц), 4,94 (1Н, С2Н, 3JНН 11.4 Гц), 5.81 д (1Н, С8Н, 4JНН 2.7 Гц), 5.86 д (1Н, С6Н, 4JНН 2.7 Гц), 6.54 д (1Н, 2JPН 586.2 Гц), 6.6 с (2Н, С5'H, C6'H, 6.83 с (1 Н, С2'), 9.03 уш.с. (2Н, С3'OH, С4'OH), 11.86 c (1H, C5OH). Спектр ЯМР 13С (ацетон-d6), д, м.д.: 14.12 (СН3(С), 19.11 (СН3СН2СН2СН2), 198.25 (С4), 31.4 (СН3СН2СН2СН2), 63.24 (СН3СН2СН2СН2), 72.07 (С3), 83.57 (С2), 95.52 (С8), 96.52 (С6), 100.94 (С10), 115.63 (С5'), 115.87 (С2'), 119.88 (С6'), 128.53 (С1'), 145.47 (С3'), 146.29 (С4'), 163.05 (С9), 163.83 (С5), 167.46 д (C7, 2JCP 0.93 Гц). Спектр ЯМР 31Р (ацетон-d6), д, м.д.: 1.2 д (1JPH 589.5 Гц). Найдено, %: С 55.05; Н 5.59 С19Н23О8Р. Вычислено, %: С 55.61; Н 5.65.

Выводы

Впервые были получены гидрофосфорильные соединения на основе катехина. Строение полученных веществ доказано с помощью физико- химических методов.

Разработаны методики синтезов полученных соединений и установлено, что, к сожалению, выходы полученных соединений малы.

Полученные нами ГФС на основе катехина практически не вступают в известные процессы, которые характерны для классических ГФС.

Список литературы

1. Babu K.S. Synthsis and biological evaluation of novel C (7) - modified chrysin analogues as antibacterial aqents / K.S. Babu, T.H. Babu, P.V. Srinivas and others // Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters. 2006. - V. 16. - P. 221 - 224.

2. Bjeldanes L.F. Mutagenic activity of quercetin and related compouns / L.F. Bjeldanes, C.W. Chang // Science. 1977. - 5 August. - P. 577 - 578.

3. Nagao M. Mutagenicities of 61 flavonoids and 11 related compounds. / M. Nagao, N. Morita, T. Yahagi and others // Environ Mutagen. 1981. - V. 3. - P. 401 - 419.

4. Jurado J. Study on the mutagenic activity of 13 bioflavonoids with the Salmonella Ara test. / J. Jurado, E. Alejandre - Duran, A. Alonso-Moraga // Mutagenesis. 1991. - V. 6. - P. 289 - 295.

5. Matsuo N. Inhibitory effect of tea polyphenols on histamine and leukotriene B4 release from rat peritoneal exudate cells. / N. Matsuo, K. Yamada, K. Yamashita and others // In Vitro Cell Dev Biol Anim. 1996. - V. 32. - P. 340 - 344.

6. Pearce F.L. Mucosal mast cells. III. Effect of quercetin and other flavonoids on antigen-induced histamine secretion from rat intestinal mast cells. / F.L. Pearce, A.D. Befus, J. Bienenstock // J Allergy Clin Immunol. 1984 - V. 73. P. 819.

7. Hamilton - Miller, J.M. Antimicrobial properties of green tea catechins (Camelia sinensis L.) / J.M. Hamilton - Miller // Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 1995. - V. 39. P. 2375 - 2377.

8. Qais N. Antimicrobial flavonoids from Desmos chinesis / N. Qais, M.M. Rahman, M.A. Rashid and others // Fitoterapia. 1996 - V. 67. - P. 554 - 555.

9. Miura S. Effects of various natural antioxidants on the Cu (2+)-mediated oxidative modification of low density lipoprotein. / S. Miura, J. Watanabe, M. Sano and others // Biological and Pharmaceutical Bulletin. 1995 - V. 18. - P. 1 - 4.

10. Hecker M. Inhibition by antioxidants of nitric oxide synthase expression in murine macrophages: role of nuclear factor kappa B and interferon regulatory factor 1. / M. Hecker, C. Preiss, P. Klemm and others // British Journal of Pharmacology. 1996. - V. 118. - P. 2178 - 2184.

11. Sichel G. In vitro scavenger activity of some flavonoids and melanins against O2. / G. Sichel, C. Corsaro, M. Scalia and others // Free Radical Biology & Medicine. 1991. - V. 11. - P. 1 - 8.

12. Han C. Screening of anticarcinogenic ingredients in tea polyphenols. / C. Han // Cancer Letters. 1997. - V. 114. - P. 153 - 158.

13. Mori A. Cytotoxicity of plant flavonoids / A. Mori, C. Nishino, N. Enoki and others // Phyrochemistry. 1998. - P. 1017 - 1020.

14. Habtemariam S. Flavonoids as inhibitors or enhancers of the cytotoxity of tumor necrosis factor-б in L-929 tumor cells / S. Habtemariam // J.Nat.Prod.1997.

- V.60. - P.775.

15. Wall M.E. Plant Antimutagenic Agents, 2. Flavonoids / M.E. Wall, M.C. Wani, G. Mahfkumar and others // // J.Nat.Prod.1988. - V.51. - P.1084-1091.

16. Cassdy J.M. Natural Products as a Sourse of Potential Cancer Chemotherapeutis and Chamopreventive Agents / J.M. Cassady, W.M. Baird, C.J. Chang // J.Nat.Prod.1990. - V.53. - P.23-41.

17. Shivji G.M. Antiinflammatory effect of green tea polyphenols on cultured normal human keratinocytes / G.M. Shivji, E. Zielinska, S. Kondo and others // J. Invest.Dermatol. 1996. - V. 106. - P.937.

18. Fishkin R.J. Endotoxin-induced reduction of social investigation by mice: interaction with amphetamine and anti-inflammatory drugs / R.J. Fishkin, J.T. Winslow // Psychopharmacology (Berl). 1997. - V.132. - P.335.

19. Moroney M.A. Selectivity of Neutrophil 5-Lipoxygenase and Cyclo- oxygenase Inhibition by an Anti-inflammatory Flavonoid Glycoside and Aglycone Flavonoids / M.A. Moroney, M.J. Forder, R.A. Carey and others // J.Pharm.Pharmacol. 1998. - V.40 - P.787-792.

20. Телескин Ю.О. Антиоксидантные свойства дигидрокверцетина / Ю.О. Телескин, В.А. Жамбалова // Биофизика. 1996. - Т.41. - С.620-624.

21. Lelpo M.T. Immunopharmacological properties of flavonoids / M.T. Lelpo, A. Baske, R. Hirando and others // Fitoterapia. 2000. - V.71. - P.101-109.

22. Болдина Г.Н. Патент RU 2003260 «Способ производства массы для сахаристых кондитерских изделий на жировой основе» / Г.Н. Болдина, М.А. Кондракова, Н.И. Смирнова // Б.И. 1993. - №43-44.

23. Радаева И.А. Патент RU 2043030 «Способ производства молочного концентрата и способ контроля содержания в нём дигидроквецетина» / И.А. Радаева, Н.А. Тюкавкина // Б.И. 1995. - №25.

24. Беляков В.А. О переносе энергии с химически возбуждаемых карбонильных соединений на производные антрацена и кислород / В.А. Беляков, Р.Ф. Васильев, Г.Ф. Фёдорова и др. // Известия АН СССР, серия физическая, 1973. - Т.37. - №4. - С.747-752

25. Rusznyak S.P. Vitamin P: flavonols as vitamins / S.P. Rusznyak, A. Szent- Gyorgyi // Nature, 1936. - T.138. - C.27.

26. Lakhanpat P. Quercetin: А versatile flavonoid / P. Lakhanapal, D. Kumar Rai // Internet Journal of Medical Update, 2007. - №2. - Vol.2.

27. Kim J. Unexpected desilylativ-alkylation of 3-O-tret-butil-dimetilhylsilyl galangin / J. Kim, H.S. Lee, K.Park and others // Bull.Korean Chem.Soc. 2008. - V.29. - P.1667-1668.

28. Fairley B. The synthesis of daidzein sulfates / B/ Fairley, N.P. Botting, A. Cassidy // Tetrahedron. 2003. - V.59. - P. 5407-5410.

29. Henglei F.A. Ьber reactionen von natьrlichen gerbstoffen und deren bausteinen mit trimethylchlorsilan / F.A. Henglei, J. Krдmer // Dissertat. S. Krдmer, Techn. Hochschule. Karlsruhe, 1953.

30. Oyama K. Synthesis of oriented anti-virus 7-O-substituted apigenins / K. Oyama, K. Kondo, K. Yoshida // Heterosysles. 2008. - V.76. - P. 1607-1615.

31. Патент 2394367 (1965). Япония // С.А. 1968. - Vol. 63. - 114445

32. Патент 2158598 (1998). Россия // Б.И. 2000. - №31.

33. Simokoriyama M. Ьber die bilding der pertiellen acetate von flavonen, flavanonen, antrachinonen mid dergleichen verbindungen / M. Simokoriyama // Ber. 1941. - V.16. - S.284-291.

34. Jurd L. Plant polyphenols. IV. Migration of acetyl Groups During alkylation of the partial acetates of flavonoid compounds / L. Jurd, L.A. Rolle // J. Am. Chem. Soc. 1958. - V.80. - P.5527-5531.

35. Natoli, M. Regioselective alcoholysis of flavonoid acetates with lipase in an organic solvent / M. Natoli, G. Nicolosi, V. Piatelli // J.Org.Chem. 1992. - V.57. - P.5776-5778.

36. Freudenberg A.H. Leuko- und pseudoverbindungen der anthocyanidine / A.H. Freudenberg, K. Weinges // Leibigs Ann. Chem. 1958. - Bd. 613. - S.61-75.

37. Kiehlmann E. Preparation and partial daecetylation of dihydroquercetin acetates / E. Kiehlmann // Organic preperations and procedures int. 1997. - V.31. - P.87-97.

38. Graham M. Constitunes of extractives from Douglas fir / M. Graham, E.F. Kurth // Ind.Engin.Chem. 1949. - V.41. - P.409-414.

39. Gripenberg R. Flavanones from the Heat Wood of Larix decidua Mill. (L.europea D C.) / R. Gripenberg // Acta.Chem.Scand. 1952. - V.6. - P.1152- 1156.

40. Kurth E.F. Behavior of Certain 3-Hydroxyflavanones toward Bases and Basic Salts of the Alkali Metals and Ammonia / E.F. Kurth, H.L. Hergert, J.D. Ross //J. Am.Chem.Soc. 1955. - V.77. - P,1621-1622.

...