Оценка иммунологических аспектов и экологической опасности микотоксинов, содержащихся в сырье и комбинированных кормах для животных
Эколого-физиологические особенности и иммунологические аспекты воздействия микотоксинов на животных и человека. Основные методики, определяющие предельно допустимые уровни вторичных метаболитов конкретных штаммов плесени для продуктов питания личности.
| Рубрика | Экология и охрана природы |
| Вид | дипломная работа |
| Язык | русский |
| Дата добавления | 22.10.2016 |
| Размер файла | 110,6 K |
Отправить свою хорошую работу в базу знаний просто. Используйте форму, расположенную ниже
Студенты, аспиранты, молодые ученые, использующие базу знаний в своей учебе и работе, будут вам очень благодарны.
Зеараленон
Было проведено всего несколько исследования потенциальной иммунотоксичности зеараленона и было выявлено, что он, как и эстрогены, уменьшает общую сопротивляемость к патоегнам, увеличивает восприимчивость к опухолям и нарушает клеточный иммунитет и воспалительный ответ (Luster и соавторы, 1980 г.). Зеараленон и его аналоги способны ингибировать митоген-стимулированную пролиферацию лимфоцитов (Forsell и Pestka, 1985 г.). При введении зеараленона (10 ppm) в рацион мыши, спустя 2 недели уменьшается сопротивление к бактериям Listeria, но при этом токсин не оказывает влияния на антитела или на ответ гиперчувствительности замедленного типа (Pestka и соавторы, 1987 г.). То же исследование показало, что при наблюдении за теми же иммуными факторами, зеараленон и дезоксиниваленол не действуют синергически. Зеараленон и зеараленол могут вызывать атрофию тимуса и активацию макрофагов (Luster и соавторы, 1984 г.).
Патулин
Некоторые исследования, показали, что in vitro патулин тормозит множественные аспекты функции макрофагов. Sorenson совместно с другими учеными обнаружил, что под воздействием патулина подавляется синтез белка в альвеолярных макрофагах крыс и нарушаются функции клеточной мембраны. Патулин подавляет окислительный взрыв у перитонеальных макрофагов крыс и кроликов in vitro (Escoula и соавторы, 1988 г.). В перитонеальных макрофагах мышей патулин значительно снизил выработку кислорода, процесс объединения фагосом-лизосом и лизосомальную активность фермента (Bourdiol и соавторы, 1990 г.). Преоральный прием патулина ( 10 мг/кг в течение 4 дней) снизил смертность мышей, зараженных грибками Candida Albicans, с 80 % у контрольных мышей до 50% случаев смертности у мышей, получавших патулин (Escoula и соавторы, 1988 г.). Применение патулина также влияет на увеличение циркулирующих нейтрофилов, которые могли бы способствовать повышению сопротивления к болезням. Нейтрофилез у крыс, которым преорально вводили патулин, сопровождается желудочо-кишечнми воспалениями (McKinley и соавторы, 1982 г.).
Цитринин
Цитринин прежде всего известен в качестве нефротоксина, но несколько исследований были обращены на его потенциальную иммунотоксичность. Campbell совместно с другими учеными в 1981 году вводили цитринин (от 125 до 500 ppm в течение трех недель) в корм для цыплят-бройлеров и обнаружили, что клеточный и гуморальный иммунный ответ не были затронуты. У мышей, получавших цитринин внутрибрюшинно (от 0,12 до 3,0 мг/кг массы тела), было обнаружено снижение выработки переферических лимфорцитов (Reddy и соавторы, 1988 г.). Наблюдалось снижение ответа антител на введение эритроцитов барана при низких дозах цитринина, но при более высоких дозах цитринина, наблюдалась стимуляция ответа. Бластогенез лимфоцитов селезенки с или без митогенов был стимулирован применением цитринина[14]. Из этого исследования кажется, что цитринин носит иммуностимулирующий характер, а не иммуносупрессивный. Однако еще предстоит определить, совпадают ли эффекты от употребления загрязненных кормов с низким уровнем цитринина с эффектами от внутрибрюшинного введения.
Вортманнин
Впервые был выделен из Penicillium wortmanni, позже был выделен и из других видов грибов, в том числе Myrothecium roridum, Fusarium oxysporum, Fusarium Sambucinum (Abbas и Mirocha, 1988 г.). Этот токсин используется в метаболических исследованиях для выяснения действия инсулина и глюкозы на гомеостаз (Bryden и соавторы, 2001 г.). Возможность иммуносупрессивного действия вортманина была предположена исходя из противовоспалительной активности структурно связанных грибковых метаболитов. Воздействие на нейтрофилы человека или на макрофаги костного мозга мыши вортманином, или его 11-дезацетокси аналогом, in vitro, ингибирует стимуляцию респираторного взрыва во время фагоцитоза (Baggiolini и соавторы, 1987 г.). У крыс, которых кормили кормом с вортманином или, которым давали чистый вортманин через желудочный зонд, обнаруживали желудочные кровоизлияния или кровоизлияния в миокарде (Gunther и соавторы, 1989 г,). Также, воздействие вортманина сопровождается геморрагическими поражениями, такими как некроз селезенки, лимфатических узлов, кишечника и лимфоидной ткани[14]. У крыс, которых кормили кормом, зараженным вортманином, наблюдается истощение и слабый некроз лимфоидной ткани, вилочковой железы. А у крыс, которым давали вортманин через желудочный зонд, наблюдается тяжелый некроз коры тимуса, который сопровождается кровотечениями (Гюнтер и соавторы, 1989 г.). Существует теория, что вортманин способствует появлению микотоксикозов, известных как пищевой токсичный агранулоцитоз, однако это не было доказано экспериментально (Mirocha и Abbas, 1989 г.),
Фузарохроманон
Фузарохроманон (ТДП-1) - микотоксин гриба Fusarium equiseti. Является причиной большеберцовой дисхондроплазии у домашней птицы. Птичья большеберцовая дисхондроплазия - аномалия роста костных пластин, в которых есть накопление некальцифицированного и аваскулярного хряща в проксимальной головке тибиотарзальной кости. Это повреждение может быть вызвано фузарохроманоном. Также этот токсин использовался для ряда исследований по изучению костной кальцификации (Bryden и соавторы, 2001 г.). Некоторые исследования показывают, что фузарохроманон имеет некоторое влияние на иммунную функцию, в частность, он подавляет гуморальный иммунитет (Chu и соавторы, 1988 г.). Это соединение имеет и ингибирующие и стимулирующее (при более низких концентрациях) свойства при анализе митоген-индуцированной пролиферации лимфоцитов (Minervini и соавторы, 1992 г.). Деацетилирование его метаболита, ТДП-2, сильно уменьшает эти иммунотоксические эффекты. Неоюходимы дополнительные исследования, что бы проверить аналогично ли проявляется иммунотоксичность фузархроманона в естественных условиях.
Глиотоксин
Глиотоксин - микотоксин характеризующийся антимикробным и иммуносупрессивным действием. Глитоксин производят несколько родов грибов, включая патоегнные, такие как Aspergillus fumigatus и Candida Albicans (Richard и соавторы, 1994 г.). Этот микотоксин, по-видимому, является причиной патогенности этих грибков, и относится к грибковым метаболитом, которые называются эпиполисиодиоксопиперазины (Jordan и Cordiner, 1987 г.; Taylor, 1971 г.). Иммуносупрессивная активность этого соединения была впервые обнаружена, когда лаборанты заметили, что глиотоксин, выделяющийся из А. fumigatus, подавляет фагоцитарную способность макрофагов на пластике (Mullbacher и Eichner, 1984 г.; Mullbacher и соавторы, 1985 г.). С этого времени стали описывать другие иммуносупрессивные действия этого микотоксина, в том числе ингибирование митоегнных стимуляций лимфоцитов в пробирке (Mullbacher и соавторы, 1987 г.; Richard и др., 1994 г.), цитотоксичность по отношению к птичьим лимфоцитам (Richard и соавторы, 1994 г.) и замедление отторжения трансплантата (Mullbacher и соавторы, 1988 г.).
Способность участия глиотоксина в патогенезе аспергиллеза усиливается тем, что он производится в инфицированных тканях животных. Eichner и его коллеги в 1988 году установили, что глиотоксин и его производные, диметилтиэтер, были обнаружены в смыве, взятом из брюшины мышей, привитых и инфицированных A. Fumigatus. Глиотоксин также был выделен и идентифицирован в естественно зараженных тканях вымени коровы, в то время как другие известные токсины этого препарата, по-видимому, отсутствовали, или их было невозможно обнаружить (Бауер и соавторы, 1989 г.). Richard и DeBey в 1995 году показали наличие глиотоксина в инфицированных тканях индюшат, которых экспериментально заразили известным глиотоксин-продуцируемым штаммом A. fumigatus. Глиотоксин впоследствии был обнаружен у индеек естественно инфицированных A. fumigatus (Richard и соавторы, 1996 г.). Статус глиотоксина, как агента, участвующего в микотоксикозе, которым заражаются через зараженный корм, является относительно неизвестным.
Глава 2. Методики определения предельно допустимых уровней и концентрации микотоксинов
2.1 Методики, определяющее предельно допустимые уровни микотоксинов для продуктов питания человека
Основным документом, обговаривающим требования к пищевым продуктам, является «Гигиенические требования безопасности и пищевой ценности пищевых продуктов санитарно-эпидемиологические правила и нормативы 2.3.2.1078-01»
Санитарно - эпидемиологические правила и нормативы "Гигиенические требования безопасности и пищевой ценности пищевых продуктов" устанавливают гигиенические нормативы безопасности и пищевой ценности для человека пищевых продуктов, а также требования по соблюдению указанных нормативов при изготовлении, ввозе и обороте пищевых продуктов[32]. иммунологический микотоксин штамм плесень
Настоящие Санитарные правила разработаны на основании Федеральных законов "О санитарно - эпидемиологическом благополучии населения" (Собрание законодательства Российской Федерации, 1999, N 14, ст. 1650), "О качестве и безопасности пищевых продуктов" (Собрание законодательства Российской Федерации, 2000, N 2, ст. 150), "О радиационной безопасности населения" (Российская газета от 17 января 1996 г.), "О защите прав потребителей" (Собрание законодательства Российской Федерации, 1996, N 3, ст. 140), "Основ законодательства Российской Федерации об охране здоровья граждан" (Ведомости Съезда народных депутатов Российской Федерации и Верховного Совета Российской Федерации, 1993, N 33, ст. 13818), Постановления Правительства Российской Федерации от 24 июля 2000 г. N 554 "Об утверждении Положения о Государственной санитарно - эпидемиологической службе Российской Федерации и Положения о государственном санитарно - эпидемиологическом нормировании" (Собрание законодательства Российской Федерации, 2000, N 31, ст. 3295)[32].
Общие положения данного документа устанавливают, что пищевые продукты должны удовлетворять физиологические потребности человека в необходимых веществах и энергии, также они должны удовлетворять обычно предъявляемым требованиям к органолептическим и физико-химическим характеристикам, и обязаны соответствовать установленным нормативными документами требованиям к допустимому содержанию химических, радиологических, биологических веществ и их соединений, микроорганизмов и других биологических организмов, представляющих опасность для здоровья нынешнего и будущих поколений. Также в данном документе сказано, что изготовление пищевых продуктов должно осуществляться в соответствии с нормативными и техническими документами и подтверждаться изготовителем удостоверением качества и безопасности пищевых продуктов. При этом индивидуальные предприниматели и юридические лица обязаны предоставлять покупателям или потребителям, а также органам государственного надзора и контроля полную и достоверную информацию о качестве и безопасности пищевых продуктов, соблюдении требований нормативных документов при изготовлении и обороте пищевых продуктов и оказании услуг в сфере розничной торговли и общественного питания. Важным замечанием является то, что при изготовлении продовольственного сырья животного происхождения не допускается использование кормовых добавок, стимуляторов роста животных, лекарственных средств, пестицидов (в том числе препаратов для обработки животных и птицы, а также препаратов для обработки помещений для их содержания), не прошедших санитарно - эпидемиологическую экспертизу и государственную регистрацию в установленном порядке[32].
Пункты 3.9. и 3.10. посвящены отдельно микотоксинам, и в них сказано, что содержание микотоксинов - афлатоксина B1, дезоксиниваленола (вомитоксина), зеараленона, Т-2 токсина, патулина - контролируется в продовольственном сырье и пищевых продуктах растительного происхождения, афлатоксина M1 - в молоке и молочных продуктах. Приоритетными загрязнителями являются: для зерновых продуктов - дезоксиниваленол; для орехов и семян масличных - афлатоксин B1; для продуктов переработки фруктов и овощей - патулин. Также не допускается присутствие микотоксинов в продуктах детского и диетического питания[32].
Таблица 1 Сводная таблица предельно допустимых уровней микотоксинов в пищевых продуктах [32]
|
Продукция(1) |
Микотоксин(2) |
ПДУ (мг/кг)(3) |
|
|
Молочные продукты |
|||
|
Молоко, сливки сырые и термически обработанные, пахта, сыворотка молочная, жидкие кисломолочные продукты, в т.ч. йогурт, сметана, напитки на молочной основе |
Афлатоксин М1 |
0,0005 |
|
|
Творог и творожные изделия, продукты пастообразные молочные белковые |
Афлатоксин М1 |
0,0005 |
|
|
Консервы молочные (молоко, сливки, пахта, сыворотка, сгущенные с сахаром; молоко сгущенное стерилизованное) |
Афлатоксин М1 |
0,0005 |
|
|
Продукты молочные сухие: молоко, сливки, кисломолочные продукты, напитки, смеси для мороженого, сыворотка и пахта |
Афлатоксин М1 |
0,0005 |
|
|
Сыры (твердые, полутвердые, мягкие, рассольные и плавленые) |
Афлатоксин М1 |
0,0005 |
|
|
Мороженое на молочной основе |
Афлатоксин М1 |
0,0005 |
|
|
Питательные среды сухие на молочной основе для культивирования заквасочной и пробиотической микрофлоры |
Афлатоксин М1 |
0,0005 |
|
|
Молокосодержащие продукты с немолочными компонентами, в т.ч. мороженое |
Токсичные элементы, микотоксины, антибиотики, пестициды и радионуклиды |
Устанавливаются с учетом содержания немолочных компонентов и требований к их безопасности |
|
|
Зерно (семена), мукомольно-крупяные и хлебобулочные изделия |
|||
|
1 |
2 |
3 |
|
|
Зерно продовольственное, в т.ч. пшеница, рожь, тритикале, овес, ячмень, просо, гречиха, рис, кукуруза, сорго |
Афлатоксин B1 |
0,005 |
|
|
пшеница |
Дезоксиниваленол |
0,7 |
|
|
ячмень |
1,0 |
||
|
Т-2 токсин |
0,1 |
||
|
пшеница, ячмень, кукуруза |
Зеараленон |
1,0 |
|
|
Семена зернобобовых, в т.ч. горох, фасоль, маш, чипа, чечевица, нут |
Афлатоксин B1 |
0,005 |
|
|
Крупа, толокно, хлопья |
Афлатоксин B1 |
0,005 |
|
|
пшеница |
Дезоксиниваленол |
0,7 |
|
|
ячмень |
1,0 |
||
|
Т-2 токсин |
0,1 |
||
|
пшеница, ячмень, кукуруза |
Зеараленон |
0,2 |
|
|
Мука пшеничная в т.ч. для макаронных изделий, ржаная, тритикалевая, кукурузная, ячменная, просяная, (пшенная) рисовая, гречневая, сорговая |
Афлатоксин B1 |
0,005 |
|
|
пшеничная |
Дезоксиниваленол |
0,7 |
|
|
ячменная |
1,0 |
||
|
Т-2 токсин |
0,1 |
||
|
пшеничная, кукурузная, ячменная |
Зеараленон |
0,2 |
|
|
Макаронные изделия |
Афлатоксин B1 |
0,005 |
|
|
из пшеничной муки |
Дезоксиниваленол |
0,7 |
|
|
из ячменной муки |
1,0 |
||
|
Т-2 токсин |
0,1 |
||
|
из пшеничной, кукурузной, ячменной муки |
Зеараленон |
0,2 |
|
|
Хлеб, булочные изделия и сдобные изделия |
Афлатоксин B1 |
0,005 |
|
|
из пшеничной муки |
Дезоксиниваленол |
0,7 |
|
|
из ячменной муки |
1,0 |
||
|
Т-2 токсин |
0,1 |
||
|
из пшеничной, кукурузной, ячменной муки |
Зеараленон |
0,2 |
|
|
Бараночные, сухарные изделия, хлебные палочки, соломка и др. |
Афлатоксин B1 |
0,005 |
|
|
из пшеничной муки |
Дезоксиниваленол |
0,7 |
|
|
из ячменной муки |
1,0 |
||
|
Т-2 токсин |
0,1 |
||
|
из пшеничной, кукурузной, ячменной муки |
Зеараленон |
0,2 |
|
|
Сахар и кондитерские изделия |
|||
|
Сахаристые кондитерские изделия: карамель, конфеты глазированные и неглазированные, помадные, сбивные, грильяжные, пралине марципановые, фруктово-ягодные, ирис, халва, пастила, зефир, мармелад, желейные изделия (для изделий, содержащих орехи) |
Афлатоксин B1 |
0,005 |
|
|
Сахаристые кондитерские изделия: шоколад и изделия из него |
Афлатоксин В1 |
0,005 |
|
|
Какао-бобы и какао-продукты |
Афлатоксин B1 |
0,005 |
|
|
Мучные кондитерские изделия |
Афлатоксин B1 |
0,005 |
|
|
Дезоксиниваленол |
0,7 |
||
|
Плодоовощная продукция |
|||
|
Соки, напитки, концентраты |
Патулин |
0,05 |
|
|
Полуфабрикаты овощные, фруктовые |
Патулин |
0,05 |
|
|
Джемы, варенье, повидло, конфитюры, плоды и ягоды протертые с сахаром и др. плодово-ягодные концентраты с сахаром |
Патулин |
0,05 |
|
|
Орехи |
Афлатоксин B1 |
0,005 |
|
|
Чай (черный, зеленый, плиточный) |
Афлатоксин B1 |
0,005 |
|
|
Кофе (в зернах, молотый, растворимый) |
Афлатоксин B1 |
0,005 |
|
|
Масличное сырье и жировые продукты |
|||
|
Семена масличных культур (подсолнечника, сои, хлопчатника, кукурузы, льна, горчицы, рапса, арахиса) |
Афлатоксин B1 |
0,005 |
|
|
Масло растительное (все виды) |
Афлатоксин B1 |
0,005 |
|
|
Продукты переработки растительных масел и животных жиров, включая жир рыбный (маргарины, кулинарные жиры, кондитерские жиры, майонезы, фосфатидные концентраты) |
Афлатоксин B1 |
0,005 |
|
|
Масло коровье |
Афлатоксин М1 |
0,0005 |
|
|
Жировые продукты на основе сочетания животных, включая молочный жир, и растительных жиров |
Афлатоксин М1 |
0,0005 |
|
|
1 |
2 |
3 |
|
|
Напитки |
|||
|
Напитки безалкогольные, в том числе сокосодержащие и искусственно минерализованные сокосодержащие: яблочный, томатный, облепиховый |
Патулин |
0,05 |
|
|
Другие продукты |
|||
|
Изоляты, концентраты, гидролизаты и текстураты растительных белков; пищевой шрот и мука с различным содержанием жира из семян бобовых, масличных и нетрадиционных культур |
Афлатоксин B1 |
0,005 |
|
|
из пшеницы |
Дезоксиниваленол |
0,7 |
|
|
из ячменя |
1,0 |
||
|
из пшеницы, ячменя, кукурузы |
Зеараленон |
1,0 |
|
|
Концентраты молочных сывороточных белков, казеин, казеинаты, гидролизаты молочных белков |
Афлатоксин М1 |
0,0005 |
|
|
Зародыши семян зерновых, зернобобовых и других культур, хлопья и шрот из них, отруби |
Афлатоксин B1 |
0,005 |
|
|
из пшеницы |
Дезоксиниваленол |
0,7 |
|
|
из ячменя |
1,0 |
||
|
из пшеницы, ячменя, кукурузы |
Зеараленон |
1,0 |
|
|
Продукты белковые из семян зерновых, зернобобовых и других культур: - напитки, в т.ч. сквашенные; тофу и окара - напитки концентрированные, сгущенные и сухие; тофу и окара сухие |
Афлатоксин B1 |
0,005 |
|
|
из пшеницы |
Дезоксиниваленол |
0,7 |
|
|
из ячменя |
1,0 |
||
|
из пшеницы, ячменя, кукурузы |
Зеараленон |
1,0 |
|
|
БАД на основе преимущественно пищевых волокон (целлюлоза, ртуть пектин, гумми, микрокристаллическая целлюлоза, отруби, фруктоолигосахара, хитозан и др. полисахариды) |
регламентируются по сырью |
||
|
БАД на основе переработки мясомолочного сырья, в т.ч. субпродуктов, птицы; членистоногих, земноводных, продуктов пчеловодства (маточное молочко, прополис и др.)-сухие для БАД на основе переработки молочного сырья |
Афлатоксин М1 |
0,0005 |
2.2 Методики, определяющие предельно допустимые уровни для сырья и кормов для животных
Предельно допустимые уровни содержания микотоксинов в сырье растительного происхождения для комбинированных кормов нормирует Технический Регламент таможенного союза «О безопасности зерна».
Данный технический регламент разработан в соответствии с Соглашением о единых принципах и правилах технического регулирования в Республике Беларусь, Республике Казахстан и Российской Федерации от 18 ноября 2010 г[33].
Технический регламент «О безопасности зерна» разработан с целью установления единых требований к зерну на единой территории Таможенного союза, обеспечения свободного перемещения зерна, которое выпускается в обращение на территории Таможенного союза[33].
Настоящий технический регламент распространяется на зерно, выпускаемое в обращении на территории Таможенного союза, которое используется для пищевых и кормовых целей, при этом не распространяется на зерно, которое предназначено для семенных целей[33].
Этот документ устанавливает обязательные требования к зерну и связанные с ним требования к процессам производства, хранения, перевозки, реализации и утилизации зерна, в целях защиты жизни и здоровья человека, имущества, окружающей среды, жизни и здоровья животных и растения[33].
Маркировка зерна, помещенного в потребительскую упаковку (зерно на кормовые цели), и зерна в транспортной таре должна содержать информацию о виде зерна, годе урожая, месте происхождения, назначения зерна (на пищевые или кормовые цели, на хранение и (или) обработку, на экспорт), количестве зерна (в единицах массы), наименовании и месте нахождения заявителя, о наличии в зерне генно-модифицированных организмов в случае если содержание указанных организмов в зерне составляет более 0,9%, о сроке годности и условиях хранения зерна (для зерна, предназначенного на кормовые цели и упакованного в потребительскую упаковку)[33].
Партия поставляемого зерна, не отвечающая требования данного регламента, подлежит возврату или утилизации. Уполномоченный орган государства - члена Таможенного союза, на территории которого выявлено зерно, не соответствующее требованиям настоящего технического регламента, принимает решение о проведении экспертизы зерна и формирует комиссию в составе представителей уполномоченного органа, изготовителя (собственника) и получателя зерна, которая отбирает образец и направляет ее в аккредитованную испытательную лабораторию (центр), включенную в Единый реестр органов по сертификации и испытательных лабораторий (центров) Таможенного союза, для проведения испытаний. Выбор аккредитованной лаборатории (центра) осуществляется комиссией. На основании результатов испытаний комиссия принимает решение о возврате или утилизации зерна. Возврат и утилизация зерна осуществляются в соответствии с требованиями национального экологического законодательства и национального законодательства в области карантина растений государства - члена Таможенного союза. При утилизации зерна, не соответствующего требованиям настоящего технического регламента, изготовитель (собственник) обязан представить в уполномоченный орган государства - члена Таможенного союза документ, подтверждающий факт утилизации такого зерна, в порядке, установленном национальным законодательством государства - члена Таможенного союза[33].
Оценка соответствия зерна требованиям данного документа проводится в формах подтверждения (декларирования) соответствия зерна; государственного контроля (надзора) за соблюдением требований настоящего документа в отношении зерна и связанных с требованиями к нему процессов производства, хранения, перевозки, реализации и утилизации зерна. Заключается в осуществлении производственного контроля, проведении испытаний образцов зерна и формировании и анализе документации[33].
Содержание микотоксинов в комбикормах для крупного рогатого скота и птицы нормирует ГОСТр 51899-2002 «Гранулированные комбикорма; Общие технические условия».
Данный документ разработан ОАО «Всероссийский научно-исследовательский институт комбикормовой промышленности» (ОАО «ВНИИКП»); Научно-исследовательским институтом пушного звероводства и кролиководства им. В.А. Афанасьева (НИИПЗК); Всероссийским научно-исследовательским и технологическим институтом птицеводства (ВНИТИП). Внесен Техническим комитетом по стандартизации ТК 4 "Комбикорма, белково-витаминные добавки, премиксы". Настоящий стандарт распространяется на гранулированные комбикорма для сельскохозяйственных животных (крупный рогатый скот, овцы, птицы), а также для непродуктивных животных (кошек, собаки др.)[25].
Контроль за содержанием микотоксинов осуществляется в соответствии с порядком, установленным производителем продукции по согласованию с территориальными органами государственного ветеринарного надзора Минсельхоза России и гарантирующим их безопасность[25].
Содержание микотоксинов в комбикормах для свиней нормирует ГОСТ 51550-2000 «Комбикорма-концентраты для свиней; Общие технические условия»[26].
Разработан ОАО «Всероссийский научно-исследовательский институт комбикормовой промышленности» (ОАО «ВНИИКП»); Всероссийским научно-исследовательским институтом животноводства (ВИЖ); Всероссийским научно-исследовательским институтом свиноводства (ВНИИС). Внесен Техническим комитетом по стандартизации ТК 4 "Комбикорма, белково-витаминные добавки, премиксы"[26].
Настоящий стандарт распространяется на комбикорма-концентраты для поросят-сосунов в возрасте до двух месяцев и отъемышей в возрасте от двух до четырех месяцев, ремонтного молодняка свиней в возрасте от четырех до восьми месяцев, холостых, супоросных и подсосных маток, хряков-производителей, мясного. Беконного откорма и откорма свиней до жирных кондиций[26].
Содержание микотоксинов в комбикормах для пушных зверей, кроликов и нутрий нормирует ГОСТ р 51166-98 «Комбикорма для пушных зверей, кроликов и нутрий; Технические условия»[27].
Данный стандарт разработан ОАО «Всероссийский научно-исследовательский институт комбикормовой промышленности» (ОАО «ВНИИКП»). Внесен Техническим комитетом по стандартизации ТК 4 "Комбикорма, белково-витаминные добавки, премиксы"[27].
Настоящий стандарт распространяется на комбикорма для пушных зверей (лисиц, песцов, соболей, норок), кроликов и нутрий, вырабатываемые на предприятиях всех форм собственности[27].
Таблица 2 Сводная таблица максимально допустимых уровней микотоксинов в сырье и кормах для животных [25],[26],[27],[33]
|
Наименование(1) |
Показатель(2) |
ПДУ (мг/кг)(3) |
Примечание(4) |
|
|
Злаковые (пшеница, ячмень, овес, рожь, тритикале, овес, ячмень, просо, гречиха, рис, кукуруза, сорго) |
Афлатоксин B1 |
0,02 |
||
|
Сумма афлатоксинов B1, B2, G1, G2 |
0,02 |
|||
|
Охратоксин А |
0,05 |
|||
|
Т-2 токсин |
0,1 |
|||
|
Дезоксиниваленол |
1,0 |
|||
|
Зеараленон |
1,0 |
|||
|
Фумонизин |
5,0 |
Кукуруза |
||
|
Зернобобовые культуры (горох, люпин, кормовые бобы, вика, нут, чечевица, чина) |
Афлатоксин B1 |
0,02 |
||
|
Сумма афлатоксинов B1, B2, G1, G2 |
0,02 |
|||
|
Охратоксин А |
0,05 |
|||
|
Т-2 токсин |
0,1 |
|||
|
Дезоксиниваленол |
1,0 |
|||
|
Зеараленон |
1,0 |
|||
|
Маслиничные (соя, рапс, подсолнечник, шрот подсолнечный, соевый шрот, жмых подсолнечный, жмых соевый) |
Афлатоксин B1 |
0,02 |
||
|
Сумма афлатоксинов B1, B2, G1, G2 |
0,02 |
|||
|
Охратоксин А |
0,05 |
|||
|
Т-2 токсин |
0,1 |
|||
|
Дезоксиниваленол |
1,0 |
|||
|
Зеараленон |
1,0 |
|||
|
Комбикорма для крупного рогатого скота, овец |
Афлатоксин B1 |
0,05 |
Дойным коровам |
|
|
- |
Стельным коровам |
|||
|
0,1 |
Телятам в возрасте более 4 мес. |
|||
|
0,1 |
Овцам в возрасте более 4 мес. |
|||
|
Патулин |
- |
Дойным коровам |
||
|
Не допускается |
Стельным коровам |
|||
|
- |
Телятам в возрасте более 4 мес. |
|||
|
- |
Овцам в возрасте более 4 мес. |
|||
|
Дезоксиниваленол |
1,0 |
Дойным коровам |
||
|
1,0 |
Стельным коровам |
|||
|
1,0 |
Телятам в возрасте более 4 мес. |
|||
|
1,0 |
Овцам в возрасте более 4 мес. |
|||
|
Комбикорма для птицы |
Охратоксин |
0,5 |
Курам-несушка |
|
|
0,3 |
Цыплятам |
|||
|
0,3 |
При откорме птицы |
|||
|
Афлатоксин B1 |
0,025 |
Курам-несушка |
||
|
0,025 |
Цыплятам |
|||
|
0,025 |
При откорме птицы |
|||
|
Патулин |
0,05 |
Курам-несушка |
||
|
0,05 |
Цыплятам |
|||
|
0,05 |
При откорме птицы |
|||
|
Дезоксиниваленол |
1,0 |
Курам-несушка |
||
|
1,0 |
Цыплятам |
|||
|
1,0 |
При откорме птицы |
|||
|
Т-2 токсин |
0,1 |
Курам-несушка |
||
|
0,1 |
Цыплятам |
|||
|
0,1 |
При откорме птицы |
|||
|
Комбикорма для свиней |
Афлатоксин B1 |
- |
Поросятам-сосунам в возрасте до 2 мес. |
|
|
0,05 |
Поросятам-отъемышам в возрасте от 2 до 4 мес. |
|||
|
- |
Ремонтному молодняку свиней в возрасте от 4 до 8 мес. |
|||
|
- |
Взрослым свиньям (холостым супоросным и подсосным маткам и хрякам) |
|||
|
2,0 |
Откормочным свиньям массой до 50 кг |
|||
|
3,0 |
Откормочным свиньям массой от 50 кг и выше |
|||
|
Зеараленон |
0,035 |
Поросятам-сосунам в возрасте до 2 мес. |
||
|
0,035 |
Поросятам-отъемышам в возрасте от 2 до 4 мес. |
|||
|
0,035 |
Ремонтному молодняку свиней в возрасте от 4 до 8 мес. |
|||
|
0,035 |
Взрослым свиньям (холостым супоросным и подсосным маткам и хрякам) |
|||
|
2,0 |
Откормочным свиньям массой до 50 кг |
|||
|
3,0 |
Откормочным свиньям массой от 50 кг и выше |
|||
|
Патулин |
Не допускается |
Поросятам-сосунам в возрасте до 2 мес. |
||
|
Не допускается |
Поросятам-отъемышам в возрасте от 2 до 4 мес. |
|||
|
Не допускается |
Ремонтному молодняку свиней в возрасте от 4 до 8 мес. |
|||
|
Не допускается |
Взрослым свиньям (холостым супоросным и подсосным маткам и хрякам) |
|||
|
0,5 |
Откормочным свиньям массой до 50 кг |
|||
|
0,5 |
Откормочным свиньям массой от 50 кг и выше |
|||
|
Дезоксиниваленол |
1,0 |
Поросятам-сосунам в возрасте до 2 мес. |
||
|
1,0 |
Поросятам-отъемышам в возрасте от 2 до 4 мес. |
|||
|
1,0 |
Ремонтному молодняку свиней в возрасте от 4 до 8 мес. |
|||
|
1,0 |
Взрослым свиньям (холостым супоросным и подсосным маткам и хрякам) |
|||
|
1,0 |
Откормочным свиньям массой до 50 кг |
|||
|
1,0 |
Откормочным свиньям массой от 50 кг и выше |
|||
|
Комбикорма для пушных зверей, кроликов и нутрий |
Афлатоксин В1 |
0,025 |
Для молодняка и взрослых пушных зверей, кроликов и нутрий в период беременности и лактации |
|
|
0,05 |
Для взрослых пушных зверей, кроликов и нутрий на откорме |
|||
|
Зеараленон |
Не допускается |
Для молодняка и взрослых пушных зверей, кроликов и нутрий в период беременности и лактации |
||
|
2,0 |
Для взрослых пушных зверей, кроликов и нутрий на откорме |
|||
|
Патулин |
Не допускается |
Для молодняка и взрослых пушных зверей, кроликов и нутрий в период беременности и лактации |
||
|
0,5 |
Для взрослых пушных зверей, кроликов и нутрий на откорме |
|||
|
Дезоксиниваленол |
1,0 |
Для молодняка и взрослых пушных зверей, кроликов и нутрий в период беременности и лактации |
||
|
1,0 |
Для взрослых пушных зверей, кроликов и нутрий на откорме |
2.3 Методики определения концентрации микотоксинов
Для определения микотоксинов существует два распространенных метода:
· Хроматографический анализ
· Иммуноферментный метод
Хроматографический метод анализа основан на распределении компонентов смеси между двумя фазами: неподвижной и подвижной. Для определения микотоксинов используют жидкостную или газовую хроматографию. Выбор хроматографического метода анализ основан на агрегатном состоянии исследуемой пробы и вида определяемого микотоксина. Нормативные документы, определяющие хроматографический метод анализа: ГОСТ 28001-88, ГОСТ 28038-89, и др.
Однако наиболее распространенным методом является иммуноферментный метод. Его основные преимущества заключаются в том, что за один эксперимент можно проверить большое количество проб, а также этот метод существенно дешевле.
Иммуноферментный метода анализа основан на использовании моноклональных антител (антитела, реагирующие на один определенный вид микотоксина). Нормативные документы, определяющие хроматографический метод анализа: ГОСТ Р 52471-2005.
Этапы проведения иммуноферментного метода определения микотоксина[31],[34]:
1. Подготовка проб
Подготовка пробы заключается в измельчение исследуемого продукта до порошкообразного состояния и дальней шей экстракции.
2. Экстракция пробы
Навески пробы массой 10 г помещают в конические колбы, далее к ним добавляют 50 см3 смеси ацетонитрила и воды. Колбы закрывают пробками и интенсивно встряхивают 3-4 раза так, что бы избежать попадания содержимого на горлышко и пробку, далее оставляют на 16 часов при комнатной температуре (18-22°С). Затем колбу вновь встряхивают 3-4 раза и содержимое фильтруют через бумажный фильтр в другие колбы. Полученные фильтраты являются экстрактами
3. Добавление конъюгата
В лунки планшета( которые содержат связанное антитело, которое является спецефическим для определяемого вещества) добавляется 100 мкл коньюгата. Количество добавляемых лунок зависит от количества исследуемых проб + количества лунок, в которых будут находится контрольные образцы
4. Добавление контрольных и исследуемых образцов
Для построения калибровочной кривой используются контрольные образцы с известной концентрацией (0; 0,2; 0,4; 0,6; 0,8; 1 мг/кг) исследуемого микотоксина (как правило, такие растворы предварительно закупаются, а не подготавливаются перед проведением исследования). Далее добавляется 100 мкл исследуемого образца (в другие лунки планшета).
5. Перемешивание и инкубация
В лунки, заполненные образцами, погружается пипетка или многоканальный дозатор (для каждой лунки используется свой наконечник). Ими осуществляется перемешивание проб (около 5 раз). Далее планшет закрывается стеклянной или пластиковой крышкой, соответствующего размера, и пробы инкубируют в течение 5 минут. На этом этапе исследуемые и контрольные образцы конкурируют за участки связывание с антителами. Соответственно, чем больше определяемого микотоксина в образце, тем меньше конъюгата связывается в лунках.
6. Промывание
После инкубации для удаления несвязанных веществ лунки промываются дистиллированной водой (около 5 раз). Это осуществляется либо ручным способом с помощью пипетки, либо автоматически в специальном устройстве для мойки планшетов «Washer».
7. Добавление субстрата
В лунки планшета добавляется 100 мкл субстрата (как правило, 3, 3', 5, 5'-тетраметилбензидин) с помощью пипетки или многоканального дозатора (для каждой лунки используется свой наконечник).
8. Инкубация
Далее пробы инкубируют в течение 5 минут. На этом этапе субстрат изменяет цвет( окрашивается в синий)в присутствии конъюгата. Таким образом, наблюдается зависимость - чем больше конъюгата свяжется, тем более синей будет окраска, то есть, чем больше исследуемого микотоксина в образце, тем менее синей будет окраска пробы.
9. Добавление стоп-раствора
В лунки планшета добавляется стоп-раствор (прозрачная жидкость, содержащая H2SO4) по 100 мкл для остановки ферментативной реакции. При этом окраска раствора меняется с синей на желтую.
10. Анализ оптической плотности в спектрофотометре
Далее спектрофотометр определяет оптическую плотность растворов при длине волны 650 нм. То есть, прибор определяет степень окрашенности растворов.
11. Анализ результатов
В результате того, что на планшете присутствуют контрольные образцы, по ним строится калибровочная кривая для количественного определения микотоксинов. Далее с этой калибровочной кривой сравнивают полученные измерения оптической плотности и определяют точную концентрацию микотоксина в исследуемых образцах.
Глава 3. Оценка экологической опасности микотоксинов, содержащихся в пробах сырья и комбинированных кормов для животных
В результате прохождения практики в испытательной лаборатории «Тест-Пущино», крупнейшая частная независимая испытательная лаборатория в России, специализирующаяся на анализе пищевой продукции, продовольственного сырья, кормов для животных и воды, аккредитованная Росстандартом РФ в системе ГОСТр ИСО/МЭК17025 с 1994 года, были получены результаты анализа сырья и кормов для сельскохозяйственных животных. По просьбе вышеуказанной лаборатории невозможно указать реальные названия компаний, предоставивших свою продукцию для анализа, но обозначим их как «А» и «Б». Компания «А» является крупным поставщиком комбинированных кормов для сельскохозяйственных животных, а компания «Б» помимо производства кормов, занимается свиноводческой, птицеводческой деятельностью и мясопереработкой. Обе компании имеют филиалы в западной и центральной части России (Брянск, Курск, Липецк, Пенза и т.д.).
Компания «А» предоставила на анализ 229 проб кукурузы, 4 пробы сои и 7 проб пшеницы, используемой в качестве сырья для кормов. Ниже представлена таблица с пробами, имеющими превышение ПДУ по содержанию в них микотоксинов. Полная таблица с результатами анализа данных проб приведена в приложении.
Таблица 3 Сводная таблица проанализированных проб Компании "А", имеющих превышение ПДУ
|
№(1) |
Дата проведения анализа(2) |
Продукция(3) |
Т-2 токсин, мкг/кг(4) |
HT-2 токсин, мкг/кг(5) |
T-2 + HT-2 токсины, мкг/кг(6) |
|
|
1 |
10.12.2012 |
кукуруза |
2832 |
3178 |
6010 |
|
|
2 |
06.12.2012 |
кукуруза |
2457,5 |
2688,8 |
5146,3 |
|
|
3 |
27.12.2012 |
кукуруза |
2444,7 |
1810 |
4254,7 |
|
|
4 |
04.12.2012 |
кукуруза |
2180 |
2440 |
4620 |
|
|
5 |
11.12.2012 |
кукуруза |
1971,3 |
2338,8 |
4310,1 |
|
|
6 |
28.12.2012 |
кукуруза |
1611,8 |
2755,6 |
4367,4 |
|
|
7 |
10.01.2013 |
кукуруза |
1581,4 |
1772,9 |
3354,3 |
|
|
8 |
03.12.2012 |
кукуруза |
1538,1 |
1721,2 |
3259,3 |
|
|
9 |
07.12.2012 |
кукуруза |
1483 |
1530 |
3013 |
|
|
10 |
17.12.2012 |
кукуруза |
1389,4 |
1364 |
2753,4 |
|
|
11 |
18.12.2012 |
кукуруза |
1367,1 |
1340 |
2707,1 |
|
|
12 |
24.12.2012 |
кукуруза |
1314 |
1236,7 |
2550,7 |
|
|
13 |
17.12.2012 |
кукуруза |
1282,4 |
1085,6 |
2368 |
|
|
14 |
12.12.2012 |
кукуруза |
1251,1 |
1075 |
2326,1 |
|
|
15 |
14.12.2012 |
кукуруза |
1217 |
982,5 |
2199,5 |
|
|
16 |
11.01.2013 |
кукуруза |
1156 |
952,9 |
2108,9 |
|
|
17 |
25.12.2012 |
кукуруза |
1091,8 |
897,8 |
1989,6 |
|
|
18 |
14.12.2012 |
кукуруза |
1020 |
777,5 |
1797,5 |
|
|
19 |
18.01.2013 |
кукуруза |
939 |
838 |
1777 |
|
|
20 |
21.01.2013 |
кукуруза |
916,4 |
1439,5 |
2355,9 |
|
|
21 |
26.12.2012 |
кукуруза |
823,5 |
650 |
1473,5 |
|
|
22 |
19.12.2012 |
кукуруза |
736,5 |
626,7 |
1363,2 |
|
|
23 |
14.01.2013 |
кукуруза |
730,9 |
763,5 |
1494,4 |
|
|
24 |
28.12.2012 |
кукуруза |
698,8 |
722,2 |
1421 |
|
|
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
|
|
25 |
15.01.2013 |
кукуруза |
694 |
997 |
1691 |
|
|
26 |
29.01.2013 |
кукуруза |
667 |
1361 |
2028 |
|
|
27 |
21.12.2012 |
кукуруза |
658,8 |
508,9 |
1167,7 |
|
|
28 |
16.01.2013 |
кукуруза |
624 |
643 |
1267 |
|
|
29 |
22.01.2013 |
кукуруза |
616,9 |
1333,8 |
1950,7 |
|
|
30 |
03.12.2012 |
кукуруза |
601,8 |
552,1 |
1153,9 |
|
|
31 |
25.01.2013 |
кукуруза |
558 |
551 |
1109 |
|
|
32 |
24.12.2012 |
кукуруза |
542,4 |
466,7 |
1009,1 |
|
|
33 |
28.12.2012 |
кукуруза |
522,3 |
512,2 |
1034,5 |
|
|
34 |
05.12.2012 |
кукуруза |
470,8 |
440,8 |
911,6 |
|
|
35 |
28.12.2012 |
кукуруза |
466,4 |
451,3 |
917,7 |
|
|
36 |
21.01.2013 |
кукуруза |
464,3 |
472,7 |
937 |
|
|
37 |
14.12.2012 |
кукуруза |
457,5 |
543,8 |
1001,3 |
|
|
38 |
28.01.2013 |
кукуруза |
453 |
1120 |
1573 |
|
|
39 |
28.01.2013 |
кукуруза |
431 |
523 |
954 |
|
|
40 |
29.12.2012 |
кукуруза |
418,7 |
209,3 |
628 |
|
|
41 |
17.01.2013 |
кукуруза |
407 |
920 |
1327 |
|
|
42 |
30.01.2013 |
кукуруза |
345,5 |
393 |
738,5 |
|
|
43 |
10.12.2012 |
кукуруза |
317,4 |
286,9 |
604,3 |
|
|
44 |
01.02.2013 |
кукуруза |
305,6 |
344,7 |
650,3 |
|
|
45 |
09.01.2013 |
кукуруза |
230,6 |
184,8 |
415,4 | ...
Подобные документы
Определение афлатоксинов в пшенице с целью развития производства качественных, безопасных продуктов питания. Оценка продукции на содержание микотоксинов. Анализ методов определения афлатоксинов в пшенице. Высокоэффективная жидкостная хроматография.
курсовая работа [74,7 K], добавлен 15.10.2016Значение животных в биосфере и жизни человека: формировании ландшафта, жизни растений. Воздействие человека на животных, причины вымирания животных: переселение животных, прямое и косвенное влияние человека. Мероприятия по охране животного мира.
контрольная работа [26,9 K], добавлен 24.11.2007Роль животных в биосфере и жизни человека. Воздействие человека на животных. Воздействие производственных процессов в АПК на животный мир. Охрана охотничьих животных, промысловых рыб, других промысловых и непромысловых животных, редких животных. Заповедни
курсовая работа [59,7 K], добавлен 23.10.2004Реакция растений на облучение. Варианты возможного радиационного воздействия и его влияние на иммунитет. Сроки гибели животных после воздействия радиации в летальных дозах. Хозяйственно-полезные качества животных, подвергшихся воздействию радиации.
реферат [1,1 M], добавлен 20.07.2010Основные понятия и определения. Нормирование качества воздуха. Нормирование качества воды. Нормирование качества почвы. Предельно допустимые концентрации вредных веществ в продуктах питания. Классы опасности химических соединений.
реферат [24,2 K], добавлен 07.02.2004Воздействие радиации на здоровье человека; требования к ограничению техногенного облучения; дозовые коэффициенты. Отслеживание активности осколков деления через различные промежутки времени после остановки реактора; оценка их экологической опасности.
дипломная работа [2,6 M], добавлен 20.07.2012Краткая история предприятия, его стратегическое значение, оценка экологической опасности, производственно-технологическая характеристика. Общая оценка уровня экологической опасности предприятий цветной металлургии на предприятии, средства защиты.
контрольная работа [317,1 K], добавлен 06.03.2014Общие понятия об атомных реакторах, ядерная энергетика и экология. Единицы измерения, используемые в радиационной экологии человека. Токсичность радионуклидов и пути их попадания в организм человека, накопление в продуктах питания и кормах животных.
курсовая работа [974,9 K], добавлен 18.04.2011Шум как экологический фактор современности. Влияние уровня шума, создаваемого электронными музыкальными инструментами на слух человека. Звуки, издаваемые камнями, насекомыми, морем. Основные источники шума в городах, его предельно допустимые уровни.
презентация [1,1 M], добавлен 11.09.2010Современное определение понятия "экология". Прикладные аспекты экологической науки. Значение развития охраны природы для жизни человека и животных. Сущность основных экологических проблем. Влияние загрязнения окружающей среды на здоровье человека.
реферат [13,1 K], добавлен 22.12.2010Основные физические характеристики шума, его действие на организм человека и животных. Расчет уровней звукового давления в расчетных точках и шумозащитные мероприятия. Уровни доз радиационного облучения населения. Химические и физические свойства урана.
курсовая работа [4,6 M], добавлен 16.05.2011Критерии экологической безопасности, ее правовое обеспечение и нормативные уровни. Экологические риски: основные понятия, цена, термины управления и оценки опасности. Глобальный, региональный и локальный уровни реализации экологической безопасности.
контрольная работа [22,6 K], добавлен 18.03.2010Экологический мониторинг. Животный мир как часть биосферы. Пастбищный биогеоценоз. Типологические особенности пастбищ. Нарушение срока выпаса животных. Эрозия почв как источник неблагоприятного воздействия. Культурно-техническое состояние пастбищ.
презентация [3,0 M], добавлен 01.04.2014Порядок и регламент проведения государственной экологической экспертизы. Формирование экспертной комиссии. Вред, причиненный нарушением экологического законодательства. Презумпции экологической опасности. Оценка воздействия на окружающую среду.
контрольная работа [30,0 K], добавлен 29.01.2011Антропогенное воздействие человека на литосферу и атмосферу. Методики исследования загрязнения окружающей среды и оценки ее качества. Оценка воздействия загрязняющих веществ промышленных предприятий Волгоградской агломерации на состояние атмосферы.
диссертация [579,3 K], добавлен 02.09.2009Газотранспортная система "Газпром трансгах Ухта", ее структура и оценка экологической эффективности. Оценка воздействия компрессорных станций на окружающую среду. Техногенные опасности и профилактика их негативного воздействия на воздушный бассейн.
дипломная работа [88,8 K], добавлен 09.11.2016Понятие и причины распространенности бездомных животных в современных городах. Четыре основные поведенческие стратегии бездомных собак по способу добычи корма. Порядок и нормативно-законодательная основа создания приюта для животных в Хабаровске.
курсовая работа [53,9 K], добавлен 10.04.2011Экологическая безопасность: атмосфера, гидросфера, литосфера, биосфера. Факторы, источники, последствия экологической опасности: утоньшение озонового слоя, сокращение биоразнообразия. Зона экологического бедствия и зона чрезвычайной экологической ситуации
реферат [29,1 K], добавлен 19.10.2007Рыбы, как переносчики опасных болезней и токсинов: пищевые токсикоинфекции и отравление альговыми токсинами. Рыбы, как переносчики возбудителей гельминтозов человека и животных: описторхоз, псовдоамфистомоз и клонорхоз, дифиллоботриоз, анизакидоз.
реферат [37,4 K], добавлен 07.04.2018Основные законы Российской Федерации, регулирующие вопросы охраны природы. Исследование воздействия на здоровье человека загрязнений атмосферы, почвы и воды. Разработка проекта по защите окружающей среды, оценка его эколого-экономической эффективности.
курсовая работа [341,1 K], добавлен 22.06.2011
