Особенности микробиоценозов кожи и кишечника при экземе на фоне инвазии Blastocystis hominis

Размещено на http://www.allbest.ru/

Размещено на http://www.allbest.ru/

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Особенности микробиоценозов кожи и кишечника при экземе на фоне инвазии Blastocystis hominis

Общая характеристика работы

По характеру изучаемых процессов и явлений диссертационная работа относится к области экологии сообществ, в частности - микробиоценозов. В работе изложены результаты исследований видового многообразия миробиоты кожи и кишечника на фоне бластоцистной инвазии, охарактеризованы особенности взаимоотношений внутри бактериальных сообществ, обоснована роль простейших Blastocystis hominis в формировании дисбиотических изменений микробного консорциума изученных биотопов.

Актуальность темы

Организм человека представляет собой экологическую нишу для множества разнообразных микроорганизмов, заселяющих определенные биотопы. Микробиоценозы тела человека - сложные системы, отличающиеся не только чрезвычайной многокомпонентностью, но и количественным разнообразием представителей микробиоты. (Бондаренко, Грачева, Мацулевич, 2003).

Кишечный микробиоценоз ряд исследователей (Воробьев, Абрамов, 1997; Буторова, Калинин, 2001) рассматривают как своеобразный экстракорпоральный орган макроорганизма, где в единой системе существуют корреляционные связи между микроорганизмами.

Нарушение колонизационной резистентности кишечника, связанное

с изменением состава нормальной микробиоты, способствует формированию дисбиоза, развитию экзогенной и эндогенной инфекции (Мельникова, 1997; Билимова, 2000; Белова с соавт., 2004; Cammarota, Ogava, 1998). Также очевидна роль дисбактериоза кишечника в формировании аллергодерматозов.

Микробиота кожи, с одной стороны, является одним из защитных механизмов организма, а с другой - неисчерпаемым резервуаром возбудителей экзогенных и эндогенных инфекций (Сытник, 1989; Акрут, 2003). Именно она образует экологический барьер, обеспечивающий колонизационную резистентность и деконтаминацию организма, воздействуя на иммунную систему (Трапезов, Леонтьева, Бондаренко, 1992; Ришко, 2004). По состоянию аутофлоры кожи можно судить о здоровье человека (Иванов, 1989).

Нарушение нормоценозов способствует хронизации патологических процессов, в частности дерматозов. Однако до настоящего времени, микробиота кожи при одном из наиболее часто встречающихся дерматозов - экземе, остается малоизученной. До сих пор не известны показатели экологической характеристики этого важного микробиоценоза, состояние которого можно рассматривать как индикатор здоровья человека.

А.А. Воробьев, Л.О. Иноземцева, Ю.В. Несвижский (1996), De Vos J., De Boer, F.D. Haas (1995) считают, что возникновение кожных заболеваний в определенной мере связано с нарушением микроэкологического баланса кишечника, в частности, с паразитарными инвазиями (гельминтоз, лямблиоз и др.), выполняющими роль дестабилизирующего фактора экосистемы. Однако в литературе отсутствуют данные о роли отдельных возбудителей паразитозов в развитии дисбиотических состояний, являющихся пусковым механизмом для иммунопатологических изменений в коже и поддерживающих хроническое течение заболевания (Espinoza, Soligen, 1998). В связи с этим, особую актуальность приобретает широко распространенная «новая» протозойная инвазия - бластоцистоз, обусловленная паразитированием простейших Blastocystis hominis в толстом отделе кишечника (Чайка, 1992; Торопова, Сафронова, Гордеева, 1998; Бугеро, 2004, Zierdt, 1988). Однако эта проблема до сих пор остается неизученной.

Цели и задачи исследования

Цель исследования - изучить особенности микробиоценозов кожи и кишечника при экземе на фоне инвазии Blastocystis hominis.

Для достижения поставленной цели были решены следующие задачи:

1. Изучить соотношение облигатной и условно-патогенной микрофлоры кишечника при экземе в зависимости от формы, продолжительности заболевания и возраста обследованных лиц.

2. Выявить частоту встречаемости Blastocystis hominis в кишечнике обследованных лиц.

3. Изучить состояние бактериальной микробиоты кожи при экземе.

4. Дать экологическую оценку микробиоценоза кожи при экземе.

Научная новизна

Впервые изучены особенности микробиоценозов кожи и кишечника при экземе на фоне протозойной инвазии - бластоцистоза. Выявлено значительное снижение содержания облигатной микробиоты кишечника и расширение спектра условно-патогенных видов, что свидетельствует о глубоких дисбиотических изменениях данного биотопа.

Показана высокая инвазированность больных экземой простейшими Blastocystis hominis. Наибольшее количество простейших отмечалось в фекалиях больных с истинной экземой и у лиц со стажем заболевания более 5 лет. Установлено увеличение инвазированности этими возбудителями у больных старших возрастных группах.

Охарактеризован видовой состав бактериальных ассоциаций кожи при экземе. Выявлено снижение доминирования основных симбионтов на фоне количественного увеличения представителей добавочной и транзиторной групп, что свидетельствует о выраженных нарушениях биоценотических связей в микробиоценозе кожи.

Впервые дана экологическая характеристика особенностей микропейзажа кожи при экземе. Показаны глубокие перестройки экосистемы микроорганизмов кожи, сопровождающиеся сменой ценотипа и иерархии экологических групп.

Теоретическая и практическая значимость работы

Полученные в работе данные расширяют теоретические представления о характере межмикробных взаимодействий, определяющих формирование и поддержание микробиоценозов кожи и кишечника человека, углубляют представления взаимоадаптации Blastocystis hominis и макроорганизма, в частности, позволяют выявить механизмы выживания патогена в условиях экологического барьера нормальной микробиоты.

Выраженные дисбиотические сдвиги микробного сообщества кишечника у больных экземой диктуют необходимость проведения регулярных исследований кишечного микропейзажа при данной патологии.

Высокая частота обнаружения бластоцист при экземе позволяет рассматривать данных простейших как этиопатогенетический ко-фактор развития этого заболевания.

Полученные данные используются в учебном процессе на экологическом факультете ГОУ ВПО «Ульяновский государственный университет».

На защиту выносятся:

1. Снижение уровня содержания облигатной микробиоты и увеличение представителей условно-патогенной группы микробиоценоза кишечника при экземе. Выраженность изменений микропейзажа кишечника зависит от возраста обследованных лиц и не связана с формой и продолжительностью заболевания.

2. Высокая степень инвазированности простейшими Blastocystis hominis у больных экземой (73,3%). Изменение встречаемости простейших Blastocystis hominis в зависимости от возраста больных, формы и продолжительности заболевания.

3. Структура микробного сообщества кожи при инвазии Blastocystis hominis. Структурная перестройка микробиоценоза кожи, сопровождающаяся сменой абсолютных доминант и увеличением видового разнообразия при экземе.

4. Глубокие перестройки пространственной организации и иерархии экологических групп микроорганизмов при изменении микробиоценоза кожи. Высокая частота встречаемости Staphуlococcus aureus (62,5%) в микробиоте кожи обследованных лиц.

Апробация работы

Результаты исследований доложены на 2-й Всероссийской научной конференции «Актуальные вопросы здоровья и среды обитания современного человека» (Ульяновск, 2005); 3-й Всероссийской научно-практической конференции «Проблемы экологии и охраны природы. Пути их решения» (Ульяновск, 2006); 1-й конференции молодых ученых медико-биологической секции Поволжской ассоциации государственных университетов (Ульяновск, 2007).

Публикации

По теме диссертации опубликовано 12 работ, 1 из них в издании, рекомендованном ВАК РФ.

Структура и объем диссертации

Диссертация изложена на 140 страницах. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов, результатов собственных исследований, заключения, выводов, списка литературы, содержащего 233 наименования, в том числе 83 зарубежных. Работа иллюстрирована 19 таблицами, 12 рисунками и 1 приложением.

Содержание работы

экзема микробиоценоз экологический кишечник

Во введении обоснована актуальность темы, определены цель и задачи работы, сформулирована научная новизна, практическая значимость работы, изложены основные положения работы, выносимые на защиту.

Глава I содержит обзор отечественной и зарубежной литературы по данной проблеме. Анализируется многогранность научных подходов изучения особенностей микробиоценозов кожи и кишечника при дерматозах. Рассматриваются теоретические аспекты исследований паразитарных инвазий при патологиях.

Глава II посвящена материалам и методам исследований. Изучение микрофлоры кишечника у больных и лиц контрольной группы проводили согласно приказа Минздрава России от 09.06.2003 №231 «Об утверждении отраслевого стандарта «Протокол ведения больных. Дисбактериоз кишечника» (ОСТ 91500.11.0004-2003), на базе бактериологической лаборатории городской клинической больницы №1 г. Ульяновска. Забор фекалий для исследования производили по методике Б.А. Ефимова, Л.И. Кафарской (2002).

Количественный состав микрофлоры кожи, частоту встречаемости отдельных видов изучали по методике А.Б. Покатилова (1993), материал брали у больных с пораженных экзематозных и здоровых (интактных) участков кожи на различных биотопах тела - рука, нога, лицо, живот.

Посевы осуществляли на дифференциально-диагностические и элективные среды, такие как Эндо, Плоскирева, Левина, Сабуро, Блаурокка. Культуры, выросшие на питательных средах, подвергали групповой (анаэробные, неспорообразующие бактерии), родовой (лактобациллы, бифидобактерии, стрептококки, коринебактерии, дрожжеподобные грибы рода Candida), и видовой идентификации (стафилококки, микрококки, энтерококки, эшерихии). Морфологические и тинкториальные свойства выделенных культур изучали в мазках, окрашенных по Грамму.

Количество микроорганизмов подсчитывали по формулам: Х=20•n•k - для плотных сред, Х=2•k - для жидких сред, где: Х - количество микроорганизмов каждого вида (КОЕ/г); n - количество выросших колоний; k - разведение, из которого произведен посев с обратным знаком степени (Куваева, Ладодо, 1991).

Культивирование простейших B. hominis проводили с использованием сред Зиердта (1992) и Suresh CEM (1994).

Оценку кожного микробиоценоза проводили с использованием метода количественного выделения видов микроорганизмов, входящих в состав микробиоценоза (Сытник, 1989; Куваева, Ладодо, 1991).

Экологический анализ микробиоценоза кожи изучали с помощью индекса контагиозности, (Уиттекер, 1980), индекса флористической значимости видов (Наткевичайте-Иванаускене, 1985), видовое разнообразие сообществ микроорганизмов рассчитывали по формуле Р. Уиттекера (1980).

Полученные данные подвергали статистической обработке с использованием критерия t по Стьюденту. Для обработки данных использовался пакет прикладных программ для Microsoft Excel 2000.

Глава III состоит из 4 разделов и включает в себя изложение собственных результатов, полученных в ходе исследований.

В разделе 3.1. изложено состояние бактериальной эндофлоры кишечника у 120 больных.

Наиболее выраженные изменения были зафиксированы со стороны анаэробной флоры. Из представителей облигатно-анаэробной микробиоты кишечника обследованных отмечалось снижение бифидобактерий до значения lg 9,540,15 КОЕ/г (р<0,001). Показатель уровня содержания лактобактерий составил lg 7,870,11 КОЕ/г (p<0,001) (табл. 1).

Содержание эшерихий с нормальной ферментативной активностью и лактозонегативных кишечных палочек составило lg 7,960,12 КОЕ/г (p<0,001) и lg 2,61±0,34 КОЕ/г (p<0,001) соответственно. Наряду с этим, характерным микроорганизмом для микропейзажа кишечника обследованных являлась гемолитическая кишечная палочка - lg 2,32±0,35 КОЕ/г (в контрольной группе не обнаружена) (табл. 1).

Частота встречаемости других представителей семейства Enterobacteriaceae и Micrococcaceae, таких как клебсиеллы, золотистый и эпидермальный стафилококки составила 33,3%, 24,2% и 28,3 случаев соответственно. Уровень их содержания составил lg 2,37±0,32 KOE/г (p<0,001), lg 1,47±0,24 KOE/г (в контрольной группе не обнаружен) и lg 1,86±0,28 KOE/г (p<0,01) соответственно. Энтерококки были выявлены у 100% больных в количестве lg 7,88±0,12 KOE/г (p<0,001).

Дрожжеподобные грибы р. Candida у больных экземой были выявлены в 35% случаев (lg 2,26±0,29 KOE/г; p<0,001).

Следовательно, у больных экземой были выявлены значительные дисбиотические изменения микробиоты кишечника.

Сравнительный анализ исследования микропейзажа кишечника больных экземой при различных формах заболевания - микробной (МЭ) и истинной (ИЭ) экземой (61,7% и 38,3% соответственно) показал отсутствие зависимости характера дисбиотических изменений от формы заболевания.

В разделе 3.2. описаны особенности микробиоценоза кишечника в зависимости от продолжительности заболевания. С этой целью все обследованные были разделены на 4 группы по продолжительности заболевания экземой. I группу составили лица со стажем болезни до 1 года, у них экзема была выявлена впервые - 58 человек (48,3%), II группу - лица с продолжительностью заболевания от 1 года до 5 лет - 30 человек (25,0%); III группу - лица со стажем болезни более 5 лет - 32 человека (26,7%).

Анализ изучения микропейзажа кишечника при экземе в зависимости от продолжительности заболевания по сравнению с контрольной группой выявил снижение содержания представителей нормофлоры, таких как бифидобактерии, лактобактерии и типичные кишечные палочки во всех группах обследованных.

Таблица 1. Микробиоценоз кишечника при экземе

Микроорганизмы	Количественное содержание микрофлоры (Lg КОЕ/г) (М ± m)
	Больные экземой	Контрольная группа
Бифидобактерии	9,54±0,15*	10,78±0,08
Лактобактерии	7,87±0,11*	8,86±0,09
Эшерихии:
типичные	7,96±0,12*	8,89±0,06
гемолитические	2,32±0,35	-
лактозонегативные	2,61±0,34*	0,28±0,14
Энтерококки	7,88±0,12*	6,80±0,07
Клебсиеллы	2,37±0,32*	0,21±0,12
Стафилококк эпидермальный	1,86±0,28***	0,91±0,27
Стафилококк золотистый	1,47±0,24	-
Дрожжеподобные грибы р. Candida	2,26±0,29*	0,43 ±0,17
Клостридии	3,13±0,23*	0,80±0,23

Примечание: различия с контролем достоверны - * р<0,001; ** p<0,05;

*** p<0,01.

Содержание условно-патогенных микроорганизмов (клебсиеллы, энтерококки, эпидермальный и золотистый стафилококки, клостридии, гемолитическая и лактозонегативная кишечные палочки, грибы р. Candida), наоборот, возрастало. Выявленные изменения микробиоценоза кишечника не зависели от длительности заболевания (табл. 2).

В разделе 3.3. изложены возрастные особенности изменений микробиоценоза кишечника при экземе. При изучении I возрастной группы обследованных (10-20 лет) наблюдалось снижение облигатной микрофлоры в 50,0% случаев, II группы (21-30 лет) больных - 46,2%. Для III группы (31-40 лет) было характерно снижение облигатной микрофлоры в 50,0% случаев. Наибольший процент изменений в составе индигенной микробиоты кишечника приходился на IV группу (более 40 лет) и составлял 59,3%.

Высокая частота встречаемости энтерококков было характерна для III и IV групп, стафилококков и клебсиелл для I, III и IV, клостридий для III, дрожжеподобных грибов р. Candida для II возрастных групп.

Таблица 2. Количественное содержание микробиоценоза кишечника больных экземой в зависимости от продолжительности заболевания (lg KOE/г)

Микроорганизмы	I группа (до 1 года)	II группа (от 1 до 5 лет)	III группа (более 5 лет)	Контрольная группа
Бифидобактерии	9,47±0,21*	9,23±0,33*	9,96±0,30***	10,78±0,08
Лактобактерии	7,77±0,15*	7,83±0,22*	8,08±0,20*	8,86±0,09
Эшерихии:	8,05±0,17*	7,71±0,30*	8,04±0,13*	8,89±0,06
типичные
гемолитические	2,33±0,50	2,94±0,78	1,72±0,64	-
лактозонегативные	2,47±0,49*	3,10±0,73*	2,40±0,66*	0,28±0,14
Энтерококки	7,93±0,17*	7,78±0,22*	7,90±0,26*	6,80±0,07
Клебсиеллы	3,00±0,50*	2,15±0,64***	1,43±0,50***	0,21±0,12
Стафилококк эпидермальный	1,66±0,40	2,51±0,59***	1,60±0,52	0,91±0,27
Стафилококк золотистый	1,15±0,32	1,47±0,46	2,06±0,56	-
Дрожжеподобные грибы р. Candida	2,47±0,43*	1,83±0,58***	2,30±0,55*	0,43±0,17
Клостридии	3,10±0,30*	2,85±0,45*	3,45±0,50*	0,80±0,23

Примечание: различия с контролем достоверны - * р<0,001; ** p<0,05;

*** p<0,01.

Результаты изучения количественного содержания микробиоты кишечника больных экземой в различных возрастных группах выявили значительное снижение количества представителей облигатной микробиоты - бифидобактерий и лактобактерий. Содержание транзиторной микрофлоры (клебсиеллы, клостридии, грибы р. Candida и др.) наоборот увеличивалось, что могло быть следствием ингибиции облигатной микрофлоры кишечника. Отмечается появление добавочных видов, таких как стафилококки и гемолитические кишечные палочки (табл. 3).

В разделе 3.4. описана характеристика простейших Blastocystis hominis, как участников микробиоценоза кишечника.

Подраздел 3.4.1. содержит результаты по выявлению B. hominis у больных экземой, которые показали, что у 88 (73,3%) человек из 120 обследованных больных экземой были обнаружены бластоцисты. Вместе с тем, лица контрольной группы инвазированы B. hominis лишь в 5% случаев (4 человека).

Следует отметить, что частота встречаемости бластоцист в зависимости от пола обследованных больных экземой незначительно различалась. Среди обследованных мужчин B. hominis обнаруживались несколько чаще (75,6%), чем среди женщин (69,0%).

Таблица 3. Результаты микробиологического обследования больных экземой в различных возрастных группах

Микроорганизмы	Количество микроорганизмов (lg KOE/г, Мm)	Контрольная группа
	I (10-20 лет)	II (21-30 лет)	III (31-40 лет)	IV (более 40 лет)
Бифидобактерии	9,720,29*	9,300,52***	9,230,40*	8,940,19*	10,780,08
Лактобактерии	7,630,33*	7,680,31*	7,940,34***	7,370,11*	8,860,09
Энтерококки	8,100,40*	7,720,30***	8,080,40*	7,840,15*	6,800,07
Типичные кишечные палочки	7,850,23*	7,520,66**	7,990,24*	7,620,15*	8,890,06
Гемолитические кишечные палочки	2,211,16	2,561,11	2,461,08	2,270,43	-
Лактозонегативные кишечные палочки	2,091,11	0,480,48	3,341,12***	2,900,43*	0,280,14
Клебсиеллы	2,551,14**	1,650,91	1,980,90	2,520,40*	0,210,12
Эпидермальный стафилококк	0,740,74	1,870,85	2,360,90	1,930,34***	0,910,27
Золотистый стафилококк	2,490,91	0,450,45	0,840,59	1,590,31	-
Дрожжеподобные грибы р. Candida	1,740,91	3,721,04*	2,570,83***	2,050,34*	0,430,17
Клостридии	1,790,64	2,800,66***	3,640,74*	3,290,27*	0,800,23

Примечание: различия с контролем достоверны - *р<0,001; **p<0,05; ***p<0,01. Инвазированность бластоцистами при различных формах экземы была неодинаковой. Наибольшее количество простейших отмечалось в фекалиях больных с ИЭ (87,0%). Значительно меньше их было у больных с МЭ (64,9%)

Анализ частоты встречаемости простейших в зависимости от возрастной структуры также показал значительные различия. В I возрастной группе частота встречаемости бластоцист составила 50,0%. Во II и III группах частота встречаемости B.hominis возросла и составила 69,2% и 64,3% соответственно. Наиболее часто бластоцисты обнаруживались в IV возрастной группе (более 40 лет) - в 79,0% случаев (рис. 1).

Рис. 1. Инвазированность бластоцистами в возрастных группах, (%)

Значительные различия были обнаружены при анализе степени инвазированности бластоцистами в группах с различной продолжительностью заболевания. Полученные результаты свидетельствуют о том, что наиболее часто

B. hominis обнаруживали в фекалиях больных со стажем заболевания более 5 лет (87,5%), у больных со стажем от 1 до 5 лет - реже (70,0% случаев). У больных со стажем заболевания до 1 года частота встречаемости данных микроорганизмов составила 67,2% (рис. 2).

Таким образом, проведенные исследования выявили высокую распространенность (73,3%) условно-патогенного простейшего микроорганизма Blastocystis hominis в кишечнике при экземе. Значительных различий в обнаружении бластоцист среди мужчин и женщин обнаружено не было. Однако установлены значительные различия в зависимости от возраста больных, продолжительности и формы заболевания.

Рис. 2. Частота встречаемости бластоцист с учетом продолжительности заболевания, (%)

В подразделе 3.4.2. описана морфологическая организация бластоцист. Выявлены две морфологические формы B. hominis: вакуолярная и гранулярная.

Бластоцисты вакуолярной формы в препаратах из фекалий больных обнаруживались в 43,2%, на гранулярную приходилось 19,3%. Одновременное выявление вакуолярных и гранулярных форм составило 37,5% среди обследованных больных (рис. 3).

Размеры бластоцист варьировали в широких пределах, что позволило выделить следующие группы простейших: первая группа - размер простейших менее 6 мкм (22,7%); вторая группа - размер бластоцист от 6 до 15 мкм (71,6%); третья группа - размер более 15 мкм (5,7%).

Характерной морфологической особенностью вакуолярной формы бластоцист являлось наличие центрального тела (ЦТ), занимающего большую часть клетки. Полученные результаты показали, что на долю бластоцист с центральным телом, занимающим от 70-90% объема клетки, приходилось 68,0% от общего количества бластоцист вакуолярной формы в клиническом материале. Установлено, что 27,8% составили простейшие, где ЦТ занимало около 90% объема клетки простейшего и 4,2% простейшие, ЦТ которых занимало менее 70% объема клетки.

Цитоплазма располагалась очень тонким слоем по периферии клетки. В цитоплазме располагались ядра, количество которых колебалось от 1 до 15 и более. Обычно их количество в препаратах из фекалий варьировало от 1 до 6 с преобладанием клеток, содержащих 1-4 ядра (78,9%).

Рис. 3. Соотношение вакуолярной и гранулярной форм B.hominis в исследуемом материале, (%)

Глава IV содержит описание особенностей микробиоты кожи при экземе.

В разделе 4.1. изложена характеристика видового состава микробиоты кожи, приведен показатель частоты встречаемости представителей микробиоценоза кожи при экземе.

В ходе исследования было выделено и подвергнуто изучению 1875 культур микроорганизмов. Их идентификация позволила отнести полученные штаммы к видам, входящим в 7 родов, 5 семейств. Изученные биотопы кожи обследованных больных характеризовались более выраженным видовым разнообразием, насчитывающим 20 видов (в контрольной группе 10 видов).

Наибольшее видовое разнообразие было обнаружено среди бактерий рода Staphylococcus (8 видов), Streptococcus (4 вида) и Corynebacterium (3 вида). В контрольной группе обнаружено 6 видов стафилококков, по 1 виду стрептококков и коринебактерий. Видовой состав дрожжеподобных грибов рода Candida при экземе включал 1 представителя, тогда как в контрольной группе данный вид обнаружен не был.

В работе был подробно изучен показатель частоты встречаемости отдельных представителей биотопа кожи при экземе (табл. 4).

Таким образом, в составе аутофлоры кожи при экземе происходили значительные изменения, отмечалось увеличение роста микробной обсемененности кожных покровов. Появлялось большое количество видов микроорганизмов, не встречающихся в контрольной группе - S. warneri, S. xylosis, M. luteus, S. agalaeticae, S. mitis, S. mutans, E. faeceum, C. haemolyticus, C. pseudodiphtericum, A. calcoaceticus, C. albicans.

Таблица 4. Состав микробиоценоза кожи обследованных групп людей

Микроорганизмы	Больные (n=120)	Контрольная группа (n=75)
	Абс.	%	Абс.	%
Staphylococcus aureus	75	62,5	5	6,7
Staphylococcus capitis	30	25,0	6	8,0
Staphylococcus epidermidis	60	50,0	55	73,3
Staphylococcus haemolyticus	38	31,7	5	6,7
Staphylococcus hominis	10	8,3	22	29,3
Staphylococcus saprophyticus	13	10,8	2	2,7
Staphylococcus warneri	9	7,5	-	-
Staphylococcus xylosis	8	6,7	-	-
Micrococcus luteus	6	5,0	-	-
Bacillus subtilis	-	-	10	13,3
Streptococcus agalaeticae	6	5,0	-	-
Streptococcus pyogenis	8	6,7	1	1,3
Streptococcus mitis	9	7,5	-	-
Streptococcus mutans	5	4,2	-	-
Enterococcus faecalis	16	13,3	5	6,7
Enterococcus faeceum	10	8,3	-	-
Corynebacterium haemolyticus	4	3,3	-	-
Corynebacterium pseudodiphtericum	3	2,5	-	-
Corynebacterium xerosis	5	4,2	38	50,7
Acinetobacter calcoaceticus	7	5,8	-	-
Candida albicans	6	5,0	-	-

В разделе 4.2. описана бактериальная обсемененность биотопов кожи (рука, нога, лицо, живот) при экземе.

При сравнительном анализе количественного состава микробиоты здоровых и пораженных участков кожи у людей, страдающих экземой, установлены значительные отличия данного критерия.

Доминирующее положение в микробиоценозе кожи при экземе занимали стафилококки, составляющие самую многочисленную группу грамположительных микробов, как по частоте встречаемости, так и по плотности колонизации.

Наиболее часто с кожи обследованных высевался S. aureus, при этом в максимальных количествах были колонизированы пораженные участки - 936,04±295,25 КОЕ/смІ, на здоровом участке этот показатель составил 601,15±171,45 КОЕ/смІ (р<0,05), в контрольной группе - 54,62±3,14 КОЕ/смІ (рис. 4).



Рис. 4. Колонизация кожи обследованных групп людей грамположительными бактериями

Показатель обсемененности (ПО) S. epidermidis на экзематозных участках составил 301,30±107,57 КОЕ/смІ, на здоровых участках - 221,73±89,80 КОЕ/смІ (р<0,05), в контрольной группе - 49,58±2,69 КОЕ/смІ.

Аналогичные изменения были выявлены среди бактерий других видов. Так, M. luteus в максимальных количествах встречался на пораженном участке - 99,93±20,80 КОЕ/смІ (р<0,05), в контрольной группе данный вид не обнаружен.

ПО S. pyogenis и S. mitis у больных на пораженном участке был в 1,5 раза больше, чем на здоровом и составил 104,96±25,96 КОЕ/смІ, 110,82±26,17 КОЕ/смІ соответственно (р<0,05). В контрольной группе встречался только один вид S. pyogenis (48,76±1,89 КОЕ/смІ).

Интенсивность колонизации видов E. faecalis и E. faeceum также увеличивалась на пораженных участках в 1,7 раза по сравнению с интактными участками кожи (121,62±19,98 и 102,82±18,25 КОЕ/смІ соответственно при р<0,05). В контрольной группе был обнаружен только E. faecalis, ПО которого составил 41,96±3,94 КОЕ/смІ.

Следует отметить, что достоверных отличий для показателя обсемененности вида C. xerosis не было установлено. На здоровом участке кожи интенсивность колонизации составила 49,98±1,34 КОЕ/смІ, на пораженном - 41,35±2,87 КОЕ/смІ, в контрольной группе - 45,87±4,37 КОЕ/смІ (р>0,05).

Таким образом, у людей, страдающих экземой, на пораженных участках кожи наблюдалось значительное увеличение показателей обсемененности микроорганизмами грамположительной флоры.

Интенсивность колонизации грамотрицательными микроорганизмами A. calcoaceticus на пораженном участке составила 76,49±19,19 КОЕ/смІ, на здоровом - 52,07±4,51 КОЕ/смІ (р<0,05), в контрольной группе данный вид не встречался.

Сравнительный анализ количественного состава микробиоты кожи больных экземой на различных биотопах показал, что наиболее обильным он оказался на поверхности руки, как здоровой, так и пораженной экзематозными очагами (рис. 5). Так, ПО стафилококками у больных на пораженных участках кожи руки составил 1062,30±290,38 КОЕ/смІ, на здоровом участке - 782,77±137,31 КОЕ/смІ при р<0,05; на пораженной поверхности кожи ноги обсемененность была 835,52±210,15 КОЕ/смІ, на здоровом участке - 590,25±150,24 КОЕ/смІ при р<0,05; на экзематозном участке кожи лица - 568,19±170,33 КОЕ/смІ, на здоровом участке - 425,14±99,13 КОЕ/смІ при р<0,05; на закрытом участке пораженной кожи - поверхности живота - показатель составил 371,84±85,23 КОЕ/смІ, а на здоровом - 300,71±78,16 КОЕ/смІ (р>0,05).

ПО стрептококками у больных на тех же пораженных участках был 210,54±38,15 КОЕ/смІ, 144,68±21,17 КОЕ/смІ, 95,25±18,46 КОЕ/смІ, 75,32±14,25 КОЕ/смІ соответственно, на здоровых - 110,89±24,32 КОЕ/смІ, 85,64±19,43 КОЕ/смІ, 55,14±17,68 КОЕ/смІ, 42,33±3,49 КОЕ/смІ соответственно (р>0,05).

При рассмотрении ПО коринеформных бактерий на экзематозных участках различных биотопов достоверных отличий не было выявлено (60,23±15,24 КОЕ/смІ, 40,14±7,15 КОЕ/смІ, 35,02±4,26 КОЕ/смІ, 32,28±2,98 КОЕ/смІ соответственно).

ПО энтерококками у больных на экзематозных участках кожи руки составил 198,36±37,85 КОЕ/смІ, на здоровом участке - 93,28±21,42 КОЕ/смІ при р<0,05; на пораженной поверхности кожи ноги обсемененность была 144,22±32,25 КОЕ/смІ, на здоровом участке - 62,85±17,29 КОЕ/смІ при р<0,05; на экзематозном участке кожи лица - 92,16±19,28 КОЕ/смІ, на здоровом участке - 60,47±16,01 КОЕ/смІ при р<0,05; на поверхности живота показатель составил 49,87±12,49 КОЕ/смІ, а на здоровом - 45,19±10,23КОЕ/смІ(р>0,05).

В разделе 4.3. рассмотрены экологические параметры микробиоценоза кожи.

Различные виды, входящие в структуру бактериальных экологических систем, по-разному взаимодействуют друг с другом и имеют присущие каждому из них типы популяционных колебаний. Для определения доли участия разных видов в структуре биоценоза использовали показатель постоянства на основе частоты встречаемости. Данный показатель позволяет установить типологию доминант биоценоза.

В зависимости от полученного значения, виды подразделяли на постоянные (С>50%), добавочные (25%<C<50%) и случайные (C<25%). Используя данный индекс, определена структура микробиоценоза кожи при экземе.

Анализ полученных нами данных позволил считать, что доминирующими видами микропейзажа кожи при экземе являются грамположительные кокки -

S. aureus и S. epidermidis (C=62,5% и C=50,0% соответственно). В контрольной группе в состав доминирующих видов входил S. epidermidis (C=73,3%) (табл. 5).

Изменение иерархии отмечали также в структуре дополнительных видов. Высокий индекс постоянства в данной категории отмечался у S. capitis и S. haemolyticus (C=25,0% и C=31,7% соответственно). В контрольной группе данные виды входили в состав случайных сочленов.

Все представители грамположительных палочек рода Corynebacterium в группе обследованных относились к транзиторной микрофлоре: С. рseudodiphthericum (С=2,5%), С. хerosis (С=4,2%), C. haemolyticus (С=3,3%). У лиц контрольной группы встречался вид С. хerosis (С=50,7%), который был доминирующим.

Анализ изучения горизонтальной структуры микробных сообществ кожи показал, что распределение условно-патогенных видов стафилококков, стрептококков, коринебактерий носит контагиозный характер. У больных экземой на пораженном участке наблюдалось повышение степени контагиозности стафилококков до 3,54±0,12 ед., стрептококков - до 1,84±0,45 ед., коринебактерий - до 1,36±0,08 ед. и снижение этого показателя данных микроорганизмов на здоровых участках кожи (2,20±0,12; 1,36±0,39; 1,08±0,09 ед. соответственно при р<0,05).

В контроле показатель достоверно не изменялся (1,10±0,1; 2,04±0,45; 1,03±0,1 ед. соответственно при р<0,05).

Уменьшение частоты встречаемости и контагиозности микробов индигенной флоры кожи больных по сравнению с группой контроля приводит к освобождению экологических ниш, успешно занимаемых представителями условно-патогенной микрофлоры, в результате чего индекс контагиозности их уменьшается.

Таблица 5. Показатель постоянства микроорганизмов кожи

№ п/п	Структура микробиоценоза кожи
	Больные	Контрольная группа
	Доминирующие виды
1	S. aureus	S. epidermidis
2	S. epidermidis	C. xerosis
	Добавочные виды
1	S. haemolyticus	S. hominis
2	S. capitis
	Транзиторные виды
1	E. faecalis	B. subtilis
2	S. saprophyticus	S. capitis
3	S. hominis	S. aureus
4	E. faeceum	S. haemolyticus
5	S. warneri	E. faecalis
6	S. mitis	S. saprophyticus
7	S. pyogenis	S. pyogenis
8	S. xylosis
9	A. calcoaceticus
10	M. luteus
11	S. agalaeticae
12	C. albicans
13	S. mutans
14	C. xerosis
15	C. haemolyticus
16	C. pseudodiphtericum

Анализ полученных значений коэффициента видового разнообразия свидетельствует о достоверном увеличении видов микробиоты кожи обследованных, по сравнению с контрольной группой (р<0,05). Этот показатель у больных экземой при бластоцистной инвазии составил на пораженных участках кожи - 4,80, на здоровых участках кожи - 3,12, в то время как в контрольной группе этот показатель не превышал 2,03, что указывает на повышение показателей видового разнообразия микробиоценоза кожи при экземе за счет увеличения количества видов условно-патогенных микроорганизмов.

Максимальные значения индекса флористической значимости для условно-патогенных видов стафилококков (35,17%), стрептококков (27,54%), коринебактерий (19,62%) были выявлены на участках пораженной кожи, тогда как в контрольной группе этот показатель для данных симбионтов был ниже (24,12%, 10,40%, 7,63% соответственно).

Выводы

1. При экземе выявлено значительное снижение содержания облигатной микробиоты кишечника на фоне расширения спектра условно-патогенных видов, что свидетельствует о глубоких дисбиотических изменениях данного биотопа. Выявленные изменения не зависели от формы и продолжительности заболевания, но носили более выраженный характер у больных старших возрастных групп.

2. Частота встречаемости Blastocystis hominis в кишечнике у больных экземой составила 73,3%, тогда как у практически здоровых людей этот показатель не превышал 5%. Бластоцисты вакуолярной формы в препаратах из фекалий больных обнаруживались в 43,2%, на гранулярную приходилось 19,3%. Одновременное выявление вакуолярных и гранулярных форм составило 37,5% среди обследованных больных.

3. Микробиоценоз кожи при экземе на фоне бластоцистоза характеризовался более выраженным видовым разнообразием (20 видов) по сравнению с контрольной группой (10 видов), значительным увеличением показателей бактериальной плотности на пораженных экзематозных участках кожи.

4. Установлено снижение показателей доминирования и флористической значимости основных симбионтов микробиоценоза кожи при экземе, а также увеличение частоты встречаемости транзиторной микрофлоры, представленной

5. 16 видами (в контрольной группе - 7 видов), что сопровождалось структурной перестройкой ценотипа и сменой абсолютных доминант. Доминирующим видом у больных экземой был золотистый стафилококк, выделенный в 62,5% случаев.

6. У здоровых лиц данный вид встречался у 6,7% обследованных и относился к представителям транзиторной (случайной) микробиоты.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Глебова Н.С. Изменения микробиоценоза кишечника под влиянием дестабилизирующего действия бластоцистной инвазии / Н.С. Глебова // Вестник Оренбургского государственного университета. - Оренбург, 2007. - №5 (69) - С. 155-160.

2. Потатуркина-Нестерова Н.И. Изменения микроэкологии кишечника при дермопатологиях / Н.И. Потатуркина-Нестерова, О.Е. Фалова, Н.С. Глебова,

3. А.С. Нестеров // Современные наукоемкие технологии. - 2005. - №7. - С. 56-57.

4. Потатуркина-Нестерова Н.И. Экологический анализ микробиоценоза кишечника при некоторых хронических дерматозах / Н.И. Потатуркина-Нестерова, М.А. Магомедов, Н.С. Глебова, О.Е. Фалова, А.С. Нестеров // Актуальные вопросы здоровья и среды обитания современного человека: материалы II Всероссийской научной конференции. - Ульяновск: УлГУ, 2005. - С. 94.

5. Фалова О.Е. Микробиоценоз кишечника как микроэкологическая система организма / О.Е. Фалова, Н.С. Глебова, Ю.Ю. Красноперова, Н.И. Потатуркина-Нестерова // Современные наукоемкие технологии. - 2005. - №4. - С. 98.

6. Фалова О.Е. Особенности ценотипа кишечника при псориазе и экземе

7. / О.Е. Фалова, Н.С. Глебова, Н.И. Потатуркина-Нестерова, А.С. Нестеров // Успехи современного естествознания. - 2005. - №10. - С. 82-83.

8. Глебова Н.С. Микробиоценоз кишечника при экземе / Н.С. Глебова,

9. Н.И. Потатуркина-Нестерова, И.С. Немова // Проблемы экологии и охраны природы. Пути их решения: Материалы III Всероссийской научно-практической конференции. - Ульяновск: УлГУ, 2006. - С. 23-25.

10. Глебова Н.С. Особенности микрофлоры кишечника у больных экземой

11. / Н.С. Глебова, Н.И. Потатуркина-Нестерова // Здоровье и Образование в XXI веке: Материалы VII Международной научно-практической конференции. - М.: Изд-во РУДН, 2006. - С. 129-130.

12. Нестеров А.С. Бластоцистоз и хронические дерматозы / А.С. Нестеров,

13. О.Е. Фалова, Н.И. Потатуркина-Нестерова, Н.С. Глебова, И.С. Немова, Ю.Ю. Красноперова // Актуальные вопросы инфекционной патологии-2006: Материалы Всероссийской научной конференции молодых ученых с международным участием. - Санкт-Петербург, 2006. - С. 34.

14. Нестеров А.С. Бактериальная контаминация кожи у больных хроническими дерматозами / А.С. Нестеров, М.А. Магомедов, Н.И. Потатуркина-Нестерова,

15. Н.С. Глебова // Модернизация здравоохранения и совершенствование охраны здоровья населения: Материалы 41-ой научно-практической межрегиональной конференции врачей. - Ульяновск, 2006. - С. 331-332.

16. Фалова О.Е. Состояние микрофлоры кишечника при дерматозах

17. / О.Е. Фалова, Н.И. Потатуркина-Нестерова, А.С. Нестеров, Н.С. Глебова // Модернизация здравоохранения и совершенствование охраны здоровья населения: Материалы 41-ой научно-практической межрегиональной конференции врачей. - Ульяновск, 2006. - С. 337-338.

18. Глебова Н.С. Частота встречаемости бластоцистной инвазии при хронической экземе / Н.С. Глебова, А.В. Курзин // Материалы I конференции молодых ученых медико-биологической секции Поволжской ассоциации государственных университетов. - Ульяновск: УлГУ, 2007. - С. 28-29.

19. Курзин А.В. Изменения состава микрофлоры кишечника при дисбиозе, вызванном инвазией простейшими Blastocystis hominis / А.В. Курзин,

20. Ю.Ю. Красноперова, Н.С. Глебова, А.М. Лазарев // Материалы I конференции молодых ученых медико-биологической секции Поволжской ассоциации государственных университетов. - Ульяновск.: УлГУ, 2007. - С. 51-52.

Размещено на Allbest.ru

...