Контроль качества и стандартизация новой лекарственной формы розувастатина кальция

Размещено на http://www.allbest.ru

Размещено на http://www.allbest.ru

Введение

От сердечно-сосудистой патологии ежегодно в России умирает более миллиона человек (700 случаев на 100 тыс. населения), что превышает аналогичные показатели стран Западной Европы и Северной Америки. Среди сердечно-сосудистых заболеваний ведущее место занимают коронарная болезнь сердца (51%) и инфаркт мозга (27%), которые обусловлены атеросклеротическим поражением коронарных и мозговых артерий. В связи с этим современная стратегия первичной и вторичной профилактики ИБС основана на коррекции факторов риска, в т.ч. гиперлипидемии и дислипидемии, как ведущих предикторов неблагоприятных исходов болезни. В настоящее время целесообразность назначения статинов, особенно в качестве средств вторичной профилактики сердечно-сосудистых катастроф, очевидна. Основная ниша применения статинов на сегодняшний день - это снижение смертности и улучшение прогноза у пациентов с ишемической болезнью сердца или другими проявлениями атеросклероза, а также для лечения нарушений липидного обмена у больных с наследственными и вторичными дислипидемиями.

В настоящее время общедоступным является применение шести статинов - ловастатина, правастатина, симвастатина, флувастатина, аторвастатина и розувастатина. Среди перечисленных препаратов особое место занимает розувастатин, что связано с наличием у него неоспоримых преимуществ в отношении фармакологических и клинических свойств по сравнению с другими статинами. Розувастатин представляет собой синтетический статин, который в большей степени взаимодействует с ГМГ- КоА-редуктазой, что связано с более высокой аффинностью к активному центру этого энзима. Также этот препарат имеет наиболее длительный период полувыведения среди всех статинов и является единственным статином, который минимально метаболизируется системой ферментов цитохрома Р450 (СYР 450) без значимого вовлечения изофермента 3А4. В результате клинически значимых лекарственных взаимодействий розувастатина и других препаратов, которые ингибируют энзимы СYР 450, практически не происходит. Это свойство розувастатина облегчает его назначение в составе комплексной терапии, например, с ингибиторами ангиотензин-превращающего фермента, нитратами, антагонистами кальция, диуретиками, в-адреноблокаторами.

К настоящему времени на предприятии не разработана методика определения розувастатина кальция в дженериковых лекарственных формах. Таким образом, возникла необходимость разработки избирательного и чувствительного метода анализа розувастатина кальция. К такому методу в полной мере относится высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ).

ВЭЖХ как универсальный и высокочувствительный метод анализа, которому в раде случаев нет альтернативы, позволяет одновременно осуществлять контроль за содержанием нескольких ЛВ, вспомогательных компонентов и возможных токсичных примесей в многокомпонентных смесей, отличаясь при этом высокой точностью и воспроизводимостью.

Таким образом, актуальность данной работы заключается в разработке и стандартизации хроматографического анализа розувастатина кальция и проведении валидации этой методики.

Поэтому целью дипломной работы явилось разработка и стандартизация методики хроматографического определения розувастатина кальция при использовании спектрофотометрического детектирования.

Предметом данной работы является стандартизации методики, а объектом - розувастатин кальция.

Для достижения поставленной цели необходимо решить следующие задачи:

- анализ литературных источников;

- установление показателей качества субстанции розувастатина кальция;

- изучение условий хроматографического разделения в условиях обращенно-фазной ВЭЖХ;

- разработка методики хроматографичкского определения розувастатина кальция;

- проведение валидации методики определения розувастатина кальция;

- разработка проекта фармакопейной статьи предприятия на основе разработанной методики.

Новизна данной дипломной работы заключается в проведении стандартизации показателей качества розувастатина кальция, разработке методики анализа методом ВЭЖХ и разработке фармакопейной статьи предприятия на основе этой методики.

1. Литературный обзор

1.1 Стандартизация лекарственных средств

Современная химическая наука предоставляет возможность создания новых эффективных лекарственных средств (ЛС) и новых синтетических материалов. За последние 25-30 лет в медицине нашли применение новые классы химических соединений: производные фенотиазина, сульфанилбензотиадиазина, соединения ряда бензодиазепина, новейшие стероиды, полусинтетические пенициллины и цефалоспорины, фторхинолоны и т.д. Вопросы качества ЛС приобретают большое значение уже на ранних стадиях их изучения и применения, так как изменение состава лекарства, например, вследствие разложения его компонентов при неправильном хранении. Как это может иметь место в случае пенициллинов, 9 препаратов сложноэфирного характера и др., может сделать применение их бесполезным для больного и, более того, вредным и опасным. Кроме того, далеко не исключаются производственные ошибки при изготовлении лекарств по рецептам, поэтому предупреждение указанных ошибок путем систематического контроля качества изготовляемых лекарств является не менее важной задачей.

Значение контроля качества лекарственных средств.

Контролю качества ЛС придается самое серьезное значение во всем мире, так как речь идет о жизни и здоровье миллионов людей. Основная специфика фармацевтической службы и всей фармацевтической деятельности заключается именно в обеспечении эффективности, безопасности и конкурентоспособности, изготовляемых и реализуемых лекарственных препаратов, что гарантируется главным образом их высоким качеством.

Эффективность лекарственных средств - это характеристика степени положительного влияния ЛС на течение болезни.

Безопасность лекарственных средств является характеристикой ЛС, основанной на сравнительном анализе их эффективности и оценки риска причинения вреда здоровью.

Под качеством лекарственных средств понимается соответствие образцов серийно производимых ЛС, поступающих в систему распределения по физико-химическим, химическим, биологическим и визуальным характеристикам, стандарту, разработанному и утвержденному на момент регистрации препарата.

В отличие от других видов товаров, потребитель ЛС не может самостоятельно судить о степени их доброкачественности. К качеству ЛС неприменимы понятия сортности. Все ЛС должны быть только высокого качества. В связи с этим к качеству ЛС предъявляются повышенные требования, которые должны обеспечиваться строгим соблюдением технологии и условий производственного процесса.

В условиях рыночных отношений государственный надзор за качеством ЛС является одной из основных функций государственного регулирования, обеспечивающей соблюдение единой государственной политики в области оценки качества ЛС, защиту прав и интересов потребителей, приобретающих ЛС. В соответствии с Федеральным законом от 22.06.1998 № 86 «О лекарственных средствах» эту задачу выполняет государственная система контроля качества, эффективности, безопасности лекарственных средств. Руководство этой системой осуществляет Департамент государственного контроля качества, эффективности, безопасности лекарственных средств и медицинской техники Минздрава РФ (далее - Департамент). Помимо Департамента в состав данной системы входят:

1. Фармакологический государственный комитет.

2. Фармакопейный государственный комитет.

3. Комитет по новой медицинской технике.

4. Бюро по регистрации ЛС, медицинской техники и изделий медицинского назначения.

5. Научный центр экспертизы и государственного контроля лекарственных средств (НЦ ЭГКЛС) МЗ РФ, включающий:

ь Институт контроля качества лекарственных средств.

ь Институт стандартизации лекарственных средств.

ь Институт доклинической экспертизы лекарственных средств.

ь Институт клинической экспертизы лекарственных средств.

ь Институт клинической фармакологии.

ь Инспекцию обращения лекарственных средств.

6. Центр по сертификации лекарственных средств МЗ РФ.

7. Центральную и зональные лаборатории государственного контроля и изучения качества препаратов крови, кровезаменителей и консервирующих растворов Гематологического научного центра Российской академии медицинских наук (РАМН).

8. Профильные институты, осуществляющие контрольно-испытательные функции (Всероссийский научно- исследовательский и испытательный институт медицинской техники). Научно-исследовательский институт фармации, Государственный научно-исследовательский институт стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов (ГИСК) имени Л.А. Тарасевича.

9. Территориальные контрольно-аналитические лаборатории (ТКАЛ) и центры контроля качества лекарственных средств (ЦККЛС).

10. Территориальные органы по сертификации лекарственных средств. Первые 6 структур системы являются законодательными органами, выполняющими разрешительные функции, остальные - исполнительными органами, выполняющими контрольные функции, поэтому систему государственного контроля качества, эффективности, безопасности лекарственных средств также называют контрольно-разрешительной системой (КРС). КРС осуществляет экспертизу, стандартизацию, государственный контроль и сертификацию ЛС, медицинской техники и изделий медицинского назначения как отечественного, так и зарубежного производства. Она действует на двух уровнях: федеральном и региональном.

Основная задача, которая решается на федеральном уровне, - это государственная регистрация ЛС, медицинской техники и изделий медицинского назначения. На федеральном уровне в качестве общественных экспертных организаций функционируют:

1. Фармакологический и Фармакопейный государственные комитеты.

2. Комитет по новой медицинской технике.

На этом уровне также работают:

3. Бюро по регистрации ЛС, медицинской технике и изделий медицинского назначения.

4. Научный центр экспертизы и государственного контроля ЛС (НЦЭГКЛС) МЗ РФ.

5. Центр по сертификации ЛС МЗ РФ.

6. Центральная лаборатория государственного контроля и изучения качества препаратов крови, кровезаменителей и консервирующих растворов.

Понятие стандарта. Виды стандартов.

Появившись в ХVII веке, фармакопеи долгое время были единственными пособиями по соблюдению и проверке качества лекарственных препаратов. ГФ и сегодня является сборником обязательных стандартов и положений, нормирующих качество лекарственных средств. Она имеет законодательный характер. Предъявляемые в ней требования к ЛС являются обязательными для всех предприятий и учреждений страны, изготавливающих, хранящих, контролирующих и применяющих ЛС, а также зарубежных фирм, регистрирующих лекарственные препараты в России. Введение в действие в 2000 г. ОСТ «Стандарты качества лекарственных средств. Общие положения» определило единый порядок разработки, изложения, оформления, экспертизы, согласования, утверждения и обозначения стандартов качества ЛС и позволило отечественным производителям выпускать продукцию по собственной НД. Согласно этому документу, ЛС являются объектами специальных стандартов, определяющих требования к их качеству.

Стандарт качества лекарственного средства - нормативный документ, содержащий перечень нормируемых показателей и методов контроля качества ЛС, утвержденный МЗ РФ. Стандарты качества ЛС, устанавливающие требования к ЛС, подразделяют на следующие категории:

· Государственные стандарты качества (ГСКЛС), включая общие фармакопейные статьи (ОФС) и фармакопейные статьи (ФС).

· Фармакопейные статьи предприятия (ФСП).

ФС - государственный стандарт качества ЛС, содержащий обязательный перечень показателей и методов контроля 13 качества, соответствующих требованиям ведущих зарубежных фармакопей: фармакопеи США (USP), Британской фармакопеи (ВР), Европейской фармакопеи (Ph. Eur.).

ОФС - государственный стандарт качества ЛС, содержащий основные требования к лекарственной форме или описание стандартных методов контроля ЛС (физических, физико-химических, химических, микробиологических и т.д.). К общим относятся статьи, регламентирующие общие положения и определяющие терминологию; посвященные общим вопросам фармакопейного анализа («Государственные стандартные образцы», «Статистическая обработка результатов химического эксперимента», «Определение активности ферментных препаратов», «Испытание на токсичность, пирогенность, содержание веществ гистаминоподобного действия» и т.д.)

ФСП - стандарт качества ЛС, содержащий перечень показателей и методов контроля качества ЛС конкретного предприятия. Разрабатывается с учетом требований ГФ и ОФС.

Показатели качества, содержащиеся в ФСП, должны быть не ниже требований ГФ и ФС. При этом допускается использование альтернативных методов анализа и испытаний (более экономичных и точных), применение более жёстких норм и включение в НД дополнительных испытаний. Таким образом, одним из прогрессивных нововведений, внесенных этим документом, стала принятая во всем мире новая категория научной документации - фармакопейная статья предприятия (ФСП). Перечень показателей качества субстанции или лекарственного препарата (спецификации качества), заложенных в ФСП, применим лишь к продукции данной фирмы. ОФС и ФС разрабатываются и пересматриваются через 5 лет Научным центром экспертизы и государственного контроля лекарственных средств МЗ РФ. Общие ФС и ФС составляют ГФ, которая издается МЗ РФ. Срок действия ФСП устанавливается при её утверждении с учётом уровня технологического процесса конкретного производства лекарственного средства, сроком не больше пяти лет.

Основные направления стандартизации.

Стандарты качества лекарственных средств должны обеспечивать разработку качественного, эффективного и безопасного лекарственного средства они должны своевременно пересматриваться с учётом новых достижений медицинской, фармацевтической и других наук и требований ведущих зарубежных фармакопей. Особенность ситуации, сложившейся в России, заключается в том, что базовых стандартов качества в виде действующих фармакопейных статей, включенных в ГФ XI, практически нет (за исключением 83 ФС на лекарственное сырьё). А поэтому оценка представляемой на экспертизу ФСП осуществляется на основании сравнительного анализа с монографиями ведущих современных фармакопей и НД зарубежных фирм. Одной из основных тенденций стандартизации фармацевтической продукции во всем мире является гармонизация требований. Яркими примерами гармонизации могут служить нормативные документы, разработанные в рамках Международной конференции по гармонизации технических требований к регистрации лекарственных препаратов для человека, которая объединяет Японию, США и страны, являющиеся членами Европейского Союза (ЕС), законодательство и нормативная база ЕС, создание Европейской фармакопеи (Ph. Eur.). Вместе с тем следует отметить, что, несмотря на тенденции гармонизации, подходы к оценке качества ЛС в Ph.Eur., Фармакопее США (USP) и Британской фармакопее (BP) остаются различными. В USP в основе количественных методов лежит требование высокой чувствительности и избирательности определения. В связи с этим для количественного определения предпочтение отдается методу ВЭЖХ. Такой подход часто используется для анализа субстанций. И в этих случаях USP в обязательном порядке предполагает использование стандартных образцов. Напротив, в Ph. Eur и BP, особенно при анализе субстанций, предпочтение отдается более точным, по сравнению с ВЭЖХ и спектрометрией, объемным методам количественного определения, а недостаток избирательности компенсируется детальным анализом содержания посторонних примесей. В то же время при количественном определении спектрофотометрическим методом в Ph. Eur и BP вместо стандартов используются величины удельного показателя поглощения, определённые в стандартных условиях на чистых образцах.

Не только различия в методологии подхода к оценке качества ЛС делают затруднительным использование материалов ведущих зарубежных фармакопей. Каждая фармакопея отражает уровень развития науки и технической оснащенности производства в отдельно взятой стране, что также обусловливает необходимость соответствующей адаптации стандартов ведущих зарубежных фармакопей. Так, требования Ph. Eur применимы только к фармацевтической продукции производящейся в соответствии с принципами и правилами GMP. В противном случае необходимо вводить дополнительные требования, как это сделано в Государственной Фармакопее Украины, гармонизированной с Ph. Eur.

ОСТ «Стандарты качества лекарственных средств. Общие положения» были установлены чёткие требования и включены показатели различных лекарственных форм и растительного сырья. Определено какие показатели являются обязательными, а включение каких зависит от технологии получения, природы действующего вещества и способа применения лекарственной формы. Таким образом, ОСТ создал основу для дальнейшего совершенствования стандартизации ЛС. Отсюда, следовательно, основными направлениями стандартизации являются:

1. Апробация НД и оценка уровней заложенных в них требований, осуществляемых на стадии Госконтроля ЛС - отечественных и ввозимых из-за границы.

2. Повышение требований к качеству лекарственных средств на основе углубленного изучения их физико-химических свойств и технологических процессов.

3. Разработка более совершенных методов контроля качества ЛС и их унификация внутри отдельных групп препаратов с предварительным выбором стандартных оптимальных условий.

4. Создание и использование стандартных образцов.

5. Поиск новых подходов к оценке качества препаратов по различным показателям и их обоснование.

Таким образом, совершенствование стандартизации ЛС - это совершенствование НД по всем её разделам путём комплексного сочетания физических, химических и физико-химических методов анализа на основе научно обоснованного выбора оптимальных и эффективных методик, унифицированных в пределах группы ЛС, близких по химическому строению. В основе совершенствования стандартизации ЛС лежит совершенствование фармацевтического анализа и на его основе совершенствование НД, а от неё повышение качества ЛС.

1.2 Валидация

Контроль качества - часть GMP, связанная с отбором проб и проведением испытаний, а также с организацией, документированием и процедурами выдачи разрешений, которые гарантируют, что необходимые испытания проведены и, что сырье и материалы не разрешены для использования, а продукция не разрешена для продажи до тех пор, пока их качество не будет признано удовлетворительным. Аналитический контроль фармацевтических продуктов или определенных веществ в препарате необходим, чтобы гарантировать их безопасность и эффективность на протяжении всего срока годности, включая хранение, распространение и использование. Такой контроль должен проводиться в соответствии со спецификациями, разработанными и валидированными во время разработки препарата. Это гарантирует, что спецификации качества применимы как к фармацевтической продукции, использованной для установления биологической характеристики субстанций, так и для их лекарственных форм. После завершения этапа экспертизы продукта качество всех последующих серий будет оцениваться только на основании этих спецификаций. Улучшение качества и повышение уровня стандартизации лекарственных средств (ЛС) связаны с разработкой системного подхода к выбору метода для соответствующего фармакопейного испытания, сравнением исходного и альтернативного метода и унификации методик. Это служит основой для формирования специального раздела фармакопейного анализа - валидации аналитических методик, применяемых при стандартизации ЛС.

Определение валидации.

В процессе контроля качества лекарств осуществляется проведение тех или иных анализов, при выполнении которых применяются аналитические методики. Аналитическая методика описывает способ выполнения анализа. Она должна подробно описывать все необходимые этапы. Описание может включать подготовку образцов, реактивов, использование прибора, построение калибровочных кривых и многое другое. Одним из аспектов формирования гармонизированных требований к качеству ЛС является внедрение валидированных методик. Ведущие зарубежные фармакопеи (Европейская и США) включают общую статью «Валидация», позволяющую подтвердить обоснованность выбора того или иного метода при оценке качества фармацевтической продукции. Также при разработке конкретных методик анализа ЛС необходима уверенность в том, что выбранные аналитические условия обеспечивают воспроизводимые и надежные результаты, адекватные поставленной цели.

Валидация - это подтверждение обоснованности выбора метода для определения показателей и норм качества фармацевтической продукции по каждому разделу НД. Валидация фармакопейных методов проводится на этапе подготовки НД на новые ЛС или при последующем их пересмотре. Валидация является документированной процедурой, дающей высокую степень уверенности в том, что конкретный процесс, метод или система будет последовательно приводить к результатам, отвечающим заранее установленным критериям приемлемости. В соответствии с международными требованиями по валидации аналитических методов любая разрабатываемая или модифицируемая аналитическая методика должна оцениваться с точки зрения обоснованности и объективности ее использования.

Цель валидации.

Основная цель аналитической валидации - гарантировать, что выбранная аналитическая методика будет давать воспроизводимые и достоверные результаты, соответствующие поставленной цели. Необходимо надлежащим образом определить как условия применения методики, так и цель, для которой она предназначена. Указанные принципы применимы ко всем методикам, которые используются фирмами - производителями ЛС.

При разработке любой методики, включаемой в ФСП или в другой используемый на предприятии документ, содержащий методы контроля, необходимо:

1. Обосновать выбор предлагаемой методики анализа в сравнении с другими возможными подходами. Т.е. необходимо привести научное обоснование ее применения или, если методика применяется взамен существующей, привести сравнительные данные.

2. Детально описать методику, чтобы должным образом обученный персонал мог ее надежно воспроизвести. Например, должны быть подробно или в виде ссылок описаны используемые реактивы и стандартные образцы, приведены полные формулы для вычисления результатов, определены все обозначения.

3. Привести данные валидации. Каждая аналитическая характеристика, которая применима к данной методике, должна быть обсуждена и подкреплена экспериментальными данными. Если результаты получены с использованием установленных фармакопейных методов, необходимость представления данных валидации может быть значительно меньшей, однако необходимо подтвердить, что фармакопейная методика подходит для анализа конкретной лекарственной формы. Параметры аналитического метода, устанавливаемые при его валидации, рассчитываются в соответствии с принятыми в настоящее время правилами статистической обработки в аналитической химии. Следует отметить, что сама по себе валидация аналитических методик не приводит к повышению качества ЛС, но ее применение необходимо для получения фармацевтической продукции высокого качества. Результаты валидации могут либо повышать степень гарантии качества, либо указывать на необходимость совершенствования условий производства, так как валидация аналитических методик проводится с целью гарантирования, что выбранная методика будет давать воспроизводимые и достоверные результаты, соответствующие поставленной цели.

Каждое предприятие-производитель само определяет, какая работа по валидации аналитических методик необходима для доказательства, что в его конкретном случае все критические условия (параметры), используемые при контроле ЛС, находятся под контролем. Валидации подвергаются аналитические методы, применяемые для:

1. Идентификации лекарственного вещества.

2. Установления пределов содержания примесей родственных соединений, тяжелых металлов, остаточных органических растворителей.

3. Количественного определения лекарственного вещества, лекарственного вещества (веществ) в составе лекарственных форм, индивидуальных примесей и суммы примесных продуктов, консервантов.

Валидация АМ предполагает ее оценку по следующим параметрам, рекомендованным Международной конференцией по гармонизации (ICH):

1) избирательность или специфичность;

2) предел обнаружения;

3) надежность;

4) линейность результатов;

5) аналитическая область методики;

6) правильность;

7) точность;

8) сходимость;

9) воспроизводимость;

10) предел количественного определения.

Характеристика аналитических методик.

Избирательность или специфичность АМ определяется ее способностью достоверно определять лекарственное вещество в присутствии примесных и вспомогательных веществ (в частности, вспомогательных веществ лекарственных форм). Она оценивается при валидации АМ, применяемых для идентификации лекарственных веществ, определения примесей, установления количественного содержания вещества в образце и лекарственной форме. Избирательность методик, применяемых для каждого из этих испытаний, достигается использованием СО и может быть дополнительно подтверждена методом добавок соответствующих количеств лекарственного вещества и (или) примесей, вспомогательных веществ. В тех случаях, когда примесные соединения не идентифицированы, специфичность предлагаемой методики должна быть обоснована результатами определений другим, независимым валидным методом. Избирательность (или ее отсутствие) может быть выражена как отклонение результатов, полученных при применении методики для определения анализируемого вещества в присутствии ожидаемого количества других компонентов, по сравнению с результатами, полученными для этого же анализируемого вещества без добавления других веществ. Когда другие компоненты известны и доступны, избирательность может быть определена путем сравнения результатов испытания определяемого вещества в образце с добавлением и без добавления потенциально мешающих веществ.

Чувствительность (sensitivity) - это способность методики испытания регистрировать небольшие изменения концентрации. Выражается в виде наклона калибровочной кривой.

Предел обнаружения (limit of detection) - это наименьшее содержание, при котором анализируемое вещество может быть обнаружено (но не обязательно определено количественно), используя данную методику при требуемых экспериментальных условиях. Такой предел обычно выражается в значениях концентрации анализируемого вещества (например, в процентах, долях на миллион - ррm или мкг/л) в образце и используется главным образом для испытания на чистоту.

Для не инструментальных методов предел обнаружения устанавливается визуально. При использовании инструментальных методов, имеющих фоновый сигнал, устанавливается минимальная концентрация, при которой анализируемое вещество может быть достоверно обнаружено. В таких случаях соотношение аналитического сигнала анализируемой пробы и фона составляет 2:1 или 3:1. Для инструментальных методов предел обнаружения может быть установлен расчетным путем с использованием величины стандартного отклонения и угла наклона калибровочной кривой.

Надежность (robustrus или ruggedness) - это способность методики давать результаты анализа с приемлемой правильностью и точностью при изменении условий. Она является мерой степени влияния изменений условий работы или окружающей среды (которые совместимы со спецификациями, описывающими методику) на получаемые результаты анализа отдельных, предположительно идентичных образцов из одной и той же однородной серии материала.

Линейность и аналитическая область методики (диапазон) (linearity и range). Линейность АМ - это ее способность давать результаты, которые прямо пропорциональны концентрации анализируемого вещества в образцах. Диапазон методики выражается как высшая и низшая концентрации, в пределах которых показано, что анализируемое вещество определяется с приемлемой точностью, правильностью и линейностью. Эти характеристики определяются посредством применения данной методики для выполнения анализа серии образцов, имеющих концентрации анализируемого вещества, перекрывающие требуемый диапазон. В тех случаях, когда соотношение между результатом и концентрацией нелинейно, стандартизация может быть обеспечена с помощью калибровочной кривой.

АМ должна быть охарактеризована следующими параметрами для подтверждения линейности: коэффициент регрессии, угол наклона линии регрессии и остаточная сумма площадей.

Аналитическая область обычно выражается в тех же единицах, что и результаты испытаний, полученных с помощью данной методики - в процентах, миллионных долях (ррт).

Она составляет:

1) для количественного содержания анализируемого вещества в образце или лекарственной форме 80?120 % от определяемой величины;

2) для показателя «однородность дозирования по содержанию» 70?130 % от определяемой величины;

3) для показателя «растворение» ± 20 % от предела, регламентированного НД;

4) для содержания примесных продуктов 50?120 % от регламентированных норм.

Для фармакологически активных или токсичных примесей предел количественной оценки должен быть соразмерен уровню, на котором примесь должна контролироваться. Если установление количественного содержания и контроль примесей выполняются одновременно, и при этом используется 100 % СО, линейность должна охватывать область «от установленного уровня до 120 % уровня ее содержания», регламентированного НД.

Правильность (accuracy) (точность) АМ - это близость получаемых с использованием данной методики результатов к истинному значению. При количественном определении лекарственного вещества этот параметр может быть установлен путем применения АМ к анализируемому объекту с использованием СО или путем сравнения результатов, полученных предлагаемой аналитической методикой, с результатами, которые получены другой независимой методикой, правильность которой известна. В случае количественного определения вещества в лекарственной форме правильность аналитической методики устанавливается по результатам ее применения к анализу модельной смеси, включающей все компоненты лекарственной формы. Правильность методики количественного определения идентифицированных примесных соединений устанавливается по результатам анализа методом добавок. При отсутствии образцов примесных соединений или в тех случаях, когда структура их не установлена, правильность предлагаемой методики их определения должна быть подтверждена результатами анализа другой аналитической методик с охарактеризованной правильностью.

Правильность должна быть оценена на основе не менее 9 определений, как минимум, на 3 уровнях концентраций в пределе аналитической области (например, 3 повторности определения для 3 аналитических концентраций).

Точность (precision) методики - это степень согласованности между отдельными результатами испытаний. Она измеряется отклонением отдельных результатов от среднего значения и обычно выражается как стандартное отклонение у или как коэффициент вариации (относительное стандартное отклонение) при условии использования полной методики для повторного анализа отдельных образцов, отобранных из одной и той же однородной серии материала.

Сходимость (repeatability) или внутрилабораторная вариация - это точность методики при ее выполнении одним и тем же аналитиком при одних и тех же условиях (использование одинакового оборудования, реактивов). Cходимость методики оценивается проведением полных отдельных определений на отдельных идентичных образцах, отобранных из одной и той же однородной серии материала, и таким образом обеспечивает измерение точности методики в нормальных рабочих условиях.

Воспроизводимость (reproducibility) - это точность методики, когда она проводится в различных условиях - разных лабораториях, разными средствами, разными операторами (аналитиками), в разное время - на одной и той же однородной серии материала. Воспроизводимость аналитическогометода характеризует степень с овпадения результатов индивидуальных испытаний при многократности его использования. Она выражается величиной стандартного отклонения, коэффициентом вариации и доверительным интервалом и устанавливается при количественном определении не менее 9 аликвот образца, позволяющим статистически рассчитать эти параметры. Для определения данной характеристики рассчитывают величину стандартного отклонения S, дисперсию S2, определяют границы доверительных интервалов. Сравнение значений вычисленных критериев Фишера Fвыч. с табличными данными F (P, f1, f2), найденными при P=99 %, дает возможность установить более высокую воспроизводимость одной из сравниваемых методик. Воспроизводимость определяется в процессе разработки методики и характеризует надежность анализа в выбранных параметрах метода. Если измерения подвержены вариациям в условиях анализа, в методику должно быть включено соответствующее примечание.

Проверяется воспроизводимость на трех уровнях:

1) повторяемость - при одном определении должна соблюдаться кучность результатов;

2) промежуточная воспроизводимость - внутри одной лаборатории должна соблюдаться высокая совпадаемость результатов;

3) межлабораторная воспроизводимость - показывает степень воспроизводимости результатов испытаний, выполненных в разных лабораториях на соответствующем оборудовании, в разное время, разными специалистами.

Воспроизводимость хроматографических методик должна гарантироваться параметрами пригодности системы.

Предел количественного определения (limit of quantitation) - это минимальное содержание анализируемого вещества в образце, которое может быть количественно определено с приемлемой точностью и воспроизводимостью. Предел количественного определения выражается как концентрация аналитического вещества в образце в процентах, ррт. Он измеряется путем анализа образцов, содержащих уменьшающиеся количества анализируемого вещества, и определением наименьшего уровня содержания, при котором может быть достигнута приемлемая степень правильности и точности. Установление предела количественного определения может проявиться визуально как в случае инструментальных, так и неинструментальных методов, а так же расчетным путем на основании величины стандартного отклонения и угла наклона калибровочного графика.

Пригодность системы - это интегральная часть многих АМ, которая показывает надежность анализа в заданных условиях его проведения. Параметры пригодности системы обеспечивают соблюдение валидности метода в случаях, когда в процессе анализа возможны некоторые внутрилабораторные изменения условий анализа. Например, для метода ВЭЖХ в наибольшей степени подвержены изменениям стабильность аналитических растворов, рН подвижной фазы, ее состав, различные серии колонок, температура, скорость потока.

1.3 Статины

Сердечно-сосудистые заболевания, обусловленные атеросклерозом, и здоровье населения России.

Сердечно-сосудистые заболевания (ССЗ) вносят наибольший (57%) вклад в смертность от неинфекционных заболеваний (НИЗ) в Российской Федерации, при этом около 40% всех смертей приходится на возраст населения от 25 до 64 лет [27]. По данным ГНИЦ ПМ, в РФ почти 10 млн трудоспособного населения страдают ишемической болезнью сердца (ИБС), более трети больных имеют стабильную стенокардию.

Как правило, в основе большинства ССЗ, таких как ИБС, инфаркт миокарда (ИМ), мозговой инсульт (МИ), заболевания периферических артерий, лежит атеросклероз, одним из ведущих факторов развития которого является нарушение обмена липидов.

За последние годы представления о механизмах атерогенеза существенно расширились. Дислипидемия (ДЛП) диагностируется при нарушении соотношения в плазме крови одного или нескольких классов липопротеинов. При этом их общее содержание может быть нормальным или повышенным. Наибольшее значение имеет увеличение холестерина (ХС) липопротеинов низкой плотности (ЛПНП) и снижение ХС липопротеинов высокой плотности (ЛПВП).

К липидам плазмы крови относятся: ХС, триглицериды (ТГ), фосфолипиды, жирные кислоты. ХС может быть свободным и этерифицированным. Свободный ХС участвует в синтезе стероидных гормонов, образовании жирных кислот, входит в состав нервной ткани и клеточных мембран. Этерифицированный ХС является результатом соединения с жирными кислотами, обнаруживается преимущественно в коре надпочечников, плазме крови, атеросклеротических бляшках. Триглицериды представляют собой эфиры жирных кислот, глицерина, входят в состав липопротеинов (ЛП), в основном хиломикронов и липопротеинов очень низкой плотности (ЛПОНП). Содержание жирных кислот и фосфолипидов в крови не связано с риском развития ИБС, поэтому они не обладают диагностической ценностью. Липопротеины представляют собой липид-белковые образования, состоящие из апобелков, ХС, триглицеридов и жирных кислот.

Наибольшее значение в развитии атеросклероза имеют ЛПНП (атерогенные ЛП) и ЛПВП (антиатерогенные ЛП). ЛПНП подвергаются перекисному окислению, активируют моноциты, проникают в субэндотелиальное пространство сосудов, превращаются в макрофаги, а затем в пигментные клетки и играют важную роль в формировании атеросклеротической бляшки. Поэтому ЛПНП являются главной мишенью гиполипидемической терапии. Так, снижение ХС ЛПНП на 1% снижает риск развития ИБС также на 1%. ЛПВП осуществляют обратный транспорт ХС из сосудистой стенки и макрофагов в печень. Их уровень в крови обратно коррелирует с риском развития атеросклероза (АС). Поэтому повышение ХС ЛПВП на 1% снижает риск развития ИБС на 3%.

Для успешного лечения больных целесообразно воздействовать на более ранние звенья в цепи: от факторов риска к основным сердечно-сосудистым заболеваниям, их осложнениям и гибели пациента.

К липидмодифицирующим медикаментозным средствам, исходя из их химического строения, относятся:

1. Фибраты (фенофибрат, ципрофибрат, гемфиброзил).

2. Анионобменные смолы (колестипол, холестирамин).

3. Статины (ловастатин, правастатин, симвастатин, флувастатин, аторвастатин, розувастатин).

4. Препараты разных химических групп (пробукол, щ-3-полиненасыщенные жирные кислоты, никотиновая кислота, секвестранты желчных кислот, жирорастворимые витамины, антиоксиданты и др.)

В основе гиполипидемического эффекта всех перечисленных препаратов лежит их способность снижать содержание в плазме крови атерогенных липопротеинов (ЛП): липопротеинов очень низкой плотности (ЛПОНП), ЛПНП и входящих в их состав липидов - ХС и ТГ.

На современном этапе развития медицины основным классом липидснижающих препаратов, использующихся в лечении ИБС, являются статины, имеющие существенную доказательную базу.

Свойства статинов.

Статины являются структурными ингибиторами фермента гидрокси-метилглутарил-коэнзим-А-редуктазы (ГМГ-КоА), основного фермента, регулирующего биосинтез ХС в гепатоцитах. В результате снижения внутриклеточного содержания ХС гепатоцит увеличивает количество мембранных рецепторов к ЛПНП на своей поверхности. Рецепторы связывают и выводят из кровотока атерогенные частицы ЛПНП и, таким образом, снижают концентрацию ХС в крови.

Статины обладают сосудистыми и плейотропными эффектами. На уровне сосудистой стенки они за счет уменьшения образования холестерина и ЛПНП увеличивают соотношение ЛПВП/ЛПНП, снижают включение холестерина в субинтиму сосудов, способствуют стабилизации уже существующих атеросклеротических бляшек за счет уменьшения липидного ядра, а следовательно, снижают риск разрыва бляшки и тромбообразования. Улучшение функционального состояния эндотелия сосудов на фоне терапии статинами связывают не только с их основным действием, но и с плейотропными эффектами.

Плейотропными называются клинические эффекты, не связанные с основным механизмом действия, или иначе, с основным назначением данного лекарства. К таким эффектам относятся: сохранение и восстановление барьерной функции эндотелия, увеличение выработки оксида азота (NO) и, как следствие, вазодилатация, уменьшение агрегации тромбоцитов, тромбогенности, активация фибринолиза, уменьшение гипертрофии левого желудочка. Антипролиферативный (по отношению к гладкомышечным клеткам), противовоспалительный (снижают уровень С-реактивного протеина - маркера воспалительной реакции в сосудистой стенке), антиаритмический, антихолелитиазный и некоторые другие эффекты. Многие из этих свойств являются общими для всех статинов, хотя и существуют индивидуальные различия как в числе плейотропных эффектов, так и в степени их выраженности. Некоторые свойства обусловлены и гиполипидемическим, и плейотропным механизмами действия статинов.

Не последнюю роль в формировании дисфункции эндотелия наряду с уже известными факторами риска ИБС и ССЗ играет гипергомоцистеинемия, в том числе в увеличении риска развития острых коронарных событий. Статины способны уменьшать дисфункцию эндотелия, вызванную гипергомоцистеинемией, что может рассматриваться как еще один, нелипидный, эффект статинов.

Механизм действия статинов.

Статины являются структурными ингибиторами 3-гидрокси-3-метилглутарил коэнзим А (ГМГ-КоА)-редуктазы (рис.11) - основного фермента, регулирующего биосинтез холестерина в гепатоцитах. В результате снижения внутриклеточного содержания холестерина, печеночная клетка увеличивает количество мембранных рецепторов к ЛПНП на своей поверхности, которые связывают и выводят из кровотока ЛПНП, таким образом, снижая его концентрацию в крови.



Рисунок 1.1 - Механизм действия статинов

Одна из частей молекулы статинов (лактоновое кольцо) по своей структуре схожа с частью фермента редуктазы ГМГ-КоА. По принципу конкурентного антагонизма молекула статина связывается с той частью рецептора кофермента (коэнзима) А, к которой прикрепляется этот фермент. Другая часть молекулы статина ингибирует процесс превращения гидрометилглутарата в мевалонат, промежуточной субстанции в синтезе молекулы холестерина. Ингибирование активности редуктазы ГМГ-КоА приводит к серии последовательных реакций, в результате которых снижается внутриклеточное содержание холестерина и происходит компенсаторное повышение активности рецепторов липопротеидов низкой плотности и соответственно ускорение катаболизма холестерина ЛПНП.

Лекарственные поражения печени зависят от свойств лекарственного препарата, особенности больного и прочих факторов. Известно, что вероятность побочных реакций возрастает с увеличением количества одновременно принимаемых лекарств. Установлено, что, если больной принимает одновременно шесть или более препаратов, вероятность побочного действия у него достигает 80%.

История создания статинов.

Еще в середине 50-х гг. XX века производился широкий скрининг химических соединений, которые могли бы оказать влияние на уровень холестерина крови. При этом было найдено вещество, снижающее уровень холестерина на 20-25% и действующее на последней стадии синтеза холестерина. Препарат под торговым названием трипаранол умеренно снижал уровень холестерина, но приводил к накоплению предшественника в плазме крови, способствуя дальнейшему развитию атеросклероза, к тому же он обладал серьезными побочными эффектами. Многие фармацевтические компании тогда вообще отказались от поиска препаратов, снижающих уровень холестерина.

В 1971 г. доктор Akira Endo, работавший в Токио (Япония), предположил, что продукты жизнедеятельности грибов, которые растут на питательной среде (для получения пенициллина лучшего качества), должно быть, также содержат естественные ингибиторы синтеза холестерина. После 2 лет работы и проведения около 6000 тестов было обнаружено, что среда культуры Penicillium citrinium содержала поразительно мощный ингибитор синтеза холестерина, который был выделен и назван ML-236B, позже - компактином. Именно этот препарат стал родоначальником статинов.

Каждая более-менее значимая фармацевтическая компания вскоре начала проводить скрининг культур микроорганизмов не только на антибиотики, но и на ингибиторы синтеза холестерина. В компании Merck в 1978 г. начался поиск собственного статина, и уже через 2 нед. был выделен свой ингибитор - соединение, синтезируемое грибами (Aspergillus terreus), отличными от тех, что использовал Endo. Вещество получило название мевинолин (позднее замененное на ловастатин). Структуры монаколина К, полученного Endo, и ловастатина, полученного Alberts, оказались совершенно идентичными. Одно и то же соединение, синтезируемое двумя разными видами микроорганизмов, было независимо открыто в двух разных лабораториях практически одновременно. С этого времени, с некоторыми серьезными остановками, началось победное шествие статинов.

Со времени появления на рынке первого статина - ловастатина в 1987 г. - прошло немало времени. За это время целевые значения уровня общего ХС и ХС ЛПНП постоянно снижались на основании все новых клинических данных. Одновременно проводились поиски и исследования все более эффективных статинов. После природного ловастатина были получены полусинтетические правастатин и симвастатин (первое поколение статинов). Затем наступил черед полностью синтетических статинов: флувастатина (второе поколение), аторвастатина и церивастатина (третье поколение). Последним из клинически изученных и активно применяемых стал розувастатин (четвертое поколение).

Особенностью статинов нового поколения (аторвастатин, розувастатин) является то, что они способны снижать уровень ХС у больных с резистентностью к другим гиполипидемическим средствам. Эти препараты оказывают более выраженный гиполипидемический эффект по сравнению с другими статинами. Кроме того, эффективность аторвастатина и розувастатина связывают с тем, что они значительно снижают уровень ТГ и лучше повышают уровень ЛПВП.

Статины различают по способу их получения: так, симвастатин, ловастатин и правастатин являются природно-синтезированными соединениями, получаемыми из продуктов жизнедеятельности некоторых видов грибов, в то время как флувастатин, аторвастатин и розувастатин являются синтезированными препаратами.

В России зарегистрированы статины: симвастатин, ловастатин, правастатин, флувастатин, аторвастатин и розувастатин. Статины наиболее эффективно снижают уровень ЛПНП, при этом действие является дозозависимым. Каждое удвоение дозы статина приводит к дополнительному снижению уровня ЛПНП на 6% («правило шести процентов»). Статины снижают уровень триглицеридов на 10-15% и повышают уровень ЛПВП на 8-10%.

Общепринятой классификации статинов нет, обычно статины указывают в хронологическом порядке, согласно их появлению. Можно классифицировать статины по гидрофильности, по их метаболизму системой цитохрома Р450, по силе гиполипидемического действия. Основные характеристики статинов. представлены на рисунке 1.2.

Рисунок 1.2 - Основные характеристики статинов

Сегодня существует большое количество статинов, включающих в себя оригинальные препараты и их дженерики (аналоги). В России зарегистрировано более 30 дженериков статинов, но несмотря на их широкую распространенность, в медицинской среде до сих пор действует устойчивый стереотип, что оригинальные препараты безопаснее, эффективнее и надежнее дженериков. Статины-дженерики применяются в тех же дозах, что и оригинальные статины. Как правило, по гиполипидемической активности они не уступают оригинальным препаратам, но являются менее дорогостоящими, более экономически привлекательными, что помогает решить проблему их доступности более широкому кругу пациентов.

Врачи общей практики, терапевты, кардиологи могут с уверенностью рекомендовать пациентам с ДЛП прием дженериковых версий статинов для целей первичной и вторичной профилактики сердечно-сосудистых заболеваний, а также тяжелых ишемических исходов (смерть, инсульт, инфаркт).

1.4 Методы контроля качества статинов

Таблица 1.1 - Сравнительный анализ методов контроля качества статинов

Наименование	Нормативный документ	Пробоподготовка	Условия хроматографирования
Аторывстатин кальция	JP XVI [41]	20 мг точной навески аторвастатина кальция помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, растворяют в смеси ацетонитрил - вода (1:1), добавляют 10 мл внутреннего стандарта и доводят объем раствора растворителем до метки. Аналогично готовят раствор стандартного образца.	Колнка: С18 5мкм, 250*4,6 мм. Детектор: УФ 254 нм. Температура: 40°С. ПФ: буферный раствор рН 4,0, ацетонитрил, тетрагидрофуран (530 мл, 270 мл, 200 мл). Объем пробы: 10 мкл. Время удерживания: 10 мин.
Правастатин натрия	JP XV [42]	0,1 г точной навески правастатина натрия помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в смеси вода - метанол (11:9), 10 мл полученного раствора помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, добавляют 10 мл внутреннего стандарта и доводят объем раствора растворителем до метки.	Колнка: С18 5мкм, 150*4,6 мм. Детектор: УФ 238 нм. Температура: 25°С. ПФ: вода, метанол, уксусная кислота, триэтиламин (550 мл, 450 мл, 1 мл, 1 мл). Объем пробы: 10 мкл. Время удерживания: 21 мин.

2. Экспериментально-аналитическая часть

2.1 Хроматографический анализ субстанции розувастатина кальция

В области производства и контроля качества фармацевтических препаратов очень широко используются различные хроматографические методы анализа и в первую очередь метод высокоэфективной жидкостной хроматографии. Этот метод идеально подходит для качественного, количественного анализа и проверки чистоты лекарственных препаратов.

Дальнейшие исследования с целью создания лекарственной формы на предприятии невозможны без стандартизации методов контроля. Необходимо разработать методику определения для лекарственной формы и провести валидацию.

В настоящей главе представлены результаты разработки методики хроматографического определения розувастатина кальция в субстанции и в лекарственной форме на ее основе.

В качестве объекта детектирования была выбрана субстанция “Teva”, Израиль.

В процессе разработки методики определения количественного содержания розувастатина кальция необходимо учитывать ряд важных моментов, связанных с физико-химическими и хроматографическими свойствами объекта анализа:

- необходимость выбора универсальной подготовки пробы для ВЭЖХ анализа;

- подбор НФ и ПФ для приемлемого разделения;

- необходимость выбора оптимальных условий детектирования.

Выбор условий детектирования, подвижной и неподвижной фазы при ВЭЖХ анализе розувастатина кальция.

Структурная формула розувастатина кальция представлена на рис. 2.1.



Рисунок 2.1 - Структурная формула розувастатина кальция

Розувастатин кальция легко растворим в ацетонитриле. При кислом значении рН исследуемый объект достаточно стабилен. Поэтому в качестве растворителя была выбрана смесь ацетонитрила и буферного раствора (рН 3,5) в объемном соотношении 1:1. Смесь ацетонитрил - буферный раствор использовалась для подготовки пробы.

Взяли около 20 мг субстанции, поместили в мерную колбу вместимостью 20 мл, прибавили 10 мл ацетонитрила и 5 мл буферного раствора, перемешали до растворения и довели объем раствора до метки буферным раствором. 2,0 мл полученного раствора перенесли в мерную колбу вместимостью 10 мл. Довели объем раствора растворителем до метки и перемешали. 4,0 мл полученного раствора перенесли в мерную колбу вместимостью 20 мл, довели объем раствора растворителем до метки. Полученная концентрация розувастатина кальция в растворе является оптимальной для проведения хроматографического анализа. Аналогичным образом был приготовлен стандартный раствор.

...