Вирусные и инфекционные болезни животных

Заместительная терапия. В случаях поражения слизистой оболочки желудочно-кишечного тракта в период выздоровления животным назначают ветеринарную диетотерапию (см. «Панлейкопения»). Одновременно применяют готовые формы поливитаминов с микроэлементами в порошкообразном виде с жидким кормом.

Иммунитет. Иммунитет при герпес-вирусной и калицивирусной инфекциях кошек непродолжительный - около 6 месяцев.

Патолого-анатомические изменения. При осмотре трупов отмечают общее истощение животных, в ротовой полости и на носовой перегородке часто обнаруживают отдельные очаги некроза (язвы). В бронхах и легких нередко наблюдают участки серозных и гнойных воспалений.

Общие правила отбора, консервирования, транспортировки и хранения материала, предназначенного для микробиологического исследования

Отбор материала. Материал берут с учетом клинических признаков болезни, которые указывают на поражение той или иной системы, патологоанатомической картины при вскрытии (изменения в различных органах - печени, легких, кишечнике и т. д.), а также основываясь на предполагаемом диагнозе, поскольку для каждой инфекции характерна определенная локализация возбудителя в организме.

Материал для исследования берут прижизненно или посмертно (от павших или вынужденно убитых животных). Во всех случаях желательно брать материал от животных, не подвергавшихся лечению антибиотиками, и в максимально короткие после их гибели сроки, так как через 2-3 ч после смерти нормальная микрофлора начинает проникать в органы и ткани. Что затрудняет выделение возбудителя в виде чистой культуры. Чтобы избежать контаминации посторонней микрофлорой, исследуемый материал берут стерильно с использованием стерильного инструмента и посуды для транспортировки. вирусный инфекционный заболевание животное

Трупы мелких животных, а также небольшие трупы павших поросят, ягнят, телят и других, мелких животных лучше посылать в лабораторию целиком в непроницаемой таре.

Паренхиматозные органы и их фрагменты (у крупных животных) берут, соблюдая требования асептики. Каждый орган (фрагмент) помещают в стерильную посуду, транспортируют в нативном виде или консервируют одним из способов.

Трубчатые кости посылают на исследование целыми, с неповрежденными концами и тщательно очищенными от мышц и сухожилий. Кости завертывают в марлю или полотно, смоченные дезинфицирующей жидкостью (5%-ным раствором карболовой кислоты или фенола). Кости можно также посыпать поваленной солью и завернуть в полотно или марлю.

Гной, пунктаты органов, экссудат берут при помощи стерильного ватного тампона, шприца. При взятии содержимого пиром (бурс) в области поражения выстригают шерсть, кожный покров дезинфицируют 70° спиртом и смазывают настойкой йода. Затем стерильным шприцем с иглой большого диаметра делают пункцию, отсасывают содержимое гигромы и переносят его в стерильную пробирку с резиновой пробкой. Иногда берут смывы, например для исслендования ПЦР.

Кровь рекомендуют брать при лихорадочных состояниях стерильным шприцем в количестве 15-20 мл. Кровь. А также другие жидкие материалы можно отбирать стерильной пастеровской пипеткой с последующим запаиванием ее кончика.

Кровь, гной, выделения из различных полостей, естественных отверстий и др. можно посылать для микроскопического исследования в виде мазков. Кровь у животных берут из вены ушной раковины или края верхушки уха, у птиц -- с поверхности гребня или подкрыльцовой вены. Шерсть на месте взятия крови выстригают или выбривают, кожу тщательно протирают ватными тампонами, смоченными сначала спиртом, а затем эфиром.

Инструменты (иглы, скальпель) должны быть стерильными. Первую каплю удаляют стерильной ватой, (исключение делают при исследовании крови на гемоспоридиозы), а следующую свободно выступившую каплю крови берут быстрым и легким прикосновением к ней поверхностью предметного стекла. Затем стекло быстро поворачивают вверх каплей и удерживают между пальцами левой руки в горизонтальном положении. К левому краю капли прикасаются под углом 45° шлифованным краем другого предметного (или покровного) стекла. Как только капля равномерно распределится по ребру этого стекла, им быстро проводят по поверхности предметного стекла слева направо, не доводя до края на 0,5--1,0 см. Ширина мазков должна быть уже предметного стекла. Для каждого нового мазка берут, свежую каплю крови. Готовые мазки крови высушивают на воздухе. Не рекомендуется подсушивать их над пламенем или на солнце.

Правильно приготовленные мазки крови должны быть тонкими, равномерными и достаточной длины. На высушенных мазках и отпечатках острым предметом надписывают номер или кличку животного и дату приготовления.

Мазки из тканей, гноя, органов и различных выделений готовят путем размазывания материала на предметном стекле стерильной палочкой или ребром другого предметного стекла до тонкого слоя. Частицы органов плотной консистенции, твердые узелки, а также вязкий материал целесообразно заключить между двумя предметными стеклами. Их разъединяют после растирания помещенного между ними материала стекла в противоположные стороны в горизонтальном направлении, в результате чего получают два довольно тонких мажа. Иногда получают так называемые препараты-отпечатки. Для этого вырезанный острым скальпелем кусочек органа захватывают пинцетом и свободной поверхностью кусочка делают на стекле несколько тонких отпечатков.

Моча: наружные половые органы обмывают, ополаскивают стерильным физиологическим раствором, осушают стерильным марлевым тампоном. Первую порцию мочи не берут, последующую в необходимом количестве набирают в стерильную посуду.

Мокрота: собирают до приема корма. Из трахеи берут при помощи стерильного трахеотубуса и стерильного ватного тампона на проволоке. При глубоком (до бифуркации) введении тампона возникает кашель и удается получить бронхиальную слизь. Тампон с материалом помещают в пробирку со стерильным раствором. При взятии материала из носоглотки используют специальные приборы, носоглоточные тампоны на изогнутой проволоке, носовые ватно-марлевые тампоны.

Секрет молочной железы: сосок обмывают водой, обрабатывают 70? этанолом, ополаскивают стерильным физиологическим раствором. Первую порцию секрета сцеживают и удаляют. Из каждой доли вымени берут последние порции молока по 10--15 мл в отдельные стерильные пробирки с резиновыми пробками. У овец и коз пробы молока берут путем пункции цистерны вымени. Для этого животное фиксируют в боковом положении, вымя у основания соска протирают 70° спиртом и смазывают настойкой йода. Стерильным шприцем с иглой делают пункцию у основания соска, и после попадания иглы в цистерну (о чем судят по свободному движению конца иглы) набирают в шприц молоко и переносят его в стерильную пробирку с резиновой пробкой.

Спинномозговая жидкость: обычно берут при наличии менингоэнцефалитического синдрома путем пункции.

Кишечник: если исследуют содержимое кишечника, то пересылают отдельные отрезки кишечника, перевязанные на концах лигатурами. В остальных случаях интересующие отрезки кишечника освобождают от содержимого, промывают стерильной водой и помещают в банку со стерильным 30%-м водным раствором глицерина или насыщенным раствором хлорида натрия. Объем консервирующей жидкости должен превышать объем взятого материала в 4--5 раз. Кишечник отправляют в лабораторию вместе с регионарными лимфатическими узлами.

Фекалии берут стерильными ватными или ватно-марлевыми ректальными тампонами, которые вводят на 8-10 см в прямую кишку, а затем помещают в стерильную пробирку. Если нет возможности сразу сделать посев, используют консервирующие смеси. В противном случае нарушается исходное количественное соотношение микробных видов, и размножение некоторых бактерий может привести к инактивации искомого возбудителя.

От трупов животных кал можно послать в отрезке невскрытого кишечника, завязанного с обоих концов. Кал в лабораторию должен быть доставлен не позднее 24 ч после его взятия.

Кожа. Для исследования участков кожи берут наиболее пораженные кусочки ее размером 10X10 см и посылают в стерильной, герметически закупоренной посуде.

Кровь для серологического исследования у КРС, овец, лошадей, верблюдов, оленей, овец и коз берут из яремной вены в верхней трети шеи в стерильные бактериологические пробирки, у свиней - из хвостовой, передней краниальной вен или глазного синуса, у птиц - из подкрыльцовой вены, у кроликов - из краевой ушной вены, кровь у лисиц и песцов берут из бедренной вены; у норок -- путем отсечения подушечки среднего пальца задней лапы или кончика хвоста.

Иглы перед взятием крови обязательно стерилизуют кипячением. Шерсть на месте взятия крови тщательно выстригают, а кожу дезинфицируют спиртом или эфиром, можно и 3%-ным раствором карболовой кислоты. Нужно следить, чтобы кровь стекала в пробирку струей, а не каплями. Кровь, взятая каплями и вспененная, скорее гемолизируетея и часто дает неправильные результаты при исследовании. Не следует допускать, чтобы кровь попадала на землю. Для этого надо пользоваться баночкой с дезинфицирующей жидкостью, куда опускают первую порцию крови.

Брать кровь для получения сыворотки надо по возможности утром, до кормления животных. Для серологического исследования берут по 7--10 мл крови от крупного рогатого скота, лошадей, овец, свиней; от пушных зверей и птиц -- по 1--2 мл.

Сыворотку крови получают методом отстоя. Для этого пробирки с кровью необходимо выдержать до формирования сгустка в тепле (1,5-2 ч), затем для отделения от стенок пробирки обвести сгусток чистой стеклянной палочкой или спицей. Для отстаивания сыворотки пробирки с кровью помещают в холодильник при 4-6?С на 18-20 ч. После ретракции сгустка сыворотку крови переливают в серологические пробирки с резиновыми пробками. При необходимости сыворотку крови консервируют, добавляя в пробирку несколько крупинок борной кислоты, тиомерсал (конечное разведение 1:10000), 5%-й фенол (1 капля на 1 мл сыворотки при постоянном помешивании), или замораживают. При необходимости сыворотки можно высушивать. Делается это следующим образом. Сыворотку (0,4 мл) наносят на фильтровальную бумагу (5x5 см) и выдерживают при рассеянном свете до полного высыхания. На каждом листе с сывороткой делают соответствующие записи простым карандашом, завертывают в пергаментную бумагу (каждую пробу отдельно), упаковывают в конверт и в таком виде отсылают в лабораторию, где каждую пробу сухой сыворотки помещают в пробирку с 2 мл физраствора. Термостатируют 6--10 ч или выдерживают при комнатной температуре 24 ч, а затем исследуют. Сухие сыворотки сохраняют антигенные свойства 40--130 дней. Сыворотки, консервированные фенолом или борной кислотой, пригодны для исследования в течение 30 дней; замороженные сыворотки -- в течение 3 дней после однократного оттаивания. Мутные, проросшие, гемолизированные сыворотки исследованию не подлежат. На каждой пробе сыворотки указывают ее номер или кличку животного, или фамилию владельца животного. Пробы направляют с описью в двух экземплярах.

Консервирование, транспортировка и хранение материала. Материал помещают в стерильную стеклянную посуду (пробирки, флаконы, банки и т. д.), закупоривают.

При подозрении на особо опасные инфекции сосуды с материалом помещают в герметичный металлический пенал, который опечатывают.

Транспортировку и хранение материала до исследования проводят таким образом, чтобы предотвратить размножение сопутствующей микрофлоры и инактивацию искомого микроорганизма. С этой целью исследуемый материал (кусочки органов) помещают в стерильную смесь равных объемов глицерина и физиологического раствора и помещают в термос, содержащий: 1) снег или лед и поваренную соль (в соотношении 3:1), температура смеси -15 - -20?С; 2) равные части сухого льда и этанола, температура смеси около -70?С.

Для консервирования материала, содержащего энтеробактерии. Используют смеси, в которых исследуемый материал должен составлять 1/3 общего объема.

Глицериновая смесь: глицерин - 500 мл, физиологический раствор - 1000 мл, рН смеси доводят до 7,8-8,0 добавлением 20%-ного раствора гидрофосфата калия. Смесь стерилизуют дробно, текучим паром.

Фосфатная буферная смесь: дистиллированная вода - 1000 мл, дигидрофосфат калия - 0,45 г, гидрофосфат калия - 5,34 г. Стерилизуют при 121?С 20 мин.

Для энтеробактерий используют также накопительные среды (селенитовая, магниевая, желчный бульон), которые должны составлять 4/5 общего объема. Независимо от способа консервирования фекалии транспортируют и сохраняют до посева при 2-6 ?С.

Трупы мелких животных, части трупов животных и отдельные органы в свежем (нефиксированном) виде отправляют для исследования в лабораторию только с нарочным. Посылаемый материал, особенно от животных, подозрительных по заболеванию инфекционной болезнью, должен быть тщательно упакован в плотный деревянный или металлический ящик, чтобы предупредить возможность рассеивания инфекции в пути. Перед упаковкой материал необходимо завернуть в ткань или мешковину, смоченную дезинфицирующим раствором (фенольный креолин, известковое молоко), и плотно уложить в ящик, чтобы не болтался

при пересылке почтой стеклянной посуды, в которой заключен посылочный материал с подозрением на наличие опасных болезней (сап, сибирская язва, эмфизематозный карбункул, бруцеллез, туляремия, перипневмония крупного рогатого скота, чума крупного рогатого скота, чума свиней, псевдочума птиц, ящур, бешенство), обязательно упаковывают в металлическую коробку, которую запаивают, пломбируют или опечатывают, а затем упаковывают в деревянный ящик.

На лицевой стороне посылки вверху должна быть надпись «Осторожно -- стекло» и «Верх».

Если такой материал доставляют с нарочным, можно отправлять его в стеклянной, герметически закупоренной посуде, без металлической коробки, но в ящике.

На взятый патологический материал составляют сопроводительный документ. Если при вскрытии посылки в лаборатории будут установлены несоответствие сопроводительному документу или парча патологического материала, то обязательно составляют акт, копию которого отправляют ветеринарному врачу, направившему материал в лабораторию.

В сопроводительном документе указывают: название и адрес хозяйства, фамилию ветеринарного работника, направляющего материал, вид животного, от которого материал получен, характер материала, на какую инфекцию необходимо исследовать. Кроме того, прилагают протокол патологоанатомического вскрытия и описание клинико-эпизоотологических данных.

Поступивший в лабораторию неконсервированный материал можно хранить при температуре 4?С 1-2 сут; консервированный в 50%-ном растворе глицерина (кусочки органов) - насколько недель; для длительного хранения материал замораживают при -15 - -20?С.

Взятие проб воды, почвы, кормов, шерсти.

Пробы почвы отбирают почвенным буром. Обследуемую площадь разбивают на участки размером не более 16 м2. Пробы почвы с территории, подозреваемой в поверхностном обсеменении сибиреязвенным возбудителем, берут на глубину до 15 см. На территории скотомогильников сначала снимают на 2--3 см верхний слой почвы, а затем берут пробы на глубину до 2 м через каждые 25 см.

Вынутую из глубины и не использованную для проб почву (3 части) обеззараживают сухой хлорной известью (1 часть), содержащей 25% активного хлора. Если почва сухая ее слегка увлажняют. Место отбора проб также дезинфицируют раствором хлорной извести (5% активного хлора), инструменты -- огнем паяльной лампы

Пробы воды отбирают барометром или специально приспособленной бутылью. Пробы воды из естественных и искусственных водоемов берут на глубине 10--15 см и у дна. Пробы придонного осадка -- у береговой кромки и исследуют их так же, как и пробы почвы Объем каждой пробы -- не менее 0,5 л, общий объем -- не менее 1 л.

Перед взятием проб из водопровода кран обжигают горящим спиртовым тампоном. Открыв кран, набирают в стерильную посуду 0,5 л воды, затем в течение 10 мин спускают воду и берут еще 0,5 л в другую стерильную посуду.

Первичные пробы грубых кормов берут из разных мест при помощи ножниц и пинцета. С 4 м2площади берут 1 пробу сухого корма массой не менее 40 г, зеленой массы-- до 100 г.

Корнеплоды и клубни берут 1--3 шт. /4 м2 площади бурта, отсека. С отобранных корнеплодов срезают поверхностный слой в местах, где имеются остатки земли.

Пробы силоса, хранящегося в ямах (траншеях), отбирают так же, как и пробы почвы, а вынутого из траншеи, как пробы зеленой массы. В лабораторию направляют среднюю пробу, которую составляют из хорошо перемешанных первичных проб данной партии, емкости и т. п. Масса средней пробы должна быть не более 500 г.

Отбирают пробы концентрированных кормов сухим стерильным пробным щупом. После взятия проб от каждого объекта (партии) щуп очищают и дезинфицируют огнем паяльной лампы. От незатаренных кормов первичные пробы отбирают из расчета 1 проба (не менее 100 г) на 4 м2 поверхности. Берут не менее 5 проб от каждого закрома, партии. Первичные пробы берут из поверхностных и глубоких слоев корма равномерно по всей площади.

Отдельно берут образцы корма из тех мест, откуда скармливали животным перед заболеванием, а также из остатков, находящихся в помещении и в кормушках. Отобранные средние образцы кормов отдельно заворачивают в бумагу, перевязывают шпагатом и надписывают.

Если шерсть упакована в кипы, берут не менее 10 образцов из разных мест каждой кипы, а также пыль, скопившуюся внутри обшивки. Образцы от одной кипы объединяют и упаковывают вместе.

Каждую отобранную пробу помещают в сухую стерильную стеклянную банку и закрывают стерильной крышкой, пробкой или пергаментом. Можно использовать полиэтиленовые мешочки, которые завязывают шпагатом. Пробы воды наливают в стерильные стеклянные бутылки и закрывают стерильными резиновыми пробками. Пробы нумеруют (пробы шерсти -- номером кипы), упаковывают во влагонепроницаемую тару и направляют в лабораторию с нарочным.

В сопроводительной записке к пробам указывают причину проведения исследования, какой материал, в каком количестве направляют, место и дату отбора материала, для проб шерсти и кормов дополнительно указывают их происхождение, объем (массу) партии, вид упаковки и количество упаковочных единиц.

При направлении в лабораторию нескольких проб почвы, шерсти и т.п. к сопроводительной прилагают опись с указанием номерка проб и места их отбора.

Отбор и упаковку проб проводят с соблюдением мер личной профилактики и общепринятых в бактериологической практике правил стерильности, не допуская рассеивания возбудителя при отборе и транспортировке проб.

Краткое описание

Отбор материала. Материал берут с учетом клинических признаков болезни, которые указывают на поражение той или иной системы, патологоанатомической картины при вскрытии (изменения в различных органах - печени, легких, кишечнике и т. д.), а также основываясь на предполагаемом диагнозе, поскольку для каждой инфекции характерна определенная локализация возбудителя в организме.

Устройство вирусологической лаборатории

Вирусологическая лаборатория - учреждение, занимающееся изучением вирусов и вирусных заболеваний или производством вирусных препаратов (вакцин, диагностикумов, противовирусных иммунных сывороток и т. п.).

Размеры и штаты вирусологической лаборатории зависят от назначения и объема работы. Но в любом случае обязательным является обеспечение безопасности персонала и возможности проведения работы в стерильных условиях.

Вирусологическая лаборатория состоит из собственно лаборатории и подсобных помещений - для обработки и стерилизации посуды, приготовления питательных сред (для выращивания клеточных культур, выявления бактерий и микоплазм), лиофилизации вирусов, инкубатора, вивария и др. Если вирусологическая лаборатория входит в состав более крупного учреждения (института, санитарно-эпидимиологической станции и т. п.), подсобные помещения могут быть общим для ряда лабораторий или всего учреждения.

Собственно вирусологическая лаборатория строится по типу бактериологической лаборатории с учетом специфики работы - выращивания клеточных и тканевых культур, ультрацентрифугирования, хранения вирусов при низких температурах и др. Она оборудуется для диагностической работы (выделения вирусов и серологических реакций), для изучения свойств вирусов, их структуры, проведения генетических исследований и т. п.

Помещение вирусологической лаборатории должно быть светлым и достаточно просторным, легко мыться и обрабатываться дезинфицирующими растворами, с этой целью стены красят масляной краской или облицовывают плиткой. Пол не должен иметь щелей. Окна лаборатории ориентируют на север или северо-запад. При ориентировке на юг окна завешивают белыми шторами. Помещение оборудуют приточно- вытяжной вентиляцией примерно с 10-кратным обменом воздуха; оно должно быть обеспечено холодной и горячей водой, а также светильным газом. Желательно, чтобы в лаборатории имелась централизованная система сжатого воздуха (давление до 1,0-1,2 атм) и вакуума (до700-760 мм рт. ст. остаточного давления). Должны быть также предусмотрены душевые комнаты для сотрудников. При работе с особо опасными вирусами необходимо обезвреживание (путем кипячения) сточных вод.

В вирусологической лаборатории обязательно наличие отдельного помещения для стерильной работы, состоящего из двух отделений, разделенных стеклянной перегородкой. Внутреннее помещение - бокс - должно быть небольшим (6-8 м?), с низким потолком. Дверь должна открываться в предбоксник, служащий для одевания дополнительной одежды, отделенный второй перегородкой от остального помещения. Для стерилизации бокса и предбоксника используют бактерицидные лампы из увиолевого стекла с преобладающей длиной волны 254 нм. Для этой цели можно использовать лампы БУВ, которые устанавливают из расчета 2-2,5 вт на 1 м? помещения; средний срок службы лампы 1500 часов. Обязательно обеспечение боксов стерильным воздухом за счет приточной вентиляции при 4-5-кратном обмене; для стерилизации воздуха могут быть использованы фильтры ЛАИК из ткани Петрянова - тип ФПП.

В боксе должны находиться лишь необходимые для работы инструменты и посуда, стерилизатор для инструментов, широкогорлые банки с дезинфицирующим раствором, бак с крышкой для зараженного материала. При работе с возбудителями особо опасных инфекций в боксе устанавливают дополнительно настольный бокс, в котором стерилизуют путем фильтрации как поступающий, так и оттекающий воздух. Основные правила работы с особо опасными возбудителями регламентируются специальной инструкцией.

Для дезинфекции в вирусологической лаборатории используют чаще всего лизол 1-5%, хлорамин 1-5%, формалин 2,5-5%.

Помимо обычной бактериологической посуды, в вирусологической лаборатории должны быть: гомогенизатор для измельчения тканей, магнитные мешалки, микроскопы (световые для исследования в обычном и ультрафиолетовом свете, а также электронные), центрифуги различной мощности (на 3-5 тыс. об./мин, а также с охлаждением на 12-15 тыс. и 60 тыс. об./мин), имеющие набор роторов. Необходимы термостаты, одновременно работающие при различной температуре (от 25 до 40?С), в том числе с подачей углекислого газа, или термостатные комнаты. Вирусологическая лаборатория оборудуется рефрижераторами или холодильными камерами с температурой +4, -20 и -40?С. Для хранения культур клеток необходимы сосуды Дьюара с жидким азотом или холодильники с температурой ниже -90?С.

Лаборатории, изучающие биохимию вирусов оборудуют по типу химических. Работа с радиоактивными изотопами производится в специально оборудованном помещении.

В отделениях по приготовлению сред, помимо обычной химической посуды необходимо иметь установки для обработки воды, которая дважды дистиллируется в стеклянных аппаратах или деионизируется на колонках с ионообменными смолами. Для стерилизации растворов, которые нельзя автоклавировать, используют асбестобумажные стерилизующие пластины Зейтца, вмонтированные в фильтры типа Сальникова (Ф-140, ФС-3, ФС-7 и т. п.); фильтрация осуществляется при давлении 0,5 атм.

Рабочий стол вирусолога, по возможности располагают на расстоянии 1 м от окна и покрывают линолеумом или стеклом. На столе помещают газовую горелку. Обязательным оборудованием рабочего места является банка для пипеток с дезинфицирующим раствором (3% раствор карболовой кислоты), закрывающийся фарфоровый или стеклянный сосуд для ваты, набор штативов для пробирок, эмалированные кюветы, пинцеты, ножницы и скальпель, чистые предметные стекла с лунками и без них, а также покровные стекла. Микроскопы хранят в футляре или под стеклянным колпаком. В вирусологической лаборатории также должна быть умывальная раковина, над которой на полке помещают бутыль с раствором для дезинфекции рук.

Виварий должен быть отделен от помещения собственно вирусологической лаборатории. В нем необходимо иметь комнаты для карантина поступающих животных, для их заражения и отдельно для вскрытия. Работа с мелкими лабораторными животными производится за защитным стеклом. Обеззараживание клеток для содержания животных лучше производить паром. Необходимо также иметь крематорий для сжигания трупов животных и мусора.

Устройство областной вирусологической лаборатории, в которую хозяйство направляет материал для исследований, отвечает основным правилам и нормам.

Стерилизация лабораторной посуды

Стерилизация - обеспложивание; уничтожение в каком-либо материале патогенных и непатогенных микроорганизмов в вегетативной и споровой формах.

Подготовка посуды для стерилизации. Лабораторная посуда должна быть чисто вымытой и простерилизованной. Для мытья используют растворы мыла или химические моющие средства. Новую посуду предварительно кипятят в 1-2%-м растворе соляной кислоты, во избежание последующего выщелачивания стекла. Вымытую в проточной воде посуду ополаскивают дистиллированной водой и высушивают.

Бактериологические пробирки. Конические, матровые колбы закрывают ватно-марлевыми пробками, состоящими из плотно скрученных валиков ваты, покрытых слоем марли. Для бактериологических пробирок также разработаны металлические пробки в виде наружных колпачков. Следует учитывать, что стерилизация ватных пробок при высокой температуре приводит к выделению из ваты веществ, ингибирующих рост некоторых чувствительных бактерий, например бруцелл.

При монтаже пипеток в верхний конец вставляют ватный тампон. У пипеток Пастера должен быть запаян капилляр. Каждую мерную пипетку заворачивают длинной полоской бумаги шириной 4-5 см, начиная с носика, винтообразно по всей длине. Пипетки Пастера заворачивают в бумагу по 10-20 штук, пробирки - по 15-20 штук. Все виды пипеток лучше хранить до и после стерилизации в специальных металлических пеналах. Пробки на колбах дополнительно покрывают колпачками из бумаги.

Чистые чашки Петри в собранном виде перед стерилизацией заворачивают в бумагу по 3-4 штуки. После стерилизации бумага предохраняет стерильную посуду от загрязнения микрофлорой.

Посуду перед стерилизацией размещают в сушильном шкафу не слишком плотно, чтобы обеспечить циркуляцию воздуха, и следят, чтобы температура не превышала 180?С, так как при более высокой температуре бумага и вата будут обугливаться. После окончания стерилизации сушильный шкаф не открывают до тех пор. Пока температура в нем не снизится до 70-80?С, поскольку резкий перепад температур может привести к разрушению стекла.

Если посуда предназначена для стерилизации в ней питательных сред автоклавированием под давлением не менее 1 атм, то ее предварительно не стерилизуют. При стерилизации сред текучим паром или в автоклаве под давлением не более 0,5 атм необходимо использовать стерильную посуду.

Стерилизация сухим нагретым воздухом. Метод применяют для стерилизации чистой стеклянной посуды. Для этого используют печь Пастера - специальный сушильный шкаф с двойными стенками. Снаружи он облицован теплонепроницаемым материалом. В верхней его части находится термометр. Между теплонепроницаемой обшивкой и внутренним металлическим корпусом на дне помещен автоматический электронагревательный элемент. При включении сушильного шкафа в электросеть воздух внутри него нагревается. По достижении заданной температуры отмечают время начала стерилизации. Режим стерилизации: при температуре 155-160?С - экспозиция 2 ч, при 165-170?С - 1-1,5 ч, при 180?С - 1 ч. По истечении времени стерилизации нагревание прекращают.

Автоклавирование. Это стерилизация паром под давлением в сочетании с высокой температурой в специальном аппарате - автоклаве. При встрече насыщенного пара с более холодным объектом пар конденсируется, превращаясь в воду, в результате чего выделяется большое количество тепла. Кроме того, уменьшается объем пара, что способствует его проникновению во внутренние части стерилизуемого материала. Обязательное условие - поступление действительно насыщенного пара, чтобы его соприкосновение с холодным предметом вело к немедленной конденсации и нагреванию. Промышленность выпускает вертикальные и горизонтальные автоклавы.

Вертикальный автоклав - это двустенный металлический котел цилиндрической формы, закрываемый герметично крышкой. Между стенками через специальный кран с воронкой заливают воду до определенного уровня. Внутренняя стенка котла в верхней части снабжена отверстиями, в нижней - краном, через который при нагревании воды пар вытесняет воздух из котла. Сверху на автоклав надевают металлический защитный каркас, причем между ним и самим автоклавом должно быть свободное пространство. Автоклав нагревают включением в электросеть.

Автоклав загружают стерилизуемым материалом, закрывают крышку и кран, через который заливали воду, нижний кран временно отваляют открытым. Нагреваемая вода между стенками автоклава кипит, образующийся пар поднимается вверх и через верхние отверстия внутренней стенки проходит внутрь котла, толчками вытесняя воздух через нижний открытый кран. Когда воздух весь вытеснен, и пар начинает выходить ровной струей, нижний кран закрывают. В результате давление пара внутри автоклава повышается. Началом стерилизации считают момент, когда давление достигает заданной величины (по показателям манометра). Нагрев регулируют на протяжении всей стерилизации, поддерживая давление пара на одном уровне. При чрезмерном повышении давления внутри автоклава предусмотрен предохранительный клапан, через который избыток пара автоматически выходит наружу.

При повышении давления пара соответственно повышается и температура в автоклаве.

Манометр показывает давление пара без учета окружающего атмосферного давления (760 мм рт. ст.). По истечении времени стерилизации автоклав отключают. После остывания при нулевом показании манометра открывают кран для спуска пара.

Горизонтальный автоклав отличается от вертикального конструкцией, но принцип действия у него такой же.

Размещено на Allbest.ru