Онкогенные вирусы человека: от латентного вирусоносительства до возникновения опухоли

Размещено на http://www.allbest.ru

Размещено на http://www.allbest.ru

Введение

Основателем вирусной онкологии следует считать Пэйтона Рауса, который в 1911 г. описал куриную саркому, перевиваемую от птицы к птице с помощью бесклеточных фильтратов. Вирус получил название вируса саркомы Рауса. К середине XX в. было обнаружено значительное число вирусов, вызывающих опухоли у человека и животных, в частности, были открыты вирусы сарком и лейкозов мышей, кошек, обезьян, крупного рогатого скота. Позже проведенными исследованиями было доказано, что практически у всех представителей животного мира имеются опухоли вирусного происхождения. Большой вклад в изучение вирусного канцерогенеза внесли и отечественные ученые. Среди них следует назвать таких выдающихся исследователей, как Л.А. Зильбер, Г.Я. Свет-Молдавский, Н.П. Мазуренко, Б.А. Лапин, А.Д. Альтшейн, И.Н. Крюкова, В.Н. Степина, А.М. Дядькова, Л.С. Яковлева и многие другие.

Очень часто онкогенным вирусам, в том числе и человека, приписывают свойства вирусов инфекционных. Причиной тому, по-видимому, являются достаточно хорошая информированность населения на бытовом уровне об инфекционных вирусах и вызываемых ими заболеваниях, и практически полная неосведомленность об онкогенных вирусах и их свойствах. Действительно, если внедрение инфекционного вируса в организм животного или человека влечет за собой возникновение соответствующего заболевания, то, следуя логике обывателя, заражение онкогенным вирусом должно привести к возникновению соответствующей опухоли.

У многих представителей животного мира такая взаимосвязь действительно довольно часто наблюдается. Так, вирусы лейкоза кур, мышей, крупного рогатого скота вызывают соответствующие лейкозы; вирус папилломы кролика - папиллому у кроликов и т. д. Однако взаимоотношения между онкогенными вирусами и представителями животного мира гораздо сложнее и многообразнее. Оказалось, что некоторые вирусы, считавшиеся онкогенными только для одного вида животных, способны вызывать опухоли у разных представителей млекопитающих (например, куриный вирус саркомы Рауса вызывает также опухоли у крыс, мышей, кроликов, змей и т. д.). В почках зеленой мартышки обнаружен вирус (SV-40), непатогенный для этого вида обезьян, но высоко онкогенный для некоторых видов млекопитающих, в частности, хомяков. Не менее сложной оказалась ситуация и с онкогенными вирусами человека: часть из них может персистировать в организме инфицированного лица всю жизнь, не вызывая у него новообразования и какой-либо другой патологии. Некоторые вирусы являются убиквитарными для человека, т. е. чрезвычайно широко распространены в человеческой популяции, благополучно с ним сожительствуя. После заражения человека онкогенным вирусом опухолевый процесс все же может возникнуть, но только при сочетанном действии дополнительных факторов и наличии определенных условий, что происходит достаточно редко, о чем будет сказано ниже.

Одно из чрезвычайно важных отличий инфекционного вируса от онкогенного заключается в том, что генетический материал опухолеродных вирусов, как правило, внедряется функционально и физически в геном клетки, нарушая ее нормальную жизнедеятельность и превращая ее в конечном итоге в злокачественную. При этом инфицированная клетка не гибнет, она усиленно размножается и дополнительного внедрения вируса уже не требуется. Инфекционный же вирус, проникая в клетку, заставляет все ее ресурсы работать на себя, что крайне редко происходит с онкогенным вирусом. В этом случае процесс заканчивается созреванием вирусного потомства и гибелью клетки.

Другое важное отличие онкогенных от инфекционных вирусов состоит в том, что в геноме большинства ДНК- и РНК-содержащих онкогенных вирусов были найдены гены, названные онкогенами, которые кодируют белок, ответственный за превращение нормальной клетки в опухолевую, причем попадание в организм животного вируса, содержащего онкоген (примером могут служить саркоматозные вирусы птиц и других животных), приводит к быстрому возникновению опухоли. У животного, зараженного вирусом, не содержащим онкогена (примером могут служить лейкозные вирусы мышей), латентный период возникновения новообразования может занять большую часть их жизни. Это происходит потому, что злокачественная трансформация клетки наступает только в случае внедрения вирусного генома в клеточный в непосредственной близости к гену или группе генов, ответственных за регуляцию роста и дифференцировки клетки, нарушая нормальную функцию этих генов.

Следует отличать, однако опухоли, индуцированные вирусами, от опухолей, в которых вирус присутствует в качестве «пассажира». У опухолей, вирусного происхождения заражение клеток предшествует появлению опухоли, и вирусные маркеры в организме возникают еще до формирования опухоли, в то время как в опухолях невирусного происхождения клетки опухоли могут быть заражены вирусом уже после ее появления. Опухоль вирусного происхождения возникает из одной -- единственной зараженной вирусом клетки, а для самой опухоли характерна моноклональность и интеграция вируса в одни и те же места генома опухолевой клетки. Обнаружена также корреляция между высокой заболеваемостью определенным типом рака и высокой инфицированностью населения определенным типом вируса. Для индуцированных вирусом опухолей характерно снижение заболеваемости определенным типом рака после вакцинации против соответствующего вируса и/или проведения других профилактических мер.

Исследования 1970-1980-х гг. показали, что онкогены РНК-содержащих вирусов (называемых еще ретровирусами), т. е. вирусов, содержащих обратную транскриптазу, а также некоторых ДНК-содержащих онкогенных вирусов, имеют клеточное происхождение. Было доказано, что когда-то (по-видимому, миллионы лет тому назад) регуляторные гены клетки были захвачены этими вирусами и уже в составе вирусного генома превратились в онкогены. Это открытие оказалось чрезвычайно важным для понимания механизма возникновения опухоли, т. к. стала очевидной возможность превращения нормальных клеточных генов в онкогены под воздействием спонтанных или вызванных какими-либо факторами генетических мутаций и без участия вирусов. И действительно, такие клеточные онкогены, не имеющие никакого родства с вирусными онкогенами, были обнаружены во многих опухолях невирусного происхождения человека и животных.

Не менее важным для понимания механизмов канцерогенеза оказалось и открытие в нормальной клетке генов-супрессоров (например, р53, Rb), препятствующих превращению клетки в злокачественную. Инактивация генов-супрессоров и преобразование регуляторных клеточных генов в активно функционирующий онкоген представляется сегодня основным механизмом превращения нормальной клетки в опухолевую. Опухоли же, индуцированные вирусами, представляют собой лишь частный случай внесения извне в клетку онкогенов и инактивации в ней генов-супрессоров. Иначе говоря, вирус наряду с химическими канцерогенами и лучевой энергией, следует рассматривать в качестве одного из возможных канцерогенных факторов, способных индуцировать опухоль.

Таким образом, опухоли могут иметь вирусную и невирусную природу. Роль вирусов в возникновении ряда опухолей животных доказана уже давно. Особенно высок процент опухолей вирусного происхождения у короткоживущих животных (грызунов, кур), в то время как у приматов и человека большая часть новообразований, по-видимому, не связана с вирусами.

1. Механизмы клеточной трансформации

Чтобы стать злокачественной клетка должна приобрести, по крайней мере, 6 свойств как результат мутации генов, ответственных за деление клетки, апоптоз, репарацию ДНК, внутриклеточные контакты и т. д. В частности, на пути к приобретению злокачественности клетка, как правило:

1) самодостаточна в плане сигналов пролиферации (что может быть достигнуто активацией некоторых онкогенов, например, Н-Ras);

2) нечувствительна к сигналам, подавляющим ее рост (что происходит при инактивации гена опухолевого супрессора Rb);

3) способна ослабить или избежать апоптоза (что происходит в результате активации генов, кодирующих факторы роста);

4) формирование опухоли сопровождается усиленным ангиогенезом (что может быть обеспечено активацией гена VEGF, кодирующего ростовые факторы эндотелия сосудов;

5) генетически нестабильна;

6) не подвергается клеточной дифференцировке;

7) не подвергается старению;

8) характеризуется изменением морфологии и локомоции, что сопровождается приобретением свойств к инвазии и метастазированию.

Поскольку мутации генов являются событиями случайными и достаточно редкими, их накопление для инициации клеточной трансформации может длиться десятилетиями. Трансформация клетки может произойти гораздо быстрее в случае высокой мутагенной нагрузки и/или дефектности (слабости) механизмов защиты генома (генов p53, Rb, ДНК репарации и некоторых других). В случае же инфицирования клетки онкогенными вирусами, кодируемые вирусным геномом белки, обладающие трансформирующим потенциалом, нарушают нормальные клеточные сигнальные связи, обеспечивая условия для активной клеточной пролиферации.

2. Онкогенные вирусы человека

Хорошо известно, что возникновение примерно 15-20% новообразований человека имеют вирусное происхождение. Среди наиболее часто встречающихся таких вирусом индуцированных опухолей можно назвать рак печени, рак шейки матки, рак носоглотки, лимфому Беркитта, лимфому Ходжкина и многие другие. В настоящее время экспертами Международного Агентства по Изучению Рака (МАИР) следующие вирусы рассматриваются в качестве онкогенных для человека:

Ё вирусы гепатита В и С (Hepatitis B virus и Hepatitis C virus, HBV/ HCV), вызывающие рак печени;

Ё определенные типы (16 и 18) папиломавирусов человека (Human papillomavirus, HPV) -- являющихся этиологическим агентом рака шейки матки и некоторых опухолей ано-генитальной сферы;

Ё вирус Эпштейна-Барр (Epstein-Barr virus, EBV), принимающий участие в возникновении целого ряда злокачественных новообразований;

Ё недавно открытый герпевирус человека 8-го типа (Human herpesvirus type 8, HHV-8), играющий важную роль в возникновении саркомы Капоши, первичной выпотной лимфомы, болезни Кастельмана и некоторых других патологических состояний;

Ё вирус Т-клеточного лейкоза человека (Human T-cell leukemia virus, HTLV-1), являющийся этиологическим агентом Т-клеточного лейкоза взрослых, а также тропического спастического парапареза и ряда других неонкологических заболеваний;

Ё вирус иммунодефицита человека (Human immunodeficiency virus, HIV) -- не обладающего трансформирующими генами, но создающего необходимые условия (иммунодефицит) для возникновения рака.

3. Вирусы гепатита человека В и С (HBV, HCV)

HBV -- это ДНК-содержащий вирус, относящийся к группе гепаднавирусов, в то время как HCV относится к семейству Flaviviridae и его геном представлен однонитевой РНК.

В настоящее время доказано, что из общего числа зарегистрированных раков печени (гепатокарцином) возникновение более половины связано с инфицированием HBV, четверти - с инфицированием HCV и в 22% случаев причина другая. Смертность от рака печени на планете среди всех смертностей от онкологических заболеваний занимает 3-е место после смертности от рака легкого и желудка. При этом каждая пятая диагностируемая в мире опухоль - это рак печени.

HBV.

Инфицированность населения HBV колеблется от низкой, не превышающей 2% в США и странах Западной Европы, до высокой в странах Африки и Юго-Восточной Азии, приближающейся к 10%.

Способы заражения HBV: перинатальный, парентеральный и половой. В ДНК HBV идентифицированы 4 открытые рамки считывания, ORFs (рис 1): ORF P кодирует РНК-зависимую ДНК полимеразу (обратную транскриптазу); ORF C - структурный белок нуклеокапсида (HBc); ORF S/preS - несколько гликопротеидов оболочки вириона: L - наиболее крупный (LHBs); M - средний, усеченный по С-концу (MHBs(t)) и мелкий S (SHBs); L и M белки имеют общий S-домен и отличаются по размеру и структуре своего N-домена. Классический поверхностный антиген (HbsAg) содержит только S-домен. ORF X кодирует специфический белок (HBx) размером 17 kDa. Продукты генов Х (HBx) и PreS2 (LHBs и MHBs) обладают способностью к транс-активации других генов. Поскольку HBV не содержит собственного онкогена, опухоли возникают в среднем через 30 лет после первичного инфицирования. Больные HВV-ассоциированными гепатокарциномами, как правило, позитивны по основному вирусному антигену HBsAg. Инициация опухолевого процесса связана с активацией транс-активаторов HBx или MHBs, стимулирующих пути передачи сигналов. Вирус-ассоциированные гепатомы моноклональны, но интеграция вируса в клеточный геном каждый раз случайна. При этом ДНК вируса обычно интегрирована в геном клетки, обеспечивая ее активную пролиферацию. Мутации в гене р53 обнаружены только в опухолях больных, содержащих ДНК HBV или подвергавшихся воздействию афлатоксина, обладающего канцерогенным действием.

Действие вируса гепатита В и С условно можно подразделить на 2 составляющие: на неспецифическое и специфическое действие. Неспецифическое действие обусловлено хроническим воспалительным эффектом. С одной стороны, известно, что в ответ на инфицирование HBV Т-клетками и мононуклеарами секретируются генотоксические факторы, способные вызвать перестройку протоонкогенов и генов супрессоров. С другой стороны, вызываемый хроническим воспалением цирроз печени, сопровождающийся нарушением нормального взаимодействия клеток между собой и внеклеточной матрицей, ведет к ослаблению нормального контроля клеточного роста. Специфическое действие вирусов заключается в модуляции внутриклеточных сигнальных путей: нарушении клеточного цикла, апоптоза и дифференцировки. За эти нарушения в большей степени ответственен ген Х у HBV и, по-видимому, комплекс белков у HCV.

Рис. 1. Основные белки, кодируемые генами вирусов гепатита В (HBV) и гепатита С (HCV) (Т.М. Block, A.S. Mehta, C.J.Fimmel and R.Jordan, 2003)

Продукты генов HBV и HCV.

А) Геном HBV представлен в виде циркулярной ковалентно-замкнутой формы (эписомы), где жирными линиями показаны транскрипты, соответствующие продуктам гена env (оболочечным или поверхностным, PreS 1, PreS2 и S), полимеразы, X, а также генам, кодирующим продукты нуклеокапсида. Цифры указывают позиции нуклетидов.

Б) Линейная, размером 9 kb, форма генома HCV, условно разделена на кодирующие области. Основные белки, кодируемые HCV, указаны на схеме.

Возможный сценарий возникновения рака печени, ассоциированного с HBV

На фоне ослабленного (по разным причинам) иммунного ответа больного инфицированные HBV гепатоциты продолжают находиться в организме в течение нескольких месяцев, и инфекция становится хронической. В результате генетических перестроек происходит делеция гена X и некоторой части генов PreS2, при этом клетки печени становятся HBsAg-негативными и окончательно уходят из-под иммунологического контроля. Далее происходит селекция клеток, в которых интегрирована ДНК HBV и которые содержат 3 основных транс-активатора, а именно: HBx, LHBs и/или MHBs(t). Транс-активаторы активируют клеточные гены, ответственные за пролиферацию клеток, синтез цитокинов (IL-6) и т. д. Цитокины, секретируемые клетками, содержащими транс-активаторы, создают микроокружение из прилегающих фибробластов, эндотелиальных клеток и др., в свою очередь, выделяющих другие ростовые факторы, стимулирующие по паракринному типу пролиферацию гепатоцитов. Усиленная пролиферация гепатоцитов может привести к генетическим поломкам, которые будут способствовать селекции клеток с ускоренной пролиферацией и приобретению ими признаков злокачественной трансформации. В опухолевых клетках печени часто имеет место инактивация опухолевых супрессоров р53, Rb, BRCA2 и Е-кадхерина. Отмечена также активация теломеразы в печеночных клетках на стадии их превращения в злокачественные и нарушение функционирования ряда важных сигнальных систем.

Что касается HCV, то инфицированность им населения в различных регионах колеблется от десятых долей процента в Европейских странах до 1-5% в странах ближнего Востока и Азии. К группам лиц, подвергающихся наибольшему риску быть зараженными, относятся наркоманы, больные, часто подвергающие гемодиализу, и медицинские работники.

Способы заражения HСV: парентеральный, реже др. пути. Наличие инфекции определяют по присутствию в сыворотке крови вирусоспецифических антител либо РНК вируса в клетках крови. Геном HCV функционально может быть разделен на 2 участка. Один кодирует 3 белка вириона, 2 из которых являются белками вирусной оболочки, а один представляет ядро вириона. Другой участок, как правило, кодирует несколько белков, обладающих ферментативными свойствами. Механизмы канцерогенеза, ассоциированные с HCV, до сих пор остаются неясными из-за отсутствия адекватных клеточных моделей и являются предметом дальнейших исследований.

4. Профилактика и лечение рака печени

В настоящее время в мире существует глобальная эпидемия HBV: на планете инфицировано этим вирусом более 350 млн. человек. Каждый год от инфекции HВV умирают 2 млн. человек, из них 700 тыс. -- от рака печени. Оценить уровень инфицированности населения HCV достаточно трудно из-за высокого процента не учитываемых хронически протекающих случаев. В то же время в США в конце 1980-х годов было зарегистрировано 230 тыс. инфицированных этим вирусом, а среди ВИЧ инфицированных американцев процент инфицированных HCV уже в наши дни колеблется от 15% до 30%.

В 1970 г. началась регулярная вакцинация людей против HВV, поскольку считается, что вакцинация наиболее эффективный способ предотвращения распространения инфекции, острого и хронического гепатита, а следовательно, и рака печени. При этом отмечено, что серологическая защита после вакцинации возникает тогда, когда антитела к HBs достигают уровня или превышают 10 mlU/mL. Во многих странах мира, включая Россию, введена обязательная вакцинация против HBV среди новорожденных, детей раннего возраста, подростков и лиц из групп риска. С целью профилактики распространения HBV, и рака печени проводится тестирование всех беременных и доноров крови на HbsAg и запрещается использование в сельском хозяйстве в качестве ядохимикатов афлатоксины. обладающих канцерогенным действием. В странах, где такая вакцинация проводилась уже несколько лет подряд, зарегистрировано снижение заболеваемости раком печени, но окончательные выводы о целесообразности этого мероприятия будут сделаны не ранее конца 2005 г. С целью профилактики распространения HСV также проводится тестирование всех беременных и доноров крови на антитела к этому вирусу и в настоящее время ведется работа над изготовлением вакцины. Для подавления роста опухоли печени, оставшейся после первичной терапии, некоторые исследователи в качестве дополнительного лечения предлагают проводить иммунизацию больных дендритными клетками (являющихся мощными антиген презентирующими клетками), выделенными из опухолевого лизата в сочетании с введением IL-12.

5. Вирусы папиллом человека (HPV)

Известно более 100 типов HPV, но лишь небольшое их число связано с различными злокачественными поражениями. К группе высоко-онкогенных HPV для человека относят типы HPV 16 и HPV 18. Показано, что HPV16 ответствен за 50% случаев рака шейки матки (РШМ), HPV18, 31, 33, и 45 -- за 20% случаев и другие типы -- за остальные случаи этого заболевания. Интересно отметить, что у 90% женщин HPV инфекция исчезает самостоятельно через год после инфицирования под воздействием иммунной системы организма и лишь у незначительного числа инфицированных возникает РШМ. При этом скрининг с помощью метода Papanicolaou полезен для выявления РШМ лишь у ограниченного числа женщин. На рис. 2а и 2в схематически представлена генетическая структура вируса в виде эписомы, а также линейной формы, интегрированной в геном клетки соответственно. Как видно, геном вируса содержит 2 гена, L1 и L2, кодирующих структурные белки, участвующие в формировании вирусных частиц, и 7 так называемых ранних генов, Е1-Е7, кодирующих белки латентной инфекции. Установлено, что трансформирующими генами являются в основном гены Е6 и Е7, в меньшей степени Е5. Механизм функционирования генов Е6 и Е7 сводится к взаимодействию продуктов этих генов с продуктами 2-х генов супрессоров р53 и Rb и последующей инактивации последних, что приводит к неконтролируемому росту инфицированных клеток. На рис. 2,б схематически представлена анормальная дифференцировка эпителия слизистой, инфицированного HPV. Сравниваются нормальный и инфицированный эпителии. Видно, что синтез вирусной ДНК наиболее выражен в зернистом слое, в то время как экспрессия поздних генов и созревание вирусных частиц наиболее активно происходит в роговом слое эпителия.

Проведенные исследования показали, что каждый из выше упомянутых 3-х генов латентной HPV инфекции, обладающий трансформирующими потенциями, вносит свой вклад в нарушение сигнальных путей клетки, увеличение ее пролиферативной активности и накопление дополнительных генетических изменений. Совокупность повреждающих действий на клетку и приводит к возникновению рака. В частности, белок Е6, кодируемый геном Е6, способен вызвать трансформацию клетки только в присутствии белка, кодируемого геном Е7. Но Е6 связывает и инактивирует опухолевый супрессор р53 , что приводит к серьезным повреждениям в клетке. Кроме того, Е6 активирует ген обратной транскриптазы и теломеразы, что способствует иммортализации вируссодержащих клеток. Белок Е7, кодируемый соответствующим геном, в отличие от Е6 самостоятельно способен вызывать трансформацию клеток, но его действие значительно усиливается в присутствии Е6. Е7 связывает и инактивирует опухолевый супрессор рRb, что существенно облегчает вход клеток в S-фазу. С другой стороны он связывает и инактивирует (преодолевает) ингибирующее действие циклин-зависимых киназ, таких, как р21 и р27, что предупреждает арест клеток в фазе G1. В отличие от предыдущих белков белок Е5 обладает очень слабым трансформирующим эффектом на клетки. Тем не менее он усиливает тирозин-киназную активность рецепторов эпидермального фактора роста, а также стимулирует МАР-киназные каскады (митоген-активированные протеин-киназы), что также нарушает нормальное функционирование клетки.

6. Терапевтические и профилактические вакцины против HPV и РШМ

Терапевтические вакцины приготовлены в основном против HPV16, и некоторые уже испытаны клинически. Предназначены они для ликвидации остаточных проявлений болезни после лечения внутриэпительных поражений или инвазивного рака. Принцип действия вакцины - стимуляция иммунной системы против Е6 и/или Е7 ранних вирусных белков (опухолевых антигенов), препятствующих входу инфицированных клеток в апоптоз и фазу старения. В результате возникает иммунный ответ, который разрушает опухолевые клетки, экспрессирующий оба ранних белка. Готовятся эти вакцины на основе пептидов, белков, химерных белков (содержащих фрагменты 2-х и более белков), ДНК, вирусных векторов, бактериальных векторов, дендритных клеток и модифицированных опухолевых клеток. Уже испытаны вакцины, приготовленные на базе рекомбинантного вируса осповакцины, экспрессирующих Е6 и Е7 HPV16 и 18, пептидов Е7, слитных белков Е6 и Е7 и дендритных клеток. Испытана с позитивным эффектом вакцина, приготовленная из химерных вирусоподобных частиц, в которой 60 карбокситерминальных аминокислот L1 HPV16 заменены фрагментами белка Е7 того же вируса. Использование рекомбинантных аденовирусов, экспрессирующих Е2 (регулятора транскрипции ранних генов и репликации HPV, подавляющего транскрипцию генов Е6 и Е7), в качестве экспериментальной вакцины индуцировало арест клеток и апоптоз в различных опухолевых клетках, указывая на ее перспективность в лечении РШМ.

Рис. 2. Линейная форма генома вируса папилломы (HPV-16), интегрированная в геном клетки

Профилактические вакцины генерируют вирус-нейтрализующие антитела, специфические для капсида HPV. Для приготовления используют биологические системы, экспрессирующие капсидный белок HPV L1, иногда в комбинации c капсидным белком HPV L2. Формируются структуры, напоминающие истинные вирионы, названные вирусоподобными частицами, представляющими собой пустые капсиды. Наиболее эффективные вакцины включают вирусоподобные частицы наиболее часто встречающихся типов HPV. Профилактические вакцины генерируют высокие уровни блокирующих и нейтрализующих антител и полностью предохраняют против персистирущих среди населения вариантов HPV и сопровождающих эту инфекцию цитологическую патологию шейки матки. Эти вакцины в будущем будут полезны для молодых женщин, и может быть молодых мужчин, ведущих активную половую жизнь. К сожалению, такие вакцины станут широко доступными в мире лишь через 10-15 лет. В настоящее время ряд фирм начинают международные испытания поливалентной превентивной вакцины, которая включает в себя HPV16, 18, 11, и 6-й типов. Как известно, 16-й и 18-й типы вызывают около 70% случаев РШМ, а 11-й и 6-й -- до 90% всех вагинальных бородавок. Окончательные доказательства профилактической эффективности и безвредности вакцины наступят только через несколько десятилетий, когда вакцинированные девушки достигнут 40-45 лет. Следует также отметить, что профилактика РШМ дорогостоящее мероприятие и не все страны могут позволить себе ее проведение. Подсчитано, что для того, чтобы предупредить 1 случай РШМ необходимо сделать 350 вакцинаций в развитых странах и 200 в развивающихся.

7. Герпевирус человека Эпштейна-Барр (ВЭБ)

ВЭБ относится к подсемейству гамма-герпевирусов, роду лимфокриптовирусов.

Геном представляет собой двойную спираль ДНК около 172 т.п.н; вирионная ДНК вируса линейная, а в латентно инфицированых клетках ДНК существует в виде эписом.

ВЭБ впервые был выделен в 1964 г. из культуры лимфоцитов ребенка, больного лимфомой Беркитта (ЛБ). В дальнейшем было показано, что этот вирус причастен к возникновению, не только лимфомы Беркитта, но и ряда других злокачественных и доброкачественных новообразований, таких, как рак носоглотки, определенные варианты лимфомы Ходжкина, инфекционный мононуклеоз и многие другие. В настоящее время известен широкий спектр патологических состояний, представленный опухолями лимфоидного и эпителиального происхождения, в возникновении которых ВЭБ принимает непосредственное участие.

Существуют 2 типа ВЭБ: ВЭБ 1(А) широко распространен в мире и обладает выраженной трансформирующей способностью; ВЭБ 2 (В) персистирует главным образом среди африканцев и трансформирующей способностью обладает в меньшей степени. Вирус убиквитарен, им инфицировано 95-100% населения планеты. Инфицирование ВЭБ обычно происходит в раннем детстве и протекает, как правило, бессимптомно. При более позднем контакте с вирусом в старшем детском и юношеском возрасте примерно в 50% случаев возникает классический инфекционный мононуклеоз и некоторые другие гемофагоцитарные синдромы. После первичного инфицирования человек пожизненно становится носителем вируса, который локализуется в В-лимфоцитах периферической крови и в эпителиальных клетках ротоглотки. Основной путь передачи ВЭБ -- со слюной, возможно с кровью (переливание). Клетками-мишенями ВЭБ являются: В-клетки, эпителиальные клетки, Т-клетки, NK клетки и клетки гладкой мускулатуры. В В-лимфоцитах периферической крови вирус находится в латентном состоянии, при этом экспрессируется только часть вирусного генома, тогда как в эпителиальных клетках ротоглотки имеет место продуктивная (литическая) инфекция, сопровождающаяся продукцией зрелых вирусных частиц и гибелью инфицированных клеток. Предполагается, что главным резервуаром вируса является малая фракция В-лимфоцитов -- покоящиеся В-клетки с фенотипом CD19+, CD23+, CD80-. Инфицирование В-клеток осуществляется через взаимодействие вирусного оболочечного гликопротеина gp350(gp340)/220 c рецептором для C3d компонента комплемента СR2 (CD21). Идентичные или схожие молекулы были обнаружены и на Т-лимфоцитах, клетках фолликулярного дендритного ретикулума и, возможно, некоторых эпителиальных клетках. Исследования показали, что клеточный тропизм ВЭБ не ограничен взаимодействием с СD21, поскольку вирус был также обнаружен в CD21-негативных клетках. Инфицирование последних может происходить в результате вызываемого ВЭБ слияния вирус содержащих В-клеток с другими клетками (эпителиальными, Т-клетками, а также фибробластами), у которых C3d/ EBV рецептор отсутствует.

Таблица 1 - Заболевания человека, ассоциированные с вирусом Эпштейна-Барр

Исследования показали, что только латентная инфекция ВЭБ ассоциирована с различными типами неоплазм и гематологических расстройств. Набор стратегий, используемый генами ВЭБ во время латентной инфекции для ускользания от иммунного контроля хозяина: 1) минимальная экспрессия антигенов ВЭБ, контролируемых цитотоксическими лимфоцитами (CTLs) хозяина, 2) подавление экспрессии молекул клеточной адгезии и 3) выработка вирусных цитокинов, ингибирующих действие CTLs хозяина.

Среди генов латентной инфекции, обладающих трансформирующими потенциями, следует назвать латентные мембранные белки 1 и 2А (LMP1 и LMP2А), а также ядерные белки вируса 1 и 2 (EBNA1 и EBNA2), ведущие клетку во время латентной инфекции к иммортализации. Такие продукты, кодируемые генами ВЭБ, как vIL-10 и вирусный гомолог анти-апоптотического белка bcl-2 (vbcl-2), в свою очередь, способствуют выживанию клеток, инфицированных ВЭБ. Кроме того, пролиферация В- клеток in vivo стимулируется и двумя клеточными белками (bcl-2, A-20), синтез которых усиливается под воздействием латентного мембранного белка LMP-I. У здоровых лиц ранняя фаза вызванной вирусом В-клеточной пролиферации обрывается нарастающим Т-клеточным иммунным ответом, что сопровождается уничтожением большей части инфицированных клеток цитотоксическими Т-лимфоцитами. Несмотря на это, пул В-клеток, латентно инфицированных ВЭБ, и его репликация в ротоглотке никогда полностью не элиминируются. В патологических случаях индуцированная вирусом пролиферация тех или иных клеток усиливается действием дополнительных факторов, что ведет к накоплению мутаций в клеточной ДНК, ее повреждению и возникновению опухоли. При этом неодинаковая частота той или иной ВЭБ-ассоциированной опухоли в разных географических регионах предполагает воздействие определенного спектра неблагоприятных факторов окружающей среды в конкретном регионе и наличие соответствующей генетико-иммунологической основы у населения для их возникновения.

На рис. 3 представлена циркулярная форма генома ВЭБ и гены, кодирующие белки латентной инфекции. Функции у них различные (см. ниже), но среди генов обладающих трансформирующей способностью, особенно выделяется ген LMP1, который признан специалистами в качестве онкогена ВЭБ.

Рис. 3. Схема эписомальной (ковалентно-замкнутой циркулярной) формы ДНК

На схеме представлены большие ДНК-повторы (IRI-IR4, TR), уникальные области (U1-U5), а также транскрипты латентной инфекции ВЭБ: EBNA-1 (поддерживает геном в эписомалъном состоянии), EBNA-2, EBNA-3A, EBNA-3C, EBNA-LP (обладают транс-активирующей гены и трансформирующей клетки способностью), EBNA-3B (функции не известны), LMP1 (вирусный онкоген, обладает трансформирующим и анти-апоптотическим действием), LMP-2A, -2В (поддерживают вирус в латентном состоянии).

Механизм канцерогенеза, ассоциированный с ВЭБ, достаточно сложен и мало изучен. Как уже было отмечено, онкогенное действие ВЭБ связано с латентной его инфекцией, точнее, со способностью ряда его вирусных белков, кодируемых генами латентной инфекции, оказывать модифицирующее действие на сигнальные пути клетки. В частности, LMP1, локализуясь в мембране, имитирует функцию конститутивно активированного рецептора СD40 и частично замещает эту функцию. Привлекая адаптерные молекулы TRAF (tumor necrosis factor receptor family -- семейство белков-рецепторов фактора некроза опухоли), LMP1 через домены активации CTAR1 и CTAR2 активирует транскрипционные факторы AP-1 и NFkB и таким образом индуцирует экспрессию генов, регулируемую этими факторами (рецептор эпидермального фактора роста, EGFR, CD40, поверхностные активационные маркеры, молекулы адгезии и т.д.). Кроме того, LMP1 взаимодействует с Jak3-киназой и таким образом активирует STAT-сигнальные пути, стимулирующие размножение и передвижение клеток.

LMP2A активирует киназу Akt/PBK, вызывая ряд эффектов, наиболее ярким из которых является подавление апоптоза.

EBNA2 имитирует транскрипционную функцию процессированной формы Notch (трансмембранный белок, преобразующий контакты с окружающими клетками в генетические программы, регулирующие судьбу клетки), конститутивная активность которого ведет к развитию лимфоидных и эпителиальных опухолей.

Основная функция EBNA1 состоит в обеспечении репликации и поддержания эписомального состояния генома ВЭБ. Этот белок также способствует предотвращению иммунологического ответа на зараженную клетку. Подавляя деградацию в протеосомах убиквитинированных белков, EBNA1 ингибирует презентацию антигенов, вследствие чего они не распознаются иммунной системой организма.

Поскольку ВЭБ убиквитарен, возникает вопрос:

Один и тот же или разные генетические варианты вируса персистируют:

а) среди здоровых лиц и больных различными злокачественными новообразованиями; б) в опухолевых клетках и неизмененных клетках периферической крови одного и того же больного? Ответ, по-видимому, может быть получен при изучении структуры и функций отдельных генов ВЭБ, принимающих участие в ВЭБ-ассоциированном канцерогенезе. Поскольку трансформирующий потенциал ВЭБ связан главным образом с геном LMP1, то объектом пристального изучения в настоящее время стал именно этот ген и кодируемый им белок (LMP1). Эти исследования стимулировали обнаружение в варианте гена LMP1, амплифицированного из опухолевой ткани больного раком носоглотки, РНГ (из эндемичной для этого заболевания региона Юго-Восточной Азии), делеции 30 пар нуклеотидов и набора других мутационно-делеционных перестроек в промоторных и кодирующих областях гена. Делецированный вариант гена, обозначенный LMP1-Cao, в экспериментальных условиях проявлял более выраженные трансформирующие способности in vitro и оказался более туморогенным в экспериментах in vivo по сравнению с известным лабораторным штаммом В95.8. Ответ на поставленный вопрос пока не получен, и исследования данной проблемы активно ведутся во многих лабораториях мира, включая и Россию.

Иммунотерапия ВЭБ-ассоциированных заболеваний достаточно специфична для каждой патологии. Так, при недиференцированном гистологическом варианте РНГ, ассоциированном с ВЭБ, применяют адоптивное введение аутологичных ВЭБ-специфических цитотоксических лимфоцитов (CTLs) в дозах 5107-3108. При этом происходит увеличение числа предшественников CTLs и восстановление контроля над репликацией ВЭБ, приводящее к снижению ВЭБ в плазме крови больных. В экспериментальных исследованиях эффективной оказалась рекомбинантная оспо-вирусная вакцина, кодирующая белок, состоящий из 6-ти подобранных по антигенам HLA I-го класса эпитопов LMP1. Иммунизация мышей этой вакциной генерировала мощный LMP-специфический ответ CTLs к 5 из 6 эпитопов, вызывая обратное развитие опухолей, экспрессирующих LMP1. При лимфоме Беркитта (ЛБ) иммунотерапия общей фракцией CTLs проблематична. Поэтому используют CD4+ CTLs и усиливают презентацию MHC I-го класса в клетках ЛБ, в результате чего экспрессия антигенов латентного цикла инфекции подавляется. Для иммунотерапии ВЭБ-позитивных случаев лимфомы Ходжкина (ЛХ) пользуются несколькими подходами. Один из них -- иммунотерапия иммунотоксинами; для этой цели применяют моноклональные антитела (Мabs) к СD25 и СD30 (маркеры клеток Березовского-Рида-Штернберга), химически привязанные к таким токсинам, как Pseudomonas edotoxin A или дегликозилированный ricin A. Больным также вводят Mabs двойной специфичности, т.е. антитела, одновременно связывающиеся с СD30 на опухолевых клетках и с CD16 на NK-клетках для индукции противоопухолевой цитотоксичности, часто с дополнительными инъекциями IL2. Другой подход заключается в адоптивной иммунотерапии, т.е. во введении аутологичных (размноженных до нужной концентрации in vitro) ВЭБ-специфических CTLs, выделенных из крови больных до начала лечения или TCL's от здоровых, подобранных по HLA доноров. Осуществляются попытки и использования ВЭБ-специфических CTLs к LMP1 и LMP2 антигенам, присутствующих на опухолевых клетках, а также нейтрализовать иммуносупрессивные цитокины, секретируемые клетками Березовского-Рида-Штернберга, такие, как TGF, хемокины и др. Приведенные варианты иммунотерапии носят пока экспериментальный характер и широкого применения в клинике еще не имеют. Особый раздел представляет терапия пост-трансплантационных лимфопролиферативных заболеваний, главным образом неходжкинских лимфом (НЛ), в значительной части случаев ассоциированных с ВЭБ. Кроме допустимого снижения уровня иммуносупрессии у реципиентов трансплантатов и перевода этих больных на возможно низкие поддерживающие дозы химиотерапевтических препаратов, применяют еще и анти-герпевирусную терапию ацикловиром или ганцикловиром. Следует однако отметить, что эти препараты не ингибирует пролиферацию латентно инфицированных клеток и позитивный терапевтический эффект может быть получен только при наличии в опухолевых клетках литической инфекции. Используют также и иммунотерапию, состоящую: а) во введении больным интерферона гамма (IFNг) для усиления активности CTLs, улучшения экспрессии главного комплекса гистосовместимости (MHC) и активации природных киллеров (NK-клеток); б) в блокировании мышиными Mab IL6, играющего важную роль в пролиферации и созревании инфицированных вирусом В-клеток; и в) в использовании анти-B-клеточных Мab (анти-CD21 и анти-СD24), а также rituximab (химерные человек/мышь анти-СD20 Mab). Для восстановления клеточной цитотоксической иммунокомпетентности, включая ВЭБ-специфическую, находит применение адоптивная иммунотерапия, а также вакцинация ВЭБ-серонегативных больных: а) рекомбинантным вирусом осповакцины (экспрессирующим белки ВЭБ) до трансплантации органа (предупреждая, таким образом, возможное инфицирование этим вирусом); б) дендритными клетками, обработанными лизатом облученных LTCs или пептидами ВЭБ.

8. Герпевирус человека 8-го типа (HHV-8)

HHV-8 был открыт в 1994г. Он относится к подсемейству гамма-герпевирусов, роду радиновирусов. В настоящее время считается доказанной его этиологическая роль в возникновении саркомы Капоши (СК), выпотной В-клеточной лимфомы полостей тела (PEL) и болезни Кастельмана. В геноме HHV-8 содержится ряд генов, продукты которых имеют высокую степень структурно-функциональной гомологии с клеточными белками, играющими важную роль в регуляции размножения и жизнеспособности клеток; повышение их активности приводит к возникновению опухоли. На рис. 4 представлена схема длинной уникальной области, ограниченная двумя терминальными повторами, с указанием областей, кодирующих структурные белки и ферменты, участвующие в репликации клетки, а также уникальные вирусные белки. Среди вирусных гомологов клеточных белков, кодируемых указанными выше генами, можно назвать следующие: v-Bcl-2 -- гомолог клеточного анти-апоптотического белка Bcl-2; v-cyclin D -- гомолог циклина D2, одного из представителей G1 циклинов человека; vMIP-I, vMIP-II -- вирусные гомологи ростовых факторов (хемокинов), близких к соответствующим белкам макрофагального воспаления MIP-I и MIP-II; vIL6 -- гомолог IL6 человека; vIRF -- гомолог семейства белков IRF (IRF-1 и IRF-2), ответственных за передачу сигналов интерферона; vGPCR -- белок-гомолог рецептора клеток, связывающего G-белок, обладающий высокой гомологией к рецепторам ростовых факторов IL8, эндотелиальных клеток и ангиогенного фактора роста. vGPCR способен запускать сигнальные каскады, ведущие к активации транскрипционного фактора АР-1; vFLIP -- гомолог соответствующего клеточного. Последний обладает единственным эффекторным доменом смерти и может блокировать один из важнейших путей, ведущих к индукции аппоптоза инфицированных клеток. Экспрессия этих вирусных белков приводит не только к размножению клеток, содержащих вирус, но и окружающих клеток, приводя к возникновению саркомы Капоши, состоящей из зараженных вирусом эндотелиальных клеток кровеносных или лимфатических сосудов и периваскулярных клеток соединительной ткани.

Рис. 4. Структура длинной уникальной кодирующей области (LUR) линейного генома HHV-8 размером 140,5 Kb

Геном подразделяется на 7 блоковых областей (1-7), которые кодируют предполагаемые структурные белки и ферменты, участвующие в репликации клетки. Межблоковые области генома (a-h) кодируют уникальные вирусные белки. Некоторые открытые рамки считывания в геноме HHV-8 кодируют белки, гомологичные известным белкам человека

Все гены HHV-8 могут быть условно отнесены к 4-м группам: гены, кодирующие белки латентной инфекции, а также гены, кодирующие т.н. предранние, ранние и поздние белки. Последние принимают участие в сборке вирусных частиц. Общим свойством герпевирусов является их способность находиться в клетке хозяина в латентном состоянии, при котором экспрессируется крайне ограниченное число вирусных генов. Латентно присутствующий в клетке вирус может быть реактивирован, и подвергнуться литической репликации. Для HHV-8 идентифицировано 5 генов, экспрессирующихся в период латентной инфекции и кодирующих комплекс LANA, v-cyclin, v-FLIP, kaposin и vIRF-2 или LANA-2. Латентное состояние вируса позволяет ему ускользнуть от иммунного надзора и установить персистентную инфекцию. Более того, латентная инфекция играет решающую роль в процессах клеточной трансформации и возникновении опухоли. Латентно инфицированные клетки саркомы Капоши -- веретеновидные клетки -- спонтанно подвергаются литической репликации, что чрезвычайно важно для распространения вируса в организме и его переноса из лимфоидных образований, где вирус локализуется на ранних стадиях болезни, в эндотелиальные клетки, где чаще всего возникает опухоль. Переключение от латенции к литической экспрессии генов HHV-8 кодируется геном этого же вируса ORF 50, являющегося гомологом регулятора транскрипционной активации ВЭБ.

Механизм канцерогенеза, ассоциированный с HHV-8, изучен мало. По-видимому, экспрессия вирусных белков защищает клетку от апоптоза в ответ на ее инфицирование вирусом. Действительно, в нормальной клетке контроль за клеточным делением осуществляется в том числе через сигнальные пути, контролируемые генами ретинобластомы (рRb) и р53. Эти пути, однако, существенно модифицируются под воздействием вирусных белков латентной инфекции, приводя к отмене ареста клеточного цикла в фазе G1/S и р53-опосредованного апоптоза, в результате чего инфицированная клетка приобретает злокачественные свойства.

9. Болезни, ассоциированные с HHV-8, и их краткая характеристика

Саркома Капоши -- многофокусный неопластический процесс, возникший из эндотелия кровеносных и лимфатических сосудов, главным образом дермы. Клинические формы: спорадическая (т.н. классическая или идиопатическая); эндемическая (африканская). Эпидемическая (СПИД-ассоциированная); иммунносупрессивная (под воздействием иммунносупрессивных препаратов).

Типы кожных поражений: пятна, бляшки, опухолевые узлы (чаще поражаются нижние конечности). Внекожные поражения: слизистая оболочка различных органов (рот, половые органы); Висцеральные поражения: лимфатические узлы, органы пищеварительного и дыхательного трактов.

Морфологическая диагностика опухоли: 1. Хаотичный незавершенный ангиогенез; 2. Пролиферация веретеновидных клеток; 3. Инфильтрация опухоли мононуклеарами.

Доказательства этиологической роли HHV-8 в возникновении СК: 1) в опухолевой ткани вирусспецифические последовательности встречаются, более чем в 90% случаев; 2) моноклональность опухолевых клеток; 3) вирус-специфические антитела появляются задолго до возникновения болезни; 4) высокий процент серопозитивных лиц среди населения различных регионов планеты совпадает с повышенной заболеваемостью СК.

PEL -- первичная выпотная лимфома или лимфома полостей тела (BCBL) -- возникает чаще у больных СПИДом. Характеризуется наличием в серозных полостях тела опухолевых масс, состоящих из В-клеток, инфицированных чаще двумя герпесвирусами человека (HHV-8 и ВЭБ), реже -- только HHV-8.

MCD -- мультицентрическая болезнь Кастельмана -- представляет собой доброкачественную поликлональную лимфопролиферацию с выраженной васкуляризацией лимфоидной ткани.

Инфицированность населения HHV-8 в различных географических регионах существенно отличается и варьирует от долей процента в США и большинстве стран Западной Европы до 8-10% в странах Средиземноморья. Самый высокий процент серопозитивных лиц был обнаружен в странах Восточной, Центральной и Западной Африки, странах, эндемичных для СК, где уровень инфицированности населения этим вирусом достигал 50-70%.

В России уровень инфицированности HHV-8 среди доноров крови находится в пределах 4%. Основной путь передачи HHV-8 -- половой, но также со слюной, возможно с кровью (редко). Содержащие вирус клетки: эндотелиальные и веретеновидные клетки в опухолевой ткани, лимфомные клетки больных PEL, а также макрофаги, дендритные клетки и клетки железистого эпителия простаты у инфицированных вирусом лиц.

Терапия саркомы Капоши.

Мишенями при лечении этого новообразования являются: HHV-8, HIV, процессы ангиогенеза и клеточной дифференцировки. При этом используется: 1) традиционная химиотерапия винбластином, винкристином или блеомицином (в России), которые вводятся внутрь опухолевых узлов и внутривенно;

2) хирургическое лечение: производят удаление опухолевых узлов; 3) анти-герпевирусная терапия (в том числе лицам из группы риска); 4) высокоактивная антиретровирусная терапия, HAART (у СПИД больных) с использованием различных ингибиторов протеазы HIV, необходимой вирусу для продукции вирусных частиц (indinavir, saquinavir, ritonavir или nelfinavir). Эти препараты оказывают также подавляющий эффект на ангиогенез, опухолевый рост, инвазию, воспаление, процессирование и презентацию антигенов, выживание клеток и т. д. В США применяют комплексную терапию, состоящую из геля для наружного применения (Alitretinoin gel), а также системного введения антибиотиков (liposomal daunorubicin; liposomal doxorubicin; PEGylated liposomal anthracyclin, paclitaxel) и интерферона-alpha. В некоторых зарубежных клиниках используют ингибиторы цинк-зависимых протеин-киназ (Matrix metalloproteinases, MMPs), разрушающие внеклеточный матрикс, чем существенно снижают способность опухоли к инвазии и метастазированию. Используют также

комбинацию антивирусной терапии HAART и химиотерапии с использованием liposomal anthracyclin. В настоящее время проводятся поиски терапевтических препаратов, направленных на ингибирование лимфангиогенеза а также разрабатываются молекулярные подходы для терапии опухоли.

10. Вирус Т-клеточного лейкоза человека (HTLV-1)

Вирус Т-клеточного лейкоза человека (HTLV-1) - это онкогенный ретровирус, являющийся этиологическим фактором Т-клеточного лейкоза/лимфомы взрослых (ATL) и нейро-дегенеративного заболевания под названием HTLV-1-ассоциированной миелопатии или тропического спастического парапареза (TSP). Спорадические случаи HTLV-1 инфекции встречаются во многих странах мира, включая Россию. Эндемичными же для этой инфекции являются некоторые регионы Японии, Южной Америки, Африки и часть стран Карибского бассейна. Существуют 3 основных пути передачи инфекции от инфицированных лиц: а) с молоком матери; б) при половом контакте главным образом через сперму; и в) с переливаемой кровью при гемотрансфузиях. После заражения HTLV-1 стимулирует клональную пролиферацию инфицированных зрелых CD4+ Т-клеток-хэлперов благодаря плеотропному действию вирусного белка Тах. ATL возникает после длительного латентного периода и не более, чем у 5% асимптоматических вирусоносителей даже в эндемических зонах. В злокачественных клетках Тах инактивируется различными механизмами, поскольку, видимо на этой стадии злокачественным клеткам Тах уже не нужен. И наоборот, повреждения клеточного генома в виде различного рода делеций и мутаций, накапливающиеся в течение латентного периода после инфицирования HTLV-1, ведут к возникновению Т-клеточного лейкоза. Хотя геном HTLV-1 кодирует несколько белков, которые вносят определенный вклад в возникновение опухоли, главным вирусным белком, выполняющим функции онкогена, является белок, кодируемый геном tax. Обычно трансформирующие ретровирусы либо содержат вирусные онкогены, которые и вызывают трансформацию инфицированных клеток, либо нарушают экспрессию важного клеточного гена как результат провирусной интеграции. Ни один из этих вариантов HTLV-1 не использует. Он использует 3-й вариант, заключающийся в транс-актививации транскрипци ряда вирусных и клеточных генов (цитокинов, их рецепторов, циклинов и др), ассоциированных с клеточной пролиферацией и способствующих росту инфицированных HTLV-1 клеток. При этом он действует не напрямую, а через NFkB, CREB и SRF сигнальные пути. Белок Тах может и транс-репрессировать транскрипции определенных генов, действуя через транскрипционный ко-активатор р300. Р53-зависимая транскрипция также подавляется Тах белком опосредованно через транскрипционный активатор СВР (CREB-взаимодействующий белок). Кроме регуляции транскрипции, Тах может оказывать влияние на функционирование других клеточных факторов: он взаимодействует с негативным ингибитором циклин зависимых киназ (CDK) р16, отменяя его функцию. Поскольку р16 ингибирует СDK4, то функциональная инактивация последней ведет к активации СDK4/6, фосфорилированию Rb и ускоренному перемещению клетки из G1 в S фазу. Тах также инактивирует чекпоинты (сверочные точки) клеточного цикла и ДНК-полимеразу (DNApol), снижая активность всех 3-х систем репарации ДНК и вызывая тем самым генетическую нестабильность, что в конечном итоге приводит к возникновению опухолевой клетки.