Лекарственные препараты: антигипоксанты и антиоксиданты

Витамин А и каротиноиды. Витамин А необходим для образования серосодержащих биомолекул, связывания и обезвреживания эндогенных веществ и ксенобиотиков. Как антиоксидант он тормозит превращение сульфгидрильных групп в дисульфидные. Может участвовать в окислительно-восстановительных реакциях благодаря наличию двойных связей в молекуле, способности образовывать перекиси, которые повышают скорость окисления других соединений. Принимает участие в синтезе гликопротеинов, воздействует на метаболизм мембранных фосфолипидов. Антиоксидантное действие витамина А объясняется участием в обмене тиоловых соединений, нормализацией функционально-структурных свойств мембран. Он препятствует канцерогенному действию бензпирена и других веществ, что обусловлено способностью тормозить микросомальное окисление этих соединений. С антиоксидантным торможением превращения ксенобиотиков связаны и антимутагенные свойства витамина А. Окисленные промежуточные продукты b-каротина и витамина А могут иметь прооксидантные свойства. Установлено, что b-каротин наибольшую антиоксидантную активность проявляет при низком парциальном давлении в крови, хотя в целом как антиоксидант он уступает б-токоферолу. При высоком содержании кислорода b-каротин может проявлять прооксидантную активность. b-Каротин расходуется при обезвреживании оксидированных липопротеидов низкой плотности, реагирует с синглетным кислородом. Он может реагировать с перекисными радикалами в так называемой добавочной реакции без донации гидрогенного атома. Промежуточные радикалы дериватов b-каротина могут взаимодействовать с O₂, образуя перекисные радикалы, которые могут в дальнейшем инициировать цепную реакцию пероксидации липидов.

Соотношение концентраций в организме b-каротина и a-токоферола составляет около 1:20. b-Каротин расходуется в организме после использования запасов b-токоферола. Его роль в атерогенезе и канцерогенезе как биоантиоксиданта в настоящее время устанавливается. Требует уточнения и роль b-каротина и других каротиноидов в физиологических условиях как «уборщиков» радикалов. Имеются сомнения, что свое антиатерогенное действие витамин А реализует через антиоксидантную активность. b-Каротин, другие каротиноиды как антиоксиданты действуют совместно с витаминами Е и С. Витамины С, Е, b-каротин составляют так называемую антиоксидантную витаминную группу. Их поступление в организм снижает риск развития рака, сердечно-сосудистых заболеваний, катаракты. Витамин А-- естественный пищевой продукт, который помимо антиоксидантной роли необходим в организме для поддержания целостности мембранных структур, роста, развития. Витамин А влияет на процессы клеточной дифференциации, пролиферации, репродуктивные процессы, от уровня его содержания в организме зависит состояние иммунной системы, зрение. Предшественниками ретинола являются каротиноиды, которые превращаются в витамин А в тонкой кишке. Каротиноиды более эффективно, чем витамин А, уничтожают свободные радикалы, в т.ч. синглетный кислород, который может привести к развитию неопластического процесса. Каротиноиды даже при многолетнем применении и в достаточно высоких дозах не проявляют токсичность.

Имеется тесная связь между витамином А и другими антиоксидантами. Так, высокие дозы витамина А уменьшают содержание запасов в организме аскорбиновой кислоты. У животных витамин А может уменьшать активность витамина Е и понижать его уровень в плазме и печени (у человека это не подтверждено). Витамин Е предохраняет клетки от разрушения мембран, которое наблюдается при гипервитаминозе А, уменьшает тератогенный эффект. Витамин А уменьшает отрицательные эффекты токсичности витамина D у животных (в том числе гиперкальциемию). Может наблюдаться антагонизм между витаминами А и К: развивается гипопротромбинемия у людей с гипервитаминозом А. Недостаток в организме белка повышает риск развития гипервитаминоза. С высоким уровнем витамина А в сыворотке крови может быть связана гиперлипопротеинемия. Негативно влияет на обмен витамина А в организме (потребление, депонирование) недостаток железа и цинка.

Из всех каротиноидов b-каротин обладает наибольшей биохимической активностью. Фактически ингибитором свободнорадикального окисления, в т.ч. синглетного кислорода, является не ретинол, а b-каротин. Он, помимо выраженного антиоксидантного эффекта, принимает участие в процессах деления иммунокомпетентных клеток, синтезе иммуноглобулинов, в том числе секреторного иммуноглобулина А, интерферона, лизоцима и других факторов специфической и неспецифической защиты от инфекций, активирует ферменты лизосом в фагоцитах, что необходимо для переваривания патогенных микроорганизмов.

Убихинон (коэнзим Q). Он необходим для течения в клетках процессов окисления и локализован преимущественно в мембранах митохондрий. Принимает участие в транспорте электронов по дыхательной цепи на участке между флавиновыми ферментами и цитохромами. Как и витамин Е, он является ингибитором радикалов фенольного типа, непосредственно реагирует с перекисными радикалами, уменьшает их концентрацию, стабилизирует мембраны. Витамин Е осуществляет первичную защиту от перекисного окисления, а убихиноны присоединяются к процессу после значительного использования витамина.

Эстрогены. Благодаря липидофильности стероидные гормоны имеют мембраннотропные свойства. Из стероидных гормонов антиоксидантными свойствами обладают эстрогены. Активность свободнорадикального окисления повышается в период циклов, когда концентрация эстрогенов низкая и наоборот. Эстрогены регулируют микросомальное окисление, поддерживая активность монооксигеназной системы. При патологических состояниях, которые сопровождаются чрезмерным усилением процессов свободнорадикального окисления, эстрогены предупреждают нарушения микросомального окисления, противодействуют повреждению биомембран.

Водорастворимые антиоксиданты действуют во внутриклеточной и межклеточной жидкости. Такой важный водорастворимый антиоксидант, как аскорбиновая кислота в организме человека не синтезируется, а поступает с пищевыми продуктами (преимущественно овощами и фруктами), в т.ч. в виде окисленной формы-- дегидроаскорбиновой кислоты. До сих пор не определены все ферменты, в состав простетических групп которых входит витамин С. Одним из основных свойств витамина является способность к окислительно-восстановительным превращениям. Аскорбиновая кислота способна окисляться в дегидроаскорбиновую кислоту и, таким образом, вместе с ней она представляет окислительно-восстановительную систему, теряющую и присоединяющую электроны и протоны. При этом витаминная активность не снижается (менее стойкая и теряет биологическую активность дегидроаскорбиновая кислота). Как важный компонент биологической антиоксидантной системы витамин С взаимосвязан с глутатионом и токоферолом. Он принимает активное участие в микросомальном окислении эндогенных и чужеродных веществ, стимулирует активность цитохромного звена, процессы гидроксилирования (играет роль восстановителя). От обеспеченности аскорбиновой кислотой зависит активность цитохрома Р-450, фагоцитарная активность нейтрофилов и макрофагов, их антимикробные свойства. Значительную защитную роль как антиоксидант витамин С играет при токсическом действии различных соединений. Аскорбиновая кислота является мощным антиоксидантом, синергистом b-каротина и токоферола. Дефицит аскорбиновой кислоты в организме, помимо снижения антиоксидантной защиты, сопровождается нарушением синтеза коллагена. Аскорбиновая кислота участвует в выработке энергии, необходимой для синтеза интерферона и других цитокинов. Всасываясь в кровь, аскорбиновая кислота быстро попадает в лейкоциты, усиливает их способность к хемотаксису. Интенсивнее всего нейтрофилы поглощают витамин С во время «дыхательного взрыва», необходимого для биосинтеза бактерицидных свободнорадикальных субстанций. После активации фагоцитов содержание в них аскорбиновой кислоты падает. Обогащенные аскорбиновой кислотой нейтрофилы усиливают свою способность распознавать и уничтожать (чаще путем фагоцитоза) предраковые клетки, бактериальные, вирусные и другие чужеродные агенты. В норме концентрация витамина С в нейтрофилах в 150раз выше, чем в плазме Дефицит витамина С сопровождается снижением хемотаксической и бактерицидной активности лимфоцитов, добавки аскорбиновой кислоты усиливают пролиферацию лимфоцитов.. Аскорбиновая кислота оказывает защитное действие по отношению к продуцируемой в легких a-1-протеазе (свободные радикалы, вырабатывающиеся во время «дыхательного взрыва», угнетают фермент). Добавки витамина С улучшают иммунные реакции за счет поддержания уровня содержания витамина Е в крови и тканях (витамин Е также является выраженным стимулятором иммунной системы. Усиление пролиферации лимфоцитов наиболее выражено при одновременном назначении витаминов С и Е. Дополнительное введение витамина С стабилизирует содержание витамина Е в плазме, тканях. И, наоборот, дефицит витамина С сопровождается снижением содержания витамина Е в тканях и плазме. Витамин С защищает противоокислительную активность витамина Е представляет собой первую линию защиты в организме от действия различных свободных радикалов и других окислителей. Он ингибирует перекисное окисление липидов (хотя основную роль в этом играет a-токоферол), нейтрализует окислители, поступающие с загрязненным воздухом (NO, свободные радикалы сигаретного дыма), редуцирует канцерогенные нитроамины. Аскорбиновая кислота предотвращает пероксидацию холестерола ЛПНП и тем самым препятствует прогрессированию атеросклероза. Смесь аскорбиновой кислоты с ионами Аu или Сu in vitro может инициировать свободнорадикальные процессы, но в организме это не происходит так, как названные ионы металлов связаны белками. Хотя, по мнению B. Halliwell (1984), локальная реализация этого эффекта в организме может иметь место.

Аскорбиновая кислота является кофактором для ряда монооксигеназ (гидроксилирование пролина, катаболизм тирозина).

Соединения, которые содержат серу. Важным звеном антиокислительной системы являются биомолекулы, которые содержат сульфгидрильные группы. К ним относятся основные аминокислоты-- цистеин, цистин, метионин. Они входят в состав белков, активных центров ферментов, ряда гормонов (инсулин, окситоцин), служат предшественниками глутатиона, коэнзима А. Основной мобильный фонд сульфгидрильных групп представляет собой глутатион (трипептид Glu-Cys-Glu), который содержится почти во всех клетках. Его антиоксидантное действие катализируют глутатионпероксидаза, глутатионредуктаза, глутатион-S-трансфераза. Глутатионпероксидаза содержит селен и играет основную роль в инактивации липидных гидроперекисных соединений. Глутатионредуктаза поддерживает достаточный уровень активного глутатиона путем восстановления его дисульфидной формы. Восстановленный глутатион осуществляет детоксикацию перекиси водорода (H₂O₂) и гидроперекисей, которые возникают при реакции активных форм кислорода (АФК) с полиненасыщенными жирными кислотами мембран. Основной функцией глутатион-S-трансферазы (функционирует в гепатоцитах) является детоксикация ряда соединений путем переноса на них атомов серы с последующим образованием меркаптидов (соединений серы с металлами), глутатионпроизводных чужеродных веществ.

Липоевая кислота функционирует как окислительно-восстановительная система: она может существовать в окисленной (-S-S-) и восстановленной (SH) форме, реализуя таким образом свои коферментные функции. Участвует в окислительном декарбоксилировании a-кетокислот (пировиноградной, кетоглютаровой), является простетической группой пируват- и кетоглютарат-дегидрогеназной системы (вместе с тиаминпирофосфатом и КоА).

Церулоплазмин-- транспортная форма меди является универсальным внеклеточным «гасителем» свободных радикалов. Он имеет супероксиддисмутазную активность: восстанавливает в крови супероксидные радикалы до кислорода и воды и этим защищает от повреждения липидные структуры мембран. Одной из основных функций церулоплазмина является нейтрализация свободных радикалов, которые освобождаются вовне макрофагами и нейтрофилами во время фагоцитоза, а также при интенсификации свободнорадикального окисления в очагах воспаления. Он окисляет разные субстраты: серотонин, катехоламины, полиамины, полифенолы, превращает двухвалентное железо в трехвалентное. Церулоплазмин переносит медь из печени к органам и тканям, где она функционирует в виде цитохром-С-редуктазы и супероксиддисмутазы. Фермент является фактором естественной защиты организма при воспалительных, аллергических процессах, стрессовых состояниях, повреждениях тканей, в частности, при инфаркте миокарда, ишемии.

Фенольные соединения (флавоноиды, полифенолы). Основой структуры фенольных веществ является углеродный скелет, имеющий гидроксильные, метильные, метоксильные, ацетильные и другие группировки. Они способны к легкой ступенчатой отдаче электронов и имеют два механизма антиоксидантной активности: инактивируют окислительные свободные радикалы, а также образуют стабильные комплексы с металлами (железом, медью, кобальтом, цинком, молибденом, алюминием) и выключают их каталитическое действие (В.А. Барабой, 1984). Молекулы фенольных соединений, нейтрализуя и инактивируя радикал, сами превращаются в малоактивные радикалы. В организме человека синтезируется ряд фенольных соединений-- медиаторов: производные пирокатехина (адреналин, норадреналин, дофамин). К фенольным соединениям также относятся триптофан, фенилаланин, витамины Е и К, убихинон, тиреоидные и стероидные гормоны. Антирадикальную активность имеют только восстановленные формы фенольных соединений, а хинонные формы являются слабыми антиоксидантами. Хинонные формы восстанавливает, возвращая им таким образом антиокислительные свойства, аскорбиновая кислота. Переход фенольных форм в хинонные является средством регуляции свободнорадикального окисления мембран. Значительное накопление фенольных форм естественных антиоксидантов может сопровождаться интенсификацией свободнорадикального окисления со снижением содержания антиоксидантов. Фенольные соединения способны также образовывать стойкие комплексы с медью, железом, которые катализируют реакции СРО. Считают, что в условиях стресса регуляторные механизмы дополнительно выбрасывают в кровь антиоксиданты-- биологически активные фенольные соединения: адреналин, норадреналин, дофамин, серотонин, а также тиреоидные и стероидные гормоны. Однако, как мы установили, при действии перечисленных соединений (в первую очередь, катехоламинов) в организме, в частности в нейтрофильных лейкоцитах, усиливаются катаболические процессы, в том числе перекисное окисление полиненасыщенных жирных кислот. Флавоноиды in vitro ингибируют пероксидацию липидов. Они, как и аскорбиновая кислота, в смеси с ионами Fe, Cu могут выступать в роли прооксидантов. Их антиоксидантная роль in vivo не изучена в достаточной мере

К внеклеточным антиоксидантным механизмам относятся трансферрин (железотранспортный протеин), лактоферрин (железосвязывающий протеин). Находясь в составе указанных протеинов, железо не катализирует свободнорадикальные повреждения. Не стимулирует также свободнорадикальные реакции железо в составе ферритина. Свободный гем и гем протеина, обладающие минимальной способностью катализировать свободнорадикальные повреждения, связываются с гемопексином и гаптоглобином. Обезвреживать свободные радикалы, связывать ионы меди может альбумин, молекула которого содержит одну сульфгидрильную группу. В качестве водорастворимого антиоксиданта рассматривается мочевина-- конечный продукт пуринового обмена .Обезвреживать свободные радикалы может мочевая кислота, содержащаяся во внутренних средах организма (0,5ммоль/л). Существуют ферменты, обезвреживающие поврежденные свободными радикалами протеины, окисленные жирные кислоты, а также ДНК.

Таким образом, ингибирование радикалов осуществляется системой антиоксидантов. Начальную стадию аутоокисления в мембранах угнетают токоферол, полифенолы, супероксиддисмутаза. Радикалы токоферола, полифенолов регенерируются под влиянием аскорбиновой кислоты, находящейся в гидрофильном слое мембран. Окисленные формы аскорбиновой кислоты восстанавливаются глутатионом (или эрготионеином), которые в свою очередь получают атомы водорода от НАДФ.H₂. В ингибировании участвуют ферменты, катализирующие окислительно-восстановительные превращения глутатиона и аскорбиновой кислоты-- глутатионзависимая редуктаза и дегидрогеназа, а также каталаза и пероксидаза. В плазме крови активно действует церулоплазмин. Представленная система поддерживает свободнорадикальное окисление липидов в мембранах на чрезвычайно низком уровне. А. Ленинджер (1981) считает, что аутоокисление липидов в организме полностью ингибируется витамином Е, аскорбиновой кислотой, различными ферментами. Функционирование цепи биоантиоксидантов и системы ферментов зависит от фонда атомов водорода (НАДФ.H₂). В свою очередь этот фонд пополняется за счет дегидрирования энергетических субстратов, т. е. при ферментативном окислении. Эти факты свидетельствуют о наличии сопряженности между ферментативным окислением (окислительным фосфорилированием) и свободнорадикальным окислением, что мы наблюдали у больных при возникновении различных заболеваний и состояний: одновременно повышаются как показатели активности окислительно-восстановительных ферментов (дегидрогеназ, цитохромоксидазы), так и показатели содержания промежуточных продуктов переокисления липидов (диеновых конъюгатов, малонового диальдегида и др.). В разных тканях преобладают определенные компоненты АОС

Высоким антиоксидантным потенциалом также обладают зеленый и черный чай, а также какао. По частоте употребления среди жидкостей чай занимает второе место в мире (конечно первое - вода). Активными компонентами чая являются полифенолы, главным образом эпигаллокатехингаллат в зеленом чае, а в черном чае с участием полифенолоксидазы образуются другие полифенолы - теафлавин и теарубигины. Полезные свойства чая многообразны:

антиоксидантное действие;

специфическая индукция детоксикационных ферментов;

регуляция клеточного роста, развития и апоптоза;

избирательное улучшение функции кишечной бактериальной флоры;

ингибирование окисления холестерина ЛПНП.

Зеленый чай способен затормозить развитие рака легких, желудка и других органов у мышей. Однако результаты клинических исследований влияния чая на здоровье дали не вполне ясный результат хотя лучше контролируемые исследования показали умеренное снижение риска хронических заболеваний. Впрочем, это не доказывает наличия причинно-следственной связи между ними.

5. Методы получения

В круглодонную колбу, оборудованную термометром, обратным холодильником и мишалкой, загружают при перемешуваннии 30 г формальдегида та 4.5 г диметиламина. Смесь охлаждают до температуры 5-8°С и поддерживают при этой температуре один час, а потом прибавляют 206 г 2,6-дитретбутилфенола (І) растворенного у 70% этиловом спирте. Смесь нагревают до температуры 85°С и поддерживают ее напротяжении 3 часов.

2. Получение 3,5-дитретбутил-4-метилфенола (ІІІ)

Реакционную массу с предыдущей стадии помещають в реактор, в нижний часте которого находится фильтр Шотта (для лучшего распределения газа). Реактор помещают в термостат с температурой 120°С, и реакционную смесь продувают водородом, который имеет 20% об. диметиламина, напротяжении 30 мин. При таких условиях получаем дистилят легколетучих продуктов, который улавливается с помощью ловушки, которая охладжуется углекислим газом.

После окончания дистиляции, реакционную смесь перемеіщают в автоклав, оснащенный мешалкой, входным штуцером для водорода та выходным штуцером для излишка водорода и газообразных продуктов. В автоклав погружают никель Ренея. Содержимое реактора подогревают до температуры 120 °С. При таких условиях основа (ІІ) гидрируются водородом, а газообразные продукты реакции оставляют автоклав. Для получения целевого продукта, реакционную смесь отделяют от катализатора и переганяют при температуре 160°С и давлениив 20 мм рт. ст. Кубовый остаток содержит 2,9 г тяжелой фракции та не прореагиваной основы (ІІ). Дистилят содержит 217,1 г продукта (ІІІ). Выход 98,7%.

Для дополнительной очистки, продукт перекристализируют,и получают 208,3 г чистого (ІІІ). Виход после перекристализацмм 94,7%.

5.2 Убинон

К 30 мл толуола добавляют 2 ч 2-метил-4.5.6- триметоксифенол и 6 г борной кислоты. Смесь подогревают на протяжении 2-х часов. После этого 15 мл толуола отгоняют и остаток охлаждают до 50?С с последующим прибавлением 35 мл н-гексину и 20 г силикогелевого алюминия. Смесь подогревают от 50? до 58С на протяжении 30 мин при перемешивании. При этих же условиях порциями прибавляют раствор 14 г декапренола в 10 мл н-гексина. Прибавление длиться 40 мин. Смесь далее подогревают при перемешивании на протяжении 10 мин, чтобы завершить реакцию. По окончанию реакции смесь фильтруют и остаток промывают эфиром. Фильтрат и экстракты соединяют и промывают сначала водой, а потом 10% р-ром NaOH. Органический слой отделяют и растворитель отгоняют до получения 16,8 г маслянистой жидкости желтого цвета.

2.Синтез 2.3-диметокси-5-метил-6-декапренил-1.4-бензохинон.

8.4 г светложелтой маслянистой жидкости с предыдущей стадии растворяют в 100 мл этилацетата. Сюда же прибавляют 35 г FeCI₃ и перемешивают 2 часа при комнатной температуре. После чего приливают 100 мл воды и смесь щательно встряхивают. Органический слой отделяют, промывают водой и сушат над сульфатом натрия. Растворитель отгоняют и получают 8,3 г красноватого маслянистого продукта, который очищают на силикогелевой колонне, используя смесь эфира и н-гексана как элюент. Получают 5,3 г желтовато-оранжевого масляного остатка. Выход 65% в перерасчете на декапренол. При перекристаллизации из ацетона получают желто-оранжевые кристаллы, с Т_пл = 49…50?С.

6. Фармакологический анализ препаратов

Tocopheroli acetas

Витамина Е ацетат

Vitaminum E aceticum

6-Ацетокси-2-метил-2-(4,8,12-триметилтридецил)-хроман

С31Н52О3 М. в. 472

Описание. Светло-желтая прозрачная вязкая маслянистая жидкость со слабым запахом. На свету окисляется и темнеет.[13]

Растворимость. Практически нерастворим в воде, растворим в 95% спирте, очень легко растворим в эфире, ацетоне, хлороформе и растительных маслах.

Подлинность. Около 0,02 г препарата растворяют в 10 мл абсолютного спирта, добавляют 2 мл дымящей азотной кислоты и нагревают в течение 15 минут на водяной бане при температуре около 80°; появляется красно-оранжевое окрашивание.

Удельный показатель поглощения Е1см1% от 42 до 47 при длине волны 285 нм (0,01% раствор в абсолютном спирте).

Показатель преломления 1,4960--1,4985.

Количественное определение. Около 0,12 г препарата (точная навеска) растворяют в 10 мл абсолютного спирта, добавляют 10 мл раствора серной кислоты в абсолютном спирте и кипятят в течение 2 часов на водяной бане в колбе с обратным холодильником. После охлаждения до комнатной температуры смесь переносят в мерную колбу емкостью 50 мл и доводят объем раствора до метки абсолютным спиртом. К 20 мл этого раствора добавляют 20 мл абсолютного спирта, 10 мл воды и 2 капли раствора дифениламина и титруют при постоянном перемешивании 0.01 н раствором сульфата церия со скоростью 25 капель в 10 секунд, защищая титруемый раствор от действия прямого солнечного света, до появления сине-фиолетового окрашивания, устойчивого в течение 10 секунд.

Параллельно проводят контрольный опыт.

1 мл 0,01 н. раствора сульфата церия соответствует 0,002364 г С31Н52О3, которого в препарате должно быть не менее 95,0%.

Примечание. Приготовление раствора серной кислоты в абсолютном спирте. К 75 мл абсолютного спирта осторожно приливают 20 мл концентрированной серной кислоты и перемешивают.

Хранение. В герметически закрытых, заполненных доверху банках темного стекла, в прохладном, защищенном от света месте.

6.2 Кислота аскорбиновая

Acidum ascorbinicum

Витамин С

Vitaminum С

Acidum Ascorbicum *

-Лактон 2,3-дегидро-L-гулоновой кислоты

С6Н8О6 М. в. 176,13

Описание. Белый кристаллический порошок без запаха, кислого вкуса.

Растворимость. Легко растворим в воде, растворим в спирте, практически нерастворим в эфире, бензоле и хлороформе.

Подлинность. 0,05 г препарата растворяют в 2 мл воды и приливают 0,5 мл раствора нитрата серебра; выпадает темный осадок.

При добавлении к раствору препарата (1 :1000) по каплям раствора 2,6-дихлорфенолиндофенола синяя окраска последнего исчезает.Температура плавления 190--193° (с разложением). Скорость подъема температуры 5° в минуту. Препарат предварительно сушат при 60° в течение 2 часов.

Удельное вращение от +22° до +24° (2% водный раствор).

Органические примеси. К 0,1 г препарата прибавляют 2 мл концентрированной серной кислоты и оставляют на 30 минут. Окраска раствора не должна превышать окраску эталона № 56, разведенного в 2 раза.

Сульфатная зола и тяжелые металлы. Сульфатная зола из 0,5 г препарата не должна превышать 0,1% и должна выдерживать испытание на тяжелые металлы (не более 0,001% в препарате).

Количественное определение. Около 0,5 г препарата (точная навеска) растворяют в воде в мерной колбе емкостью 50 мл, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают. К 10 мл приготовленного раствора прибавляют 0,5 мл 1% раствора йодида калия, 2 мл раствора крахмала и 1 мл 2% раствора соляной кислоты и титруют 0.1 н. раствором йодата калия до появления стойкого слабо синего окрашивания.

1 мл 0,1 н. раствора йодата калия соответствует 0,008806 г С6Н8О6,которой в препарате должно быть не менее 99,0%.

Хранение. В хорошо укупоренной таре, предохраняющей от действия света и воздуха.

6.3 Метионин

Methioninum

d,l-б- Амино-??-метилтиомасляная кислота

C5H11NО2S М. в. 149,21

Описание. Белый кристаллический порошок с характерным запахом и слегка сладковатым вкусом.

Растворимость. Трудно растворим в воде, практически нерастворим в органических растворителях, легко растворим в разведенных минеральных кислотах, растворах едких щелочей и аммиака, растворим в растворе карбоната натрия.

Подлинность. 0,05 г препарата растворяют в 1 мл воды при нагревании, прибавляют 5--6 капель раствора нингидрина; появляется сине-фиолетовое окрашивание.

0,05 г препарата нагревают в пробирке с 5--6 каплями 30% раствора едкого натра до получения сплава. Пробирку закрывают кусочком фильтровальной бумаги, которую смачивают I--2 каплями свежеприготовленного 5% раствора нитропруссида натрия, на фильтровальной бумаге появляется красно-фиолетовое окрашивание.

К охлажденному сплаву добавляют 5 мл воды и подкисляют разведенной серной кислотой; появляется запах сероводорода и меркаптана.

Прозрачность и цветность раствора. Растворы 0,5 г препарата в 20 мл воды при 25° и 0,5 г препарата в 5 мл разведенной соляной кислоты должны быть прозрачными и бесцветными.

Хлориды. 0,8 г препарата растворяют в 40 мл воды при 25° в течение 5 минут. 10 мл полученного раствора должны выдерживать испытание на хлориды (не более 0,01 % в препарате).

Сульфаты. 10 мл того же раствора должны выдерживать испытание на сульфаты (не более 0,05% в препарате).

Соли аммония. 0,2 г препарата нагревают до кипения с 3 мл раствора едкого натра. Влажная красная лакмусовая бумага не должна синеть в парах кипящей жидкости.

Цианиды. К 0.5 г препарата прибавляют 10 мл воды, 5 капель раствора сульфата закисного железа, 2 капли раствора хлорида окисного железа,1 мл раствора едкого натра и слегка нагревают. После подкисления соляной кислотой смесь не должна окрашиваться в синий цвет.

Потеря в весе при высушивании. Около 0.5 г препарата (точная навеска) сушат при 100--105° до постоянного веса. Потеря в весе не должна превышать 0,5%.

Сульфатная зола и тяжелые металлы. Сульфатная зола из 0.5 г препарата не должна превышать 0.1% и должна выдерживать испытание на тяжелые металлы (не более 0.001,% в препарате).

Мышьяк. 0,5 г препарата не должны давать реакции на мышьяк.

Количественное определение. 1. Около 0,1 г препарата (точная навеска) помещают в колбу Кьельдаля емкостью 200 мл и далее поступают, как указано в статье «Определение азота в органических соединениях».

После просветления раствора сжигание продолжают в течение 4-41/2 часов.

Содержание общего азота в препарате должно быть не менее 9,2% и не более 9.5%.

2. Около 0.3 г препарата (точная навеска) помещают в коническую колбу емкостью 250 мл, растворяют в 100 мл волы, прибавляют 5 г фосфата калия двузамещенного, 2 г фосфата калия однозамещенного, 2 г йодида калия и взбалтывают до полного растворения. Затем прибавляют точно 50 мл 0.1 н. раствора йода, закрывают колбу, хорошо перемешивают и оставляют на 30 минут. Избыток йода оттитровывают 0,1 н. раствором тиосульфата натрия, прибавляя в конце титрования раствор крахмала.

Параллельно проводят контрольный опыт.

1 мл 0,1 н. раствора йода соответствует 0,007461 г C5H11NO2S, которого в пересчете на сухое вещество должно быть не менее 98,5%.

Хранение. В хорошо укупоренных банках оранжевого стекла, в защищенном от света месте.

7. Сводная таблица