Особливості морфогенезу та прогресування фіброзу і цирозу печінки у хворих на хронічний вірусний гепатит С

5. У хворих на ХВГ С зростання імуноцитарної інфільтрації фіброзно зміненої печінки стимулює експресію ММР-9 і ТІМР-1 перисинусоїдальними зірчастими клітинами і макрофагами Купфера, гепатоцитами, макрофагами і лімфоцитами портальних та внутрішньодолькових імуноцитарних інфільтратів. При імуноклітинній деструкції печінки експресія ММР-9 і ТІМР-1 досягає максимального рівня і визначається у великій кількості зірчастих клітин Іто, гепатоцитів, макрофагів Купфера, лімфоцитів і макрофагів портально-перипортальних імуноклітинних інфільтратів та вогнищ імуноклітинного кілінгу.

6. Прогностичними ознаками імовірного прогресування портально-септального фіброзу печінки у хворих на ХВГ С є проліферація Кі67+ фібробластів і збільшення кількості б-SMA+ фібробластів в портальних трактах, поява множинних активних септ з підвищеною кількістю в них CD8+ Т-кілерів і CD68+ макрофагів, а також значне збільшення в септах і портально-перипортальних імуноклітинних «ступінчастих некрозах» кількості б-SMA+ активованих фібробластів. На місці великих внутрішньодолькових осередків цитолізу гепатоцитів та їх імуноклітинної деструкції CD8+ Т-кілерами і CD68+ макрофагами, після активації перисинусоїдальних б-SMA+ зірчастих клітин, утворюються великі неупорядковані осередки фіброзу і фіброзні септи.

7. Про можливе прогресування перисинусоїдального фіброзу печінки свідчить проліферація Кі-67+ перисинусоїдальних зірчастих клітин та збільшення в печінкових дольках кількості б-SMA+ перисинусоїдальних зірчастих клітин при низкому рівні експресії ними апоптотичної каспази-3, а також виражена експресія б-SMA значною кількістю перисинусоїдальних зірчастих клітин на тлі слабкого фіброзу і колагенизації внутрішньодолькових синусоїдів. До посилення перицелюлярного фіброзу веде прогресування значної дрібно-крупновакуольної дистрофії гепатоцитів та утворення стеатокіст при стеатозі печінки.

8. Ознаками активного цирозу є імуноцитарна інфільтрація прошарків сполучної тканини і фіброзно потовщених портально-перипортальних зон, а також імуноклітинна деструкція дольок і псевдодольок з наявністю CD8+ Т-лімфоцитів і CD68+ макрофагів з домішком CD45R0+ Т-лімфоцитів і CD20+ В-лімфоцитів в портально-перипортальних інфільтратах і у розширених внутрішньодолькових синусоїдах. Декомпесація цирозу печінки обумовлена 4-ма морфогенетичними шляхами його прогресування: активацією імуноклітинної деструкції циротично зміненої печінки; прогресуванням септального, перисинусоїдального і перицелюлярного фіброзу в дольках і псевдодольках печінки; ішемічним і геморагічним некрозом дольок та псевдодольок; колапсом дольок печінки внаслідок апоптозу гепатоцитів при портально-центролобулярному шунтуванні кровотоку в печінці.

Практичні рекомендації

1. При патоморфологічному дослідженні парафінових зрізів інтраопераційних біопсій та трепанобіоптатів печінки з наявністю не менш ніж 18-20 дольок і 10-12 портальних трактів, при забарвленні гематоксиліном та еозином, за Ван-Гізон, трихром-Масон та ІГХ визначенні рівня експресії б-SMA і колагену IV типу, у хворих на ХВГ С діагностується портально-септальний, перисинусоїдально-центролобулярний, перицелюлярний і змішаний (портально-септальний та перисинусоїдально-центролобулярний) фіброз печінки.

2. Для визначення ступеня вираженості різних типів фіброзу печінки аналізується гістотопографія фіброзу і ступінь його розвитку в різних компартментах печінки: в портальних трактах і в перипортальних зонах; у внутрішньодолькових центролобулярних венах і перисинусоїдальних просторах; в портально-долькових, порто-центрально-портальних і порто-портальних фіброзних септах, а також у фіброзних прошарках навколо істинних дольок і псевдодльок печінки. З урахуванням цих даних в гепатобіоптатах хворих на ХВГ С визначається слабкий, помірний і тяжкий фіброз без псевдодольок, а також цироз печінки.

3. Для прогнозування імовірного прогресування фіброзу печінки в парафінових зрізах гепатобіоптатів, окрім забарвлення гематоксиліном та еозином, за Ван-Гізон, трихром-Масон та ІГХ виявлення експресії б-SMA і колагену IV типу, необхідно визначити рівень експресії клітинами печінки і клітинами імуноцитарних інфільтратів Кі-67, каспази-3, CD68, а також визначити розповсюдження і локалізацію CD8+ Т-лімфоцитів і CD20+ В-лимфоцитів.

4. Імунохроматографічний експрес-метод виявлення тест-касетами «CITO-TEST HCV» фірм «AmeriTec Inc» (США) та «Acon Biotech Со» (Китай) антитіл до вірусу гепатиту С в дрібних стовпчиках тканин трепанобіоптатів печінки має достовірно високу 90% чутливість; його можна рекомендувати для швидкої діагностики вірусного гепатиту С в біопсійній практиці, а також для швидкого виявлення антитіл до вірусу гепатиту С в тканинах органів під час операцій для попередження інфікування вірусами гепатиту медичного персоналу.

Список праць, опублікованих за темою дисертації

1. Шебеко Ю. О. Характеристика експресії ММР-9 і ТІМР-1 при фіброзі і цирозі печінки у хворих на хронічний вірусний гепатит С / Ю. О. Шебеко // Патологія. - 2011. - Т. 8, № 2. - С. 111-113.

2. Туманский В. А. Интраоперационная иммунохроматографическая экспресс-диагностика вирусного гепатита С в ткани трепанобиоптатов печени / В.А. Туманский, Ю. А. Шебеко // Патология. - 2010. - Т. 7, № 2. - С. 107-109. (Автором самостійно проводились імунохроматографічні дослідження біопсій печінки і крові хворих, обробка та аналіз результатів дослідження).

3. Туманський В. О. Клініко-морфологічне обґрунтування градації фіброзу печінки в біопсійній практиці / В. О. Туманський, Ю. О. Шебеко // Патологія. - 2009. - Т. 6, № 2 - С. 64-70. (Автором самостійно проводився набір більшої частини первинного матеріалу, обробка та аналіз результатів дослідження, формулювалися висновки).

4. Туманский В. А. Цирроз печени: пути прогрессии и возможности репаративной регенерации / В. А. Туманский, Ю. А. Шебеко, А. С. Тугушев // Патологія. - 2009. - Т. 6, № 3. - С. 17-25. (Автором забезпечено морфологічне дослідження матеріалу, обробка та аналіз результатів дослідження)

5. Шебеко Ю. О. Імуногістохімічна характеристика експресії маркерів проліферації при фіброзі та цирозі печінки / Ю. О. Шебеко // Актуальні питання фармацевтичної і медичної науки та практики. - Запоріжжя, 2009. - Вип. 22, т. 1 (клінічна медицина). - С. 166-167.

6. Туманский В. А. Патогенно индуцированный апоптоз гепатоцитов при хроническом вирусном гепатите: молекулярные механизмы и микроскопическая діагностика / В. А. Туманский, Ю. А. Шебеко // Патологія. - 2008. - Т. 5, № 3 - С. 29-34. (Автором самостійно проводився набір більшої частини первинного матеріалу, обробка та аналіз результатів дослідження).

7. Туманский В. А. Иммуноклеточный киллинг: морфогенез и последствия для больных хроническим вирусным гепатитом / В. А. Туманский, М. А. Шишкин, Ю. А. Шебеко // Патологія. - 2008. - Т. 5, № 3 - С. 110-112. (Автором самостійно проводився набір частини первинного матеріалу, обробка та аналіз результатів дослідження).

8. Тяжкий фіброз печінки: особливості морфогенезу, біопсійної діагностики та клінічних проявів / В. О. Туманський, М. А. Шишкін, Ю. О. Шебеко, А. В. Куртєв // Світ медицини та біології. - 2008. - № 2. - С. 102-104. (Автором самостійно проводився набір більшої частини первинного матеріалу, обробка та аналіз результатів дослідження, формулювалися висновки).

9. Туманский В. А. Особенноси морфогенеза тяжелого фиброза-цирроза печени при хроническом стеатогепатите и вирусном гепатите / В. А. Туманский, Ю. А. Шебеко, А. А. Гаврилюк // Актуальні проблеми онкоморфології. - 2011. - С. 119. (Автором самостійно проводився набір більшої частини первинного матеріалу, обробка та аналіз результатів дослідження, формулювалися висновки).

10. Шебеко Ю. О. Спосіб інтраопераційної експрес-діагностики вірусного гепатиту С / Ю. О. Шебеко // Хист. Всеукраїнський медичний журнал молодих вчених. - 2010. - Вип. 12. - С. 197.

11. Шебеко Ю. О. Імуногістохімічні та комп'ютерно-морфометричні особливості фіброзу різного ступеня та цирозу печінки / Ю. О. Шебеко // Актуальні проблеми сучасної медицини: Вісник Української медичної стоматологічної академії. - 2009. - Т. 9, вип. 4 (28), част. 3. - С. 235.

12. Туманский В. А. Фиброз печени: источники развития, морфогенез и градация интенсивности / В. А. Туманский, Ю. А. Шебеко // 100-летие Российского общества патологоанатомов. - СПб. : Biovitrum, 2009. - С. 315-317. (Автором самостійно проводився набір більшої частини первинного матеріалу, обробка та аналіз результатів дослідження).

13. Посмертна імунохроматографічна діагностика ВІЛ-інфекції і вірусних гепатитів: методичні рекомендації / В.О. Туманський, С.Г. Тимошенко, А.В. Куртєв, Ю. А. Шебеко. - К. : МОЗ України. 2009. - 23 с. (Автором самостійно проводився набір частини первинного матеріалу, обробка та аналіз результатів дослідження).

14. Пат. № 47598 UA, МПК7 G01N 33/00. Спосіб експрес-діагностики вірусного гепатиту С / Туманський В.О., Шебеко Ю.О., Живиця С.Г. (Україна). - № u 200909572; заявл. 18.09.09; опубл. 10.02.10, Бюл.№3. (Автором самостійно проводились імунохроматографічні дослідження біопсій печінки і крові хворих та аналіз результатів дослідження, проводилась робота з патентом).

Анотація

Шебеко Ю. О. Особливості морфогенезу і прогресування фіброзу та цирозу печінки у хворих на хронічний вірусний гепатит С. - На правах рукопису.

Дисертація на здобуття наукового ступеня кандидата медичних наук за спеціальністю 14.03.02 - патологічна анатомія. - Запорізький державний медичний університет МОЗ України. - Запоріжжя, 2011.

На підставі комплексного дослідження біоптатів печінки 120 хворих на ХВГ С та аналізу клініко-лабораторних даних 268 пацієнтів встановлено, що фіброз печінки розвивається в зонах, в яких з'являються нові покоління б-SMA+ фіброгенних клітин. Доведена важлива роль проліферації і апоптозу цих клітин в морфогенезі фіброзу і цирозу печінки. ІГХ-методами вивчено склад імуноклітинних інфільтратів печінки та диференційовані зони її імуноклітинної деструкції.

Вперше детально описані основні морфологічні типи фіброзу печінки. Вперше охарактеризовані особливості морфогенезу перисинусоїдально-центролобулярного фіброзу печінки у хворих на ХВГ С. Визначені прогностичні ознаки імовірного прогресування кожного морфологічного типу фіброзу, запропоновані параметри градації ступеня тяжкості перисинусоїдально-центролобулярного і змішаного фіброзу печінки.

Зазначені особливості експресії ММР-9 та ТІМР-1 при фіброзі і цирозі печінки у хворих на ХВГ С.

В роботі охарактеризовані та систематизовані комлексні ознаки стабільного і активного цирозу печінки, обґрунтовані основні патоморфологічні шляхи прогресування і декомпенсації цирозу печінки у хворих на ХВГ С.

Розроблено, запатентовано та впроваджено в практичну діяльність спосіб імунохроматографічної експрес-діагностики наявності антитіл до вирусу гепатиту С в тканині печінки і крові померлих.

Ключові слова: фіброз і цироз печінки, морфогенез, прогресування, імуноклітинна деструкція, хронічний вірусний гепатит С.

Аннотация

Шебеко Ю. А. Особенности морфогенеза и прогрессии фиброза и цирроза печени у больных хроническим вирусным гепатитом С. - На правах рукописи.

Диссертация на соискание научной степени кандидата медицинских наук по специальности 14.03.02 - патологическая анатомия. - Запорожский государственный медицинский университет МЗ Украины. - Запорожье, 2011.

На основании комплексного патоморфологического, гистохимического, иммуногистохимического и компьютерно-морфометрического исследования трепанобиоптатов и интраоперационных биоптатов печени 120 больных ХВГ С, а также анализа клинико-лабораторных данных 268 пациентов определено, что фиброз печени может развиваться в нескольких ее зонах, в которых появляются новые поколения фиброгенных б-SMA+ звездчатых клеток и фибробластов: в портальных трактах и перипортальных «ступенчатых некрозах», в центролобулярных венах и перисинусоидальных пространствах, а также в очагах иммуноклеточной деструкции долек печени.

Доказана важная роль пролиферации и апоптоза активированных б-SMA+ фиброгенных клеток в морфогенезе фиброза и цирроза печени. Иммуногистохимическими методами изучен состав перисинусоидальных и портально-перипортальных иммуноклеточных инфильтратов печени, а также дифференцированы зоны иммуноклеточной деструкции печени (иммуноклеточные «ступечатые» и «мостовидные некрозы», очаги иммуноклеточного киллинга гепатоцитов), в которых сосредоточены иммуноциты цитотоксической направленности.

Впервые детально описаны основные морфологические типы фиброза печени: перисинусоидально-центролобулярный, портально-септальный, смешанный и перицеллюлярный фиброз (разновидность перисинусоидально-центролобулярного фиброза). Впервые охарактеризованы молекулярно-клеточные особенности морфогенеза перисинусоидально-центролобулярного фиброза печени у больных ХВГ С. Изучены и изложены прогностические патогистологические, гистохимические и иммуногистохимические признаки вероятной прогрессии каждого морфологического типа фиброза печени, предложены параметры градации степени тяжести перисинусоидально-центролобулярного и смешанного фибоза печени у больных ХВГ С. Доказана важная роль иммуноклеточной деструкции в прогрессии портально-септального фиброза и развитии сидрома цитолиза у больных ХВГ С.

Охарактеризованы особенности экспресии матриксной металлопротеиназы ММР-9 и её тканевого ингибитора ТIMP-1 клетками печени, а также расширение спектра клеток-продуцентов этих ферментов при фиброзе с иммуноцитарной инфильтрацией и при циррозе печени.

В работе охарактеризованы и систематизированы патогистологические, гистохимические, иммуногистохимические признаки стабильного и активного цирроза печени, детально обоснованы основные патоморфологические пути прогрессии и декомпенсации цирроза печени у больных ХВГ С.

На основании параллельного анализа особенностей экспресии б-SMA+ и коллагена IV типа активированными фиброгенными клетками печени предложены прогностические признаки вероятной прогрессии либо стабилизации фиброза и цирроза печени у больных ХВГ С.

Разработан, запатентован и внедрен в практику патологоанатомической службы и судебно-медецинской экспертизы способ иммунохроматографической экспресс-диагностики наличия антител к вирусу гепатита С в ткани печени и в крови умерших больных.

Ключевые слова: фиброз и цирроз печени, морфогенез, прогрессия, иммуноклеточная деструкция, хронический вирусный гепатит С.

Annotation

Shebeko Yu. A. Features of morphogenesis and progression of liver fibrosis and cirrhosis at patients with chronic viral hepatitis C. - As manuscript.

The Thesis for scientific degree of Candidate of Medical Sciences on specialization 14.03.02 - pathological anatomy. - Zaporozhye State Medical University. - Zaporozhye, 2011.

Zones-sources of fibrogenesis with populations of fibrogenic б-SMA+ cells were determined on the base of complex analysis of liver biopsies of 120 patients with chronic HCV-infection and analysis of clinical-laborathory data of 268 patients with hepatitis C virus (HCV). The important role of б-SMA+ activated fibrogenic cells' proliferation and apoptosis in liver fibrosis and cirrhosis morphogenesis was established. A compound of immunocellular infiltration in liver was established and foci of immunocellular liver destruction were differentiated due to IHC analysis.

The main morphological types of liver fibrosis were determined. Features of perisinusoidal-cenrtolobular liver fibrosis at patients with chronic HCV-infection were also studied. Prognostic signs of possible progression of each morphological types of liver fibrosis were studied and defined. The scoring system was proposed for perisinusoidal-cenrtolobular and mixed liver fibrosis.

There were determined features of MMP-9 and TIMP-1 expression at patients with chronic HCV-infection.

Complex criteria of stable and active liver cirrhosis were establised. The main pathways of liver cirrhosis progression and decompensation were detaily characterized.

Method of immunochromatographic express diagnostics of HCV-antibodies in liver tissue and postmortem blood was designed, patented and embeded in practice.

Key words: liver fibrosis and cirrhosis, morphogenesis, progression, immunocellular destruction, chronic HCV-infection.

Перелік умовних скорочень

АлАТ - аланінамінотрансфераза

АсАТ - аспартатамінотрасфераза

ВГС - вірус гепатиту С

ГХ - гістохімічні (дослідження)

ІГА - індекс гістологічної активності

ІГХ - імуногістохімічні (дослідження)

ІХА - імунохроматографічний аналіз

КМ - комп'ютерна морфометрія

ПГ - патогістологічні (дослідження)

ПКМ - позаклітинний матрикс

РНК - рибонуклеїнова кислота

ХВГ - хронічний вірусний гепатит

ХВГ С - хронічний вірусний гепатит C

б-SMA - б-ізоформа гладком'язового актину

HCV - вірус гепатиту С

IHC - імуногістохімічний (аналіз)

IL - інтерлейкіни

ММР-9 - матриксна металопротеїназа 9

NK-клітини - натуральни кілери

PСNA - ядерний антиген клітинної проліферації

PDGF - тромбоцитарний фактор росту

TGF-в1 - трансформуючий фактор росту в1

ТІМР-1 - тканинний інгібітор матриксних металопротеїназ-1

Размещено на Allbest.ru