Біологічні та імуногенні властивості епізоотичних штамів вірусу інфекційного бронхіту курей

Нестерова, Л. Ю. Біологічні властивості штамів вірусу інфекційного бронхіту курей [Текст] / Л. Ю. Нестерова, О. О. Пащенко, М. Аль Равашдех // Вісник Полтавської ДАА. - Полтава, 2008. - № 1 : Вет. науки. - С. 149-152. (Дисертантка провела експериментальні дослідження, узагальнила результат, брала участь в оформленні статті).

Деклараційний патент на корисну модель № 26102 Україна, МПК С12N 7/00. Ізолят ЛІ_1 як продуцент антигену вірусу інфекційного бронхіту курей (родина Coronaviridae, Coronavirus) [Текст] / Л. І. Пархоменко, М. М. Ігнатов, Л. Ю. Нестерова; заявник і патентовласник Луганський національний аграрний університет. - № 200613813 ; заявл. 25.12.2006 ; опубл. 10.09.2007, Бюл. 14. - 8 с.

Деклараційний патент на корисну модель № 26692 Україна, МПК С12N 7/00. Ізолят ЛІ_2 як продуцент антигену вірусу інфекційного бронхіту курей (родина Coronaviridae, Coronavirus) [Текст] / Л. І. Пархоменко, Л. Ю. Нестерова, М. Аль Равашдех; заявник і патентовласник Луганський національний аграрний університет. - № 200613927 ; заявл. 27.12.2006 ; опубл. 10.10.2007, Бюл. 16. - 8 с.

Петренко, Л. Ю. Ізоляція вірусу інфекційного бронхіту курей [Текст] / Л. Ю. Петренко, Л. І. Пархоменко // Молодь за вирішення аграрних проблем XXI століття : матеріали міжнар. студ. наук. конф. - Львів, 2001. - Ч. 1. - С. 61-64. (Дисертантка провела ізоляцію з патологічного матеріалу від птиці та індикацію епізоотичних штамів вірусу інфекційного бронхіту курей).

Petrenko, L. Viral and bacterial parasiticinosis among farm, synanthropic and omamental birds / L. Parhomenko, N. Ignatov, L. Petrenko, O. Zemlyanskaya, D. Ponomarenko, M. Popov, Y. Zelukina // Emerging Diseases and Diseases of Complex or Unknown Etiology : 14th World Veter. Poultry Cong. Exhibition. - Istanbul, 2005. - P. 485. (Дисертантка провела досліди, узагальнила результати щодо властивостей ізолятів вірусу інфекційного бронхіту курей, підготувала проект статті).

Пархоменко, Л. І. Визначення циліарної активності трахеї курчат та мітотичного режиму перещеплюваної культури клітин Vero, інфікованих штамами вірусу інфекційного бронхіту курей [Текст] / Л. І. Пархоменко, Л. Ю. Нестерова, М. Аль Равашдех : методичні рекомендації. - Луганськ, 2008. - 23 с. (Дисертантка провела експериментальні досліди, підготувала проект рекомендацій).

Нестерова Л. Ю. Біологічні та імуногенні властивості епізоотичних штамів вірусу інфекційного бронхіту курей. - Рукопис.

Дисертація на здобуття наукового ступеня кандидата ветеринарних наук за спеціальністю 16.00.03 - ветеринарна мікробіологія та вірусологія. Національний науковий центр «Інститут експериментальної і клінічної ветеринарної медицини», Харків, 2008.

Дисертація присвячена вивченню біологічних, фізико-хімічних, імуногенних властивостей епізоотичних штамів ВІБК, циркулюючих у птахогосподарствах Луганської області. Результати серологічного моніторингу впродовж 2003-2006 рр. вказують на поширення збудника ІБК у промислових птахогосподарствах. З патологічного матеріалу, відібраного від курей і курячих ембріонів, ізольовано 6 штамів ВІБК. За патогенністю для курячих ембріонів, курчат та культури клітин фібробластів курячого ембріону ізоляти ЛІ_1 і ЛІ_2 віднесено до вірулентних. Інфекційна активність ізоляту ЛІ_1 у курячих ембріонах становить 5Ч106,26 ЕІД50/см3, ізоляту ЛІ_2 - 5Ч107,0 ЕІД50/см3.

Аутентичність патогенних ізолятів ЛІ_1 та ЛІ_2 вірусу ІБК встановлена за ПЛР і характерною для коронавірусів морфологією віріонів (сферична форма, розмір 122-169 нм, оболонка з булавоподібними виступами 10-18 нм).

У культурі клітин Vero ізолят ЛІ_1 нарівні з вакцинним штамом 4/91 ВІБК проявляє цитопатогенну дію за типом симпластоутворення, тоді як репродукція ізоляту ЛІ_2 і штаму Н_120 ВІБК спричиняє деструктивні зміни клітин. Установлено, що ізольовані штами викликають пригнічення мітотичної активності культури клітин Vero зі збільшенням кількості патологічних мітозів, серед яких переважала пола метафаза, що складала 40,48 % (ЛІ_2), 42,58 % (4/91) та 44,6 % (ЛІ_1) від загальної кількості патологічних мітозів. Титр ізолятів ЛІ_1 та ЛІ_2 ВІБК у культурі клітин Vero становить відповідно 104,59 і 105,25 ТЦД50/см3.

Ізоляти ЛІ_1 і ЛІ_2 викликають гемаглютинацію еритроцитів півня і чутливі до температури 45 °С.

Характерною білковою фракцією як для ізольованих, так і для вакцинних штамів 4/91, Н_120 і Ма_5 ВІБК є фракція 25,1 кD, що за молекулярною масою відповідає внутрішньому мембранному білку (М) та матриксному глікопротеїну (Е1) ВІБК. Білкова фракція молекулярною масою 67,0 кDa встановлена лише в складі польових штамів.

Після інтраназального та інтраокулярного інфікування курчат з різним рівнем пасивного імунітету до ВІБК ізоляти ЛІ_1 і ЛІ_2 індукують появу циліостазу й накопичення антитіл у сироватці крові, між якими встановлено зворотно-пропорційну кореляцію.

Ключові слова: вірус інфекційного бронхіту курей, серологічний моніторинг, епізоотичні штами, ізоляція, індикація, ідентифікація, біологічні, фізико-хімічні, імуногенні властивості.

Нестерова Л. Ю. Биологические и иммуногенные свойства эпизоотических штаммов вируса инфекционного бронхита кур. - Рукопись.

Диссертация на соискание научной степени кандидата ветеринарных наук по специальности 16.00.03 - ветеринарная микробиология и вирусология. Национальный научный центр «Институт экспериментальной и клинической ветеринарной медицины», Харьков, 2008.

Диссертация посвящена изучению биологических, физико-химических и иммуногенных свойств эпизоотических штаммов вируса инфекционного бронхита кур, циркулирующих в птицехозяйствах Луганской области.

Низкий уровень сероконверсии у птицы раннего возраста, пестрота и повышение (3,6-3,9 log2) титров антител к вирусу инфекционного бронхита кур (ИБК) в репродуктивный период, снижение яичной продуктивности на 15-20 % с появлением 5 % яйца с признаками деформации и тонкой скорлупой, 25-30 % задохликов среди отходов инкубации, выявленные в течение 2003-2006 гг. в промышленных птицехозяйствах, указывают на циркуляцию в птицехозяйствах возбудителя ИБК. Из патологического материала, отобранного от кур и куриных эмбрионов из птицехозяйств, выбранных на основании серомониторинга и при подозрении заболевания птицы на ИБК, изолировано 6 штаммов вируса ИБК. По патогенности для куриных эмбрионов, цыплят и репродукции в культуре фибробластов куриного эмбриона изоляты ЛИ_1 и ЛИ_2 отнесены к вирулентным. Изоляты ЛИ_1 и ЛИ_2 вызывают у куриных эмбрионов 9-11_суточной инкубации смертность, карликовость, отёк хорионаллантоисной оболочки, увеличение объема экстраэмбриональной жидкости с наличием уратов, гиперемию и кровоизлияния на теле зародыша. Инфекционность изолята ЛИ_1 составляет 5Ч106,26 ЭИД50/см3, изолята ЛИ_2 - 5Ч107,0 ЭИД50/см3. Аутентичность патогенных изолятов ЛИ_1 и ЛИ_2 вирусу ИБК установлена методом амплификации фрагмента кДНК участка S1 гена и по характерной при электронной микроскопии для коронавирусов морфологии вирионов (сферическая форма, размер 122-169 нм, оболочка с булавовидными выступами).

У 40 % цыплят 13_суточного возраста, через 36 часов после интраназальной инокуляции изолят ЛИ_1 вызывал респираторное заболевание и появление антител к вирусу ИБК через 25 суток. Респираторное заболевание зарегистрировано у 100 % цыплят 3_суточного возраста через 12 часов после интраназального заражения изолятом ЛИ_2 и наличие антител к вирусу ИБК через 3 суток.

Репродукция изолированных штаммов в культуре фибробластов куриного эмбриона сопровождалась дегенеративными изменениями клеток. В культуре клеток Vero изолят ЛИ_1, подобно штамму 4/91 вируса ИБК, проявляет цитопатогенное действие по типу симпластообразования, тогда как репродукция изолята ЛИ_2 и штамма Н_120 приводит к деструктивным изменениям клеток. Установлено, что изолированные эпизоотические штаммы вызывают угнетение митотической активности клеток Vero с увеличением количества патологических митозов, среди которых преобладала полая метафаза и составляла 40,48 % (ЛИ_2), 42,58 % (4/91) та 44,6 % (ЛИ_1) от всех патологических форм. Инфекционность изолятов ЛИ_1 и ЛИ_2 в культуре клеток Vero составляет соответственно 104,59 и 105,25 ТЦД50/см3.

Изоляты ЛИ_1 и ЛИ_2 вызывают агглютинацию эритроцитов петуха и чувствительны к температуре плюс 45 °С. Характерной белковой фракцией как для изолированных, так и для вакцинных штаммов 4/91, Н_120 и Ма_5 вируса ИБК является фракция 25,1 кD, которая по молекулярной массе соответствует внутреннему мембранному белку (М) и матриксному гликопротеину (Е1) вируса ИБК. Белковая фракция молекулярной массой 67,0 кD выявлена только у изолированных штаммов.

Эпизоотические штаммы ЛИ_1 и ЛИ_2 индуцируют появление цилиостаза и накопление антител после интратрахеального и интраокулярного инфицирования цыплят с разным уровнем пассивного иммунитета к вирусу ИБК. Установлено, что со снижением цилиостатического балла трахеи увеличивается уровень антител к вирусу ИБК в сыворотке крови инфицированных цыплят. Наиболее вероятно (Р?0,01-Р?0,001) эта связь прослеживается у цыплят после инокуляции изолята ЛИ_1 и штамма Н_120.

Ключевые слова: вирус инфекционного бронхита кур, серологический мониторинг, эпизоотические штаммы, изоляция, индикация, идентификация, биологические, физико-химические, иммуногенные свойства.

Nesterova L. Yu. Biological and immunogenic properties of epizootic strains of avian infectious bronchitis virus. - Manuscript.

Dissertation on the competition of scientific degree of the candidate of veterinary sciences after speciality 16.00.03 - veterinary microbiology and virology. National Scientific Center «Institute of Experimental and Clinical Veterinary Medicine», Kharkiv, 2008.

The dissertation is devoted to studying of biological, physical, chemical, and immune properties of epizootic strains of avian infectious bronchitis virus (AIBV) that circulation in poultry flocks of Lugansk region.

Results of serological monitoring during 2003-2006 years and epizootic investigate are indicated spread of AIBV in poultry farms. From pathological material samples from hens and chicken embryos were isolated 6 strains of AIBV. Isolates LI_1 and LI_2 by the pathogenicity rout for chicken embryos, chicken and culture cell of fibroblasts of chicken embryos were define as virulent. Infection activity of isolate LI_1 on chicken embryos was equal to 5Ч106.26 ЕІD50/сm3, isolate LI_2 - 5Ч107.0 ЕІD50/сm3. By the PCR and typical for morphology of coronavirusеs (spherical form, the sizes of 122 to 169 nm, spike-rich surface) were determinate authentically isolates LI_1 and LI_2 to AIBV.

The isolate LI_1 as the vaccine strains 4/91 AIBV to induce cytopathic effects in the Vero cells by symplasts, whereas reproduction of the isolate LI_2 and the vaccine strains H-120 AIBV cause destruction of cells. Field strains of AIBV in Vero cells cause depressions of mitotic activity with increase of number pathological mitosis among which prevail were tripolar metaphases and chromosomal bridges. Titer of the isolates LI_1 and LI_2 AIBV in Vero cells was according to 104.59 and 105.25 ТCD50/см3.

Isolates LI_1 and LI_2 AIBV are able to cause haemagglutination, sensitively to 45 °С. Protein fraction of 25.1 kD is typical of the isolated and vaccines 4/91, Ma_5, H_120 AIBV and conformity to matrix (M) and membrane (E1) glycoprotein's of AIBV. A protein with a molecular weight of 67.0 kD was in the field strains only.

After intranasal and intraocular infection of chickens with the difference passive immunity to AIBV isolates LI_1 and LI_2 AIBV were induce cilіostas and accumulation of antibodies in serum, between that was detected reverse correlation connection.

Key words: avian infectious bronchitis virus, serological monitoring, epizootic strains, isolation, indication, identification, biological, physical, chemical, and immune properties.

Размещено на Allbest.ru