Влияние обогащенной тромбоцитарной плазмы крупного рогатого скота на регенерацию кожных ран

Количество лейкоцитов определяли при помощи следующей формулы:

Х=АБ/ВГ = 50 * 4,

где

Х - количество лейкоцитов в 1 мл крови.

А - число лейкоцитов, подсчитанных в 100 больших квадратах.

Б - степень разведения крови (20).

В - количество маленьких квадратиков в 100 больших (100 * 16 = 1600).

Г - объем счетной камеры над маленьким квадратом (1/4000 мл).

Норма кровяных клеток у крупного рогатого скота следующая: эритроциты 5,0 - 7,5 х10 * 12 / л; лейкоциты 4,5 - 12 х 10 * 9 /л.

Определение количества гемоглобина.

Для проведения количества гемоглобина использовали гематиновый метод (метод Сали). В градуированную пробирку гемометра ГС-3 вносили глазной пипеткой до метки «2» 0,1Н раствор соляной кислоты. Капиллярной пипеткой набирали 20 мкл (0,02 мл) крови, кончик пипетки вытирали ватой и кровь вдували на дно пробирки в раствор кислоты, промывая им 2-3 раза пипетку для удаления остатков крови. Перемешивали и оставляли стоять на 5 минут. Вследствие образования солянокислого геметина (хлоргематина) раствор в пробирке приобретает коричневую окраску. Добавляли по каплям дистиллированную воду, помешивая стеклянной палочкой до тех пор пока окраска жидкости в пробирке не сравнялась с цветом стандартной пробирки. Количество гемоглобина в граммах на 100 мл крови устанавливали по делениям шкалы, которое совпадает с уровнем жидкости в пробирке. Если умножить количество гемоглобина на коэффициент 10, то можно определить концентрацию гемоглобина в г%.

Норма гемоглобина у крупного рогатого скота 99 - 129 г/л.

Выведение лейкограммы.

Лейкограмма - это процентное соотношение между отдельными видами лейкоцитов в крови.

Выведение лейкограммы осуществляли по окрашенным мазкам крови путем дифференциального подсчета под иммерсионной системой микроскопа 100 лейкоцитов. Подсчет проводили по однопольному методу. При записи результатов отдельные виды лейкоцитов располагали в следующей последовательности: базофилы (Б), эозинофилы (Э), нейтрофилы: миелоциты (М), юнные (Ю), палочкоядерные (П), сегментоядерные (С); лимфоциты (Л), моноциты (Мон). При норме,характерной для данного вида и возраста животного, лейкограмма выглядит следующим образом:

Известно, что любой целостной живой системе, будь то организм или орган, ткань или клетка присуще такое качество, как реактивность. Под этим термином мы понимаем любое проявление реакции ответного действия живой системы в ответ на действие раздражающего агента. Реактивность организма вытекает из свойства раздражимости, реализация которого происходит только при условии столкновения субстрата с раздражающим фактором живой или любой другой природы (Куприянов В.В., 1965).

Гистологическое исследование.

Мы брали на следование края раны гистологическими кусачками на 3, 5 и 14 день. Кусочки помещали в 10% процентный формалин на 3 дня , через 3 дня меняли формалин и меняли его еще на 3 дня, Через 3 дня кусочки проводили через изопропиловые спирты различной концентрации. И помещали в расплавленный парафин на 1.5 часа. После этого заливали полученный материал в чашку петрии. Через сутки с помощью микротома резали полученный материал. Полученный материал клался в подогретую воду 50 градусов Цельсия и помещался на стекло, Сутки закреплялся в термостате при температуре 38 градусов Цельсия, Красился материал по романовскому гинзе. Материал исследовал в врач вет клиники Михайлова Е.В.

Количество лейкоцитов у всех собак, после нанесения раны резко повысилось, и продолжало повышаться до 7 дня в опытных собаках до Собаки№6, а от 6 собаки до 10 количество лейкоцитов повышалось до 10 дня. Затем количество лейкоцитов снижалось во всех. Таким образом, видно, что организм адекватно реагирует на внешний раздражитель, которым в нашем случае является рана.

Широкое применение формалин получил благодаря ряду свойств:

а) высокой степени диффузии;

б) способности хороню сохранять форму, окраску и структуру исследуемого объекта;

в) оказывать длительное фиксирующее действие (до нескольких лет), существенно не ухудшая при этом качество материала;

г) хорошо сохранять жиры и липоиды.

Высокая диффузионная способность и незначительное осаждающее действие позволяют формалину довольно быстро и глубоко проникать в ткани, что позволяет фиксировать кусочки органа размером от 1 см и более, а при необходимости и довольно крупные органы целиком.

Срок фиксации тканей в формалине 24--48ч. Обычный формалин, как правило, содержит примесь метилового спирта и муравьиной кислоты, количество которой увеличивается под влиянием света.

При охлаждении формалина в растворе появляется муть, оседающая в виде белого осадка (параформальдегид). Такой же осадок наблюдается на стенках сосуда и при испарении формалина. Поэтому формалин следует хранить в темной плотно закрывающейся стеклянной посуде при температуре не ниже 9°С. После фиксации материала в фиксирующих средах проводится обезвоживание материала с помощью этилового спирта разной крепости, начиная с 60, 70, 80, 90, 96, абсолютный-1 и абсолютный-2 в широкогорлых банках по 12-24 часа в каждой порции. После этого обезвоженный материал помещали на 1-3 часа в растворитель, затем на 12 часов в «кашу» (растворитель (хлороформ) плюс парафин), а затем на 2-3 часа в расплавленный парафин - 1 и парафин - 2. В дальнейшем пропитанные кусочки заливались в парафин и с них делались серийные срезы толщиной 4-5 мкм.

Методика окрашивания срезов гематоксилин - эозином.

Эта методика наиболее часто применяется и поэтому должна быть описана более детально. Этим методом можно окрашивать целлоидиновые срезы, депарафинированные, парафиновые или замороженные срезы. Далее срезы переносят в дистиллированную воду. Целлоидиновые срезы переносят из одного бюкса в другой с помощью препаровальной иглы с загнутым концом. Депарафинированные и замороженные срезы можно окрашивать на предметном стекле, наливая или сливая соответствующие растворы. Растворы красителей при этом можно сливать обратно для повторного использования.

Порядок окрашивания срезов гематоксилин - эозином следующий:

1) срезы переносят в дистиллированную воду;

2) окрашивают гематоксилином Эрлиха 2-5 мин;

3) промывают в дистиллированной воде;

4) затем промывают в водопроводной воде 3-5 мин;

5) осуществляют контроль под микроскопом;

6) дифференцируют 1% раствором хлористоводородной кислоты в 70° спирте 1--2 с;

7) быстро переносят срезы в водопроводную воду на 30 мин при частой смене; в водопроводной воде вишневая окраска ядер сменяется синей;

8) осуществляют контроль под микроскопом; если хроматин и ядрышко видны недостаточно четко, то дифференцировку следует повторить (срезы можно смотреть под большим увеличением, накрыв их покровным стеклом);

9) промывают в дистиллированной воде;

10) 1% водный раствор эозина 0,5-1 мин;

11) промывают в дистиллированной воде (и дифференцируют, так как вода смывает эозин); время промывки контролируют по цвету среза;

12) проводят обезвоживание, осветляют в ксилоле, заключают в бальзам. В спиртах эозин также отмывается, так что проводить срезы по спиртам следует быстро. Время окрашивания в гематоксилине нужно установить на первых 2 -3 срезах и затем все срезы данного блока окрашивать одинаково.

Дифференцировку в растворе хлористоводородной кислоты в спирте можно не проводить, но в этом случае структуры ядра будут менее четкими и в цитоплазме может быть синеватый фон.

Раны - повреждения тканей в результате механического воздействия. Сопровождаются нарушением целостности кожи либо слизистой оболочки. Различаются по механизму возникновения, способу нанесения, глубине, анатомической локализации и другим параметрам. Могут проникать или не проникать в естественные замкнутые полости тела (брюшную, грудную, полости суставов). Основными симптомами являются зияние, боль и кровотечение. Диагноз выставляется на основании клинической картины, в ряде случаев требуются дополнительные исследования: рентгенография, лапароскопия и т. д. Лечение хирургическое.

Выделяют четыре зоны раны: собственно дефект, зону ушиба (контузии), зону сотрясения (коммоции) и зону с нарушением физиологических механизмов. Дефект может иметь вид поверхности (например, при скальпированных или обширных поверхностных ушибленных повреждениях), полости (например, при резаных и глубоких ушибленных ранах) или глубокого канала (при колотых, сквозных и некоторых слепых огнестрельных повреждениях). Стенки дефекта образованы некротическими тканями, между стенками находятся сгустки крови, кусочки тканей, инородные тела, а в случае открытых переломов - еще и костные фрагменты.

В зоне контузии образуются значительные кровоизлияния, возможны переломы костей и разрывы внутренних органов. В зоне сотрясения наблюдаются очаговые кровоизлияния и расстройства кровообращения - спазм мелких сосудов, сменяющийся их устойчивым расширением. В зоне нарушенных физиологических механизмов выявляются проходящие функциональные нарушения, микроскопические кровоизлияния и очаги некроза.

Заживление происходит поэтапно, через расплавление поврежденных тканей, сопровождающееся местным отеком и выделением жидкости, за которым следует воспаление, особенно выраженное при нагноении. Затем рана полностью очищается от некротических тканей, в области дефекта формируются грануляции. Потом грануляции закрываются слоем свежего эпителия, и постепенно наступает полное заживление. В зависимости от особенностей и размера раны, степени ее загрязнения и общего состояния организма возможно заживление первичным натяжением, заживление под струпом либо заживление через нагноение (вторичным натяжением).

Симптомы и диагностика.

Возникает боль, кровотечение, ограничение или нарушение функции. Выраженность всех перечисленных симптомов может значительно варьировать - от небольших изменений при поверхностных ранах до яркой симптоматики при повреждении внутренних органов, костей, сухожилий, суставов, мышц, нервов и крупных сосудов. При небольших ранах кровотечение капиллярное или смешанное, значительной кровопотери не возникает. При повреждении внутренних органов и крупных сосудов может наблюдаться крупная кровопотеря, развивается травматический шок.

Кровь может выделяться наружу (наружное кровотечение) и в естественную полость тела (внутреннее кровотечение). В последнем случае образуется скопление крови со сдавлением соответствующего органа и нарушением его функции. При гемотораксе наблюдается сдавление легкого, при гемоперикарде - сердца, при гемартрозе - всех структур сустава и т. д. Мелкие поверхностные повреждения, как правило, не сопровождаются общей симптоматикой. При тяжелых травмах наблюдаются снижение АД, тахикардия, бледность кожи и слизистых, тошнота, головокружение, слабость и учащение дыхания.

При небольших поверхностных ранах, не сопровождающихся общими симптомами, диагноз выставляется на основании клинической картины. При обширных и глубоких ранах с нарушением общего состояния необходимы дополнительные исследования, перечень которых определяется с учетом локализации повреждения. При повреждениях в области груди назначают рентгенографию грудной клетки, при повреждениях области живота - рентгенографию брюшной полости, УЗИ или лапароскопию и т. д.

Литература

резистентность ветеринарный тромбоцитарный плазма

1. Н.В. Корнилов Травматология и ортопедия: учебник 3-е изд., доп. и перераб. - 2011. - 592с.

2. Афиногенов Г.Е., Елинов Н.П., Антисептики в хирургии, Ленинград, Медицина, 1987 - 141с.

3. Бабаева А.Г., Регенерация и система иммуногенеза, Москва, Медицина, 1985 - 255с.

4. Безин А.Н., Клинико-иммунологический статус и иммунокоррекция при травмах у животных, Троицк, издательство УГАВМ, 2000 - 300с.

5. Борисевич В.Б., Борисевич Б.В., Смирнов А.И., Раневой процесс и закономерности заживления ран, Ветеринария № 5, 1999 - 48-52с.

6. Вахидов В.В., Хирургия в «Кононо» Абу Ибн Сины, Ташкент, 1980 - 13с.

7. Виденин В.Н., Послеоперационные гнойно-воспалительные осложнения у животных, Санкт-Питербург, Лань, 2000 - 160с.

8. Видение В.Н., Профилактика хирургической инфекции у животных, асептика и антисептика в ветеринарной хирургии, Санкт-Петербург, 2001 - 67с.

Размещено на Allbest.ru