Размещено на http://www.allbest.ru/

ГОСУДАРСТВЕННОЕ АВТОНОМНОЕ ПРОФЕССИОНАЛЬНОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ РЕСПУБЛИКИ БАШКОРТОСТАН

«УФИМСКИЙ МЕДИЦИНСКИЙ КОЛЛЕДЖ»

Допускается к защите»

Зам. директора по УР

Е. А. Воронинская

____________________

(подпись)

«___»________20__г.

ВЫПУСКНАЯ КВАЛИФИКАЦИОННАЯ РАБОТА

(ДИПЛОМНАЯ РАБОТА)

ТЕМА: ДИАГНОСТИЧЕСКАЯ ЦЕННОСТЬ ИЗОСЕРОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ

Выполнила: Гильманова Гузель Фануровна

студентка группы 41л

специальности 31.02.03 Лабораторная диагностика базовой подготовки

Руководитель дипломной работы:

Разбежкина Наталья Эдуардовна

Уфа

2017 г.

Содержание

Перечень условных обозначений и символов

Введение

Глава 1. Группы крови

1.1 Понятие о группах крови

1.2 Понятие о подгруппах крови

1.3 История развития учения о группах крови

1.4 Методика определения групп крови

1.4.1 Определение групп крови по стандартным изогемагглютинирующим сывороткам

1.4.2 Определение группы крови перекрестным способом

1.4.3 Определение групп крови моноклональными антителами

1.4.4 Метод агглютинации в геле определения А/г эритроцитов и антиэритроцитарных А/т

1.4.5 Определение группы крови АВ0 двойной реакцией (по стандартным сывороткам и стандартным эритроцитам)

1.5 Резус-фактор

1.5.1 Понятие о резус-факторе

1.5.2 Методики определения резус-фактора и резус-антител

1.6 Подготовка больного к переливанию

1.7 Ошибки при определении группы крови

Глава 2. Материалы и методы исследования

2.1 Ценность определения группы крови

Глава 3 Собственные результаты исследований и их обсуждение

Заключение

Список использованной литературы

Приложение

ПЕРЕЧЕНЬ УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ И СИМВОЛОВ

1.Мл - миллилитр

2.% -проценты

3. .°С -градус

4.Система АВО -

5. ФСВОК - Федеральная система внешней оценки качества

6. (+)- положительный резус-фактор

7. (- )отрицательный резус-фактор

8.О - первая группа крови обозначается символом

9.А - вторая группа крови обозначается буквой.

10.В - третья разновидность групп крови обозначается буквой.

11.АВО -четвертая группа крови

12.0 (I) Rh+ первая группа крови с положительным резус фактором,

13.0 (I) - первая;

A (II) - вторая;

B (III)- третья;

AB (IV) - четвертая;

14. - Rh+ или Rh-. - резус -факторы

15. ГБУЗ «РСПК» РБ - Государственном бюджетном учреждении здравоохранения «Республиканская станция переливания крови» Республики Башкортостан

16. АИСТ» - единая автоматическая донорская программа

17.КДО ГБУЗ «РСПК» РБ- клинико-диагностический отдел в Государственном бюджетном учреждении здравоохранения

«Республиканская станция переливания крови» Республики Башкортостан

18.ПТО инфекционного ииммуногематологического генеза - посттрансфузионные осложнения инфекционного и иммуногематологического генеза

19.Аг - агглютиноген

20. Ат - агглютин

21.МКА моноклональные антитела

22. НАГТ - непрямой антиглобулиновый тест

23. ИГИ - иммуногематологические исследования

24. ПАГТ - прямой антиглобулиновый тест

25.ИС - Индекс сенсибилизации

26.ОР - отношение рисков

27. ДИ -доверительный интервал

28.ЛПУ РБ -лечебно -профилактические учреждения Республики Башкортостан

29 ID-карты Идентификационные карты

30. ФГУ «РосНИИГТ ФМБА России» -Федеральное государственное бюджетное учреждение

«Российский научно-исследовательский институт гематологии и трансфузиологии Федерального медико-биологического агенства

ВВЕДЕНИЕ

Обеспечение безопасности переливания компонентов крови в Республике Башкортостан является актуальной проблемой здравоохранения. В связи с этим в Государственном бюджетном учреждении здравоохранения Башкортостан (ГБУЗ «РСПК» РБ) вопросу иммуногематологической безопасности донорской крови уделяется большое внимание: с 2005 года проводится активная работа по модернизации структуры и работы службы крови в Республике Башкортостан (РБ), включая иммуногематологические исследования. В результате проведения последовательной поэтапной работы по централизации службы крови в республике реорганизовано 33 отделения переливания крови, количество учреждений службы крови уменьшилось в 7,8 раза по сравнению с 2005 годом, количество штатных должностей сократилось на 47,7%, число реально работающих лиц возросло на 15,7%. В 2009 году в РСПК была подключена единая автоматическая донорская программа «Фламинго», с 2010 года - единая автоматическая донорская программа «АИСТ», введена в эксплуатацию автоматическая раскапывающая система для гелевых карт «Swing Twing sampler», в 2014 году была произведена централизация иммуногематологических исследований, приобретен и введен в эксплуатацию автоматический иммуногематологический анализатор «Immucor Galileo Neo» (Германия) для микропланшетной методики определения антигенов эритроцитов и антиэритроцитарных антител. В результате централизации заготовки и управления запасами компонентов крови списание донорских эритроцитов в республике сократилось на 856,3%.

В структуре РСПК иммуногематологические исследования традиционно проводились в иммунологическом отделе, который, согласно Приказу Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации (РФ) от 28 марта 2012 г. № 278н, с 2012 года преобразован в «группу иммуногематологических исследований» клинической лаборатории клинико-диагностического отдела (КДО) ГБУЗ «РСПК» [4]. Современные требования к лабораторным исследованиям в службе крови диктуют необходимость постоянного совершенствования проводимых иммуногематологических исследований.

Цель исследования: проанализировать деятельность группы иммуногематологических исследований в клинической лаборатории клинико-диагностического отдела ГБУЗ «РСПК» РБ для оценки эффективности изосерологических исследований службы крови региона.

Задачи исследования

1.Изучить историю развития учения о группах крови

2.Провести статистическую выборку данных о типировании доноров и реципиентов ..

3..Изучить частоту выявления маркеров гемотрансмиссивных инфекций у потенциальных доноров и пациентов, получивших гемотрансфузии компонентов крови.

4.Оценить вероятность риска ПТО инфекционного и иммуногематологического генеза.

5.Определить меры дальнейшего повышения безопасности гемотрансфузионной терапии.

Научная новизна

Применение современного гелевого метода иммуногематологической диагностики позволило оптимизировать систему комплексного лабораторного обследования доноров и реципиентов, направленную на профилактику ПТО, обусловленных несовместимостью по А/г эритроцитов.

Практическая значимость

Данные о частоте встречаемости групп крови и эритроцитарных А/г у пациентов необходимы при планировании и заготовки компонентов крови для гемотрансфузии эритроцитсодержащих сред.

Регистрация типированных доноров помогает обеспечить подбор эритроцитарной массы реципиенту с учетом фенотипа эритроцитов.

Разработан алгоритм подбора донорской эритроцитарной массы сенсибилизированным и несенсибилизированным реципиентам с отягощенным трансфузионным и/или гематологическим анамнезом, которым необходимы многократные гемотрансфузии. После определения группы крови по системам ABO, Rh (D), Келл (К1), рекомендовано дополнительно типирование на наличие А/г системы Rhesus (С, Cw, с, Е, е) и на наличие тепловых и холодовых А/т в сыворотке с идентификацией их специфичности и классов иммуноглобулинов (IgG и IgM). Подбор пары донор-реципиент рекомендовано проводить методом непрямого антиглобулинового теста (НАГТ) и солевого теста при 37°С с учетом идентичности по всем известным А/г эритроцитов, при выявлении холодовых или тепловых А/т - методом НАГТ и солевого теста при 4-8°С, 20-22°С и 37°С. Данный алгоритм подбора донорской эритроцитарной массы пациентам с отягощенным гемотрансфузионным анамнезом позволяет максимально обеспечить безопасность гемотрансфузионной терапии.

Внедрение в практику.

По результатам исследований будут разработаны методические рекомендации по современному комплексному лабораторному обследованию доноров и реципиентов для обеспечения иммуногематологической и инфекционной безопасности гемокомпонентной терапии.

Результаты работы применяются при обследовании доноров и реципиентов отделения переливания крови и хирургических отделений при аллогенной трансфузии эритроцитарной массы в ежедневной работе

ГЛАВА 1. ГРУППЫ КРОВИ

1.1 ПОНЯТИЕ О ГРУППАХ КРОВИ

кровь переливание группа лабораторный

Группы крови - иммуногенетические признаки крови, позволяющие объединять людей в определенные группы по сходству антигенов (изоантигенов) их крови, которые содержатся в эритроцитах, лейкоцитах, тромбоцитах и белках плазмы крови. Группы крови имеют первостепенное значение в практике переливания крови, а также трансплантации органов. К настоящему времени в крови человека обнаружено более 300 различных антигенов, образующих несколько десятков антигенных систем. Принадлежность человека к той или иной группе крови является его индивидуальной биологической особенностью, которая начинает формироваться уже в раннем периоде эмбрионального развития и не меняется в течение всей жизни. Строма каждого эритроцита вмещает в себя большое число антигенов, характеризующих специфические признаки организма людей. Все антигены объединены в группы, получившие различные названия: АВО, резус и другие.

Наука о группах крови возникла в конце XIX века как один из разделов общей иммунологии.

Термин «группа крови» характеризует системы эритроцитарных антигенов, контролируемых определенными локусами, содержащими различное число аллельных генов, таких, например, как A, B и 0 в системе AB0. Термин «тип крови» отражает её антигенный фенотип (полный антигенный «портрет», или антигенный профиль) -- совокупность всех групповых антигенных характеристик крови, серологическое выражение всего комплекса наследуемых генов группы крови(смотри рисунок 1).

Группу крови можно назвать идентификатором личности, так как она не изменяется, как и отпечатки пальцев. Самым главным является то, что различие между всеми людьми нашей планеты состоит не в этническом происхождении, а в составе крови.

Две важнейшие классификации группы крови человека -- это система AB0 и резус-система.

Известно также 46 классов других антигенов, из которых большинство встречается гораздо реже, чем AB0 и резус-фактор.

С открытием групп крови стало понятно, почему в одних случаях трансфузии крови проходят успешно, а в других заканчиваются трагически для больного. К. Ландштейнер впервые обнаружил, что сыворотка, или плазма, одних людей способна агглютинировать (склеивать) эритроциты других людей. Это явление получило наименование изогемагглютинации. В основе изогемагглютинации лежит наличие в эритроцитах Аг, названных агглютиногенами и обозначаемых буквами А и В, а в плазме - природных Ат, или агглютининов, именуемых б и в. Агглютинация эритроцитов наблюдается лишь в том случае, если встречаются одноименные агглютиноген и агглютин (Аг и Ат): А и б, В и в. Почему же это происходит?

Установлено, что агглютинины, являясь природными Ат, имеют два центра связывания, а потому одна молекула агглютинина способна образовать мостик между двумя эритроцитами. Но каждый из эритроцитов может при участии агглютининов связываться с соседним, благодаря чему возникает конгломерат (агглютинат) эритроцитов.

Приведенные факты говорят о том, что в крови одного и того же человека не может быть одноименных агглютиногенов и агглютинов, ибо в противном случае у здоровых людей происходило бы массовое склеивание эритроцитов, что несовместимо с жизнью. Отсюда ясно, что существует только 4 комбинации, при которых не встречаются одноименные агглютиногены и агглютинины, или 4 группы крови: I - бв, II - Ав, III - Вб, IV - АВ.

Кроме агглютининов в плазме или сыворотке крови содержатся соединения, получившие наименование гемолизины. Их также 2 вида, и они обозначаются, как и агглютинины, буквами б и в. При встрече одноименных агглютиногена и гемолизина наступает гемолиз эритроцитов. Действие гемолизинов проявляется при температуре 37-40оС. Вот почему при переливании несовместимой крови у человека уже через 30-40 сек. наступает гемолиз эритроцитов. При комнатной температуре, если встречаются одноименные агглютиногены и агглютины, происходит агглютинация, а не гемолиз.

Наконец, в плазме людей II, III, IV групп крови имеются антиагглютинины - агглютиногены, покинувшие эритроцит. Обозначаются они, как и агглютиногены, буквами А и В (табл.1).

Как видно из приводимой таблицы, I группа крови не имеет агглютиногенов, а потому по международной классификации обозначается как группа 0, II - носит наименование А, III - В, IV - АВ.

Для решения вопроса о совместимости групп крови до недавнего времени пользовались следующим правилом: среда реципиента (человека, которому переливают кровь) должна быть пригодна для жизни эритроцитов донора (человека, который отдает кровь). Но такой средой является плазма. Следовательно, у реципиента должны учитываться агглютинины и гемолизины, находящиеся в плазме или сыворотке, а у донора агглютиногены, содержащиеся в эритроцитах. Для решения вопроса о совместимости групп крови смешивали эритроциты и сыворотку (плазму), полученные от людей с различными групповыми признаками (см.табл.2)

Примечание: знаком «+» обозначается наличие агглютинации (группы несовместимости), знаком «-« - ее отсутствие (группы совместимы).

Из таблицы видно, что агглютинация происходит в случае смешения сыворотки I группы с эритроцитами II, III и IV групп, сыворотки II группы с эритроцитами III и IV групп, сыворотки III группы с эритроцитами II и IV групп.

Представленная таблица также служит для определения групп крови. Если агглютинация не происходит со всеми сыворотками, то группа крови I. Если агглютинация наблюдается с сывороткой I и III групп крови, то это II группа крови. Наличие агглютинации с сыворотками I и II групп указывает на III группу крови. И, наконец, если агглютинация происходит со всеми сыворотками, за исключением IV группы, то группа крови IV.

Принцип определения группы крови состоит в смешивании испытуемой цельной крови или взвеси эритроцитов с соответствующей антисывороткой. Реакционную смесь выдерживают некоторое время при определенной температуре (37оС, комнатной или в холодильнике), причем температурный режим взаимодействия эритроцитов и сыворотки выбирают в соответствии с природой антител. Определяют также титр антител, учитывая, что сыворотки с низким титром антител обычно реагируют на холод гораздо лучше, чем в тепле. Для иммунных антител температурный диапазон их оптимального реагирования с антигенами эритроцитов более широк. По истечении установленного времени смесь проверяют на наличие агглютинации и при появлении последней реакцию считают положительной.

Таким образом, принятая международная классификация обозначает каждую группу крови по наличию или отсутствию в ней двух агглютининов сывороток, которые названы альфа (а) и бета (b) и двух агглютиногенов эритроцитов, названных А и В.

Первая группа крови определяется тем, что в ее эритроцитах отсутствуют агглютиногены, а в сыворотке имеются оба агглютинина - альфа и бета. Таким образом, полная формула крови 1 группы: I (0ab).

В крови II группы эритроциты имеют только один агглютиноген - А, а сыворотка содержит один агглютинин - бета. Таким образом, полная формула крови II группы: II(Ab).

III группа крови характеризуется тем, что эритроциты имеют только один агглютиноген - В, а ее сыворотка содержит только один агглютинин - альфа. Таким образом, полная формула крови III группы: III (Ва).

IV группа крови отличается тем, что ее эритроциты имеют оба агглютиногена - А и В, а ее сыворотка вообще не содержит агглютининов. Таким образом, полная формула крови IV группы: (АВо).

В настоящее время принято обозначать группы крови цифрой и по содержанию агглютиногенов эритроцитов: I(0); II(А); III(В); IV(AB).

В практической работе по переливанию крови пользуются делением людей на четыре группы. Распределение групп крови среди населения разных стран имеет некоторые различия, но в среднем считается, что людей I(0) группы - 41 %, II(А) - 38 %, III(B) - 18 % и IV(AB) - 3 %.

1.2 ПОНЯТИЕ О ПОДГРУППАХ КРОВИ

Групповой антиген А не является однородным и может быть подразделен на несколько подгрупп - А1, А2, А3, А4, А5, А, А0 и др. Чаще встречаются А1, А2. Групповой антиген В характеризуется большей однородностью, но описаны редкие варианты и этого антигена - В2, В3, В, В, Вх и др. Несмотря на то, что они встречаются редко, при определении группы крови приходится с ними считаться только с помощью высокоактивных стандартных сывороток (в том числе и цоликлонов) можно выявить и эти слабо выраженные агглютиногены А и В.

Эритроциты группы 0(1) характеризуются отсутствием в них агглютиногенов А и В и наличием особых специфических Н и О. Они содержатся в эритроцитах не только группы 0(1), но и подгруппы А2 и менее всего - AI и AIB. Существует вариант группы "Бомбей", эритроциты которой не содержат антигены системы АВО, вместе с тем, в сыворотке имеются антитела анти-А, анти-В и анти-Н. Лица с группой крови 0(1) считались универсальными донорами, т.е. их кровь могла быть перелита людям всех групп без исключения. Однако это положение не является абсолютным, так как есть люди с группой крови 0(1), переливание крови которых может привести к летальному исходу вследствие наличия в крови иммунных гемолизинов и гемагглютининов с высоким титром (1:200 и более). Таким образом, среди универсальных доноров могут быть и опасные доноры, вот почему кровь этих лиц может быть перелита только пациентам с одноименной 0(1) группой крови.

В эритроцитах, лейкоцитах, тромбоцитах, а также в плазме крови людей имеется много десятков изоантигенов. По-видимому, истинное число антигенов на поверхности мембран эритроцитов человека значительно превышает число открытых изоантигенов. Наличие или отсутствие в эритроцитах того или иного антигена, а также различные сочетания их создают большое разнообразие антигенных структур. Наряду с широко распространенными антигенами встречаются и крайне редкие (у 1 из 1000 и у 1 из 3000 обследованных людей).

1.3 ИСТОРИЯ РАЗВИТИЯ УЧЕНИЯ О ГРУППАХ КРОВИ

Учение о группах крови, как и множество других открытый в физиологии и медицине, возникло из потребностей клинической медицины. Несмотря на то, что кровь пытались переливать еще в глубокой древности, этот метод стал широко и с успехом применяться в клинической медицине только в ХХ веке. А до этого врачи больше увлекались кровопусканиями и, как это ни покажется странным, клизмами, которым приписывалось чудодейственное влияние. История открытия групп крови поучительна и необходимо остановиться на ней несколько подробнее.

История отбора группы крови уходит в глубокую древность и ее можно разделить на 4 периода. Первый период от древних времен до открытия В. Гарвеем закона кровообращения (1628 г.), второй, эмпирический, до открытия К. Ландштейнером закона изогемагтлютинации (1901 г.), третий связан с решением двух с открытием закона изогемагглютинации и применением стабилизатора крови (1901-- 1919 гг), четвертый период следует назвать современным, или научным, когда происходит научное осмысление взглядов на кровь и ее части, а также осуществляется поиск полноценных заменителей составных частей крови. Этот период продолжается по настоящее время.

Первый период истории трансфузиологии. В древности были попытки использовать кровь для лечения различных заболеваний, так как по существующему в то время представлению в крови человека была заключена душа. Применяемая для лечения кровь употреблялась внутрь. Гиппократ (460--370 г. до н. э.) предлагал лечить этим методом душевные болезни. У историков древности -- Плиния (Naturae Historiae), Цельсия (De re medica) имеются сообщения, что эпилептики и старики пили кровь умирающих гладиаторов для лечения и омоложения. Все это нашло отражение и в классических литературных произведениях. Одиссей у Гомера давал пить кровь теням подземного царства, чтобы вернуть им речь и сознание. В произведении Овидия «Метаморфозы» (I--II век н. э.) Медея предлагает дочерям Пелея выпустить кровь отца-старца и наполнить его сосуды кровью юношей. От итальянских историков Виллари (Villari), Сисмонди (Sisrnondi) до нас дошел необычный факт о «переливании» крови, произведенном папе Иннокентию VIII для омоложения (1492 г.). Врач взял кровь у трех мальчиков десяти лет, чтобы приготовить лекарство для папы. Этот эксперимент закончился печально: дети погибли от анемии, папа -- от старости.

Второй период истории трансфузиологии. Новый этап в истории переливания крови начинается открытием в 1628 г. Вильямом Гарвеем (W. Harvey, 1578--1657) двух кругов кровообращения. В 1654 г. Фолли из местечка Поппи в Италии отправил письмо правителю Тосканы, в котором предлагал производить переливание крови от людей с помощью серебряных или золотых канюль. Письмо осталось без ответа. Только в 1935 г. члены I Международного конгресса по переливанию крови отдали должное этой идее и прикрепили мемориальную доску на доме, где жил Фолли. Известны и многие другие, менее достоверные, факты. По литературным данным, первое переливание крови животным осуществлено англичанином Ричардом Ловером (R. Lower, 1631--1691), который в 1665 г. произвел полное замещение крови одной собаки кровью другой, а позднее от собаки к человеку. Однако ныне доказано, что подобные эксперименты проводил итальянский врач Джероламо Кардано (J. Cardano, 1501-- 1576). На основании результатов эксперимента он считал, что переливание крови может быть осуществлено при остром кровотечении. Этот и последующие опыты дали толчок к целой серии экспериментов по замещению крови. Первая трансфузия крови человеку (1667 г.) связана с именами Ж.-Б. Дени (J.-B. Denis), впоследствии профессора медицины, и хирурга Эммерец (Emmerez), которые произвели переливание крови от животного (ягненка) человеку. В дальнейшем Ж.-Б. Дени произвел еще несколько подобных переливаний. Впервые применения внутривенные вливания Кристофер Рэн (С. Wren, 1632-1723), член Лондонского Королевского общества (первой в мире академии наук), используя птичье перо (вместо инъекционной иглы) и пузыри рыб и животных (вместо шприца). (Цит. по А. П. Зильберу, 1999). Многочисленные эксперименты различного характера принесли наряду с успешными результатами целый ряд неудач. Это привело к тому, что палата депутатов Франции приняла в 1670 г. указ о запрещении экспериментов по переливанию крови. В 1675 г. Ватикан издал запретительный эдикт на переливания крови. Запрет на длительное время затормозил изучение данного вопроса.

Третий период истории переливания крови связан с решением двух с открытием закона изогемагглютинации и применением стабилизатора крови (1901-- 1919 гг)

В 1819 г. англичанин Джеймс Бланделл (J. Blundell, 1790--1877) впервые в истории произвел переливание крови от человека человеку. И, несмотря на то, что это переливание имело трагичный исход, пациент погиб, но Бланделл продолжал опыты вновь и вновь, несмотря на множество неудач. Особенность техники, примененной Д. Бланделлом, заключалась в том, что в специально сконструированном аппарате кровь подогревалась и тем замедлялась ее свертываемость. Кроме того, он предлагал вводить кровь медленно, наблюдая за состоянием больного. При появлении какой-либо реакции рекомендовал переливание крови от этого донора прекратить и взять кровь от другого человека.

Четвертый период истории трансфузиологии.

Новая эра в учении о переливании крови связано с именем ученого австрийского происхождения Карла Ландштейнера. Родился 14 июня 1868 года в Вене в семье юриста и журналиста Леопольда Ландштейнера. После окончания народной школы и государственной гимназии работал в медицинской клинике Венского университета, в университетской хирургической клинике, в институте гигиены и, наконец, в институте патологии.

Первая выдающаяся основополагающая работа Карла Ландштейнера «Об агглютинабельной способности нормальной крови человека», в которой впервые описан принцип тестирования групп крови, позднее объединенных в изосерологическую систему АВО, была опубликована в 1901 году. К. Ландштейнер объявил об открытии им трех групп крови человека. Спустя год, он же уведомляет мир о наличии у человека относительно редко встречающейся IV группы крови. За эти открытия Карл Ландштейнер удостоен Нобелевской премии в 1930 году. За выдающиеся заслуги в области учения о группах крови этот ученый был удостоен звания почетного доктора наук Венского, Брюссельского, Кембриджского, Чикагского, Гарвардского университетов.

Практически в то же время (1907 год), не зная об открытии К. Ландштейнера, чешский врач Ян Янский сообщает, что им выявлены групповые признаки крови, на основе которых можно решать вопрос о переливании крови от человека к человеку.

Наконец, в 1909 году американец Мосс сообщает об открытии им 4-х групп крови. Новая эра в учении о переливании крови вступила в свои права.Вслед за открытием основных групп крови последовало обнаружение антигенов в эритроцитах, играющих немаловажную роль в переливании крови. Так, в 1940 году К.Ландштейнер и его сотрудник А. Винер устанавливают в эритроцитах наличие нового агглютиногена, получившего наименование резус-фактор (Rh+). А в 1941 году К. Ландштейнер и другой его сотрудник

Ф. Левин сообщают о наличии в эритроцитах системы антигенов, названных ими М, N и Р.

В 1926 году в Москве А.А.Богдановым по решению Наркомздрава был создан первый в мире Институт переливания крови. А вскоре аналогичные институты открылись в Ленинграде, Минске и многих столицах союзных республик.

В России немало сделали для развития трансфузиологии А.А. Багдасаров, А.Н. Филатов, А.Е. Киселев, О.К. Гаврилов, А.И. Воробьев и многие другие.

Пятый период следует назвать современным, или научным, когда происходит научное осмысление взглядов на кровь и ее части, а также осуществляется поиск полноценных заменителей составных частей крови. Этот период продолжается по настоящее время. Важнейшим практическим продуктом данного периода следует считать повсеместный и полный отказ от переливания цельной донорской крови и полный переход на компонентную гемотерапию, которая свела до минимума все негативные моменты и риски этой ответственной операции.

1.4 МЕТОДИКА ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГРУПП КРОВИ

Групповая принадлежность крови по системе АВО определяется с помощью реакции агглютинации. В настоящее время используют четыре способа определения групп крови по системе АВО:

- по стандартным изогемагглютинирующим сывороткам,

- по стандартным изогемагглютинирующим сывороткам и стандартным эритроцитам (перекрестный способ),

- с помощью моноклональных антител (цоликлонов анти-А и анти-В)

- гелевые технологии.

При этом существует следующая общепринятая тактика при определении группы крови.

При плановом исследовании врач стационара определяет группу крови по стандартным изогемагглютинирующим сывороткам или с помощью цоликлонов, после чего посылает кровь в серологическую лабораторию для проверки группы перекрестным методом.

Группа крови считается определенной только тогда, когда лаборатория подтвердит данные, полученные врачом стационара. Если результаты исследований расходятся между собой, оба исследования нужно При необходимости определения группы крови в экстренном порядке (при кровотечении необходимо срочное переливание крови), врач стационара определяет группу сам (в лаборатории перепроверка производится, но постфактум). В таких случаях также используются реакции с изогемагглютинирующими сыворотками (или цоликлонами), но при возможности целесообразно применение перекрестного метода.

1.4.1 ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГРУПП КРОВИ ПО СТАНДАРТНЫМ ИЗОГЕМАГГЛЮТИНИРУЮЩИМ СЫВОРОТКАМ.

Этот способ в настоящее время наиболее распространен в клинической и лабораторной практике.

Принцип метода: определение в испытуемой крови групповых антигенов А и В с помощью стандартных изогемагглютинирующих сывороток. Для этих целей используется реакция агглютинации. Постановку реакции проводят в помещении с хорошим освещением при температуре 15-25°С. Алгоритм определения в приложении №1.

Интерпретация результатов.

Реакция агглютинации может быть положительной или отрицательной.

При положительной реакции обычно в течение первых 10-30 секунд в смеси появляются видимые невооруженным взглядом мелкие красные зернышки (агглютинаты), состоящие из склеенных эритроцитов. Мелкие зернышки постепенно сливаются в более крупные зерна, а иногда в хлопья неправильной формы.

При этом сыворотка частично или полностью обесцвечивается. При отрицательной реакции капля остается равномерно окрашенной в красный цвет и в ней не обнаруживается никаких зернышек (агглютинатов).

Принадлежность исследуемой крови к соответствующей группе определяют по наличию или отсутствию агглютинации при реакции с соответствующими сыворотками.

При этом следует отметить, что, если сыворотки всех трех групп дали положительную реакцию, это указывает на то, что испытуемая кровь содержит оба агглютиногена - А и В и принадлежит к группе AB(IV).

Однако в таких случаях для исключения неспецифической реакции агглютинации необходимо провести дополнительное контрольное исследование испытуемой крови со стандартной изогемагглютинирующей сывороткой группы AB(IV), не содержащей агглютининов.

Лишь отсутствие агглютинации в этой капле при наличии агглютинации в каплях, содержащих стандартные сыворотки групп 0(1), А(И) и В(Ш), позволяет считать реакцию специфической и отнести исследуемую кровь к группе АВ0 (IV).

Следует отметить, что при наличии в исследуемой крови слабого подтипа антигена А2 реакция агглютинации с гемагглютинирующими сыворотками групп 0(1) и В(Ш) начинается позже (на 3-4 минуте).

Для точного определения подтипа антигена А необходимо проведение дополнительной реакции с так называемым анти-А, реактивом, изготовляемым из семян растения Dolichos bitforis, содержащим только анти-А, антитела (проводится в серологической лаборатории).

1.4.2 ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГРУППЫ КРОВИ ПЕРЕКРЕСТНЫМ СПОСОБОМ

Способ наиболее часто используется в серологических лабораториях.

Принцип метода: определение наличия или отсутствия в исследуемой крови групповых антигенов А и В с помощью стандартных изогемагглютинирующих сывороток, а также групповых антител б и в с помощью стандартных эритроцитов. Это дает полную серологическую характеристику крови.

Реакция со стандартными эритроцитами проводится следующим образом. Алгоритм определения в приложении.

Интерпретация результатов.

При трактовке результатов оценивают данные, полученные при обеих реакциях со стандартными изогемагглютинирующими сыворотками и стандартными эритроцитами.

Особенностью трактовки результатов реакции со стандартными эритроцитами является то, что эритроциты группы 0(1) являются контрольными (в них нет антигенов, что делает принципиально невозможной специфическую реакцию агглютинации с любой сывороткой).

Результат перекрестного способа считается достоверным только если при оценке результатов реакции со стандартными изогемагглютинирующими сыворотками и со стандартными эритроцитами ответы о группе исследуемой крови совпадают. Если этого не происходит, обе реакции следует переделать.

1.4.3 ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГРУПП КРОВИ МОНОКЛОНАЛЬНЫМИ АНТИТЕЛАМИ

Для определения группы крови используются моноклональные антитела, для получения которых применяется гибридомная биотехнология.

Гибридома - это клеточный гибрид, образованный путем слияния клетки опухоли костного мозга (миеломы) с иммунным лимфоцитом, синтезирующим специфические моноклональные антитела. Гибридома приобретает свойства обоих "родителей": способность к неограниченному росту, характерную для опухолевой клетки, и возможность синтезировать антитела, присущую иммунному лимфоциту.

Разработаны стандартные реагенты - моноклональные антитела (МКА): цоликлоны анти-А и анти-В, которые применяют для определения агглютиногенов эритроцитов. Цоликлоны представляют собой лиофилизированный порошок красного (анти-А) или синего (анти-В) цвета, который разводят изотоническим раствором хлористого натрия непосредственно перед исследованием. Алгоритм определения в приложении №3.

Интерпретация результатов.

Методика определения группы крови с помощью цоликлонов позволяет отказаться от услуг доноров, кровь которых используют для приготовления стандартных изогемагглютинирующих сывороток.

Ошибки при определении групповой принадлежности крови.

Определение групповой принадлежности с помощью реакции агглютинации может сопровождаться ошибками, которые ведут к неверной трактовке результатов. Все ошибки можно разделить на три группы:

- низкое качество реагентов,

- технические ошибки,

- особенности исследуемой крови.

Стандартные изогемагглютинирующие сыворотки и стандартные эритроциты могут иметь низкие агглютинабельные свойства, что приводит к неверному толкованию результатов реакции. Во избежание подобных ошибок следует следить за сроком годности реагента, условиями хранениями, а также их внешним видом (прозрачность сыворотки, отсутствие пленок, хлопьев, запаха гниения и прочие).

1.4.4 МЕТОД АГГЛЮТИНАЦИИ В ГЕЛЕ ОПРЕДЕЛЕНИЯ А/Г ЭРИРОЦИТОВ И АНТИЭРИТРОЦИТАРНЫХ А/Т.

Гелевая технология в микропробирках была предложена Лариерре в 1989 г. Метод основан на агглютинации эритроцитов в агаровом геле «сефадекс», помещенном в микропробирки. Обычно система представляет собой пластиковые карты, содержащие микропробирки, заполненные гелем. ИГИ, основанные на реакции гемагглютинации, обычно проводятся в жидкофазных системах.

Одним из наиболее важным условием получения корректных данных реакции агглютинации является оценка результата. Слабая реакция может быть неверно интерпретирована, особенно неопытным персоналом. Ложные слабые или отрицательные результаты непрямого антиглобулинового теста могут иметь место за счет нейтрализации антиглобулинового реагента следами сыворотки вследствие недостаточного эффективного отмывания эритроцитов. Неадекватное перемешивание эритроцитов и элюция слабо фикцированных А/т и процесс отмывания могут стать причиной ошибок при проведении непрямого антиглобулинового теста. Методика агглютинации в геле была разработана с целью стандартизации реакций гемагглютинации и получения достоверных результатов. Гелевая технология предусматривает разделение эритроцитов при центрифугировании, при этом неагглютинированные эритроциты проходят через гель и оседают на дне пробирок (отрицательный результат), в то время агглютинированные эритроциты задерживаются на поверхности или в толще геля (положительный результат). Центрифугирование в геле может быть конечной фазой любых серологических исследований, основанных на реакции гемагглютинации, кроме методов, требующих диспергирования для оценки результата.

Тестирование на индивидуальную совместимость крови донора и реципиента по А/г эритроцитов не заменяет обязательное ИГИ (типирования А/г эритроцитов системы АВ0, резус, Келл, выявление антиэритроцитарных А/т, поиск и идентификацию аллоантиэритроциторных А/т), а лишь дополняет его.

Таким образом гелевый тест является простым, воспроизводимым, быстрым и очень чувствительным методом, позволяющим сразу выявить слабые варианты А/г эритроцитов. Тест оценивается только макроскопически. После короткого обучения персонала, необходимо для правильного выполнения теста, сводиться к минимуму затраты рабочего времени и ошибки, встречающиеся при использовании традиционных методик. Гелевый тест позволяет стандартизировать лабораторные методики, дать объективную оценку результатов реакции гемагглютинации. Стабильность результатов теста позволяет перепроверять полученные данные, что необходимо для контроля. Результаты теста могут быть фотокопированы для сохранения их в архиве или для обучающих целей в сложных для диагностики случаях. Для теста используется небольшое количество сыворотки или эритроцитов, что чрезвычайно важно для педиатрических клиник.

Использование гелевой системы позволяет снизить риск заражения персонала даже при работе с потенциально инфицированными образцами.

Гелевый тест может применяться для проведения проб на совместимость по А/г эритроцитов перед переливанием крови. Для этого используются НАГТ и одностадийный ферментный метод. Гелевый тест выполняется и оценивается по вышеприведенным правилам. Отсутствие этапов отмывания эритроцитов при выполнении НАГТ позволяет более эффективно использовать рабочее время, а также, благодаря стабильности результатов теста, контролировать все полученные результаты.

Принцип гелевого теста

Забуференный декстрановый гель Sephadex G 100 superfine, может быть как нейтральным, так и содержащим специфические антисыворотки или антиглобулиновый реагент на гелевом матриксе. На гель наносятся эритроциты или смесь эритроцитов и сыворотки. Клетки всегда вносятся перед сыворотками - в отличие от стандартных серологических методик - с тем, чтобы тестируемые сыворотки не контактировали с гелем, что особенно важно при проведении антиглобулинового теста. После инкубации следует центрифугирование в строго определенном режиме. Если условия центрифугирования не выполняются, могут иметь место ложноположительные результаты. Ложноотрицательные результаты также могут иметь место при нарушении условий центрифугирования. Для проведения тестов обычно используются три вида геля:

1. нейтральный, не содержащий специфических А/т (применяется для поиска и идентификации А/т солевым ферментным методами, холодовой стадии пробы на совместимость крови донора и реципиента);

2. специфический, содержащий А/т (моноклональные или поликлональные) к А/г эритроцитов крови человека (применяется для типирования А/г эритроцитов систем АВ0, резус, Келл и т.д.)

3. антиглобулиновый, содержащий А/т (полиспецифические и моноспецифические ) к иммуноглобулинам человека и компонентам системы комплемента (применяется для ПАГТ и НАГТ (реакции Кумбса) при поиске и идентификации ауто- и аллоиммунных А/т, пробе на совместимость крови донора и реципиента).

Характеристика идентификационных карт

Идентификационные карты (ID-карты) Диа-Мед представляют собой пластиковые карточки, в которые встроено по шесть микропробирок. В пяти пробирках содержится смесь геля и антисывороток. Каждая карточка имеет шестую контрольную пробирку, содержащую нейтральный гель без А/т (сtl). Маркировка пробирок в ID-карте осуществляется по выявляемым А/г, например: А-В-АВ-D-СDЕ-сtl или С-с-Е-е-К-ctl. ID карты для выявления А/т к А/г эритроцитов имеют некоторые отличия, например, карты "Coombs / Enzyme Test": в трех пробирках, расположенных слева, содержится гель, содержащий А/т к глобулинам человека (моноспецифические анти-IgD или полиспецифические - к иммуноглобулинам различных классов) - реакция Кумбса. В следующих трех пробирках содержится только нейтральный гель, предназначенный для выявления А/т к А/г эритроцитов в солевой среде.

Общие правила использования идентификационных карт

ID карты должны храниться в сухом, защищенном от света месте при температуре 18-25°С. Срок годности указан в паспортной части каждой карты и на упаковочных коробках.

Растворы для приготовления суспензии эритроцитов, а также стандартные сыворотки и стандартные ID-эритроциты, использующиеся в отдельных исследованиях, должны храниться в сухом, защищенном от света месте при температуре 2-8°С. Срок годности указан на этикетке каждого флакона и упаковочной коробке.

Во избежание получения ложных результатов исследований, запрещается использование любых реагентов и карт с истекшими сроками годности, а также высохших, содержащих пузырьки газа или при повреждении оболочки.

Заготовка крови осуществляется с применением современных флеботонических методик, а также пригодна артериальная, капиллярная и пуповинная (без отмывания) кровь. Для исследований пригодны как образцы цельной крови (взятые в чистую, сухую пробирку), так и образцы крови, взятые на консервантах и стабилизаторах.

1.4.5 ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГРУППЫ КРОВИ АВО ДВОЙНОЙ РЕАКЦИЕЙ (ПО СТАНДАРТНЫМ СЫВОРОТКАМ И СТАНДАРТНЫМ ЭРИТРОЦИТАМ)

Стандартные эритроциты представляют собой 10-20% взвесь свежих нативных эритроцитов (или отмытых от консерванта тест - клеток) группы 0(I), A(II) и B(III) в 0,9% растворе натрия хлорида или цитратно-солевом растворе. Нативные стандартные эритроциты могут быть использованы в течение 2-3 дней при условии хранения их в изотоническом солевом растворе при температуре 4°C. Консервированные стандартные эритроциты хранят при температуре 4°C в течение 2 мес. и отмывают от консервирующего раствора перед использованием.

Ампулы или флаконы со стандартными сыворотками и стандартными эритроцитами располагают в специальных штативах с соответствующей маркировкой. Для работы с типирующими реагентами используют сухие чистые пипетки, отдельные для каждого реагента. Для промывания стеклянных (пластмассовых) палочек и пипеток подготавливают стаканы с 0,9% раствором натрия хлорида.

Для определения группы берут 3-5 мл крови в пробирку без стабилизатора. Кровь должна отстояться в течение 1,5- 2 ч при температуре 15-25°C.

1.5 РЕЗУС-ФАКТОР. ОПРЕДЕЛЕНИЕ РЕЗУС - ПРИНАДЛЕЖНОСТИ

1.5.1 ПОНЯТИЕ О РЕЗУС - ФАКТОРЕ

В 1940 году К. Ландштейнер и А.Виннер иммунизировали кроликов и морских свинок эритроцитами крови обезьяны макаки резус (Macacus rhesus) и получили гетероимунные антитела, которые агглютинировали не только эритроциты крови этой обезьяны, но и эритроциты крови приблизительно 85 % белых жителей Нью-Йорка. Выявленный таким образом антиген был назван антигеном резус (Rh); эритроциты, содержащие этот фактор, были обозначены как резус-положительные (Rh+), а не содержащие его - как резус-отрицательные (Rh-). A.S.Wiener, H.R.Peters (1940) показали возможность выработки антител анти-Rh и в сыворотке крови человека.

После открытия в следующем году фактора резус почти все исследователи считали, что гетероиммунные антитела, полученные K.Landsteiner, A.S.Wiener на кроликах и морских свинках, имели ту же самую специфичность, что и антитела, обнаруженные P.Levine, E.R.Stetson в сыворотке крови женщины, родившей мертвого ребенка, т.е. они также могут обусловливать посттрансфузионные осложнения и гемолитическую болезнь новорожденных. Последующими работами было показано, что гетероиммунные антитела, полученные K.Landsteiner, A.S.Wiener, имеют не совсем такую же серологическую специфичность, как изоиммунные антитела, выявленные P.Levine, E.R.Stetson.

Таким образом, стало очевидным, что выявленный с помощью гетероиммунных антител общий антиген, присущий эритроцитам крови как резус-положительных, так и резус-отрицательных людей, не имеет ничего общего с тем исключительно важным для клиники антигеном, называемым антигеном Rh0 или D. Этот общий антиген был назван «D-подобной субстанцией». Было установлено, что «D-подобная субстанция» находится в эритроцитах крови почти всех людей, так же впрочем как в эритроцитах крови обезьяны макаки-резуса и других обезьян. Только очень редкие лица с отсутствием резусных свойств и имеющих так называемый резусный фенотип не содержат в эритроцитах своей крови «D-подобную субстанцию». В настоящее время эта антигенная субстанция в честь ее первооткрывателей K.Landsteiner, A.S.Wiener названа антигеном LW.

P. Levine и сотр. (1963) смогли показать возможность получения высокоэффективных гетероиммунных сывороток анти-D и анти-LW путем иммунизации морских свинок резус-положительными эритроцитами крови человека с последующей абсорбцией антисывороток эритроцитами крови лиц, имеющих резусный фенотип ---/---. В очень редких случаях могут образовываться антитела анти-LW и в сыворотке крови человека, причем эти антитела легко могут быть абсорбированы эритроцитами крови резус-отрицательных людей (типа rr).

Наиболее вероятно, что ген, ответственный за образование антигена LW, находится в самостоятельном генном локусе, не связанном с генным локусом, аллели которого контролируют появление антигенов системы резус. По всей видимости, генные локусы систем LW и резус находятся на разных аутосомальных хромосомах.

По мнению J.Swanson, G.A.Matson (1964), редчайшие случаи отсутствия антигена LW в эритроцитах крови человека обусловлены действием рецессивного супрессорного гена в гомозиготной генотипической форме.

В 1941 году обнаружили связь между резус-фактором и гемолитической болезнью новорожденных (фетальным эритробластозом). Резус-отрицательная женщина беременна плодом, который от своего биологического отца унаследовал резус-фактор, присутствующий в эритроцитах его крови. Резус-отрицательная мать образует на этот чужеродный ей антиген соответствующие антитела, которые в результате циркуляции крови переходят через плаценту в конце беременности и во время родов в кровь ребенка. Эти антирезусные антитела могут вызывать гемолиз эритроцитов крови плода или новорожденного ребенка, приводящий иногда к тяжелым патологическим осложнениям вплоть до его гибели.

Правда, известно достаточно большое число случаев, когда резус антитела, присутствующие в сыворотке крови резус-отрицательной матери, не причиняют вреда ребенку, несмотря на то, что в эритроцитах его крови находится антиген, на который и выработались антирезусные антитела. Объяснить подобного рода феномены в настоящее время довольно трудно, особенно в тех случаях, когда в сыворотке крови ребенка достоверно выявлялись антирезусные антитела, перешедшие к нему из сыворотки крови ее матери.

Резус-фактор передается по наследству. Если женщина Rh- , а мужчина Rh+, то плод может унаследовать резус-фактор от отца, и тогда мать и плод будут несовместимы по Rh-фактору. Установлено, что при такой беременности плацента обладает повышенной проницаемостью по отношению к эритроцитам плода. Следует, однако, заметить, что даже в условиях нормы приблизительно у 15 % женщин во время беременности в кровь проникает до 1 мл эритроцитов плода, у 3 % женщин это количество достигает 3 мл и у 0,5 % - до 100 мл и более. Но даже при незначительном проникновении эритроцитов плода в кровь беременных женщин (до1 мл) может развиться резус-конфликт. Эритроциты плода, попадая в кровь матери, приводят к образованию Ат (антирезусагглютининов). Проникая в кровь плода перед родами, Ат вызывают агглютинацию и гемолиз его эритроцитов со всеми вытекающими отсюда последствиями.

Алгоритм определения в приложении №4

1.5.2 ОПРЕДЕЛЕНИЕ РЕЗУС - ПРИНАДЛЕЖНОСТИ КРОВИ С ПОМОЩЬЮ МОНОКЛЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ.

Определение резус-принадлежности крови с помощью моноклональных антител следует проводить в два этапа : сначала кровь больного исследуют с помощью реагента моноклональных антител анти-Rh (D), если получают отрицательную реакцию с этим реагентом, то дополнительно проводят исследования такой крови с моноклональным стандартным реагентом анти-Rh (DC) и состояние стандартном сывороткой Rh0'' '(DCE). Моноклональные антитела используют в реакциях прямой агглютинации на плоскости, в пробирках, в микроплаты. Определение антигена D, С, Е можно проводить в крови, взятой в консервант, в крови, взятой без консерванта, у крови, взятой из пальца.

1.6 ПОДГОТОВКА ПАЦИЕНТА К ПЕРЕЛИВАНИЮ: ПРОБА НА СОВМЕСТИМОСТЬ, РЕЗУС-СОВМЕСТИМОСТЬ, БИОЛОГИЧЕСКАЯ ПРОБА

Проверка документации и качества трансфузионных средств. Перед каждым переливанием гемотрансфузионного средства следует проверить паспорт, срок хранения, герметичность флакона и оценить его содержание. Паспорт (этикетка) должен содержать все необходимые сведения: название средства, дату заготовки, групповую и резус принадлежность, регистрационный номер, фамилию и инициалы донора, фамилию врача, который проводил заготовку крови, а также этикетку "стерильно". Флакон должен быть герметичным. При осмотре гемотрансфузионного средства он не должен иметь признаков гемолиза, посторонних включений, сгустков, осадка и др.. Переливание такого гемотрансфузионного средства разрешается, если групповая и резусная принадлежность их совпадает с таковыми у больного. Методика выполнения проб на совместимость.

Во всех случаях перед каждым переливанием крови или ее компонентов необходимо определить группу и резус-принадлежность крови больного и донора. Кроме того, должны быть проведены обязательные пробы на совместимость. Выделяют:

1) индивидуальную пробу на совместимость по системе или;

2) по резус-принадлежности (в процессе подготовки к трансфузии);

3) биологическую пробу (в начале переливания).

Для выполнения первых двух проб необходимо иметь сыворотку крови больного Она должна быть свежей, полученной в день переливания крови или накануне (но не более, чем за один день до трансфузии) при условии ее хранения при температуре +4 - +6 ° С.

Для получения сыворотки берут 4-5 мл крови в пробирку без стабилизатора, на которой тут же надписывают фамилию и инициалы больного, группу его крови и дату. После этого такую кровь ставят в штатив и помещают в холодильник для отстаивания. Чтобы ускорить отделение сыворотки, пробирку с кровью центрифугируют 5-7 мин при 2000-3000 об /мин. После свертывания и ретракции сгустка от него отделяется сыворотка, которую и используют для проб на совместимость.

Кровь донора для проведения проб берут из флакона после того, как его подготовили к переливанию.

Пробу на совместимость проводят в хорошо освещенной комнате при температуре помещения в пределах +15-25 ° С. На белую поверхность (фар-форовую тарелку, пластинку) пипеткой наносят каплю сыворотки больного и сбоку от нее в 5 раз меньше каплю крови донора, после чего перемешивают сухой стеклянной палочкой или разными углами предметного стекла, затем тарелку слегка покачивают в течение 5 мин и одновременно следят за результатом реакции. Отсутствие реакции агглютинации (проба отрицательная) свидетельствует о совместимости крови донора и реципиента по системе групп крови ИЛИ Появление агглютинации (проба положительная) свидетельствует об их несовместимости и недопустимости переливания данной крови . При несовместимости по группам крови реакция агглютинации происходит в течение первой минуты. Следует помнить, что при низкой температуре групповых антител в сыворотке крови больного или при слабо выраженной активности аглютиноген А у донора (подгруппа А2) может наступать значительно позже. Поэтому наблюдать нужно не менее 5 мин.

В сомнительных случаях проводят тепловую пробу на индивидуальную совместимость.

Проба на совместимость.

На чашку Петри наносят 2-3 капли сыворотки больного и каплю крови донора в соотношении 10:1, их смешивают стеклянной палочкой. Для лучшей оценки пробы каплю рекомендуют поместить на предметное стекло

Пробу необходимо оценивать в первую минуту, покачивая предметное стекло с каплей над белым фоном Наличие агглютинации (проба положительная) свидетельствует об индивидуальной несовместимости крови донора и реципиента.

...