Диагностическая ценность изосерологических исследований

Пробы на совместимость по Резус-фактору.

Для определения резус - совместимости в последнее время используют пробу с 33% Моноклональные антитела используют в реакциях прямой агглютинации на плоскости, в пробирках, в микроплаты. Эту пробу проводят в пробирке без подогрева На дно пробирки вносят 2 капли сыворотки больного, 1 каплю донорской крови и 1 каплю 33% раствора Полиглюкина. Затем содержимое пробирки перемешивают, поворачивая ее, и предоставляют такого положения, чтобы содержание расплывался по стенкам пробирки. Эту процедуру продолжают в течение 5 минут. После этого в пробирку переливают 3-4 мл изотонического раствора хлорида натрия, перемешивают его и рассматривают на свете. Если содержимое пробирки остается равномерно окрашенным, без признаков агглютинации, кровь донора совместима с кровью больного по резус-фактору Rh (D) и ее можно переливать. В сомнительных случаях пробу необходимо повторить или провести новую с 10% раствором желатина на водяной бане.

Проба на резус - совместимость с 10% раствором желатина, ее проводят в пробирке при температуре 46-48 ° С. На дно лабораторной пробирки помещают одну каплю крови донора, после чего добавляют две капли подогретого до разжижения 10% раствора желатина и 2-3 капли сыворотки крови больного. Содержимое пробирки перемешивают (путем встряхивания) и помещают на 10 мин в водяную баню при температуре 46 -48 ° С. После этого пробирку вынимают из водяной бани, добавляют в нее 5-8 мл изотонического раствора хлорида натрия, перемешивают ее содержимое и после 1-2-кратного перевертывания пробирки просматривают на свет невооруженным глазом или через лупу. Наличие агглютинации в виде взвеси мелких, реже - крупных комочков на фоне просветленной или полностью обесцвеченной жидкости означает, что кровь донора несовместима с кровью больного и не может быть ему перелита. Если содержимое пробирки остается равномерно окрашенным, и в ней замечается агглютинация эритроцитов, кровь донора совместима с кровью больного.

Пробу на Резус - совместимость проводят как при переливании резус-положительной крови резус-положительному, так и резус-отрицательной крови резус-отрицательному больному. Пробу проводят с каждым флаконом донорской крови, эритроцитарной массы, отмытых эритроцитов.

Следует помнить, что пробы на групповую и резус-совместимость ни в коем случае не заменяют друг друга. С помощью этих проб выясняют совместимость различных агглютиногенов и агглютининов крови, которые проявляют себя при различных условиях. Только проведение обеих проб может своевременно предотвратить переливание несовместимой крови.

Биологическая проба на совместимость практически предупреждает возможность переливания несовместимой крови по системе АВО, Переливание недоброкачественной крови (гемолизированной, инфицированной, перегретой), а также оказывает индивидуальную повышенную чувствительность каждого реципиента на кровь донора.

Во время и после переливания гемотрансфузионных жидкостей за больными устанавливают пристальный надзор. Изменение состояния больного, его поведения или появление каких-либо жалоб должны расцениваться как первые проявления осложнения.

После переливания гемотрансфузионных жидкостей больному назначают постельный режим в течение 2-х часов. Через два часа необходимо измерить температуру тела, а при ее повышении - повторять измерения каждый час в течение 4-х часов. На следующий день после переливания больному назначают общий анализ крови и мочи

В посттрансфузионный период важным является наблюдение за мочевыделением, количеством мочи, ее цветом. Появление розового или бурого цвета свидетельствует о развитии гемотрансфузионного осложнения. Только внимательный контроль за общим состоянием больного, уровнем артериального давления, температурой тела, количеством и характером выделенной мочи позволяет своевременно выявить начало осложнения.

Большинство реакций и осложнений возникают, как правило, в течение первых суток. При возникновении посттрансфузионного осложнения необходимо отменить переливания, срочно сообщить врачу, а он сообщает администрации станции переливания крови.

Таким образом, У 85 % людей эритроциты имеют особое антигенное вещество, названное резус-фактор. Эти люди считаются резус-положительными, а остальные 15 %, не имеющие в крови резус-фактора, резус-отрицательными. Переливание резус-положительной крови резус-отрицательным больным приводит к выработке у них резус-антител. При повторных переливаниях у них наступает тяжелая посттрансфузионная реакция, способная привести к смертельному исходу.

Поскольку основные проблемы совместимости вызывают антигены А и В, а у первой (О) группы их нет, то она считается универсальной, совместимой с любой группой крови. При этом, обладатели четвертой группы крови (AB) положительного резуса являются универсальными получателями (реципиентами), потому что им подходит кровь любой группы.

Незначительные антигены также могут вызвать проблемы совместимости. Поэтому они должны быть исследованы до переливания крови.

1.7 ОШИБКИ ПРИ ОПРЕДЕЛЕНИИ ГРУППЫ КРОВИ

Во избежание ошибок при определении групповой и резус-принадлежности крови необходимо четко знать их источники. Ошибки возникают при нарушении техники выполнения исследования и в случаях трудноопределимых групп крови [7].

1.7.1 ПОРЯДОК РАСПОЛОЖЕНИЯ РЕАГЕНТОВ

Если нарушен порядок расположения реагентов в штативе или на пластинке, то при правильной оценке результата с каждой отдельно взятой сывороткой можно сделать неправильное заключение о групповой и резус-принадлежности исследуемой крови. Поэтому каждый раз при определении группы крови следует проверить расположение реагентов, а также визуально оценить их качество, исключив использование помутневших, подсохших реагентов и с истекшим сроком годности.

1.7.2 СООТНОШЕНИЕ ИНГРЕДИЕНТОВ РЕАКЦИИ

Оптимальное для реакции агглютинации соотношение эритроцитов и тестовых реагентов 1 : 10 при использовании гемагглютинирующих сывороток и 2-3 : 10 при использовании моноклональ-ных реагентов и реагентов, приготовленных в комбинации с коллоидами.

Как при избытке, так и при недостаточном количестве эритроцитов агглютинация появляется медленно и может быть не замечена, особенно в тех случаях, когда агглютинационные свойства эритроцитов снижены (подгруппа А2, эритроциты Du).

1.7.3 ТЕМПЕРАТУРНЫЕ УСЛОВИЯ

Определение группы крови производят при температуре не ниже 15 °С, поскольку исследуемая кровь может содержать поливалентные холодовые агглютинины, вызывающие неспецифическое склеивание эритроцитов при пониженной температуре (холодовая агглютинация).

При повышенной температуре (более 25 °С) антитела анти-А, анти-В и анти-АВ реагируют менее активно, чем при комнатной температуре (22 °С), поэтому определение группы крови производят при температуре не выше 25 °С. Нарушение температурных условий при определении группы крови может привести к искажению результатов.

1.7.4 ПРОДОЛЖИТЕЛЬНОСТЬ НАБЛЮДЕНИЯ

Агглютинация эритроцитов появляется в течение 10-30 сек., однако наблюдение за ходом реакции следует проводить не менее 5 мин, внимательно следят за теми каплями, в которых агглютинация не появилась. Это позволяет выявить слабые агглютиногены А2 и Du, характеризующиеся замедленной агглютинацией. Длительное выдерживание проб на пластинке приводит к их подсыханию и появлению в зоне подсыхания агрегатов эритроцитов, вследствие чего создается ошибочное впечатление положительной реакции. В сомнительных случаях исследование повторяют.

1.7.5 ВЫПАДЕНИЕ ФИБРИНА

При исследовании свежей цельной крови, взятой без антикоагулянта, иногда происходит ее свертывание, что в некоторых случаях затрудняет учет результата. Капля приобретает желеобразную консистенцию, плохо перемешивается при покачивании пластинки. Выпадение фибрина особенно выражено в том случае, если пластинку, на которую помещена реагирующая смесь, слишком долго оставляют лежать на столе не покачивая.

Выпадение фибрина может быть связано с особенностями свертывающей системы крови обследуемого, а также с избытком хлорида кальция в тестовых сыворотках, если они были приготовлены из плазмы крови путем дефибринирования указанным препаратом. При внимательном рассмотрении легко различить белесоватые нити и глыбки фибрина, между которыми концентрируются эритроциты, имитируя мелкозернистую агглютинацию. Для получения четких результатов исследование крови выполняют заново, используя для этого тестовые реактивы, приготовленные из нативных сывороток, или моноклинальные антитела. В случае возникновения сомнений следует дождаться полного свертывания крови в пробирке, после чего использовать для исследования так называемую третью фракцию эритроцитов (осадок эритроцитов на дне пробирки, не вовлеченных в сгусток) или заготовить исследуемую кровь с антикоагулянтом.

1.7.6 АГГЛЮТИНАЦИЯ,МАСКИРОВАННАЯ ГЕМОЛИЗОМ

Сыворотки крови отдельных лиц содержат активные гемолизины анти-А (реже анти-В), которые могут лизировать стандартные эритроциты до начала агглютинации, что создает впечатление отсутствия последней. Гемолиз предотвращают путем разведения сыворотки изотоническим раствором натрия хлорида или посредством непродолжительного прогревания ее при температуре 56 °С.

Имеют место случаи, когда вместо изотонического раствора в смесь сыворотки и эритроцитов ошибочно добавляют воду, предназначенную для промывания пипеток, что также вызывает лизис как неагтлютинированных, так и агглютинированных эритроцитов. Ошибку распознают по внешнему виду реагирующей смеси, которая на глазах из красной опалесцирующей взвеси превращается в прозрачную алую жидкость («лаковая» кровь).

1.7.7 НЕКОРРЕКТНАЯ ЗАПИСЬ

При правильном определении групповой принадлежности крови результат исследования может быть неверно записан или неверно перенесен из одного документа в другой.

Известны два типа ошибок в технике определения и оценке результатов: во-первых, когда считают, что агглютинации не произошло, а она имеется или должна появиться; во-вторых, когда предполагают, что агглютинация произошла, а она фактически отсутствует.

Причинами первого типа ошибок могут быть:

а) малая активность (титр) сыворотки или агглютинабельность эритроцитов (группа А2 ). Возможность этой ошибки исключается, если пользоваться только активными, проверенными сыворотками (титр не менее 1:32) и наблюдать за реакцией не менее 5 минут;

б) слишком большая капля крови при добавлении к стандартной сыворотке приводит к разведению агглютининов и снижению их титра. Избежать ошибки возможно при соблюдении соотношения капли крови и стандартной сыворотки 1:10;в) при окружающей температуре выше + 25 (жаркая погода) агглютинация может не возникнуть и реакция должна производится на охлажденной тарелке.

Вторая ошибка, т.е. учет агглютинации как положительной при фактическом ее отсутствии может произойти:

а) при склеивании эритроцитов в "монетные столбики", не отличимые простым взглядом от агглютинатов. Добавление капли0,85% раствора хлорида натрия, как правило, разрушает "монетные столбики", но не влияет на истинные агглютинаты;

б) когда испытуемые эритроциты дают феномен ауто-или панагглютинации (агглютинация) в сыворотке любых эритроцитов, даже собственных, или агглютинация эритроцитов в любой сыворотке, даже групп АВ(IV). Это явление наблюдается у больных с циррозами печени, лейкозом и др. Во избежание этой ошибки, определение групп крови необходимо производить при температуре не ниже +15 град С и обязательно использовать стандартные сыворотки АВ(IV) группы при появлении на стекле агглютинации во всех группах сыворотки. Агглютинация и в сыворотке АВ(IV) группы свидетельствует об ауто-или панагглютинации. Явления пан-и аутоагглютинации исчезают при температуре 37 градусов и вновь появляются при охлаждении;

в) при пользовании бактериально - загрязненной стандартной сывороткой, дающей неспецифическую агглютинацию (феномен Томсена). Эта ошибка не возникает, если не пользоваться помутневшей или подсыхающей, неправильно хранившейся сывороткой (не в холодильнике, без укупорки);

г) оседание эритроцитов на дно в кучки при отсутствии покачивания тарелки засыхании капли и длительном (более 5 минут) наблюдении.

Оба типа ошибок возможны при механической спутанности сывороток на штативе и палочек для размешивания капель. Они исключаются непременным пользованием не менее, чем 2 сериями стандартных сывороток. В сомнительных случаях при нечетких результатах прибегают к повторному определению группы крови другими сериями стандартных сывороток, а при необходимости к перекрестному способствует стандартным сывороткам и стандартным эритроцитам;

д) агглютинация, обусловленная наличием в сыворотке антител другой групповой системой, таковыми могут быть антитела анти-М, анти-Ц, анти-Л;

е) выпадение фибрина наблюдается при исследовании свежей крови (цельной) и делает невозможным учет результатов. Связано это с избытком хлорида кальция в тестовых реактивах, приготовленных из плазмы крови путем дефибрирования ее указанными препаратами, необходимо тестовые реактивы приготовлять из нативной плазмы;

ж) кровяные химеры - так называют одновременное пребывание в кровяном русле двух популяций эритроцитов, отличающихся по группе крови и другим антигенам. Различают истинные и трансфузионные кровяные химеры, которые возникают в результате многократного переливания универсальной крови гр. О(I) реципиентам с гр. крови А(II) и В(III), или они носят транзисторный характер - после прекоащения трансфузии они исчезают. Истинные химеры встречаются у гетерозиготных близнецов, у которых в период внутриутробного развития возможен обмен родоначальными кроветворными клетками.

1.7.8 ОШИБКИ ПРИ ОПРЕДЕЛЕНИИ ГРУППЫ КРОВИ И РЕЗУС -ФАКТОРА

1.Организационные ошибки.

Перепутывание пробирок с образцами крови, перепутывание гемагглютинирующих сывороток, несоблюдение соотношения капель (10:1 + 9 капель физраствора для контроля достоверности агглютинации), отказ от добавления физраствора, отказ от использование сыворотки IV группы для определения этой группы, нарушение температурного режима в помещении (холод замедляет реакции и при температуре ниже 18 град. Запрещаются лабораторные исследования, плохое освещение в помещении лаборатории, не соблюдение 5-минутного режима наблюдения за агглютинацией.

2.Ошибки,связанные с биологическими свойствами крови

Слабые антигены пациента, отсутствие аглютининов (дети 1-го года жизни), панагглютинация;

3.ошибки,связанные с недоброкачественностью реагентов (серологических стандартов)

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

В структуре РСПК иммуногематологические исследования традиционно проводились в иммунологическом отделе, который, согласно Приказу Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации (РФ) от 28 марта 2012 г. № 278н, с 2012 года преобразован в «группу иммуногематологических исследований» клинической лаборатории клинико-диагностического отдела (КДО) ГБУЗ «РСПК» [4]. В группе иммуногематологических исследований клинической лаборатории КДО работает 16 сотрудников, в том числе 3 врача клинической лабораторной диагностики, 1 биолог, 2 медицинских технолога, 7 медицинских лабораторных техников, 3 санитарки. Функциями группы иммуногематологических исследований являются: исследование крови доноров (типирование антигенов эритроцитов по 10 клинически значимым антигенам систем АВ0, Rh, Келл, скрининг антиэритроцитарных антител), проведение индивидуального подбора крови и ее компонентов, иммуногенетических исследований лейкоцитов крови для реципиентов.

Для проведенного анализа использованы данные ежегодной отчетности группы иммуногематологических исследований клинической лаборатории КДО ГБУЗ «РСПК» Республики Башкортостан за 2008-2013 гг. Определение группы крови системы АВ0 в лаборатории проводится перекрестным методом с использованием стандартных эритроцитов DiaCell (0-А-В) и цоликлонов анти-А, анти-В, анти-АВ, анти-А1, анти-А-слабый (ФГУ «РосНИИГТ ФМБА России», Санкт-Петербург). Определение фенотипа эритроцитов по системе Rh и Келл с 2011 года проводится с помощью цоликлонов (ООО «Гематолог», Москва; ООО «Медиклон», Санкт-Петербург, Россия). Скрининг антиэритроцитарных антител проводится панелью стандартных эритроцитов трех фенотипов ID DiaCell (I-II-III) (ФГУ «РосНИИГТ ФМБА России», Санкт-Петербург).

Ежегодно группой иммуногематологических исследований клинической лаборатории клинико-диагностического отдела РСПК проводится исследование 30 000-40 000 образцов крови доноров, 2000 проб крови реципиентов. Всего проводится более 1 млн анализов (лабораторных единиц) в год. Лаборатория ежегодно участвует в Федеральной системе внешней оценки качества (ФСВОК) лабораторных исследований, результаты исследований контрольных образцов удовлетворительные. Полученные данные оценили с использованием дескриптивных статистик при уровне значимости 0,05.

2.1 ЦЕННОСТЬ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГРУППЫ КРОВИ

При переливании несовместимой крови и резус-конфликте возникают тяжелейшие осложнения. Это связано не только с образованием конгломератов эритроцитов и их гемолизом, но и с интенсивным внутрисосудистым свертыванием крови, так как в эритроцитах содержится набор факторов, вызывающих агрегацию тромбоцитов и образование фибриновых сгустков. При этом страдают все органы, но особенно сильно повреждаются почки, ибо сгустки забивают чудесную сеть мальпигиева клубочка, препятствуя образованию мочи, что может быть несовместимо с жизнью. Кроме того, при массовом разрушении эритроцитов образуется большое количество билирубина, обладающего выраженной нейротоксичностью.

Связь между группой крови и полом отсутствует. Все четыре группы крови равномерно распределяются между мужчинами и женщинами. Групповые свойства крови передаются по наследству согласно классическим законам генетики.

В последующие годы в эритроцитах людей обнаружили ряд новых антигенов: новые варианты агглютиногена А (А, А2, Am и т. д.), системы, свойственные многим людям, и системы, характерные для отдельных семей и даже отдельных лиц (М, N, Р, Льюис, Келл-Челано, Кидд, Даффи и др.). Системы часто называют по фамилиям людей, у которых их нашли впервые.

Исследования определение группы крови позволили осуществить давнюю мечту человечества -- пересадку органов и тканей. Первые пересадки органов делались лишь с учетом групповой принадлежности -- подбирали донора, у которого была та же группа крови, что и у реципиента. Эффект отторжения пересаженной ткани показал, что этого недостаточно.

В 60-е годы XX столетия французским профессором Доссе была открыта система лейкоцитов, получившая международное название HL-А от первых букв латинских слов: «гуман» (человек), «лейкоциты», «антиген» . Благодаря открытию Доссе стал возможен подбор наиболее оптимального донора при пересадке органов.

Успехи определения группы крови могут быть использованы в судебной медицине. Установлено, что антигенный «узор» эритроцитов каждого человека в значительной степени индивидуален. Наиболее часто повторяющиеся комбинации крови могут встречаться только у 7 из 1000 жителей нашей планеты, но возможны комбинации, которые наблюдаются лишь у одного человека из миллиарда людей. Криминалисты даже предложили создать особую картотеку, где были бы собраны данные о групповой характеристике крови известных преступников.

Определение группы крови с успехом используется в судебной медицине при спорах об отцовстве, материнстве и в случае потери детей в раннем возрасте.

Существуют законы наследования групповых признаков крови. Исследованиями определения группы крови заинтересовались ученые других специальностей. Антигены А и В обладают удивительной стойкостью. Они сохраняются в высушенной ткани, в крови, подвергшейся температурной обработке. Это не могло не заинтересовать антропологов -- появилась возможность узнать свойства крови далеких предков человека по сохранившимся останкам, мумиям, костям.

После открытия групп крови обнаружился еще один интересный факт: среди различных рас и народностей группы крови распределяются неравномерно. У этнографов появилась возможность изучить происхождение рас и народов, проследить расселение и миграцию людей на нашей планете, узнать причины расцвета и упадка древних государств.

В настоящее время установлена определенная закономерность между групповой принадлежностью крови и частотой некоторых заболеваний. Эти исследования, возможно, приведут к новым открытиям в медицине.

При некоторых заболеваниях, интоксикациях, отравлениях необходимы обменные переливания крови. Для операций на сердце, осуществляемых в условиях искусственного кровообращения, необходимо 5-8 л донорской крови, для работы аппарата «искусственная почка» -- 4-6 л.

В организме человека кровь составляет 1/13 -- 1/14 объема массы тела. У человека с массой 80 кг. циркулирует около 6 л. крови. Допустимая кровопотеря у здорового человека может достигать 1/5 общего объема крови. Потеря 300-400 мл. крови (т.е. того количества, которое берут у донора) для здорового человека абсолютно безвредно.

Пострадавшим в результате ожоговой травмы переливают плазму крови. Переливание плазмы производят при травматическом шоке, септических заболеваниях. Плазму применяют и как кровоостанавливающее средство. Из плазмы получают альбумин, используемый при некоторых терапевтических заболеваниях, у истощенных, послеоперационных больных, при ожоговом шоке и кровопотерях.

При переливании крови группа крови определяется вначале лечащим врачом и повторно врачом-лаборантом. Определение резус-принадлежности проводится врачом лаборатории. Определение группы крови, проводимое независимо друг от друга двумя лицами, помогает избежать ошибок. Данные о групповой и резус-принадлежности крови выносятся на первую станицу истории болезни.

ГЛАВА 3. СОБСТВЕННЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

По данным ежегодной отчетности группы иммуногематологических исследований клинической лаборатории КДО, представленным в табл. 1, количество исследуемых образцов крови доноров с 2008 года снижалось до 2012 года на 4,1%, а в 2013 году увеличилось на 3,4% по сравнению с 2012 годом за счет присоединения филиалов и централизации лабораторных исследований в ГБУЗ «РСПК» РБ. Однако количество доноров при этом остается ниже уровня 2008 года, а количество анализов, выполняемых у доноров, возрастает, что связано с внедрением в практику обследования доноров по 10 клинически значимым эритроцитарным антигенам [3]. Фенотипирование эритроцитов в настоящее время проводится с использованием современных высокочувствительных методов (гелевая методика) и реагентов (цоликлоны, панель стандартных эритроцитов трех фенотипов), что позволяет получать достоверные результаты анализов, уменьшает число ошибок, исключает необходимость в проведении повторных исследований. Эти исследования с 2014 года в лаборатории проводятся только у доноров клеток крови, у доноров плазмы исследований фенотипа эритроцитов не проводится, что значительно сокращает материальные затраты и позволяет более рационально использовать труд сотрудников лаборатории. В обследуемый период общее количество определенных показателей увеличилось на 96,7%, а в расчете на одного донора - на 103,5%.

Распределение фенотипов эритроцитов системы группы крови АВ0 отличается от общероссийского (табл. 2 и 3). Фенотип В у доноров Башкортостана встречается на 27,8% чаще (p < 0,01; отношение рисков (ОР) = 1,38, 95% доверительный интервал (ДИ 95%) - от 1,33 до 1,43; хІ = 291,3), а фенотип А - на 14,9% реже (p < 0,01; ОР = 0,76, ДИ 95% - от 0,74 до 0,79; х = 263,98).

Установлено, что больные, имеющие экстраагглютинины анти-А1, не должны получать эритроциты доноров с антигеном А1 [6]. Среди доноров с группой А частота лиц с А2-антигеном составляет, по нашим данным, 14,7 ± 2,0%, а с группой АВ - 18,6 ± 2,3% (табл. 4) против 12,0 и 20,0% по РФ соответственно [1].

Эритроциты, полученные у доноров с со слабым антигеном А2, не содержащие экстраагглютининов, с 2013 года в РСПК РБ не списываются, а используются для индивидуального подбора реципиентам с аналогичными группами крови, что в целом сокращает долю относительного брака крови и сроки выдачи гемокомпонентов реципиентам ЛПУ РБ. Невостребованная часть этих компонентов также выдается в ЛПУ для переливания реципиентам с А1- и А1В-группой крови. За 2013-2014 гг. в ГБУЗ «РСПК» РБ было принято из ЛПУ РБ 2089 заявок на индивидуальный подбор компонентов крови реципиентам, из них слабый антиген А2 был выявлен в 551 случае (26,4%) (табл. 5). Заявки на индивидуальный подбор компонентов крови реципиентам с А2-подгруппой, нуждающимся в гемокомпонентной терапии, направляются в ГБУЗ «РСПК» РБ практически из всех ЛПУ РБ. Всего за последние два года подобрано 688 доз крови, гемотрансфузионных реакций и осложнений у реципиентов ЛПУ РБ, получавших компоненты крови из ГБУЗ «РСПК», за анализируемый период (2008-2013 гг.) не наблюдалось. По результатам работы в 2013 году для реципиентов со слабым антигеном А2 было доступно 11,0 и 4,7 дозы эритроцитов в расчете на одного пациента с фенотипами А и АВ соответственно.

Важным показателем для иммуногематологических лабораторий является индекс сенсибилизации (ИС) населения, характеризующий популяцию в медицинском, биологическом, антропологическом и геногеографическом аспекте [5, 7]. Расчет ИС (аллоиммунизации) населения в регионе рассматривают как важную должностную обязанность иммуносерологов службы крови. В связи с этим в лаборатории ГБУЗ «РСПК» РБ на основании результатов обследования доноров регулярно проводится расчет индекса сенсибилизации. В 2008-2013 гг. скрининг антиэритроцитарных антител выполнили у 194 334 доноров (127 099 мужчин и 67 235 женщин). Антитела выявили у 266 (0,14%) доноров, в том числе у 99 (0,08%) мужчин и 167 (0,25%) женщин (табл. 6). В целом среди населения европейской части России антитела выявляются несколько чаще - у 0,20% доноров [1]. У доноров-женщин антиэритроцитарные антитела выявляются значимо чаще, чем у мужчин (p < 0,01; ОР = 3,19, ДИ 95% - от 2,49 до 4,1; хІ = 93,51). Полученные результаты согласуются с литературными данными [2].

Анализ деятельности лаборатории по индивидуальному подбору крови для реципиентов показал, что число заявок на эритрокомпоненты крови для реципиентов из ЛПУ РБ увеличивается, а количество выданных эритрокомпонентов снижается. Это обусловлено проведением фенотипирования.

У всех (100%) доноров по 10 клинически значимым антигенам эритроцитов (А, В, D, С, Сw, с, Е, е, К, к) в ГБУЗ «РСПК» РБ имеется возможность подбора идентичного компонента донорской крови с фенотипом эритроцитов, установленным у реципиентов в лабораториях ЛПУ РБ.

Фенотипирование и подтверждение групп крови реципиентов по 10 клинически значимым антигенам в настоящее время проводят обученные специалисты клинико-диагностических лабораторий ЛПУ РБ. Однако при обращении ЛПУ РБ по поводу установления фенотипа эритроцитов крови в сложных случаях, выявлении аллоиммунизации по системе АВ0, Rh, Келл, лейкоцитарным антигенам, необходимости массивных переливаний крови, диагностики гемолитической болезни новорожденных в лаборатории ГБУЗ «РСПК» РБ проводятся консультативные исследования. В таких случаях проводятся исследования крови с применением методов прямой и непрямой пробы Кумбса, желатиновой и унитиоловой, гелевой, автоматизированной микропланшетной методики, скрининга антиэритроцитарных и антилейкоцитарных антител, определение их титра. Данные анализы особенно востребованы в онкологии, гематологии, неонаталогии, реаниматологии, комбустиологии.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В 2013-2016 гг. количество иммуногематологических показателей, определяемых в среднем у одного донора, увеличилось на 103,5%.

Распределение фенотипов эритроцитов системы группы крови АВ0 отличается от общероссийского. Фенотип В у доноров Башкортостана встречается на 27,8% чаще (p < 0,01; отношение рисков (ОР) = 1,38, 95% доверительный интервал (ДИ 95%) - от 1,33 до 1,43; хІ = 291,3), а фенотип А - на 14,9% реже (p < 0,01; ОР = 0,76, ДИ 95% - от 0,74 до 0,79; хІ = 263,98).

Выявление слабого антигена А2 у донора позволяет в настоящее время использовать эти компоненты для всех реципиентов с аналогичной группой крови. По результатам работы в 2013 году для реципиентов со слабым антигеном А2 было доступно 11,0 и 4,7 дозы эритроцитов в расчете на одного пациента с фенотипами А и АВ соответственно.

Индекс сенсибилизации (ИС) доноров крови Республики Башкортостан составляет 0,14% (0,08% - ИС мужчин и 0,25% - ИС женщин). У доноров-женщин антиэритроцитарные антитела выявляются значимо чаще, чем у мужчин (p < 0,01; ОР = 3,19, ДИ 95% - от 2,49 до 4,1; хІ = 93,51). Количество доз эритроцитов, подобранных по одной заявке, сократилось на 31%, что связано с заменой эритроцитной массы на более эффективную эритроцитную взвесь.

Количество индивидуальных и консультативных иммуногематологических исследований снижается вследствие расширения возможности выбора идентичного компонента из регистра типированных доноров.

ВЫВОДЫ

Опираясь на полученные в ходе исследования результаты, можно сделать следующие выводы:

1. При переливании несовместимой крови и резус-конфликте возникают тяжелейшие осложнения

2. В эритроцитах людей обнаружили ряд новых антигенов: новые варианты агглютиногена А (А, А2, Am и т. д.), системы, свойственные многим людям, и системы, характерные для отдельных семей и даже отдельных лиц (М, N, Р, Льюис, Келл-Челано, Кидд, Даффи и др.)

3. Исследования определения группы крови позволили осуществить давнюю мечту человечества -- трансплантацию органов и тканей. В 60-е годы XX столетия французским профессором Доссе была открыта система лейкоцитов, получившая международное название HLА от первых букв латинских слов: «гуман» (человек), «лейкоциты», «антиген» Благодаря открытию Доссе стал возможен подбор наиболее оптимального донора при пересадке органов.

4. Успехи определения группы крови могут быть использованы в судебной медицине. Определение группы крови с успехом используется в судебной медицине при спорах об отцовстве, материнстве и в случае потери детей в раннем возрасте.

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

1. Донсков С.И., Мороков В.А. Группы крови человека. Руководство по иммуносерологии. - М.: ИП Скороходов В.А., 2011. - 1016 с.

2. Липатова И.С. Аллоиммунизация групповыми антигенами эритроцитов (индивидуальные и популяционные особенности): Дисс. … канд. мед. наук. - М., 2009. - 99 с.

3. Приказ Минздрава России от 02.04.2013 № 183н «Об утверждении правил клинического использования донорской крови и (или) ее компонентов».

4. Приказ Минздравсоцразвития России от 28.03.2012 № 278н «Об утверждении требований к организациям здравоохранения (структурным подразделениям), осуществляющим заготовку, переработку, хранение и обеспечение безопасности донорской крови и ее компонентов, и перечня оборудования для их оснащения».

5. Рагимов А.А., Дашкова Н.Г. Основы трансфузионной иммунологии. - М.: Медицинское информационное агентство, 2004. - 280 с.

6. Требования к проведению иммуногематологических исследований доноров и реципиентов на СПК и в ЛПУ (Методические указания Минздрава России № 2001/109).

7. Шевченко Ю.Л., Жибурт Е.Б. Безопасное переливание крови. - СПб.: Питер, 2000. - 320 с.

ПРИЛОЖЕНИЕ №1

Оснащение

Стандартные изогемагглютинирующие сыворотки групп О (I), А (II), В (III) и АВ (IV) двух различных серий. Сыворотки для определения групп крови изготавливают в специальных серологических лабораториях из донорской крови. Сыворотки хранят при температуре 4-8 "С (в холодильнике).

Срок годности сыворотки указан на этикетке. Титр сыворотки (также указывается на этикетке) должен быть не ниже 1 : 32 (для сыворотки В (III) - не ниже 1 : 16/32). Под титром сыворотки понимается то максимальное ее разведение, при котором может наступать реакция агглютинации. Сыворотка должна быть прозрачной, без признаков гниения. Для удобства стандартные гемагглютинирующие сыворотки различных групп подкрашивают в определенный цвет: О (I) - бесцветная (серая), А (II) - синяя, В (III) - красная, АВ (IV) - ярко-желтая.

- Белые фарфоровые или эмалированные тарелки или любые другие пластинки со смачиваемой поверхностью, маркированные 0(1), А(Ы), ВЦП), AB(IV).

- Изотонический раствор хлорида натрия.

- Иглы, пипетки, стеклянные палочки (предметные стекла).

Техника проведения реакции

Под соответствующими обозначениями группы крови на тарелку (пластинку) наносят стандартные изогемагглютинирующие сыворотки I, II, III групп в объеме 0,1 мл (одна большая капля около 1 см в диаметре).

Во избежание ошибок наносят две серии сывороток каждой из групп, так как одна из серий может иметь низкую активность и не дать четкой агглютинации. Всего получается 6 капель, которые образуют два ряда по три капли в следующем порядке слева направо: О (I), A (II), В (III).

Кровь для исследования берут из пальца или из вены. Шесть капель исследуемой крови величиной приблизительно с булавочную головку 0,01 мл (маленькая капля) последовательно переносят сухой стеклянной палочкой на пластину в 6 точек, каждую рядом с каплей стандартной сыворотки (количество испытуемой крови должно быть приблизительно в 10 раз меньше количества стандартной сыворотки, с которой она смешивается), потом их осторожно с помощью стеклянных палочек с закругленными краями перемешивают.

Возможна более простая методика: на тарелку наносят одну большую каплю крови, из которой ее забирают уголком предметного стекла и переносят в каждую каплю сыворотки, аккуратно перемешивая с последней. При этом всякий раз кровь берут новым уголком стекла, следя за тем, чтобы капли не сливались.

После смешивания тарелку периодически покачивают. Агглютинация начинается в течение первых 10-30 секунд, однако наблюдение следует обязательно вести до 5 минут ввиду возможности более поздней агглютинации, например с эритроцитами группы А2(Н).

В те капли, где произошла агглютинация, добавляют по одной капле изотонического раствора хлорида натрия, после чего оценивают результат реакции.

ПРИЛОЖЕНИЕ №2

Оснащение

- Стандартные изогемагглютинирующие сыворотки групп О (I), А (II), В (III) и АВ (IV) двух различных серий. Сыворотки для определения групп крови изготавливают в специальных серологических лабораториях из донорской крови. Сыворотки хранят при температуре 4-8 "С (в холодильнике).

Срок годности сыворотки указан на этикетке. Титр сыворотки (также указывается на этикетке) должен быть не ниже 1 : 32 (для сыворотки В (III) - не ниже 1 : 16/32). Под титром сыворотки понимается то максимальное ее разведение, при котором может наступать реакция агглютинации. Сыворотка должна быть прозрачной, без признаков гниения. Для удобства стандартные гемагглютинирующие сыворотки различных групп подкрашивают в определенный цвет: О (I) - бесцветная (серая), А (II) - синяя, В (III) - красная, АВ (IV) - ярко-желтая.

- Белые фарфоровые или эмалированные тарелки или любые другие пластинки со смачиваемой поверхностью, маркированные 0(1), А(Ы), ВЦП), AB(IV).

- Изотонический раствор хлорида натрия.

- Иглы, пипетки, стеклянные палочки (предметные стекла).

Техника проведения реакции

Под соответствующими обозначениями группы крови на тарелку (пластинку) наносят стандартные изогемагглютинирующие сыворотки I, II, III групп в объеме 0,1 мл (одна большая капля около 1 см в диаметре).

Во избежание ошибок наносят две серии сывороток каждой из групп, так как одна из серий может иметь низкую активность и не дать четкой агглютинации. Всего получается 6 капель, которые образуют два ряда по три капли в следующем порядке слева направо: О (I), A (II), В (III).

Кровь для исследования берут из пальца или из вены. Шесть капель исследуемой крови величиной приблизительно с булавочную головку 0,01 мл (маленькая капля) последовательно переносят сухой стеклянной палочкой на пластину в 6 точек, каждую рядом с каплей стандартной сыворотки (количество испытуемой крови должно быть приблизительно в 10 раз меньше количества стандартной сыворотки, с которой она смешивается), потом их осторожно с помощью стеклянных палочек с закругленными краями перемешивают.

Возможна более простая методика: на тарелку наносят одну большую каплю крови, из которой ее забирают уголком предметного стекла и переносят в каждую каплю сыворотки, аккуратно перемешивая с последней. При этом всякий раз кровь берут новым уголком стекла, следя за тем, чтобы капли не сливались.

После смешивания тарелку периодически покачивают. Агглютинация начинается в течение первых 10-30 секунд, однако наблюдение следует обязательно вести до 5 минут ввиду возможности более поздней агглютинации, например с эритроцитами группы А2(Н).

В те капли, где произошла агглютинация, добавляют по одной капле изотонического раствора хлорида натрия, после чего оценивают результат реакции.

ПРИЛОЖЕНИЕ №3

Техника проведения реакции:

Цоликлоны анти-А и анти-В наносят на белый планшет по одной большой капле (0,1 мл) под соответствующими надписями: анти-А или анти-В. Рядом с каплями антител наносят по одной маленькой капле (0,01мл) исследуемой крови. После перемешивания составных частей за реакцией агглютинации наблюдают в течение 2-3 мин.

ПРИЛОЖЕНИЕ №4

Методики определения резус-фактора и резус-антител

Оснащение:

1. антирезусные сыворотки (2 серии);

2. стандартные резус-положительные и резус-отрицательные эритроциты;

3. планшет;

4. пипетки;

5. предметные стекла:

6. стеклянные палочки.

На чашку Петри наносят последовательно три крупные капли сыворотки анти-резус одной серии и параллельно три капли сыворотки второй серии).

Затем в первый ряд сывороток вносят по небольшой капли исследуемой крови (соотношение 1 : 10 или 18). Во второй вертикальный (средний) ряд - по такой же капли стандартных резус-положительных эритроцитов (контроль активности) и в третьей ряд - резус-отрицательные стандартные эритроциты (контроль специфичности). Отдельной стеклянной палочкой или углами предметного стекла тщательно перемешивают каждую отдельно каплю чаш-ку закрывают крышкой и ставят на водяную баню при температуре 40-42 ° С. Через 10 мин получают результат. Если в каплях обеих серий антирезусных сывороток с эритроцитами исследуемой крови произошла реакция агглютинации, то кровь резус-положительная, нет агглютинации - кровь резус-отрицательная.

В неотложных ситуациях пользуются экспресс-методом с помощью сыворотки анти-резус АВ (IV) группы крови, разбавленной 20-30% раствором альбумина или 30-33% раствором полиглюкина. На чашку Петри наносят каплю стандартной сыворотки АВ (IV) группы, содержащая антирезусные антитела, и рядом каплю резус-отрицательной сыворотки АВ (IV) группы, не содержащих антител. В эти капли добавляют в 2-3 раза меньший объем исследуемой крови, перемешивают стеклянными палочками или поочередно углами предметного стекла, покачивают чашкой 3-4 мин, после чего добавляют по 1 капле изотонического раствора хлорида натрия. Результаты читают через 5 мин. При наличии агглютинации исследуемых эритроцитов с сывороткой, содержащей антирезусные тела и отсутствующей реакции с контрольной резус-отрицательной сывороткой кровь резус-положительная . При отсутствии реакции агглютинации в обеих сыворотках кровь - резус-отрицательная.

ПРИЛОЖЕНИЕ №5

Рисунок 1 Графическое изображение групп крови человека

Рис.2 Динамика иммуногематологических исследований образцов крови доноров в ГБУЗ «РСПК» за период 2011-2016 гг.



Рис.3 Распределение фенотипов эритроцитов по данным ГБУЗ РСПК и РФ

Рис.4 Распределение фенотипов А и АВ по данным ГБУЗ РСПК у доноров в РБ за период 201102016гг.



Рис.5 Распределение реципиентов с фенотипами А и АВ в 2013году.

Рис.6 Распределение реципиентов с фенотипами А и АВ в 2014 году.

Таблица 1

Серологический состав основных групп крови (система АВО)

Группы крови	Эритроциты	Плазма или сыворотка
	Агглютиногены	Агглютинины и гемолизины	Антиагглютинины
I (0) II (А) III (В) IV(АВ)	- А В АВ	б, в в б -	- А В АВ

Таблица 2

Таблица совместимости различных групп крови

Группа плазмы или сыворотки	Группа эритроцитов
	I (0)	II (А)	III (В)	IV (АВ)
I б, в II в III б IV -	- - - -	+ - + -	+ + - -	+ + + -

Таблица 3

Динамика иммуногематологических исследований образцов крови доноров в ГБУЗ «РСПК» РБ за период 2011-2016гг.

Годы	2011	2012	2013	2014	2015	2016	Всего
Обследовано доноров	35595	35469	29829	31425	27597	34419	194334
Определено показателей	111164	110827	112263	141273	152707	218711	1846945
Количество показателей у 1 донора	3,12	3,12	3,76	4,50	5,53	6,35	9,0

Таблица 4

Динамика иммуногематологических исследований образцов крови доноров в ГБУЗ «РСПК» РБ за период 2011-2016гг.

Годы	2011	2012	2013	2014	2015	2016	Всего
Обследовано доноров	35595	35469	29829	31425	27597	34419	194334
Определено показателей	111164	110827	112263	141273	152707	218711	1846945
Количество показателей у 1 донора	3,12	3,12	3,76	4,50	5,53	6,35	9,0

Таблица 5

Распределение фенотипов эритроцитов системы группы крови АВО у доноров Республики Башкортостан и по России

Фенотип крови	Данные ГБУЗ РСПК	Общероссийские данные
	Абс.	%	Абс.	%
О	10719	33,1	10716	33,5
А	10265	31,7	12057	37,8
В	8484	26,2	6539	20,5
АВ	2915	9,0	2594	8,1
Всего	32383	100	31896	100

Таблица 6

Доля доноров с подгруппой антигена А2 в 2011-2016гг.

Фенотип	2011	2012	2013	2014	2015	2016	Средние показатели
	Абс.	%	Абс.	%	Абс.	%	Абс.	%	Абс.	%	Абс.	%	Абс.	%
А	1952	14.0	1421	12.3	1731	17.9	1333	15.1	1328	13.1	1760	15.9	1526.7	14.7
АВ	700	19.4	602	19.5	549	20.1	373	13.9	571	19.1	633	19.8	576.0	18.6

Таблица 7

Индивидуальный подбор компонентов крови реципиентам со сллабым антигеном А2 в группах крови А иАВ за период 2013-2014гг.

Фенотип	2013	2014
	Число реципиентов.абс.(%)	Число реципиентов.абс.(%)
А	160 (54.05)	161 ( 63.1)
АВ	136 (45.95)	94 (36.86)
Всего	296	255

Размещено на Allbest.ru

...