Иммунохимические методы анализа
Характеристика иммунохимического метода анализа. Структура и свойства антигенов и антител. Гетерогенный и гомогенный метод иммуноферментного анализа, их практическое применение. Радиоиммунологический, иммуноцитохимический и иммуногистохимиеский анализ.
| Рубрика | Медицина |
| Вид | курсовая работа |
| Язык | русский |
| Дата добавления | 25.09.2017 |
| Размер файла | 1,2 M |
Отправить свою хорошую работу в базу знаний просто. Используйте форму, расположенную ниже
Студенты, аспиранты, молодые ученые, использующие базу знаний в своей учебе и работе, будут вам очень благодарны.
Для оценки интенсивности специфической флюоресценции бактериальных клеток используется четырех плюсовая шкала: «+++» и «+++» - очень яркая и яркая; «++» и «+» - выраженная и слабая ободочная, зеленая флюоресценция клеток.
Примеры реагентов: линия MONOFLUOKIT “Sanofi Pasteur” (Франция), выявление антигена - индикация возбудителей: аденовирусов, циомегаловируса, криптоспоридий, вирусов гриппа и вирусов парагриппа, ВИЧ 1 - 2, герпесвирусов 1 - 2, вирусов бешенства, респираторно-синцитиального вируса, легионелл, хламидий, микоплазм, уреаплазм, трепонем, риккетсий, плазмодий малярии, пневмоцист и токсоплазм. Отечественные реагенты РИФ для определения иерсиний чумы, псевдотуберкулеза, бруцелл, вирусов полиомиелита, вирусов гепатита А,Е,В,С,D, вирусов клещевого энцефалита , лихорадки денге и крымской геморрагической лихорадки, вируса бешенства. Диагностические наборы «С.Т.Д.-тест», для определения возбудителей инфекций, передаваемых половым путем: С.Т.Д.-тест- уреаплазма, С.Т.Д.-тест- микоплазма, С.Т.Д.-тест хламидия.
Серологические реакции с использованием специфических антител меченных флюорохромами прочно вошли в практику экспресс - диагностики вирусных и бактериальных инфекций, широко используются в идентификации микроорганизмов. Время исследования 1,5-2 часа.
6. Радиоиммунологический анализ (РИА)
В основе РИА лежит феномен конкуренции: связывание антител с антигеном, меченным радиоактивным изотопом, подавляется в присутствии немеченного антигена. Этот метод очень широко используется в лабораторной диагностике. С помощью РИА в биологических жидкостях определяют концентрации гормонов, факторов роста, ферментов, аутоантител, маркеров злокачественных новообразований и других веществ (например, лекарственных средств и наркотиков).
Принцип. В основе РИА лежит феномен конкуренции: связывание антител с антигеном, меченным радиоактивным изотопом, подавляется в присутствии немеченного антигена. Методика РИА проста и включает следующие основные этапы:
А. К раствору антител добавляют меченный антиген и пробу (содержащую неизвестное количество немеченного антигена). Концентрацию антител в реакционной смеси подбирают так, чтобы число мест связывания было намного меньше общего числа антигенов. Концентрация меченного антигена должна превышать максимальную возможную концентрацию антигена в пробе.
Б. Реакционную смесь инкубируют при определенной температуре. Меченный и немеченный антигены конкурентно связываются с антителами, при этом образуются иммунные комплексы, содержащие либо меченный, либо немеченный антиген. Таким образом, к концу инкубации в реакционной смеси присутствуют меченные и немеченные иммунные комплексы, а также свободные меченные и немеченные антигены. Количество меченных иммунных комплексов обратно пропорционально количеству немеченного антигена в пробе.
В. Чтобы оценить количество меченных иммунных комплексов, их надо отделить от свободного меченного антигена. Наиболее распространены два способа разделения:
1. К реакционной смеси добавляют вещество, повышающее ее плотность, например полиэтиленгликоль.
2. К реакционной смеси добавляют вещество с большой молекулярной массой, которое специфически связывается с антителами в составе иммунных комплексов. Для этого используют вторые антитела либо стафилококковый белок A.
В обоих случаях иммунные комплексы, имеющие большую молекулярную массу, чем свободные антигены, осаждают центрифугированием и измеряют радиоактивность осадка.
Г. Определяют концентрацию антигена в пробе по калибровочной кривой. Для ее построения используют несколько стандартных калибровочных растворов с известными концентрациями немеченного антигена.
Разработано множество вариантов РИА. Методика, описанная выше, называется жидкофазным РИА (все реагенты находятся в растворенном состоянии). Существует и твердофазный РИА, в котором антитела иммобилизируются на водонерастворимом носителе, например на полистироле. Особая разновидность метода -- иммунорадиометрический анализ, в котором используются меченные антитела, а не меченный антиген.
Принцип РИА распространяется и на другие иммунохимические и неиммунохимические методы анализа. Например, в ИФА вместо радиоактивного изотопа в качестве метки используют ферменты, а в иммунофлюориметрическом анализе -- флуоресцирующие вещества. В неиммунохимических методах роль антител выполняют реагенты, специфически связывающие определяемое вещество. Этими реагентами могут быть рецепторы гормонов или связывающие белки плазмы. Так, в радиорецепторном анализе тиреостимулирующих и тиреоблокирующих аутоантител используются очищенные рецепторы ТТГ, а для измерения уровня свободного T4 иногда применяется тироксинсвязывающий глобулин.
Все эти методы анализа называют методами конкурентного связывания.
7. Иммуноцитохимический и иммуногистохимиеский анализ
Иммуногистохимимческое исслемдование -- метод микроскопического исследования тканей, обеспечивающий наиболее специфическое выявление в них искомых веществ и основанный на обработке срезов маркированными специфическими антителами к выявляемому веществу, которое в данной ситуации служит антигеном. Впервые способ окрашивания клеточных и тканевых компонентов с помощью специфических антител для микроскопического исследования был предложен A. Coons с соавт. в 1941 году; позднее были разработаны антитела, меченные не флуоресцентными красителями, а ферментами.
Прямой иммуногистохимический метод основан на реакции специфического связывания маркированных антител непосредственно с выявляемым веществом:
Рис. 10 Схематичное изображение прямого гистохимического метода.
Непрямой иммуногистохимический метод является более чувствительным, основан на том, что немаркированные первичные антитела связываются с искомым антигеном (выявляемым веществом), а далее уже их выявляют при помощи вторичных меченых антител, при этом первичные антитела служат для вторичных антигенами.
Маркировка антител производится путём их связывания с одной из следующих групп веществ:
флуоресцентные красители (родамин, флуоресцеин);
ферменты (щелочная фосфатаза, пероксидаза хрена) -- далее выявляются гистохимически;
электронно-плотные частицы (коллоидное золото, ферритин)
Заключение
Иммунохимические методы анализа имеют большое знаение в биологии, медицине. Благодаря иммуноцитохимическим и имммуногистохимиеским методам определяют наличие онкологии у пациентов; иммунофлюоресцентный метод импользуют в диагностике туберкулеза и других инфекционных заболеваний. Особое место среди иммунохимических методов анализа занимает иммуноферментный анализ.
В ИФА сочетается уникальная специфичность иммунохимического анализа с высокой чувствительностью определения ферментной метки. Чувствительность метода (под чувствительностью подразумевают минимальное выявляемое количество антител или антигена) определяется следующими факторами: аффинностью антител, предпочтительнее использование моноклональных антител; специфической активностью фермента; интенсивностью сигнала; чувствительностью учета сигнала. Различные варианты ИФА различаются по своей чувствительности. Отдельные варианты твердофазного ИФА позволяют выявлять в образце единичные молекулы. Средняя чувствительность ИФА - 10-9 -10-12моль.
Размещено на Allbest.ru
...Подобные документы
Вирусные гепатиты с фекально-оральным и парентеральным механизмом передачи возбудителя. Методы диагностики вирусных гепатитов. Тест-системы для выявления антигенов и антител. Подготовка исследуемых образцов. Проведение иммуноферментного анализа.
дипломная работа [783,0 K], добавлен 08.04.2014Методы иммунного анализа в медицинской практике, взаимодействие антигена и антитела в его основе. Виды иммунного анализа в зависимости от типа метки и условий постановки теста. Характеристика компонентов, используемых в иммуноферментном анализе.
реферат [373,7 K], добавлен 07.11.2011Понятие эпидемиологического анализа как оценки состояния и тенденций развития эпидемического процесса. Осуществление оперативного анализа, его задачи. Смысл ретроспективного анализа. Структура эпидемического анализа. Необходимая для анализа информация.
презентация [88,1 K], добавлен 12.04.2014Использование лабораторного анализа для диагностики онкологических заболеваний и послеоперационного мониторинга эффективности операции и химиотерапии. Определение онкомаркеров методами иммуноферментного, иммунолюминесцентного и радиоиммунного анализа.
реферат [40,9 K], добавлен 09.10.2010Чужеродные для организма вещества (антитела), которые при попадании во внутреннюю среду способны вызывать образование специфических антител. Особенности функционирования бактериальных антигенов. Антигены эритроцитов человека. Основные свойства антигенов.
презентация [2,8 M], добавлен 22.12.2014Понятие потенциометрии как электрохимического метода анализа, ее применение. Ионометр, pH-метр: принципы работы, области и методы применения. Прямая потенциометрия (ионометрия) и потенциометрическое титрование. Преимущества потенциометрических методов.
презентация [1,5 M], добавлен 04.03.2016Критерии фармацевтического анализа, общие принципы испытаний подлинности лекарственных веществ, критерии доброкачественности. Особенности экспресс-анализа лекарственных форм в условиях аптеки. Проведение экспериментального анализа таблеток анальгина.
курсовая работа [46,1 K], добавлен 21.08.2011Иммунная электронная микроскопия. Схема иммуноферментного анализа. Полимеразная цепная реакция. Приборная база для применения метода полимеразной цепной реакции в лаборатории. Образование нуклеотидной цепи. Поражение вирусом Эпштейна-Барр, мононуклеары.
презентация [207,3 K], добавлен 04.02.2014Культуральные и биохимические свойства брюшного тифа. Характерные признаки сальмонелл. Основные факторы патогенности сальмонелл. Клиническая характеристика брюшного тифа. Методы диагностики и проведение анализа методом иммунофлуоресцентного анализа.
контрольная работа [1,0 M], добавлен 18.09.2013Взаимодействие химических соединений с электромагнитным излучением. Фотометрический метод анализа, обоснование эффективности его использования. Исследование возможности применения фотометрического анализа в контроле качества лекарственных средств.
курсовая работа [932,4 K], добавлен 26.05.2015Классификация лекарственных форм и особенности их анализа. Количественные методы анализа однокомпонентных и многокомпонентных лекарственных форм. Физико-химические методы анализа без разделения компонентов смеси и после предварительного их разделения.
реферат [50,2 K], добавлен 16.11.2010Распространенность и характер интоксикаций препаратов фенотиазинового ряда. Структурная формула, классификация и общая характеристика группы, физико-химические свойства. Объекты химико-токсикологического анализа, правила пробоотбора и методы анализа.
контрольная работа [15,2 K], добавлен 08.04.2010Изучение физико-химических методов анализа. Методы основанные на использовании магнитного поля. Теория методов по спектрометрии и фотоколореметрии в видимой области спектра. Спектрометрические и фотоколореметрические методы анализа лекарственных средств.
курсовая работа [4,3 M], добавлен 17.08.2010Получение антиидиотипических и моноклональных антител овцы межвидовым слиянием клеток. Области применения моноклональных антител и их методы получения. Применение эрлифтных ферментеров для получения антител. Система управления аффинной хроматографией.
реферат [286,8 K], добавлен 06.08.2009Создание кардиологических дистанционных консультативных центров на базе поликлиник, кардиодиспансеров, их цели и задачи. Организация системы регистрации, анализа и хранения ЭКГ с передачей информации на расстояние для последующего врачебного анализа.
методичка [10,5 M], добавлен 10.06.2013Состав, функции и основное предназначение крови в нашем организме. Резус-фактор. Антропология и группы крови. Система АВО и предрасположенность к болезням. Идентификация специфических антигенов и антител, применение двойного метода. Гемофилия и анемия.
реферат [38,7 K], добавлен 11.04.2014Пути заражения трихинеллезом. Симптоматика заболевания, стадии развития трихинелл в организме человека. Методы диагностики и иммуноферментного анализа. Миграционная, кишечная и мышечная фазы трихинеллеза. Лечение больных со всеми формами болезни.
презентация [1,3 M], добавлен 13.11.2016Теоретическое обоснование микрокристаллоскопического анализа. Влияние условий кристаллизации на продукты реакции. Описание методик микрокристаллоскопического анализа. Микрокристаллоскопический анализ на основе кристаллооптики, особенности его техники.
курсовая работа [6,6 M], добавлен 11.01.2017Специфические особенности фармацевтического анализа. Испытание на подлинность лекарственных препаратов. Источники и причины недоброкачественности лекарственных веществ. Классификация и характеристика методов контроля качества лекарственных веществ.
реферат [3,0 M], добавлен 19.09.2010Основные проявления взаимодействия антиген — антитело. Иммунологический анализ антигенов и антител с помощью меченых реагентов. Сущность активности комплемента. Методы определения эффекторных клеток. Трансгенные животные и направленная доставка генов.
реферат [20,3 K], добавлен 28.09.2009
