Научно-производственная разработка новых препаратов-синбиотиков и клинико-лабораторная оценка их эффективности

Рис. 13. Результаты определения количества жизнеспособных бифидобактерий на разных сроках хранения в препаратах с различными добавками при температуре 22-24 0С

Проведенные исследования показали, что Raftilosa Sinergy, так же, как и порошок топинамбура и яблочный пектин, оказывают стабилизирующее действие: в сочетании с ними препараты бактерий сохранялись дольше и проявляли устойчивость к температурным воздействиям в широком диапазоне температур. Наряду с этим, в смеси с Fibregum происходило быстрое отмирание клеток.

Таким образом, результаты исследований технологических параметров культивирования биомассы, разработка схемы культивирования консорциумов бифидобактерий, применение молекулярно-биологических методов для видовой идентификации и отбора штаммов, разработка режимов новых способов высушивания биомассы с целью ее консервации, изучение перспективных с позиций функциональной ценности для организма человека ингредиентов, послужили основанием к разработке оптимального состава препаратов-синбиотиков, предназначенных для различных возрастных групп людей.

5. Разработка рецептуры и технологической документации препаратов-синбиотиков

5.1 Серия «Бифидум-Мульти»

Основной задачей при конструировании биопрепаратов-синбиотиков «Бифидум-Мульти» было создание консорциумов бифидобактерий, которые доминируют в микробиоценозе ЖКТ различных возрастных групп людей и предопределяют функции нормальной микрофлоры. Исходя из алгоритма, разработанного в рамках данной работы, были созданы консорциумы для трех возрастных групп, как основы для серии препаратов:

1. Возрастная группа от рождения до 3 лет - «Бифидум-Мульти-1» - B. bifidum 1, B. bifidum 791, B. breve 79-119, B. breve 79-88, B. infantis 73-15, B. infantis 79-43, B. longum В379М.

2. Возрастная группа от 3 до 12 лет - «Бифидум-Мульти 2» для детей от 3 до 14 лет»- B. bifidum 1, B. bifidum 791, B. breve 79-88, B. infantis 79-43, B. longum В379М, B. longum Я-3.

3. Возрастная группа от 12 лет и старше - «Бифидум-Мульти 3» - B. bifidum 791, B. bifidum ЛВА-3, B. longum В379М, B. longum Я-3, B. adolescentis Г7513, B. adolescentis ГО-13.

Данные по изучению спектра биохимической активности, антибиотикорезистентности, антагонистических свойств, сроков сохранности свидетельствуют о том, что в консорциуму не только суммируется биологический потенциал отдельных штаммов, но и наблюдается синергидный эффект. Так, уровень антагонистической активности в консорциумах выше, чем у отдельных штаммов (табл.2)

Таблица 2 - Антагонистическая активность монокультур бифидобактерий и их консорциумов (зоны задержки роста тест-культур (в мм)

Объект исследования	S.sonnei5063	S.flexnery170	E.coli157	S.aureus 209	Pr. Vulgar.177
B. bifidum 1	15,0+2	17,2+3	14,5+1	27,1+2	16,8+4
B. bifidum 791,	16,7+3	15,3+2	15,1+3	14,5+1	17,3+2
B. bifidum ЛВА-3	16,2+2	16,9+1	15,5+2	13,8+1	16,0+3
B. breve 79-88	29,0+2	25,0+2	27+3	25+3	31+1
B. breve 79-119	30,5+1	27+2	29,5+2	30,1+1	28,4+1
B. infantis 79-43	11+1	12+1	16+2	12,5+2	16,5+2
B. infantis 7315	12,1+2	12+1	15,2+2	13,1+2	17,2+2
B. longum В379М	24,2+2	20,1+2	23,0+2	17,9+3	25,6+3
B. longum Я-3	21,3+3	19,8+1	24,2+2	19,0+1	27,1+2
B.adolescentis Г7513	23,2+2	25,5+3	27,2+2	27,5+2	25,7+1
B. adolescentis ГО-13	32,0+2	26,2+1	29,1+2	26,4+1	25,3+1
Консорциум от 0 до 3 лет	34+2	28,5+2	31+2	33,7+1	35+1
Консорциум от 3 до 12 лет	35,1+2	32,9+1	33,3+3	33,2+2	36,4+2
Консорциум для взрослых	35,5+1	36,2+2	34,8+2	35,7+1	35,6+1

Изучение биотехнологических и биологических свойств порошка из клубней топинамбура и яблочного пектина позволили выбрать эти вещества в качестве ингредиентов для включения в состав препаратов «Бифидум-Мульти-2» и «Бифидум-Мульти-3». В «Бифидум-Мульти-1» в качестве технологического и функционального ингредиента, рекомендуемого для детей младшего возраста, помимо биомассы бифидобактерий включен мальтодекстрин. Он состоит из глюкозы, олигосахаридов и солодового сахара, является легко перевариваемой формой углевода; способствует выработке организмом инсулина и широко применяется и рекомендуется к применению детям младшего возраста, в том числе, в составе питательных смесей для детей грудного возраста (Мухина Ю.Г, 2006, Хавкин А.И, 2007).

Формы выпуска также предусматривали удобство приема для пациентов разных возрастных групп:

Бифидум-Мульти-1 - порошок, дозируется мерной ложечкой 0,5 г ;

Бифидум -Мульти-2 - капсулы 0,25 г;

Бифидум-Мульти-3 - капсулы 0,4 г.

Высушивание биомассы производилась параллельно тремя способами - сублимационным, распылительным и в псевдоожиженном слое. Согласно разработанной рецептуре, были изготовлены экспериментально-производственные серии препаратов и заложены на хранение при 4+20С с периодической проверкой жизнеспособности бифидобактерий (рис. 14).

Рис. 14. Показатели содержания жизнеспособных бифидобактерий (КОЕ/г) при хранении

Показано, что во всех образцах бифидобактерии сохранялись в жизнеспособном состоянии без значимых потерь в течение 12 месяцев (при сравнении значений КОЕ/г в процессе хранения различия недостоверны, p>0,5). Препараты, включающие биомассу, высушенную сублимационным и распылительным методами, сохраняли высокие показатели числа КОЕ/г бифидобактерий в течение 18 месяцев, в псевдоожиженном слое - в течение 1 года (при содержании в 1 г готовой продукции не менее lg8), что соответствует требованиям СанПиН 2.3.2.1078-01. Таким образом, по сохранности биомасса распылительного высушивания не уступает высушенной сублимационно. Сроки хранения биомассы, высушенной сушкой-гранулированием в псевдоожиженном слое, также можно признать удовлетворительными.

5.2 Серия «Нормоспектрум®»

Одной из ведущих причин, приводящих к дефициту витаминов и минералов в организме, является нарушение микробной экологии человеческого организма, возникающее под влиянием целого ряда неблагоприятных факторов. Снижение уровня индигенной микрофлоры приводит к преимущественному размножению УПМ, конкурентному потреблению ими питательных субстратов, в том числе, витаминов и минералов, что еще более усугубляет состояние дисбиоза, с одной стороны, и приводит к дефициту микронутриентов, с другой. Продукты метаболизма патогенных микроорганизмов меняют кислотно-электролитный баланс среды, нарушают проницаемость кишечной стенки, нарушают метаболизм. Без восстановления внутреннего гомеостаза не происходит полноценного усвоения витаминов и минералов. Установлено, что циркуляция в организме и участие в сложных биохимических процессах находится под регулирующим влиянием микрофлоры пищеварительного тракта (Eckburg P.B.,2005, Шендеров Б.А., 2005, 2009). Микроорганизмы, присутствующие в кишечнике, оказывают прямое или опосредованное действие практически на все факторы, определяющие биоусвояемость поступающих в организм микронутриентов. В связи с этим целесообразно при дисбиотических состояниях использовать сочетанно микронутриенты и пробиотические микроорганизмы. Пробиотическая микрофлора повышает биодоступность микронутриентов и снижает дефицит витаминов и минералов, что, в свою очередь, должно способствовать более эффективному восстановлению индигенной микрофлоры и метаболитного баланса в организме.

Для решения данной задачи была разработана серия синбиотиков «Нормоспектрум» для разных возрастных групп людей. Их основой являются консорциумы бифидобактерий, комплементарные микробиоте ЖКТ различных возрастных групп людей и сконструированные в соответствии с алгоритмом, разработанным в ходе данной работы. В их состав были включены производственно значимые штаммы лактобацилл, витаминно-минеральный комплексом, инулином и олигофруктоза.

В качестве пробиотических составляющих были выбраны следующие штаммы бифидобактерий и лактобацилл из Государственной коллекции микроорганизмов нормальной микрофлоры ФГУН им.Г.Н.Габричевского Роспотребнадзора:

«Нормоспектрум для детей» - живые культуры (не менее 500 млн КОЕ/г): B. bifidum 1, B. bifidum 791, B. longum B379M, B. breve 79-88, B. infantis 79-43, L. plantarum 8-РА-3, L. acidophilus NK-1, L. casei КНМ-12;

«Нормоспектрум для взрослых и детей старше 14 лет» - живые культуры, не менее 500 млн - B. bifidum 1, B. bifidum 791, B. longum B379M, B. longum Я-3, B. adolescentis ГО-13, L. plantarum 8-РА-3, L. acidophilus NK-1, L. acidophilus К3ш24, L. casei КНМ-12.

В препарат был включен витаминно-минеральный комплекс: -Витамин Е (токоферол), -Витамин В1 (тиамин), - Витамин В2 - рибофлавин, - Витамин В6 - пиридоксин, - Витамин В12 - кобаламин, - Витамин Вс - фолиевая кислота, - Витамин В5 - пантотеновая кислота, - Витамин РР - ниацинамид, - Витамин Н - биотин, - Витамин С - аскорбиновая к-та, -Цинк, -Селен.

Содержание суточной дозы витаминно-минерального премикса, вводимой в препараты, составляет, в соответствии с рекомендациями Института Питания РАМН, 30-50% от суточной нормы потребления и зависит от возраста (Спиричев В.Б., 2000, Коденцова В.М., 2006).

Формы выпуска также предусматривают удобство приема для пациентов разных возрастных групп:

- «Нормоспектрум для детей от 1 до 3 лет» - порошок, дозируется мерной ложечкой по 0,5 г ;

- «Нормоспектрум для детей от 3 до 14 лет» - капсулы 0,25 г;

- «Нормоспектрум для взрослых и детей старше 14 лет» - капсулы - 0,34 г.

Были изготовлены, согласно рецептуре, экспериментально-производственные серии препаратов и заложены на хранение при 4+20С с периодической проверкой жизнеспособности бифидобактерий и лактобацилл (рис.15 и 16).

Рис.15. Показатели содержания жизнеспособных бифидобактерий и лактобацилл (КОЕ/г) при хранении в препарате «Нормоспектрум для детей»

Рис.16. . Показатели содержания жизнеспособных бифидобактерий и лактобацилл (КОЕ/г) при хранении в препарате «Нормоспектрум для взрослых»

Было установлено, что во всех образцах бифидобактерии и лактобациллы сохранялись в жизнеспособном состоянии без значимых потерь в течение 18 месяцев (при сравнении значений КОЕ/г в процессе хранения различия недостоверны, p>0,5).

Исследования, проведенные в аккредитованных лабораториях, подтвердили соответствие разработанных продуктов требованиям основных нормативных документов - СанПин 2.3.2.1078-01 «Гигиенические требования к качеству и безопасности продовольственного сырья и пищевых продуктов» и СанПиН 2.3.2.1290-03 «Гигиенические требования к организации производства и оборота БАД» по показателям специфической активности, санитарно-бактериологической и физико-химической безопасности.

Разработаны технические условия «ТУ 9197-003-38989935-03, БАД к пище «Бифидум-Мульти», «ТУ 91979197-005-38989935-05, БАД к пище «Нормоспектрум», технологические регламенты производства, проекты потребительских этикеток и рекомендации по применению. Разработанная документация и образцы продукции были представлены на экспертизу в Институт питания РАМН и Центр «Экспертиза» Роспотребнадзора. После получения положительного решения данная продукция зарегистрирована в Государственном реестре биологически активных добавок к пище, как средства для нормализации микрофлоры и функционального состояния ЖКТ - дополнительные источники пробиотических микроорганизмов; Нормоспектрум, кроме того, как источник витаминов, цинка и селена.

6. Использование разработанных препаратов-синбиотиков в различных областях профилактической и восстановительной медицины

Для оценки эффективности препаратов-синбиотиков и подтверждения заявленной концепции был проведен ряд исследований в различных областях профилактической и восстановительной медицины на базе клинических стационаров, в амбулаториях, в детских дошкольных учреждениях. В исследование были включены пациенты различных возрастных групп. Контрольные группы оставляли пациенты, принимавшие препараты моновидового состава.

Первоначально было проведено изучение эффективности и безопасности «Нормоспектрума для взрослых» и «Бифидум-Мульти-3» у взрослых с вторичными дисбиозами, возникшими на фоне острых и хронических заболеваний ЖКТ; исследования проводились на базе КИП № 1 г.Москвы.

Под наблюдением находилось 65 взрослых больных обоего пола. Все пациенты принимали базовую терапию. Для коррекции дисбиотических нарушений, возникших на фоне основного заболевания, пациенты были разбиты на группы: две опытные группы: 25 пациентов принимали «Нормоспектрум для взрослых», 20 - «Бифидум-Мульти-3»; 20 пациентов (контрольная группа) получали моновидовой препарат «Бифидумбактерин». Все препараты принимались 2-3 раза в день в течение 2-3 недель во время еды.

У всех обследованных после курса принимаемых препаратов отмечались положительные сдвиги в состоянии микробиоценоза кишечника и купирование симптомов дисбактериоза. При этом в группах пациентов, принимавших «Нормоспектрум» и «Бифидум-Мульти-3», эти показатели были достоверно выше, чем в группе контроля, в которой был назначен «Бифидумбактерин». Аллергических реакций не было отмечено, препараты хорошо переносились больными.

Клинико-лабораторные исследования подтвердили экспериментальные данные о преимуществах в антагонистической активности препаратов комплексного состава. Хорошая переносимость и отсутствие аллергических проявлений можно аргументировать большим содержанием гидролаз в консорциумах, что способствует более полному расщеплению белков и лучшему их усвоению.

Полученные результаты позволили расширить спектр исследований и возрастные границы обследуемых пациентов.

Так, результаты исследования БАД «Бифидум-Мульти-1» в перинатологии с целью профилактики эндогенных и экзогенных инфекций показали, что у детей группы высокого инфекционного риска применение «Бифидум-Мульти-1» способствовало формированию микробиоценоза с более высоким содержанием основных представителей нормофлоры - бифидобактерий, лактобацилл, кишечной палочки с нормальной ферментативной активностью и в более ранние сроки, чем это отмечалось после приема препарата «Бифидумбактерин» (рис. 17). бифидобактерии (109) лактобациллы (109)

Рис. 17. Сравнительные показатели содержания КОЕ/г бифидобактерий и лактобацилл у детей групп риска по развитию ГСГИ после приема препаратов

Более высокие показатели содержания бифидобактерий к 5-6 дню были отмечены у подавляющего большинства детей, получавших «Бифидум-Мульти-1» (75%), в то время как в группе контроля таких детей было 16,7%. Лактобациллы в основной группе также встречались в более высоких концентрациях, чем в контроле (на 3 сутки - 106,2+0,4 КОЕ/г в основной группе и 104,6+0,3 КОЕ/г в контроле, на 5-6 сутки - 108,1+0,3 КОЕ/г в основной группе и 106,9+0,3 КОЕ/г в контроле). При этом число новорожденных основной группы, у которых выделялись лактобациллы. составляло 45,9%; в контрольной группе этот показатель составил 20,8%.

Колонизация кишечника условно патогенной флорой была менее выражена у новорожденных, получавших «Бифидум-Мульти-1» (Рис.18)

Рис. 18. Колонизация кишечника условно- патогенной флорой у детей групп риска после приема препаратов

Как следствие этого, уменьшалась интоксикация, что проявлялось в более ранней нормализации показателей гемограммы. Перекрест в лейкоцитарной формуле в основной группе детей происходил раньше, реже отмечались аллергические проявления в виде неонатальной токсической эритемы.

Данное исследование показало, что применение БАД «Бифидум-Мульти-1» у новорожденных детей группы высокого перинатального инфекционного риска способствует более благоприятному протеканию периода адаптации, чем после применения однокомпонентного препарата «Бифидумбактерин», за счет раннего формирования микробиоценоза кишечника с высокими количественными показателями содержания основных представителей нормальной микрофлоры.

Исследования, проведенные в стационаре гастроэнтерологического профиля, показали, что у детей в возрасте 2 - 18 месяцев, получавших «Бифидум-Мульти-1», клинические проявления нарушения пищеварения в виде срыгиваний, метеоризма, кишечных колик, запора, нарушения характера стула, купировались на 2-7 дней раньше, чем у пациентов контрольной группы, получавших альтернативные бактерийные препараты (рис.19).



Рис.19. Динамика клинических симптомов нарушений функции пищеварения у детей основной и контрольной групп (день терапии)

Положительная клиническая динамика способствовала повышению массо-ростовых показателей у детей основной группы. В среднем за период наблюдения прирост массы составил 435,0+65,3 г, прирост роста - 0,57+0,12 см. Та же закономерность касалась повышения уровня гемоглобина и эритроцитов в крови.

Исследование микробного пейзажа толстой кишки так же выявило положительные изменения у обследованных детей (рис.20). Так, у детей на фоне приема «Бифидум-Мульти-1» отмечалось статистически значимое повышение содержание бифидобактерий (р<0,05), также зарегистрировано уменьшение удельного веса условно-патогенной флоры.



1	Дефицит бифидобактерий	5	Лактозонегативн. кишечн. пал.
2	Стафилококки	6	Энтерококк
3	Гемолизир. кишечная пал.	7	Грибы рода Candida
4	lac+. кишечн.палочка	8	Клебсиелла
		9	Синегнойная палочка

Рис. 20. Сравнительная характеристика микробного пейзажа толстой кишки у детей до и после приема «Бифидум -Мульти-1» (в процентах)

Таким образом, сравнение клинико-лабораторных показателей основной и контрольной групп показало, что применение синбиотика «Бифидум-Мульти-1» способствовало существенно более раннему восстановлению функционального и микроэкологического статуса ЖКТ детей.

В отделении детских инфекций МИБ № 1 было проведено изучение корригирующего влияния синбиотика «Нормоспектрум для детей» (всего 45 детей) на клинической состояние и микробиоценоз ЖКТ у детей с дисбактериозом кишечника, возникшем на фоне других заболеваний. Возрастной диапазон пациентов был от 1 до 14 лет. Группу контроля составляли дети, принимавшие «Бифидумбактерин» (46 детей). Все группы были сопоставимы по возрасту пациентов, тяжести заболевания, срокам начала лечения, а также по характеру дисбиотических нарушений.

Клинические наблюдения за больными, получавшими «Нормоспектрум», позволили выявить его более выраженное положительное действие по сравнению с контрольной группой, которое проявлялось в более раннем уменьшении явлений желудочно-кишечного дискомфорта и нормализации стула (рис. 21).

При наличии диарейного синдрома у детей к 3-4 дню от начала лечения уменьшалась кратность стула, улучшалась его консистенция, исчезали патологические примеси в фекалиях. У детей с функциональными запорами, начиная с 6-8 дня, стул становился регулярным. У части больных наблюдалось восстановление аппетита к 4,8±0,4 дню от начала терапии, уменьшение явлений метеоризма к 2,8±0.4 дню.

Рис. 21. Функциональное состояние ЖКТ после приема препаратов

Изучение кишечной флоры в динамике показало, что после курса применения БАД «Нормоспектрум» у наблюдавшихся детей выявлено достоверное уменьшение доли пациентов с дисбактериозом кишечника II-III степени с 82, 5±7,9% до 32,5±7,4 %, возрастанием числа детей с I степенью дисбактериоза с 7,5,0±6,0 % до 52,5±7,8 %. У 15,0±5,6 % пациентов отмечалась нормализация показателей микрофлоры кишечника (разница показателей достоверна, р<0,05).

В контрольной группе применение «Бифидумбактерина» также сопровождалось улучшением состояния кишечной микрофлоры, что выражалось увеличением числа детей с дисбактериозом кишечника I степени с 4,3±4,2 % до 26,0±9,1%) и уменьшением доли детей с дисбактериозами II степени с 95,7±4,2% до 65,2±9,9% (р<0,05). Однако, в отличие от основной, у 26,1±9,1% детей контрольной группы сохранялись дисбиотические нарушения III степени.

Применение «Нормоспектрума» у большинства детей повышало содержание как бифидобактерий, так и лактобацилл, при этом выявлена более выраженная положительная динамика на фоне применения препарата в основной группе (рис. 22, 23).

до приема после приема

Рис.22. Содержание бифидобактерий в фекалиях обследованных детей



Рис.23. Содержание лактобацилл в фекалиях обследованных детей до и после приема препаратов

Параллельно росту содержания бифидобактерий в микрофлоре кишечника под влиянием «Нормоспектрума» наблюдался рост нормальных эшерихий (рис.24). Достоверно снижалось число детей с дефицитом кишечной палочки ниже 300 млн/г фекалий и повышалось число детей с их нормальным содержанием.



до приема после приема

Рис.24. Содержание эшерихий в фекалиях обследованных детей

Существенным результатом применения «Нормоспектрума» явилась элиминация условно-патогенных бактерий, в том числе S.aureus и грибов рода Candida, что согласуется с данными других авторов о достоверно более эффективном ингибировании роста клинических штаммов С.albicans препаратами, содержащими лектины бифидобактерий и лактобацилл, чем препаратами одних лактобацилл (Лахтин В.М., 2009).

Обсеменённость УПМ и грибами под влиянием «Нормоспектрума» снизилась в 2,5 раза, в то время как в контрольной группе - в 1,7 раза (рис. 25).

Рис.25. Обсемененность кишечника условно-патогенными бактериями и грибами в основной и контрольной группах (до и после приема препаратов)

Таким образом, эффективность препарата «Нормоспектрум», проявляющееся в коррекции кишечную микрофлоры и нормализующем влиянии на функциональные расстройства со стороны ЖКТ, значительно превышает таковую при использовании препарата «Бифидумбактерин».

Известно (Куваева И.Б., 1991, Коршунов В.М., 2000, Ефимов Е.И., Соколова К.Я., 2004, Дубровская М.И, 2006, Ezindam J., 2008, Bailey., 2009), что микрофлора кишечника выполняет главенствующую роль в формировании как системного иммунитета, так и иммунной системы, ассоциированной с лимфоидной тканью желудочно-кишечного тракта. Являясь самым значимым биотопом в макроорганизме и выполняя роль своеобразного биосорбента, он связан как с внешней средой, так и находится во взаимодействии со всеми остальными биотопами. Ведущая роль микрофлоры кишечника сказывается на состоянии колонизационной резистентности других биотопов, в частности, ротоглотки. Поэтому при организации профилактических мероприятий по снижению заболеваемости, прежде всего, детской, острыми респираторными инфекциями различной этиологии напрашивается вывод о необходимости проведения обязательной коррекции микрофлоры желудочно-кишечного тракта. С этой целью были использован синбиотик для детей возрастной группы от 3 до 12 лет «Бифидум-Мульти-2».

Исследования проводились в период повышенной сезонной респираторной заболеваемости в 3-х территориально не связанных детских садах. У всех детей одновременно были проведены бактериологические исследования ротоглотки и кишечника. Анализ состояния микрофлоры ротоглотки у детей показал, что оно коррелировало с показателями респираторной заболеваемости: если в анамнезе присутствовали сведения о перенесенных накануне ОРВИ, тонзиллите и пр., в микрофлоре ротоглотки этих детей обнаруживались дисбиотические изменения - золотистый стафилококк с интенсивным обсеменением (105 - 106), а также наличие ассоциаций микроорганизмов, несвойственных данному биотопу (эшерихий, клебсиелл, псевдомонад, грибов рода Candida) (табл.3).

Таблица 3 - Частота обнаружения различных бактерий на слизистой ротоглотки

Бактерии	Детский сад №1 N=39 , Абс., (%)	Детский сад №2 n=29, Абс. (%)
Streptococcus spp., 5-7 lg КОЕ/мл, в том числе в кол-ве 8 lg КОЕ/мл	39 (100) 1 (2,5)	28 (96,6) 1 (3,4)
Neisseria spp. 5-7 lg КОЕ/мл	39 (100)	28 (96,6)
Staphylococcus spp., в том числе S. aureus 5-6 lg КОЕ/мл	12 (30,8) 8 (20,5) 3 (7,6%)	11 (37,9) 8 (37,6) 3 (10,3)
E. coli	-	3 (10,3)
Klebsiella spp.	1 (2,5)	1 (3,4)
P. aeruginosa	-	2 (6,8)
Candida albicans	-	1 (3,4)

В табл. 4 представлены показатели состояния микробиоты ЖКТ у наблюдавшихся детей, которые также носили дисбиотический характер.

Таблица 4 - Показатели микробиоты кишечника у наблюдавшихся детей

Бактерии	Детский сад №1 n=39, Абс., (%)	Детский сад №2 n=29, Абс., (%)
Bifidobacterium ниже 8 lg КОЕ/г	3 (7,6)	2(6,8)
Lactobacillus ниже 6 lg КОЕ/г	8 (20,5)	4 (13,8)
Общее количество Е. coli ниже 7 lg КОЕ/г	7 (17,9)	5 (17,2)
Е. coli Lac-*	10 (25,6)	8 (27,6)
Е. coli Hly+**	10 (25,6)	11 (37,9)
Грамотрицательные энтеробактерии	4 (10,3)	2 (6,8)
Staphylococcus spp. в том числе S. aureus	9 (23,1) 7 (17,9)	8 (27,6) 6 (20,1)
Candida albicans	3 (7,6)	3 (10,3)

Таким образом, нарушения в обоих биотопах носили количественный и качественный характер, проявлялись одновременно, но имея присущую каждому специфику. Однако, были отмечены также группы микроорганизмов, одновременно встречающиеся в обоих биотопах (рис.26).



Рис. 26. Частота обнаружения стафилококков, грибов и энтеробактерий на биотопах ротоглотки и кишечника и частота совпадения выделенных культур

Обследованные дети были разделены на две подгруппы. Одной из них назначали синбиотик «Бифидум-Мульти-2» в течение 14 дней. Вторая подгруппа, не получавшая препарат, служила группой сравнения.

По окончании приема препарата в течение трех месяцев продолжалось наблюдение за детьми: регистрировались случаи заболеваемости ОРВИ, особенности клинических проявлений заболевания, частота возникновения осложнений, случаи назначения антибиотиков, а также учитывалось число дней, пропущенных ребенком из-за болезни.

Результаты сравнительного наблюдения за детьми, получавшими и не получавшими синбиотик «Бифидум-Мульти-2», наглядно свидетельствовали о существенно более низком уровне заболеваемости ОРВИ, облегченном их течении после курса приема препарата, в то время как в группе сравнения был зарегистрирован высокий уровень заболеваемости, зачастую с осложненным течением, отмечены интеркурентные заболевания. Период болезни длился значительно дольше и, соответственно, было больше пропущено дней. На этом фоне сравнение результатов первичного и повторного бактериологического обследования группы детей, не принимавших «Бифидум-Мульти-2», показал отрицательную динамику в состоянии микрофлоры ротоглотки и кишечника.

Существенным результатом применения «Бифидум-Мульти-2» явилось снижение уровня кишечной палочки с атипичными свойствами: в группе, принимавшей «Бифидум-Мульти-2» на 61,7 %, в то время, как в контрольной группе этот показатель снизился только на 9,7 % (р>0,001).

Полученные результаты подтвердили тот факт, что состояние микрофлоры желудочно-кишечного тракта играет исключительно важную роль в защите от различных инфекций, а проведенное исследование показало, что применение синбиотика «Бифидум-Мульти-2», улучшающего состояние микрофлоры кишечника и ротоглотки, приводит к снижению уровня заболеваемости детей в детском коллективе.

Целью следующего исследования, проведенного на базе онкологической клинической больницы № 62 г. Москвы, был выбор наиболее рациональной и эффективной схемы предоперационной подготовки и послеоперационного ведения больных колоректальным раком, применение которой позволило бы достоверно снизить уровень госпитальных гнойно-септических инфекций у этой категории больных.

С этой целью был апробирован синбиотик «Нормоспектрум для взрослых». В исследование были включены четыре группы сравнения: 1) - пациенты получали стандартные предоперационную подготовку и ведение в послеоперационном периоде; 2) - пациенты, принимавшие сорбент «Ирмалакс; 3) пациенты, получавшие сорбент в сочетании с «Бифидумбактерином»; 4) пациенты, получавшие сорбент в сочетании с «Нормоспектрумом».

Послеоперационный период у 59 (30%) пациентов из 200 наблюдаемых нами больных с колоректальным раком осложнился развитием той или иной нозологической формы ГГСИ.

Анализ частоты встречаемости случаев ГГСИ в каждой из сформированных нами группе больных, представлен на рис.27.



Рис. 27. Частота встречаемости случаев заболевания в зависимости от схемы профилактики

Наиболее часто инфекционные осложнения в послеоперационном периоде встречались у больных из контрольной группы, которым проводилась лишь стандартная подготовка к операции - у 60 %. Во второй группе, частота осложнений снизилась в два раза, в третьей - в три раза по сравнению с первой группой. Самая низкая частота встречаемости инфекционных осложнений в послеоперационном периоде больных с колоректальным раком была в четвертой группе, где применялся препарат - синбиотик «Нормоспектрум. Разница в частоте встречаемости инфекционных осложнений у пациентов из первой и четвертой опытной групп составляла 4, 5 раза (p<0,01).

Эффективность данной схемы обусловлена нормализацией микроэкологии толстой кишки, наступающей благодаря высокой эффективности биопрепарата «Нормоспектрум», входящего в данную схему. В «Нормоспектрум», помимо штаммов - представителей нормальной микрофлоры входит витаминно-минеральный комплекс, восполняющий их дефицит и активизирующий иммунную систему и нормализующий обмен веществ в организме больного.

Проводя коррекцию дисбактериоза, мы тем самым повышаем колонизационную резистентность организма пациента к эндогенной и экзогенной условно - патогенной микрофлоре - этиологическому агенту ГГСИ. В данном исследовании «Нормоспектрум» проявляет свойства статика и консерванта метаболизма толстого кишечника, что можно рассматривать как новое, важное направление экстремальной медицины.

Таким образом, «Нормоспектрум» является новым препаратом - синбиотиком с широкими показаниями для профилактики и лечения госпитальных инфекций у онкологических больных. Это подтвердил и опыт применения «Нормоспектрума для взрослых» в лечении больных злокачественными лимфопролиферативными заболеваниями. Его включение в схему стандартного химио-лучевого лечения больных из опытной группы оказало положительное влияние на динамику астеновегетативного, абдоминального болевого синдрома и симптомы поражения кишечника по сравнению с контрольной группой, что говорит о целесообразности его назначения больным с онкогематологической и другой онкологической патологией в ходе лечения - проведения лучевой и полихимиотерапии, а также целесообразно их использование в восстановительных программах этой значительной группы больных.

Подводя итог проведенной работе, можно констатировать, что клинические наблюдения за применением новых препаратов-синбиотиков «Бифидум-Мульти» и «Нормоспектрум» в различных областях профилактической и восстановительной медицины продемонстрировали их выраженную лечебно-профилактическую эффективность, оцениваемую по совокупности клинико-лабораторных показателей. Сопоставление с препаратами моновидового состава, составлявшими группы сравнения во всех проведенных клинических исследованиях, подтвердило неоспоримые преимущества выбранного подхода - применение для коррекции микроэкологических нарушений консорциумов микроорганизмов нормофлоры в сочетании с функционально значимыми ингредиентами - ФОС, пектином, витаминами и минералами. Особенно важно то, что препараты можно применять целенаправленно для разных возрастных групп людей, обеспечивая индивидуализацию подхода к коррекции микрофлоры и повышая ее эффективность. 

ВЫВОДЫ

1. Изучены технологические, пробиотические и молекулярно-биологические свойства бифидобактерий и произведен отбор промышленно-перспективных штаммов, относящихся к видам, доминирующим в микробиоценозе ЖКТ человека.

2.Разработан метод совместного культивирования высокоэффективных и технологичных штаммов бифидобактерий разных видов с целью получения устойчивых консорциумов - основы для препаратов нового поколения. Показано, что в консорциуме не только суммируются количественные (число КОЕ/мл бифидобактерий) и качественные (индивидуальные свойства штаммов) показатели, но проявляется синергидный эффект, что подтверждалось усилением антагонистической активности и повышением устойчивости при хранении по сравнению с отдельными культурами.

3.Разработаны методические подходы, подобраны питательные и защитные среды, технологические добавки (порошок топинамбура, цикория, яблочный пектин), позволяющие использовать современные методы высушивания - распылительную сушку при низкой температуре теплоносителя и сушку-гранулирование в псевдоожиженном слое - для получения биомассы пробиотических микроорганизмов с высокой степенью жизнеспособности, устойчивости к длительному хранению в широком диапазоне температур.

4. Предложен новый концептуальный подход к конструированию и назначению препаратов нормофлоры целевого назначения пациентам разных возрастных групп, основанный на видах бифидобактерий, доминирующих в микробиоценозе этих возрастных категорий: у детей от рождения до 3-х лет: B.infantis, B.breve, B.bifidum, B.longum, у детей от 3 до 14 лет - B.breve, B.bifidum, B.longum, у подростков и взрослых - B.bifidum, B.longum, B.adolescentis.

5.На основе предложенного принципа рецептуростроения и новых технологических приемов разработаны и зарегистрированы в Федеральном реестре Роспотребнадзора препараты-синбиотики нового поколения «Бифидум-Мульти» и «Нормоспектрум» для разных возрастных групп людей, сочетающие в себе устойчивые консорциумы бифидобактерий, лактобациллы и функциональные добавки, оказывающие метаболический, иммуностимулирующий и защитный эффект.

6. При использовании в различных областях профилактической и восстановительной медицины у пациентов, относящихся к разным возрастным группам: у новорожденных высокого риска развития эндо- и экзогенных инфекций (61 ребенок), детей с нарушениями пищеварения (26 детей), пациентов с вторичными дисбиозами после перенесенных заболеваний (68 детей и 65 взрослых), часто болеющих детей в детских дошкольных учреждениях (90 детей), онкобольных хирургического отделения с высоким риском развития инфекционных осложнений (200 больных) - была подтверждена высокая эффективность, безвредность синбиотиков «Бифидум-Мульти» и «Нормоспектрум», а также доказано их преимущество по клиническим и лабораторным показателям перед аналогичными препаратами моновидового состава.



СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

Журналы, рекомендованные ВАК РФ

1. Островский В.Г., Шеремет С.П., Амерханова А.М. Получение сухих гранулированных микробиологических препаратов по конверсионной технологии. // Конверсия в машиностроении - 2003. - №5.- С.6-10.

2. Амерханова А.М., Лаврова А.Е., Дмитриева Г.В., Пырикова И.А., Зубкова Е.С., Жиленкова О.Г., Кураленко А.А. Опыт применения БАД к пище «Бифидумбактерин Мульти» в педиатрической практике. // Вестник Российской АМН. - № 12. - 2005. - С.30-32.

3. Амерханова А.М., Пономарева Л.П., Анкирская А.С., Бондарь О.Е., Лисунова С.А., Фурсова С.А., Жиленкова О.Г., Зубкова Е.С., Кураленко А.А. Новые биопрепараты-синбиотики и их использование в неонаталогии с профилактической целью. // Вопросы детской диетологии. - М.- 2006. - Т.4.-№ 4. - С.66-69.

4. Карзанова М.В., Воронина О.Л., Лунин В.Г., Жиленкова О.Г., Амерханова А.М. Определение видовой принадлежности штаммов бифидобактерий на основе секвенирования фрагментов генов 16S pРНК и трансальдолазы .//Сборник докладов Россельхозакадемии. - М. - 2006. - № 5. - С.9-12.

5. Амерханова А.М., Алешкин В.А., Грачева Н.М., Петрова М.С., Попова О.П., Зубкова Е.С., Жиленкова О.Г., Кураленко А.А., Соловьева А.И. Принципы конструирования препаратов-синбиотиков и оценка их клинической эффективности. // Вестник Российской АМН. - 2006. - № 6. - С.38-45.

6. Феклисова Л.В, Амерханова А.М., Жиленкова О.Г, Мескина Е.Р., Воропаева Е.А., Пожалостина Л.В., Зубкова Е.С., Кураленко А.А., Моисеева К.Д. Возможности применения синбиотиков для снижения заболеваемости часто болеющих детей, посещающих дошкольные учреждения. //Вопросы практической педиатрии. - М.-2007.- т.2.-№ 6.- С.53-59.

7. Амерханова А.М., Алешкин В.А., Митрохин С.Д., Соколов А.А., Жиленкова О.Г., Лисунова С.А., Зубкова Е.С., Кураленко А.А.. Возможности использования препарата Нормоспектрум в профилактике госпитальных гнойно-септических осложнений у больных колоректальным раком. // Инфекционные болезни. - М.- 2007. - том 5.- № 1.- С.3-6.

8. Воронина О.Л., Кунда М.С., Субботина М.Е., Жиленкова О.Г., Амерханова А.М., Афанасьев С.С., Алешкин В.А. Анализ видового разнообразия бифидофлоры и влияние синбиотика «Бифидум-Мульти-1» на становление и развитие бифидобактерий у детей раннего возраста. // Вопросы детской диетологии. М.- 2008.- т.6 - № 5.- С.59-64.

Другие издания

9. Амерханова А.М., Алешкин В.А. БАДы «Полибактерин» - новые препараты-пробиотики. //Материалы IV Международного симпозиума «Биологически активные добавки к пище: ХХI век». - С-Петербург. - 2000. - С.8-9.

10. Бандоян А.К., Амерханова А.М., Алешкин В.А. Новые подходы к конструированию препаратов-пробиотиков на основе бифидобактерий. // Cборник статей «Проблемы инфекционных болезней». - М. - 2000. - ч.2. - С.284-286.

11. Амерханова А.М., Алешкин В.А., Шендеров Б.А. Комплексные препараты-пробиотики, моделирующие микробиоценоз людей различных возрастных групп. // Cборник трудов Европейского конгресса по астме. - М.-2001.- т.2. - № 1.- С.259-260.

12. Алешкин В.А., Амерханова А.М., Бандоян А.К., Бояркина Л.А. Новые подходы к конструированию препаратов-пробиотиков. //Сборник материалов IV Международной конференции «Пожилой больной. Качество жизни». - М. - 2001.- т.7. - № 8. - С.74-75.

13. Амерханова А.М., Бандоян А.К., Бояркина Л.А., Хачатрян Г.В. Использование топинамбура в составе препаратов и продуктов пробиотической направленности. //Сборник материалов IV Международная конференция «Пожилой больной. Качество жизни». - М. - 2001.- т.7. - № 8. - С.75.

14.Амерханова А.М., Бандоян А.К., Бояркина Л.А., Зубкова Е.С., Кононков П.Ф., Гинс М.С., Кропова Ю.Г., Гинс В.К. Использование растительного сырья в составе препаратов и продуктов пробиотической направленности. //Сборник материалов IV Международной научно-технической конференции «Пища, экология, человек». - М. - 2001.- С. 75-76.

15. Зубкова Е.С., Амерханова А.М., Гинс В.К. Растение амарант - перспективное сырье для продуктов функционального питания. //Сборник материалов международной конференции «Пробиотические микроорганизмы - состояние вопроса и перспективы использования». - М.- 2002. - C.76-77.

16.Хачатрян Г.В., Амерханова А.М., Бандоян А.К. Поиск методических подходов к оптимизации глубинного культивирования бифидобактерий.

//Сборник материалов международной конференции «Пробиотические микроорганизмы - состояние вопроса и перспективы использования». - М.- 2002. - С.69-70.

17. Амерханова А.М., Астафьев Е.И., Коновалов Н.А., Хачатрян Г.В., Бояркина Л.А., Хачатрян А.В., Зубкова Е.С. Разработка технологии получения сухой формы бифидумбактерина распылительным методом высушивания. // Там же - C.67-68.

18. Алешкин В.А., Тихонова Н.Т., Амерханова А.М., Левченко Т.А. Новое направление бактериотерапии - комплексные препараты - пробиотики. // Там же - C.47.

19. Амерханова А.М. Бифидобактерии - история вопроса, основные итоги изучения, перспективы использования (в аспекте деятельности лаборатории биологии бифидобактерий ГУ «МНИИЭМ им.Г.Н.Габричевского МЗ РФ»).// Там же - C.6-8.

20. Амерханова А.М. Комплексные фитопробиотики. //Парафармацевтика.- 2002. - № 10. - С.17-18.

21. Амерханова А.М., Поспелова В.В., Манвелова М.А. Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им.Г.Н.Габричевского - основоположник концепции бактериотерапии. //Сборник «Новые лекарственные средства». - М. -2003. - № 7. - С.3-8.

22. Грачева Н.М., Петрова М.С., Москалева Т.Н., Амерханова А.М., Соловьева А.И., Зубкова Е.С., Маркелова В.П., Звонарева С.В. Новые препараты «Бифидумбактерин-Мульти» в практике лечения дисбактериозов кишечника у детей. // Материалы VII всероссийского конгресса «Здоровое питание населения России». - М. - 2003. - т.1.- С.137-139.

23. Амерханова А.М., Грачева Н.М., Петрова М.С., Москалева Т.Н., Гаврилов А.Ф., Аваков А.А., Зубкова Е.С., Соловьева А.И. Дисбактериоз и индивидуализация коррекции микрофлоры. // Сборник докладов симпозиума «Функциональное питание, пищевая безопасность и здоровье людей в условиях мегаполиса». М. - 2003.- С.34-38.

24. Амерханова А.М. Дифференцированный подход к возрастным группам больных - залог эффективного применения пробиотических средств. // Новые лекарственные средства. - М. - 2003. - №7. -С. 9-12.

25.Алешкин В.А., Шендеров Б.А., Афанасьев С.С., Амерханова А.М., Поспелова В.В. Пробиотики и интерферон в поддержании здоровья населения. //Сборник материалов международной конференции «Пробиотики, пребиотики, синбиотики и функциональные продукты питания. Современное состояние и перспективы». - М. - 2004. - С.3-5.

26. Галкина Л.А., Феклисова Л.В., Казакова С.П., Амерханова А.М., Машаланчук И.А., Ермаков А.Ф. Результаты применения биологически активной добавки «Полибактерин» в комплексной терапии больных ангинами. // Там же - С.62-63.

27. Мескина Е.Р., Феклисова Л.В., Амерханова А.М., Машаланчук И.А., Ермаков А.Ф., Волохович Т.Т. Динамика показателей микробиоценоза толстой кишки у детей с острыми кишечными инфекциями, получавшими новый поликомпонентный отечественный синбиотик. //. Там же - C.70-71.

28. Алешкин В.А., Амерханова А.М., Грачева Н.М., Петрова М.С., Москалева Т.Н., Аваков А.А., Гаврилов А.Ф., Зубкова Е.С., Соловьева А.И. Комбинированные пробиотические препараты - оптимизация профилактики дисбактериозов. //. Там же- C.84-85.

29. Лаврова А.Е., Дмитриева Г.В., Амерханова А.М., Зубкова Е.С., Пырикова И.А. «Бифидумбактерин Мульти-1» - новый пробиотик для коррекции дисбиоза у детей. // Сборник материалов V съезда научного общества гастроэнтерологов России .- М.- 2005. - C.427-438.

30. Мескина Е.Р., Амерханова А.М., Пожалостина Л.В., Жиленкова О.Г. Сопоставление результатов клинико-лабораторного изучения микробиоценоза ротоглотки детей с острой респираторной патологией. //Сборник научно-практических работ «Современные подходы к профилактике, диагностике и лечению детей в амбулаторных условиях». - М. -2006. - С.104-112.

31.Феклисова Л.В., Амерханова А.М., Мескина Е.Р., Жиленкова О.Г. Пожалостина Л.В. Состояние микробиоценоза кишечника у детей, посещающих дошкольные учреждения, и возможность коррекции нарушений при использовании синбиотика Бифидум-Мульти-2. //Cборник работ Всероссийской научно-практической конференции «Этапная реабилитация и профилактика инфекционных заболеваний у детей». - С-Петербург. - 2006. - С.75.

32.Феклисова Л.В., Мескина Е.Р., Амерханова А.М., Жиленкова О.Г., Воропаева Е.А., Пожалостина Л.В., Моисеева К.Д. и.др. Микробиоценоз слизистых оболочек ротоглотки и кишечника у детей, посещающих детские сады. // там же. - С.76.

33. Амерханова А.М., Алешкин В.А., Грачева Н.М., Петрова М.С., Попова О.П. Принципы конструирования и оценка клинической эффективности нового синбиотика Нормоспектрум®. // Практическая медицина. - Казань. - 2006. - № 4(18). - С.46-47.

34. Феклисова Л.В., Мескина Е.Р., Амерханова А.М., Жиленкова О.Г. Новые препараты-синбиотики для коррекции микрофлоры у детей разных возрастных групп. // Ремедиум Приволжья. - Н.Новгород. -2006.- № 6.-С 53.

35. Мескина Е.Р., Амерханова А.М., Пожалостина Л.В., Жиленкова О.Г., Моисеева К.Д. Состояние микрофлоры кишечника у детей, посещающих детское дошкольное учреждение. // Сборник научно-практических работ под редакцией Л.В.Феклисовой. - М.- 2006. - С.104-112.

36. Троицкая Н.Б., Феклисова Л.В., Савицкая Н.А., Амерханова А.М., Моисеева К.Д., Воропаева Е.А., Мескина Е.Р. Микробиологическая и терапевтическая коррекция при использовании пробиотиков в лечении больных острой респираторной патологией и у здоровых детей. // Сб. материалов научно-практической конференции «Современные вопросы лечебной и практической медицины». - М.-2006.- С.202-206.

37. Мескина Е.Р., Феклисова Л.В., Амерханова А.М., Жиленкова О.Г., Пожалостина Л.В. Новые пути оптимальной коррекции микробиологических нарушений кишечника у детей. //Сборник материалов III ежегодной Московской конференции «Гнойно-септические заболевания у детей с участием регионов России и стран СНГ». - М. - 2007. - С.107-108.

38. Мескина Е.Р., Феклисова Л.В., Амерханова А.М., Пожалостина Л.В. Оценка эффективности использования препаратов Бифидум-Мульти-1 и Бифидум-Мульти-2 в комплексе реабилитационных мероприятий у детей с дисбиотическими нарушениями кишечника. // Сборник тезисов докладов ХIV Российского конгресса «Человек и лекарство». - М. -2007. - С.718

39.Амерханова А.М., Алешкин В.А., Афанасьев С.С., Жиленкова О.Г., Лисунова С.А., Зубкова Е.С., Кураленко А.А.. Роль пробиотических микроорганизмов в современных технологиях профилактической и восстановительной медицины и возможности повышения эффективности препаратов на их основе. // Новые лекарственные средства. - М.- 2007.- вып.4. - С. 4-7.

40. Алешкин В.А., Амерханова А.М., Жиленкова О.Г., Лисунова С.С., Зубкова Е.С., Кураленко А.А.. Синбиотики и их роль в современных технологиях профилактической и восстановительной медицины. // Клиническое питание. - С-Петербург.- 2007.- № 1-2. - стр.А19.

41. Воронина О.Л., Субботина М.Е., Лунин В.Г., Жиленкова О.Г., Амерханова А.М. Дифференцирование видов бифидобактерий на основе секвенирования фрагментов генов 16S pPНК и трансальдолазы . // Там же - стр.А31.

42. Жиленкова О.Г., Лисунова С.А., Амерханова А.М., Зубкова Е.С., Кураленко А.А. Чувствительность к антибактериальным препаратам производственных штаммов бифидо- и лактобактерий. //Там же. - стр.А41.

43. Пономарева Л.П., Бондарь О.Е., Анкирская А.С., Амерханова А.М., Лисунова С.А., Жиленкова О.Г. Применение бактерийного препарата «Бифидум-Мульти» у новорожденных группы высокого инфекционного риска. // Там же. - стр. А 63.

44. Феклисова Л.В., Амерханова А.М., Мескина Е.Р., Жиленкова О.Г, Зубкова Е.С., Кураленко А.А., Пожалостина Л.В., Воропаева Е.А., Моисеева К.Д. Состояние микрофлоры кишечника и ротоглотки у детей детских дошкольных учреждений, возможность коррекции синбиотиком Бифидум-Мульти-2// Там же.-.С.20-22.

45. Мескина Е.Р., Феклисова Л.В., Амерханова А.М., Пожалостина Л.В. Лечебное питание, как фактор коррекции параметров микробиоценоза толстой кишки у детей с учетом его возрастных особенностей. // Сборник материалов научно-практической конференции педиатров России «Фармакология и диетология в педиатрии». М.- 2007.- С.113.

46. Мескина Е.Р., Феклисова Л.В., Амерханова А.М., Пожалостина Л.В. Эффективность коррекции нарушения микробиоценоза толстой кишки у детей с учетом его возрастных особенностей. // Там же. - С.114.

47. Пономарева Л.В., Анкирская А.С., Бондарь О.Г., Амерханова А.М., Лисунова С.А., Фурсова С.А., Жиленкова О.Г. Сравнительная оценка эффективности использования препаратов Бифидум-Мульти-1 и Бифидумбактерин с целью профилактики у новорожденных высокого перинатального риска по реализации внутриутробных инфекций. // Сб. материалов конгресса «Человек и лекарство». - М.-2007.-С.730.

48. Соколов А.А., Митрохин С.Д., Минаев В.И., Забазный Н.П., Сергеев С.А., Широкорад В.И., Сергеев В.П., Амерханова А.М., Афанасьев С.С., Алешкин В.А. Современные подходы к антибиотикопрофилактике госпитальных инфекций у больных, находящихся в отделениях хирургического профиля онкологического стационара. //Методические указания № 24.-М.- 2007.- 26 C.

49. Пожалостина Л.В., Амерханова А.М., Феклисова Л.В., Лиханская Е.И. Распространение криптоспоридий среди детей, посещающих дошкольные учреждения». // 4 Международная конференция «Идеи Пастера в борьбе с инфекциями». С-Петербург.- 2008. - С.135.

50. Мескина Е.Р., Амерханова А.М., Пожалостина Л.В., Воропаева Е.А., Жиленкова О.Г. Некоторые клинические аспекты состояния микробиологических биотопов ротоглотки и кишечника у организованных дошкольников.// Материалы научно-практической конференции, посвященной 50-летию детского инфекционного отделения МОНИКИ. - М.-2008.-200-207.

51. Aleshkin V.A., Amerhanova A.M., Pospelova V.V., Afanasiev S.S., Shenderov B.A. History, present situation, and prospects of probiotic research conducted in the G.N.Gabrichevsky Institute for Epidemiology and Microbiology. // Microbial ecology in Yealth and Disease. - 2008. - 20.- Р.113-115.

Патенты

52. Патент РФ № 2180915 «Консорциум бифидобактерий и лактобацилл, используемый для приготовления бактериальных препаратов, заквасок для кисломолочных продуктов, ферментированных и неферментированных пищевых продуктов, биологически активных добавок, предназначенных для коррекции микрофлоры детей в возрасте до 3-х лет»; Заявка № 2001111553 от 28.04.2001 г. Опубл. 27.03.2002 г.

53. Патент РФ № 2180348 «Консорциум бифидобактерий и лактобацилл, используемый для приготовления бактериальных препаратов, заквасок для кисломолочных продуктов, ферментированных и неферментированных пищевых продуктов, биологически активных добавок, предназначенных для коррекции микрофлоры детей в возрасте от 3-х до 12-ти лет». Заявка № 2001111552 от 28.04.2001 г. Опубл. 10.03.2002 г.

54. Патент РФ № 2180914 «Консорциум бифидобактерий и лактобацилл, используемый для приготовления бактериальных препаратов, заквасок для кисломолочных продуктов, ферментированных и неферментированных пищевых продуктов, биологически активных добавок, предназначенных для коррекции микрофлоры людей в возрасте от 12-ти лет и старше». Заявка № 2001111551 от 28.04.2001. Опубл. 27.03.2002 г.

55. Патент РФ № 2214454 «Питательная среда для культивирования бифидобактерий». Заявка № 2001135502 от 29.12.2001 г. Опубл. 20.10.2003 г.

56. Патент РФ № 2260042 Штамм Bifidobacterium bifidum 791-ИН, используемый для получения бактерийных препаратов, биологически активных добавок к пище, кисломолочных ферментированных и неферментированных пищевых продуктов, гигиенических и косметических средств. Заявка № 2002128794 от 28.10.2002 г. Опубл. 28.10.2002 г.

57. Патент РФ № 2244745 «Штамм Bifidobacterium longum 379-ИН, используемый для получения бактерийных препаратов, биологически активных добавок к пище, заквасок, ферментированных и неферментированных пищевых продуктов, гигиенических и косметических средств». Заявка № 2003106129 от 05.03.2003 г. Опубл. 05.03.2003 г.

58. Патент РФ № 2264451 «Биопрепарат «Бифистим от 3 месяцев до 3 лет» для профилактики и лечения дисбактериозов и инфекционных болезней желудочно-кишечного тракта у детей в возрасте от 3 месяцев до 3 лет, биологически активная добавка к пище «Бифистим от 3 месяцев до 3 лет» для профилактики дисбактериозов и восстановления микрофлоры желудочно-кишечного тракта после антибиотикотерапии и других неблагоприятных воздействий у детей в возрасте от 3 месяцев до 3 лет и консорциум бифидобактерий для коррекции микрофлоры желудочно-кишечного тракта у детей в возрасте от 3 месяцев до 3 лет. Заявка № 2003129798 от 08.10.2003. Опубл.20.11.2005 г.

59. Патент РФ № 2264452 «Биопрепарат «Бифистим от 3 до 12» для профилактики и лечения дисбактериозов и инфекционных болезней желудочно-кишечного тракта у детей в возрасте от 3 до 12 лет, биологически активная добавка к пище «Бифистим от 3 до 12» для профилактики дисбактериозов и восстановления микрофлоры желудочно-кишечного тракта после антибиотикотерапии и других неблагоприятных воздействий у детей в возрасте от 3 до 12 лет и консорциум бифидобактерий для коррекции микрофлоры желудочно-кишечного тракта у детей в возрасте от 3 до 12 лет. Заявка № 2003129799 от 08.10.2003. Опубл.20.11.2005 г.

60. Патент РФ № 2264450 «Биопрепарат «Бифистим для взрослых» для профилактики и лечения дисбактериозов и инфекционных болезней желудочно-кишечного тракта у людей старше 12 лет, биологически активная добавка к пище «Бифистим для взрослых» для профилактики дисбактериозов и восстановления микрофлоры желудочно-кишечного тракта после антибиотикотерапии и других неблагоприятных воздействий у людей старше 12 лет и консорциум бифидобактерий для коррекции микрофлоры желудочно-кишечного тракта у людей старше 12 лет. Заявка № 2003129797 от 08.10.2003. Опубл.20.11.2005 г.

...