Резвератрол и его комбинации с основными антигипертензивными препаратами в фармакологической коррекции эндотелиальной дисфункции

Для комплексной оценки функциональных характеристик сосудистой реактивности, сократимости миокарда, нитроксидергической системы и морфологических характеристик миокарда на основе интегрального анализа всего спектра проводимых исследований, мы представили значение каждого показателя в виде вектора. Все вектора, каждый из которых соответствовал определенной нагрузочной пробе, были построены на плоскости в прямоугольной декартовой системе координат Оху, полюсом для всех векторов было выбрано начало прямоугольной декартовой системы координат, полярной осью служило положительное направление оси Оу, длина вектора равнялась величине каждого показателя функционально-морфометрической оценки эндотелио- и кардиопротективного эффекта нагрузочной пробы. Направление каждого вектора задавалось жестко, 1-й вектор - САД (систолическое артериальное давление) совпадал с осью 0у, последующие вектора располагались в порядке проведения нагрузочной пробы по часовой стрелке, угол между соседними векторами составлял 60°. Следующими векторами соответственно обозначены показатели - ДАД - диастолическое артериальное давление; КЭД - коэффициент эндотелиальной дисфункции; КМЦ - диаметр кардиомиоцитов - нагрузка объемом; NO х - суммарное количество нитратов и нитритов (Total NO); ПА 5-25 - нагрузка сопротивлением (отношение прироста сократимости миокарда на 5-й сек пережатия аорты к 25-й сек пережатия). Площадь векторной диаграммы рассчитывали по формуле :

;

где: S - площадь векторной диаграммы, хi и уi-- прямоугольные координаты соответствующих векторов, n - количество векторов.

Различия между соответствующими функциональными, биохимическими и морфологическими показателями при проведении исследований между изучаемыми группами интактных, контрольных и опытных групп животных отражаются площадью диаграмм, образованной соединением конечных точек векторов вышеуказанных показателей.

Обоснование доз и дизайн эксперимента. Исследованы дозы резвератрола 0,15 и 2 мг/кг. Доза 0,15 мг/кг соответствует дозе резвератрола разрешенной в РФ в качестве биологически активной добавки (10 мг/сут.).

При этом согласно данным литературы эндотелио- и кардиотропные эффекты резвератрола в экспериментах на крысах обнаруживаются в диапазоне доз от 0,2 до 2 мг/кг (Fremont L., 2000). Доза 2 мг/кг соответствует содержанию его в экстраординарных сортах вин (10 мкмоль/л, 600 мл/сут.). Согласно литературных данных именно в этой дозе резвератрол, проявляет максимальные эндотелио- и кардиотропные эффекты.

В хронических экспериментах при моделировании L-NAME-опосредованного дефицита оксида азота резвератрол вводили в дозах 0,15 и 2 мг/кг один раз в сутки внутрибрюшинно в течение 7 дней через 30 минут после введения L-NAME. При моделировании гипоэстроген-индуцированного дефицита оксида азота резвератрол вводился в дозе 2 мг/кг один раз в сутки внутрибрюшинно в течение 42 дней.

Принятая схема соответствует основной массе экспериментальных исследований на крысах (Deng L.Y., 1993).

Препараты с доказанной эндотелипротективной активностью вводили внутрижелудочно в течение 7 суток при L-NAME-опосредованной модели дефицита оксида азота, и в течение 42 суток при гипоэстроген-индуцированном дефиците оксида азота. Ингибитор АПФ эналаприла малеат («Рениприл», производства ОАО «Фармстандарт-Лексредства»), лозартан калия («Блоктран», производства ОАО «Фармстандарт-Лексредства»), амлодипин («Амлотоп», производства «Макизфарма»), небиволол, («Небилет», производства «Берлин-хеми»), индапамид («индапамид», производства ОАО «Фармстандарт-Лексредства»), использовали в дозах 0,5 мг/кг, 6 мг/кг, 0,5 мг/кг, 0,5 мг/кг, 2 мг/кг соответственно, что соответствует данным доступной литературы и выявляет эффективное гипотензивное и кардиопротективное действие препаратов в экспериментах, проведённых ранее в нашей лаборатории.

При комбинированном использовании резвератрола с антигипертензивными препаратами использовались те же дозы, пути введения, и та же продолжительность применения.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

1. Динамика функциональных, биохимических и морфологических показателей при моделировании L-NAME- и гипоэстроген-индуцированного дефицита NO.

Рис. 1. Функциональные, биохимические и морфологические показатели при моделировании L-NAME индуцированного дефицита NO.

Внутрибрюшинное введение L-NAME в дозе 25 мг /кг однократно в течение 7 суток крысам-самцам, привело к стойкому повышению артериального давления. У крыс-самок артериальная гипертензия развивается в течение 42 суток после овариэктомии (рис. 1).

Рис. 2. Динамика АД и ЧСС при проведении функциональной пробы на эндотелийзависимую вазодилятацию (внутривенное введение ацетилхолина 40 мкг\кг), А - у интактных животных, Б - у животных с патологией.

Примечание: здесь и везде далее АД - артериальное давление (мм.рт.ст.); ЧСС- частота сердечных сокращений (уд.мин);

Проведение функциональных проб с оценкой реакции на эндотелий-зависимое и эндотелийнезависимое расслабление показало существенные отличия в группах с патологией в отличие от интактных животных. На рисунке 2а - верхняя кривая - АД систолическое, далее - АД диастолическое и ЧСС. Реакция на введение ацетилхолина характеризуется резким падением артериального давления и брадикардией. После окончания миокардиального компонента - (метка 2) артериальное давление восстанавливается. Треугольник над кривой восстановления артериального давления принимался нами как площадь эндотелиальной реакции.

Здесь и далее: САД, ДАД, АД систолическое, диастолическое артериальное давление, КЭД - коэффициент эндотелиальной дисфункции, АДр - адренореактивность, НС - нагрузка сопротивлением, eNOS - экспрессия NO-синтетазы, NOx - суммарная концентрация нитритов и нитратов плазмы, ДМ - диаметр кардиомиоцитов. * - р < 0,05 в сравнении с группой интактных животных.

На рис. 2 Б представлена реакция на ацетилхолин при моделировании эндотелиальной дисфункции. При этом видно, что площадь эндотелийзависимой реакции в несколько раз меньше чем у интактных животных.

Аналогично оценивали эндотелийнезависимую реакцию на нитропруссид. Обращает на себя внимание отсутствие принципиальной разницы в площадях эндотелийнезависимых реакций у интактных и опытных групп, несмотря на существенно более высокие цифры АД (рис. 3).

Математическое выражение описанного явления представлено нами в виде коэффициента эндотелиальной дисфункции (КЭД), являющимся отношением площади среднего артериального давления на нитропруссид к площади среднего артериального давления на ацетилхолин.

В наших экспериментах КЭД в группе интактных самцов составил - 1,1±0,1, при L-NAME индуцированном дефиците оксида азота - 5,4±0,6, в группе интактных самок - 0,8±0,11, при гипоэстроген-индуцированном дефиците оксида азота - 2,2±0,2. Разница у интактных животных и животных с патологиями соответственно составила в 5 и 2,6 раза (рис. 1).

Рис. 3. Динамика АД и ЧСС при проведении функциональной пробы на эндотелийзависимую вазодилятацию (внутривенное введение нитропруссида натрия 30 мкг\кг) А - у интактных животных, Б - у животных с патологией.

L-NAME- и гипоэстроген-индуцированные модели патологии приводят к увеличению абсолютных значений ЛЖД в пробе на адренореактивность и снижению миокардиального резерва в пробе нагрузки сопротивлением (рис. 1).

У интактных самцов ЛЖД к 25 секунде снижалось до 83,6±7,7, у интактных самок до 89,3±5,4, а у животных с L-NAME- и гипоэстроген-индуцированной патологией значительно сильнее соответственно - 66,0±5,5 % и 67,9±2,5 % (рис. 1).

Характерная динамика биохимических маркеров L-NAME- и гипоэстроген-индуцированного дефицита оксида азота представлена на рис.1. Так, концентрация нитратов и нитритов плазмы (NOx) у животных, получавших L-NAME, и перенесших овариэктомию соответственно составил 61,2 ±3,6 и 71,5 ±3,6 мкМ, тогда как соответствующие значения у интактных животных составили - 114,1±4,1 и 122,8±2,8, мкМ.

Экспрессия эндотелиальной NO-синтазы (eNOS) сывороткой интактных самцов и самок соответственно 72,9±3,8% и 80,1±4,6%, тогда как у животных с соответствующими патологиями 21,4±4,7% и 32,4±3,5%.

Результаты гистологических исследований показали, что в обоих случаях присутствует гипертрофия миокардиоцитов, утолщение мышечного слоя сосудистой стенки и спазм артериол, (рис.4). На представленных гистологических препаратах, слева (а) - интактные миокардиоциты, справа (б) - миокардиоциты животных на 7-е сутки с L-NAME-индуцированной патологией. Наглядно видно, что площадь поперечного сечения резко увеличена при сохранённом диаметре ядер при одном увеличении. Морфометрические исследования показали, что у интактных самцов поперечное сечение составило 9,1±1,1, у интактных самок 8,5±0,21, у животных, поучавших L-NAME - 18,4±1,1, у животных перенесших овариэктомию 12,5±0,7 мкм (рис.1).

Аналогично прослеживалась морфологическая картина изменений в почках (рис. 5). У крыс, получавших L-NAME, отмечалась гипертрофия структур юкстагломерулярного аппарата (ЮГА) (рис. 5-б). У интактных крыс количество клубочков с гипертрофированным ЮГА составляло около 15% (рис. 5 а), в группе животных, получавших L-NAME, количество таких клубочков достигало 60-80% (рис. 5 б).

Рис. 4. Морфологическая картина миокарда у интактных и опытных животных: а - гистологическая картина миокарда у интактных крыс на поперечном срезе; б - гипертрофия кардиомиоцитов у крысы с L-NAME- индуцированной эндотелиальной дисфункцией на поперечном срезе. Окр. гематоксилином и эозином. а, б - х280

Рис. 5. Морфологическая картина почечных артерий у интактных и опытных животных: а - неизмененная артерия почки у интактной крысы; б - перестройка стенки почечной артерии с резким утолщением ее стенки и сужением просвета, гиперплазией эластических структур и гипертрофией гладкомышечных элементов у крысы с патологией. Окр. гематоксилином и эозином, а, б - х440

Таким образом, моделирование L-NAME и гипоэстроген-индуцированные патологии сопровождаются увеличением артериального давления и коэффициента эндотелиальной дисфункции, повышением адренореактивности с развитием скрытой сердечной недостаточности, характерными биохимическими сдвигами - снижением экспрессии eNOS и концентрации нитратов и нитритов плазмы крови, а также характерной гистологической картиной - гипертрофией миокарда и гиперплазией сосудистого русла.

2. Исследование эндотелиопротективной активности резвератрола и препаратов с доказанной эндотелиопротективной активностью при L-NAME - модели дефицита NO в эксперименте.

Сравнительные исследования показали, что при L-NAME-индуцированной патологии все изучаемые вещества, снижали АД, однако, уровня нормы АД не достигало ни в одном случае, и значения АД, были достоверно выше значений интактных животных во всех сериях экспериментов. Максимальное снижение АД выявлено при монотерапии небивололом - САД-170,1±7,3, ДАД-125,9±4,7 (рис.6).

Проведение функциональных проб выявили в разной степени эндотелиопротективное действие у всех препаратов. Применение резвератрола обнаружила выраженное дозозависимое эндотелиопротективное действие, превосходящим таковую у препаратов с доказанной эндотелиопротективной активностью. Максимальные эффекты наблюдались при использовании резвератрола в дозе 2 мг/кг и небиволола. Соответственно КЭД составил 1,2±0,1- у резвератрола, и 1,7±0,1 у небиволола. Тогда, как данный показатель у интактных животных составил - 1,2±0,1, а у животных с патологией 5,4±0,6 (рис.6).

Проба на адренореактивность у животных с патологией на фоне терапии, препаратами, также обнаружила снижение максимальных цифр левожелудочкового давления. Максимальное снижение выявлено при монотерапии амлодипином - 201,3±14,4 и небивололом - 206,6±15,6 мм рт.ст., у интактных самцов - 199,2±8,3, L-NAME- 247,3±4,8 мм рт.ст. (рис.6).

Рис. 6. Влияние резвератрола и препаратов с доказанной эндотелиопротективной активностью на функциональные, биохимические и морфологические показатели при моделировании L-NAME- индуцированного дефицита NO.

Здесь и далее: АД - артериальное давление, КЭД - коэффициент эндотелиальной дисфункции, АДр - адренореактивность, НС - нагрузка сопротивлением, eNOS - экспрессия NO-синтазы, NOx - суммарная концентрация нитритов и нитратов плазмы, ДМ - диаметр кардиомиоцитов.

Примечание: *- p < 0,05 - в сравнении с L-NAME,

** - р < 0,05 - в сравнении с интактными

Аналогичная тенденция выявлена в пробе на нагрузку сопротивлением. Данные при использовании монолечении исследуемыми препаратами находились между значениями интактных животных и животных с патологией. Сократимость на 25 секунде к 5-й секунде, взятой за 100% нагрузки соответственно составила у интактных самцов 83,6±2,1, у животных с L-NAME- индуцированной патологией - 66,0±2,3%. Максимальное предотвращение исчерпания миокардиального резерва обнаружено при монотерапии небивололом (95,1±3,2%) (рис.6).

Значения экспрессии эндотелиальной NO-синтазы, при L-NAME - индуцированной модели патологии не достигали значений интактных животных (рис.6).

Концентрация суммы нитратов и нитритов плазмы при монотерапии указанными препаратами достоверно увеличивалась. Резвератрол в дозе 2 мг/кг и небиволол выявили максимальное предотвращение снижения концентрации суммы нитратов и нитритов плазмы, соответствующие значения составили 107,9±6,3 и 99,1±4,3 (рис.6).

Данные морфометрических исследований показали, что все изучаемые вещества в разной степени предотвращают развитие гипертрофии миокардиоцитов. Данный эффект выражен у резвератрола-9,8±0,3 мкм, амлодипина -10,2±0,2 и небиволола -9,6±0,1 мкм (рис.6).

Интегральный векторный анализ гемодинамических, биохимических и морфологических показателей в комплексной оценке эндотелио- и кардиопротективной активности резвератрола 0,15 и 2 мг/кг, эналаприла 0,5 мг/кг, лозартана 6 мг/кг, амлодипина 0,5 мг/кг, небиволола 0,5 мг/кг, индапамида 2 мг/кг, определяет характеристику функции эндотелия и сократимости миокарда с использованием нескольких основных параметров Векторные значения выбранных показателей были представлены в процентном отношении от соответствующих значений группы интактных животных, принятых за 100%, площадь векторной диаграммы выражалась в условных единицах (усл. ед.).

Сравнение площадей векторных диаграмм, выявил выраженные различия между группой интактных животных, животных с моделированием L-NAME-индуцированного дефицита оксида азота и групп, животных с фармакологической коррекцией вышеуказанными препаратами. В группе интактных животных расчётная площадь составляет 5,48 усл. ед., в группе с моделированием L-NAME-индуцированного дефицита оксида азота - 10,12 усл. ед., что отличается в 2 раза и принимается за наибольшую степень выраженности сочетанных сосудистых, гемодинамических, биохимических и морфологических нарушений.

Результирующие площади векторных диаграмм составляют в группах: резвератрола 0,15 мг/кг - 6,97; резвератрола 2 мг/кг - 6,13; эналаприла 0,5 мг/кг - 8,16; лозартана 6 мг/кг - 7,39; амлодипина 0,5 мг/кг - 6,46; небиволола 0,5 мг/кг - 6,47; индапамида 2 мг/кг - 8,05 усл.ед.

Анализируя площади векторных диаграмм по совокупности эндотелио- и кардиотропных эффектов данную группу выбранных исследуемых лекарственных средств для коррекции L-NAME-индуцированного дефицита оксида азота можно расположить в порядке возрастания активности эналаприл (0,5 мг/кг) - индапамид (2 мг/кг) - лозартан (6 мг/кг) - резвератрол (0,15 мг/кг)- небиволол (0,5 мг/кг) - амлодипин (0,5 мг/кг) -резвератрол (2 мг/кг).

Из предложенных шести показателей - САД, ДАД, коэффициент эндотелиальной дисфункции (КЭД), диаметр кардиомиоцитов (КМЦ), суммарное количество нитратов и нитритов (NO х), показатели миокардиальной пробы с нагрузкой сопротивлением (отношение прироста сократимости миокарда на 5-й сек пережатия аорты к 25-й сек пережатия, ПА 5-25), при L-NAME-индуцированном моделировании дефицита оксида азота, только КЭД имеет дельту (?) по отношению к показателю у интактных животных в 500 %, остальные показатели соответственно: САД - 138%, ДАД - 142 %, КМЦ - 203 %, NO - 54%, ПА 5-25 - 79 %. Таким образом, сумма ?САД. ДАД, КМЦ, NOх, ПА 5-25= 616 % сопоставима с ?КЭД. Отсюда, очевидно, что предложенный подход в своём интегральном виде преимущественно показывает эндотелиальную составляющую интегрального протективного эффекта при L-NAME-индуцированном дефиците NO.

Применение данного подхода комплексной оценки позволил выявить степени активности в группе изучаемых препаратов в отношении коррекции нарушений метаболического пути L-аргинина/NO при моделировании L-NAME-индуцированного оксида азота. Наиболее выраженной активностью обладают резвератрол (2 мг/кг), амлодипин (0,5 мг/кг) и небиволол (0,5 мг/кг), наименьшей - эналаприл (0,5 мг/кг) и индапамид (2 мг/кг), занимают промежуточное положение резвератрол (0,15 мг/кг) и лозартан (6 мг/кг).

Таким образом, по совокупности функциональных, биохимических, морфологических показателей, отражающих эндотелиопротективные эффекты, резвератрол 2 мг/кг выявил активность, сопоставимую и в ряде случаев превосходящую таковую у препаратов с доказанной эндотелиопротективной активностью.

3. Изучение эндотелиопротективной активности сочетанного применения резвератрола с препаратами с доказанной эндотелиопротективной активностью при L-NAME- индуцированной модели дефицита NO в эксперименте.

Сочетанное применение препаратов с доказанной эндотелиопротективной активностью с резвератролом (2 мг/кг) на фоне L-NAME индуцированного дефицита оксида азота приводило к значительному снижению артериального давления, что не достигалось при соответствующей монотерапии. В группе животных, где применялся лозартан с резвератролом, достигался целевой уровень АД - 144/116 мм рт.ст. (рис.7).

Рис. 7. Влияние комбинированного применения резвератрола с препаратами с доказанной эндотелиопротективной активностью на функциональные, биохимические и морфологические показатели при моделировании L-NAME- индуцированного дефицита NO.

Здесь и далее: АД - артериальное давление, КЭД - коэффициент эндотелиальной дисфункции, АДр - адренореактивность, НС - нагрузка сопротивлением, eNOS - экспрессия NO-синтазы, NOx - суммарная концентрация нитритов и нитратов плазмы, ДМ - диаметр кардиомиоцитов.

Примечание: *- p < 0,05 - в сравнении с L-NAME,

** - р < 0,05 - в сравнении с интактными

КЭД при сочетанном использовании резвератрола с данными препаратами, также снижался в большей степени, чем при монотерапии. КЭД в группах с использованием сочетаний составил 1,5±0,1-эналаприл+резвератрол, 1,8±0,2-лозартан+резвератрол,1,6±0,1-амлодипин+резвератрол, 1,3±0,1-небиволол+резвератрол, 2,2±0,1-индапамид+резвератрол, что достоверно отличается от соответствующей монотерапии. Максимальное снижение КЭД обнаружено при использовании сочетания резвератрола с небивололом (рис.7).

В экспериментах на открытом сердце также обнаружена эффективность сочетанного использования резвератрола с препаратами с доказанной эндотелиопротективной активностью по сравнению с монотерапией. Так, значения ЛЖД при использовании комбинаций в пробе на адренореактивность находилась в диапазоне от 199,5±6,5, до 210,9±13,5 мм рт.ст., тогда как при соответствующей монотерапии - от 201,3±14,3, до - 247,9±9,3. Интактные - 199,2±8,3, L-NAME - 247,2±4,8 мм рт.ст. Аналогичная ситуация обнаружена при проведении пробы на нагрузку сопротивлением. У интактных ЛЖД на 25 сек. составила 83,6±2,1%, у животных с L-NAME-индуцированной патологией - 66,0±2,3%. Данные использования сочетаний имели промежуточные значения, которые оказались выше значений соответствующей монотерапии. Максимальное предотвращение исчерпания миокардиального резерва выявлено при применении сочетания небиволола с резвератролом - 92,7±3,4%. (рис.7).

Эффективность комбинаций резвератрола с основными антигипертензивными препаратами по сравнению с соответствующей монотерапией выявлена в увеличении концентрации суммы нитритов и нитратов плазмы. Значения в сериях сочетаний были близкими к значениям интактных животных (рис.7).

Функционально-биохимические показатели подтвердились результатами морфометрии миокардиоцитов. Средний диаметр животных, получающих комплексную терапию существенно лучше, чем при соответствующей монотерапии и достоверно не отличается от интактных животных (рис.7).

Комплексную оценку эндотелио- и кардиопротективной активности сочетанного применения резвератрола 2 мг/кг с препаратами с доказанной эндотелиопротективной активностью проводили с помощью интегрального векторного анализа гемодинамических, биохимических и морфологических показателей.

Векторные значения выбранных основных показателей представлены в процентном отношении от соответствующих значений группы интактных животных, принятых за 100%, площадь векторной диаграммы выражалась в условных единицах (усл. ед.).

Площадь векторной диаграммы, в группе интактных животных составил 5,48, а в группе с моделированием L-NAME индуцированного дефицита оксида азота - 10,12. Значения в группах животных с фармакологической коррекцией сочетаниями резвератрола с препаратами с доказанной эндотелиопротективной активностью находились между значениями интактных и животных с патологией, а также были ниже соответствующей монотерапии с вышеназванными препаратами. Данный показатель составил: резвератрол 2 мг/кг+ эналаприл 0,5 мг/кг - 6,29, резвератрол 2 мг/кг+ лозартан 6 мг/кг - 6,11, резвератрол 2 мг/кг+ амлодипин 0,5 мг/кг - 6,06, резвератрол 2 мг/кг+ небиволол 0,5 мг/кг - 6,26, резвератрол 2 мг/кг+ индапамид 2 мг/кг - 6,64.

Анализируя площади векторных диаграмм по совокупности эндотелио- и кардиотропных эффектов комбинаций исследуемых лекарственных средств для коррекции L-NAME-индуцированного дефицита оксида азота, следует отметить возрастание активности фармакологической коррекции метаболического пути L-аргинина/NO при совместном использовании резвератрола с препаратами с доказанной эндотелиопротективной активностью по сравнению с соответствующей монотерапией.

Дальнейший анализ данных сочетаний позволяет рассчитать дельту аддиции (?адд= Sпреп - Sрезв+преп) и её вероятностный процент (Pадд), рассчитываемый по формуле: Pадд=?адд /?L-NAME * 100%. Проведение соответствующих расчётов выявила следующие данные: дельта (?адд) и вероятностный процент (Pадд) аддиции в группах комбинаций соответственно составил: резвератрол + эналаприл - 1,87- 40,3 %; резвератрол + лозартан - 1,28-27,6%; резвератрол + амлодипин - 0,4- 8,6%, резвератрол + небиволол - 0,21- 4,5%; резвератрол + индапамид - 1,41- 30,4%.

Таким образом, сочетанное использование резвератрола с препаратами с доказанной эндотелиопротективной активностью по сравнению с соответствующей монотерапией оказывало более выраженное, эндотелиопротективное действие на модели L-NAME-индуцированного дефицита NO, выражающееся в снижении КЭД, в предотвращении снижения концентрации суммы нитратов и нитритов (NOx). При этом в большей степени предотвращалось развитие гипертензии, а в случае применения сочетания лозартана с резвератролом уровень АД достигал нормы.

4. Исследование эндотелиопротективной активности резвератрола и препаратов с доказанной эндотелиопротективной активностью при гипоэстроген-индуцированной модели дефицита NO в эксперименте.

Как показали дальнейшие исследования, при гипоэстроген-индуцированной патологии все препараты значительно снижали АД, а в случае монотерапии резвератролом, эналаприлом и небивололом предотвращалось развитие артериальной гипертензии и значения АД достоверно не отличались от значений интактных животных. Соответствующие значения АД составили САД-123,3±6,3, 139,6±7,3, 125,1±4,8 мм рт.ст., ДАД-108,2±3,2, 107,4±4,9, 94,8±4,1 мм рт.ст. (рис.8).

Коэффициент эндотелиальной дисфункции (КЭД) также снижался во всех группах животных при монотерапии как резвератролом, так и с препаратами с доказанной эндотелиопротективной активностью. Максимальное эндотелиопротективное действие наблюдалось при использовании резвератрола и небиволола. КЭД соответственно составил 0,9±0,1 и 1,1±0,1. Данный показатель у интактных животных составил - 0,8±0,1, а у животных с патологией 2,1±0,2 (рис.8).

Рис. 8. Влияние применения резвератрола и препаратов с доказанной эндотелиопротективной активностью на функциональные, биохимические и морфологические показатели при моделировании гипоэстроген- индуцированного дефицита NO.

Здесь и далее: АД - артериальное давление, КЭД - коэффициент эндотелиальной дисфункции, АДр - адренореактивность, НС - нагрузка сопротивлением, eNOS - экспрессия NO-синтазы, NOx - суммарная концентрация нитритов и нитратов плазмы, ДМ - диаметр кардиомиоцитов.

Примечание: *- p < 0,05 - в сравнении с овариэктомией,

** - р < 0,05 - в сравнении с интактными

Функциональная проба на адренореактивность у животных с патологией на фоне монотерапии всеми препаратами, обнаружила снижение максимальных цифр левожелудочкового давления. Максимальное предотвращение повышения адренореактивности выявлено при монотерапии небивололом - 200,5±6,1, у интактных самок - 203,3±2,6, у животных с овариэктомией - 243,2±6,4 (рис.8).

Проведение пробы на нагрузку сопротивлением выявила аналогичную тенденцию. Данные при использовании монолечении исследуемыми препаратами находились между значениями интактных животных и животных с патологией. Сократимость на 25 секунде к 5-й секунде, взятой за 100% нагрузки соответственно составила у интактных самок 87,2±3,4%, у животных с гипоэстроген - индуцированной патологией - 67,9±2,8%. Максимальное предотвращение исчерпания миокардиального резерва обнаружено при монотерапии небивололом (89,9±2,5%) и амлодипином (86,7±3,2%) (рис.8).

Показатель экспрессии еNOS под воздействием изучаемых веществ, увеличивался, однако, значения экспрессии эндотелиальной NO-синтазы, не достигали значений интактных животных (рис.8).

Суммарная концентрация нитрит-ионов при монотерапии указанными препаратами достоверно увеличивалась. Небиволол и резвератрол в дозе 2 мг/кг и выявили максимальное предотвращение снижения концентрации нитрит - ионов, соответствующие значения составили 101,2±5,1 и 98,6±3,7 (рис.8).

Морфометрические исследования показали, что все изучаемые вещества в разной степени предотвращают развитие гипертрофии миокардиоцитов. В большей степени предотвращение развития гипертрофии миокардиоцитов выявлена у резвератрола-9,2±0,2, и небиволола -9,6±0,3 (рис.8).

Интегральный векторный анализ гемодинамических, биохимических и морфологических показателей в комплексной оценке эндотелио- и кардиопротективной активности резвератрола 2 мг/кг, эналаприла 0,5 мг/кг, лозартана 6 мг/кг, амлодипина 0,5 мг/кг, небиволола 0,5 мг/кг, индапамида 2 мг/кг представляет характеристику функции эндотелия и сократимости миокарда с использованием нескольких основных параметров .Векторные значения выбранных показателей были представлены в процентном отношении от соответствующих значений группы интактных животных, принятых за 100%, площадь векторной диаграммы выражалась в условных единицах (усл. ед.).

Сравнивая площади векторных диаграмм, мы получили выраженные различия между группой интактных животных, животных с моделированием гипоэстроген - индуцированного дефицита оксида азота и групп, животных с фармакологической коррекцией вышеуказанными препаратами. В группе интактных животных расчётная площадь составляет 5,48 усл. ед., в группе с моделированием гипоэстроген - индуцированного дефицита оксида азота - 7,33 усл. ед., что принимается за наибольшую степень выраженности сочетанных сосудистых, гемодинамических, биохимических и морфологических нарушений.

Результаты площадей векторных диаграмм в группах составляют: резвератрол 2 мг/кг - 5,47; эналаприл 0,5 мг/кг - 6,02; лозартан 6 мг/кг - 6,13; амлодипин 0,5 мг/кг - 6,41; небиволол 0,5 мг/кг - 5,76; индапамид 2 мг/кг - 6,32 усл.ед.

Согласно данных анализа площадей векторных диаграмм по совокупности эндотелио- и кардиотропных эффектов данную группу выбранных исследуемых лекарственных средств для коррекции гипоэстроген-индуцированного дефицита оксида азота можно расположить в порядке возрастания активности амлодипин (0,5 мг/кг) - индапамид (2 мг/кг) - лозартан - эналаприл (0,5 мг/кг) - (6 мг/кг) - небиволол (0,5 мг/кг) --резвератрол (2 мг/кг).

Из предложенных шести показателей - САД, ДАД, коэффициент эндотелиальной дисфункции (КЭД), диаметр кардиомиоцитов (КМЦ), суммарное количество нитратов и нитритов (NOх), показатели миокардиальной пробы с нагрузкой сопротивлением (отношение прироста сократимости миокарда на 5-й сек пережатия аорты к 25-й сек пережатия, ПА 5-25), при гипоэстроген - индуцированном моделировании дефицита оксида азота КЭД имеет дельту (?) по отношению к показателю у интактных животных в 262,5 %, остальные показатели соответственно: САД - 124,9%, ДАД - 130,5 %, КМЦ - 147,1 %, NO - 61,2%, ПА 5-25 - 76,0 %. Сумма остальных пяти показателей ?САД. ДАД, КМЦ, NOх, ПА 5-25= 539,7 %, а значит вклад ?КЭД составляет половину, что очень существенно, в коррекции нарушений метаболического пути синтеза оксида азота, вызванного билатеральной овариэктомией.

Используя данный подход комплексной оценки, следует отметить, что наибольшей активностью в группе изучаемых препаратов в отношении коррекции нарушений метаболического пути L-аргинина/NO при моделировании гипоэстроген-индуцированного оксида азота обладают резвератрол (2 мг/кг), и небиволол (0,5 мг/кг), наименьшей - амлодипин (0,5 мг/кг) и индапамид (2 мг/кг), эналаприл (0,5 мг/кг) и лозартан (6 мг/кг) занимают промежуточное положение.

Таким образом, по совокупности функциональных, биохимических, морфологических показателей, отражающих эндотелиопротективные эффекты, резвератрол 2 мг/кг выявил активность, сопоставимую или превосходящую таковую у препаратов с доказанной эндотелиопротективной активностью.

5. Изучение эндотелиопротективной активности сочетанного применения резвератрола с препаратами с доказанной эндотелиопротективной активностью при гипоэстроген - индуцированной модели дефицита NO в эксперименте.

Сочетанное применение препаратов с доказанной эндотелиопротективной активностью с резвератролом (2 мг/кг) на фоне гипоэстроген-индуцированного дефицита оксида азота практически полностью предотвращало развитие артериальной гипертензии, и за исключением сочетания индапамида с резвератролом достигался целевой уровень АД (рис.9).

Рис. 9. Влияние комбинированного применения резвератрола с препаратами с доказанной эндотелиопротективной активностью на функциональные, биохимические и морфологические показатели при моделировании гипоэстроген- индуцированного дефицита NO.

Здесь и далее: АД - артериальное давление, КЭД - коэффициент эндотелиальной дисфункции, АДр - адренореактивность, НС - нагрузка сопротивлением, eNOS - экспрессия NO-синтазы, NOx - суммарная концентрация нитритов и нитратов плазмы, ДМ - диаметр кардиомиоцитов.

Примечание: *- p < 0,05 - в сравнении с овариэктомией,

** - р < 0,05 - в сравнении с интактными

Также комбинированное использование препаратов выявило увеличение эндотелиопротективного эффекта, что привело к снижению КЭД до уровня интактных во всех сериях кроме сочетания индапамида с резвератролом в сравнении с монотерапией (рис.9).

Абсолютная цифра максимального ЛЖД на введение адреналина у животных, получавших комбинации оказалась ниже, чем при монотерапии. В сериях экспериментов, где использовался эналаприл + резвератрол, амлодипин + резвератрол, небиволол + резвератрол и индапамид + резвератрол значения ЛЖД достоверно не отличались от группы интактных (рис.9).