Фармакотерапия нарушений высшей нервной деятельности при дисбалансе эстрогенов (экспериментальное исследование)

Размещено на http://www.allbest.ru/

Размещено на http://www.allbest.ru/

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени

Фармакотерапия нарушений высшей нервной деятельности при дисбалансе эстрогенов (экспериментальное исследование)

14.00.25 - фармакология, клиническая фармакология

доктора биологичесикх наук

Федотова Юлия Олеговна

Волгоград - 2008 г.

Работа выполнена в Отделе нейрофармакологии им. С.В. Аничкова ГУ Научно-исследовательский институт экспериментальной медицины РАМН (Санкт-Петербург)

Научный консультант: Заслуженный деятель науки РФ, член-корреспондент РАМН, доктор медицинских наук, профессор Сапронов Николай Сергеевич

Официальные оппоненты: Заслуженный деятель науки РФ, академик РАМН, доктор медицинских наук, профессор Игнатов Юрий Дмитриевич

доктор биологических наук, профессор Хоронько Владимир Владиленович

Заслуженный деятель науки РФ, доктор медицинских наук, профессор Воронина Татьяна Александровна

Ведущая организация: Военно-медицинская академия им. С.М. Кирова (Санкт-Петербург)

Защита состоится «___» _____________ 2008 г. в _____ часов на заседании Диссертационного совета Д 208.008.02 ГОУ ВПО «Волгоградский государственный медицинский университет Росздрава» (400131, г. Волгоград, пл. Павших борцов, д. 1.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО «Волгоградский государственный медицинский университет Росздрава»

Автореферат разослан «___» _____________ 2008 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

доктор медицинских наук, профессор А.Р. Бабаева

Общая характеристика работы

Актуальность проблемы. В последнее время накоплен большой объем экспериментальных данных, свидетельствующих о роли половых стероидов не только в репродуктивном поведении, но и в модулирующем влиянии на другие, не связанные с половым, формы поведения (McEwen, Alves, 1999; Toran-Allerand et al., 1999). Действительно, исследования последних лет убедительно показали, что мозг гораздо более чувствителен к действию половых стероидов, чем предполагалось ранее (Falkenstein et al., 2000; McEwen, 2001). Установлено, что эстрогены проявляют контролирующее влияние на пренатальный и ранний постнатальный периоды развития головного мозга, а также в течение всей жизни при различных нарушениях в гипофизарно-овариальной системе (Vries, 2004). Органами-мишенями для эстрогенов являются передний мозг, гипоталамус, гиппокамп и ядра шва мозга (McEwen, 2001).

При этом, гормональные сдвиги, обусловленные аномальным функционированием гипоталамо-гипофизарно-овариальной системы, глубоко изменяют высшую нервную деятельность (McEwen, Alves, 1999; McEwen, 2001). Кроме того, исследования последних лет показывают, что эстрогены оказывают многогранное влияние на взаимодействие различных нейромедиаторных систем между собой (McEwen, Alves, 1999; McEwen, 2001, 2002; Бабичев, 2005). Это взаимодействие осуществляется посредством геномного и негеномного механизмов действия эстрогенов (McEwen, 2001). Доказано влияние эстрогенов за счет обоих механизмов действия на следующие нейромедиаторные системы: норадренергическую, ацетилхолинергическую, серотонинергическую, дофаминергическую, ГАМКергическую и опиоидергическую (McEwen, Alves, 1999; Toran-Allerand et al., 1999). Такое множественное влияние эстрогенов на медиаторную нейропередачу в головном мозге позволяет предполагать их участие в патофизиологических механизмах целого ряда когнитивных и психических расстройств (Lindamer et al., 1999; Sherwin, 2000, 2005; Amin, Epperson, 2005). Не случайно, что когнитивные и нервно-психические расстройства чаще встречаются у женщин по сравнению с мужчинами (Amin, Epperson, 2005).

Для коррекции обмена веществ при возникающих гормональных сдвигах в гипофизарно-овариальной системе у женщин, как правило, назначают стандартную заместительную гормонотерапию. При этом, положительный результат нередко сопровождается рядом побочных явлений, весьма губительных для отдельных пациенток. Так, длительное применение эстрогенсодержащих препаратов в качестве заместительной терапии в большинстве случаев приводит к резким нарушениям в сердечно-сосудистой и гепатобилиарной системах, а также к появлению новообразований (Cметник, 2003; Wang-Cheng, Rosenfeld, 2003). Следует отметить, что в эти схемы лечения не входит оптимальная нормализация мнестических процессов пациента, а сведения о какой-либо фармакологической коррекции нарушений высших функций мозга при патологическом функционировании гипофизарно-овариальной системы, кроме заместительной гормональной терапии, отсутствуют.

Принимая во внимание многомерность влияния эстрогенов на ЦНС, а также широкий спектр воздействия эстрогенов на функциональную активность нейромедиаторных систем, особенно важным представляется вопрос об изучении роли эстрогенов в реализации эффектов различных фармакологических нейротропных веществ, действующих на нейромедиаторные рецепторы. Анализ данных литературы показывает, что эстрогены могут оказывать существенное влияние на развитие эффектов лекарственных веществ как при остром, так и при хроническом применении препаратов (Арушанян, 2005). Следовательно, детализация эффектов нейротропных препаратов при дисбалансе эстрогенов является необходимым условием как для поиска оптимальных подходов к терапии, так и для разработки новых лекарственных препаратов. Кроме того, установлено, что введение 17?-эстрадиола в очень низких дозах, обеспечивающих уровень эстрадиола в крови, близкий к физиологическому, выраженно улучшает когнитивные процессы у овариоэктомированных крыс при исследовании в различных поведенчеcких тестах по сравнению с введением других препаратов эстрогенов в высоких дозах (Wise et al., 2005).

В связи с этим, разработка новых подходов фармакокоррекции, при которых используемые различные нейротропные препараты или их комбинация с эстрогенами в минимальных дозах прямо или опосредованно модулируют функциональную активность нейромедиаторных или гормональных систем, приводя к улучшению или полной нормализации процессов высшей нервной деятельности мозга, является актуальной.

Целью настоящей работы являлось изучение возможности фармакологической коррекции нарушений высшей нервной деятельности мозга в условиях аномального функционирования гипофизарно-овариальной системы, а также в ключевые периоды полового цикла у самок крыс, с помощью сочетанного введения нейротропных веществ и гормонального агента в низких дозах.

Задачи исследования:

1. Оценить эффекты низкого или высокого уровня эндогенных эстрогенов, тотального дефицита эндогенных эстрогенов и экзогенного введения 17-эстрадиола на мнестические процессы, уровень половых гормонов в крови, обмен моноаминов и экспрессию генов рецепторов в структурах головного мозга у самок крыс.

2. Провести сравнительный анализ влияния серотонинотропных, дофаминотропных и холинотропных веществ в низких дозах на условнорефлекторную деятельность и эмоциональные формы поведения, гормональный и нейромедиаторный статус, а также экспрессию генов рецепторов в головном мозге в условиях физиологических колебаний уровня эндогенных эстрогенов у нормально циклирующих самок.

3. При экспериментальном дефиците эстрогенов провести сравнительное изучение действия серотонинотропных, дофаминотропных и холинотропных веществ, введенных изолированно или в комбинации с 17-эстрадиолом в минимальных дозах, на поведенческий, гормональный и нейромедиаторный статус, а также на экспрессию генов рецепторов в головном мозге.

Научная новизна. Проведенное исследование позволило уточнить характер взаимодействия моноаминергических и холинергической систем с гипоталамо-гипофизарно-овариальной системой, нарушения которых определяют развитие когнитивных расстройств при аномальном функционировании указанной гормональной системы. Впервые проведено комплексное сравнительное изучение роли нейромедиаторных систем в патогенезе развития нарушений высшей нервной деятельности в условиях естественного колебания уровня эстрогенов в крови в течение полового цикла и при экспериментально созданном дефиците эстрогенов у самок крыс. Обоснован новый подход к фармакотерапии когнитивных нарушений при дисбалансе эстрогенов, который заключается в минимизации доз нейротропных препаратов и 17-эстрадиола при их комбинированном использовании.

В процессе исследования было впервые установлено, что:

1/ стимуляция 5-ГТ_1А-подтипа или блокада 5-ГТ_2А/2С-подтипа серотониновых рецепторов корректирует мнестические процессы у ОЭ самок и ОЭ самок, получавших 17-эстрадиол;

2/ стимуляция Д₁-типа или Д₂-типа дофаминовых рецепторов нормализует высшую нервную деятельность и уменьшает выраженность тревожного поведения у ОЭ самок и ОЭ самок, получавших 17-эстрадиол;

3/ блокада Д₂-типа дофаминовых рецепторов восстанавливает мнестический статус и оказывает антидепрессивный эффект у ОЭ самок и ОЭ самок, получавших 17-эстрадиол;

4/ повышение уровня ацетилхолина, стимуляция М- или блокада Н-холинорецепторов корректирует условнорефлекторную память у ОЭ самок и ОЭ самок, получавших 17-эстрадиол;

5/ блокада 5-ГТ_1А-подтипа серотониновых рецепторов или Д₁-типа дофаминовых рецепторов нарушает мнестические функции мозга у ОЭ самок и ОЭ самок, получавших 17-эстрадиол.

Приоритетный характер носят полученные в работе данные об эффектах серотонинотропных, дофаминотропных и холинотропных веществ в низких дозах на гормональный статус, обмен моноаминов и экспрессию генов рецепторов нейромедиаторов и рецептора 17-эстрадиола в структурах головного мозга, вовлеченных в механизмы реализации высших функций мозга.

Научно-практическое значение работы. Представленная работа, посвященная анализу важнейшего аспекта проблемы взаимодействия нейромедиаторных и гормональной овариальной систем при дисбалансе эстрогенов в патогенезе мнестических расстройств, носит фундаментальный характер. Основное теоретическое значение работы состоит в раскрытии нейро-эндокринных взаимодействий, включающих модуляцию гормонального статуса, обмена биогенных аминов и экспрессии генов рецепторов нейромедиаторов и 17-эстрадиола. Полученные в работе данные позволяют говорить о существовании конкурентных или синергичных взаимоотношений в ряде случаев между эстрогенами и нейромедиаторами в контроле высшей нервной деятельности при дефиците эстрогенов в эксперименте.

Вместе с тем, проведенное исследование создает экспериментальный базис для разработки и внедрения новых подходов к фармакотерапии когнитивных расстройств при дефиците эстрогенов в клинической практике. Предложен способ лечения нарушений мнестических функций при гипоэстрогенном синдроме (патент № 2268726). Полученные в работе результаты могут быть использованы и в разработке новых подходов для коррекции гормонального статуса при различных эндокринных патологиях, сопровождающихся дисфункцией гипофизарно-овариальной системы.

Результаты исследования способствуют выбору оптимальной терапии конитивных расстройств при дефиците эстрогенов с учетом всех негативных и позитивных эффектов монотерапии нейротропными веществами в низких дозах или комбинированной терапии нейротропными препаратами совместно с 17-эстрадиолом в низкой дозе и создают необходимые условия для разработки специальных гендерных схем назначения веществ с целью повышения их эффективности и ограничения побочных реакций.

Проведенный в работе анализ эффектов комбинированной терапии нейротропными веществами с 17-эстрадиолом открывает перспективы для создания новых фармакологических препаратов, сочетающих в себе одновременно гормональной и нейромедиаторный агенты. На основе экспериментальных данных могут быть предложены новые подходы к применению нейротропных средств и/или их комбинациий с гормональными препаратами для эффективной фармакокоррекции расстройств высших функций мозга при дисбалансе эстрогенов в организме.

Основные положения, выносимые на защиту:

Направленность фармакологических эффектов нейротропных веществ, введенных изолированно или в комбинации с 17-эстрадиолом в низкой дозе, зависит от типа расстройств высших функций мозга и функционального состояния гипофизарно-овариальной системы.

При выборе оптимальной схемы фармакокоррекции мнестических нарушений при дисфункции гипофизарно-овариальной системы в эксперименте следует учитывать гормональный фон и тип патологии высшей нервной деятельности.

Фармакологические воздействия на холинергическую, дофаминергическую или серотонинергическую системы могут потенцировать или ингибировать поведенческие эффекты экзогенно введенного 17-эстрадиола в зависимости от стимуляции или блокирования типа нейромедиаторных рецепторов.

Использование холинотропных веществ, активирующих М-холинореактивные структуры или блокирующих Н-холинореактивные структуры головного мозга, оказывает универсальное корректирующее влияние при нарушениях высшей нервной деятельности независимо от гормонального статуса самок крыс.

Нормализация эмоциональных форм поведения при применении нейротропных средств, стимулирующих 5-ГТ_1А-подтип серотониновых рецепторов или блокирующих 5-ГТ_2А/2C-подтип серотониновых рецепторов, не детерминируется состоянием гипофизарно-овариальной системы.

Позитивные эффекты дофаминотропных веществ на мнестические процессы и тревожно-депрессивное поведение зависят от гормонального статуса и характера нарушений высших функций головного мозга.

Личный вклад автора. Автором лично проведены все опыты с использованием различных поведенческих методик, выполнены биохимические исследования по определению уровня тропных и периферических половых гормонов в крови in vitro и оценке обмена биогенных аминов в структурах головного мозга. Часть исследований, посвященных изучению экспрессии генов рецепторов в разных образованиях головного мозга, проделана совместно с Н.А. Платоновой, Н.В. Цымбаленко и Л.В. Пучковой (Отдел молекулярной генетики ГУ НИИЭМ РАМН).

Апробация работы. Результаты работы докладывались на различных международных и всероссийских конгрессах и конференциях. Из числа важнейших форумов, на которых были представлены материалы диссертации, следует отметить: Пленум правления Российского научного общества фармакологов «Фармакология и современная медицина» (Санкт-Петербург, 1999); 1-ый, 2-ой и

3-ий Региональные конгрессы Международного общества психонейроэндокринологов (Санкт-Петербург, 2001; Бухарест, Румыния, 2002; Капподокия, Турция, 2004); 33-ий и 35-ый Ежегодные конгрессы Международного общества психонейроэндокринологов (Пиза, Италия, 2003; Глазго, Шотландия, 2004); 2-ой Съезд Российского общества фармакологов (Москва, 2003); Всероссийская конференция с международным участием «Нейроэндокринология - 2003» (Санкт-Петербург, 2003); 1-ый Международный экологический форум (Санкт-Петербург, 2003); 24-ый конгресс Международной коллегии нейропсихофармакологии (Париж, Франция, 2004); Региональный конгресс Международной коллегии нейропсихофармакологии (Брно, Чехия, 2004); 17-ый, 18-ый и 20-ый конгрессы Европейской коллегии нейропсихофармакологии (Стокгольм, Швеция, 2004; Амстердам, Нидерланды, 2005; Вена, Австрия, 2007); 8-ой Региональный конгресс Европейской коллегии нейропсихофармакологии (Москва, 2005); 8-ой Всемирный конгресс биологической психиатрии, (Вена, Австрия, 2005); 3-ий Съезд фармакологов России (Санкт-Петербург, 2007), а также на научных заседаниях отдела нейрофармакологии НИИЭМ РАМН (Санкт-Петербург (2004 - 2007 гг).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 53 работы, из них 22 статьи в центральных отечественных и зарубежных реферируемых журналах.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 342 страницах машинописного текста, включая 36 таблиц и 83 рисунка. Диссертация содержит разделы «Введение», «Обзор литературы», «Материалы и методы исследования», «Результаты», «Обсуждение результатов» и «Выводы». Список литературы насчитывает 344 источника, из них 28 работ на русском языке, 316 на иностранном.

Материалы и методы исследования

Работа выполнена на 3800 половозрелых cамках крыс линии Вистар массой 180-200 г, получаемых из питомника «Рапполово». Все исследования проводились в утренние часы (10.00 13.00). Для выполнения каждой методики крыс разделяли на группы по 8-10 особей в каждой.

Операция удаления яичников. Операционное вмешательство осуществляли с соблюдением правил асептики. В качестве наркоза использовали диэтиловый эфир. Методические особенности и детали операции подробно описаны у Я. Д. Киршенблата (1969). Отсутствие эстрального цикла у самок подтверждали анализом влагалищных мазков в течение 4-х дней до начала эксперимента.

Цитологический метод определения стадии полового цикла у самок. Для анализа влияния разного уровня эндогенных эстрогенов нами были выбраны три наиболее характерные фазы полового цикла: диэструс, проэструс и эструс (Розен, 1994). Определение фаз полового цикла (диэструс, проэструс, эструс) у интактных крыс проводили с использованием характерных морфологических признаков по мазкам согласно описанию у Я. Д. Киршенблата (1969).

Вещества

Серотонинотропные вещества. 8-OH-DPAT ([]-8-гидрокси-2-дипропиламинотетралина гидробромид) селективный агонист 5-ГТ_1А-рецепторов растворяли в 0,9% растворе NaCl и вводили подкожно в дозе 0,05 мг/кг. NAN-190 (1-(2-метоксифенил)-4-(4-фталимидобутил) пиперазина гидробромид) селективный антагонист 5-ГТ_1А-рецепторов растворяли в смеси, состоящей из 5 частей дистиллированной воды, 4 частей пропиленгликоля и 1 части 96% этилового спирта, и вводили внутрибрюшинно в дозе 0,1 мг/кг. m-CPP (1-(3-хлорфенил)пиперазина гидрохлорид) селективный агонист 5-ГТ_2В/2C-рецепторов растворяли в 0,9% растворе NaCl и вводили внутрибрюшинно в дозе 0,5 мг/кг. Кетансерин (R 41468/3-[2-[4-(4-флюоробензоил)-1-пиперидинил]этил]-2,4[1Н,3Н]-квиназолинэдиона тартрат) селективный антагонист 5-ГТ_2А/2C-рецепторов растворяли в 0,9% растворе NaCl и вводили внутрибрюшинно в дозе 0,1 мг/кг.

Дофаминотропные вещества. SKF-38393 ([]-1-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-(1Н)-3-бензазепин-7,8-диол гидробромид) агонист Д₁-типа рецепторов растворяли в 0,9% растворе NaCl и вводили внутрибрюшинно в дозе 1,0 мг/кг. SCH-23390 ([R]-(+)-7-хлор-8-гидрокси-3-метил-1-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1Н-3-бензазепин гидрохлорид) антагонист Д₁-типа рецепторов растворяли в смеси, состоящей из 5 частей дистиллированной воды, 4 частей диметилсульфоксида и 1 части 96% этилового спирта, и вводили внутрибрюшинно в дозе 0,1 мг/кг. Квинпирол ([4а-транс]-4,4а,5,6,7,8,8а,9-октагидро-5-пропил-1Н-пиразол[3,4-g]квинолина гидрохлорид) агонист Д₂-типа рецепторов растворяли в 0,9% растворе NaCl и вводили внутрибрюшинно в дозе 0,1 мг/кг. Сульпирид ([RS]-()-5-аминосульфонил-N-[(1-этил-2-пирролидинил]-2-метоксибензамид) антагонист Д₂-типа рецепторов растворяли в смеси, состоящей из 5 частей дистиллированной воды, 4 частей диметилсульфоксида и 1 части 96% этилового спирта и вводили внутрибрюшинно в дозе 10,0 мг/кг.

Холинотропные вещества. Галантамина гидробромид растворяли в 0,9% растворе NaCl и вводили внутрибрюшинно в дозе 1,0 мг/кг. Метамизил растворяли в 0,9% растворе NaCl и вводили внутрибрюшинно в дозе 0,5 мг/кг. Ганглерон растворяли в 0,9% растворе NaCl и вводили внутримышечно в дозе 5,0 мг/кг. При сочетанном введении метамизила и галантамина, последний вводили через 20 минут после введения метамизила.

Гормональный препарат. 17-Эстрадиол (17-Е₂) растворяли в стерильном персиковом масле и вводили внутримышечно в дозе 0,5 мкг на каждое животное. Необходимо отметить, что в данном исследовании была использована низкая доза 17-эстрадиола (Wise, 2000).

Необходимо подчеркнуть, что все нейротропные вещества были использованы в низких поведенческих дозах, полностью соответствующих данным литературы (Diaz-Veliz et al., 1995, 1997, 1999; Лосев,. 2001; Bethea et al., 2002). Фармакологические вещества вводили в объеме 0,1 мл на животное ежедневно в течение 14 дней, через 2 недели после овариоэктомии. Поведенческие тесты проводили через 1 час после последнего введения фармакологических веществ.

Поведенческие тесты

Условную реакцию пассивного избегания (УРПИ) вырабатывали на основе однократного электрокожного подкрепления в установке, состоящей из двух камер большой (освещенной) и малой (темной) с электрифицированным полом, сообщающихся между собой круглым отверстием (Любимов, 1965). Методическая особенность эксперимента заключалась в использовании высоких значений электрического тока (6 мA) для выработки прочно сформированного навыка пассивного избегания (Sandi, Rose, 1997). Регистрировали латентный период захождения животного в темную камеру. Воспроизведение УРПИ определяли через 24 часа. Незахождение в темную камеру расценивали как воспроизведение навыка пассивного избегания, а укорочение времени нахождения в освещенной камере как амнезию навыка.

Водный лабиринт Морриса. Для выявления способности животных к пространственной ориентации в работе использовали бассейн диаметром 130 см и высотой 50 см, заполненный водой на глубину 35 см (Пономарев, Виноградова, 2000). В течение 7 дней животных обучали поиску этой платформы, которая располагалась на периферии бассейна в 15 см от борта. В день тестирования (8-ой день эксперимента) животному предоставлялись две попытки тренировочная и опытная, интервал между которыми составлял 60 с. В течение 3 мин регистрировали время обнаружения платформы в течение тренировочной и опытной попыток.

Уровень тревожности у животных определяли с использованием общепринятого теста приподнятого «крестообразного» лабиринта (Воронина, Середенин, 2000). Поведение животных регистрировали в течение 5 мин и оценивали следующие параметры: время нахождения в открытых и закрытых рукавах, число заходов в открытые и закрытые рукава.

Тест Порсолта. Суть метода состоит в том, что крыс помещают в сосуд 30-40 см в диаметре и глубиной 60 см, заполненный водой с температурой 25 2⁰С. Животные, попадая в воду, стараются выбраться из сосуда. Убедившись в тщетности своих попыток, крысы оставляют их и зависают в воде в характерной позе (Porsolt et al., 1978). Показателем выраженности депрессивноподобного состояния по данному тесту является длительность неподвижности, которую оценивали визуально. Через 24 часа проводили тестирование выраженности депрессивноподобного состояния. Животное снова помещали в сосуд с водой и в течение 5 мин регистрировали время неподвижности.

Биохимические методы

Определение метаболизма моноаминов в структурах головного мозга. Выделенные структуры мозга (гипоталамус, гиппокамп и миндалина) размельчали в гомогенизаторе стекло-тефлон при 4⁰С и скорости вращения пестика 3000 об/мин с использованием в качестве среды выделения 0,1 н HСlO_4. После этого пробы центрифугировали при 14000 g в течение 7 мин при 4⁰C, после чего супернатант был профильтрован через 0.2 мм Millipore фильтр. Концентрацию дофамина (ДА), норадреналина (НА), серотонина (СА) и их метаболитов МГФГ, ДОФУК и 5-ГИУК в гипоталамусе, гиппокампе и миндалине определяли методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) на «Beckman System Gold» с электрохимическим детектором LC-4C. Разделение пиков проходило в хроматографической колонке SperoClone 5 ODS 2 (250 mm x 4,60 mm) с предколонкой SecurityGuard (ODS 4,0 mm L x 3,0 mm ID) производства «Phenomenex». В состав подвижной фазы входил 0,1 М цитратно-фосфатный буфер, содержащий 0,3 мМ октансульфоната натрия, 0,1 мМ ЭДТА и 8% ацетонитрила (рН = 3,2) (Андреев и соавт., 2002). Идентификацию и чистоту хроматографических пиков, а также их количественную оценку осуществляли по отношению к пикам, полученным от внешних стандартов с использованием пакета компьютерных программ.

Определение уровня половых тропных и периферических гормонов в сыворотке крови. Уровень половых гормонов (лютеинизирующий гормон ЛГ, фолликулостимулирующий гормон ФСГ, эстрадиол Э, прогестерон П) определяли в сыворотке крови с помощью гормональных тест-наборов для твердофазного иммуноферментного анализа in vitro у человека (DRG Германия, Adultis Италия, Biochimmak Германия, Хема-Медика Италия-Россия) согласно прилагаемой инструкции, но с предварительной раститровкой всех наборов и подбором оптимального разведения сывороток крови крыс, выполнением теста на удвоение и теста внутреннего стандарта для каждого набора. Подсчет результатов производился автоматически с помощью многоканального плашечного спектрофотометра «Униплан» (Россия) при длине волны 450 нм.

Определение уровня экспрессии генов рецепторов нейромедиаторов и 17-Е₂-рецептора в структурах головного мозга. Характер экспрессии 5-ГТ_1А-рецептора, 5-ГТ_2C-рецептора, Д₁-рецептора, Д₂-рецептора, M-холинорецептора, Н-холинорецептора и 17-Е₂-рецептора в гипоталамусе, гиппокампе и миндалине определяли методом полуколичественной полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией (ОТ-ПЦР). Последовательности прямого и обратного праймеров, кодирующих 5-ГТ_1А-рецептор, были подобраны по последовательности Genbank Ac.N NM_012585, Rattus norvegicus 5-hydroxytryptamine (serotonin) receptor 1A(Htr1a), mRNA, 1269 bp. Длина ПЦР-продукта для 5-ГТ_1А-рецептора составляла 362 п.н. Последовательности прямого и обратного праймеров, кодирующих 5-ГТ_2С-рецептор, были подобраны по последовательности Genbank Ac.N NM_012765, Rattus norvegicus 5-hydroxytryptamine (serotonin) receptor 2С(Htr2с, mRNA, 1383 bp). Длина ПЦР-продукта для 5-ГТ_2C-рецептора составляла 170 п.н. Последовательности прямого и обратного праймеров, кодирующих Д₁-рецептор, были подобраны по последовательности Genbank Ac.N NM_012546, Rattus norvegicus dopamine receptor 1A (Drd1a), mRNA, 3715 bp. Длина ПЦР-продукта для Д₁-рецептора составляла 202 п.н. Последовательности прямого и обратного праймеров, кодирующих Д₂-рецептор, были подобраны по последовательности Genbank Ac.N NM_012547, Rattus norvegicus dopamine receptor 2 (Drd2), mRNA, 2750 bp. Длина ПЦР-продукта для Д₂-рецептора составляла 399 п.н. Последовательности прямого и обратного праймеров, кодирующих М-холинорецептор, были подобраны по последовательности Genbank Ac.N NM_031016, Rattus norvegicus cholinergic receptor, muscarinic 2 (Chrm2), mRNA, 2483 bp. Длина ПЦР-продукта для М-холинорецептора составляла 200 п.н. Последовательности прямого и обратного праймеров, кодирующих Н-холинорецептор, были подобраны по последовательности Genbank Ac.N NM_031016, Rattus norvegicus cholinergic receptor, nicotinic, alpha, polypeptide 2 (neuronal) (Chrna2), mRNA, 1931 bp). Длина ПЦР-продукта для Н-холинорецептора составляла 201 п.н. Последовательности прямого и обратного праймеров, кодирующих 17-Е₂-рецептор, были подобраны по последовательности Genbank Ac.N RNU57439, Rattus norvegicus estrogen receptor beta mRNA, 2555 bp. Длина ПЦР-продукта для 17-Е₂-рецептора составляла 332 п.н. Сравнительный анализ нуклеотидных последовательностей ДНК проводили с использованием программы «BLAST» (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/). Тотальную РНК выделяли из ~25-30 мг ткани с помощью QiuckPrep Total RNA Extraction kit^TM (AmershamPharmaciaBiotech, UK Limited) в полном соответствии с протоколом производителя. Обратную транскрипцию проводили в 25 мкл реакционной смеси, содержащей 1,0 мкг полирибосомной РНК, 200,0 ед. РНК-зависимой ДНК-полимеразы (M-Mlv обратная транскриптаза, 200,0 Eд/мкл, АмплиСенс, Россия), 1,0 мкМ random-праймера (АмплиСенс, Россия), эквимолярную смесь четырех dNTP по 500,0 мкM каждого (Promega, США), 5XОТ-буфер. Полимеразную цепную реакцию проводили в 30,0 мкл смеси, содержащей 1 мкл синтезированной кДНК, 1,5 ед. рекомбинантной Диа Taq-полимеразы (5,0 Eд/мкл, АмплиСенс, Россия), 1,5 мМ MgCl₂, эквимолярную смесь четырех dNTP по 200,0 мкмолей каждого, 6,0 мкл 5-кратного ПЦР-буфера (АмплиСенс, Россия) и по 0,5 мкМ специфических праймеров (Синтол, Россия). Начальную денатурацию проводили при 94⁰С в течение 5 мин, синтез состоял из 30 циклов, включавших этапы денатурации (94⁰С, 1 мин), отжига (60⁰С для 5-ГТ_1А-рецептора, 55⁰С для 5-ГТ_2С-рецептора, 57⁰С для Д₁-рецептора, 59⁰С для Д₂-рецептора, 55⁰С для M-холинорецептора, 59⁰С для Н-холинорецептора, 1 мин) и элонгации (72⁰С, 1 мин). Заключительный цикл элонгации длился 7 мин. Протокол амплификации для 17-Е₂-рецептора: начальная денатурация при 94⁰С в течение 5 мин, 35 циклов: 94 ⁰C 1 мин, 53⁰C 1 мин, 68⁰C 1 мин, и последний цикл элонгации 7 мин 68⁰C. В качестве контроля синтезированных кДНК проводили ПЦР с праймерами к -актину. Были использованы следующие праймеры: прямой 5'-GAAGATCCTGACCGAGCGTG-3' и обратный 5'-AGCACTGTGTTGGCATAGAG-3'. Длина ПЦР-продукта составляла 327 п.н. Электрофоретический анализ ПЦР продуктов проводили в 1% агарозном геле. В качестве маркеров использовали ДНК-маркеры фирмы Сибэнзим (от 1000 п.н. до 100 п.н., отличающиеся друг от друга на 100 п.н.). Определение относительного содержания ЦП-мРНК проводили следующим образом. ПЦР-продукты подвергали электрофорезу в 1% агарозном геле, гели окрашивали бромистым этидием, цифровые фотографии геля денситометрировали посредством программы Scion Image и результаты выражали как отношение количества образовавшегося ПЦР-продукта данной мРНК к количеству -актина.

Статистическая обработка результатов

Результаты экспериментов обрабатывали с применением интегрированного пакета статистических программ SPSS 9.0 (StatSoft, Inc). Статистическая обработка полученных данных проводилась с использованием двухфакторного дисперсионного анализа (General Linear Model) при Р<0.05. Данные, не удовлетворяющие критериям нормального распределения и не прошедшие тест на равенство дисперсий, обрабатывали с применением теста Краскалла-Уоллиса. В таблицах и графиках результаты экспериментов представлены в виде M m, где: М среднее арифметическое, m среднеквадратичная ошибка среднего арифметического, число животных в группах (N) было 8-10 особей.

Результаты исследования и их обсуждение

Влияние серотонинотропных веществ на высшую нервную деятельность у интактных самок крыс

Было выявлено, что при стимуляции 5-ГТ_1А-подтипа или при блокаде 5-ГТ_2А/2С-подтипа серотониновых рецепторов независимо от уровня эндогенных эстрогенов в организме нарушалась способность к воспроизведению условной реакции пассивного избегания (УРПИ) и существенно угнеталась способность самок к пространственному обучению (рис. 1 и 2).



Размещено на http://www.allbest.ru/

Размещено на http://www.allbest.ru/

Рисунок 1. Влияние серотонинотропных веществ на воспроизведение УРПИ у интактных самок крыс в различные фазы полового цикла. Примечание: * - р<0,05 (тест Тьюки), достоверное отличие от самок в фазе диэструса; # - р<0,05 (тест Тьюки), достоверное отличие от контрольных самок в соответствующих фазах полового цикла.

Рисунок 2. Влияние на пространственное обучение в водном тесте Морриса (8-ой день тестирования) у интактных самок крыс в различные фазы полового цикла. Примечание: см. как на рис. 1.

В то же время, блокада 5-ГТ_1А-подтипа серотониновых рецепторов как при низком уровне эндогенных эстрогенов, так и при их высоком уровне приводила к восстановлению процесса воспроизведения УРПИ у крыс (рис. 1). С другой стороны, стимуляция 5-ГТ_2В/2С-подтипа серотониновых рецепторов выраженно улучшала пространственное обучение у крыс независимо от уровня эндогенных эстрогенов в организме (рис. 2).

В тесте приподнятый «крестообразный» лабиринт у самок крыс при среднем или низком уровне эндогенных эстрогенов на фоне блокады 5-ГТ_1А-подтипа серотониновых рецепторов регистрировался анксиогенный эффект, тогда как при высоком уровне эстрогенов, напротив, проявлялся анксиолитический эффект (табл. 1). При стимуляции 5-ГТ_2В/2C-подтипа серотониновых рецепторов при низком или среднем уровне эндогенных эстрогенов уровень тревожности снижался, а при их

Таблица 1 Влияние NAN-190, m-CPP и кетансерина на тревожное поведение интактных самок крыс

Фаза цикла	Время в «открытых рукавах», сек	Время в «закрытых рукавах», сек	Количество заходов в «открытые рукава», раз	Количество заходов в «закрытые рукава», раз
ИНТАКТНЫЕ САМКИ
ДИЭСТРУС	86,4 6,2	213,6 2,4	1,8 0,2	2,1 0,4
ПРОЭСТРУС	36,4 3,4*	263,6 8,6*	0,4 0,1*	4,5 0,2*
ЭСТРУС	42,6 4,2*	257,4 2,2*	0,3 0,1*	4,0 0,6*
ИНТАКТНЫЕ САМКИ + NAN-190
ДИЭСТРУС	41,2 3,4#	258,8 8,6#	1,2 0,2	2,2 0,2
ПРОЭСТРУС	90,3 3,4#	209,7 6,2#	0,4 0,2	4,0 0,4
ЭСТРУС	23,7 2,2#	276,3 3,8#	0,3 0,1	4,1 0,6
ИНТАКТНЫЕ САМКИ + m-CPP
ДИЭСТРУС	153,4 3,2#	146,6 4,2#	4,2 0,4#	0,8 0,2#
ПРОЭСТРУС	13,8 0,8#	286,2 5,6	0,1 0,02#	3,9 0,8
ЭСТРУС	86,8 5,2#	213,2 7,2#	3,6 0,2#	1,6 0,4#
ИНТАКТНЫЕ САМКИ + КЕТАНСЕРИН
ДИЭСТРУС	83,5 4,2	216,5 2,4	1,6 0,2	2,0 0,6
ПРОЭСТРУС	84,0 4,8#	216,0 5,6#	2,8 0,2#	0,6 0,2#
ЭСТРУС	92,0 6,2#	208,3 4,6#	2,6 0,2#	0,5 0,2#

Примечание: * - р<0,05 (тест Тьюки), достоверное отличие от самок в фазе диэструса; # - р<0,05 (тест Тьюки), достоверное отличие от контрольных самок в соответствующих фазах полового цикла.

высоком уровне степень тревожности у самок крыс увеличивалась. Однако блокада 5-ГТ_2А/2С-подтипа серотониновых рецепторов однонаправлено вызывала анксиолитический эффект в условиях как низкого, так и высокого содержания эндогенных эстрогенов.

В тесте Порсолта стимуляция 5-ГТ_1А- или 5-ГТ_2В/2С-подтипов серотониновых рецепторов в условиях низкого или высокого уровня эндогенных эстрогенов оказывала антидепрессивный эффект у самок (рис. 3).

Рисунок 3. Влияние серотонинотропных веществ на депрессивноподобное поведение у интактных самок крыс в различные фазы полового цикла. Примечание: см. как на рис. 1.

Таким образом, можно говорить о наличии избирательного влияния серотонинотропных веществ на условнорефлекторную деятельность и депрессивноподобное поведение в течение полового цикла. Действие серотонинотропных веществ на тревожное поведение во многом определяется фазой полового цикла.

Согласно данным литературы, 8-OH-DPAT в низких дозах (0,1 - 0,3 мг/кг, подкожно) улучшает кратковременную рабочую память у самцов крыс, тогда как введение 8-OH-DPAT в высокой дозе (1,0 мг/кг, подкожно), напротив, нарушает кратковременную рабочую память и удлиняет латентный период появления рефлекса (Cole et al., 1994; Menenses, Hong, 1995). Это связано с тем, что в низких дозах 8-OH-DPAT действует на пресинаптические рецепторы, а в высоких дозах на постсинаптические 5-ГТ_1А-рецепторы (Bethea et al., 2002). Выявлено, что NAN-190 (1,0 мг/кг, внутрибрюшинно) улучшал различные виды памяти у самцов крыс (Ohno, Watanabe, 1996; Souza et al., 2001). Работы Diaz-Veliz и соавторов (1997) показали, что однократное введение кетансерина (3,0 мг/кг, подкожно) за 30 минут до тестирования проявляло анксиолитический эффект в фазу диэструса, но анксиогенный эффект в фазы эструса и проэструса, при этом кетансерин в данной дозе не оказывал какого-либо влияния на тревожное поведение у самцов крыс. У самок, получавших кетансерин, не было выявлено воспроизведения УРПИ в фазы диэструса и метэструса, но в фазу эструса при введении этого препарата отмечалось воспроизведение УРПИ. На УРАИ кетансерин оказывал позитивное влияние в фазу эструса, однако нарушал способность у животных к этой форме обучения в фазу диэструса (Diaz-Veliz et al., 1997).

Влияние серотонинотропных веществ на уровень тропных и периферических половых гормонов в крови, обмен биогенных аминов и экспрессию генов рецепторов нейромедиаторов и 17-эстрадиола в головном мозге у интактных самок крыс

При изучении нейрохимических механизмов действия серотонинотропных препаратов на мнестические функции мозга было выявлено, что данные гормонального и нейромедиаторного статуса, а также результаты экспрессии генов рецепторов нейромедиаторов и 17-Е₂ у самок в фазу эструса или проэструса, получавших исследуемые вещества, не коррелируют отчетливо с результатами, обнаруженными в поведенческих тестах. Можно говорить только о существовании модуляции протекания биохимических процессов в зависимости от фазы полового цикла под действием серотонинотропных веществ, что в конечном итоге выражается и в модуляции условнорефлекторной деятельности. Вместе с тем, нельзя недооценивать те биохимические и поведенческие эффекты, которые оказывают серотонинотропные вещества при их применении в течение полового цикла в эксперименте, поскольку эти нейротропные вещества глубоко изменяют функциональное состояние всей гипоталамо-гипофизарно-овариальной системы.

Влияние серотонинотропных веществ на высшую нервную деятельность у овариоэктомированных самок и овариоэктомированных самок, получавших 17-эстрадиол

Изолированное или комбинированное с низкой дозой 17-E₂ хроническое введение агониста 5-ГТ_1А-подтипа серотониновых рецепторов - 8-OH-DPAT или антагониста 5-ГТ_2А/2C-подтипа серотониновых рецепторов - кетансерина ОЭ самкам оказывало позитивное влияние на процессы обучения и памяти как на модели непространственного обучения - модель УРПИ, так и на модели пространственного обучения - водный тест Морриса (рис. 4, 5, 6 и 7). При этом, введение 8-OH-DPAT или кетансерина ОЭ самкам, получавшим 17-E₂ и без него, сопровождалось снижением уровня тревожности в тесте приподнятый «крестообразный» лабиринт ([F(7,36) = 3,40, p<0,05] и [F(5,72) = 21,95, p<0,01], соответственно) и степени депрессивности в тесте Порсолта ([F(7,36) = 2,88, p<0,01] и [F(5,72) = 5,97, p<0,01], соответственно).

нервный аномальный гипофизарный нейротропный



Размещено на http://www.allbest.ru/

Размещено на http://www.allbest.ru/

Рисунок 4. Влияние серотонинотропных веществ на воспроизведение УРПИ у ОЭ самок крыс. Примечание: * - р<0,05 (тест Тьюки), достоверное отличие от самок в фазе диэструса или эструса; ** - р<0,05 (тест Даннета), достоверное отличие от интактных самок в фазе диэструса или эструса, получавших серотонинотропные вещества; # - р<0,05 (тест Даннета), достоверное отличие от ОЭ самок.



Размещено на http://www.allbest.ru/

Размещено на http://www.allbest.ru/

Размещено на http://www.allbest.ru/

Размещено на http://www.allbest.ru/

Рисунок 5. Влияние серотонинотропных веществ на пространственное обучение (8-ой день тестирования) в тесте Морриса у ОЭ самок крыс. Примечание: см. как на рис. 4.

В то же время, изолированное или сочетанное с 17-E₂ хроническое введение антагониста 5-ГТ_1А-подтипа серотониновых рецепторов - NAN-190 вызывало антиамнестический эффект у ОЭ самок на разных моделях обучения и не оказывало какого-либо влияния на эмоциональные формы поведения. Необходимо также отметить, что позитивные поведенческие эффекты самого 17-E₂ у ОЭ самок на фоне введения NAN-190 полностью блокировались. Вместе с тем, введение агониста 5-ГТ_2B/2C-подтипа серотониновых рецепторов ОЭ самкам - m-CPP только частично проявляло позитивное действие на условнорефлекторную деятельность. Такие эффекты препарата могут быть обусловлены его способностью действовать не только на 5-ГТ_2B- или 5-ГТ_2C-подтипы серотониновых рецепторов, но и на 5-ГТ_1B- и 5-ГТ_1Д-подтипы серотониновых рецепторов, хотя и в меньшей степени (Bethea et al., 2002).

Размещено на http://www.allbest.ru/

Размещено на http://www.allbest.ru/

Рисунок 6. Влияние серотонинотропных веществ на воспроизведение УРПИ у ОЭ самок, получавших 17-эстрадиол. Примечание: * - р<0,05 (тест Тьюки), достоверное отличие от самок в фазе диэструса или проэструса; ** - р<0,05 (тест Даннета), достоверное отличие от самок в фазе диэструса или проэструса, получавших серотонинотропные вещества; # - р<0,05 (тест Даннета), достоверное отличие от контроля 3; $ - р<0,05 (тест Даннета), достоверное отличие от группы ОЭ крыс, получавших 17-эстрадиол.

Рисунок 7. Влияние серотонинотропных веществ на пространственное обучение у ОЭ самок крыс, получавших 17-эстрадиол. Примечание: см. как на рис. 6.

Влияние серотонинотропных веществ на уровень половых гормонов в крови, обмен биогенных аминов и экспрессию генов рецепторов нейромедиаторов и 17-эстрадиола в головном мозге у овариоэктомированных самок и овариоэктомированных самок, получавших 17-эстрадиол

Анализ гормонального фона у ОЭ самок, получавших 8-OH-DPAT или кетансерин изолированно или в сочетании с 17-E₂, показал, что данные препараты понижали уровни тропных гормонов - ФСГ и ЛГ и повышали содержание Э в крови, тем самым корректируя нарушенный гормональный статус у ОЭ самок (рис. 8). Оценка обмена нейромедиаторов в структурах головного мозга, имеющих непосредственное отношение к мнестическим функциям, выявила, что 8-OH-DPAT и кетансерин восстанавливают нарушенный обмен НА ([F(7,36) = 14,56, p<0,05] и [F(5,72) = 15,22, p<0,05] соответственно) и ДА ([F(7,36) = 7,40, p<0,01] и [F(5,72) = 20,05, p<0,01] соответственно) в гипоталамусе и миндалине, а также обмен СА ([F(7,36) = 15,22, p<0,05] и [F(5,72) = 3,22, p<0,01] соответственно) в гиппокампе у ОЭ самок и ОЭ самок, получавших 17-E₂. Кроме того, изолированное или комбинированное с 17-E₂ введение 8-OH-DPAT или кетансерина ОЭ самкам приводит к нормализации экспрессии генов 5-ГТ_1А-рецептора ([F(7,36) = 15,44, p<0,05] и [F(5,72) = 22,11, p<0,01] соответственно), 5-ГТ_2С-рецептора ([F(7,36) = 9,40, p<0,05] и [F(5,72) = 15,40, p<0,01] соответственно) и 17-E₂-рецептора ([F(7,36) = 2,88, p<0,01] и [F(1,72) = 6,92, p<0,01] соответственно) в гипоталамусе, гиппокампе и миндалине.



Размещено на http://www.allbest.ru/

Размещено на http://www.allbest.ru/

Размещено на http://www.allbest.ru/

Размещено на http://www.allbest.ru/

Размещено на http://www.allbest.ru/

Размещено на http://www.allbest.ru/

Рисунок 8. Влияние серотонинотропных веществ на уровень П и Э в крови у овариоэктомированных самок крыс, получавших 17-эстрадиол. Примечание: * - р<0,05 (тест Тьюки), достоверное отличие от самок в фазе диэструса, эструса или проэструса; ** - р<0,05 (тест Даннета), достоверное отличие от интактных самок в фазе диэструса, эструса или проэструса, получавших дофаминотропные вещества; # - р<0,05 (тест Даннета), достоверное отличие от ОЭ самок; $ - р<0,05 (тест Даннета), достоверное отличие от группы ОЭ крыс, получавших 17-эстрадиол.

Как свидетельствуют эти данные, при введении ОЭ самкам агониста 5-ГТ_1А-подтипа серотониновых рецепторов или антагониста 5-ГТ_2А/2C-подтипа серотониновых рецепторов изолированно или совместно с 17-E₂ происходит нормализация как условнорефлекторной деятельности, так и эмоциональной сферы поведения. Можно предполагать, что такие поведенческие эффекты данных препаратов у ОЭ самок могут быть обусловлены позитивным и комплексным влиянием этих веществ на гормональный и нейромедиаторный статус, а также на паттерн экспрессии генов рецепторов нейромедиаторов и 17-Е₂. Следует также отметить, что в условиях комбинированного с 17-E₂ введения 8-OH-DPAT и кетансерина отмечается потенцирование всех поведенческих и биохимических эффектов нейротропных веществ и гормонального агента. В то же время, негативное действие NAN-190 при его введении с 17-E₂ на высшие функции мозга у ОЭ самок распространяется как на гормональный, так и на нейромедиаторный статус, а также на экспрессию генов рецепторов в структурах головного мозга. Это говорит о том, что негативное действие NAN-190 на поведенческие процессы при дефиците эстрогенов сопровождается еще большим увеличением уровня ЛГ и понижением концентрации Э в крови, отсутствием изменений в обмене моноаминов во всех структурах головного мозга и патологически усиленной экспрессией генов 5-ГТ_1А-рецептора и 17-E₂ в структурах головного мозга, имеющих непосредственное отношение к мнестическим процессам. Введение m-CPP ОЭ самкам только частично проявляет позитивное действие на мнестические расстройства, при этом параллельно также частично восстанавливая нарушенный гормональный фон, повышая уровень НА, ДА и СА в гипоталамусе и экспрессию генов 5-ГТ_2С-рецептора и 17-E₂-рецептора в гипоталамусе и экстрагипоталамических образованиях головного мозга.

Как свидетельствуют результаты настоящего исследования, эффекты агониста и антагониста 5-ГТ_1А-подтипа серотониновых рецепторов на высшую нервную деятельность у ОЭ самок и ОЭ самок, получавших 17-E₂, противоположны, что свидетельствует об избирательном действии этих веществ именно на 5-ГТ_1А-подтип серотониновых рецепторов. Полагают, что 5-ГТ_1А-подтип серотониновых рецепторов опосредует многие эффекты эстрогенов на ЦНС (Wissnik et al., 2001). С другой стороны, известно, что ЭР может быть активирован многими стероидными и нестероидными лигандами, а не только его собственным лигандом - эстрадиолом (Tzukerman et al., 1994; Wissnik et al., 2001). Можно предположить, что разнонаправленные эффекты 8-OH-DPAT и NAN-190 связаны с их воздействием на ЭР. По-видимому, агонист 5-ГТ_1А-подтипа серотониновых рецепторов выступает в качестве синергичного с 17-E₂ активатора эстрогеновых рецепторов (ЭР), тогда как антагонист данного подтипа серотонинового рецептора препятствует связыванию 17-E₂ с ЭР и последующие эффекты обусловлены только аллостерической активацией ЭР посредством NAN-190. Данное предположение подтверждается результатами наших исследований на ОЭ самках, получавших 17-E₂: так 8-OH-DPAT потенцировал эффекты 17-эстрадиола на поведенческий, гормональный и нейромедиаторный статус, а также на экспрессию генов рецепторов нейромедиаторов и 17-Е₂, тогда как NAN-190, напротив, полностью блокировал эффекты 17-E₂ на эти же показатели. При анализе поведенческих эффектов кетансерина и m-CPP также прослеживается разнонаправленность в их действии, хотя присутствует и некоторая схожесть их эффектов на поведенческие процессы. Оба вещества воздействуют на 5-ГТ_2С-подтип серотониновых рецепторов, хотя один препарат активирует, а другой блокирует этот подтип рецепторов, но при этом эффекты на процессы обучения и памяти в некоторой степени однотипны. Выявленное обстоятельство отнюдь не артефакт. Во-первых, в литературе имеются сведения о том, что агонисты и антагонисты одного подтипа нейромедиаторных рецепторов могут приводить к одинаковым поведенческим эффектам именно у самок крыс с дисбалансом эстрогенов, при этом молекулярные механизмы таких эффектов до сих пор не выяснены (Diaz-Veliz, 1997). Во-вторых, m-CPP и кетансерин проявляют разнонаправленные эффекты на эмоциональные формы поведения ОЭ самок, позитивный эффект m-CPP на обучение, в отличие от такого же эффекта кетансерина, лишь частичен. Поэтому можно говорить о том, что частичный позитивный эффект m-CPP вызван его действием на 5-ГТ_2С-подтип серотониновых рецепторов, но полностью не реализуется вследствие его агонистического действия на 5-ГТ_2В-подтип серотониновых рецепторов и другие подтипы серотониновых рецепторов. Это позволяет предполагать, что 5-ГТ_2А-подтип серотониновых рецепторов играет более значимую роль в высшей нервной деятельности при дефиците эстрогенов у самок, чем 5-ГТ_2В-подтип серотониновых рецепторов.

Влияние дофаминотропных веществ на высшую нервную деятельность у интактных самок крыс

Как показали результаты экспериментов, введение агониста Д₁-типа дофаминовых рецепторов - SKF-38393 или агониста Д-типа дофаминовых рецепторов - квинпирола циклирующим самкам нормализует условнорефлекторную деятельность в фазах проэструса и эструса на моделях непространственного и пространственного обучения (за исключением действия SKF-38393 в водном лабиринте Морриса) (рис. 9 и 10).

Рисунок 9. Влияние дофаминотропных веществ на воспроизведение УРПИ у интактных самок крыс в различные фазы полового цикла. Примечание: * - р<0,05 (тест Тьюки), достоверное отличие от самок в фазе диэструса; # - р<0,05 (тест Тьюки), достоверное отличие от контрольных самок в соответствующих фазах полового цикла.

Вместе с тем, хроническое введение антагониста Д₁-типа дофаминовых рецепторов - SCH-23390 или антагониста Д-типа дофаминовых рецепторов - сульпирида приводило к ухудшению мнестических процессов у самок в фазах проэструса и эструса на разных моделях обучения (рис. 9 и 10). При этом, введение квинпирола сопровождалось снижением уровня тревожности в тесте приподнятый «крестообразный» лабиринт в фазах проэструса и эструса, тогда как введение SKF-38393 у этих же групп животных приводило к усилению проявления тревожного

...