1. Полученные данные о распределении групп крови у коренного населения (взрослых и детей) ханты дополняют общую картину генетической дифференциации народов Сибири и, в конечном итоге, уточняют геногеографическую карту России.

2. Разработанный новый метод на основе анализа параметров аттракторов иммуносерологических показателей крови целесообразно использовать для оценки скорости ассимиляции коренного населения пришлым населением.

3. Для перинатальной диагностики АВ0 и Rh-конфликтной беременности, диагностики гемолитической болезни плода и новорожденного на станциях и отделениях переливания крови Ханты-Мансийского автономного округа приводится скрининг антител в сыворотках крови беременных и новорожденных по системе АВ0, Rh и Kell.

4. Модернизированный метод с использованием 5% раствора сульфидредуцента унитиола эффективно позволяет идентифицировать IgG-антитела системы АВ0.

Положения, выносимые на защиту

1. Коренное население Югры - ханты в фазовом пространстве с позиций теории хаоса и синергетики имеет своеобразный характер распределения антигенов эритроцитарных групповых систем АВ0, Rh и K, отличающий их, как от европеоидов, так и монголоидов. Наиболее близкой ханты является популяция манси.

2. В субпопуляциях кочующих ханты имеет место генный дрейф, о котором, свидетельствует высокая частота гена q системы АВ0, также аллелей E, cDE и CDE системы Rh.

3. Представители полуизолированных (кочующие и оседлые ханты) популяций Югры и панмиктической (пришлое население) имеют неодинаковую частоту IgG-антител системы АВ0.

4. Параметры аттракторов иммуносерологических показателей крови коренного населения в субпопуляциях оседлых ханты свидетельствуют о смешении с пришлым славянским населением.

5. Модернизированный метод с использованием 5% раствора сульфидредуцента унитиола эффективно позволяет идентифицировать IgG-антитела системы АВ0.

Апробация работы

Материалы работы доложены на ХVIII съезде физиологического общества имени И.П. Павлова (Казань, 2001); I всероссийской конференции «Актуальные проблемы эволюционной и популяционной физиологии человека» (Тюмень, октябрь 2001); II окружной конференции «Современные проблемы оказания трансфузионной помощи» в Ханты-Мансийском автономном округе (Нижневартовск, апрель 2003); международном научном симпозиуме «Югра-ГЕМО» (Ханты-Мансийск, октябрь 2003); на III окружной научно-практической конференции «Современные аспекты безопасности трансфузионной терапии» (Ханты-Мансийск, март 2004); международной научной конфренции «Медико-биологические и экологические проблемы здоровья человека на Севере» (Сургут, ноябрь 2004); на конференции «Актуальные вопросы иммуногематологии» (Екатеринбург, 2004); на городской конференции «Актуальные вопросы клинической трансфузиологии» (Сургут, декабрь 2005); на окружной научно-практической конференции «Актуальные проблемы безопасности гемотрансфузий» (Нижневартовск, октябрь 2006); на региональной конференции «Актуальные вопросы службы крови» (Тюмень, октябрь 2007); на межкафедральном заседании в Ханты-Мансийском медицинском институте (Ханты-Мансийск, апрель 2009). На совместной конференции ФМБА и ГНЦ РАМН «Качество лабораторных исследований в Службе крови» (Москва, май 2009). На XVII Международной конференции «Новые информационные технологии в медицине, биологии, фармакологии и экологии». (Украина, Крым, Гурзуф, июнь 2009).

Публикации

По теме диссертации опубликовано 22 работы, из них 11 в центральных отечественных и зарубежных изданиях, одно методическое пособие. антиген популяция иммуносерологический

Структура и объем диссертации

Работа изложена на 136 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, главы с описанием материалов и методов исследования, главы с изложением результатов собственных исследований, заключения, выводов, списка литературы. Библиография включает 156 отечественных и 90 иностранных источников. Работа иллюстрирована 14 таблицами, 4 рисунками.

Материалы и методы исследования

Групповые антигены эритроцитов исследовали у коренного населения ханты Югры (взрослых и детей, n=729). Изучали частоту IgG-антител системы АВ0 к группоспецифическим антигенам у вышеуказанных лиц (взрослых ханты - n=453, детей - n=165). Для сравнения использовали показатели аналогичных исследований в панмиктической популяции пришлого населения (сыворотки крови: детей n=403, доноров n=4805, доноров-женщин n=1558, беременных n=648).

Исследование эритроцитарных антигенов системы АВ0, проводили общепринятыми методами, утвержденными приказом №2 МЗ РФ от 09.01.98. «Иммуносерология» с использованием моноклональных антител (МКА) (цоликлонов) анти-А, анти-В.

Фенотипирование антигенов эритроцитов по системе Rh и Kell проводили с использованием (МКА) анти-D, анти-C, анти-c, анти-E, анти-e и анти-K серии Супер (производитель "Гематолог", Москва). Для диагностики антигенов Cw, Cellano (k), использовали идентификационные карты гелевой технологии фирмы DiaMed (Швейцария).

Антитела IgG класса системы АВ0 дифференцировали от IgM - антител после разрушения последних сульфидредуцентами с применением стандартных эритроцитов групп 0, А и В.

Унитиол применяли в виде 5% раствора (готовая лекарственная форма в ампулах 5% раствор). Рабочий раствор 0,2М 2-меркаптоэтанола готовили путем смешивания 1,49 мл основной концентрации, поставляемой от изготовителя, со 100 мл изотонического раствора NaCl. Приготовленные растворы использовали в течение 5 дней, хранили при температуре +2+8єС.

Редукцию антител анти-А и анти-В проводили путем смешивания равных объёмов рабочих растворов редуцентов с исследуемыми сыворотками. Пробы инкубировали в термостате при +37оС в течение одного часа. Сыворотки, обработанные редуцентами, исследовали со стандартными эритроцитами групп А и В на плоскости методом прямой агглютинации при комнатной температуре. О присутствии IgG-антител системы АВ0 судили по способности редуцированных сывороток агглютинировать соответствующие стандартные эритроциты. В случае получения положительных результатов определяли активность антител методом титрования на плоскости.

В качестве контроля выступала тест-система анти-D Супер (производства «Гематолог», Москва), содержащая только IgМ-антитела, ее параллельно редуцировали и далее исследовали в тех же условиях. Полноту устранения IgМ-антител контролировали эритроцитами группы 0.

Для обработки полученных результатов использовали статистические методы, применяемые в медицине и биологии (Гланц, 1999). Результаты представлены в виде средних значений со стандартной ошибкой доли.

Достоверность различий в сравниваемых выборках оценивали с применением метода 2, углового преобразования Фишера:

2 =(ad-bc)n2/(a+b)(c+d)(a+c)(b+d), где:

a - частота антигенпозитивных лиц в одной выборке,

b - частота лиц, не содержащих антиген в той же группе,

c - частота антигенсодержащих лиц во второй группе,

d - частота не содержащих антиген в другой выборке.

Результаты оценивали по специальной таблице. Различия считали статистически значимыми при p<0,05 и ниже (3,84 и более при наличии одной степени свободы), точного критерия Р Фишера:

Р = (1 - 2)/(n1n2)(n1+n2), где 1 = 2 arcsin (p1); 2 = 2 arcsin (p2); где:

p1 - частота антигена в долях единицы в первой из сравниваемых групп,

p2 - частота антигена во второй группе,

n1 - число лиц в первой группе,

n2 -число лиц во второй из сравниваемых групп.

Различия считали достоверными при Р=1,96 и выше (что соответствует p< 0,05 и ниже).

Вычисление частоты генов АВ0 проводили, по формулам, предложенным F. Bernstein для трехаллельных генетических систем. Частоты генов 0, А и В в данном случае принято обозначать буквами r, p и q.

r = ,

p = ,

q = ,

где 0, А и В - частоты лиц с группами 0(I), A(II) и B(III) в долях единицы соответственно.

Частоту генов и гаплотипов системы Rh рассчитывали, используя следующие формулы.

D = 1 - , C = 1 - , E = 1 - , c = 1 - , e = 1 - , где:

D, C, E, c, e - частоты генов,

dd, cc, ee, CC и EE - частоты соответствующих фенотипов в долях единицы соответственно.

Частоту гаплотипов Rh расcчитывали по формулам, предложенным Mourant;

cde = , Cde =,

cdE = , cDe =,

cDE = - сdE, CDe =- Сde,

СDE = CCDEe: CDe 2,

где ccddee, Ccddee, ccddEe, ccDee, CCDee, CCDEe и ccDEE - частоты соответствующих фенотипов в долях единицы. Частоту генов G (система Rh), K и Fya (системы Kell и Duffy соответственно) рассчитывали по приведенной выше универсальной формуле для многоаллельных систем.

При подсчете частоты антигенов и генов учитывали ошибку по формуле:

M = , где:

Р - частота антигена в %,

n - количество обследованных в выборке.

Индекс аллосенсибилизации рассчитывали по формуле (n/N 100%), предложенной Донсковым С. И с соавт., (1998), где:

n - число впервые выявленных сенсибилизированных лиц,

N - общее количество обследованных.

В настоящей работе использованы методы, основаны на идентификации обьёма аттракторов ВСОЧ в фазовом пространстве (В.М. Еськов с соавт., 2001-2008). Обработка данных по поведению аттракторов ВСОЧ в m-мерном фазовом пространстве состояний для обследуемых проводилась с использованием авторской программы «Identity» «Идентификация параметров аттракторов поведения вектора состояния биосистем в m-мерном фазовом пространстве» (Еськов В.М, 2006). В наших исследованиях проводили сравнительные характеристики аттракторов иммуносерологических параметров по групповым факторам коренного и пришлого населения в 6-ти и 9-ти мерном пространстве признаков, изучаемых в различные годы.

Все данные показатели рассчитывали на ЭВМ. Определялись интервалы изменения ?хi по 6-ти и 9-ти координатам, показатели асимметрии Rх, а также рассчитывали общий обьем параллелипипеда V (General value), ограничивающего аттрактор ВСОЧ. Были получены таблицы данных, представляющие размеры ?хi и показателя асимметрии Rх для каждой координаты хi и обьем параллелипипеда Vх., также построена матрица межкластерных расстояний (между центрами аттракторов) в фазовом пространстве состояний.

С позиции теории хаоса и синергетики (ТХС), проанализированы параметры аллоиммунизации различных популяций коренного и пришлого населения (кластеров), представляющих биологические динамические системы (БДС), находящиеся в разных экологических состояниях.

2. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Ханты-Мансийский автономный округ - Югра расположен в центральной части Западно-Сибирской равнины, является исторической родиной коренного населения, которое проживает на территории своих 153 родовых имений, в тайге, поддерживая традиции развития и размножения клана, соблюдая уклад жизни.

Несмотря на сложившийся исторический образ жизни аборигенов, следует упомянуть о постепенно увеличивающейся доле метисов среди ханты. По мере перехода на оседлый образ жизни возникают межэтнические браки с пришлым населением (Бутенко Н.А., 2000).

Согласно данным В.В. Мархинина с соавт., (1998), общая доля метисов среди ханты и манси, проживающих на территории Югры, в настоящее время составляет 29%.

Популяции современных ханты (обские угры) значительно омоложены - по причине интенсивных смешанных браков с русскими и коми за последние 30 лет (Иванов К.П.с соавт., 1991).

Распределение групп крови систем АВ0, Rh и Kеll среди популяций ханты

Полуизолированность популяции - условия проживания ханты - малочисленных коренных жителей. Основная и большая часть ханты проживает в определенной географической зоне в тайге в чумах на родовых угодьях, где аборигены занимаются оленеводством, на промыслах, охотой. Лишь очень незначительное количество ханты ведет оседлый образ жизни в поселках, расположенных вдали от автодорог, промышленных предприятий, дети ханты проживают в интернатах при школах. Все это не может не отразиться на характере распределения групп крови среди ханты, поскольку импорт генов этим народом из других популяций является минимальным (Рычков Ю.Г., с соавт., 2000). Более того, на родовых угодьях в небольших группах большая вероятность существования близкородственных браков - инбридинга среди ханты.

Собственные исследования сравнивали с имеющимися данными по распределению групп крови среди калмыков и ханты, проведенных в разные годы: Тумановым А.К. с соавт., (1969), n=214 и Хеапост Л.И. (1978, цит. по Рычкову Ю.Г. с соавт., 2000), n=95.

По нашим данным у коренных жителей группа крови 0 встречается существенно реже (18,0%), чем у калмыков (25,7%), 1969), и ханты (33,7%). Частота антигена А (29,4%) оказалась несколько выше, чем встречаемость этого признака по результатам аналогичных исследований в предыдущие годы (у калмыков 22,9% и ханты 17,9% соответственно). По нашему мнению, это обусловлено частичным смешением коренной и пришлой популяций.

Обращает на себя внимание частота групповых антигенов В и АВ (37,4% и 15,2% соответственно), которая значительно приближена к такой у калмыков (40,6% и 10,7%), и ханты (40,0% и 8,4%) по нашему мнению, может быть следствием браков внутри родовых кланов. В связи с этим мы полагаем, что выявленный феномен - преобладание антигена В (суммарно 52,6%) над другими антигенами системы АВ0 (А суммарно-44,6%, 0-18,0%) являются следствием как полуизолированного проживания ханты на родовых угодьях, так и наличием браков лиц, состоявших между собой в той или иной степени родства. Соотношения частот групповых антигенов у ханты можно выразить как B > A > 0 > AB.

Известно, что антигены эритроцитов системы АВ0, особенно антиген А, имеют фенотипические варианты (или подгруппы) (Умнова М.А, 1989, Минеева Н.В. с соавт., 2003). Исследуя антиген А эритроцитов ханты, мы не обнаружили слабого варианта А2 в группе А(II) и АВ(IV), все образцы демонстрировали активную гемагглютинацию на плоскости.

Оценивая распределение фенотипов системы АВ0 среди ханты в сравнении с другими этническими группами (табл.3), мы пришли к заключению, что среди ханты преобладает группа В, ее частота превосходит таковую у бурят и монголов.

Русские: A > 0 > B > AB;

Коми: 0 > A B > AB;

Удмурты: 0 > B > A > AB;

Манси: 0 > B > A > AB;

Ханты: B > A > 0 > AB;

Буряты: 0 > B > A > AB;

Монголы: 0 > B > A > AB.

Примечание:* - различия достоверны при p<0,001.

Более того, среди оседлых ханты присутствует антиген K системы Kеll и лица с D-отрицательной кровью, в то время как индивиды с такими фенотипическими характеристиками практически отсутствуют в популяции кочевых ханты. Это может служить еще одним доказательством смешения оседлых ханты с пришлым русским населением (Донсков С.И., 2006).

На гетерогенный фенотипический статус указывают изменения частот фенотипов системы Rh разных субпопуляций ханты, оседлых, проживающих в населенных пунктах и длительное время кочующих по тайге (табл.6). Среди кочующих ханты значительно чаще встречаются лица с фенотипом Е (328 или 82,6%), причем зарегистрирован редкий фенотип CcDEE, который закрепился в этой группе, что указывает на вероятность кровного родства. Ген CDE в данном случае может даже играть своеобразную роль «родительского гена». В то же время в группе оседлых ханты выявлены лица с фенотипом Cw+, установленные различия также свидетельствуют о метисации коренных жителей пришлым европейским населением.

Таблица 6 Распределение фенотипов Rh среди оседлых и кочующих субпопуляций ханты

Таблица 7 Распределение фенотипов системы Rh в популяциях ханты и манси