Рецепторная специфичность вирусов гриппа разных хозяев

Размещено на http://www.allbest.ru/

На правах рукописи УДК 578.832

03.00.06 - вирусология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

Рецепторная специфичность вирусов гриппа разных хозяев

ГАМБАРЯН АЛЕКСАНДРА СЕРГЕЕВНА

Москва - 2007 г.

Работа выполнена в ГУ Институт полиомиелита и вирусных энцефалитов им. М.П.Чумакова.

Официальные оппоненты:

Доктор медицинских наук, профессор,

Альтштейн Анатолий Давидович

Доктор биологических наук,

Народицкий Борис Савельевич

Доктор биологических наук, с.н.с.

Новиков Борис Валентинович.

Ведущая организация:

ГУ Институт вирусологии им. Д.И. Ивановского РАМН

Защита состоится 21 декабря 2007г. в 1000 на заседании диссертационного совета Д 001.026.01 при Институте полиомиелита и вирусных энцефалитов им. М.П.Чумакова РАМН (142782, Московская обл., Ленинский р-н, п/о Институт полиомиелита).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГУ Института полиомиелита и вирусных энцефалитов им. М.П.Чумакова РАМН.

Автореферат разослан ________ноября 2007 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

кандидат биологических наук О.А.Медведкина



ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Природным резервуаром вирусов гриппа (ВГ) являются дикие утки, у которых ВГ вызывают бессимптомную инфекцию в нижнем отделе кишечника. Эпизодически вирусы уток могут инфицировать других хозяев и иногда дают начало новым эволюционным ветвям ВГ. Важнейшим элементом адаптации вируса к новому хозяину является настройка на новые рецепторные детерминанты в новом хозяине и, возможно, на новых клетках мишенях. Инфицирование вирусом гриппа начинается с прикрепления вириона к сиалосодержащим рецепторам на поверхности клетки. Вирусы адаптированы к рецепторам на клетках мишенях своего хозяина, следовательно, вирусы разных хозяев могут иметь разную рецепторную специфичность.

В работе была поставлена задача углубления существующих представлений о зависимости рецепторной специфичности вирусов гриппа от хозяйской принадлежности. Для оценки потенциальной опасности вирусов гриппа птиц с точки зрения возможности их перехода к человеку сравнивались вирусы гриппа разных хозяев: птиц, человека и домашних животных.

Актуальность проблемы

Проблемы, связанные со сменой хозяев вирусами гриппа в настоящее время особенно актуальны учитывая риск возникновения нового пандемического варианта из высокопатогенного птичьего вируса гриппа.

Во всем мире очень интенсивно ведется изучение птичьих вирусов гриппа и разработка вакцин против них. Реальная угроза новой пандемии вывела проблему на государственный уровень.

Во многих лабораториях проводятся испытания эффективности известных лекарственных препаратов. Большую проблему составляет появление штаммов вируса, устойчивых к классическим антивирусным препаратам - ремантадину и амантадину. Широко исследуется и применяется новые препараты, действующие как ингибиторы нейраминидазы. Однако появляются штаммы устойчивые и к этим препаратам. Поэтому идет интенсивная разработка новых препаратов, в том числе - ингибиторов связывания вируса с клеткой.

Параллельно ведутся фундаментальные исследования птичьих вирусов гриппа, для лучшего понимания механизма возникновения пандемических вариантов.

Цели и задачи исследования

1) Выяснение детальной молекулярной структуры рецепторов вирусов гриппа. вирус грипп сиалосахар рецептор

2) Сравнение рецепторной специфичности вирусов гриппа разных хозяев, с целью выявления круга вирусов с наибольшим потенциалом перехода к людям.

3) Изучение состава сиалосахаров - рецепторов вируса гриппа на клетках мишенях разных хозяев.

Научная новизна

Впервые показано, что рецепторная специфичность вирусов гриппа разных птиц различна.

Для изучения различий в рецепторной специфичности мы использовали панель синтетических сиалогликополимеров на основе полиакриламида с терминальным Neu5Acб2-3/6Gal фрагментом, синтезированных нашими коллегами из лаборатории химии углеводов Института биоорганической химии.

Показали, что H5N1 вирусы кур, (включая выделенные от людей штаммы) обладают исключительно высоким сродством к Neu5Acб2-3Gal1-4(6-HSO3)GlcNAc (6-Su-3`SLN) группировке. Связывание вирусов кур и млекопитающих с клетками трахеи зеленой мартышки ослабевает, после обработки последней глюкозамин-6-сульфатазой, что указывает на наличие 6- Su-3`SLN групп на соответствующем субстрате. Высказано предположение, что наличие таких группировок на клетках дыхательного эпителия человека способствует заражению людей H5N1 вирусами.

Показано, что один из человеческих изолятов H5N1 вирусов, распознает человеческий рецептор. Это лишний раз напоминает о риске возникновения пандемического варианта этих вирусов.

Показано, что адаптация исходных вирусов гриппа самых разных эволюционных линий к курам приводит к изменению рецепторной специфичности вируса. Вирусы перенацеливаются на рецепторы с лактозаминовым кором (Таким же как у человеческого рецептора -6` сиалилактозамина). У H5N1, H9N2 и H7N7 вирусов повышено сродство к сульфатированному рецептору с лактозаминовым кором. Многие из этих вирусов приобретают также частичное сродство к человеческому рецептору.

Впервые показано, что эволюция вирусов гриппа в свиньях идет в том же направлении с теми же самыми аминокислотными заменами, что и эволюция вирусов в людях. Вирусы гриппа, лишь недавно перешедшие от птиц к свиньям (так называемые avian-like), адаптированы к таким же рецепторам, что и куриные вирусы. Однако вирусы специализированной «свиной» линии - H1N1 адаптированы строго к 6` сиалилактозамину, так же как и человеческие вирусы. Высказана гипотеза, что адаптация к 6` сиалилактозамину у вирусов гриппа свиней, также как и у человеческих вирусов, обеспечивает более эффективный механизм воздушно-капельной передачи вируса.

Впервые в мире изучали способность вирусов гриппа разных хозяев связываться с клетками кишечного эпителия птиц, принадлежащих к отрядам Anseriformes (Утиные), Galliformes (Куриные), Charadriiformes (Кулики и чайки), Ciconiiformes (Аистообразные), Podicipediformes (Поганкообразные) и Gruiformes (Журавлеобразные). Состав сиалосодержащих рецепторов на этих же клетках изучали с помощью лектинов.

Полученные результаты указывают на то, что состав природных сиалозидов у разных птиц различен. Рецепторная специфичность ВГ разных хозяев отражает эти отличия. Можно предположить, что вследствие этого ВГ разных птиц могут отличаться по способности преодолевать межвидовой барьер, и в частности, заражать млекопитающих и человека.

Практическая значимость

В настоящее время для оценки опасности вирусов все чаще пользуются молекулярными маркерами. Для таких оценок нужно точное знание о зависимости какого-то свойства вируса от наличия той или другой аминокислоты в определенной позиции вирусного белка. В частности, до начала наших исследований было обнаружено две (226 и 228) аминокислотных замены, ответственные за способность вируса гриппа вызвать пандемию среди людей. Наши исследования выявили дополнительные замены, приводящие к такому же результату (190, 225 и 227).

Исследование рецепторной специфичности вирусов гриппа разных хозяев, в частности разных птиц, показало, что вирусы гриппа кур обладают резко повышенным, по сравнению с исходными утиными вирусами, потенциалом перехода к людям.

Обнаружение полной аналогии эволюции вирусов гриппа в свиньях и в людях позволяет рассматривать грипп свиней как модельную систему для изучения человеческого гриппа.

Апробация работы

Материалы работы были представлены на:

Пятом интернациональном симпозиуме по птичьему гриппу. США, Джорджия, апрель 2002.

Первой Европейской конференции по гриппу. Мальта, Октябрь, 2002

12-ой международной конференции по вирусам с негативным геномом. Италия, Пиза, июнь 2003.

Второй Европейской конференции по гриппу. Мальта, 11-14 сентября, 2005

Восьмом съезде Всероссийского научно-практического общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов.

Девятом съезде Всероссийского научно-практического общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов.

РЕЗУЛЬТАТЫ

Изучение рецепторной специфичности вирусов гриппа с помощью полимеров, несущих рецепторные аналоги.

Изучение рецепторной специфичности вирусов гриппа (ВГ) до недавнего времени рассматривалось в основном в свете распознавания разных производных нейраминовой кислоты и типа связи между сиаловой кислотой и галактозой (Paulson, 1985; Suzuki, 1994; Connor et al., 1994; Naeve et al., 1984; Matrosovich et al.,1991, 1992, 1993, 1998; Tuzikov et al., 1997) . Роль сахаридных звеньев, последующих за галактозой, была исследована только в одном случае - а именно для человеческих вирусов, распознающих 6`SLN лучше, чем 6`SL (Matrosovich et al., 1993, 1997, 2000; Gambaryan et al., 1995, 1997, 1999; Mochalova et al., 2003). Для сиалил2-3галактозных рецепторов таких исследований вообще не проводилось.

Изучение вирусов разных хозяев

Первоначальной целью исследования была детализация рецепторной специфичности вирусов гриппа разных хозяев. Для этого мы исследовали связывание вирусов с 17 типами соединений с идентичной концевой Siaб2-3- сахаридной группировкой, но отличающихся строением последующих сахаридных звеньев, а так же с оптимальным «человеческим» рецептором 6`SLN . Полимер, несущий асиаловый сульфосахарид 3'-O-Su-Galб1-3GlcNAc использовали как контрольный. Сахаридная группировка всех тестированных соединений была присоединена к полиакриловому полимеру через одинаковый спейсер. Структуры использованных сахаров и их краткие обозначения приведены в таблице 1. Они отличаются типом связи (1-3 или 1-4) между галактозой и последующим звеном, типом третьего звена (глюкозав, глюкозаминв либо галактозаминб), наличием или отсутствием фукозного заместителя, сульфогруппировки или второй сиаловой кислоты при третьем звене.

Таблица 1 - Структуры использованных в данной работе сиалосахаридов и их условные обозначения

Сахариды	Усл. обозначение
Биотинилированные полимеры (1000 kD)
Neu5Ac2-3Gal1-4Glc (biot)	3`SL
Neu5Ac2-6Gal1-4Glc (biot)	6`SL
Neu5Ac2-6Gal1-4GlcNAc (biot)	6`SLN
Neu5Gc2-6Gal1-4GlcNAc (biot)	6`SLN(Gc)
Немеченные полимеры (30 kD)
3'-O-Su-Gal?1-3GlcNAc-sp	3'-Su-Lec
Neu5Ac2-6Gal1-4GlcNAc	6`SLN
Neu5Ac2-6Gal1-4-(6-Su)GlcNAc	Su-6`SLN
Neu5Gc?-sp	Neu5Gc
Neu5Ac?2-3Gal?-sp	SG
Neu5Ac?2-3GalNAc?-sp	STn
Neu5Ac?2-3Gal?1-4Glc?-sp	SL
Neu5Gc2-3Gal1-4GlcNAc	3`SLN(Gc)
Neu5Ac2-3Gal1-4GlcNAc	3`SLN
Neu5Ac2-3Gal1-4-(6-Su)GlcNAc	Su-3`SLN
(Neu5Ac2-3Gal1-4)(Fuc1-3)GlcNAc	SLex
(Neu5Ac2-3Gal1-4)(Fuc1-3)(6-O-Su)GlcNAc	Su-SLex
Neu5Ac2-3Gal1-3GlcNAc	SLec
Neu5Ac2-3Gal1-3-(6-Su)GlcNAc	Su-SLec
Neu5Ac2-3Gal1-3GalNAc	STF
Neu5Ac?2-3Gal?1-3-(6-Su)GalNAc?-sp	Su-STF
(Neu5Ac2-3Gal1-3)(Fuc1-4)GlcNAc	SLea
Neu5Ac?2-3Gal?1-3 GalNAc?-sp Neu5Ac?2-6	3,6-STF
Neu5Ac?2-3 GalNAc?-sp Neu5Ac?2-6	3,6-STn
(Neu5Ac?2-8)-sp3	(Sia)3
Ганглиозиды
Gal1-3GalNAc?1-4 Gal?1-4Glc-cer Neu5Ac2-3	GM1a
Neu5Ac2-3Gal1-3GalNAc?1-4Gal?1-4Glc-cer	GM1b
Neu5Ac2-3Gal1-3GalNAc?1-4 Gal?1-4Glc-cer Neu5Ac2-3	GD1a
Gal1-3GalNAc?1-4 Gal?1-4Glc-cer Neu5Ac2-8 Neu5Ac2-3	GD1b
Neu5Ac2-3Gal1-3GalNAc?1-4 Gal?1-4Glc-cer Neu5Ac2-8 Neu5Ac2-3	GT1b

Все исследованные сахара, кроме STn и 3,6-STn - природные соединения.

Контрольный асиаловый полимер, а так же полимеры, несущие группировки Neu5Gcб, 3,6-STn и (Sia)3 не связывались ни с какими из вирусов. Сродство к 3`SLN- и 3`SL-группировкам было, в пределах точности измерения, равным для всех испытанных вирусов.

Проведенное исследование показало, что рецепторная специфичность разных вирусов гриппа птиц не совпадает. Общность птичьих вирусов ограничивается только распознаванием 2-3 связи между сиаловой кислотой и последующей галактозой. Разные вирусы нацелены на разные природные сиалосодержащие группировки. Причем можно отметить как отличия, связанные с хозяйской принадлежностью вируса, так и особенности, присущие субтипам.

Способность вирусов связывать гликолильную форму сиаловой кислоты изучали с помощью полимеров 3`SLN и 3`SLN(Gc). Все исследованные Н3 и Н7 вирусы связываются с 3`SLN(Gc) почти так же хорошо, как и с 3`SLN. Это свойство не коррелирует с хозяйской принадлежностью вирусов, так 3`SLN(Gc)-группировку хорошо связывают вирусы уток, свиней, лошади, кур и тюленя Н3 и Н7 субтипов. В то же время вирусы других субтипов 3`SLN(Gc) не связывали.

Ни один из вирусов не связывался с р(Sia)3, в котором сиаловая кислота присоединена не к галактозе, а к восьмому кислороду другой CK. Этот результат лишний раз доказывают, что минимальной рецепторной группировкой вирусов гриппа птиц является не просто сиаловая кислота, а сиалил2-3 галактоза.

Т2Роль третьего сахаридного звена в связывании рецептора с вирусом видна из сравнения сродства к SG, 3`SL,3`SLN, SLec и STF. Большинство вирусов примерно одинаково хорошо связывается с SG, 3`SL и SLN. Это свидетельствует о том, что сахаридное кольцо, присоединенное к в галактозе 1-4 связью, направлено в раствор и не принимает активного участия в связывании. В SLec и STF третье звено присоединено к галактозе 1-3 связью. Сродство к этим группировкам у всех вирусов близкое, следовательно, направление гидроксильного остатка при четвертом углероде третьего сахаридного звена не принципиально для связывания.

Сродство к STF у вирусов уток, как правило, выше чем к SLN, то есть эти вирусы адаптированы к 1-3 связи между вторым и третьим звеном сахаридной цепочки. Вирусы цыплят, напротив, лучше связывают 3`SLN чем STF, то есть они адаптированы к 1-4 связи между галактозой и последующим звеном.

У вирусов чаек соотношение сродства к 3`SLN и STF зависит от субтипа. У ВГ субтипа Н13 выше сродство к 3`SLN, а у Н4, H6 и Н14 вирусов, которые недолго циркулировали в чайках, как и у близкородственных вирусов уток, выше сродство к STF.

Заместители при третьем звене сахаридной цепочки влияют на связывание разных вирусов по разному, и могут как понижать, так и повышать сродство к рецептору.

Фукозилирование третьего от конца глюкозамина резко понижает сродство рецептора к большинству утиных вирусов. В отличие от вирусов уток, у всех исследованных нами вирусов чаек, относящихся к пяти субтипам, сродство к фукозилированному SLex не ниже, чем к исходному 3`SLN. Для специализированных к чайкам вирусов субтипа Н13 SLex является одной из оптимальных рецепторных группировок.

Столь же резкие отличия, связанные с хозяйской принадлежностью вирусов, наблюдаются и в отношении к сульфатированным по шестому положению третьего звена рецепторам. Для большинства тестированных нами утиных вирусов наличие этой группировки не сказывается на связывании. Но для вирусов цыплят, свиней, вируса лошади и вируса тюленя сульфатирование повышает сродство к определенным типам рецепторов. Так, резко повышено сродство к Su-3`SLN у Н5 вирусов кур и у Н3 вируса лошади, а у всех свиных вирусов и у Н7 вирусов кур и тюленя резко повышено сродство к Su-SLex.

Полученные результаты свидетельствуют, что, несмотря на то, что птичьи вирусы гриппа, как правило, распознают Sia2-3Gal, они могут отличаться по способности распознавать последующие сахаридные звенья рецептора. Из этого следует, что разные виды птиц могут отличаться по способности генерировать вирусы, потенциально опасные для человека.

Рецепторная специфичность вирусов гриппа чаек

До наших исследований вирусы гриппа уток и чаек характеризовались как единая группа, которую было принято называть вирусами диких водоплавающих птиц (wild aquatic birds) (Alexander, 2000; Webster and Bean, 1998). В 1997 году было показано, что Н13 вирусы чаек отличаются от вирусов уток других субтипов тем, что их сродство к 3`сиалиллактозе не выше, чем сродство к свободной к б-нейраминовой кислоте (бNeu5Ac). Иными словами, если для утиных вирусов минимальной рецепторной детерминантой является Sia2-3Gal, то для Н13 вирусов вклад галактозы в связывание не существенен (Matrosovich et al., 1997). Для более детального сравнения вирусов чаек с типичными представителями вирусов уток мы определили сродство этих вирусов к бNeu5Ac, к 3`сиалиллактозе, и к полимерным гликоконьюгатам, несущим группировки: 6`SLN, 3`SLN, SLex, SLea и SLec.

Все исследованные вирусы гриппа чаек, так же как и вирусы уток, адаптированы к б2-3-связанной сиаловой кислоте. Однако структура оптимального рецептора для вирусов уток и чаек различается. Общим свойством всех тестированных вирусов чаек, с гемагглютининами H4, H5, H6, H13, H14 и H16 субтипов является высокое сродство к фукозилированным рецепторам.

Для вирусов чаек 4, 5, 6 и 14 субтипа оптимальным рецептором является SLea, то есть у них сохраняется характерное для утиных вирусов предпочтение рецепторов, основанных на дисахариде Gal1-3GlcNAc. У вирусов субтипов Н13 и Н16 сродство к 3`SLN выше чем к Sleс, а сродство к Sleх выше чем к Sleа. Т.е. они лучше распознают рецепторы, основанные на дисахариде второго типа (Gal1-4GlcNAc).

Повышенное сродство к фукозилированным рецепторам у вирусов чаек сопровождается перестройкой 222-228 петли гемагглютинина (Табл. 2). У Н13 вирусов заменены консервативные Val223 и Gly228; крупная аминокислота в 222 позиции заменена на мелкую, и мелкая в 227 позиции - на крупную.

Таблица 2 - Сравнение строения 222-228 петли гемагглютинина утиных вирусов и вирусов чаек субтипов Н13, Н16, Н6 вирусов и вируса А/Чайка/ Москва/3100/2006 (Ч/Moсква) (H6N2)

№ аминокислот	222	223	224	225	226	227	228
Консенсус HA вирусов уток	Lys, Pro, Аrg, Leu, Gln, Trp	Val	Asn Arg	Gly	Gln	Ala, Gly, Ser	Gly
HA H13	Gly	Tyr	Asp	Gly	Gln	Arg, Lys	Ser
HA H16	Gly	-	Asp	Gly	Gln	Arg	Ser
Консенсус HA Н6	Ala	Val	Asn	Gly	Gln	Arg	Gly
HA Ч/Москва	Ala	Val	Ser	Gly	Gln	Arg	Gly

Гемагглютинин 16 субтипа без сомнения происходит от 13 субтипа, так как в нем сохранены все замены, характерные для 13 субтипа. Однако там возникли новые, еще более «радикальные» замены (Tyr98/Phe, Ala138/Ser, Glu190/Tre и делеция 223 аминокислоты). В результате рецепторный фенотип вирусов 16 субтипа оказался совершенно необычным. Интересно, что к ним вернулась утраченная у Н13 вирусов способность связывать 3`SL с более высоким сродством, чем бNeu5Ac что указывает на существенный вклад галактозы в связывание. Сродство к мономерной 3`SL высокое, но при этом сродство к заякоренным на полимере рецепторам низкое. Максимальное сродство - к SLex. Возможно оптимальная рецепторная группировка для Н16 вирусов в ее природном «контексте» нами еще не найдена.

H6N2 вирус А/Чайка/ Москва/3100/2006, выделенный нами из фекалий чайки осенью 2006 на Московском пруду в Тропарёво, связывает фукозилированные Slex и Slea значительно лучше, чем исходные соединения.

По сравнению с «консенсусом» утиных вирусов, у Чайка/ Москва/3100, как и у всех Н6 вирусов в 222 позиции вместо массивной аминокислоты стоит Ala; помимо этого по сравнению с консенсусом Н6 вирусов имеется еще одна замена Asn224/Ser (табл. 2). Сочетание этих замен как раз там, куда направлена группа фукозы, создает, вероятно, особо благоприятные условия для связывания фукозилированных рецепторов.

На примере Н4 вирусов видно, что характерная способность распознавать SLex не хуже, чем 3`SLN появляется немедленно после переход утиных вирусов к чайкам. Так, в верхушечной части гемагглютинин вируса Крачка/Бурятия/1901/00 (H4N6) отличается от вируса Утка/Бурятия /1905/00 (H4N6) единственной аминокислотной заменой Ser205/Pro, однако измененный «чаячий» рецепторный фенотип у него уже сформирован. Ser205 тесно зажат между несколькими участками цепей гемагглютинина. С одной стороны он прижимается к гидрофобному "узлу" составленному из Val204, Leu243, Ile245 и Trp180 Trp. Важно подчеркнуть, что 204 и 180 аминокислоты константны для всех субтипов, а в 204 и 243 позиции постоянна гидрофобная аминокислота.

С другой стороны Ser205 вклинивается между Arg220 и Pro221 соседней субъединицы гемагглютинина. Обе эти аминокислоты константны для всех субтипов. Это позволяет нам утверждать, что структура данного участка консервативна. Замена маленького серина на более крупный пролин, который, к тому же, вносит излом в белковую цепь, должна сильно нарушить локальную структуру гемагглютинина. Подвижки 220 и 221 аминокислот неизбежно вызовут смещения контактирующих с ними 222, 229, 228 и 226 аминокислот. 222 аминокислота, как следует из данных приведенных ниже, играет ключевую роль во взаимодействии с фукозой. Очевидно, именно вследствие этой перестройки фукоза в группировках Slex и Slea перестает препятствовать связыванию.

Вирусы чаек 14-го субтипа по рецепторным свойствам напоминают вирусы чаек четвертого и шестого субтипов - максимальное, причем высокое сродство к SLeа. Этот рецепторный фенотип характерен для ВГ чаек тех эволюционных ветвей, которые совсем недавно отделились от утиных вирусов и, возможно, сохраняющих способность инфицировать уток. Имеются и утиные изоляты с таким же рецепторным фенотипом - Шилохвость/Приморье/695/76 (H2N3), Кряква/Гурьев/244/82 (H14N6). Возможно - это вирусы «смешанных» очагов, где утки и чайки живут в близком соседстве и обмениваются вирусами.

Подводя итог, можно сказать, что самым общим и самым постоянным свойством вирусов чаек является их способность связывать фукозилированные рецепторы. Такое свойство не могло возникнуть случайно и независимо в большом числе эволюционных линий, и оно явно свидетельствует о том, что при переходе от уток к чайкам вирус адаптируется к новому, фукозилированному рецептору.

Рецепторная специфичность вирусов гриппа свиней

Сравнительное сродство вирусов свиней к клеткам мишеням утки, свиньи и мартышки

Изменение рецепторной специфичности вирусов гриппа при смене хозяина по всей вероятности должна повышать сродство вирионов к новой хозяйской клетке, то есть при переходах вируса от уток к свиньям и к людям можно ожидать соответствующих изменений рецепторных фенотипов. Для проверки этого положения, мы сравнили способность вирусов связываться с плазматическими мембранами эпителиальных клеток кишечника утки, трахеи свиньи и трахеи зеленой мартышки. Вирусы уток хорошо связываются со всеми тремя субстратами. Вирусы свиней связываются с мембранами клеток кишечника утки хуже, чем утиные вирусы. Для них падает доля подходящих рецепторов на клетках кишечника утки. H1N1 вирусы человека практически перестают связываться с клетками кишечника утки. Вирусы свиней лучше всего связываются с мембранами из трахеи свиньи, а вирусы человека - с мембранами из трахеи мартышки. Это указывает на то, что состав сиалосахаридов на этих трех типах клеток не совпадает и вирусы приспособлены к рецепторам своих хозяйских клеток. Для детализации рецепторного фенотипа ВГ свиней мы воспользовались полимерами, несущими разные рецепторные аналоги.

Распознавание типа связи между сиаловой кислотой и галактозой(б2-3 vs. б2-6).

Исследование проводили с помощью рецепторных аналогов 3`SL, 6`SL, 6`SLN и 6`SLN(Gc), пришитых к полимеру, меченному биотином. На рис.1 представлен пример подобного опыта. Полученные данные представлены в виде графиков Скетчарда. Вирус A/Sw/Saskatchewan/18789/02 (H1N1) по всем генам соответствует птичьим вирусам гриппа (“avian-like” вирус), хотя и выделен из свиньи (Karasin et al., 2004) A/Sw/Wisconsin/H03H04/03 (H1N2) несет гемагглютинин классических свиных вирусов, ведущих свое начало со времен пандемии «Испанки» в 1918 году, а A/Sw/Wisconsin/R7C/01 несет поверхностные белки от современных человеческих H3N2 вирусов.

Рис. 1. Графики Скетчарда связывания биотинилированных полимеров, несущих группировки 6`SLN-, 6`SL- и 3`SL- со свиными вирусами: с «классическим свиным» гемагглютинином, с « человеческим» Н3 гемагглютинином и с «аvian-like» гемагглютинином.

Из рисунка видно, что “avian-like” вирус связывает все три типа рецепторов (3`SL, 6`SL, 6`SLN), причем лучше всего - первый из них, отличаясь от птичьих вирусов только принципиальной возможностью связывать 6`SL и 6`SLN рецепторы. Два других вируса связывают только рецепторы с сиалил2-6галактозной связью, причем 6`SLN существенно лучше, чем 6`SL.

Такой характер связывания типичен для современных ВГ человека (Gambaryan et al., 1997 and 1999; Mochalova et al., 2003), но до сих пор не был описан для свиных вирусов. Во всех предыдущих исследованиях у свиных вирусов регистрировали «двойную» рецепторная специфичность (Rogers and D`Souza, 1989; Gambaryan et al., 1997; Matrosovich et al., 1997, 2000; Маринина и др., 2004). Однако во всех этих исследованиях работали со свиными вирусами, изолированными на куриных эмбрионах, в отличие от вирусов, использованных в этом исследовании.

Для прояснения картины мы протестировали с помощью пяти вышеупомянутых меченных рецепторных аналогов четыре группы свиных вирусов, а именно:

Изолированные на клетках МДСК вирусы с «классическим» свиным ГА

Изолированные в куриных эмбрионах вирусы с «классическим» свиным ГА

Изолированные на клетках МДСК вирусы с Н3 ГА человека.

Изолированные на клетках МДСК “avian-like” вирусы с Н1 и Н3 ГА.

Для сравнения использовали два типичных птичьих вируса A/Duck/Hong Kong/717/79 (H1N3) и A/Duck/Alberta/35/76 (H1N1).

Из таблицы 3 видно, что

Никакие из вирусов, кроме “avian-like” Н3, не распознают 6`SLN(Gc) - рецептор. Это противоречит гипотезе Ito (1998), что свиные вирусы адаптируются в гликолильной форме сиаловой кислоты - доминирующей на сиалохаридах дыхательного тракта свиньи.

Утиные вирусы распознают только 3`SL рецепторы - в составе фетуина и полимера.

Вирусы, выделенные на куриных эмбрионах, хорошо связываются с фетуином и распознают как «человеческий» так и «птичий» рецепторы, в полном согласии с ранее опубликованными данными (Rogers and D`Souza, 1989; Gambaryan et al., 1997; Matrosovich et al., 1997, 2000; Маринина и др., 2004).

Такой же рецепторной специфичностью обладают и “avian-like” вирусы с Н1 и Н3 ГА изолированные на клетках МДСК.

Таблица 3 - Константы диссоциации комплексов вирусов с фетуин-пероксидазой и с биотинилированными полимерами (1000 kD), несущими сиалосахаридные остатки.

Вирусы	Субтип	Фетуин	Сахаридные остатки:
			3`SL	6`SL	6`SLN	6`(Neu5Gc)LN
С «классическим свиным» НА, изолированные на МДЦК
Sw/Wisconsin/HO3HS5/03	H1N1	0.5	>5	0.03	0.01	>5
Sw/Wisconsin/HO3G1/03	H1N1	0.5	>5	0.1	0.05	>5
Sw/Wisconsin/R33F/01	H1N2	0.5	>5	0.2	0.04	>5
Sw/Wisconsin/R36C/01	H1N2	1	>5	0.2	0.02	>5
Sw/Wisconsin/R46F/01	H1N2	0.5	>5	0.2	0.05	>5
Sw/North Carolina/93523/01	H1N2	1	>5	0.05	0.01	>5
Sw/North Carolina/98225/01	H1N2	1	>5	0.2	0.05	>5
Sw/Wisconsin/H03H04/03	H1N2	1	>5	0.06	0.01	>5
Sw/Iowa/930/01	H1N2	1	>5	0.1	0.05	>5
С «классическим свиным» НА, изолированные на куриных эмбрионах
Sw/Iowa/1976/31	H1N1	0.03	0.03	0.2	0.05	>5
Sw/Indiana/1726/88	H1N1	0.05	0.05	0.15	0.05	>5
Turkey/Kansas/4880/80	H1N1	0.03	0.1	0.4	0.2	>5
«человеческие», выделенные от свиней, изолированные на МДЦК
Sw/Wisconsin/HO3HB4/03	H3N2	>1	>5	0.04	0.01	>5
Sw/Wisconsin/R5E/01	H3N2	>1	>5	0.1	0.02	>5
Sw/Wisconsin/R5I/01	H3N2	>1	>5	0.3	0.04	>5
Sw/Wisconsin/R6H/01	H3N2	>1	>5	0.5	0.1	>5
Sw/Wisconsin/R7C/01	H3N2	>1	>5	0.3	0.03	>5
Sw/Wisconsin/RP5G/01	H3N2	>1	>5	0.5	0.1	>5
«Avian-like», выделенные от свиней, изолированные на МДЦК
Sw/Saskatchewan/18789/02	H1N1	0.01	0.02	0.1	0.05	>5
Sw/Ontario/K0477/01	H3N3	0.03	0.01	0.1	0.1	1
Sw/Ontario/42729/01	H3N3	0.03	0.01	0.1	0.1	1
Утиные вирусы, изолированные на куриных эмбрионах
Dk/Hong Kong/717/79	H1N3	0.03	0.02	>1	>1	>5
Dk/Alberta/35/76	H1N1	0.05	0.03	>1	>1	>5

*Для вирусов гриппа А обозначение А/ в названии опущено.

Sw - swine, Dk - duck, Ch - Chicken

** мкМ по сиаловой кислоте

Приводятся усредненные данные трех опытов; стандартная ошибка не превышает 50% от представленных величин

Все вирусы первой и третьей группы, обладают рецепторной специфичностью, типичной для человеческих ВГ. Они совершенно не распознают 3`SL рецептор. H3N2 вирусы, как и современные человеческие H3N2, не связывают фетуин; H1N1 и H1N2 сохранили небольшую способность связывать фетуин, что, опять же, характерно для человеческих H1N1 вирусов.

Чтобы понять, с чем связано расхождение результатов данного исследования, проведенного в основном на вирусах, изолированных на культуре клеток МДСК, от результатов полученных ранее на свиных вирусах, выделенных на куриных эмбрионах, мы проанализировали последовательности H1 HА депонированные в Лос-Аламосовской базе данных. Все Н1 вирусы, выделенные от свиней и индюшек имеют замену Glu190/Asp(Asn) по сравнению с консенсусом вирусов уток. У вирусов выделенных позднее 2000 года, как правило, заменена также 225 аминокислота: Gly225/Asp. Отметим, что именно эти две замены ответственны за рецепторный фенотип человеческих H1N1 вирусов. Причем, при адаптации человеческих ВГ к куриным эмбрионам очень часто возникает реверсия Asp225/Gly, возвращающая вирусу способность связывать «птичий» сиалил2-3галактозный рецептор (Gambaryan et al., 1999; Matrosovich et al., 2000).

Мы предполагаем, что наличие Asp225 в свиных ВГ после 2000 года связано не с реальным изменением вирусов, а с изменением способа выделения. После того, как были открыты «вторичные» линии свиных вирусов, происходящие из человеческих ВГ, стал практиковаться метод выделения свиных вирусов на клеточной культуре, так как современные человеческие вирусы плохо выделяются в куриных эмбрионах.

При выделении на культуре, содержащей сиалил2-6галактозные рецепторы, вирусу нет необходимости настраиваться на «птичий» рецептор и он сохраняет свой исходный генотип и фенотип. Таким образом, мы наблюдаем глубокий параллелизм в формировании рецепторной специфичности человеческих и свиных H1N1 вирусов.

Распознавание Sia2-3Gal рецепторов с разным сахаридным кором.

Первичная замена Glu190/Asp дает вирусу возможность связывать 6`SLN -рецепторы, однако сохраняет возможность связывать и 3`SL-рецепторы. Такой двойной рецепторной специфичностью обладали некоторые изоляты вируса «испанки» и “avian-like” вирусы свиней, недавно перешедшие от птиц к свиньям.

Мы исследовали рецепторную специфичность ряда ВГ H1N1, изолированных от свиней и индеек с сочетанием Asp190 и Gly225 с помощью полимеров, несущих группировки 6`SLN, SLec, Su-SLec, 3`SLN, Su-3`SLN, SLex и Su-SLex. Все вирусы связывали 6`SLN, однако все они с максимальным сродством связывали Su-SLex.

Поводя итог, можно сказать, что адаптация птичьего вируса к свиньям проходит через две фазы. Вирусы, попавшие в свиней недавно (“avian-like”) обладают смешанным рецепторным фенотипом, распознавая как 2-3, так и 2-6 связь между сиаловой кислотой и галактозой, и с тенденцией к увеличению сродства к сульфатированным рецепторам. Однако специализированные к свиньям вирусы, так же как и человеческие, перестают распознавать Sia2-3Gal рецепторы, и настроены на 6`SLN.

Для “avian-like” вирусов оптимальными являются сульфатированные формы Sia2-3Gal рецепторов, в первую очередь Su-SLex. Как было показано выше, именно к этой форме рецептора адаптируются ВГ домашней птицы. Вирусы, «классической» линии начинают с высоким сродством распознавать этот же рецептор в результате одной реверсии Asp/Gly225, при этом вирус сохраняет способность инфицировать свиней.

Многие исследователи (Lipkind et al., 1984, Altmuller et al., 1992; Wright et al. 1992; Suarez et al., 2002; Choi et al., 2004) описывали межвидовую трансмиссию ВГ между свиньями и индейками. Можно высказать гипотезу, что способность распознавать «куриный» рецептор облегчает такую трансмиссию. Регулярная трансмиссия между свиньями и птицами (в особенности, если в ней участвуют и дикие синантропные птицы, например голуби и воробьи) может давать эволюционные преимущества вирусу, облегчая его распространение.

Рецепторная специфичность H5 вирусов

Повышенный интерес к H5N1 вирусам и необычная рецепторная специфичность тех образцов, который были тестированы в первоначальном исследовании стимулировали нас обследовать рецепторную специфичность широкого набора Н5 вирусов из коллекций США (Department of Virology and Molecular Biology, St. Jude Children's Research Hospital, Memphis, Tennessee, и CDC, Atlanta, Georgia). Непатогенные утиные вирусы использовались для сравнения. Мы обследовали представителей нескольких эволюционных ветвей, включавших непатогенные утиные евроазиатские вирусы, американскую линию, включающую вирусы как диких уток так и домашней птицы, и высоко патогенную южноазиатскую линию H5N1 вирусов. Для сравнения, в этих же опытах проставляли ряд других вирусов: ВГ диких уток и человека.

Использовали 9 типов полимеров. Асиаловый 3'-O-Su-Lec, - для контроля; 6`SLN, SLec, Su-SLec, 3`SLN, Su-3`SLN, SLex, Su-SLex и Slea. Ни один из испытанных вирусов не связывал асиаловый сахарид 3'-O-Su-Lec, что доказывает адекватность использованной методики. Как и следовало ожидать, два, взятых для сравнения, человеческих вируса, не связывали ни один из 3`-сиалозидов и хорошо связывали 6`SLN.

Рецепторные фенотипы «первичных» утиных вирусов американской, дальневосточной и юговосточной линий близок к типичному рецепторному фенотипу утиных вирусов прочих субтипов, а именно: сульфатирование не сказывается на связывании рецептора с вирусом, а фукозилирование резко понижает сродство. В эволюционных линиях, адаптирующихся к домашней птице, рецепторная специфичность меняется - возрастает сродство к сульфатированному 3`SLN. Это свойство независимо появляется как в американской, так и Южно-азиатской линии вирусов, и особенно ярко выражено у высоко патогенных H5N1 вирусов.

Вирусы линии, доминирующей в Индонезии, Камбоджи, по-прежнему циркулируют среди домашних птиц. Они приобрели особо высокую патогенность как для кур, так и для млекопитающих, включая человека. У этих вирусов продолжается возрастание сродства к сульфатированным рецепторам, в частности выросло сродство к сульфатированному и фукозилированному рецептору Su-SLex. Напомним, что это же соединение является оптимальным рецептором «вируса куриной чумы» - FPV/Rostok/34 (H7N1). Другая, «китайская» линия H5N1 вирусов характеризуется активным возвратом к диким природным хозяевам: - уткам, гусям и т.д. В этой группе наблюдаются возврат рецепторного фенотипа к исходному. У ряда вирусов сульфатирование не повышает, а понижает сродство к рецептору.

К этой же группе относятся весьма интересные изоляты: Hong Kong/212/2003 и Hong Kong/213/2003. Эти вирусы были выделены от отца и сына, входящих в семейную группу заболевших людей (От других заболевших и умерших не было взято материала для исследования) (Guan et al., 2004). У обоих изолятов резко сдвинутая рецепторная специфичность - они приобрели способность распознавать человеческий рецептор 6`SLN, в то время как сродство к «птичьим» рецепторам у них упало (Shinya et al., 2005; Gambaryan et al., 2006). Сравнение аминокислотных последовательностей рецепторного участка Н5 вирусов выявляет у изолятов Hong Kong/212/2003 и Hong Kong/213/2003, замену Ser227/Asn по сравнению с близкородственными вирусами. Важно отметить, что замена Ser227/Asn не встречается в вирусах, выделеных от птиц, и ее наличие в обоих человеческих изолятах резко усиливает подозрение, что эта мутация произошла в больном человеке, и что дальнейшая передача вируса уже происходила внутри данной семейной группы, от человека к человеку. Такая «сцепка» между сдвигом рецепторной специфичности в сторону распознавания человеческого рецептора и способностью вируса передаваться от человека к человеку может быть рассмотрена как модель формирования пандемического штамма.

Молекулярные механизмы распознавания Su-3`SLN у Н5 вирусов.

Анализ аминокислотных замен у Н5 вирусов помогает понять механизм повышенного сродства к сульфатированным рецепторам. Большинство Н5 вирусов в 193 позиции несут лизин или аргинин - то есть положительно заряженные аминокислоты. Исключениями являются Turkey/Wisconsin/68 и Goose/Vietnam/113/2001, у которых лизин заменен на отрицательно заряженную глютаминовую кислоту. В обоих случаях сродство к сульфатированному рецептору резко падает и становится существенно ниже, чем у несульфатированного аналога (Табл 4).

Таблица 4 - Константы диссоциации Н5 вирусов отличающихся по 193 аминокислоте к сульфатированным и исходным рецепторам.

		193 а.о.	3`SLN	Su-3`SLN	SLex	Su-SLex	SLec	Su-SLec
Turkey/California/6878/79	H5N3	Lys	5*	1	>50	10	4	4
Turkey/Wisconsin/68	H5N8	Asp	5	50	>50	>100	3	10
Goose/Vietnam/324/2001	H5N1	Lys	5	5	50	30	5	5
Goose/Vietnam/113/2001	H5N1	Asp	5	40	40	>100	3	5

*См подпись под табл. 3.



Повышенным сродством к Su-3`SLN обладают также H3N8 вирусы лошадей с Lys193 в HA (Gambaryan et al., 2004, 2005, 2007). Н7 вирусы, которые также обладают повышенным сродством к сульфатированным рецепторам, тоже содержат Lys в 193 позиции гемагглютинина.

Все эти данные согласуются с нашей гипотезой, что электростатические взаимодействия положительно заряженной аминогруппы лизина или аргинина 193 с отрицательно заряженной сульфогруппой обеспечивают высокое сродство вирусов с Su-3`SLN. (Gambaryan и др., 2004).

Молекулярное моделирование вмещения рецепторов в рецептор-связывающий участок (РСУ) иллюстрирует, почему повышено сродство именно к Su-3`SLN а не к Su-SLec (Рис. 2). Сульфа-группа Su -3`SLN направлена в сторону лизина 193, а у Su-SLec она направлена в свободное пространство.

Рис. 2. Расположение сульфатированных рецепторов Su-SLec и Su-3`SLN в РСУ Н5 вируса. Рецептор вмещен в РСУ гемагглютинина закристализованного в присутствии рецептора LSTa (1JSN, Brookhaven Protein Databank, Ha et al., 2001) путем наложения галактозы Su-SLec или Su-3`SLN на галактозу LSTa. Основная часть рецептора представлена в формате “stick”, за исключением сульфа-группы. Лизин 193 помечен.

Рецепторная специфичность вирусов других субтипов, адаптирующихся к домашней птице.

Сходство рецепторной специфичности высокопатагенных H5N1 вирусов и куриного вируса FPV/Rostok/34 стимулировали нас обследовать рецепторную специфичность вирусов других субтипов, адаптирующихся к домашней птице, в первую очередь тех, среди которых отмечались случаи инфицирования людей.

Результаты анализа вирусов разных хозяев других субтипов представлены в таблице 5.

Из таблицы видно, что разнообразие рецепторных фенотипов у разных птичьих вирусов крайне велико, начиная от типично «утиных» фенотипов, и кончая способностью связывать человеческий рецептор, не хуже, чем птичий. Видно, также, что рецепторные фенотипы зависят скорее от хозяйской принадлежности, чем от субтипа вирусов. Вирусы диких уток 1-го, 2-го, 3-го, 4-го, 5-го, 9-го и 10-го субтипов как и утиные вирусы описанные выше, лучше всего связывают нефукозилированные рецепторы с 1-3 связью между галактозой и последующим звеном: SLeс и STF; не реагируют на сульфатирование рецептора, а фукозилированные рецепторы SLea и SLeх связывают значительно хуже, чем исходные сахариды. Сродство к человеческому рецептору 6`SLN у них исключительно низко.

Близким рецепторным фенотипом обладают вирусы Chicken/14/76, Turkey/England/69, Goose/VN/324/01, Goose/VN/113/01, Turkey/WI/01/1996. В случае Chicken/14/76, Turkey/England/69 и Turkey/WI/01/1996 это может объясняться эволюционной близостью с утиными вирусами. H5N1 вирусы Goose/VN/324/01и Goose/VN/113/01 относятся к группе, безусловно отошедшей от эволюционной ветви, предварительно глубоко адаптированной к курам. Их рецепторный фенотип иллюстрирует повторную адаптацию к птицам отряда Anseriformes. Вирусы шестого субтипа отличаются от утиных вирусов толерантностью к фукозилированию рецептора - сродство к SLeх у них не ниже, чем к 3`SLN. В этом отношении они напоминают вирусы чаек разных субтипов (H4, H5, H6, H13 и H14).

Таблица. 5 Рецепторная специфичность вирусов гриппа домашней птицы

вирусы	Субтип	6`SLN	3`SLN	Su-3'SLN	SLex	Su-SLex	SLec	Su-SLec	STF	SLea
Duck/Hong Kong/193/77	H1N2	>5000	10	10	>100	>100	10	10	10	>100
Duck/Hong Kong/717/79	H1N3	>5000	10	10	>100	>100	10	10	10	>100
Duck /Hong Kong/278/78	H2N9	>5000	20	10	>50	>50	10	10	10	>50
Duck/Nanchang/2-0485/00	H2N9	>5000	20	10	>50	>50	10	10	10	>50
Duck/Buryatia/652/88	H3N8	>5000	10	10	50	50	5	5	5	50
Mallard/New York/670/78	H4N6	>5000	4	8	100	>200	2	4	8	100
Duck/Primorie/3/82	H9N2	>5000	10	8	100	30	8	5	5	100
Mallard/Netherlands/02/00	H10N4	>5000	20	7	>50	30	5	5	-	-
Chicken/Hong Kong/14/76	H1N1	>5000	10	10	>100	>100	20	20	5	>100
Turkey/England/69	H3N2	>5000	2	8	40	50	3	5	5	50
Goose/Vietnam/324/01	H5N1	>5000	5	5	50	30	5	5	-	-
Goose/Vietnam/113/01	H5N1	>5000	5	40	40	>100	3	5	-	-
Shearwater/Australia/1/72	H6N5	>5000	20	30	10	30	15	15	15	10
Teal/Hong Kong/W312/97	H6N1	>5000	50	>50	20	>50	20	>50
Turkey/Massachussetts/65	H6N2	>5000	20	30	20	30	10	20	20	50
Chicken/New York/13237-6/98	H6N8	>5000	7	10	7	20	5	10	5	10
A/Turkey/Virginia/4529/02	H7N2	200	2	1	20	4	10	10	5	>100
Avian/ New York /273874/03	H7N2	500	10	2	30	8	20	15	-	-
Ch/New Jersey/294598-12/04	H7N2	200	5	1	20	5	5	2	-	-
Chicken/Delaware/296763-2/04	H7N2	200	15	5	30	15	20	15	-	-
New York/107/03	H7N2	200	10	2	>100	15	20	>100	-	-
Netherlands/219/03	H7N7	500	4	1	5	0.5	5	5	5	50
Netherlands/230/03	H7N7	500	4	1	5	0.5	5	5	5	50
Netherlands/231/03	H7N7	500	4	1	5	0.5	5	5	5	50
Goose/Minnesota/5773/80	H9N2	>5000	20	10	50	20	10	10	20	50
Turkey/Wisconsin/1/96	H9N2	>5000	5	5	20	30	2	2	20	10
Turkey/Minnesota/38391-6/95	H9N2	>5000	10	10	10	20	5	5	10	5
Chicken/New Jersey/12220/97	H9N2	>5000	5	5	0.5	0.5	5	5	7	2
Pheasant/Wisconsin/1780/88	H9N2	>5000	10	3	2	1	10	10	-	-
Chicken/Korea/96323/96	H9N2	>5000	10	3	30	10	10	3	-	-
Turkey/Kandeijoni/73	H9N2	200	20	5	20	3	20	5	-	-
Chicken /Hong Kong/FY20/99	H9N2	50	>100	3	>100	5	>100	>100	-	-
Chicken /Hong Kong/G9/97	H9N2	50	>100	5	>100	10	>100	>100	-	-
Chicken /Hong Kong /SF3/99	H9N2	50	>100	3	>100	5	>100	>100

Подобные документы

• Грипп и типология его вирусов

  Структура и свойства вирусов гриппа, их антигенная изменчивость. Международная система кодировки вирусов. Разброс аэрозольных частиц при чихании. Симптомы заболевания и его клиническая диагностика. Осложнения и последствия гриппа. Статистика заболевания.
  
  реферат [818,5 K], добавлен 15.02.2014
  

• Профилактика гриппа и ОРВИ

  Хронические переохлаждения - идеальная почва для развития простудных заболеваний. Антигенное смещение вирусов. История гриппа и ОРВИ. Самые частые вопросы и ответы об острой респираторной вирусной инфекции. Опасность гриппа, профилактика и лечение.
  
  реферат [37,2 K], добавлен 28.12.2010
  

• Общественная значимость пандемий вируса гриппа

  Краткие сведения о вирусе гриппа А. Пандемии гриппа в новейшей истории человечества. Статистические характеристики заболеваемости вирусом гриппа А/H1N1. Разработка вакцин против пандемического гриппа H1N1. Эффективность противовирусных препаратов.
  
  реферат [33,1 K], добавлен 27.08.2012
  

• Клинические особенности, профилактика и лечение гриппа

  Особенности ОРВИ и гриппа, полиэтиологичность вирусов как фактор неконтролируемости эпидемий. Пути передачи инфекции, причины малой эффективности вакцинации населения. Роль медицинской сестры в диагностических и профилактических мероприятиях при гриппе.
  
  курсовая работа [295,8 K], добавлен 11.12.2014
  

• Классификация, структура и особенности биологии вирусов

  Свойства вирусов и плазмид, по которым они отличаются от остального живого мира. Морфология вирусов. Исходы взаимодействия вирусов с клеткой хозяина. Методы культивирования вирусов. Вирусы бактерий (бактериофаги). Этапы взаимодействия фагов и бактерий.
  
  реферат [25,6 K], добавлен 21.01.2010
  

• Теории происхождения вирусов

  История возникновения вирусов, простые и сложные вирусы. Содержание теории регрессивного происхождения вирусов. Основания для выдвижения эндогенного происхождения вирусов. Основные недостатки теории происхождения вирусов из доклеточных форм жизни.
  
  презентация [5,7 M], добавлен 10.10.2019
  

• Вирус гриппа

  Виды гриппа - острого инфекционного заболевания дыхательных путей. Строение и распространение вируса гриппа, история эпидемий заболевания, его патогенез, клиническая картина, возможные осложнения. Профилактика и существующие методы лечения гриппа.
  
  курсовая работа [42,4 K], добавлен 10.11.2011
  

• Вирусы

  Проблемы борьбы с вирусами - возбудителями заболеваний. История открытия вирусов, их формы. Многообразие строения вирусов. Особенности вирусов, их классификация и этапы жизнедеятельности. Анализ строения бактериофага. Вирусные заболевания человека.
  
  презентация [576,5 K], добавлен 12.05.2013
  

• Инфекционные свойства вирусов

  Характеристика вирусов – неклеточных форм жизни, изучаемых с помощью микроскопа. Основные свойства вирусов: поражение вирусами лимфоцитов, особенность образовывать включения Оспа, бешенство, корь. Виды вирусных болезней: продуктивные, персистирующие.
  
  презентация [186,2 K], добавлен 12.12.2011
  

• Репродукция вирусов

  Описание стадий адсорбции вириона на поверхности клетки. Особенности процесса проникновения вируса в чувствительные к нему клетки. Специфика скрытой фазы инфекционного вируса. Синтез компонентов и формирование зрелых вирионов. Репродукция вирусов.
  
  реферат [17,8 K], добавлен 26.12.2011
  

• Вирусы

  Гипотезы происхождения, история открытия вирусов, их строение и химические свойства. Классификация вирусов, их взаимодействие с клеткой. Способы передачи вирусных заболеваний: оспа, гепатит, грипп, полиомиелит, СПИД. Эволюция вирусов на современном этапе.
  
  реферат [46,4 K], добавлен 20.12.2009
  

• Противовирусные препараты

  Краткая характеристика вирусов. Роль изучения вирусов в развитии эпидемиологии, иммунологии, молекулярной генетики и других разделов биологии. Характеристика вирусных заболеваний. Классификация противовирусных препаратов и их фармакологическое действие.
  
  реферат [36,0 K], добавлен 31.10.2011
  

• Изучение многообразия вирусов

  Изучение вируса табачной мозаики. Горизонтальный перенос генов. Электронная микрофотография бактериофагов, инфицирующих клетку. Определение вич-инфекции, его влияние на иммунную систему организма человека. Классификация и особенность строения вирусов.
  
  презентация [849,1 K], добавлен 05.12.2014
  

• Классификация, морфология и биология вирусов

  Открытие первого вируса, поражающего человека, его проникновение в клетку. Этапы развития вирусологии. Использование лабораторных мышей и куриных эмбрионов для культивирования вирусов. Строение и химический состав вириона. Выход вирионов из клетки.
  
  презентация [7,3 M], добавлен 17.01.2014
  

• Лабораторный надзор за гриппом и ОРЗ в г. Воронеже и области в 2006-2007 гг.

  Изучение основных видов лабораторных исследований по гриппу, обеспечивающих возможность раннего распознавания этиологии пандемии, с последующим проведением всего комплекса противоэпидемических и профилактических мероприятий. Выделение вирусов гриппа.
  
  доклад [15,7 K], добавлен 08.01.2011
  

• Вирусы

  Сущность понятия "вирус", история изучения. Схематическое строение вируса. Классификация вирусов: дезоксивирусы, рибовирусы. Схематичное изображение расположения капсомеров в капсиде вирусов. Вирус иммунодефицита человека, трехмерное изображение.
  
  презентация [496,1 K], добавлен 19.10.2011
  

• Грипп. Свиной грипп

  Исторические сведения о гриппе как острой респираторной антропонозной инфекции. Этиология болезни, разновидности вирусов, механизм передачи. Клиническая картина, эпидемиология, дифференциальная и лабораторная диагностика. Особенности свиного гриппа.
  
  реферат [200,1 K], добавлен 15.12.2009
  

• Виды вирусов

  Теории происхождения, история изучения и открытия вирусов. Их жизненный цикл, роль в заболеваниях человека, биосфере и эволюции. Морфологические типы капсидов. Формирование липидной оболочки вируса. Виды вирусных инфекций человека, растений, бактерий.
  
  курсовая работа [2,3 M], добавлен 18.05.2016
  

• Факты о свином гриппе

  История появления свиного гриппа, споры вокруг его возникновения и распространения, влияние на организм, препараты и вакцинация. Статистические данные о смертности от "обычного" сезонного гриппа. Материалы сети интернет о способах предотвращения гриппа.
  
  реферат [70,7 K], добавлен 10.11.2009
  

• ДНК-геномные вирусы. Вирус папилломы и полиомы человека

  Общая характеристика и классификация ДНК-геномных вирусов как вирусов, геном которых представлен дезоксирибонуклеиновой кислотой. Характеристика, виды, онкогенность, репликация и лабораторная диагностика вируса папилломы и вируса полиомы человека.
  
  реферат [295,0 K], добавлен 10.12.2010
  

• главная
• рубрики
• по алфавиту
• вернуться в начало страницы
• вернуться к началу текста
• вернуться к подобным работам