Последствия воздействий ионизирующих излучений: цитогенетические изменения в лимфоцитах крови человека

хроматидного типа примерно в 2-3 раза превышает аналогичные показатели в контрольной группе. Частота дицентриков и центрических колец имеет наибольшие значения в группе ликвидаторов, работавших в 1986 году - примерно в 5 раз выше по сравнению с контролем. В группах ликвидаторов, работавших в последующие годы, наблюдается постепенное снижение уровня цитогенетических показателей.

В обследованной группе только у 60% ликвидаторов имелись официальные данные о дозе облучения. Статистический анализ не выявил достоверных различий по частоте дицентриков и центрических колец между группами с разными значениями средних доз (рис. 11).

Рисунок 11 Средняя частота дицентриков и центрических колец в группах ликвидаторов с разными значениями доз по документам

Среди ликвидаторов 1986 г. 692 человека работали в зоне аварии однократно, а 96 человек приезжали на работу несколько раз в течение 3-4 лет (табл. 6). В группе ликвидаторов, работавших в Чернобыле многократно, частота всех цитогенетических показателей была выше. Получены статистически значимые различия между группами по общей частоте хромосомных аберраций, частоте ацентрических фрагментов и частоте хроматидных аберраций.

В отдельную группу выделены 60 ликвидаторов, которые работали на предприятиях атомной промышленности, являясь специалистами в области радиационной физики, радиохимии, дозиметрии, и которые подвергались радиационному воздействию в процессе профессиональной деятельности. Средняя частота дицентриков и центрических колец в этой группе в 1,5 раза достоверно выше аналогичного показателя в группе ликвидаторов, работавших в зоне аварии в наиболее опасное время - в 1986 году.

При анализе результатов цитогенетического мониторинга ликвидаторов, работавших в 1986 г., полученные данные были объединены в 4 группы - по времени проведения цитогенетического анализа - через 4-5 лет (I группа) после аварии, 6-10 лет (II группа), 11-15 лет (III группа) и 15-20 лет (IV группа) (рис. 12).

а

б

в

12. Средняя частота хромосомных аберраций в группе ликвидаторов 1986 года в разные сроки обследования (а-частота дицентриков и центрических колец на 100 клеток; б - частота ацентрических фрагментов на 100 клеток; в - частота хроматидных аберраций на 100 клеток)

На протяжении всего периода обследования, начиная с1990 года и вплоть до 2007 года, частота всех типов хромосомных аберраций оставалась достоверно более высокой по сравнению с контрольными значениями.

Необходимо подчеркнуть, что не было выявлено достоверных различий по частоте клеток с дицентриками и центрическими кольцами в зависимости от сроков проведения цитогенетического обследования. При этом частота ацентрических фрагментов и аберраций хроматидного типа снизилась со временем. В группах ликвидаторов, обследованных через 11-15 лет и 16-20 лет (III и IV группы), средняя частота этих показателей примерно в 2 раза ниже по сравнению с группами ликвидаторов, обследованных в более ранние периоды (I и II группы).

Стабильные хромосомные аберрации. Цитогенетический анализ, проведенный с помощью FISH метода, показал, что средняя частота транслокаций в группе ликвидаторов превышает контрольный уровень в 2,2 раза (табл. 7). 17 ликвидаторов работали в Чернобыле периодически в течение 1986-1995 гг., т.е. подвергались длительному фракционированному облучению. Частота транслокаций в этой группе в 3,3 раза выше, чем в контрольной группе и в 2 раза превышает аналогичный показатель для группы ликвидаторов, которые работали в Чернобыле только в 1986 г.

Среди обследованных FISH методом ликвидаторов у 34 человек имелись официальные сведения о дозе облучения. Статистический анализ не выявил значимой корреляции частоты транслокаций с накопленной (по документам) за время работы в Чернобыле дозой ионизирующего излучения (коэффициент корреляции составил 0,08 при p=0,65).

Таблица 7 Средняя частота транслокаций у ликвидаторов Чернобыльской аварии (FISH метод)

Группы	Число обследованных (число клеток)	Доза по документам ± m, мЗв	Частота транслокаций FG m на100 кл
Все ликвидаторы	52 (44283)	251±42	1,210,16*
Ликвидаторы 1986г.	35 (27767)	200±20	0,860,13*а
Ликвидаторы 1986-1995гг.	17 (15516)	380±46	1,810,34*
Контроль (Москва)	16 (29043)	-	0,17 0,03

* - значения, достоверно отличающиеся от аналогичных показателей в группе сравнения, p<0,05, t-критерий Стьюдента; a - значения, достоверно отличающиеся от аналогичных показателей в группе ликвидаторов, работавших в Чернобыле в 1986-1995 гг., р<0,05, t- критерий Стьюдента

Таким образом, подводя итоги многолетнего изучения цитогенетических эффектов у участников ликвидации последствий аварии на Чернобыльской АЭС, необходимо отметить, что на протяжении всего периода наблюдения средняя частота хромосомных аберраций в группах ликвидаторов, работавших в зоне аварии в 1986 - 1989 гг., превышает контрольный уровень. Со временем после облучения наблюдается постепенное снижение частоты ацентрических фрагментов и аберраций хроматидного типа. При этом частота дицентриков и центрических колец - маркеров радиационного воздействия - фактически не изменяется и превышает аналогичный показатель в контрольной группе в 3,5 - 5 раз в зависимости от сроков работы и длительности нахождения в зоне аварии. Частота транслокаций, исследованная с помощью FISH метода, также превышает контрольный уровень (в 1,5 - 3 раза) и зависит от продолжительности работы в зоне аварии.

Не обнаружено связи частоты дицентриков и центрических колец, а также частоты транслокаций с величиной дозы, официально зарегистрированной в документах ликвидаторов.

Результаты цитогенетического обследования свидетельствуют, что более надежными показателями при анализе последствий облучения ликвидаторов являются дата въезда в зону радиоактивного загрязнения или, иными словами, год работы в Чернобыле и продолжительность проведения восстановительных работ.

3. Применение цитогенетических показателей крови для биологической индикации и дозиметрии ионизирующего излучения

3.1. Анализ зависимостей «доза-эффект» при воздействии гамма- и бета-излучения и построение калибровочных кривых для частоты дицентриков и транслокаций

3.1.1. Гамма-излучение. Зависимость «доза-эффект» для гамма-излучения 60Co исследована при двух режимах облучения образцов крови - при мощности дозы 0,1 Гр/мин и 0,47 Гр/мин. Для построения калибровочной кривой выбраны дозы в диапазоне от 0 до 4 Гр.

С целью построения максимально адекватной калибровочной кривой «доза-эффект» проанализированы результаты цитогенетического исследования для пяти (облучение с мощностью дозы 0,1 Гр/мин) и трех (облучение с мощностью дозы 0,47 Гр/мин) доноров. При обоих режимах облучения данные, полученные для разных доноров, после предварительной проверки на однородность были объединены. Всего проанализировано 55007 метафаз, т.е. около 5000 клеток на каждую точку кривой при облучении образцов крови с мощностью дозы 0,1 Гр/мин и 10510 метафаз, т.е. около 1500 клеток на каждую точку кривой при облучении образцов крови с мощностью дозы 0,47 Гр/мин.

Регрессионные уравнения, описывающие дозовую зависимость, вычислены с помощью метода наименьших квадратов с весами, величины которых обратно пропорциональны дисперсиям частот хромосомных аберраций. Установлено, что наиболее значимым для оценки дозы показателем является частота дицентриков и центрических колец (р=6 10-14 при облучении с мощностью дозы 0,1 Гр/мин и р=3 10-11 при облучении с мощность дозы 0,47 Гр/мин). Дозовые зависимости для этого показателя лучше всего описываются линейно-квадратичным уравнением. Сравнение двух дозовых зависимостей, полученных при разных режимах облучения образцов крови, не выявило существенных различий (рис. 13). Значения линейных и линейно-квадратичных коэффициентов практически не отличаются или отличаются в пределах ошибки (р>0,05).

Таким образом, результаты экспериментального исследования позволяют констатировать, что мощность дозы в исследуемом диапазоне не оказывает влияния на частоту хромосомных аберраций.

В дальнейшем для реконструкции доз по частоте дицентриков применяли калибровочные кривые «доза-эффект», полученные при облучении образцов крови гамма-излучением с мощностью дозы 0,1 Гр/мин. Соответствующая регрессионная зависимость, имеет вид:

y = 0,1 + 1,5 D +6,3 D2 , где

y - частота аберраций на 100 клеток, D - доза облучения. Значимость модели: р=610-14.



Рис. 13 Зависимость «доза-эффект» для частоты дицентриков и центрических колец при двух режимах облучения

Дозовая зависимость для частоты стабильных хромосомных аберраций - транслокаций при облучении образцов крови гамма-излучением с мощностью дозы 0,1 Гр/мин получена с помощью FISH метода. Всего проанализировано 21087 метафаз, т.е. в среднем 2636 метафаз на каждую точку кривой. При построении калибровочной кривой учитывали суммарное значение реципрокных и нереципрокных транслокаций. Соответствующая регрессионная зависимость имеет вид:

y = 0,24 + 0,70 D +0,14 D2, где

y - частота транслокаций с участием хромосом 1, 4 и 12 на 100 клеток, D - доза облучения. Значимость модели: р=6,3х10-4.

Известно, что клетки с нестабильными хромосомными аберрациями (дицентриками и центрическими кольцами) постепенно элиминируют из циркулирующей крови в силу особенностей структурной организации, что и является основной причиной, не позволяющей использовать их для ретроспективной дозиметрии. При анализе стабильных хромосомных аберраций - транслокаций, с увеличением дозы радиационного воздействия повышается вероятность появления клеток, содержащих как стабильные, так и нестабильные хромосомные аберрации. Элиминация таких клеток в пострадиационном периоде может привести к тому, что доза, рассчитанная по частоте транслокаций, будет недооценена. Поэтому очень важно иметь достоверную информацию том, в каком диапазоне доз можно применять анализ стабильных хромосомных аберраций для ретроспективной дозиметрии, не вводя поправку на снижение частоты нестабильных клеток, в которых могут содержаться транслокации. Анализ частоты клеток только со стабильными хромосомными аберрациями показал, что только в диапазоне доз до 2 Гр можно проводить ретроспективную оценку уровня облучения по частоте транслокаций, не учитывая процессы элиминации (рис. 14).

Рис. 14 Зависимость «доза-эффект» для частоты транслокаций

Анализ частоты дицентриков и центрических колец, проведенный с помощью FISH метода после облучения образцов крови гамма-излучением (мощность дозы 0,1 Гр/мин) показал, что зависимость «доза-эффект» очень близка к полученной при применении классического цитогенетического метода (рис. 15). Различия между показателями статистически недостоверны. Этот, несомненно, важный результат является подтверждением корректности формулы, предложенной (Lucas et al., 1993) для пересчета частоты транслокаций с участием окрашенных хромосом на весь геном.

Рис. 15 Дозовая зависимость для частоты дицентриков и центрических колец (FISH метод)

Сплошной линией обозначена калибровочная кривая для частоты дицентриков и центрических колец, полученная с помощью классического метода.

3.1.2. Бета-излучение оксида трития (НТО). Зависимость «доза-эффект» после воздействия бета-излучения НТО изучена при двух режимах облучения - при постоянном времени облучения - 24 ч (мощность дозы изменялась от 0,042 до 1,03 мГр/мин) и при постоянной мощности дозы бета-излучения НТО - 0,522 мГр/мин (время облучения варьировало от 1,6 до 48 ч) в диапазоне доз от 0,05 до 1,5 Гр.

На основании результатов цитогенетического анализа (посчитано 15329 клеток, в среднем по 2000 клеток на точку) с помощью метода наименьших квадратов с весами получены уравнения регрессии, описывающие дозовую зависимость при двух режимах облучения. Результаты экспериментального исследования показали, что при пролонгированном радиационном воздействии в течение 24 ч с низкой мощностью доз, варьирующей от 0,042 до 1,03 мГр/мин, дозовая зависимость частоты дицентриков и центрических колец лучше всего соответствует линейной модели регрессии (у=0,21+10,76D, р=4х10-6). При облучении с постоянной мощностью дозы 0,522 мГр/мин при разном времени радиационного воздействия (от 1,6 до 48 ч) дозовая зависимость имеет линейно-квадратичный вид (у=0,07+4,47D+9,03D2 , р=2x10-6).

Анализ экспериментальных данных показал, что дозовые зависимости для обоих режимов облучения в диапазоне до 1 Гр практически одинаковые. И только при дальнейшем увеличении дозы наблюдаются различия. При облучении образцов крови с постоянной мощностью дозы - 0,522 мГр/мин в течение 48 ч резко возрастает частота хромосомных аберраций. По-видимому, в исследуемом диапазоне мощностей доз (0,522 - 1,03 мГр/мин) определяющим фактором могло быть время радиационного воздействия, отличающееся в 2 раза (48 и 24 ч, соответственно), и которое в совокупности с особенностями биологического действия бета-излучения трития, привело к наблюдаемому эффекту.

3.2. Относительная биологическая эффективность излучений разного качества.

Для количественной оценки биологического действия разных по качеству ионизирующих излучений определяют коэффициенты относительной биологической эффективности (ОБЭ). Численные значения ОБЭ не только представляют самостоятельный интерес для радиобиологии, определяя степень опасности излучения, но и служат основанием для оценки весового множителя излучений (Wr), который является поправочным коэффициентом при определении качества излучения и необходим для преобразования поглощенной дозы (Гр) в эквивалентную (Зв) (МКРЗ, публикация 60, 1990).

3.2.1. Оценка относительной биологической эффективности бета-излучения НТО in vitro. Определение коэффициента ОБЭ бета-излучения НТО проводили, сравнивая частоту дицентриков и центрических колец с данными, полученными при облучении in vitro гамма-излучением 60Co с мощностью дозы 0,1 Гр/мин:

.

Отсюда:

Максимальное значение коэффициента ОБЭ трития, равное 2,2 , было получено при дозе 0,03 Гр. При увеличении дозы значение коэффициента ОБЭ плавно снижается, приближаясь к величине 1,2 при дозе в 1 Гр.

Причины более высокой эффективности бета-излучения трития обусловлены в первую очередь особенностями его биологического действия. Известно, что из-за низкой энергии и малого пробега бета-частиц трития средняя плотность ионизации значительно возрастает, что может приводить к повышению дозы на порядок (Pinson et al., 1980). Важным фактором является включение тритиевой воды в гидратированные оболочки ДНК, что приводит к дополнительным повреждениям молекул ДНК и, соответственно, увеличению реальной поглощенной дозы (Mathur-de Vre, Binet, 1984; Baumgartner, 2002). Также важно учитывать, что при радиационном распаде трития проявляется трансмутационный эффект - превращение атома трития в атом гелия, что реализуется в более выраженной деструкции генетических структур (например, замена пар оснований) и может проявляться в виде точечных мутаций. Возникновение таких точечных повреждений в молекуле ДНК трудно обнаруживается системой репарации, что постепенно приводит к накоплению дефектов молекулярной структуре и, как следствие, потери генетической информации. Показано, что эффект трансмутации может значительно превосходить эффект ионизации (Грачева, Королев, 1977; Commerford, 1984 Balonov et al., 1984).

Наиболее важная с практической точки зрения информация о значениях ОБЭ бета-излучения трития касается области малых доз. Увеличение ОБЭ при действии низких доз может быть связано как с нарушением взаимоотношений между основными системами клетки, ответственными за реализацию радиационных повреждений, так и с повышением продукции активных форм кислорода, губительно влияющих на структуры клеток (Федоренко, 2006). При малых дозах излучения степень повреждения клеток за счет образования свободных радикалов на единицу поглощенной дозы значительно возрастает по сравнению с областью высоких доз.

3.2.2. Оценка ОБЭ бета-излучения трития и космического излучения in vivo. Для определения ОБЭ бета-излучения трития и космического излучения был проведен сравнительный анализ результатов цитогенетического обследования профессионалов г. Сарова и космонавтов, имевших близкие значения частот стабильных хромосомных аберраций (транслокаций). У этих людей, подвергавшихся радиационному воздействию в процессе профессиональной деятельности, имеется достаточно надежная информация о дозе, полученная с помощью физических и расчетных методов дозиметрии.

Значение коэффициента, характеризующего ОБЭ бета-излучения трития и космического излучения по сравнению с гамма-излучением, определяли как отношение средних равноэффективных доз, индуцирующих одинаковую частоту транслокаций (табл. 8). Значение коэффициента ОБЭ для бета-излучения трития составило 2,5 при средней дозе бета-излучения НТО 157 мЗв. Эта величина несколько превышает значение ОБЭ трития, полученное в экспериментальной части работы. Однако представленные результаты позволяют с уверенностью говорить о большей эффективности бета-излучения трития по сравнению с гамма-излучением, особенно в области малых доз.

В группе космонавтов дозы, вызывающие эффект, близкий наблюдаемому в группе профессионалов, подвергавшихся действию гамма-излучения, в 1,9 раз ниже. Это значение вполне реально и не противоречит данным, представленным в работ по экспериментальной оценке ОБЭ космического излучения (Методические указания, 1991; Ballarin, Ottolenghi, 2005; Петров и др., 2007). Полученные данные являются наглядным подтверждением более высокой ОБЭ космического излучения, обусловленной входящими в его состав тяжелыми ионами высокой энергии.

Таблица 8 Средние значения коэффициентов ОБЭ бета-излучения трития и космического излучения, рассчитанные по частоте транслокаций in vivo

Группы	Доза, мЗв	Частота транслокаций на 100 кл. ± m	Коэффициент ОБЭ
Профессионалы, бета-излучение	157	1,94± 0,50	2,5
Космонавты	203	1,84±0,61	1,9
Профессионалы, гамма-излучение	386	1,77±0,71	-

Оценка ОБЭ космического излучения и бета-излучения трития проведена непосредственно по реакции организма, с учетом его индивидуальных особенностей. Естественно, эти результаты нельзя считать бесспорными. Однако такой подход, на наш взгляд, позволяет реально оценить степень опасности разных видов ионизирующего излучения и может быть полезен при разработке рекомендаций по обеспечению радиационной безопасности лиц, профессионально контактирующих с источниками облучения.

3.3. Реконструкция доз ионизирующего излучения по частоте хромосомных аберраций в лимфоцитах периферической крови (биологическая дозиметрия)

Для оценки и прогноза последствий облучения в первую очередь важно иметь достоверную информацию о дозе радиационного воздействия. Одним из возможных подходов в случае отсутствия или ограничения данных физической дозиметрии является оценка доз с помощью цитогенетических методов (WHO, 1976; IAEA, 1986, 2001; UNSCEAR, 1986). Располагая результатами цитогенетического обследования людей, подвергшихся облучению в результате аварийных и чрезвычайных ситуаций, нам представлялось вполне обоснованным применить их для оценки доз, используя калибровочные кривые, полученные в настоящей работе. Принимая во внимание, что все обследованные лица подвергались пролонгированному или хроническому облучению в течение длительного времени, для определения доз использовали только линейную компоненту уравнения регрессии: у= с+бD (Obe, 2007).

3.3.1. Космонавты. Только для космонавтов была возможность оценить дозы по частоте нестабильных хромосомных аберраций, т.к. цитогенетический анализ проводился сразу после окончания КП. По частоте дицентриков были рассчитаны дозы, полученные космонавтами за время первого КП (табл. 9).

Необходимо отметить, что полученные значения доз рассчитаны без учета реальных условий облучения в космосе, а именно, без учета ОБЭ космического излучения, а также величины мощности дозы. Несмотря на это, данные биологической дозиметрии свидетельствуют о более значительном воздействии космического излучения на организм космонавтов, чем это следует из данных физической дозиметрии. Причем в случае краткосрочных полетов различия между биологическими и физическими дозами достигают значений 17 - 26, в то время как в случае длительных полетов эта величина составляет всего 3 - 4. Одним из объяснений данного факта может быть длительное (около полугода) пролонгированное облучение, во время которого в циркулирующей крови космонавтов во время КП протекают одновременно два противоположных процесса - образование хромосомных аберраций под воздействием радиации и элиминация клеток с нестабильными хромосомными аберрациями. Оценка дозы проводилась после окончания КП, т.е. по остаточной частоте дицентриков, что, естественно, могло привести к недооценке радиационного эффекта у космонавтов, участвующих в ЭО. Также нельзя не учитывать и возможность влияния на уровень хромосомных аберраций дополнительных факторов КП, таких как стресс, невесомость, перегрузки, измененный состав газовой среды. Сочетанное воздействие факторов радиационной и нерадиационной природы может приводить к аддитивному или даже синергетическому эффекту. Непропорционально высокий уровень хромосомных аберраций, наблюдаемый у космонавтов после краткосрочных полетов, может быть связан и с особенностями космического излучения, характеризующегося высокой плотностью ионизации, при действии которого в поврежденных клеточных структурах отсутствуют или крайне слабо выражены восстановительные процессы. Именно вследствие этого ОБЭ излучений с высокой ЛПЭ возрастает по мере снижения суммарной дозы и достигает максимальных значений при хроническом воздействии в малых дозах (Москалев, 1983).

Таблица 9 Биологическая оценка доз у космонавтов по частоте дицентриков и центрических колец

Экспедиция	Станция	Среднее значение физической дозы (диапазон), мГр	Число обследованных	Частота диц+ц.к на 100 кл.±m	«Биологическая» доза (диапазон), мЗв
ЭП	«Мир»	6 (2-11)	4	0,26±0,09	107 (47 - 167)
	МКС	2 (1-3)	13	0,18±0,04	53 (27-80)
ЭО	«Мир»	71 (7-109)	14	0,44±0,06	227 (187-267)
	МКС	29 (18-46)	6	0,27±0,07	113 (67-160)

Биологическая оценка доз у космонавтов проведена также по частоте стабильных хромосомных аберраций - транслокаций, которые были проанализированы с помощью FISH метода (табл. 10). Среднее значение дозы, рассчитанное по частоте транслокаций в группе космонавтов после первого КП, оказалось близким к дозе, которая была определена по частоте дицентриков. Несколько сниженное значение последней, возможно, обусловлено процессом элиминации клеток с дицентриками из циркулирующей крови космонавтов во время длительного КП. Как и в случае оценки доз по частоте дицентриков, доза после первого КП, рассчитанная по частоте транслокаций, 4 раза превышает значение дозы, полученной на основании данных физической дозиметрии.

Таблица 10 Биологическая оценка доз у космонавтов по частоте стабильных хромосомных аберраций - транслокаций (FISH метод)

Группа	Число обследованных	Данные физической дозиметрии (суммарная доза), мГр	Частота транслокаций FP на 100 кл. ± m	«Биологическая» доза (диапазон), мЗв
До 1-го КП	5	-	0.30 0.06	-
После 1-го КП	10	45 4	0.43 0.09	186 (0 -314),
После 2-го и 3-го КП	8	181±18	0,46 0.06	229 (143 -314)

3.3.2. Профессионалы г. Сарова. Индивидуальная оценка доз проведена спустя несколько десятилетия с начала работы в радиационно-опасных условия производства только для тех профессионалов, у которых частота транслокаций достоверно отличалась от контрольного уровня.

В «гамма» группе значения доз составили от 243 до 1757 мЗв. Несмотря на наблюдаемую тенденцию связи между дозами, полученными с помощью физических методов дозиметрии и «биологическими» дозами, статистический анализ не выявил достоверной корреляции (коэффициент корреляции 0,64, р=0,06).

Оценка доз у профессионалов «бета» группы проведена с использованием двух подходов:

- по частоте транслокаций с помощью калибровочной кривой «доза-эффект», для бета-излучения трития, представленной в работе (Deng et.al., 1998);

- по частоте транслокаций с помощью собственной калибровочной кривой «доза-эффект» для гамма-излучения 60Со с учетом коэффициента ОБЭ бета-излучения трития, полученного в настоящей работе.

Значения индивидуальных доз при использовании первого подхода составили от 94 до 1280 мЗв, второго - от 115 до 2530 мЗв, т.е. в 1,5 - 2 раза в среднем выше. Установлена достоверная корреляция между дозами, полученными расчетными методами дозиметрии и дозами, реконструированными по частоте транслокаций. Коэффициенты корреляции составили 0,68 (p=0,004) для доз, рассчитанных по калибровочной кривой для бета-излучения трития и 0,80 (p=0,0002) для доз, рассчитанных по калибровочной кривой для гамма-излучения 60Со с учетом коэффициента ОБЭ трития.

Наибольшие различия между расчетными и «биологическими» дозами наблюдаются в области малых доз - до 100 мЗв (табл. 11). При низких уровнях облучения (по данным физической дозиметрии) значения «биологических» доз превышают расчетные как минимум в 6 раз. В области более высоких доз (>100 мЗв) данные физической и биологической дозиметрии очень близки, особенно при оценке доз по калибровочной кривой для бета- излучения трития. При определении доз по калибровочной кривой для гамма-излучения 60Со с учетом ОБЭ трития данные физической и биологической дозиметрии отличаются в 2 раза.

Таблица 11 Соотношения «биологических» доз и доз, полученных расчетными методами дозиметрии у профессионалов «бета» группы.

Группы, диапазон доз, мЗв	Число обследованных	Расчетная доза, мЗв	«Биологическая» доза, мЗв	Соотношение доз
< 100	8	35	212а (238)в	6,1 (6,8)
> 100	8	386	407 (820)	1,1 (2,1)

а - доза, рассчитанная по калибровочной кривой для бета-излучения НТО;

в - доза, рассчитанная по калибровочной кривой для гамма-излучения с учетом коэффициента ОБЭ.

Полученные результаты наглядно свидетельствуют о более высокой биологической эффективности воздействия бета-излучения трития в области малых дозах. К сожалению, данный факт не учитывается при реконструкции доз с использованием расчетных и физических методов дозиметрии, что приводит, в конечном итоге, к недооценке опасности воздействия бета-излучения трития на организм человека

3.3.3. Участники ликвидации аварии на Чернобыльской АЭС. Определение доз облучения у ликвидаторов проводили спустя 7 - 10 лет после окончания работы в Чернобыле с помощью калибровочной кривой «доза-эффект» для транслокаций (Bauchinger et al., 1993). Средняя доза для всей группы (52 человека) составила 270 мЗв, для группы ликвидаторов, которые неоднократно работали в Чернобыле в период с 1986 по 1995 г. - 390 мЗв, а для ликвидаторов, работавших только в 1986 г. - 190 мЗв. Следует отметить, что средние значения доз, рассчитанные по частоте транслокаций для ликвидаторов 1986 г. не противоречат данным, полученным с помощью физических методов дозиметрии (Иванов и др., 1992).

Для 18 ликвидаторов, у которых частота транслокаций достоверно отличалась от контрольного уровня, определены индивидуальные дозы облучения, значения которых составили от 270 до 1000 мЗв

3.3.4. Жители территорий, загрязненных радионуклидами вследствие радиационных аварий. Оценка средних доз по частоте транслокаций у жителей загрязненных радионуклидами территорий показала, что наиболее пострадавшее население - это жители Казахстана и Алтайского края, подвергшиеся облучению в результате ядерных испытаний на Семипалатинском полигоне, и жители с.Муслюмово, расположенного на берегу р.Теча (табл. 12). Следует отметить, что значения доз были рассчитаны с помощью калибровочной кривой для гамма-излучения, полученной при конкретной мощности дозы. При этом не были учтены такие важные факторы, как реальная мощность дозы, характер радиационного воздействия (внутреннее ли внешнее облучение), распределение дозы во времени и ОБЭ излучения, так как такие данные отсутствуют. Естественно, что существует также большая доля неопределенности, связанная с влиянием на уровень транслокаций факторов нерадиационной природы, таких как возраст, условия проживания, производственные факторы. Однако, несмотря на это, полученные результаты позволяют ретроспективно оценить степень радиационного воздействия на население пострадавших регионов в условиях отсутствия точных данных физической дозиметрии.

Попытка сравнения доз, рассчитанных с помощью физических и расчетных методов дозиметрии, с данными цитогенетического анализа, на наш взгляд, не всегда корректна. Отсутствие четкой зависимости между уровнем хромосомных аберраций и физическими дозами может быть связано и с неточностями оценки последних. Как известно, ретроспективная оценка доз населения часто проводится с учетом усредненных данных (условия облучения, время радиационного воздействия, время наблюдения и др.).

Следует отметить, что на основании полученных результатов представляется преждевременным говорить о невозможности применения цитогенетических показателей крови для оценки доз в отдаленные сроки после радиационного воздействия. Учитывая, что одной из основных целей ретроспективной дозиметрии является прогноз возможных отдаленных последствий облучения, любой метод, с помощью которого можно получить информацию о дозовых нагрузках, имеет право на существование. Преимущество биологических методов, в данном случае цитогенетических, состоит в том, что оценивается непосредственная реакция организма на радиационное воздействие, которая учитывает специфические особенности организма, в первую очередь индивидуальную радиочувствительность, а также его состояние в момент облучения. Иными словами, «биологическая» доза - это интегральный показатель повреждающего действия радиации, условно выраженный в единицах эффективной дозы.

Таблица 12 Биологическая оценка доз у жителей, пострадавших в результате радиационных аварий

Группы	Число обследованных жителей	Частота транслокаций Fр, на 100 клеток	«Биологи-ческая» доза, мЗв
Лаптев Лог (Алтайский край)	8	0,58±0,12	490
Беленькое (Алтайский край)	6	0,56±0,153	460
Топольное (Алтайский край)	4	0,40±0,12	230
Долонь (Казахстан)	5	0.75 ± 0.10	730
Кайнар (Казахстан)	3	0,42 ± 0,09	250
Карааул (Казахстан)	5	0.64 ± 0.09	570
Знаменка (Казахстан)	5	0.41 ± 0.06	240
Муслюмово (Ю.Урал)	6	0,71±0,15	670
Окрестности АЭС ТМА	6	0,49±0,07	360

4. Применение цитогенетических показателей для прогноза последствий облучения

К настоящему времени накоплены данные, свидетельствующие о взаимосвязи мутагенеза в соматических клетках с канцерогенезом, что позволяет вполне правомерно использовать цитогенетические показатели в качестве прогностических тестов развития онкопатологии (Sorsa et al., 1992; Hagmar et al., 1998; Wild et al., 2002; Rossner et al., 2005). Существует мнение, что дестабилизация генома является основным патогенетическим механизмом развития соматических заболеваний. Появляется все больше сведений о вкладе соматических мутаций в развитие неопухолевой патологии (Пелевина и др., 2005; Воробцова, Семенов, 2006; Михайлова, 2006, Неронова и др., 2008).

Принимая во внимание, что хромосомные аберрации являются чувствительным показателем радиационного воздействия на организм человека, а также, учитывая негативную роль радиационного фактора в развитии соматической патологии, была проанализирована связь уровня заболеваемости с частотой хромосомных аберраций в лимфоцитах крови облученных лиц. В анализ включены две группы - сотрудники ВНИИЭФ г. Сарова и участники ликвидации последствий аварии на ЧАЭС, проходившие медицинское обследование в Российском научном центре рентгенорадиологии.

4.1 Анализ взаимосвязи цитогенетических повреждений и заболеваемости в группе профессионалов г. Сарова

Структура заболеваемости, классифицированная в соответствии с международной классификацией болезней - МКБ 10, проанализирована в группах, для которых проведен цитогенетический анализ, т.е. 108 человек основной группы и 49 человек контрольной группы. В группе профессионалов преобладала патология сердечно-сосудистой системы (67%), нервной системы и органов чувств (63%), а также костно-мышечной системы и соединительной ткани (58%). Приблизительно у половины профессионалов выявлены заболевания желудочно-кишечного тракта, у трети - болезни органов дыхания.

Для анализа связи показателей заболеваемости с уровнем хромосомных повреждений в лимфоцитах периферической крови были выделены две однородные группы - со значениями цитогенетических показателей выше («верхняя» группа) и ниже крайних квартилей («нижняя» группа). В качестве критериев выбраны два цитогенетических показателя - общая частота хромосомных аберраций и частота дицентриков и центрических колец. Каждая группа включала 27 человек. В «нижнюю» группу вошли профессионалы, у которых частота цитогенетических показателей не отличалась от контрольного уровня. «Верхняя» группа объединяла профессионалов, цитогенетические показатели которых достоверно превышают контрольные значения (рис. 16).

При сравнительном анализе установлено, что среднее количество диагностированных на момент цитогенетического обследования заболеваний сердечно-сосудистой системы и нервной системы достоверно выше в группах профессионалов с высоким уровнем общей частоты хромосомных аберраций и частоты дицентриков и центрических колец. При этом общее число профессионалов, страдающих сердечно-сосудистыми заболеваниями, практически не отличалось в сравниваемых группах.

Рис. 16 Структура заболеваемости в группах профессионалов, выделенных по критерию «общая частота хромосомных аберраций» и «частота дицентриков и центрических колец» 1 - сердечно-сосудистые заболевания; 2 - заболевания костно-мышечной системы и соединительной ткани; 3 - заболевания нервной системы и органов чувств; 4 - желудочно-кишечные заболевания; 5 - заболевания органов дыхания

Выделены значения, достоверно различающиеся в группах сравнения (p<0,05, точный критерий Фишера).

В группе профессионалов с высоким уровнем хромосомных аберраций и, соответственно, с высокой частотой заболеваний нервной системы и органов чувств отмечено достоверное увеличение случаев заболеваний катарактой. При этом большинство профессионалов, для которых был установлен диагноз «катаракта», имеют высокий уровень общей частоты хромосомных аберраций и клеток с дицентриками и центрическими кольцами. У одного профессионала катаракта является лучевой, возникшей в возрасте 33 лет после аварийного облучения в дозе 5100 мЗв. Важно отметить, что при анализе заболеваемости в контрольной группе не выявлено ни одного случая катаракты. Так как нет данных, подтверждающих радиационную природу катаракты у остальных профессионалов, можно только предполагать, что одной из причин повышенного уровня заболеваемости является радиационно-индуцированное ускорение процессов старения у лиц, подвергавшихся длительному воздействию ионизирующего излучения. Нельзя также отрицать и роль индивидуальной радиочувствительности в развитии данной патологии.

По остальным классам заболеваний достоверных различий между группами с разным уровнем хромосомных аберраций выявлено не было, за исключением патологии желудочно-кишечного тракта, которая чаще встречалась в группе обследованных профессионалов с низким уровнем дицентриков и центрических колец.

4.2. Анализ взаимосвязи цитогенетических повреждений и заболеваемости в группе участников ликвидации аварии на ЧАЭС.

Для анализа связи заболеваемости с уровнем хромосомных аберраций в лимфоцитах крови была сформирована группа ликвидаторов, участвовавших в восстановительных работах в Чернобыле в 1986 году (324 человека). Установлено, что в этой группе преобладала патология сердечно-сосудистой системы (81,5%), нервной системы и органов чувств (95%), а также костно-мышечной системы и соединительной ткани (89,5%). Приблизительно у половины всех обследованных ликвидаторов выявлены болезни эндокринной системы (52%), у 44% - болезни органов дыхания. Анализ связи цитогенетических повреждений с заболеваемостью проведен по двум классам болезней - сердечно-сосудистые заболевания и заболевания нервной системы и органов чувств. Этот выбор обусловлен с одной стороны, имеющимися в настоящее время данными о наиболее частой патологии этих систем организма среди ликвидаторов, а с другой стороны, результатами, полученными при обследовании профессионалов г. Сарова. В качестве цитогенетических критериев были выбраны: общая частота хромосомных аберраций, частота дицентриков и центрических колец, частота ацентрических фрагментов и частота аберраций хроматидного типа.

Для определения возможной связи цитогенетических показателей с заболеваемостью применяли корреляционный анализ, который предполагал последовательное вычисление парных и частных коэффициентов корреляции, и регрессионный анализ.

Принимая во внимание значительное влияние возраста на уровень заболеваемость, группа ликвидаторов была ранжирована по этому признаку и разделена на 10 возрастных групп в диапазоне от 26 до 78 лет. Для каждой группы вычислялись значения средних частот хромосомных аберраций, среднее количество диагнозов на момент цитогенетического обследования и средний возраст. При парном сравнении двух варьирующих признаков (диагноз - возраст, диагноз - хромосомные аберрации, хромосомные аберрации - возраст) получена достоверная корреляция сердечно-сосудистых заболеваний с частотой хромосомных аберраций (табл. 13). Связь заболеваний нервной системы с уровнем хромосомных нарушений достоверна, но носит отрицательный характер - наблюдается снижение заболеваемости при увеличении частоты хромосомных нарушений. Реально существует достоверная связь сердечно-сосудистых заболеваний с возрастом. Коэффициент корреляции r= 0,94 (р=0,01).

Заболевания нервной системы, как показал анализ, не зависят от возраста, хотя и наблюдается тенденция к снижению уровня данной патологии с возрастом.

Было получено также, что общая частота хромосомных аберраций и частота дицентриков и центрических колец с возрастом растут (r=0,788 и r=0,836, соответственно, при р=0,01).

Таблица 13 Корреляция между заболеваемостью и частотой хромосомных аберраций в лимфоцитах крови ликвидаторов (парные коэффициенты корреляции)

Цитогенетический показатель	Парные коэффициенты корреляции, r ± m (уровень значимости, р)
	Сердечно-сосудистая система	Нервная система и органы чувств
ХА	0,889±0,066 (р=0,01)	- 0,642±0,186 (р=0,05)
диц+ц.к	0,904±0,058 (р=0,01)	-0,479±0,244 (н.д.)
ф"	0,281±0,291 (н.д.)	-0,700±0,161 (р=0,05)
хрмт	0,785±0,121 (р=0,01)	-0,366±0,274 (н.д.)

Принимая во внимание, что корреляция между изучаемыми признаками может возникать в силу чисто случайных причин, связанных с малой выборкой, с некорректностью данных, либо когда один или оба признака является частью третьего, данные результаты нельзя рассматривать как окончательные. Дальнейший анализ предполагал определение частных коэффициентов корреляции, которые характеризуют связь только двух признаков (хромосомные аберрации - заболеваемость), при условии постоянного значения третьего учитываемого признака (возраст), который находится в корреляционной зависимости от первых двух. Значения частных коэффициентов корреляции представлены в таблице 14. Исходя из полученных значений частных коэффициентов корреляции, можно утверждать, что существует достоверная связь сердечно-сосудистых заболеваний с хромосомными аберрациями (общая частота хромосомных аберраций, частота дицентриков и центрических колец, частота хроматидных аберраций).

Таблица 14 Корреляция между заболеваемостью и частотой хромосомных аберраций в лимфоцитах крови ликвидаторов (частные коэффициенты корреляции)

Цитогенетический показатель	Частные коэффициенты корреляции, r ± m (уровень значимости, р)
	Сердечно-сосудистая система	Нервная система и органы чувств
ХА	0,699 (р=0,05)	- 0,359 (н.д.)
диц+ц.к	0,650 (р=0,05)	0,028(н.д.)
ф"	- 0,03 (н.д.)	-0,673 (р=0,06)
хрмт	0,779 (р=0,01)	0,01 (н.д.)

Статистический анализ позволил установить, что существует достоверная связь сердечно-сосудистых заболеваний с возрастом - частный коэффициент корреляции r=0,845 (р=0,01). И вполне закономерно, что связь между частотой хромосомных аберраций всех типов и возрастом при исключении влияния третьего признака - заболеваний сердечно-сосудистой и нервной системы, отсутствует.

Таким образом, частные коэффициенты корреляции подтвердили взаимосвязь уровня хромосомных аберраций в лимфоцитах периферической крови ликвидаторов с сердечно-сосудистыми заболеваниями и отсутствие связи с заболеваниями нервной системы и органов чувств.

Для того, чтобы получить представление насколько в среднем может измениться один из признаков (в нашем случае это сердечно-сосудистые заболевания) при изменении другого (частота хромосомных аберраций), связанного с ним, проведен анализ регрессионной зависимости и построена линейная регрессионная модель, имеющая следующий вид:

у = (1,48±0,44) х - 0,80, где

у - показатель, характеризующий уровень заболеваемости сердечно-сосудистой системы, отн.ед., х - частота хромосомных аберраций на 100 клеток. Уровень значимости коэффициента линейной регрессии p=0,02.

Естественно, что давать какую-либо количественную оценку на основании полученных данных представляется преждевременным, т.к. далеко не все факторы, влияющие на развитие сердечно-сосудистой патологии, были учтены при проведении анализа. Даже при достоверно установленной связи частоты хромосомных аберраций с уровнем заболеваемости еще остается невыясненным, какова доля участия анализируемого фактора среди прочих, в нашем случае, многочисленных факторов, систематически влияющих на состояние здоровья ликвидаторов. Однако полученные результаты, свидетельствующие о взаимосвязи уровня хромосомных нарушений с сердечно-сосудистыми заболеваниями, имеют, несомненно, большое значение, т.к. позволяют обоснованно прогнозировать развитие постлучевой патологии и целенаправленно подходить к вопросу о выборе критериев для формирования групп риска относительно развития неопухолевой патологии среди лиц, подвергавшихся низкодозовому радиационному воздействию.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Цитогенетическое обследование людей, подвергшихся радиационному воздействию при различных ситуациях, позволяет сделать следующее обобщение.

Цитогенетические повреждения в лимфоцитах периферической крови являются объективным, высокочувствительным критерием степени радиационного воздействия в раннем и отдаленном периодах после облучения и могут успешно использоваться для биологической индикации и оценки полученной дозы. При этом данные цитогенетического анализа позволяют судить о характере радиационного воздействия и виде ионизирующего излучения.

Корректная интерпретация результатов цитогенетического обследования облученных людей возможна только при наличии надежной информации о спонтанном уровне хромосомных аберраций, который зависит от места и условий проживания, а также влияния производственных и бытовых факторов генотоксического характера, с которыми человеку приходится сталкиваться на протяжении всей жизни.

Анализ нестабильных хромосомные аберрации позволяет провести количественную оценку радиационного воздействия только в ранние сроки после облучения. Однако, при ретроспективном исследовании, несмотря на значительный период времени, прошедший после облучения, в крови пострадавших людей наблюдается повышенная частота нестабильных хромосомных аберраций, в том числе маркеров радиационного воздействия - дицентриков и центрических колец, которая коррелирует с уровнем дозовых нагрузок.

Ретроспективная оценка доз в случае аварийных и чрезвычайных ситуаций возможна только по частоте стабильных хромосомных аберраций - транслокаций. При этом очень важно учитывать характер радиационного воздействия, тип излучения и диапазон доз.

В отличие от доз, полученных с помощью физических или расчетных методов дозиметрии «биологическая» доза, оцененная по частоте хромосомных аберраций, является интегральным показателем повреждающего действия радиации, который учитывает индивидуальную радиочувствительность и состояние организма в момент облучения. Информация о «биологической» дозе позволяет более точно прогнозировать возможные последствия радиационного воздействия.

Установленная достоверная связь заболеваний сердечно-сосудистой и нервной системы с частотой нестабильных хромосомных аберраций в лимфоцитах крови облученных людей имеет, несомненно, большое значение для обоснованного применения результатов цитогенетического анализа при формировании групп риска относительно развития неопухолевой патологии среди лиц, подвергшихся облучению в результате аварийных и чрезвычайных ситуаций.

ВЫВОДЫ

В результате проведения масштабного цитогенетического обследования лиц, подвергшихся радиационному воздействию при различных ситуациях, убедительно продемонстрирована возможность применения цитогенетических показателей крови для количественной индикации облучения и прогноза его последствий для организма.

Показано достоверное увеличение частоты стабильных и нестабильных хромосомных аберраций в лимфоцитах периферической крови облученных людей независимо от времени, прошедшего после радиационного воздействия. При этом установлено, что:

а) частота нестабильных аберраций хромосом у космонавтов, принимавших участие в полетах на станции "Мир" и МКС, зависит от длительности полета, величины накопленной дозы и продолжительности работы в открытом космосе;

б) у профессионалов г.Сарова через 40 и более лет после начала работы в радиационно-опасных условиях производства увеличенная частота аберраций хромосом, обусловленная воздействием гамма- и бета-излучения, коррелирует с величиной дозы излучения, накопленной за период работы;

в) в группе ликвидаторов последствий аварии на Чернобыльской АЭС частота нестабильных хромосомных аберраций в лимфоцитах крови не связана с величиной дозы, официально зафиксированной в документах, а зависит от времени первого въезда в зону аварии и продолжительности выполнения восстановительных работ;

г) у жителей, подвергшихся облучению в результате радиационных аварий (жители Алтайского края и жителей с.Муслюмово Челябинской области) частота дицентриков и центрических колец в лимфоцитах периферической крови коррелирует с уровнем радиоактивного загрязнения и, соответственно, величиной накопленной эффективной дозы.

Исследованы зависимости "доза-эффект" для хромосомных аберраций в лимфоцитах крови человека после облучения in vitro гамма- и бета-излучением при разных режимах и получены калибровочные кривые для определения доз радиационного воздействия по частоте дицентриков и транслокаций. Установлено, что при ретроспективной оценки доз по частоте транслокаций в диапазоне доз до 2 Гр можно не вводить поправку на снижение частоты нестабильных клеток, содержащих транслокации.

На основании анализа частоты дицентриков и центрических колец в эксперименте in vitro определен коэффициент ОБЭ бета-излучения трития, максимальное значение которого составляет 2,2 при дозе 0,03 Гр, приближаясь к значению 1,2 при дозе 1Гр.

Впервые при сравнительном анализе результатов цитогенетического обследования профессионалов г. Сарова и космонавтов установлена более высокая биологическая эффективность космического и бета-излучения излучения по сравнению с гамма-излучением в области малых доз. Коэффициент ОБЭ, рассчитанный по частоте транслокаций, для бета-излучения трития составляет 2,5, а для космического излучения - 1,9.

Количественная оценка степени радиационного воздействия, проведенная по частоте стабильных хромосомных аберраций в группах профессионалов, участников ликвидации последствий аварии на Чернобыльской АЭС и жителей загрязненных радионуклидами территорий продемонстрировала преимущество биологических методов дозиметрии в условиях аварийного облучения и при чрезвычайных ситуациях. Доза, оцененная непосредственно по реакции организма на радиационное воздействие, позволяет учесть такой важный фактор как индивидуальная радиочувствительность, что очень важно для прогноза возможных последствия облучения.

Установлена связь частоты нестабильных хромосомных аберраций в лимфоцитах крови с заболеваниями сердечно-сосудистой и нервной системы у профессионалов г.Сарова, отмечено их статистически значимое увеличение в группах с высоким уровнем цитогенетических повреждений. В группе участников ликвидации последствий аварии на Чернобыльской АЭС установлена достоверная корреляция цитогенетических показателей крови с сердечно-сосудистыми заболеваниями. При этом не выявлено взаимосвязи нестабильных хромосомных аберраций в лимфоцитах крови с заболеваниями нервной системы и органов чувств.

СПИСОК ПУБЛИКАЦИЙ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

Статьи в реферируемых журналах

1. Снигирева Г.П., Любченко П.Н., Шевченко В.A., Новицкая Н.Н., Борисова Н.M., Дубинина E.В., Mасленникова В.Г. Результаты цитогенетического обследования участников ликвидации последствий аварии на Чернобыльской АЭС через 5 лет. // Гематология и трансфузиология. -1994. - Т.39. - №3. - С.19-21.

2. Хандогина Е.К., Агейкин В.А., Зверева С.В., Марченко Л.Ф., Мутовин Г.Р., Снигирева Г.П., Ленская Р.В., Буянкин В.М., Шахтарин В.В., Акифьев А.П. Цитогенетическое обследование различных групп детей, проживающих в районах Брянской области, загрязненных в результате Чернобыльской аварии. // Радиационная биология. Радиоэкология. - 1995. - Т.35. - Вып.5. - С.618-625.

3. Шевченко В.A., Снигирева Г.П., Сусков И.И., Акаева Е.А., Елисова Т.В., Иофа Э.Л., Нилова И.Н., Костина Л.Н., Новицкая Н.Н., Сидорова В.Ф., Хазинс Е.Д. Цитогенетические эффекты у населения Алтайского края, подвергшегося воздействию ионизирующих излучений в результате ядерных взрывов на Семипалатинском полигоне. // Радиационная биология. Радиоэкология. - 1995. - Т.35. - Вып.5.- С. 588-596.

4. Снигирева Г.П., Шевченко В.А., Новицкая Н.Н. Использование FISH метода для реконструкции поглощенных доз, полученных участниками ликвидации аварии на Чернобыльской АЭС. // Радиационная биология. Радиоэкология. 1995. - Т.35.- Вып.5. - С.654-661.

5. Snigiryova G., H.Braselmann, K.Salassidis Shevchenko V., Bauchinger M. Retrospective biodosimetry of Chernobyl clean-up workers using chromosome painting and conventional chromosome analysis. // International Journal Radiation Biology. - 1997. - V.71.- N.2. - P. 119-127.

6. Bauchinger M., Salassidis K., Braselmann H., Vosilova A., Press S., Stephan G., Snigiryova G., Kozheurov V.P., Akleev A. FISH-based analysis of stable translocations in a Techa River population.// International Journal Radiation Biology. - 1998. - V. 73. - N.6. - P. 605-612.

7. Salassidis K., Braselmann H., Okladnikova N.D., Pressl S., Stephan G., Snigiryova G., Baughinger M. Analysis of symmetrical translocations for retrospective biodosimetry in radiation workers of the Mayak nuclear-industrial complex (Southern Urals) using FISH-chromosome painting. // International Journal Radiation Biology. - 1998. - V.74. - N.4. - P.431-439.

8. Федоренко Б.С., Ворожцова С.В., Герасименко В.Н., Дружинин С.В., Юдаева Л.А., Снигирева Г.П., Шевченко В.А. Цитогенетические нарушения в клетках экспериментальных животных и человека при действии ускоренных заряженных частиц и космического излучения. // Физика элементарных частиц и атомного ядра. - 1999. - Т.30. - Вып.2. - С.469-526.

...