Антиоксидантное действие геропротекторных пептидных биорегуляторов

Рис. 1. Кинетическая кривая, характеризующая Fe2+-индуцированную хемилюминесценцию липопротеинов сыворотки крови

Как было определено нами в специальных экспериментах, сами исследуемые вещества не подвергаются окислению в данных условиях, так что изменения, наблюдаемые в их присутствии, отражают их прямое действие на окисление липидного материала. Из приведенных в табл. 1 данных видно, что исследуемые соединения в разной степени влияют на окисляемость липопротеинов.

Таблица 1.

Влияние исследуемых соединений на параметры Fe2+-индуцированной хемилюминесценции липопротеинов сыворотки крови здоровых доноров (в процентах по отношению к контролю)

Название вещества	Концентрация вещества в пробе	Параметры Fe2+-индуцированной ХЛ
		h, %	ф, %	Н, %	Скорость окисления, %
Карнозин	0,5 мМ	53±6	133±8	94±6	75±10
	1 мМ	40±5	189±9	88±8	66±8
Вилон	0,5 мМ	66±6	93±10	92±7	86±6
	1 мМ	43±4	120±11	87±6	78±6
Эпиталон	0,5 мМ	69±6	116±9	94±6	83±7
	1 мМ	49±4	120±10	97±8	77±5
Везуген	0,5 мМ	54±4	100±8	94±5	92±6
	1 мМ	50±6	100±8	104±11	75±5
Пинеалон	0,5 мМ	54±4	105±10	94±9	81±5
	1 мМ	50±6	111±12,0	88±8,5	75±7

Эффект вилона и эпиталона несколько слабее эффекта карнозина, а везуген лишь незначительно снижает скорость окисления, практически не влияя на величину . В то же время, все исследованные соединения способны эффективно связывать гидроперекиси липидов дозо-зависимым способом, что отражается в снижении величины h. Полученные результаты указывают на способность исследуемых соединений препятствовать окислительному повреждению липидов. С учетом того, что исследуемые соединения не проявляют способности нейтрализовать радикальные молекулы, их эффект можно объяснить стабилизирующим влиянием на структуру липопротеинов. Эти данные указывают на то, что короткие пептиды способны осуществлять защиту надмолекулярных комплексов не по принципу антиоксидантного действия, а за счет их структурных перестроек.

Таблица 2.

Сравнение действия исследуемых соединений на уровень АФК в нейронах крыс

Используемое соединение	Флуоресценция DCFH2DA, отн. ед.	Флуоресценция DCFH2DA, % по отношению к контролю	Количество мертвых клеток, %
	-H2O2	+H2O2	-H2O2	+H2O2	-H2O2	+Н2O2
Контроль (без добавок)	21,6±2,0	158,7±14,6	100	100	9,6	15,0
Карнозин, 1 мМ	23,2±1,9	105,3±8,9*	108	66	4,3	6,5
NAC, 1 мМ	21,9±3,1	127,6±5,1	101	80	5,5	15,2
Вилон, 1 мМ	34,9±3,0*	134,5±9,1	161	84	6,4	10,2
Эпиталон, 1 мМ	144,0±9,8**	131,1±12,5	666	83	10,9	5,5
Везуген, 1 мМ	41,5±4,1*	221,7±12,5*	192	140	6,0	2,4
Пинеалон, 1 мМ	54,2±3,9*	108,6±3,0	250	68	6,5	3,1

Примечание: *р<0,005; **р<0,001 по сравнению с контролем.

Исследуемые соединения по-разному влияли на течение осмотического гемолиза эритроцитов крыс. NAC не оказывал влияния на осмотический гемолиз, что закономерно, поскольку в развитие осмотической неустойчивости мембран свободнорадикальные процессы не вовлекаются. Карнозин понижал скорость гемолиза на 35-40% уже в концентрации 0,4 мМ, что объясняется его мембранопротекторными свойствами. Все исследованные короткие пептиды проявляли двойной эффект: при концентрациях 1-2 мМ они несколько увеличивали скорость гемолиза эритроцитов крысы, а при повышении концентрации стимулирующий эффект сменялся подавлением процесса гемолиза. Сходные эффекты исследуемых соединений наблюдались и на эритроцитах человека - при концентрации, равной 3,0 мМ, исследуемые соединения повышали скорость гемолиза (особенно выраженным - в 2,5 раза по сравнению с контролем - было действие эпиталона), тогда как повышение концентрации до 5,0 мМ вызывало противоположное действие - возрастание устойчивости эритроцитов к осмотическому гемолизу. Полученные результаты указывают на проявление исследуемыми соединениями мембранопротекторных свойств, не связанных с прямой антиоксидантной активностью.

Действие коротких пептидов на нейрональные клетки мозжечка

Использование метода проточной цитометрии позволило оценить влияние исследуемых соединений на состояние гранулярных клеток мозжечка крыс и генерацию ими активных форм кислорода в условиях окислительного стресса, вызываемого перекисью водорода. Действие коротких пептидов в условиях индукции АФК проявляется различным образом (табл. 2). Прединкубация клеток с 10 мМ H2O2 в течение 190 мин вызывала увеличение внутриклеточного уровня АФК в 7 раз. В присутствии карнозина увеличение уровня АФК происходило гораздо слабее (только в 4 раза), что указывает на то, что карнозин выступает как антиоксидант прямого действия, препятствуя накоплению АФК. NAC в этой же концентрации был гораздо менее эффективен, чем карнозин. Вилон сам по себе вызывал увеличение внутриклеточного уровня АФК (в 1,6 раз по сравнению с контролем). На этом фоне, тем не менее, наблюдалось некоторое ограничение роста АФК под действием H2O2 (на 16%). Эпиталон вызывал наиболее значительное увеличение внутриклеточного уровня АФК, сравнимое с тем, что достигается перекисью водорода (в 6,6 раз по сравнению с контролем), но при этом не влиял на гибель нейронов (Рис.2). Добавление 10 мМ H2O2 на этом фоне не приводило к дополнительному росту АФК. Везуген увеличивал исходный уровень АФК в 2 раза, и на его фоне происходило дальнейшее увеличение уровня АФК в ответ на преинкубацию с 10 мМ H2O2 (в 1,4 раза). Пинеалон увеличивал исходный уровень АФК в 2,5 раза, на его фоне происходило дальнейшее увеличение уровня АФК в ответ на преинкубацию с 10 мМ H2O2 (в 2 раза), однако достигаемое значение было ниже контрольного (на 32%).

Таким образом, исследуемые короткие пептиды увеличивали продукцию АФК в клетках. На этом фоне эффективность индукции АФК перекисью водорода снижалась пинеалоном на 32%, вилоном и эпиталоном - на 20%. Везуген увеличивал индуцированный перекисью водорода уровень АФК на 40%. Приведенные данные согласуются с описанными нами ранее результатами экспериментов с ДФПГ о наличии «прооксидантной составляющей» в механизме действия исследуемых пептидов на нейрональные клетки.



Контроль

Вилон Эпиталон

Везуген Пинеалон

Рис.2 Влияние коротких пептидов на гибель нейронов мозжечка крыс

Примечание: живые клетки располагаются в нижнем левом квадранте,

мертвые - в верхнем левом квадранте.

Действие перекиси водорода на фоне вилона, везугена и пинеалона сопровождалось уменьшением количества нейронов в анализируемом гейте на 40-50%, причем доля мертвых клеток в исследуемой популяции снижалась (Рис. 2). Полученные результаты позволяют предположить, что регуляторные пептиды способны вовлекаться в механизм регуляции процессов апоптоза/некроза нейронов головного мозга в условиях индуцированного перекисного окисления липидов. При этом можно ожидать, что в условиях in vivo их эффективные концентрации при направленном действии на мозг могут быть значительно ниже, чем в модельных экспериментах.

Антигипоксические свойства коротких регуляторных пептидов Влияние коротких пептидов на устойчивость крыс к воздействию гипоксии и состояние их потомства

При воздействии на крыс острой сублетальной гипобарической гипоксии дольше всего дыхательную активность в барокамере сохраняли крысы, получавшие инъекции пинеалона. Удовлетворительные результаты были получены также при применении вилона и эпиталона. Для животных, которым вводили пинеалон и эпиталон, были характерны наименьшие значения коэффициента реституции, что свидетельствует о их лучшей адаптированности к гипоксическому воздействию. Исходя из приведенных результатов, пинеалон был выбран в качестве наиболее перспективного протектора от гипоксии, в связи с чем в следующей серии экспериментов его антигипоксические эффекты были исследованы на модели пренатальной гипобарической гипоксии. Беременные крысы по чувствительности к гипоксии были разделены на 2 группы. Крысы 1-ой группы характеризовались высокой чувствительностью к гипоксии, что проявлялось в остановке дыхания через 61-285 сек. после достижения заданного остаточного давления в барокамере. 2-я группа животных была представлена устойчивыми к гипоксии животными, сохранявшими дыхательную активность в барокамере на протяжении всего периода гипоксического воздействия. У чувствительных к гипоксии животных (группа 1) наблюдалась также потеря позы продолжительностью 140 - 340 сек. В ходе сеанса гипоксии у животных, устойчивых к гипоксии (2-я группа), потери позы не наблюдалось.

Заметный интерес представляют данные о влиянии пинеалона на активность антиоксидантных ферментов в мозге и печени устойчивых и чувствительных к гипоксии крыс. Оказалось, что в ткани мозга устойчивых к гипоксии крыс активность супероксиддисмутазы (СОД) и глутатионпероксидазы (ГП) в 2 раза выше, чем у животных, чувствительных к гипоксии (рис.3,4а). В печени же подопытных животных подобной разницы в активности антиоксидантных ферментов между двумя группами не отмечалось (Рис. 3,4б), что соответствует представлениям о том, что мозг наиболее подвержен гипоксическому воздействию. Вместе с тем, полученные нами данные отчетливо показали, что введение чувствительным к гипоксии животным пинеалона приводит к значительному повышению активности СОД в тканях мозга и печени (рис. 3а,б). Причем, в мозговой ткани он достигает уровня, сопоставимого с таковым у животных, устойчивых к гипоксии. Активность ГП под влиянием пинеалона возрастает только у крыс, чувствительных к гипоксии (рис. 4а,б). Характерно, что пинеалон не вызывает достоверных изменений в активности антиоксидантных ферментов в мозге и печени крыс, устойчивых к гипоксии. Полученные данные свидетельствуют о том, что у устойчивых к гипоксии крыс высокая активность наиболее значимых антиоксидантных ферментов СОД и ГП обеспечивает защиту от гипоксического воздействия и не нуждается в дополнительной стимуляции со стороны пинеалона и, возможно, других коротких регуляторных пептидов.

Рис. 3 а. Влияние пинеалона на активность супероксиддисмутазы

в мозге чувствительных и устойчивых к гипоксии крыс.

* - отличия между животными чувствительными к гипоксии и животными, чувствительными к гипоксии, получавшими пинеалон (p<0,01);

** - отличия между чувствительными и устойчивыми к гипоксии животными (p<0,001)

Рис. 3 б. Влияние пинеалона на активность супероксиддиммутазы в печени чувствительных и устойчивых к гипоксии крыс.

* - отличия между животными чувствительными к гипоксии и животными чувствительными к гипоксии, получавшими пинеалон (p<0,05).

Рис.4 а. Влияние пинеалона на активность глутатиопероксидазы в мозге чувствительных и устойчивых к гипоксии крыс.

Примечание: * - отличия между животными чувствительными к гипоксии и животными чувствительными к гипоксии, получавшими пинеалон (p<0,05);

** - отличия между чувствительными и устойчивыми к гипоксии животными (p<0,01)

Рис. 4 б. Влияние пинеалона на активность глутатиопероксидазы в печени чувствительных и устойчивых к гипоксии крыс.

Численность потомства от животных, перенесших гипоксию, составляла 9±3 особи,

а в группе, получавшей пинеалон - 14±2 (p<0,05), что приближалось к нормальному физиологическому уровню, типичному для интактных животных. На 12-й день часть подросших животных была декапитирована, и их мозжечок был использован для цитометрического анализа. Оставшихся животных в возрасте 4 недель использовали для оценки поведения в тесте «открытое поле». При этом в течение 3 мин поминутно регистрировали горизонтальную активность животных (ГА) - количество пересеченных квадратов, вертикальную активность (ВА) - количество стоек, количество обследованных норок, характеризующее исследовательскую активность животных, число эпизодов груминга, выход в центр поля, количество болюсов, характеризующие тревожность и эмоциональную активность животных. Потомство животных, разделенное по реакции их матерей на гипобарическую гипоксию в период беременности на 2 разные группы - чувствительную

к гипоксии и устойчивую к ней анализировали по отдельности. Данные представлены в таблице 3. У потомства, как чувствительных, так и устойчивых к гипоксии крыс, получавших пинеалон, и ГА, и ВА были достоверно выше, чем у потомства крыс подвергшихся гипоксии и не получавших этого пептида. При этом у потомства, полученного от устойчивых к гипоксии крыс, ГА была несколько выше, чем от чувствительных к гипоксии крыс, поэтому эффект пинеалона проявлялся более выражено в группе чувствительных к гипоксии животных. На исследовательскую активность (обследование норок) достоверного влияния пинеалон не оказывал.

Таблица 3

Физиологические параметры, характеризующие поведение животных в тесте «открытое поле»

Параметр	Чувствительные к гипоксии (n=6)	Чувствительные к гипоксии + пинеалон (n=11)	Устойчивые к гипоксии (n=9)	Устойчивые к гипоксии + пинеалон (n=12)
ГА	36±6,9	53±5,1*	45±3,3	57±3,3*
ВА	2±0,8	5±0,8*	2±0.6	6±1,1*
Норковая активность	1,5±0,5	1,5±0,6	2,7±0,7	3±0,5
Число эпизодов груминга	1,5±0,8	3,5±1,2	8,7±2,9	10±2,4
Кол-во болюсов	2,7±0,4	1,8±0,6	2,0±0,7	4,1±0,8
Число выходов в центр поля	0,01±0,1	0,27±0,1	0,17±0,1	0,13±0,1

Примечание:* р<0,05 - характеризует достоверность по отношению к группе гипоксических животных, не леченых пинеалоном.

У потомства чувствительных к гипоксии крыс пинеалон заметно увеличивал частоту груминга и количество выходов в центр открытого поля, хотя это увеличение так же как изменение количества болюсов (актов дефекации) было недостоверным вследствие разброса показателей индивидуальной реакции животных. В противоположность этому, его действие на потомство устойчивых к гипоксии животных не проявлялось.

Действие пинеалона на нейрональные клетки мозжечка потомства крыс,подвергнутых воздействию гипобарической гипоксии Инкубация нейронов с перекисью водорода (20 мМ в течение 20 мин) или с NMDA (1 мМ в течение 40 мин) вызывала резкое возрастание гибели нейрональных клеток (Рис. 5). При этом в суспензии нейронов крысят, рожденных от самок, подвергнутых гипоксии, но не леченых пинеалоном, наблюдалось двукратное увеличение гибели клеток, вызываемое перекисью водорода, в то время как для нейронов, выделенных из мозжечка потомства самок, получавших пинеалон, эта величина не превышала 40%. Исходный уровень мертвых нейронов в первичной культуре также был почти вдвое ниже в случае нейронов, выделенных из мозжечка животных, выделенных из мозжечка леченых пинеалоном крыс. Менее выраженные, но аналогичные изменения наблюдались при инкубации нейронов мозжечка с NMDA. Таким образом, клетки, выделенные из мозжечка животных, рожденных от крыс, получавших пинеалон, демонстрируют большую устойчивость к окислительному стрессу.

Рис. 5. Доля мертвых клеток в первичной культуре нейронов мозжечка крыс при инкубации с перекисью водорода (слева) или с NMDA (справа).

Инкубация с 20 мМ перекиси водорода - 20 мин, с 1 мМ NMDA - 40 мин

Рис. 6. Уровень активных форм кислорода в первичной культуре нейронов при инкубации с перекисью водорода (слева) или NMDA (справа).

Обозначения те же, что на Рис.5.

Исследование уровня АФК в тестируемых клетках обнаружило, что гипоксия приводит к резкому (почти в 3 раза) увеличению исходного (стационарного) уровня АФК. На этом фоне индукция окислительного стресса у нейронов с помощью неспецифического фактора (перекиси водорода) вызывает прирост свободных радикалов, который мало отличается в обеих группах гипоксических животных (получавших и не получавших пинеалон).

В то же время, по реакции на NMDA нейроны этих животных существенно различались. На фоне высокого стационарного уровня АФК NMDA не вызывал дополнительного роста свободных радикалов в нейронах потомства гипоксических крыс, как это наблюдается в случае интактных нейронов, а в нейронах потомства гипоксических крыс, леченных пинеалоном, даже понижал его (Рис. 6). Этот факт свидетельствует о том, что пинеалон защищает нейрональные клетки от экзайтотоксического действия NMDA.

Влияние коротких пептидов на клетки нейробластомы человека при гипоксии

В данном исследовании при инкубации клеток нейробластомы в условиях гипоксии было обнаружено снижение уровня мРНК неприлизина (НЕП) и инсулиндеградирующего фермента (ИДФ), участвующих в деградации в-амилоидного пептида, на 25-30% и 30-35%, соответственно (Рис. 7, 8)

Рис. 7. Уровень содержания мРНК металлопептидазы НЕП в клетках нейробластомы человека NB7, культивируемых в нормоксических или гипоксических условиях.

Примечание: Здесь и на Рис.8 по оси ординат - % от контроля. Содержание мРНК в контрольных клетках принято за 100%. Нормоксия: 1 - контроль (без введения агентов), 2 - эпиталон 50 нМ, 3 - вилон 50 нМ. Гипоксия: 4 - контроль (без введения агентов), 5 - эпиталон 50 нМ, 6 - вилон 50 нМ, 7 - ЭГКГ 25 мкг/мл. * - p < 0.05 по сравнению с контролем;

# - p < 0.05 по сравнению с гипоксией.

Рис. 8. Уровень содержания мРНК ИДФ в клетках нейробластомы человека NB7, культивируемых в нормоксических или гипоксических условиях.

При добавлении в инкубационную среду 50 нМ эпиталона он препятствовал снижению уровня экспрессии ИДФ и НЕП, вызванному гипоксией, а в случае НЕП приводил даже к увеличению его экспрессии на 30%. В аналогичных условиях эксперимента вилон не оказывал влияния на уровень экспрессии ИДФ при гипоксии, но предотвращал подавление экспрессии НЕП. Изучение влияния вилона и эпиталона на уровень экспресии НЕП и ИДФ в клетках нейробластомы человека NB7 при нормоксии не выявило статистически достоверных изменений в уровне содержания их мРНК, хотя в случае мРНК ИДФ наблюдалось незначительное (10-15%) его повышение (Рис. 7).

Для сравнения нами было исследовано действие антиоксиданта экстракта зеленого чая, эпигаллокатехин-3 галлата (ЭГКГ) на уровень экспрессии мРНК НЕП и ИДФ в клетках нейробластомы NB7 в условиях гипоксии. Известно что, ЭГКГ вызывает увеличение экспрессии НЕП на уровне белкового продукта в клетках нейробластомы SH-SY5Y [Yasojima K. еt al., 2005]. Оказалось, что ЭГКГ также способен предотвращать снижение уровня экспрессии НЕП в нашем эксперименте, однако он был менее эффективен в отношении ИДФ (Рис.7, 8). В нормоксических условиях эффект ЭГКГ на содержание мРНК ИДФ был также слабо выраженным (117±9%).

Анализируя полученные нами данные, можно заключить, что из всех исследуемых препаратов является оптимальным по величине антигипоксического эффекта в отношении уровня экспрессии НЕП и ИДФ, а вилон, не влияя на экспрессию НЕП, несколько уступает ЭГКГ в стимулировании уровня экспрессии ИДФ.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Экспериментами, проведенными in vivo установлено, что короткие пептиды (эпиталон, кортаген и вилон) при введении животным (крысы линий ЛИО, Wistar мыши линии СВА) оказывают антиоксидантное действие, которое выражается в снижении интенсивности свободнорадикальных процессов (перекисного окисления липидов и окислительной модификации белков). Антиоксидантные свойства коротких пептидов проявляются в экспериментах как на интактных половозрелых животных, так и особенно наглядно при старении или действии экстремальных факторов внешней среды (гипоксия, гипокинезия). Наиболее сильным антиоксидантом является эпиталон, слабее всего антиоксидантные свойства выражены у вилона.

Модельные эксперименты in vitro показали, что, наряду с эпиталоном и вилоном, антиоксидантным действием обладают относящиеся к категории биологических добавок пинеалон и везуген. Они также как эпиталон и вилон при применении в концентрациях до

5 мМ не взаимодействуют со стабильным радикалом ДФПГ, т.е. не относятся к группе антиоксидантов прямого действия, таких как аскорбиновая кислота и тиоловые соединения. Вместе с тем, исследуемые пептиды, особенно эпиталон и вилон, оказывали мембраностабилизирующее действие, подавляя в той или иной степени окисляемость липопротеиновых комлексов плазмы крови и препятствуя осмотическому гидролизу эритроцитов. Мембранопротекторные свойства коротких пептидов были выявлены также и в экспериментах in vivo при воздействии на животных гипокинезии и гипобарической гипокинезии, что выражалось в снижении под влиянием эпиталона и вилона уровня содержания внеэритроцитарного гемоглобина и суммарной пероксидазной активности в плазме крови. Установлено также стимулирующее влияние исследуемых пептидных препаратов на стационарный уровень активных форм кислорода в изолированных гранулярных клетках мозжечка, наряду со снижением доли погибших клеток в популяции нейронов.

Изучение в тесте «открытое поле» поведенческой активности и характеристики когнитивных функций у потомства самок крыс, подвергшихся во втором триместре беременности воздействию острой сублетальной гипобарической гипоксии, выявило защитное влияние пинеалона на исследуемые физиологические показатели. Известно, что одной из значимых причин развития хронической внутриутробной гипоксии плода и фетоплацентарной недостаточности на поздних сроках беременности является гипергомоцистеинемия. При этом наблюдается картина генерализованной микроангиопатии, проявляющейся в виде позднего токсикоза (гестоза), следствием которого является тяжелая нефропатия и развитие аутоиммунных процессов у матери и снижение функциональных резервов всех жизнеобеспечивающих систем новорожденного [Vollset S.E., 2000, Wotherspoon F., Laight D., 2003]. Проведенные нами исследования показали, что ряд коротких пептидов (пинеалон, карнозин) способны осуществлять защиту потомства от токсического действия гипергомоцистеинемии (неопубликованные данные). Обнаружено, что при введении этих пептидов беременным самкам наблюдается увеличение среднего веса потомства, выращенного в условиях пренатальной гипергомоцистеинемии до контрольного уровня (22 - 25 г.). Оценка пространственной ориентации крысят, т.е. способности к обучению в тесте Морриса (поиск платформы при передвижении в бассейне) выявила некоторое улучшение под влиянием исследуемых пептидов возможностей их обучения и запоминания, нарушенных в результате перенесенной пренатальной гипергомоцистеинемии.

В экспериментах с нейронами, выделенными из мозжечка животных, рожденных от крыс, получавших пинеалон, установлены нейропротекторные свойства коротких пептидов, обуславливающие устойчивость клеток к окислительному стрессу, индуцируемому перекисью водорода или лигандом глутаматных рецепторов N-метил-D-аспартатом. Поскольку не было обнаружено аналогии между уровнем смертности нейронов и ростом АФК при индукции окислительного стресса, можно заключить, что защита клеток от гибели осуществляется пинеалоном не путем прямого ограничения продукции АФК. Возможно, это обусловлено механизмом, связанным с повышением устойчивости мембран, как это наблюдалось нами ранее в модельных экспериментах с осмотическим гемолизом эритроцитов, индуцируемым в присутствии пинеалона. Нельзя исключить, что эффект пинеалона реализуется через увеличение устойчивости системы антиоксидантных ферментов, как это установлено нами для самок беременных крыс.

Полученные нами данные позволяют предположить, что синтетические пептиды эпиталон, и в меньшей степени вилон, обладают нейропротекторыми антигипоксическими свойствами в отношении уровня экспрессии таких металлопептидаз, как НЕП и ИДФ. Известно, что при старении и ишемии мозга также наблюдается снижение уровня экспрессии НЕП и ИДФ в коре и гиппокампе [Caccamo A. et al., 2005]. В связи с этим, можно полагать, что эпиталон и вилон способны оказывать защитный нейропротекторный эффект на нервные клетки этих структур путем стабилизации активности этих ферментов, играющих важную роль в катаболизме амилоидного пептида, и препятствовать его накоплению в токсических для клеток концентрациях.

Приведенные в работе результаты исследований об антиоксидантном действии исследуемых пептидных препаратов, которое проявляется на различных уровнях, начиная от клеток до организма в целом, в зрелом возрасте и при старении, в условиях действия экстремальных факторов внешней среды, свидетельствуют о важной роли коротких пептидов в механизмах регуляции гомеостаза при старении.

ВЫВОДЫ

1. В сыворотке крови и печени старых крыс (24 мес.) уровень генерации АФК по сравнению с молодыми животными (3 мес.) снижается, что сопровождается интенсификацией процесса окислительной модификации белков, некоторым увеличением образования продуктов ПОЛ и значительным ингибированием активности СОД. В мозгу не выявлено существенных возрастных изменений показателей свободнорадикального окисления.

2. Введение половозрелым крысам эпиталона и кортагена (2,5 - 10 мкг/кг массы) приводит к снижению уровня содержания продуктов ПОЛ и окислительной модификации белков в сыворотке крови и коре головного мозга, которому сопутствует подавление общей антиокислительной активности. Антиоксидантное действие эпиталона особенно наглядно проявляется в экспериментах на старых (24 мес.) животных, у которых при его введении почти вдвое повышается активность СОД коры головного мозга.

3. Сравнительное исследование влияния эпиталона и вилона на свободнорадикальные процессы у 18 -мес. мышей линии СВА показало, что введение эпиталона, в отличие от вилона, приводит к заметному снижению интенсивности свободнорадикальных процессов в крови и тканях мышей CBA; при этом он оказывает преимущественное влияние на начальные этапы ПОЛ (уровень ДК) в печени и сыворотке крови и, напротив, его терминальную стадию (уровень ШО) в головном мозгу. Эффекты эпиталона в большинстве случаев сопоставимы с действием мелатонина.

4. Предварительное введение крысам эпиталона и вилона (2,5 - 10 мкг/кг массы) перед началом сеанса гипокинезии или гипоксии способствует нормализации свободнорадикальных процессов в плазме крови и коре мозга крыс благодаря антиоксидантным и мембраностабилизирующим свойствам коротких пептидов, которые у вилона выражены гораздо слабее, по сравнению с эпиталоном.

5. При определении прямой антиоксидантной активности тестируемых соединений вилон и эпиталон не проявляют способности к взаимодействию со стабильным свободным радикалом 1,1`-дифенилпикрилгидразилом, что позволяет классифицировать их как соединения, не обладающие прямой антиоксидантной активностью.

6. Исследование индуцированного окисления липопротеинов плазмы крови человека показало, что короткие пептиды способны защищать липопротеиновые комплексы от Fe-индуцированного окисления, причем вилон и эпиталон обеспечивают заметное увеличение резистентности к окислению, а везуген и пинеалон существенно снижают скорость окислительного процесса.

7. Вилон, везуген, эпиталон и пинеалон примерно в равной степени оказывают мембраностабилизирущее влияние, подавляя осмотический гемолиз эритроцитов крысы и человека, хотя этот защитный эффект проявляется лишь при высоких

8. (5 мМ) концентрациях пептидных препаратов, протекторная активность которых была приблизительно равноценной.

9. Вилон, везуген и пинеалон повышают стационарный уровень активных форм кислорода в изолированных гранулярных клетках мозжечка на 61-155%, на этом фоне перекись водорода не только не вызывает роста внутриклеточного уровня АФК, но и приводит к понижению уровня радикалов в нейронах. При этом эти вещества, подобно карнозину, вызывают уменьшение доли мертвых клеток в популяции исследуемых нейронов. Эпиталон вызывал наибольшее увеличение уровня АФК в нейронах (до 666%), хотя не влиял на гибель нейронов.

10. Введение вилона, везугена, эпиталона, и пинеалона в дозе 10 мкг/кг массы самкам крыс перед созданием гипобарической гипоксии, оказывает антигипоксическое действие на животных. Среди исследуемых пептидов наиболее эффективным является пинеалон, введение которого повышает устойчивость животных к гипоксии и обеспечивает частичную защиту от вызываемого ею окислительного стресса. Это проявляется в повышении активности антиоксидантных ферментов (СОД и глутатионпероксидазы) в мозгу и печени чувствительных к гипоксии крыс.

11. Введение пинеалона в дозе 10 мкг/кг массы беременным крысам после сеанса гипобарической гипоксии способствует увеличению численности потомства и обеспечивает его защиту от последствий гипоксической атаки развивающегося мозга. Защитный эффект пинеалона выражается в улучшении показателей поведения крысят в тесте «открытое поле», а также в увеличении устойчивости выделенных из их мозжечка нейронов к окислительному стрессу, индуцируемому перекисью водорода или N-метил-D-аспартатом.

12. Эпиталон и в меньшей степени вилон оказывают нейропротекторное действие, препятствуя снижению уровня экспрессии металлопептидаз неприлизина инсулиндеградирующего фермента в клетках нейробластомы человека NB7 в условиях гипоксии. Это позволяет рассматривать исследуемые короткие пептиды в качестве перспективных нейропротекторных соединений, препятствующих накоплению в-амилоида в нервных клетках.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Принимая во внимание экспериментальные данные об антиоксидантных свойствах эпиталона и других коротких пептидов, целесообразно провести клинические испытания их в качестве антиоксидантных геропротекторных препаратов.

2. Исходя из полученных результатов об антигипоксическом и нейропротекторном действии пинеалона и везугена, целесообразно использовать их в качестве биорегуляторов, способствующих профилактике развития возрастной патологии и ускоренного старения.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРЦИИ

Статьи в журнале по перечню ВАК Министерства образования и науки Российской Федерации:

1. Влияние пептидов вилон и эпиталон на уровень экспрессии неприлизина и инсулин-деградирующего фермента в клетках нейробластомы человека в норме и при гипоксии / Л.С. Козина, Е.Г. Кочкина, Н.Н. Наливаева, Н.Д. Беляев,

2. Э. Тернер, А.В. Арутюнян// Нейрохимия. - 2008. - Т.25, № 1 - 2. - С. 82 - 85.

3. Влияние пептидных препаратов эпифиза на пролиферативные процессы в органотипической культуре преоптической области гипоталамуса / Ю.П. Милютина, Л.С. Козина, А.В. Арутюнян, Н.И Чалисова., В.В. Лесняк // Успехи геронтологии, 2007. - Т. 20. - № 4. - С. 61 - 63.

4. Изучение антиоксидантных и мембранопротекторных свойств коротких пептидов в модельных экспериментах/ Л.С. Козина, С.Л. Стволинский, Т.Н. Федорова, Е.Р. Булыгина, Е.С. Арзуманян, А.В. Арутюнян, В.Х. Хавинсон//Вопр. биол., мед. и фармацевт. химии. - 2008, -№ 2. - С.

5. Козина Л.С. Исследование антигипоксических свойств коротких пептидов/Л.С. Козина//Успехи геронтологии. - 2008. - Т.21. - , № 1. - С. 61 - 67.

6. Козина Л.С. Антиоксидантное действие пептидных препаратов эпифиза и мелатонина/ Л.С. Козина// Вест. Санкт-Петербургской государственной медицинской академии им. И.И. Мечникова.- 2007.- Т. 8, №1 - С. 140 - 143.

7. Козина Л.С. Влияние биологически активных тетрапептидов на свободнорадикальные процессы/ Л.С. Козина//Бюлл. эксперим. биологии и медицины. - 2007. - Т. 143, № 6. - С. 690 - 692.

8. Оценка биологической активности регуляторных пептидов в модельных экспериментах in vitro// Л.С. Козина, А.В. Арутюнян, С.Л. Стволинский, В.Х. Хавинсон//Успехи геронтологии. - 2008. - Т.21, № 1. - С. 68 - 73.

9. Пренатальная гипергомоцистеинемия как модель окислительного стресса мозга/А.В. Махро, А.П. Машкина, О.А. Соленая, О.А. Трунова, Л.С. Козина, А.В. Арутюнян, Е.Р. Булыгина//Бюлл. эксперим. биологии и медицины.- 2008.- Т.146 , № 7 . - С. 37 - 39.

10. Регуляторные пептиды защищают нейроны мозга от гипоксии в экспериментах in vivo/ Л.С. Козина, А.В. Арутюнян, С.Л. Стволинский, М.С. Степанова, В.Х. Хавинсон// Докл. акад. наук, 2008, - т. 418, №3, - с.419 - 422.

Монографии

11. Пептидная регуляция адаптации организма к стрессорным воздействиям/ А.В. Лысенко, А.В. Арутюнян, Л.С. Козина. - СПб : ВМедА, 2005. -207 с.

Статьи

12. Антиоксидантные механизмы стресс- и геропротекторных эффектов дельта-сон индуцирующего пептида и его аналогов у крыс разного возраста /А.В. Лысенко, Л.С. Козина, Р.Г. Шейхова, А.А. Алиев//Новые лекарственные препараты. - 2007.- Т. 34, № 3. - С. 44 -56.

13. Арутюнян А.В. Антиоксидантное действие коротких пептидов при старении и экстремальных воздействиях/А.В. Арутюнян, Л.С. Козина// Матер. докл. Международной конф. «Новые информационные технологии в медицине, биологии, фармакологии и экологии» Украина, Крым, Ялта-Гурзуф, 31 мая - 9 июня 2007 г.

14. - С. 409-411.

15. Арутюнян А. В. Модулирующее влияние геропротекторных пептидов эпифиза, обладающих антиоксидантными свойствами, на репродуктивную систему/

16. А.В. Арутюнян, Л.С. Козина, Хавинсон В.Х.// Международный симпозиум

17. « Молекулярные механизмы регуляции функции клетки» 12-16 сентября 2005г., Тюмень, 2005. - С. 209 - 211.

18. Арутюнян А.В. Хронобиология регуляции репродуктивной функции при старении / А.В. Арутюнян, Л.С. Козина, Ю.П. Милютина//Перспективные направления использования лабораторных приматов в медико-биологических целях: Матер. Всеросс. научн. конф. - Сочи-Адлер, 2006. - С. 276 -281.

19. Влияние эпиталона на возрастные изменения эндокринной функции пинеальной железы и активность ферментов антиоксидантной защиты у самок макак резусов/ А. В. Шмалий, Н. Д. Гончарова, Л.С. Козина, А.А. Венгерин// Перспективные направления использования лабораторных приматов в медико-биологических целях: Матер. Всеросс. научн. конф. - Сочи-Адлер, 2006. - С. 293 -298.

20. Козина Л.С. Влияние интенсивности окислительных процессов в организме на продолжительность жизни/ Л.С. Козина, А.В. Арутюнян//«Актуальные проблемы геронтологии и гериатрии» Сб. трудов юбилейной научно-практической конференции «ХХ лет первой в России кафедре гериатрии» (под ред. проф. А.Л. Арьева) СПб МАПО, 27-28 апреля 2006 г., СПб.-2006- С. 272-278.

21. Козина Л.С. Исследование антиоксидантных свойств коротких пептидов в модельных экспериментах in vitro/ Л.С. Козина, А. В. Арутюнян, Е.Л. Стволинский // Матер. 5-ой национальной научно-практической конференции с международным участием «Активные формы кислорода, оксида азота, антиоксиданты и здоровье человека», 18-22 сентября, 2007, Смоленск, 2007. С. 334-337.

22. Козина Л.С. Роль пептидов в регуляции свободнорадикальных процессов при старении/ Л.С. Козина, А.В. Арутюнян, В.Х. Хавинсон //Матер. Международной научной конференции «Свободные радикалы, антиоксиданты и старение», 2-3 ноября 2006 г., Астрахань. - 2006. - С. 15-20.

23. Kozina L.S. Antioxidant properties of geroprotective of the pineal gland/ L.S.Kozina, A.V. Arutjunyan, V.Kh. Khavinson// Arch. Gerontol. Geriatr. Suppl. 1. - 2007. - P. 213-216.

24. The effects of vilon and epithalon peptides on the expression of neprilysin and insulin - degrading enzyme in human neuroblastoma NB7 cells under normal and hypoxic conditions /L.S. Kozina, E.G. Kochkina, N.N. Nalivaeva, N.D. Belyaev, A. J. Turner, A.V. Arutjunyan // Neurochemical. Journal.-2008. - Vol.2. No.1-2. P. 82 - 85.

Тезисы

25. Антигипоксическое действие коротких регуляторных пептидов/Л.С. Козина, А.В. Арутюнян, С.Л. Стволинский, В.А. Арутюнов, М.С. Степанова// Матер. III научно-практической геронтологической конференции с международным участием, посвященная памяти Э.С. Пушковой (Пушковские чтения), 8-9 ноября 2007 г., С-Петербург. - 2007. - С. 176.

26. Антиоксидантные и мембранопротекторные свойства коротких пептидов в экспериментах in vitro /Л.С. Козина, А.В. Арутюнян, С.Л. Стволинский, В.Х. Хавинсон// Матер. III научно-практической геронтологической конференции с международным участием, посвященная памяти Э.С. Пушковой (Пушковские чтения), 8-9 ноября 2007 г., С-Петербург. - 2007. - С. 177.

27. Антиоксидантные свойства геропротекторных пептидов эпифиза/ А.В. Арутюнян, Л.С. Козина, Т.В. Харитонова, Ю.П. Милютина // 4-й Национальный конгресс геронтологов и гериатров Украины «Проблемы старения и долголетия», Киев. - 2005. - Т. 14. - С. 71-72.

28. Антиоксидантные свойства эпиталона и его структурных аналогов / Козина Л.С., А.В. Арутюнян, В.М. Прокопенко, Т.И. Опарина, Ю.П. Милютина// Тез. докл. VII Всероссийской конференции с международным участием «Биоантиоксидант», 25-26 ноября 2006 г., Москва. - 2006, С. 47 - 48.

29. Арутюнян А.В. Антиоксидантные свойства геропротекторных пептидных препаратов эпифиза и вилочковой железы /А.В. Арутюнян, Л.С. Козина// Всероссийской конференции «Перспективы фундаментальной геронтологии» 25-26 ноября 2006 г., Санкт-Петербург. - 2006. - С. 11-12.

30. Арутюнян А.В. Влияние геропротекторных пептидов на свободнорадикальные процессы/А.В. Арутюнян, Л.С. Козина// Тез. докл. 4-ой Крымской конференции «Окислительный стресс и свободнорадикальные патологии» Судак, Крым, Украина, 2008. - С. 7- 8.

31. Арутюнян А.В. Нейропротекторное действие пептидных биорегуляторов при гипоксии/А.В. Арутюнян, Л.С. Козина, В.А. Арутюнов// Конференция с международным участием «Нейрохимические механизмы формирования адаптивных и патологических состояний мозга» Санкт-Петербург-Колтуши, 10-12 сентября 2008 г., Тез. докл. СПб.

32. - С. 11-12.

33. Арутюнян А.В. Окислительная модификация белков и старение/ А.В. Арутюнян, Л.С. Козина, В.В. Лесняк//Сб. тез. конф/«Проблемы геронтологии и гериатрии», 20-22 апреля. 2006г., Сыктывкар. 2006. С. 68.

34. Арутюнян А.В. Полифункциональное антиоксидантное действие мелатонина/ Арутюнян Л.С., Козина Л.С. //Тез. докл. Всерос. научно-практической конференция

35. «50 лет мелатонину: Итоги и перспективы исследований» - Санкт-Петербург, 24-25 апреля 2008. - С. 4 - 5.

36. Влияние пептидов на адаптационные возможности организма и уровень тревожности/ А.В. Лысенко, Е.В. Моргуль, Р.Г. Шейхова, Л.С. Козина, А.В. Арутюнян//Тез. докл. ХХ съезда физиологического общества им. И.П. Павлова, 4-8 июня 2007 г., Москва. - 2007. - С. 315.

37. Возрастные аспекты стресспротекторной эффективности коротких пептидов при гипоксии /А.В. Лысенко, Козина Л.С., Руденко Т.Н.. Арутюнян А.В.// Матер. 4-й Российской конференции «Гипоксия: механизмы, адаптация, коррекция» (с международным участием), 12-14 октября 2005 г., Москва. - 2005. - С. 70-71.

38. Возрастные особенности показателей стрессоустойчивости у работников железнодорожного транспорта с различным уровнем тревожности/Т.А. Финоченко, А.В. Лысенко, В.А. Мамченко, Л.С. Козина// Матер. Межрегиональной научно-практической конференции «Медицинские проблемы пожилых», 20 ноября 2007 г., Йошкар-Ола, - 2007. - С. 58-60.

39. Гипоталамическая регуляция репродуктивной функции и ее нарушение под влиянием нейротоксических ксенобиотиков/ А.В. Арутюнян, М.Г. Степанов, А.В. Кореневский, Л.С. Козина//Сб. научных трудов I съезда физиологов СНГ, Сочи, Дагомыс, 19-23 сентября 2005. - Москва.- 2005. - Т.1. - С.116.

40. Защитная роль мелатонина и пептидных препаратов эпифиза при воздействии экотоксикантов на репродуктивную функцию/А.В. Арутюнян, Ю.П. Милютина, А.В. Кореневский, М.Г. Степанов, Л.С. Козина, В.Х. Хавинсон// Матер. Конгресса «Экотоксины и здоровье», 1-4 июля 2008, Санкт-Петербург. Вестник Российской Военно-медицинской академии, 2008, № 3 (23) Приложение 2.Часть I. - С. 65.

41. Захарченко И.В. Адаптивное значение возрастных изменений углеводного обмена в печени при иммобилизационном стрессе/ И.В.Захарченко, Л.С. Козина//Матер. конф. «Забота, помощь, милосердие», 21-24 марта 2007г., С-Петербург, 2007. С. 66-67.

42. Кириченко И.М. Зависимость результатов ангиографии коронарных артерий у лиц пожилого и старческого возраста от показателей липидного обмена и внутрисосудистой активации тромбоцитов / И.М. Кириченко, Л.С. Козина// Всероссийской конференции «Перспективы фундаментальной геронтологии» 25-26 ноября 2006 г., Санкт-Петербург. - 2006. - С. 53-54.

43. Кириченко И.М. Зависимость результатов ангиографии коронарных артерий от наличия инфаркта миокарда в анамнезе у пациентов пожилого и старческого возраста /И.М. Кириченко, Л.С. Козина //Матер. IV научно-практической конференции «Общество, государство и медицина для пожилых и инвалидов», 21-22 мая 2007г., Москва, 2007. С. 51.

44. Кириченко И.М. Зависимость результатов ангиографии коронарных артерий от индекса массы тела у пациентов пожилого и старческого возраста/ И.М. Кириченко, Л.С. Козина, К.Л. Козлов //Матер. конф. «Забота, помощь, милосердие», 21-24 марта 2007г., С-Петербург, 2007. С. 66-67.

45. Козина Л.С. «Антигипоксические эффекты коротких пептидов»/ Л.С. Козина, А.В. Лысенко// Матер. XII Международного симпозиума «Эколого-физиологические проблемы адаптации», 30-31 января 2007 г., Москва. - 2007. - С. 235-236.

46. Козина Л.С. Влияние вилона и эпиталона на процессы свободнорадикального окисления при старении у мышей линии CBA /Л. С. Козина, А.В. Арутюнян//Матер. III Всесоюзной научно-практической конф. «Общество, государство и медицина для пожилых», 25-26 мая 2006г., Москва. - 2006. - С. 53.

47. Козина Л.С. Возрастная динамика показателей свободно-радикальных процессов и антиоксидантной системы / Л.С. Козина, В.В. Лесняк //«Актуальные проблемы геронтологии и гериатрии» Сб. трудов юбилейной научно-практической конференции «ХХ лет первой в России кафедре гериатрии» (под ред. проф. А.Л. Арьева) СПб МАПО, 27-28 апреля 2006 г., СПб.-2006- С. 288-289.

48. Козина Л.С. Возрастные изменения в интенсивности биорадикальных процессов при развитии сердечно-сосудистой патологии/Л.С. Козина, Т.В. Харитонова//Матер. III научно-практической геронтологической конференции с международным участием, посвященная памяти Э.С. Пушковой (Пушковские чтения), 8-9 ноября 2007 г.,

49. С-Петербург.- 2007. - С. 101-102.

50. Козина Л. С. Возрастные изменения перекисного окисления белков эритроцитов и плазмы крови/Л. С. Козина, А.В. Арутюнян// Матер. научно-практической конф. «Пожилой больной» Москва, 2004. - ж. Клиническая геронтология. - Т.10, № 9. - С. 76.

51. (нет ксерокса).

52. Козина Л.С. Возрастные особенности процессов свободнорадикального окисления в печени крыс при иммобилизационном стрессе/Л.С Козина, И.В. Захарченко //Матер. конф. «Забота, помощь, милосердие», 21-24 марта 2007г., С-Петербург, 2007. С. 67.

53. Козина Л.С. Изучение возрастных изменений в интенсивности биорадикальных процессов при развитии сердечно-сосудистой патологии/ Л.С. Козина, Т.В. Харитонова// 4-я национальная научно-практическая конференция с международным участием. «Активные формы кислорода, оксид азота, антиоксиданты и здоровье человека» Смоленск, Россия, 26-30 сентября 2005 г., Смоленск, - 2005. - С. 394-395.

54. Козина Л.С. Изучение прямого антиоксидантного действия коротких пептидов / Л.С. Козина, С.Л. Стволинский, А.В. Арутюнян// Тез. докл III Российского симпозиума «Белки и пептиды», 16 - 21 сентября 2007 г., Пущино. 2007. - С. 121-122.

55. Козина Л.С. Исследование антиоксидантных свойств коротких пептидов в модельных экспериментах in vitro/Л.С. Козина, А.В. Арутюнян, С.Л. Стволинский//5-я национальная научно-практическая конференция с международным участием. «Активные формы кислорода, оксид азота, антиоксиданты и здоровье человека» Смоленск, Россия, 18-22 сентября 2007 г., Смоленск. - 2007. - С. 334-335.

56. Козина Л.С. Регуляция свободнорадикальных процессов пептидными препаратами эпифиза при старении/ Л.С. Козина, А.В. Арутюнян //Сб. докл.VII Международный симпозиум «Биологические механизмы старения», 24-27 мая 2006 г., Харьков, Украина. 2006. - С. 30 - 31.

57. Козина Л.С. Роль возрастных изменений функциональной активности митохондрий в развитии сердечно-сосудистой патологии /Л.С. Козина, Т.В. Харитонова, И.М. Кириченко// Всероссийской конференции «Перспективы фундаментальной геронтологии» 25-26 ноября 2006 г., Санкт-Петербург. - 2006. - С. 59-60.

58. Козина Л.С. Роль свободнорадикальных процессов в развитии атеросклероза/ Л.С. Козина, Т.В. Харитонова, А.В. Арутюнян//Сб. научных трудов «Актуальные вопросы внутренних болезней» СПб государственная медицинская акад. им. И.И. Мечникова, Санкт-Петербург, 2006. - С. 60 - 61.

59. Козина Л. С. Роль пептидов эпифиза в регуляции свободнорадикальных процессов при старении/Л. С. Козина, А.В. Арутюнян// Матер. научно-практической конф. «Пожилой больной» Москва, 2004. - ж. Клиническая геронтология. - Т.10, № 9. - С. 78.

60. Козина Л.С. Экспериментальное изучение влияния геропротекторных пептидов эпифиза на антиоксидантную систему /Л. С. Козина, А.В. Арутюнян// Матер. научно-практической конф. «Пожилой больной» Москва, 2006. - ж. Клиническая геронтология. - Т.12, № 9. - С. 88.

61. Козина Л.С. Ингибирование активности холинэстераз в клетках нейробластомы человека SH-SY5Y под влиянием вилона и эпиталона /Л.С. Козина, Н.З. Макова, Н.Н. Наливаева,Е.Г Кочкина., В.А. Арутюнов, А. Тернер, И.А. Журавин, А.В. Арутюнян// Сб. докл.VIII Международный симпозиум «Биологические механизмы старения», 21-24 мая 2008 г., Харьков, Украина. 2008. - С. 65 - 66.

62. Козина Л.С. Эффект геропротекторных пептидов на активность холинэстераз в клетках нейробластомы человека SH-SY5Y/Л.С. Козина, Н.З. Макова, Н.Н. Наливаева,

63. Е.Г Кочкина., В.А. Арутюнов, А. Тернер, И.А. Журавин, А.В. Арутюнян// Матер. V Всероссийской научно-практической конф. «Общество, государство и медицина для пожилых», 3-4 июня 2008г., Москва. - 2008. - С. 35.

64. Лысенко А.В. Применение эпиталона для коррекции метаболических и функциональных нарушений при физической нагрузке у спортсменов/А.В. Лысенко, Л.С. Козина//Тез. докл. «XIV Российский национальный Конгресс «Человек и лекарство», 16-20 апреля 2007 г., Москва, 2007. С. 400.

65. Оценка безопасности использования нанопрепаратов пептидной природы/ А.В. Лысенко, Т.А. Финоченко, Р.Г. Шейхова, Л.С. Козина, А.В. Арутюнян//Матер. II-го Санкт-Петербургского международного экологического форума, 1-4 июля 2008, Санкт-Петербург. Вестник Российской Военно-медицинской академии, 2008, № 3 (23) Приложение 2.Часть II. - С. 486

66. Сравнительное изучение антиоксидантных свойств тетрапептидов/Л.С. Козина, А.В. Арутюнян, В.М. Прокопенко, Т.И. Опарина, Т.В. Харитонова//Тез. докл. «2-й Российский симпозиум по химии и биологии пептидов», 25-27 мая 2005 г., Санкт-Петербург. - 2005. - С. 66.

67. Участие биогенных аминов гипоталамуса в регуляции репродуктивной системы женского организма/ А.В. Арутюнян, М.Г. Степанов, А.В. Кореневский, Г.О. Керкешко, Л.С. Козина //Сб. тез. докл. «Нейрохимия: фундаментальные и прикладные аспекты». Научн. конф. 14-16 марта 2005 г., Москва.-2005. - С. 77.

68. Харитонова Т.В. Характеристика показателей про- и антиоксидантных систем крови при старении / Т.В. Харитонова, Л.С. Козина // Тез. докл. «Геронтология: от кардиологии к социально-экономическим аспектам», Сыктывкар, 2005. - С. 75.

69. Харитонова Т.В. Показатели про- и антиоксидантных систем крови при старении/Т.В. Харитонова, Л.С. Козина// Матер. III научно-практической геронтологической конференции с международным участием, посвященная памяти Э.С. Пушковой (Пушковские чтения), 8-9 ноября 2007 г., С-Петербург. - 2007. - С. 135-136.

70. Arutjunyan A.V. In vivo protection of the organism from oxidative stress by small natural regulatory peptides/A.V. Arutjunyan, A.A. Boldyrev, L.S. Kozina//Abstr. VI European Congress «Healthy and active ageing for all Europeans» International association of gerontology and geriatrics, 5-8 July, 2007. Adv. in Gerontology. 2007. - Vol. 20, № 3 - P. 17.

71. Arutjunyan A.V. Geroprotective peptides of the pineal gland and antioxidative defence system/A.V. Arutjunyan, L.S. Kozina, V.Kh. Khavinson// 4th Bologna International Meeting “Affective, behavioral and cognitive disorders in the elderly-ABCDE”. Bologna, Italy, 2006.-P.68.

72. Chalisova N.I. Modulatory effect of amino acids on the liver tissue culture of young and old rats/ N. I. Chalisova, L.S. Kozina, V.V. Lesnyak// Abstr. VI European Congress «Healthy and active ageing for all Europeans» International association of gerontology and geriatrics, 5-8 July, 2007. Adv. in Gerontology. 2007. - Vol. 20, № 3 - P. 25.

73. Effect of synthetic regulatory peptides on expression of neprilysin in human neuroblastoma NB7 cells/N.N. Nalivaeva, , E.G. Kochkina, N. Makova, N.D. Belyaev, A.J. Terner L.S. Kozina,V.A. Arutyonov, A.V. Arutjunyan // Abstr. VI European Congress «Healthy and active ageing for all Europeans» International association of gerontology and geriatrics, 5-8 July, 2007. Adv. in Gerontology. 2007. - Vol. 20, № 3 - P. 59.

74. Khavinson V.Kh.Geroprotective peptides of the pineal gland and antioxidative protection system/ V.Kh. Khavinson, A.V. Arutjunyan, L.S. Kozina//Abstr. 18th World Congress of Gerontology, Rio de Janeiro, Brazil, June 26-30, 2005. - J. Gerontology. - P. 106.

75. Kozina L.S. Age dependent changes in lipid metabolism and thrombocytes intravascular aggregation in cardiovascular pathology development/L.S Kozina, T.V. Kharitonova, I.M. Kirichenko// Abstr. VI European Congress «Healthy and active ageing for all Europeans» International association of gerontology and geriatrics, 5-8 July, 2007. Adv. in Gerontology. 2007. - Vol. 20, № 3. - P. 46.

76. Kozina L.S. The influence of geroprotective peptides on the phagocytic activity of leucocytes in hypokinesia/L.S. Kozina, A.V. Lysenko, A.V. Arutjunyan//Abstr. International Symposium “Interactuion of the nervous and immune systems in health and disease, May 31 - June 2, 2007. Saint-Petersburg. 2007. - P. 38 - 39.

77. Kozina L.S. The role of pineal gland peptides in regulation of free radical rocesses in aging/ L.S.Kozina, V.Kh. Khavinson, A.V. Arutjunyan //Abstr. of the 8th ECNP regional Meeting Moscow, Russia, April 14-16, 2005//European Neuropsychopharmacology - 2005.- Vol. 15. Supplement 2 -2005. - S. 208-209.

78. Protective effect of the peptides vilon and epitalon against hypoxia incluced changes in amiloid-degrading enzymes/ N.N. Nalivaeva, N. Makova, E.G. Kochkina, D. John, N.D. Belyaev, L.S. Kozina, A.V. Arutjunyan, A.J. Terner //Abstr. 21st Biennial Meeting of International Society for Neurochemistry and the 38th Annual Meeting of the American Society for Neurochemistry/ Cancun, Mexico, 19-24 August, 2007. J. Neurochemistry. - Vol. 102. Supplement 1. - 2007. - P. 134.

79. Study of the effects of regulatory peptides on expression of amyloid-degrading enzymes/ N.N. Nalivaeva, N.Z. Makova, L.R. Fisk, E.G. Kochkina, N.D. Belyaev, I.A. Zhuravin, L.S. Kozina, A.V. Arutjunyan, A.J. Terner// Abstr.4th International Peptide Symposium, 7th Australian Peptide Symposium, 2nd Asia-Pacific International Peptide Symposium “Discovery to Drugs: The Peptide Pipeline”, 21-25 October,2007, Cairns, Queensland, Australia.

80. The disturbance of free radical processes in rat brain during toluene and dioxane chronic inhalation/ Burmistrov S.O., Kerkesyko G.O., Stepanov M.G., Kozina L.S., Korenevsky A.V.// Abstr. International conference “Free radicals and antioxidants in the development and functions of the central nervous system: from fetus to aging». April 18-20, 2001. Saint-Petersburg, Russia. Adv. in Gerontology, 2001. - Vol. 6. - P. 45.

81. The effect of regulatory peptides on aging intensity in rats with different anxiety level/A.V. Lysenko, E.V. Morgul, R.G. Sheykhova, T.A. Finochenko, L.S. Kozina//Abstr. VI European Congress «Healthy and active ageing for all Europeans» International association of gerontology and geriatrics, 5-8 July, 2007. Adv. in Gerontology. 2007. - Vol. 20, № 3 - P. 53.

...