Видеоцифровая регистрация для иммунологических и биохимических исследований в практике клинической лабораторной диагностики

Рис. 12 Основное окно программы «Эксперт-Лаб Агглютинация» при регистрации результатов реакции в 12-луночном микропланшете (формат 3х4) с использованием 3 мкл латексной смеси

Разработанные микропланшеты с лунками в формате матрицы 3х4, имеют дистанции между лунками, аналогичные 96-луночному планшету и глубину лунки, оптимальную для получения изображения в режиме пропускания в системе «Эксперт-Лаб» или «Рефлеком». Рабочий объем лунок составляет 10-15 мкл, что позволяет уменьшить объем реагента и проб до 2-3 мкл и 5-10 мкл при проведении реакции ЛА, соответственно. При проведении реакции в 12-луночных микропланшетах получены данные, полностью совпадающие с результатами при проведении реакции в крышках 96-луночных микропланшетов. Снижение требуемого объема реагента в 10-20 раз особенно важно для латексных тестов с дорогостоящими реагентами (например, теста для определения Д-димера).

4. Разработка комплексных систем проведения иммунологических и клинических биохимических исследований в микроматричном формате с видеоцифровой регистрацией

Видеоцифровая регистрация создает основу для развития принципиально новых методик исследований на основе применения микрометодов. 12-луночный микропланшет является полезным промежуточным форматом исследований. Он обеспечивает значительное снижение объемов реагентов и образцов и может быть использован с применением стандартного дозирующего оборудования с визуальной регистрацией. Дальнейшее снижение объемов реакционных смесей требует разработки полных специализированных систем, обеспечивающих как проведение анализа (дозирование, смешивание), так и регистрацию результатов, поскольку в диапазоне объемов менее 1 мкл обычные пипетки и традиционная фотометрия или визуальный учет результатов не применимы.

Для проведения различных лабораторных исследований в объемах реакционной смеси менее 1 мкл был разработан полный аналитический комплекс, применение и оценка эффективности которого для реализации различных лабораторных исследований, описываются в данном разделе.

А. Разработка и характеристики систем позиционирования-смешивания матриц микрокапель на планарных носителях.

Была разработана простая, применимая в клинической лаборатории система серийного нанесения микроколичеств образцов в виде упорядоченной матрицы точек для любых планарных носителей. В системе использован принцип пинового нанесения исследуемых образцов. Этот метод основан на погружении в образец пина (микростержня) с последующим переносом формирующейся на пине микрокапли на мембрану. Очевидно, что объем микрокапли образца зависит от свойств анализируемой жидкости, материала и размера пина, типа мембраны, что определяет размер окрашенных точек на конечной фазе анализа.

Задача нанесения на планарный носитель воспроизводимых по объему капель образцов в виде упорядоченной матрицы была решена путем разработки многопиновых систем, включающих микропланшет для внесения образцов и соответствующий мультиаппликатор (Рис.13).

Рис. 13 Внешний вид разработанных нами многопиновых систем с аппликаторами различных форматов и планшетами для образцов: (а) - аппликатор формата 6х2 с шагом 2,4 мм; (б) - аппликатор формата 6х5 с шагом 4,4 мм. Приведены изображения нитроцеллюлозных мембран после нанесения модельного антигена в различных концентрациях после проявления конъюгатом моноклональных антител с пероксидазой

Для систем пинов, формирующих матрицы с дистанциями между точками менее 3 мм, была разработана специальная конструкция микропланшета с лунками грушевидной формы. Аппликатор на рис. 13 (б) выполнен из нержавеющей стали и позволяет формировать матрицы точек с расстояниями между точками 4,4 мм. В комбинации с разработанным микропланшетом с 30-лунками (формат 5х6) аппликатор позволяет наносить на плоскую поверхность одновременно 30 образцов. Аппликатор на рис.13 (а), представляющий собой два ряда пинов в пластиковом держателе, позволяет создавать матрицы точек с расстоянием 2,4 мм между их центрами. Для дальнейших исследований использовалась система на основе 30-пинового аппликатора формата 5х6 с шагом 4,4 мм и толщиной пинов 1,0 - 1,5 мм. Объем капель, переносимых аппликатором, в зависимости от толщины пинов составляет 0,2- 0,5 мкл.

В результате исследований параметров пинового нанесения микрокапель нами были созданы системы позиционирования-смешивания, обеспечивающие жесткую фиксацию положения аппликатора по отношению к планарному носителю. Такая система обеспечивает быстрое и точное нанесение матриц микрокапель на носитель, а также возможность смешивания реагентов и образцов в каждой точке матрицы. Система позиционирования-смешивания представляет собой блок с тремя отделениями, специальные микропланшеты с лунками объемом 10-15 мкл, предназначенные для образцов и реагентов и аппликаторы с тридцатью пинами (рис14).



Рис. 14 Система позиционирования-смешивания ? разработанное устройство для нанесения и смешивания реагентов и образцов

Для проведения реакций со смешиванием компонентов в первые два отделения вставляются планшеты с образцами и реагентами, а в третье - предметное стекло, на котором производится смешивание микрокапель. Принцип использования системы для формирования матриц микрокапель и проведения реакций на планарном носителе в микроформате схематично показан на рис. 15.

Для формирования на носителе матрицы микрокапель исследуемых образцов сыворотки или мочи из микропланшета пинами аппликатора забирают капли жидкости (а-б), которые перемещают на носитель с помощью позиционера (в-г). Такой вариант используется при проведении исследований, не требующих смешивания реагентов в ходе анализа (иммунодот-тесты на мембране, тесты «сухой химии»). Для проведения исследований со смешиванием реагентов и образцов в матричном формате сначала формируют на стекле матрицу микрокапель реагента (как на рис.16), а затем из микропланшета для образцов аппликатором забирают капли образца (шаги (д-е), рис.15), которые с помощью позиционера помещают на носитель так, чтобы каждая наносимая капля образца смешалась с каплей реагента, уже находящейся на носителе (шаг (ж) рис.15). В третьем отделении позиционера микрокапли тщательно перемешиваются с помощью аппликатора.

Размещено на http: //www. allbest. ru/

Рис. 15 Схема формирования матрицы микрокапель (а-г) и проведения реакции агглютинации со смешиванием компонентов в точках матрицы на носителе (а-ж)

Носитель (предметное стекло) с нанесенными с помощью позиционера микрокаплями, расположенными в виде матрицы 5х6, показан на рис. 16.

Рис. 16 Матрица микрокапель жидкости, созданная с помощью системы позиционирования-смешивания

После прохождения соответствующих реакций на мембранах, тест-полосках или микрокаплях на стекле получают изображение объекта с помощью ВЦР системы, которое обрабатывается соответствующим ПО для получения результатов.

Применение системы позиционирования-смешивания с ВЦР позволило создать новые варианты проведения лабораторных исследований в матричном формате.

Б. Разработка мембранных тестов в микроформате с видеоцифровой регистрацией.

Серийное определение альбумина в моче в микроформате - тест на микроальбуминурию проводили по схеме прямого твердофазного иммуноферментного анализа. При этом пробы мочи наносили с помощью разработанного аппликатора на мембраны, а затем альбумин в пробах выявлялся с помощью конъюгата генно-инженерного рецептора альбумина или антител к альбумину с пероксидазой.

Были подобраны типы используемых нитроцеллюлозных мембран, параметры иммунологической системы детекции, такие как концентрация конъюгата, время и условия инкубации, состав блокирующего буфера и др. После формирования матрицы микрокапель образцов мочи на мембране и проведения всех процедур иммуноферментного анализа результаты анализировали с помощью разработанной и адаптированной к данному типу анализа программы «Видеодот».

На рис. 17 показаны результаты сопоставления данных определения альбумина в моче разработанным методом серийного дот-анализа и методом иммуноферментного анализа для 67 образцов мочи от здоровых людей и пациентов с сахарным диабетом. Данные демонстрируют удовлетворительное совпадение двух методов во всем диапазоне концентраций альбумина в моче у обследованного контингента больных.



Рис. 17 Сопоставление результатов определения альбумина методом дот-анализа с ВЦР (мембрана “Schleicher & Schull”) и ИФА с использованием тест-систем фирмы «Orgentic» (Германия) и анализатора «VICTOR 1420»

Чувствительность определения альбумина в моче составляла 10-20 мг/л. Исходя из того, что признанное пороговое значение концентрации альбумина для выявления микроальбуминурии составляет 30 мг/л, можно сделать вывод, что тест на микроальбуминурию с ВЦР в этом формате обладает достаточной чувствительностью для использования на практике.

Серийное определение концентрации глюкозы в микроформате в цельной крови и сыворотке проводили с использованием мембран «сухой химии» «Меридиан» фирмы «NDP» (Австралия). На мембрану с помощью описанной системы позиционирования наносили в виде упорядоченной матрицы микрокапли цельной крови с антикоагулянтом или сыворотки крови. Результаты измерений концентрации глюкозы в единицах ммоль/л получали с помощью модифицированной для этого типа анализа программы «Эксперт-Лаб Видеодот».

Так как с помощью аппликатора на мембрану переносятся сразу 30 образцов крови или сыворотки крови, а время проявления и анализа цветовых пятен на мембране составляет не более 90 секунд, предлагаемый метод отличается высокой производительностью. Вся процедура анализа 30 образцов (после заполнения планшета образцами) занимает не более 2-3 минут, причем результаты, представляются и сохраняются в электронной форме.

Были проведены исследования аналитических характеристик разработанного метода. Воспроизводимость метода изучали при повторных измерениях контрольных сывороток. Эти данные представлены в таблице 5.

Таблица 5 Данные по воспроизводимости результатов определения содержания глюкозы в контрольных сыворотках

концентрация глюкозы в контрольных сыворотках, ммоль/л	Внутрисерийная воспроизводимость	Межсерийная воспроизводимость
	Хср, ммоль/л	S	CVвс, %	Хср, ммоль/л	S	CVмс, %
4,13-5,7	4,85	0,13	2,79	4.82	0,19	3,86
5,30-7,16	6,15	0,19	2,99	6,11	0,25	4,01
13,1-17,7	15,36	0,47	3,08	15,36	0,68	4,45

Каждая из сывороток была измерена 10 раз в одной серии и 20 раз в различных сериях. После этого были рассчитаны серийный и межсерийный коэффициенты вариации для каждой выборки. Рассчитанный коэффициент вариации оказался меньше предельно допустимого его значения (CV=5%), что доказывает хорошую сходимость и воспроизводимость результатов. Все полученные результаты концентраций сывороток попали в интервалы, которые указаны в паспортах сывороток.

Минимально определяемая разработанным методом концентрация глюкозы составила 2,1 ммоль/л. При более низких концентрациях результаты были статистически недостоверны. Оценка чувствительности (разрешающей способности) методики, проведенная на контрольных сыворотках методом добавок показала, что она составляет от 0,1 до 0,3 ммоль/л для низких и высоких концентраций глюкозы.

На рис. 18 представлены данные сопоставления результатов определения глюкозы сыворотки крови методом серийного дот-анализа и референсным глюкозооксидазным методом на анализаторе «AU400» (Olympus, Япония). Очевидна низкая дисперсия результатов, что говорит о хорошем совпадении результатов.

Рис. 18 Сопоставление результатов определения глюкозы крови методом дот-анализа и глюкозооксидазным методом на анализаторе «AU400» (Olympus, Япония)

Представленные данные показывают, что предлагаемый микроматричный метод серийного определения концентрации глюкозы по своим аналитическим характеристикам может применяться в практике лабораторных исследований.

В.Тесты со смешиванием образцов и реагентов в микроформате.

Тесты на основе реакции латексной агглютинации проводили по схеме, приведенной на рис. 15. Сначала пинами аппликатора из лунок планшета, содержащего латексную суспензию на носитель (обезжиренное предметное стекло) переносили капли реагента объемом 0,5 мкл с формированием упорядоченной матрицы рис.15 (а-г). Затем такую же операцию проводили, погружая пины другого аппликатора в лунки планшета с образцами и контролями рис.15 (г-ж), и в каждой точке матрицы с помощью аппликатора латексный реагент смешивается с образцом рис.15 (з). Через 120-150 секунд получали изображение в режиме пропускания стекла с матрицей смеси реагентов и образцов с помощью системы «Эксперт-Лаб».

Фотография носителя с матрицей прореагировавших с латексной суспензией образцами показана на рис. 19. На увеличенном сканерном изображении двух рядов матрицы (на врезке на рис. 19) хорошо различима неоднородная структура положительных проб.

Рис. 19 Фотография носителя с проведенной на нем реакцией латексной агглютинации в разработанной нами системе позиционирования-смешивания. Обозначено стрелкой увеличенное сканерное изображение двух рядов матрицы с различимой неоднородной структурой положительных проб

Для регистрации результатов агглютинационных тестов в микроформате использовали специально разработанное ПО «Эксперт-Лаб Агглютинация-Микро».

На рис. 20 представлено основное окно программы «Эксперт-Лаб Агглютинация-Микро», содержащее исходное изображение аналитических зон матрицы, с количественной оценкой результатов реакции агглютинации и протоколом анализа и дискриминацией положительных и отрицательных результатов по пороговому значению. Продемонстрирована имеющаяся для всех программ возможность анализа увеличенных изображений аналитических зон, соответствующих контролям и исследуемому образцу. Данный способ проведения реакции агглютинации позволяет избежать ошибок при серийных постановках, связанных с высокой скоростью прохождения реакции, так как образцы и контроли наносятся одновременно и время инкубации строго одинаково на момент регистрации результатов.

Сопоставление результатов, получаемых с помощью разработанного микроматричного метода проведения исследований ЛА, с результатами традиционных макрометодов показало полное совпадение аналитических характеристик двух методов.

Предлагаемый новый способ постановки реакции ЛА обеспечивает одновременное проведение реакции для 30 образцов, в 10-30 раз снижает потребление латексных реагентов, предоставляет возможность объективной оценки и документирования результатов исследований.

Производительность и экономичность проведения определений разработанным методом может сделать доступными любые скрининговые обследования на основе реакции ЛА.



Рис. 20 Основное окно и программы «Эксперт-Лаб Агглютинация-Микро»

Оценку характеристик серийных исследований методом латексной агглютинации в микроформате проводили на примере определения СРБ, РФ и АСЛО на контрольных сыворотках и клиническом материале. Для изучения воспроизводимости измерений метода были проведены реакции с контрольными отрицательными и положительными сыворотками с разными концентрациями определяемых веществ. Коэффициенты вариации для определений аналитов для положительных сывороток представлены в таблице 6. Чувствительность разработанного метода составила, соответственно, 6,8±1,27 мг/л - для СРБ, 10,5±4,1 МЕ/мл - для РФ и 234±57 МЕ/мл - для АСЛО, что совпадает с паспортными данными латексных системы.

Таблица 6 Данные по воспроизводимости результатов определения аналитов в контрольных сыворотках «Randox»

Аналиты	Концентрация аналита в контрольных сыворотках	СV, % , данные производителя	CV20, %
СРБ, мг/л	25,73,9	25	10
	52,67,9		5
	78,311,7		5
РФ, МЕ/мл	40,38,1	25	15
	56,311,3		5
АСЛО, МЕ/мл	35445	20	15

Для оценки правильности метода были проанализированы 345 образцов сывороток на наличие СРБ, РФ и АСЛО полуколичественными методами: классическим методом ЛА на слайдах с визуальной регистрацией, его модификацией в лунках крышек 96-луночных планшетов и микрометодом в матричном формате с ВЦР и количественным иммунотурбидиметрическим методом на анализаторе «AU640» («Olympus», Япония). Полученные данные представлены в таблице 7.

Таблица 7 Данные статистической обработки (коэффициенты корреляции Спирмана, при p<0,05) результатов, полученных в системах с реакцией ЛА на планарных объектах и иммунотурбидиметрическим методом

Референс-методы Сравниваемые методы	Иммунотурбидиметрия	Классический метод ЛА с визуальной регистрацией
	СРБ	РФ	АСЛО	СРБ	РФ	АСЛО
ЛА в лунках крышки планшета с ВЦР	0,978	0,930	0,951	1,0	0,988	0,988
Микроматричный метод c жидким латексом с ВЦР	0,981	0,923	0,959	0,993	0,987	0,977
Классичесий метод ЛА с визуальной регистрацией	0,978	0,928	0,937	-	-	-

Для сравнения результатов, полученных количественным и полуколичественными методами, титры сывороток и соответствующие им концентрационные интервалы ранжировались, а так же учитывалось количество сывороток, попадающих в тот или иной интервал, и в таблице 7 приведены рассчитанные коэффициенты корреляции Спирмана.

Статистические данные показывают высокую степень совпадения результатов, полученных разработанным микрометодом ЛА с видеорегистрацией, с результатами референсных методов.

Вариант тест-систем с высушенным латексным реагентом был также разработан и апробирован для реакции латексной агглютинации в микроформате. В этом случае латексный реагент в стабилизирующем буфере с помощью системы позиционирования наносили аппликатором на обезжиренное предметное стекло и высушивали при комнатной температуре. В результате этого, на носителе формировалась матрица из тридцати зон, содержащих дозы сухого латексного реагента, в которых можно проводить реакцию ЛА с исследуемыми образцами. Носители с высушенными матрицами микрокапель реагентов хранили в пакетиках из фольги в присутствии силикагеля при комнатной температуре, и их стабильность составляла не менее полугода при комнатной температуре. Такая тест-система показана на рис. 21.

Рис 21 Тест-система с высушенным латексным реагентом

Процедура постановки реакции ЛА на системах с высушенным латексным реагентом аналогична методике для использования жидких реагентов, но нет стадии нанесения микрокапель латекса, что позволяет упростить проведение анализа. Результаты, получаемые с применением тестов с сухими и жидкими реагентами, полностью совпадают.

Разработанные тест-системы с сухим реагентом представляют собой аналитическую систему, сводящую к минимуму количество операций, проводимых непосредственно в КДЛ при проведении анализа. В данном случае операция нанесения латексного реактива выполняется при производстве тестов в стандартных условиях.

Применение разработанного метода исследований в микроформате с ВЦР обеспечивает минимизацию ошибок в процессе исследования, снижает количество требуемого биоматериала, уменьшает затраты времени на проведение анализа, то есть улучшает качество и повышает экономическую эффективность лабораторных исследований.

Определение групп крови системы АВО и резус-фактора в микроформате проводили по методике, аналогичной методике проведения реакции латексной агглютинации. С помощью описанной выше системы позиционирования-смешивания в каждой точке матрицы, формируемой на предметном стекле, смешивали суспензию исследуемых эритроцитов и цоликлоны, специфичные к соответствующим эритроцитарным антигенам.

Примеры интерпретации результатов исследования эритроцитов по системе группы АВО и Резус-фактору приведены на рис.22.



Рис. 22 Пример интерпретации результатов изосерологического исследования (слева контрастированное изображение аналитических зон, справа - визуальное представление математической обработки изображения)

Для повышения надежности определения для каждого образца крови использовали два разведения эритроцитарной массы. В рамках одного нанесения в формате 5х6 исследовали одновременно 5 образцов крови. Визуальное аналоговое представление математической обработки изображения помогало объективно оценить результаты реакции агглютинации. Получаемые нами результаты полностью совпадали с данными референс-метода прямого и перекрестного определения эритроцитарных антигенов на плоскости, что доказывает возможность использования разработанного нового способа определения групп крови АВО и резус-фактора в микроформате.

Проведение исследований в микроформате с ВЦР позволяет одновременно анализировать до 30 образцов на один или несколько параметров. При этом используется минимальное количество образца и реагентов, сокращается время проведения анализа. Видеорегистрация дает возможность повысить объективность оценки результата реакции за счет средств компьютерной обработки изображений. При необходимости оценку результатов реакции можно повторить, данные распечатать или передать с помощью сетевых технологий в центральную лабораторию. Таким образом, приспособления для позиционирования-смешивания в сочетании с системами видеорегистрации представляют полную аналитическую систему для достоверного, производительного проведения иммунологических исследований в микроформатах, как в условиях оснащенной лаборатории, так и во внелабораторных условиях.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Проведенные исследования подтверждают эффективность использования программно-аппаратных комплексов «Эксперт-Лаб» и «Рефлеком» для широкого спектра иммунологических и биохимических лабораторных исследований. Система «Эксперт-Лаб» при использовании для регистрации результатов иммуноферментных, лактекс- и гем-агглютинационных исследований в формате 96-тилуночного планшета имеет аналитические характеристики, не уступающие современным традиционным регистрирующим приборам, при наличии значительных преимуществ, обеспечиваемых возможностью сохранения первичного документа теста.

Комплекс «Эксперт-Лаб» и комплекс «Рефлеком» позволяют регистрировать результаты иммунохроматографических тестов и тестов, проводимых с помощью полосок «сухой химии». Оба комплекса используются в качестве систем регистрации для разработанных нами микротехнологий проведения иммунологических лабораторных исследований, позволяющих снизить используемые объемы реагентов и проб в 10-50 раз, (от рабочего объема 100 мкл для 96-тилуночного микропланшета до объема реакционных смесей 1-2 мкл для проведения реакции в микроматричном формате).

С учетом универсальности и единого принципа построения, выдачи и обработки информации разработанные системы ВЦР могут рассматриваться как основа комплексного оснащения широкопрофильных лабораторий различной специализации и уровня.

Однако перечисленные выше возможности не исчерпывают потенциал данных комплексов и систем на основе видеоцифровой регистрации и микротехнологий.

Разработанные подходы к созданию систем ВЦР, принципы построения программного обеспечения, использование матричных форматов являются универсальными и весьма гибкими. Они применимы практически ко всем сферам и задачам лабораторной диагностики, от интегрирования в лабораторные информационные сети крупных лабораторных центров, до использования в полевых условиях с передачей аналитической информации по мобильной связи.

Наиболее перспективными направлениями развития описанных разработок и научно-обоснованных подходов видеоцифровой регистрации являются:

-Для сканерных систем - биохимические, иммунотурбидиметрические, микробиологические исследования в формате 96-луночного планшета;

-Для систем на основе цифровых видеокамер - исследования на тестах сухой химии в кинетическом режиме, исследования в микроматричных форматах.

Таким образом, научно обоснованное разрабатываемое направление совершенствования методов клинических лабораторных исследований, базирующееся на применении видеоцифровой регистрации и использования микрометодов открывает новые возможности повышения качества, доступности, создания гибких вариантов и расширения спектра приложений лабораторной диагностики.

Широкому практическому применению этих систем может способствовать и их легкая адаптация к любым системам передачи цифровой информации через Интернет или по мобильной телефонной связи.

Передача информации в цифровом виде может быть неоценимым преимуществом для решения таких задач, как организация профильных лабораторных сетей с вертикально интегрированной системой контроля качества, организация дистанционного получения результатов анализов и консультативная помощь из единого центра при полевых лабораторных исследованиях или тестах «в месте оказания медицинской помощи».

Выводы

1.Разработаны алгоритмы обработки изображений аналитических объектов для компьютерных видеоцифровых систем «Эксперт-Лаб» и «Рефлеком» и универсальное программное обеспечение (ПО) для регистрации результатов распространенных лабораторных исследований, проводимых в матричных форматах (96- луночные планшеты, планарные носители для микрометодов) и исследований на планарных носителях (иммунохроматографические тесты, тесты «сухой химии»).

2.Доказана возможность повышения качества проводимых анализов за счет документирования, объективизации, автоматической оценки результатов при регистрации агглютинационных исследований: экспресс тестов латексной агглютинации, РПГА, агглютинации желатиновых частиц, изосерологических исследований на разработанном программно-аппаратном комплексе «Эксперт-Лаб».

3.Предложена система внутрилабораторного контроля качества для агглютинационных тестов, повышающая аналитическую надежность получаемых данных.

4.Применение разработанной системы видеоцифровой регистрации результатов иммуноферментного анализа обеспечивает выявление и исключение ошибок, связанных с артефактами при проведении исследований (выпадение субстрата в осадок, посторонние включения, дефекты планшета).

5.Разработано гибкое программное обеспечение для регистрации, автоматической оценки, документирования результатов иммунохроматографических тестов, применимое к любым типам тестов горизонтального потока. На примере иммунохроматографических тестов для определения простатического специфического антигена с видеоцифровой регистрацией показана возможность получения полуколичественных результатов с эффективной дифференциацией диагностически значимых диапазонов концентраций.

6.Разработаны 12-луночные микропланшеты для проведения латексных агглютинационных и изосерологических исследований с видеоцифровой регистрацией, позволяющие снизить в 5-10 раз расход реагентов с сохранением всех аналитических характеристик методик.

7.Предложена система формирования упорядоченных матриц микрокапель на планарных носителях и разработаны специализированные программы, составляющие полную аналитическую систему для проведения лабораторных иммунологических и биохимических исследований с использованием объемов проб и реагентов менее 1 мкл.

8.Предложенные варианты проведения серийного дот-анализа в матричном формате для определения глюкозы в сыворотке крови, латексагглютинационного метода определения содержания аналитов: С-реактивного белка, ревматоидного фактора, антистрептолизина-О и определения групп крови системы АВО и резус-фактора в микрообъемах с видеоцифровой регистрацией обеспечивают получение достоверных результатов исследования аналитов.

9.Разработаны тесты с сухими реагентами для проведения латекс-агглютинационных тестов и изосерологических исследований в формате 12-луночных микропланшетов и микроматричном формате, аналитические характеристики которых не уступают системам с жидкими реагентами и могут быть рекомендованы к использованию в клинической лабораторной практике.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Созданная многофункциональная видеоцифровая система «Эксперт-Лаб» может быть рекомендована для малых и средних клинико-диагностических лабораторий как базовый комплекс, обеспечивающий регистрацию результатов практически всего спектра проводимых иммунохимических исследований.

Предложенные инструментальные методики проведения латекс- и

гемагглютинационных тестов в формате 96-луночного планшета могут применяться для использования в клинико-диагностических лабораториях вместо традиционных тестов с визуальной регистрацией результатов, обеспечивая документирование, объективизацию и повышая аналитическую надежность исследований.

Серийный латексагглютинационный метод определения содержания С-реактивного белка, ревматоидного фактора, антистрептолизина-О в микроматричном формате с видеоцифровой регистрацией может быть рекомендован для внедрения в практику клинико-диагностических лабораторий лечебно-профилактических учреждений здравоохранения.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Старовойтова Т.А., Зайко В.В., Волощук С.Г., Стериополо Н.А., Мартынкина Л.П., Савина М.И., Зайцева Н.А., Тогузов Р.Т., Венгеров Ю.Ю. Иммунохроматографический анализ простатического специфического антигена с видеоцифровой регистрацией // Клиническая лабораторная диагностика. - М.- 2005. - №9 - С. 24-25.

2. Зайко В.В., Старовойтова Т.А., Волощук С.Г., Стериополо Н.А., Мартынкина Л.П., Кутвицкий В.А., Туголуков А.Е.,. Тогузов Р.Т., Венгеров Ю.Ю. Системы регистрации и анализа изображений для задач клинической лабораторной диагностики // Клиническая лабораторная диагностика. - М.- 2005. - №10. - С. 25-26.

3. Старовойтова Т.А., Зайко В.В., Стериополо Н.А., Калачева О.С., Мартынкина Л.П., Кутвицкий В.А., Туголуков А.Е., Егоров Е.Е., Волощук С.Г., Тогузов Р.Т., Венгеров Ю.Ю. Видеоцифровой анализ для лабораторной диагностики: комплекс «Эксперт-Лаб» на основе сканера для документирования, объективизации и регистрации результатов латекс-агглютинационных, гемагглютинационных тестов, изосерологических и иммуноферментных исследований // Лаборатория. - М.- 2006. - №1. - С. 19-22.

4. Стериополо Н.А., Зайко В.В., Калачева О.С., Мартынкина Л.П., Кутвицкий В.А., Туголуков А.Е., Волощук С.Г., Тогузов Р.Т., Старовойтова Т.А., Венгеров Ю.Ю. Применение сканера для регистрации результатов иммуноферментного анализа в стандартных микропланшетах // Клиническая лабораторная диагностика. - М.- 2006. - № 11. - С. 44-46.

5. Старовойтова Т.А., Стериополо Н.А., Зайко В.В., Калачева О.С., Мартынкина Л.П., Кутвицкий В.А., Туголуков А.Е., Егоров Е.Е., Волощук С.Г., Тогузов Р.Т., Венгеров Ю.Ю. Видеоцифровой анализ для лабораторной диагностики: комплекс «Эксперт-Лаб» на основе сканера для документирования и регистрации результатов латекс-агглютинационных тестов и иммуноферментных исследований // Материалы докладов семинаров и конференции в рамках выставки «AnalyticaExpo-2006».- М. - 2006. - С. 42-43.

6. Зайко В.В., Стериополо Н.А., Калачева О.С., Старовойтова Т.А., Ротанов В.С., Фриго Н.В., Венгеров Ю.Ю. Видеоцифровая система «Эксперт-Лаб» для лабораторной диагностики сифилиса // Материалы научных работ Х Всероссийской конференции дерматовенерологов «Организация оказания дерматовенерологической помощи в современных условиях». - М.-2006. - С. 74.

7. Зайко В.В., Мартынкина Л.П., Стериополо Н.А., Калачева О.С., Кутвицкий В.А., Туголуков А.Е., Егоров Е.Е., Волощук С.Г., Тогузов Р.Т., Старовойтова Т.А., Венгеров Ю.Ю. Система на основе сканера для документирования, объективизации и регистрации результатов тестов латексной агглютинации // Клиническая лабораторная диагностика. - М.- 2006. - № 12. - С. 18-21.

8. Венгеров Ю.Ю., Кутвицкий В.А., Туголуков А.Е., Волощук С.Г., Зайко В.В., Мартынкина Л.П., Старовойтова Т.А., Стериополо Н.А. Свидетельство №2007613095 «Пакет программ для лаборатории «Эксперт-Лаб» - заявка №2007612576, 26.07.2007; Зарегистр. в Реестре программ для ЭВМ 20.07.2007.

9. Старовойтова Т.А., Стериополо Н.А., Зайко В.В., Мартынкина Л.П., Калачева О.С., Кутвицкий В.А., Туголуков А.Е., Волощук С.Г., Венгеров Ю.Ю., Тогузов Р.Т. Видеоцифровая система «Эксперт-Лаб» для регистрации и объективизации результатов латекс-агглютинационных тестов в формате 96-луночного планшета // Клиническая лабораторная диагностика. - М.- 2007. - № 9. - С. 37.

10. Старовойтова Т.А., Стериополо Н.А., Зайко В.В., Мартынкина Л.П., Калачева О.С., Кутвицкий В.А., Туголуков А.Е., Волощук С.Г., Венгеров Ю.Ю., Тогузов Р.Т. Исследование характеристик сканерной видеоцифровой системы Эксперт-Лаб для регистрации результатов иммуноферментного анализа // Клиническая лабораторная диагностика. - М.-2007. - № 9. - С. 30-31.

11. Зайко В.В., Мартынкина Л.П., Стериополо Н.А., Кутвицкий В.А., Туголуков А.Е., Егоров Е.Е., Волощук С.Г., Старовойтова Т.А., Венгеров Ю.Ю., Тогузов Р.Т. Мультиплексная аналитическая система для проведения тестов латексной агглютинации в микроформате с видеоцифровой регистрацией // Клиническая лабораторная диагностика.- М. - 2007. - № 9, С. 39

12. Венгеров Ю.Ю., Барский В.Е., Волощук С.Г., Егоров Е.Е., Туголуков А.Е., Кутвицкий В.А., Мартынкина Л.П., Зайко В.В., Черных В.С., Старовойтова Т.А., Стериополо Н.А., Калачева О.С. Пат. 2325644 Рос. Федерация, МПК G 01N 33/48, G 01N 33/53. Способ проведения клинического и биохимического анализа биологических жидкостей - № 2005123717/15; заявл. 26.07.2005; опубл. 27.05.2008, Бюл. №15.

13. Зайко В.В., Мартынкина Л.П., Стериополо Н.А., Кутвицкий В.А., Туголуков А.Е., Егоров Е.Е., Волощук С.Г., Старовойтова Т.А., Венгеров Ю.Ю., Тогузов Р.Т. Аналитические характеристики микроматричного полуколичественного метода проведения серийных латексных тестов с видеоцифровой регистрацией // Клиническая лабораторная диагностика. - М.- 2008. - № 6. - С.17-20.

14. Zaiko V., Martinkina L., Steriopolo N., Kutvitsky V., Tugolukov A., Egorov E., Voloshchuk S., Starovoitova T., Toguzov R., Vengerov Yu. Microarray Method for Multiplex and Serial Latex Agglutination Tests with Digital Image Registration // ClinLab. - Н. - 2008. - N 54. - Р. 273 -279.

15. Старовойтова Т.А., Зайко В.В., Стериополо Н.А., Мартынкина Л.П., Кутвицкий В.А., Туголуков А.Е., Волощук С.Г., Венгеров Ю.Ю. Комплекс «Эксперт-Лаб» для регистрации тестов латексной агглютинации и иммуноферментного анализа // Материалы 6-ой Международной научно-практической конференции «Достижения фундаментальных наук в решении актуальных проблем медицины» Астраханский медицинский журнал. - А.- 2008. - Т. 3. - №3 (приложение). - С.190-194.

16. Венгеров Ю.Ю., Старовойтова Т.А., Тогузов Р.Т. Видеоцифровая регистрация и миниатюризация как высокотехнологичные подходы к усовершенствованию клинических лабораторных исследований.// Лаборатория.- М.- 2009.-№2.- С 10.

17. Старовойтова Т.А., Стериополо Н.А., Зайко В.В., Мартынкина Л.П., Кутвицкий В.А., Туголуков А.Е., Волощук С.Г., Тогузов Р.Т., Венгеров Ю.Ю. Видеоцифровая регистрация: новые перспективы лабораторной диагностики //Клинико-лабораторный консилиум. - С - П.- 2009. - №5. - С.44-55.

18. Старовойтова Т.А., Зайко В.В., Стериополо Н.А., Мартынкина Л.П., Кутвицкий В.А., Туголуков А.Е., Волощук С.Г., Тогузов Р.Т., Венгеров Ю.Ю. Аналитическая платформа для проведения биохимических и иммунологических исследований в микроматричном формате с видеоцифровой регистрацией // Медлайн.РУ: Российский биомедицинский журнал. - С - П.- 2009. - №12.- С.

19. Мартынкина Л.П., Старовойтова Т.А., Стериополо Н.А., Зайко В.В., Кутвицкий В.А., Туголуков А.Е., Волощук С.Г., Венгеров Ю.Ю. Информативность экспресс-латекс-тестов при использовании видеоцифровой регистрации // Клинико-лабораторный консилиум. - С - П.- 2009. - №6. С.56-62.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

HBsAg - поверхностный антиген вируса гепатита В

TPHA - Treponema pallidum hemagglutination - агглютинация сорбированных антигенами возбудителя сифилиса эритроцитов

TPPA - Treponema pallidum particle agglutination - агглютинация с сорбированных антигенами возбудителя сифилиса частиц

АГ - антиген АСЛО - антистрептолизин - О

АТ - антитело

АТТГ - антитела к тиреоглобулину

АТТПО - антитела к тиреоидной пероксидазе

ВЛК - внутрилабораторный контроль качества

ВЦР - видеоцифровая регистрация

ДЭА-S - дегидроэпиандростерон - ульфат

ИФА - иммуноферментный анализ

ИХ - иммунохроматографические тесты

ЛА - латексная агглютинация

ОП - оптическая плотность

ПДТ - первичный документ теста

ПЗС - прибор с зарядовой связью

ПО - программное обеспечение

ПСА - простатспецифический антиген

РФ - ревматоидный фактор

РПГА - реакция пассивной гемагглютинации

СРБ - С-реактивный белок

СТ4 - свободный тироксин

ТМБ - тетраметилбензидин

ТТ3 - общий трийодтиронин

ТТГ - тиреотропный гормон

Размещено на Allbest.ru

...