Генетические основы этиологической гетерогенности злокачественных новообразований

Клинико-генетический анализ первично-множественных злокачественных опухолей.

Другими изученными локализациями явились первично множественные злокачественные опухоли, включавшими оценку клинических, эпидемиологических и молекулярных особенностей 400 больных с синхронным и метахронным ПМЗО. Проведенный анализ создал основу для выделения разных вариантов патологии и показал существование косегрегации отдельных форм опухолей в семьях таких больных. Установлено, что риск развития этих заболеваний тесно коррелирует с семейным анамнезом заболевания. Частота ПМЗО среди родственников (0,8%), во много раз превышает аналогичную частоту в популяции г.Москвы (0,008%). Частота поражения разными злокачественными новообразованиями членов семей больных ПМЗО (26,9±1,8 %) также превысила аналогичную частоту (4,0±0,03%) в популяции (Р<0,001). Сравнение частоты поражения неоплазиями родственников больных ПМЗО с таковой у больных солитарным раком контрольных групп (больных раком желудка, молочной железы и меланомы кожи) показало не только более тяжелый фенотип заболевания при ПМЗО, но и то, что члены семей этих больных являются предметом высокого онкологического риска (Р<0,001) ( рис.3).

Рис.3. Частота злокачественных опухолей среди различных групп родственников 1-ой степени родства больных ПМЗН, больных раком желудка и меланомой кожи и раком молочной железы.

Выявлена тенденция к предпочтительному поражению идентичных органов в семьях больных с первично множественным поражением раком толстой кишки (рис. 4).

Рис.4. Семейная агрегация колоректального рака в семьях больных единственным раком толстой кишки и в семьях больных первично-множественным раком толстой кишки (ПМЗНТК).

Частота накопления однотипных опухолей в семьях больных с первично множественным раком толстой кишки (5,8±0,6%) выше, чем аналогичный показатель в семьях больных с солитарным раком толстой кишки (3,0±0,2%) (Р?0,001), следовательно для членов семей больных с ПМЗО с поражением толстой кишки риск развития рака этой локализации повышен. Частота развития первично множественного рака у больных раком толстой кишки выше, чем у больных раком прямой кишки. Пропорция поражения множественной малигнизацией толстой кишки у мужчин больных раком толстой кишки (2,4±1,6%), по отношению к таковой у мужчин больных раком прямой кишки (0,8±1,8%), составила 3:1 (Р?0,001). У женщин больных раком толстой кишки и раком прямой кишки, таких различий не выявлено. Отсутствие этих различий у женщин исключает возможность артефакта из-за вероятности включения в анализ синдрома ННКРР. Исходя из полученных данных, больных с первично множественным раком толстой кишки и раком прямой кишки следует рассматривать как две отдельные, биологически более гомогенные группы.

В семьях больных ПМЗО выявлена тенденция к совместному развитию некоторых видов рака. Из группы женщин больных ПМЗО, при первом первичном раке молочной железы, вторая первичная опухоль чаще всего поражает: толстую кишку -25%, эндометрий - 5,8%, яичники -5,8%, шейку матки -4,5%, молочную железу -2,7%, желудок - 11%, и др. Если развитие единственного РМЖ в значительной степени обусловлено влиянием окружающих факторов риска, то у пациенток, пораженных дополнительными первичными опухолями, влияние генетических факторов может быть доминирующим. Подтверждением этому является то, что 16% родственников, из семей этих пациенток, также были поражены полинеоплазиями, частота которых превышала таковую в популяции (4,2%) (р?0,05). Изучение совместных локализаций полинеоплазий среди 543 женщин с ПМЗО, у половины которых, одной из первичных опухолей был РЯ, а у другой - рак эндометрия, выявило, что в обеих группах, сочетание поражения раком: яичников, эндометрия, молочной железы и органов желудочно-кишечного тракта, имеет устойчивую ассоциацию, данные представлены на рисунках 6,7.

Рис. 6. Локализация второй первичной Рис.7. Локализация второй первичной опухоли у 211 больной ПМЗО с пораже- опухоли у 232 больных ПМЗО с жением эндометрия. поражением яичников.

Полученные данные стали основанием для оценки генетических корреляций между выявленными формами рака в семьях больных ПМЗН. Установлены достаточно высокие оценки корреляций между раком эндометрия и раком толстой кишки (0,9±0,2), между раком молочной железы и раком толстой кишки (0,7±0,3), между раком желудка и раком молочной железы (0,8±0,6).

Хотя каждая из указанных форм опухолей имеет характерные именно для нее системы детерминации, однако доля общих генов подверженности свидетельствует о наличии общих этиологических механизмах (генетической общности) их развития и выраженности связей определенных типов опухолей в семьях больных ПМЗО. Эти наблюдения представляют интерес, поскольку, если у больного одна из первичных опухолей соответствует указанным выше, то можно ожидать в отдельно взятых семьях аналогичные солитарные опухоли у родственников.

Установленная общность генетических механизмов подверженности к проявлению указанных форм опухолей подтверждает наличие генетической гетерогенности между «спорадическими» формами рака женских репродуктивных органов, желудка, толстой кишки и ПМЗО, компонентами которых они являются.

Показано, что развитие ПМЗО ассоциируется с моногенно наследуемыми синдромами. Эти синдромы, обладают уникальными клиническими особенностями к поражению первичной злокачественной опухолью нескольких анатомических областей. Ассоциированная генетическая предрасположенность особенно выражена для остео-, мягкотканых сарком, лейкозов, РМЖ и для новых опухолей в области мозга и ЦНС при синдроме Li-Fraumeni, при синдроме Каудена - рака молочной железы, щитовидной железы и толстой кишки и др. В семьях больных ПМЗО наследственные варианты злокачественных опухолей встречаются значительно чаще (17,3%), по сравнению с таковыми, установленными при равных условиях в семьях 460 больных МК (3,9%) и семьях 950 больных раком желудка (2,1%) (р?0,01). Возраст диагностики первого первичного рака у больных с синдромами оказался более ранним (43,6± 1,6 года), по сравнению с таковым в общей группе больных ПМЗО (49,8±0,9 года) (р?0,01).

Коэффициент наследуемости ПМЗО, рассчитанный на основе корреляций, оказался равным - 77,4%, что без учета гетерогенности этих опухолей, свидетельствует о высокой генетической детерминации и, следовательно, генетической отягощенности этих семей.

Определение частоты наиболее распространенных герминальных мутаций в генах BRCA1/2 и CHEK2, с использованием технологии олигонуклеотидных биочипов у 20 больных ПМЗО с поражением яичников и 68 больных одним РЯ показало, что герминальные мутации в гене BRCA1 выявляются в 52,63% больных ПМЗО и только у 10,3% больных солитарным РЯ (р<0,01). Наличие у пациентки ПМЗО с поражением яичников увеличивает вероятность обнаружения в семье мутации в гене BRCA1.Синдромы «семейного рака» идентифицированы у 55% больных ПМЗО - носителей герминальной мутации в гене BRCA1. У больных одним РЯ выявлено два типа мутаций: 185delAG (1,47%) и 5382insC (8,82%). У больных ПМЗО с поражением яичников, идентифицированы 4 типа мутаций гена BRCA1 (табл.8).

Таблица 8.

Типы мутаций гена BRCA1 обнаруженные у 11 из 20 пациенток, у которых одной из первичных опухолей был рак яичников.

Анализ семей больных с выявленными генотипами гена BRCA1 показал, что формы опухолей, которыми поражаются родственники этих больных, различается в зависимости от вариантов мутаций в пределах гена. В семьях ассоциированных с мутацией в позиции 5382insC, по сравнению с другими типами мутаций в гене BRCA1, родственники чаще поражаются раком женских репродуктивных органов, предстательной железы и меланомы кожи (МК), (рис. 9).

Родословная больной С. (мутация 5382insC гена BRCA1).

Рис. 9. У больной ( III-2) с герминальной мутацией 5382insC, меланома кожи верхней трети правого бедра диагностирована в 41 год, РЯ в 51 год, у матери (II-3) МК лица удалили в 41 год, а через 10 лет у не обнаружен рак эндометрия, умерла в 70 лет, дедушка (I-1) рак кожи. Сестра (III-1) полипоз эндометрия, мутации не обнаружено.

В семьях носителей мутации в позиции 300 замена T>G гена BRCA1, члены семей поражались раками разных типов, среди которых рак толстой кишки и желудка встречался чаще, чем при других типах мутаций (рис.10).

Родословная больной Н. (мутация 300T>G гена BRCA1).

Рис.10. У больной (II-2) с герминальной мутацией 300T>G, рак молочной железы обнаружен в 34 года, а в 38 лет диагностирован второй первичный рак яичников, мать (I-4) умерла 54 года от РЯ, брат (II-3) умер от рака толстой кишки, сестра (II-4) рак эндометрия, бабушка (I-4) - РЯ, у дочери (III-1) выявлена мутация 300T>G.

При мутациях 4153delA и 185delAG, родственники наиболее часто поражались раком той же самой анатомической локализации и/или РМЖ (рис.11).

Родословная больной О, (мутация 185delAG )

Рис. 11. У больной (II-3) РМЖ обнаружен в 41 г, РЯ в 50 лет, у дочери (III-1) рак обеих яичников обнаружен в 39 лет, мать больной (I-2) умерла от РЯ в 44г.

Мутация во 2 экзоне гена BRCA1 - 185delAG обнаружена у матери (II-3) и дочери (III-1), у детей (IY-1,2) мутации не обнаружено.

Хотя полученные данные статистически незначимы, встречаемость этих форм рака следует учитывать в семьях больных ПМЗО с поражением яичников и их использование могло бы быть полезным при прогнозе риска развития неоплазий у родственников в зависимости от варианта выявленной герминальной мутации у больного.

В анализируемых группах мутации в гене BRCA2 выявлены у больных с билатеральным РМЖ, мутаций в гене CHEK2 не обнаружено. Статус метилирования генов-супрессоров опухолевого роста RASSF1A, RARв2 и SEMA3B исследован в представительной выборке, включавших 330 образцов РМЖ и РЯ. На рисунке 12 приведены примеры анализа метилирования CpG-островка гена RASSF1A в образцах РМЖ и яичников.

Рисунок 12. Примеры типичных результатов анализа метилирования промоторной области гена RASSF1A с применением метода МС-ПЦР в образцах РМЖ и РЯ. Электрофоретическое разделение в 10 % ПААГ продуктов МС-полимеразной цепной реакции (ПЦР), полученных для образцов ДНК. ПЦР проводили на ДНК конвертированной бисульфитом. Исследован фрагмент 168 п.н. гена RASSF1A. М-маркер длин фрагментов с шагом 10 п.н. (10 bp DNA ladder ). Контроль полноты рестрикции - фрагмент 445 п.н.; контроль целостности ДНК - фрагмент 229 п.н.; анализируемый фрагмент гена RASSF1A 357 п.н.. К (-) - отрицательный контроль ( в отсутствие ДНК). М - маркер длин фрагментов с шагом 100 п.н. (100 bp DNA ladder). Т- опухоль, N- норма.

Выявлена высокая частота аномального метилирования CpG-островка генов RASSF1A, RARв2 и SEMA3B в опухолях молочной железы: 78% (32/41), 46% (26/56), 35% (22/65), в опухолях яичников:73% (33/45), 30% (15/50), 50% (25/51), соответственно. Впервые обнаружено, что у больных ПМЗО метилирование ДНК из образцов ткани рака молочной железы, принадлежащих СрG островкам генов RASSF1A, RARв2 выявлялось практически во всех случаях -90% (11/12) и - 90% (4/5), соответственно. При наличии у больных ПМЗО с поражением яичников, аномальное метилирование CpG островка гена RASSF1A выявлялось в 67% (8/12), а гена RARв2 практически во всех случаях 90% (4/5). На рисунке 13 показано схематическое изображение метилирования промоторного района гена RASSF1A в образцах РМЖ.

Рисунок 13. Применение бисульфитного секвенирования и МЧРА при анализе метилирования CpG-островка промоторной области гена RASSF1A. Сверху даны позиции CpG-динуклеотидов; CpG- динуклеотиды 2,3, 9.. и 31; с левого края приведены номера образцов РМЖ. Черный прямоугольник указывает на выявление метилирования, белый прямоугольник - метилирование не выявлено. Приведены данные анализа для 12-ти образцов ДНК первичных опухолей РМЖ, №341-527, № 510 и 374- образцы, принадлежащие больным с ПМЗО. Справа показаны клинико-гистологические характеристики опухоли: D - инфильтративно-протоковый рак молочной железы; L - инфильтративно-дольковый рак молочной железы, Mix - смешанный; стадия и степень анаплазии опухоли.

Показано, что аномальное метилирование промоторной области гена RASSF1A можно обнаружить на доклинической стадии развития этих опухолей. В морфологически неизмененной ткани уровень метилирования для гена RASSF1A составил 14% (РМЖ) и 5% (РЯ). Отсутствие метилирования этих участков ДНК в крови здоровых доноров (0/15), что позволяет считать метилирование этого гена ранним молекулярным маркером злокачественной трансформации РМЖ и РЯ. Выявлена корреляция частоты метилирования промоторных районов генов RARв2, SEMA3B с клинической стадией и степенью анаплазии РМЖ и РЯ ( рис.14).

Рис.14. А. Частота метилирования промоторного CpG-островка гена RARв2 в образцах ДНК первичных опухолей РМЖ и РЯ по сравнению с образцами ДНК гистологически-нормальной ткани от тех же пациентов. B. Корреляция уровня метилирования (с учетом плотности метилирования CpG островка) гена RARв2 со степенью анаплазии опухоли (1/2 против 3, 1-я пара столбиков) и с клинической стадией рака молочной железы (I/II против III/IV, 2-я пара столбиков). Достоверность рассчитана с помощью теста Фишера (P?0.005).

Как видно на рисунке 14 значение частоты метилирования в ДНК опухолей молочной железы и яичников достоверно выше соответствующих величин, полученных для ДНК морфологически нормальной ткани из этих органов, полученных от тех же пациентов (Р?0,001).

Результаты исследования метилирования промоторных районов генов RASSF1A, RARв2 и SEMA3B, свидетельствуют о значительной роли эпигенетических факторов в регуляции функции этих генов в канцерогенезе рака молочной железы и рака яичников. Выявленные в ходе исследования данные показали, что больные с гиперметилированием гена RASSF1A и RARв2 имеют тенденцию к развитию первично множественных поражений, включающих молочную железу и яичники. Метилирование промоторных районов генов RASSF1A, RARв2, SEMA3B, может использоваться в качестве маркеров в комплексной диагностике и прогнозе этих заболеваний и имеет большие возможности для разработки неинвазивной диагностики рака. Генетически детерминированных формы ПМЗО выявлены в 18,1%, из них семейные формы - 0,8%, в составе наследственных синдромов -17%. Еще одним существенным обстоятельством, в плане использования как диагностического инструмента определения предрасположенности к раку в семьях больных ПМЗО, является: 1) ранний возраст манифестации рака у больного или у члена его семьи; 2) наличие в семье больных с первично множественным поражением злокачественными опухолями; 3) наличие в семье большого числа мультифокального и двустороннего поражения парных органов; 4) большое число пораженных индивидов более чем в одном поколении родственников; 5) наличие в семье специфических опухолевых ассоциаций, которые можно объединить в понятие синдром; 6) выявление мутации гена, специфически связанного с возникновением неоплазии у одного из членов семьи.

Таким образом, разработаны и внедрены, основанные на применении клинико-генеалогических, цитогенетических и молекулярно-биологических исследований, методы оценки генетической детерминации развития рака щитовидной железы, меланомы кожи, первично-множественных злокачественных опухолей и их генетической гетерогенности, позволившие создать в медико-генетическом консультировании этих неоплазий новые возможности для ранней диагностики, профилактики, прогноза развития неоплазий у клинически здоровых родственников из семей этих больных, выборе тактики лечения, вопросах планирования семьи.

Разработаны рекомендации по ранней диагностике и оценке эффективности прогноза развития неоплазий у клинически здоровых родственников из семей этих больных и у ряда из них, с профилактической целью, проведены дородовая диагностика и хирургическое вмешательство, что практически исключало риск развития рака.

Разработан алгоритм медико-генетического консультирования при РЩЖ, МК и ПМЗО, включающий выявление и регистрацию семей с отягощенным семейным анамнезом, уточнение генетического диагноза (в том числе ДНК-диагностику), формирование групп риска и их мониторинг, который можно представить в виде схемы:

ВЫВОДЫ

1. Анализ 1495 больных раком щитовидной железы (РЩЖ), меланомы кожи (МК) и первично множественных злокачественных опухолей (ПМЗО) и 8727 их родственниках 1-й-2-й степени родства выявил основные особенности и генетические закономерности их проявления.

2. Наследственные варианты немедуллярного РЩЖ (НМРЩЖ) установлены в 5% случаев, из них в 3,6% НМРЩЖ встречается у больных с наследственными синдромами. Впервые выявлен синдром семейного папиллярного РЩЖ (1,4%). Обнаружена тенденция к поражению разных органов у больных НМРЩЖ: частота первично множественного поражения в семьях (5,4%) превысила таковую в популяции (0,003%). Выявлена косегрегация НМРЩЖ с неоплазиями почки, молочной железы, МК, толстой кишки.

3. Генетически детерминированные формы медуллярного РЩЖ (МРЩЖ) идентифицированы в 24,9% случаев и клинически они проявляются как синдром МЭН2А, МЭН2Б и синдром семейного МРЩЖ. Молекулярной основой МЭН2 являются мутации в гене RET. Выявлены мутации гена RET в цистеиновых кодонах: 634- в семьях с МЭН2А, 918 -в семьях МЭН2Б, 620 - при синдроме СМРЩЖ. Показано, что причиной клинического полиморфизма МРЩЖ является аллельная гетерогенность.

4. ДНК-диагностика МРЩЖ открывает возможность дородового выявления синдромов МЭН 2 и позволяет разработать терапевтические подходы у носителей мутаций гена RET. Первый опыт пренатальной диагностики в семьях с МЭН2А и синдромом СМРЩЖ показал высокую надежность и эффективность этого метода, а «профилактическая» тиреоидэктомия, проведенная у бессимтомных носителей мутации этого гена, получила гистологическое подтверждение диагноза медуллярного РЩЖ почти во всех случаях.

5. Структура генетической детерминации МК, включает: семейную форму (2,6%); 2) синдром диспластических невусов (1,1%); 3) первично-множественную МК (2,6%); 4) первично-множественные злокачественные опухоли с включением МК (4,1%); 5) МК в составе наследственных синдромов (3,9%).

Риск развития МК для лиц с большим количеством меланоцитарных, ати- пичных и ДН значительно повышается при наличии в семье МК. В семьях больных МК и лиц - носителей множественных и ДН выявлена косегрегация опухоли мозга, МК, рака кожи. Оценки генетических корреляций между ДН-МК, ДН-опухолью мозга, показали высокое генетическое сходство, подтверждая, что опухоли нервной системы и МК могут независимо накапливаться в этих семьях.

6. Установлено, что цитогенетические изменения с наибольшей частотой аккумулируются в трех участках кроткого плеча хромосомы 1(1р), обнаруживая общность в индивидуальном распределении разрывов в регионах 1р22, р31, р32 у индивидов с МК, МК+ДН и у лиц носителей ДН, что ассоциируется с локальной хромосомной нестабильностью и является ранним событием в цепи изменений, предшествующих МК.

7. Гемизиготность по различному набору используемых маркеров (D9S157, D9S161, D9S171, D9S169, D9S301) в районе локализации гена p16/CDKN2A наблюдается у 24% больных МК. Аномальное метилирование промоторной области гена CDKN2A выявляется у 24,3%, однако инактивация этого участка ДНК гена CDKN2A в результате метилирования выявляется у всех больных с первично множественными неоплазиями, включающими МК.

8. ПМЗО являются наследственно детерминированными в 18,1%, из них семейные формы - 0,8%, в составе наследственных синдромов -17,3%. Частота поражения неоплазиями родственников из семей больных ПМЗО (26,9± 1,8 %) превышает аналогичную частоту в популяции (4,0±0,03%) (Р<0,001) и таковую у больных солитарным раком контрольных групп (РМЖ, МК и раком желудка), определяя, что члены семей больных ПМЗО относятся к группе высокого онкологического риска. У больных ПМЗО выявлена органная ассоциация между опухолями, поражающими больных и членов их семей. Тенденция к совместному развитию рака яичников, эндометрия, молочной железы и органов желудочно-кишечного тракта подтверждена оценками генетических корреляций между РЭ и РТК (0,9±0,2); РМЖ и РТК (0,7±0,3); раком желудка и РМЖ (0,8±0,6), указывая на наличие общности генов, детерминирующих предрасположенность к развитию этих опухолей.

9. Частота герминальных мутаций в генах BRCA1 больных ПМЗО с поражением яичников составляет 52,63%, тогда как у больных одним РЯ - 10,3% (р<0,01). У больных ПМЗО - носителей герминальной мутации в гене BRCA1, синдромы «семейного рака» выявлены в 55%. Обнаружено, что локализация неоплазий у родственников больных ПМЗО - носителей мутаций в гене BRCA1, различается в зависимости от типа мутаций: в семьях, ассоциированных с мутацией 5382insC, родственники поражались раком женских репродуктивных органов, предстательной железы и МК; в семьях носителей мутации 300T>G, рак толстой кишки и желудка у членов семей встречался чаще, чем при других типах мутаций, а при мутациях 4153delA и 185delAG родственники чаще поражались раком той же самой анатомической локализации и/или РМЖ.

10. Исследованный статус метилирования генов-супрессоров опухолевого роста RASSF1A, RARв2 и SEMA3B в опухолях молочной железы и яичников показал, что аномальное метилирование промоторных районов этих генов выявляется в опухолях молочной железы, соответственно, в: 78%, 46% и 35%; в опухолях яичников: 73%,30% и 50%, тогда как, при наличии у больных ПМЗО аномальное метилирование CpG островка гена RASSF1A выявлялось практически во всех случаях РМЖ и РЯ, а гена RARв2-во всех случаях РЯ. Выявлена корреляция частоты метилирования промоторных райнов генов RARв2 и SEMA3B с клинической стадией и степенью анаплазии опухоли. Показано, что метилирование промоторных районов генов RASSF1A, RARв2, SEMA3B может использоваться в качестве маркеров в комплексной диагностике и прогнозе этих заболеваний, что дает возможность разработки неинвазивной диагностики рака.

11. Разработан алгоритм медико-генетического консультирования при

РЩЖ, МК и ПМЗО, включающий оценку семейной отягощенности (выявление и регистрацию семей с отягощенным семейным анамнезом), уточнение генетического диагноза (в том числе ДНК-диагностику), формирование групп риска и их мониторинг.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Казубская Т.П.,Ситникова Т.С., Нефедов М.Д., Гарькавцева Р.Ф. Клини-ко -генетический анализ распространенных злокачественных заболеваний. //Советская медицина. 1989, №6, С. 16-19.

2. Гарькавцева Р.Ф., Сотникова Е.Н., Казубская Т.П., Акуленко Л.В.,

Нефедов М.Д., Лиснянский И.Е. Медико-генетические аспекты злокачественных новообразований. // Обзорная информация «Медицина и здравоохранение», серия - Oнкология. 1990, вып.2 ,С.1-18

3. Сельчук В.Ю., Казубская Т.П., Белев Н.Ф., Нефедов М.Д., Гарькавцева Р.Ф. Генетические аспекты первично-множественных злокачественных новообразований.// Вестник ВОНЦ АМН СССР.1990 , № 1, С.28-31.

4. Казубская Т.П., Ситникова Т.С., Харкевич Г.Ю., Демидов Л.В., Гарькавцева Р.Ф. Роль наследственных факторов в возникновении меланомы кожи.// Всесоюзный симпозиум «Клиника и лечение меланомы кожи» Саратов. 1990, С.28-30.

5. Сельчук В.Ю., Казубская Т.П. Генетическая гетерогенность и прогнозирование первично-множественных злокачественных новообразований.// YI республиканнская науч. конф. онкологов Молдавии, Кишинев.1990, С. 9-10.

6. Sitnikova T., Kazubskaya T. Clinical genetic analisys malignat melanoma.// Eur. J. Cancer EACR-XI, Genua, Italy, 1991, Suppl.3, V. 27, Post. 2015, S.24

7. Гарькавцева Р.Ф., Казубская Т.П., Сельчук В.Ю. Анализ генетической предрасположенности к раку в семьях больных первично-множественными злокачественными новообразованиями.// Цитология и генетика. Киев, 1992, Т. 21, С.32-36.

8. Казубская Т.П., Харкевич Г.Ю., Демидов Л.В., Мусатов В.К., Гарькавцева Р.Ф. Диспластические невусы и их значимость для идентификации предрасположенности и ранней диагностики меланомы.// Вестник ОНЦ АМН России. 1993, № 1, С.20-25.

9. Сокова О.И., Кириченко О.П.,Чеботарев А.Н., Казубская Т.П., Харкевич Г.Ю., Мусатов В.К., Копнин Б. П. Повышенная частота повреждений некоторых участков хромосом в клетках крови больных меланомой и/или диспластическими невусами.// Вестник ОНЦ России. 1993, № 1, С. 34-38.

10. Kazubskaya T., Selchuk V., Belev N.,Garcavtseva R. Genetic-epidemiological study of multiple primary malignant neoplasms.// Cancer Detection and Prevention, 1993, V. 17, № 99, Р.114-115.

11. Харкевич Г.Ю., Казубская Т.П. Идентификация наследственных вариантов меланомы кожи.// 50-лет Акад. мед. Наук, Москва. 1994, C.153-154.

12. Selchuk V., Kazubskaya T., Klimenkov A., Garkavtseva R. Multiple Primary Malignant Neoplasms.// XVI International Cancer Congress. 1994, 30 Oct.-5 Nov. India, Delhi, Ref -00110, P.284

13. Гарькавцева Р.Ф., Ситникова Т.С., Казубская Т.П., Демидов Л.В., Харкевич Г.Ю. Генетический анализ предрасположенности к развитию меланомы кожи. Сообщение 1. Распространеность, семейное изучение, генетическая гетерогенность.// Генетика. 1995, Т.31, №11, С.557-1561.

14. Харкевич Г.Ю., Казубская Т.П.,Агапова Р.К., Мусатов В.К., Трубников В.И., Гарькавцева Р.Ф. Генетический анализ предрасположенности к развитию меланомы кожи. Сообщение 2. Взаимосвязь и патогенетическая общность меланомы кожи с диспластическими невусами.// Генетика.1995, Т.31, №11, С.1562-1565.

15. Казубская Т.П., Гарькавцева Р.Ф. Генетический анализ и разработка принципов прогнозирования злокачественных опухолей в семьях больных раком желудка и первично множественными новообразованиями.// Генетика. 1995, Т.31, № 34, С.410-414.

16. Базов И.В., Аксенова М.Г., Казубская Т.П., Смирнов А.В., Забаровский Е.Р. Брага Э.А. Анализ аллельных потерь в области короткого плеча хромосомы 3 в карциномах почки, тела матки и яичников с помощью три- и тетрамерных маркеров.// Молекулярная биология. 1997, №31,С. 805-809.

17. Kasubskaya T.P., Bazov I.V.,Braga E.A., Pugacheva E.M., Ermilova V.D Garkavtseva R.F. Human chromosome 3p deletion mapping in carcinomas of kidney, lang and reproductivе organs.// 17th International Cancer Congress. 1998, Brazil, A.600, P.141.

18. Braga E, Pugacheva E, Bazov I, Ermilova V, Kazubskaya T, Garkavtseva R,

Mazurenko N, Kisseljov F.,Liu J, Garkavtseva R, Zabarovsky E, Kisselev L. Comparative allelotyping of the short arm of human chromosome 3 in epithelial tumors of four different types.// FEBS Letters.1999 July 9; V.454, №3, Р.215-219.

19. Амосенко Ф.А., Козлова В.М., Любченко Л.Н., Казубская Т.П., Гарькавцева Р.Ф. Мутации в протоонкогене RET у больных с медуллярным раком щитовидной железы и возможности доклинической диагностики и профилактического лечения носителей этого заболевания.// Вестник онкологического научного центра им.Н.Н.Блохина РАМН. 2000, № 1, С.20-26.

20. Braga E., Bazov, I., Senchenko V., Liu J, Loginov V., Ermilova V., Kazubskaya T., Garkavtseva R. Common deletion regions on chromosome 3p in different types of cancer.// Abstracts of HUGO's Human Genome Meeting “HGM'99”, Vancouver, Canada, April, 2000, Р.75.

21. Гарькавцева Р.Ф., Казубская Т.П., Белев Н.Ф., Сельчук В.Ю. Генетика рака желудочно-кишечного тракта.// Современная онкология. 2001,Т.3, №4. С.151-153.

22. Казубская Т.П., Мусатов В.К., Парфенова Д.Н., Михайловский А.В., Трубников В.И., Сельчук В.И., Гарькавцева Р.Ф. Результаты длительного активного наблюдения и клинико-генетический анализ пигментных невусов.// Вестник дерматологии и венерологии. 2001, №1, С.4-9.

23. Гарькавцева Р.Ф., Казубская Т.П., Любченко Л.Н, Козлова В.М., Белев Н.Ф., Сельчук В.Ю. Наследственный рак: идентификация, генетическая гетерогенность, медико-генетическое консультирование.// Вестник РАМН. 2001, №9, С.27-33.

24. Амосенко Ф.А.,Фриллинг А.,Козлова В.М.,Любченко Л.Н., Казубская Т. П., Гарькавцева Р.Ф. Молекулярная диагностика множественной эндокринной неоплазии 2 типа.// Вестник Академии наук. 2001, №2,С.34-37.

25. Braga E.,Bazov I.,Ermilova V., Kazubskaya Т., еt al. Critical tumor-suppressor gene regions on chromosome 3p in major.// Int. J.Cancer.2002,V.100,P.534-41.

26. Гарькавцева Р.Ф., Казубская Т.П., Лиснянский И.Е. Генeтические аспекты медуллярного рака щитовидной железы.// Проблемы эндокринологии. М. 2002, Т.48. №.4. С.16-20.

27. Казубская Т.П., Мусатов В.К., Михайловский А., Сельчук В.Ю., Шабанов М.А., Трофимов Е.И. Меланома кожи: клинико-генетическая гетерогенность и принципы медико-генетического консультирования.// Российский онкологический журнал. 2003, №3, С.26-33.

28. Амосенко Ф.А., Бржезовский В.Ж., Любченко Л.Н., Шабанов М.А.,

Козлова В.М., Казубская Т.П., Ванушко В.Э. Анализ мутаций в прото-онкогене RET у российских больных с медуллярным раком щитовидной железы.// Генетика. 2003, Т.29, №6. С.1-7.

29. Белев Н.Ф., Самотыя Е.Е., Халипли С.Д., Софрони М.Ф., Казубская Т.П., Гарькавцева P. Ф. Сегрегационный и генетико-дисперсионный анализ предрасположенности к первично-множественным злокачественным новообразованиям.// Съезд онкологов республики Казахстан. Алма-Ата. 2003,С. 8-9.

30. Казубская Т.П., Козлова В.М., Мусатов В.К, Михайловский А.В., Шабанов М.А.,Трофимов Е.И., Сельчук В.Ю. Идентификация наследственных вариантов меланомы кожи.// Генетика. 2004, Т.40, №1, С.1-9.

31. Senchenko V., Liu J, Loginov V, Bazov I. ,Ermilova V., Kazubskaya T., Garkavtseva R, Braga E., ZabarovskyYu. Discovery of frequent homozygous deletions in chromosome 3p21.3 LUCA and AP20 regions in renal, lung and breast carcinomas.// Oncogene. 2004, V.23, №34, P.5719 -5728.

32. Логинов В.И.,Маликова А.В.,Серегин Ю.А., Ходырев Д.С, Казубская Т.П., Ермилова В.Д., Киселев Л.Л, Брага Э.А. Метилирование промоторного региона гена RASSF1A кандидата в опухолевые супрессоры в первичных эпителиальных опухолях.// Молекулярная биология. 2004, Т.38, № 4, С.654-667.

33. Amosenko F., Kazubskaya T. Mutation analysis RET proto-oncogene in Russian patients with inherited medullary thyroid carcinoma.// 30th American Society of Preventive Oncology. 2006, Bethesda, USA, P. 37.

34. Корчагина Е.Л., Казубская Т.П., Сазонова М.А., Гарькавцева Р.Ф. Роль наследственной предрасположенности в возникновении рака толстой кишки. // Медицинская генетика. 2005., Т.4, №5, C.209-210.

35. Федорова О.Е., Любченко Л.Н., Паяниди Ю.Г., Казубская Т.П., Амоссенко Ф.А., Наседкина Т.В. Использование биочипов при изучении распространенных мутаций в генах BRCA 1/2 и CHEK 2 у больных органоспецифическим раком яичников и первично-множественными злокачественными новообразованиями с поражением яичников (российская популяция).//Молекулярная биология. 2007, Т.41, №1, С.37-42.

36. Казубская Т.П., Козлова В.М., Шишков Р.В., Поляков В.Г., Бржезовский В.Ж., Амоссенко Ф.А., Гарькавцева Р.Ф. Синдром множественных эндокринных неоплазий типа 2А. Профилактическая тиреоидэктомия.// Детская онкология (Pediatric oncology). 2007, №2 , С.24-31. 37. Казубская Т.П., Белев Н.Ф, Нефедов М.Д., Паяниди Ю.Г., Сельчук В.Ю. Клинико-генетический анализ первично множественных злокачественных новообразований.// Российский онкологический журнал.2007, №2, С.4-9.

38. Казубская Т.П, Амосенко Ф.А, Козлова В.М., Гарькавцева Р.Ф. Диагностика и профилактика медуллярного рака в семьях больных синдромом множественной эндокринной неоплазии тип 2.// Материалы XI Российского онкологического конгресса. Москва 2007. Издательская группа РОНЦ, С.179

39. Kazubskaya T., Shatalova E., Loginov V., Sudomoina M., Blanchard P.,

Favorova O.O., Braga E.A. Genetic and epigenetic alterations associated with breast cancer risk in Russian women.// 19th International Congress on Anti Cancer Treatment. Paris, France. 2008, Р.154, Р.182.

40. Казубская Т.П., Козлова В.М., 5. Амосенко Ф.А., Шишков Р.В., Поляков В.Г., Бржезовский В.Ж., Любаев В.Л., Гарькавцева Р.Ф. Синдромы множественных эндокринных неоплазий и медуллярный рак щитовидной железы. // Российский онкологический журнал. 2008, №1, С. 4-9. 41. Логинов В.И., Базов В.И., Ходырев Д.С., Пронина И.В., Казубская Т.П., Ермилова В.Д., Гарькавцева Р.Ф., Забаровский Е.Р., Брага Э.А. Районы потенциальных генов-супрессоров эпителиальных опухолей почки, молочной железы и яичников на хромосоме 3 человека.// Генетика. 2008, Т. 44, С.250-6

42. Ходырев Д.С., Логинов В.И., Пронина И.В., Казубская Т.П., Гарькавцева Р.Ф., Брага Э.А. Метилирование промоторной области гена RAR-beta2 в опухолях почки, молочной железы и яичников. //Генетика. 2008, T. 44, C. 1126 -1132. гетерогенность злокачественный опухоль наследственный

43. Корчагина Е.Л., Белев Н.Ф., Казубская Т.П., Барсуков Ю.А.,Тимофеев Ю.М., Музаффарова Т.А., Карпухин А.В., Гарькавцева Р.Ф. Клинико-генетические аспекты рака толстой кишки и идентификация его наследственных форм. // Колопроктология. 2008, Т.2, №24, С.9-14. 44. Логинов В.И., Ходырев Д.С., Пронина И.В., Казубская Т.П., Гарькавцева Р.Ф., Брага Э.А. Изменение уровня метилировния гена SEMA3B в эпителиальных опухолях.// Мол. биология. 2009, Т.43, №3, С.436-445. 45. Гарькавцева Р.Ф., Казубская Т.П., Любченко Л.Н. Роль наследственных факторов в развитии злокачественных новообразований. // В справочнике практического врача «Онкология» под ред. чл-корр. РАМН, проф. И.В. Поддубной, Москва 2009, издательство «МЕДпресс-информ», С.18-30.

46. Брага Э.А., Логинов В.И., Пронина И.В., Ходырев Д.С. Казубская Т.П.,

Ермилова В.Д., Забаровский Е.Р., Гарькавцева Р.Ф. От структурно-функциональных изменений в генах хромосомы 3 в эпителиальных опухолях к онкомаркерам.// II Российский симпозиум «Молекулярно-генетическая диагностика злокачественных опухолей человека» Вестник РОНЦ им.Н.Н.Блохина РАМН. 2009, Т.2, №1, С.79-80.

47. Казубская Т.П. Диагностика наследственной предрасположенности к паиллярному и фолликулярному раку щитовидной железы.// Российский онкологический журнал. 2010, № 2, принята в печать.

Автор выражает глубокую признательность и благодарность проф. д.м.н. Р.Ф.Гарькавцевой, проф. д.м.н. В.Ю.Сельчуку, за постоянный интерес к данным исследованиям, за обсуждение результатов диссертационной работы, критические замечания и большую помощь при подготовке рукописи.

Автор выражает искреннюю благодарность, д.б.н. Э.А. Браге, к.б.н. Ф.А. Амосенко, к.б.н. Т.А. Наседкиной, проф. д.м.н. Н.Ф. Белеву, проф. д.м.н. Д.В. Залетаеву, и всем коллегам, сотрудничество с которыми позволило осуществить эту работу.

Размещено на Allbest.ru