Размещено на http://www.allbest.ru/

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

Коррекция пролиферации кератиноцитов с использованием липосом и её клинико-лабораторная оценка как направление в наружной терапии псориаза

14.01.10 - кожные и венерические болезни

14.03.10 - клиническая лабораторная диагностика

На правах рукописи

Грашин Роман Арикович

Санкт-Петербург 2009

Работа выполнена в ФГОУ ВПО «Военно-медицинская академия имени С.М. Кирова» МО РФ

Научные консультанты:

доктор медицинских наук профессор Барбинов Вячеслав Витальевич;

доктор медицинских наук профессор Карпищенко Анатолий Иванович.

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук профессор Горланов Игорь Александрович;

доктор медицинских наук профессор Ключарева Светлана Викторовна;

доктор медицинских наук профессор Эмануэль Владимир Леонидович.

Ведущая организация: ГОУ ДПО «Санкт-Петербургская медицинская академия последипломного образования Федерального агенства по здравоохранению и социальному развитию».

Защита диссертации состоится “___” декабря 2009 года в ___ часов на заседании диссертационного совета Д 215.002.01 в ФГОУ ВПО «Военно-медицинская академия имени С.М. Кирова» МО РФ (194044, г. Санкт-Петербург, ул. Академика Лебедева, дом 6).

С диссертацией можно ознакомиться в фундаментальной библиотеке ФГОУ ВПО «Военно-медицинская академия имени С.М. Кирова» МО РФ

Автореферат разослан “____” 2009 года

Ученый секретарь совета доктор медицинских наук профессор Пономаренко Геннадий Николаевич

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования. Согласно современным представлениям, псориаз - это хронический воспалительный иммунозависимый генодерматоз, основное патогенетическое звено которого проявляется усилением пролиферативной активности кератиноцитов, приводящей к нарушению процессов кератинизации [Самцов А. В. И соавт., 2002; Барбинов В.В. и соавт.,2008]. При этом в очагах поражения кожи митотическая активность эпидермальных клеток возрастает настолько, что время выхода кератиноцитов на поверхность кожи сокращается по сравнению с нормой с 14 до 2 суток, приводя при этом к полному обновлению эпидермиса всего за 5-6 дней вместо 28 [Шарапова Г.Я. и соавт., 1989]. Подобная скорость пролиферации в норме наблюдается лишь в клетках фолликулярного эпителия и клетках слизистых оболочек. Тем не менее, многочисленные исследования клеточного метаболизма не выявили нарушений, соответствующих изменениям, наблюдаемым при опухолевой прогрессии [Мошкалов А.В.,1995; Шилов В.Н., 2001]. В связи с этим большинство исследователей относит псориаз к сугубо воспалительным дерматозам, а ускоренную клеточную пролиферацию трактуют как результат дисбаланса в системе клеточных регуляторных механизмов.

К таким механизмам, относятся, в том числе, процессы свободнорадикального окисления и антиоксидантной защиты по изучению которых накоплен достаточный опыт. Однако, имеется ряд сообщений в которых указано, что характер процессов свободнорадикального окисления (СРО) при псориазе отличен от общепринятого и непосредственно в клетках кожи имеет инвертный характер [Шилов В.Н. и соавт., 1997, 2001; Хышиктуев Б.С. и соавт., 2000; Тарасенко Г.Н. и соавт., 2002]. Участие этих процессов в пролиферации и дифференцировке кератиноцитов, несомненно, представляет немалый интерес, а их регуляция - новые возможности в наружной терапии.

На сегодняшний день предложено несколько теорий возникновения и развития псориаза, которые в целом не противоречат, а скорее дополняют друг друга. Доминирующей является теория Т-клеточно-опосредованного воспаления в коже, которая объясняет патогенез данного заболевания активацией нескольких субпопуляций лимфоцитов, которые управляют клеточным иммунитетом и контролируют его [Шегай М.М. и соавт., 1998; Шилов В.Н., 2000, 2001; Кrueger J.G., 2002]. Существует также и теория «псориатина» - неопознанного цитокина псориаза, вероятно, продуцируемого самими кератиноцитами и таким образом поддерживающими сам воспалительный и пролиферативный процессы, а также есть ещё ряд других теорий [Скрипкин Ю.К., 1995; Мяделец О.Д. и соавт., 1997].

Оптимальный объём знаний об этиопатогенезе заболевания позволяет разрабатывать адекватную программу терапии. Хотя многие из применяемых сегодня методов лечения принято считать патогенетическими, следует признать, что некоторые их них являются эмпирическими, в лучшем случае симптоматическими и, более того, применение почти всех методов (исключая цитостатические и кортикостероидные препараты, ультрафиолетовое облучение) даёт положительный результат примерно в одни и те же сроки [Шилов В.Н. и соавт., 1995].

Для наружной терапии псориаза традиционно используют препараты следующих групп: разрешающие средства, включая гидроксиантроны (Дёготь, Антралин, Дитранон, Цигнолин); глюкокортикоидные препараты различной силы, как отдельные стероиды, так и в комбинации с кератопластическими препаратами, антибиотиками, анестетиками и другими средствами (Элоком С, Дипросалик, Полькортолон и пр.); синтетические ретиноиды (Тезаротен); синтетические аналоги витамина D3 (Дайвонекс, Дайвобет) [Соколовский Е.В., ред., 1999; Иванов О.Л. и соавт., 2005; Терлецкий О.В., 2006]. Применение средств для наружной терапии входит в комплекс лечебных мероприятий, направленных в конечном итоге на нормализацию пролиферации клеток кожи. Наружная терапия при этом нередко является ведущей, особенно в стационарном периоде псориаза. Необходимо отметить, что далеко не все препараты являются высокоэффективными и нередко требуют длительного подбора и ещё более длительного применения. Кроме того, препараты всех групп имеют свои недостатки. Так, разрешающие средства обладают выраженным раздражающим действием и не могут быть использованы в остром периоде псориаза [Соколовский Е.В., ред., 1999; Самцов А. В. И соавт., 2002]. Топические кортикостероиды являются гормонами, применение которых вызывает ухудшение регенерации эпидермиса, а при длительном применении подавление иммунологической функции и атрофию кожи, ослабление лечебного эффекта. Такими же недостатками обладают и производные витамина D3. Ретиноиды, несмотря на их высокую эффективность, достаточно токсичны [Иванов О.Л. и соавт., 1998; Хойбеш М. и соавт., 1998; Жилова М. Б., 2000].

Препараты для наружной терапии значительно отличаются по механизму своего действия, но ни один из них не обладает комплексным влиянием на клетку с учётом тех звеньев патогенеза, которые приводят к снижению пролиферации и усилению дифференцировки кератиноцитов, устранению иммунологических сдвигов и воспалительного процесса. Отдельные их них, например, созданный на основе витамина D3, избирательно действует на ядерные рецепторы гистон-нуклеинового комплекса и таким образом подавляет продукцию интерлейкина-1 [Кубанова А.А., 1993; Никулин Н. К. и соавт., 2000]. Цинка пиритионат (Скин-кап) обладает выраженным цитостатическим эффектом, блокируя механизмы репликации нуклеиновых кислот [Соколовский Е.В., ред., 1999]. Кортикостероиды угнетают синтез лейкотриенов, также воздействуя на ядерный аппарат клетки [Суворов А.П., 1988; Шарапова Г.Я. и соавт., 1989; Суворова К.Н., 1996].

Одним из направлений работы явилась необходимость обеспечения эффективной доставки и проникновения лекарственных соединений ко всем клеточным слоям эпидермиса независимо от его толщины на различных участках тела. Доказано, что мембранные структуры клетки практически не воспринимают водорастворимые соединения, наносимые на поверхность рогового слоя, даже если они входят в состав мазей и кремов [Марголис Л.Б. и соавт., 1986; Каплун А. П. и соавт., 1998]. Иными словами, для решения задачи о доставке лекарственных веществ ко всем слоям кожи необходим проводник, способный проникать как внутрь клетки, так и проводить водорастворимые соединения в глубокие участки межклеточного пространства. Есть мнение, что наиболее удобным и вместе с тем физиологичным энхансером являются липосомы, по созданию которых в мире накоплен достаточный опыт, к сожалению, пока, в основном, только лабораторный и косметологический [Бердичевский В.П. и соавт., 1979; Грегориадис Г., 1983; Чубатова С.А. и соавт., 1999; Lasic D., 1993] без широкого практического применения в дерматологии.

Таким образом, слабо изученные механизмы патогенеза болезни, недостатки наружной терапии показали необходимость исследования молекулярных механизмов пролиферации кератиноцитов при псориазе, разработки лекарственных препаратов, способных комплексно и при этом мягко воздействовать на рецепторный аппарат клеток кожи, стабилизировать метаболические процессы, создавая условия для их окончательной дифференцировки и полноценного кератинообразования.

Цель исследования: разработать новое направление наружной терапии псориаза, основанное на комплексной регуляции процессов пролиферации, для чего создать комбинированное лекарственное средство в липосомальной форме, разработать лабораторные показатели его биологической активности и изучить его клиническую эффективность.

Задачи исследования.

Исследовать биорегулирующее действие отдельных лекарственных препаратов, включённых в липосомы, на культуры кератиноцитов больных псориазом для выбора наиболее эффективных из них.

Изучить биорегулирующее действие комбинаций лекарственных препаратов, включённых в липосомы, на культуры кератиноцитов больных псориазом для выбора оптимальной, в наибольшей степени подавляющей их пролиферацию и разработать высокоэффективное комбинированное средство для наружной терапии.

Изучить клиническую эффективность комбинированного липосомального препарата для наружной терапии псориаза.

Провести сравнительный анализ динамики разрешения псориатических высыпаний у больных, получавших современные препараты для наружной терапии псориаза с новым антипролиферативным кремом.

Исследовать молекулярные механизмы регуляции пролиферативно-дифференцировочной активности кератиноцитов в культуре клеток на основе клинико-лабораторных методов комплексной оценки процессов свободнорадикального окисления и антиоксидантной защиты.

Научная новизна.

На основе разработанного метода определения чувствительности кератиноцитов подтверждена теория происхождения псориаза как воспалительного дерматоза.

Разработано новое научное направление в наружной терапии дерматозов, основанное на использовании высокоэффективных фармацевтических субстанций, ранее не применявшихся в дерматологии и нанотехнологий (липосом), обеспечивая, таким образом, помимо высокой клинической эффективности, нивелирование побочных эффектов, возникающих при применении современных наружных лекарственных средств.

Установлено, что культуры кератиноцитов больных псориазом выращенные из клеток как поражённых, так и здоровых участков кожи, обладают одинаково высокой пролиферативной активностью и способны длительное время самоподдерживаться без добавления специальных ростовых факторов.

На изолированных культурах псориатических кератиноцитов, с использованием специально разработанного метода оценки чувствительности клеток, установлен антипролиферативный эффект лекарственных препаратов включённых в липосомы и их комбинаций.

На изолированных культурах кератиноцитов больных псориазом с использованием лабораторно-диагностических методов показано поведение систем свободнорадикального окисления и антиоксидантной защиты и установлена их роль в регуляции клеточной пролиферации, что дополняет и расширяет представления о патогенезе псориаза и способах его лечения.

Практическая значимость.

Разработанное направление наружной терапии псориаза и созданный на этой основе комбинированный лекарственный препарат в форме крема позволяют проводить и в дальнейшем совершенствовать эффективную наружную терапию больных псориазом как в остром (с использованием общей терапии), так и в стационарном (в качестве монотерапии) периодах.

Разработан и апробирован принципиально новый негормональный липосомальный комбинированный лекарственный препарат для наружной терапии псориаза.

Разработанный лабораторный метод определения чувствительности кератиноцитов с использованием клеточных культур позволяет тестировать клетки кожи к известным препаратам для выбора оптимальной терапии ещё до начала лечения и таким образом максимально индивидуализировать проведение наружной терапии, а также создавать новые эффективные препараты комбинированного действия.

Результаты, полученные при изучении систем свободнорадикального окисления и антиоксидантной защиты свидетельствуют о необходимости включения в состав рецептур для наружной терапии псориаза препаратов прооксидантного действия.

Личное участие автора в получении результатов.

Автор принимал непосредственное участие в получении липосомальных препаратов и их комбинаций, в разработке и внедрении метода тестирования липосомальных препаратов и их влияния на активность пролиферации в культурах клеток, в разработке и создании липосомального комбинированного препарата, а также непосредственно проводил сбор и обработку материала в ходе клинической части исследования. Автор лично выполнил все методики по исследованию систем свободнорадикального окисления и антиоксидантной защиты.

Автор составил план настоящего исследования, сформировал базу данных, провёл аналитический обзор отечественной и зарубежной литературы, статистическую обработку и обобщение полученных результатов, сформулировал выводы и практические рекомендации.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту.

1. Культуры кератиноцитов кожи больных псориазом как с поражённых, так и с непоражённых участков обладают высокой пролиферативной активностью и способны длительное время самоподдерживаться без добавления специальных ростовых факторов, что свидетельствует о том, что кератиноциты больного псориазом способны секретировать собственные факторы роста.

2. Лекарственные препараты механизм действия, которых, связан с подавлением клеточной пролиферации: пентоксифиллин, пирроксан, селенит натрия, глутатион окисленный и сальбутамол, переведённые в липосомальную форму, обладают антипролиферативным действием на кератиноциты больных псориазом (подавление включения 3Н-тимидина в 4,2; 4,2; 3,2; 2,5 и 2.2 раза соответственно).

3. Комбинации из наиболее эффективных липосомальных лекарственных препаратов (пентоксифиллина, селенита натрия и пирроксана, а также пентоксифиллина, селенита натрия и этмозина) целесообразно использовать в качестве лекарственных средств для наружной терапии псориаза, так как они обладают синергидным действием (подавление включения 3Н-тимидина в 36,2 и в 23 раза соответственно).

4. Комбинированный препарат, в состав которого входят липосомальные: пентоксифиллин, пирроксан и селенит натрия является высокоэффективным средством для наружной терапии псориаза и может быть использован как в остром, так и в стационарном периоде заболевания, так как не обладает раздражающим эффектом и по клинической эффективности не уступает современным наружным средствам (чувствительность 93,9% стационарных и 90% амбулаторных больных; скорость разрешения псориатических элементов кожной сыпи: 4-5 нед у больных с ограниченной и 7-8 нед при распространённой формах болезни).

5. При псориазе увеличение интенсивности свободнорадикального окисления ведёт к остановке клеточной пролиферации, а высокий уровень антиокислительной защиты её поддерживает.

Реализация и внедрение полученных результатов работы.

На основе полученных в ходе исследования результатов разработан и внедрён в практику липосомальный биорегулирующий препарат для наружной терапии псориаза. Патент на изобретение №2196583 «Средство для наружной терапии псориаза и способ его изготовления» от 20.01.2003 г.

Разработан лабораторный метод определения чувствительности кератиноцитов больных псориазом к лекарственным липосомальными препаратам, в том числе и к ранее не применявшимся в дерматологии в качестве наружных средств. Патент на изобретение № 2361219: «Способ определения чувствительности кератиноцитов больного псориазом к лекарственным препаратам» от 16.04.2008 г.

Результаты, полученные в ходе исследования, были использованы при разработке и внедрении в клиническую практику дерматологических учреждений Санкт-Петербурга препаратов для наружной терапии и профилактики различных дерматозов, а также серии липосомальной косметической продукции.

Рекомендации, разработанные на основании полученных в ходе диссертационного исследования данных, используются в научной работе и учебном процессе на кафедре кожных и венерических болезней и кафедре клинической биохимии и лабораторной диагностики Военно-медицинской академии, на кафедрах и клиниках дерматовенерологии СПбГМУ им И.П. Павлова, СПбГМА им. И.И. Мечникова, в лечебно-диагностическом процессе в кожно-венерологических диспансерах Санкт-Петербурга и медицинском центре «Альтермед».

Апробация и публикация материалов исследования.

Основные положения диссертационного исследования были доложены и обсуждены на: 1-ом Европейском конгрессе по псориазу (Париж, 2004); I Всероссийском конгрессе дерматовенерологов (Санкт-Петербург, 2005); II Всероссийском конгрессе дерматовенерологов (Санкт-Петербург, 2007); Всероссийской научно-практической конференции «Актуальные проблемы лабораторной диагностики" (Санкт-Петербург, 2008); VI Всероссийской научно-практической конференции «Актуальные вопросы лечения в многопрофильных учреждениях" (Санкт-Петербург, 2003); Юбилейной научной конференции посвящённой 80-летию кафедры микробиологии ВМедА и 300-летию основания Санкт-Петербурга «Современная микробиология клинической медицине» (Санкт-Петербург, 2003); Юбилейной научно-практической конференции «Актуальные вопросы дерматологии, косметологии и ИППП»: посвящённой 10-ти летию кафедры кожных и венерических болезней с курсом дерматокосметологии ФУВ (Москва, 2003); второй научно-практической конференции «Санкт-Петербургские дерматологические чтения» (Санкт-Петербург, 2008).

По теме диссертационного исследования опубликовано 30 научных работ, из них 10 в рецензируемых журналах, получены патенты на 2 изобретения.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, 5 глав, включающих обзор литературы, общую характеристику материалов и методов исследования, 3 главы полученных результатов с их обсуждением, заключения и выводов. Работа изложена на 231 странице машинописного текста, содержит 12 рисунков, 9 таблиц. Список литературы состоит из 368 источников, из них 252 отечественных и 114 иностранных авторов.

липосомальный псориаз лекарственный наружный

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Для достижения цели исследования и решения поставленных задач работа проводилась по двум основным направлениям - экспериментальному и клиническому.

Экспериментальная (клинико-лабораторная) часть исследования заключалась в последовательном проведении следующих этапов работы:

- приготовления липосом и лекарственных липосомальных комбинаций;

- культивирования кератиноцитов, полученных от больных псориазом;

- изучения антипролиферативной активности отдельных липосомальных фармацевтических препаратов и их комбинаций на полученных культурах кератиноцитов;

- изучения состояния систем СРО и АОЗ на полученных культурах кератиноцитов.

Клиническая часть исследования предусматривала:

-изучение клинической эффективности созданного препарата для наружной терапии - крема Липсор в амбулаторных и стационарных условиях;

-сравнение крема Липсор с наиболее эффективными современными препаратами для наружной терапии псориаза.

1. Методы приготовления липосом и лекарственных липосомальных комбинаций. Изготовление липосом и включение в них лекарственных субстанций производилось по методу Г. Грегориадиса, А. Аллисона (1983), в нашей модификации [Грегориадис Г. и соавт., 1983; Грашин Р.А., 2008].

Таким образом, были приготовлены липосомальные эмульсии: пентоксифиллина, этмозина гидрохлорида, сальбутамола, натрия селенита, глутатиона окисленного, кальция хлорида и фторурацила, а также различные липосомальные комбинации из данных препаратов. Размер частиц составлял от 50 до 200 нм.

2. Культуральные методы исследования. Выделение первичной культуры кератиноцитов человека осуществлялось по методу Rheinwald J.G., Green H. (1975), в нашей модификации [Грашин Р.А., 2008;]. В этих условиях кератиноциты образовывали колонии, вытесняя фибробласты. Такая система может быть использована для изучения не только дифференцировки клеток кожи и различных ее патологических изменений, но и для тестирования лекарственных препаратов, влияющих на эпидермис.

Метод радиометрической оценки пролиферативной активности клеток. Влияние составных частей антипсориатического крема Липсор оценивали по включению в клетки меченых предшественников синтеза ДНК. Все эксперименты по определению пролиферативной активности кератиноцитов проводили в 4 параллельных пробах. Радиоактивность измеряли на синтиляционном анализаторе «Tracor Analytic Delta 300» (6891 Liquad Scintillation System) (Великобритания). Фотографии изготавливали с помощью компьютерной системы анализа изображения, состоящей из стандартного светового микроскопа, монохромной камеры «Chiper» (США), платы захвата изображения «Utech» (США) и программного морфометрического пакета «Image-Pro-Plus» (США).

3. Методы исследования свободнорадикального окисления и антиоксидантной защиты тканей на модели культур кератиноцитов при использовании отдельных липосомальных препаратов и их комбинаций.

Исследование параметров СРО и антиокислительной защиты (АОЗ) проводилось до и после воздействия препаратов, наиболее сильно подавляющих пролиферативную активность: пентоксифиллина, пирроксана, натрия селенита, сальбутамола, а также смесей препаратов, состоящих из пентоксифиллина, пирроксана, натрия селенита - как наиболее активной и пентоксифиллина и натрия селенита - как наименее активной в отношении антипролиферативной деятельности. Поражённый и непоражённый участки кожи мы в данном исследовании не дифференцировли, т.к. ранее было установлено, что кератиноциты с обоих участков у всех пациентов после добавления ростовых факторов обладали практически одинаковой способностью к росту и размножению.

Для исследования процессов свободнорадикального окисления и антиокидантной защиты клетки культур снимались с лунок 2 раза: после того как активно пролиферировали, т.е. перед воздействием липосомальных смесей и отдельных препаратов, и после воздействия, через 48 часов, т.е. после подавления пролиферации. В качестве контроля использовались культуры кератиноцитов здоровых доноров.

Для определения активности глуатионпероксидазы (ГП), глутатионредуктазы (ГР), супероксиддисмутазы (СОД) каталазы и глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы (Гл-6ф-ДГ) использовали очищенную цитоплазматическую фракцию, которую получали дифференциальным центрифугированием.

Определение концентрации восстановленного глутатиона производили по методике G.L. Ellman (1959) [Карпищенко А.И., ред., 2002] в нашей модификации. Концентрацию восстановленного глутатиона выражали в мкмоль/г ткани.

Определение концентрации сульфгидрильных групп белков в кератиноцитах производили по методу G.Bellomo (1990). Содержание выражали в мкмоль/г ткани.

Определение концентрации диеновых конъюгатов осуществляли по методике И.Д. Стальной (1977) [Карпищенко А.И., ред., 2002] в нашей модификации. Концентрацию ДК выражали в нмоль/г ткани.

Определение концентрации малонового диальдегида осуществляли по методу M. Uchiyama (1978) в нашей модификации [Карпищенко А.И., ред., 2002]. Концентрацию ТБК-продуктов выражали в нмоль/г ткани.

Определение общей антиокислительной активности производили методом Е.Б. Спектор, А.А. Ананенко и Л.Н. Политовой (1984) в модификации Н.С. Немченко (1989).

Определение активности глутатионпероксидазы (КФ 1.11.1.9) производили по методу А.Н. Гавриловой (1986). Активность фермента выражали в ммоль/(мин·г белка).

Определение активности глутатионредуктазы (КФ 1.6.4.2) осуществляли методом I. Carlberg и B. Mannervik (1985). Активность выражали в мкмоль/(мин·г белка).

Активность глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы (КФ 1.1.1.49.) определяли по методу A.Kornberg и соавт. (1955). Результаты выражали в мкмоль/(мин·г белка).

Определение активности супероксиданиондисмутазы (КФ 1.15.1.1.) проводилось по методу Чумакова В.Н. (1977). Результаты выражали в мкмоль/мин . г белка.

Для определение активности каталазы (КФ 1.11.1.6.) использовался метод М.А. Королюка и соавт.(1988). Результаты выражали в мкмоль/мин . г белка.

Содержание белка в пробах определяли методом Лоури в модификации G.L. Peterson (1977) и выражали в г/л.

Методика проведения клинических исследований.

Клиническая характеристика больных.

Под нашим наблюдением находилось 2260 больных. Больные отбирались из числа пациентов клиники кожных и венерических болезней Военно-медицинской академии, районных кожно-венерологических диспансеров и центра «Альтермед» г. Санкт - Петербурга. Критерием отбора являлось наличие заболевания в течение 12 месяцев и более, подтвержденное медицинской документацией (табл.1)

Тяжесть болезни оценивалась по индексу площади и тяжести псориатических поражений PASI (Psoriasis Area and Severity Index) [Адаскевич В.П., 2004; Carlin C.S. et al., 2004] (легкая степень - < 12 баллов, средняя - ? 12 - 20 < баллов, тяжелая - ? 20 баллов). (табл. 2).

Сезонность псориаза оценивалась по данным медицинской документации и путем сбора анамнеза (табл.1).

Для оценки эффективности применения крема Липсор в качестве наружного средства для лечения псориаза использовался опросник оценки симптомов псориаза PSA (Psoriasis Symptom Assessment), который заполнялся больными до и после лечения.

Всем больным, находившимся на стационарном лечении, при поступлении и перед выпиской проводилось исследование клинико-биохимического и сокращённого иммунологического статуса.

В качестве контроля использовался индифферентный крем, имевший идентичную с Липсором основу, но без активных ингредиентов, т.н. «плацебо».

Таблица 1. Общая характеристика больных

Категории	Больные
	Количество	%
Пол:
Мужской	1541	68
Женский	719	32
«Семейный» анамнез:
Есть	712	31,5
Нет	1548	68,5
Возраст начала болезни:
< 40 лет (I тип)	1723	76,2
? 40 лет (II тип)	537	23,8
Амбулаторное лечение	1680	74
Стационарное лечение	580	26
Всего:	2260	100

Контрольную группу составили 20 стационарных больных, одновременно получавшие крем Липсор и плацебо на различные, как правило, симметричные очаги поражения.

В ходе исследования пациенты были разделены на 3 группы: 2 основных и группу сравнения (табл. 2) В первую группу вошли больные с ограниченными формами псориаза, во вторую - с распространённой и диффузными формами. Группу сравнения составили 260 амбулаторных больных вульгарным псориазом, которым для наружной терапии назначались «Элоком С», «Дайвонекс», «Скин-кап».

Крем наносился на поражённые участки кожи два раза в сутки. Курсовая доза составила от 60 до 300 г препарата в зависимости от характера и распространённости поражения кожи.

Таблица 2. Клиническая характеристика больных

Категории	Больные
	Количество	Проценты
Клиническая форма:
ограниченный псориаз	1239	54,8
ограниченный экссудативный псориаз	82	3,6
распространённый псориаз	838	37
диффузный псориаз	101	4,4
Всего:	2260	100
Тяжесть болезни (по индексу PASI):
Легкой степени (< 12 баллов)	1594	70
Средней степени (? 12 - 20 < баллов)	401	17,7
Тяжелой степени (? 20 баллов)	265	11,7
Всего:	2260	100
Сезонность:
Летняя форма	331	14,6
Смешанная форма	409	18,1
Зимняя форма	1520	67,2
Всего:	2260	100
Течение:
Интермиттирующее	1542	68,2
Часторецидивирующее	718	31,8
Всего:	2260	100

Больные также получали общую терапию, которая включала в себя фолиевую и аскорбиновую кислоты перорально цианкобламин и глюконат кальция внутримышечно. 40% амбулаторных больных использовали Липсор как монотерапию.

Эффективность лечения оценивалась: - по определению индекса PASI до начала терапии, еженедельно и в конце срока наблюдения (число, размер и распространённость высыпаний, выраженность эритемы, инфильтрации, шелушения); - субъективным ощущениям больного (жжение, зуд, сухость кожи).

Окончательный итог исследования определялся на основании достигнутого результата лечения: клиническая ремиссия, значительное улучшение, незначительное улучшение, без изменений, ухудшение; определения индекса PASI.

Переносимость препарата оценивалась по следующим параметрам: очень хорошая, хорошая, плохая, очень плохая.

Статистическая обработка результатов.

Статистическую обработку полученных результатов проводили на персональном компьютере с помощью пакета прикладных программ «Microsoft Excel». В каждой группе рассчитывали средние значения и ошибку среднего. Достоверность различий с соответствующей контрольной группой оценивали по критерию t Стьюдента. Приведенные в тексте и таблицах значения представляли в виде Xср mx.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Исследования в культурах клеток

1. Пролиферативно-дифференцировочная активность культур (контроль) кератиноцитов до воздействия липосомальными препаратами и их комбинациями.

Для выделения первичной культуры кератиноцитов использовались лоскуты кожи, взятые в стерильных условиях у больных псориазом из очага поражения и с неизмененного участка.

Кератиноциты, выделенные из пораженного участка кожи больных псориазом, пролиферировали более интенсивно и на 20-е сутки культивирования образовали 80-90% монослоя (рис.2), в то время как кератиноциты, выделенные с неизмененного участка кожи больных, образовали не более 40% монослоя (рис.3). Примечательно, что клетки, выделенные с непораженного участка кожи, через несколько дней под воздействием фактора роста, содержащегося в питательной среде, резко усиливали активность пролиферации, которую они приблизили к поведению клеток, выделенных из очагов поражения, и в дальнейшем степень их пролиферации не отличалась.

Частота включения 3Н-тимидина в кератиноциты поражённых и непоражённых участков эпидермиса составила 3178±126 и 2750±195 имп./мин (табл. 3), соответственно, и не имела достоверных отличий.

2. Результаты влияния отдельных липосомальных препаратов на пролиферацию культур кератиноцитов.

С целью последующего выбора оптимальной лекарственной комбинации для создания наружной лекарственной формы нами проведены исследования и дана оценка антипролиферативного действия отдельных лекарственных препаратов, предварительно включённых в липосомы.

Были приготовлены и использованы липосомальные суспензии: пентоксифиллина, этмозина гидрохлорида (морицизин), пирроксана, кальция хлорида, глутатиона окисленного, сальбутамола и фторурацила в концентрациях, соответствующих среднетерапевтическим для парентерального введения [Машковский М.Д., 1998]. Выбор пал на эти препараты, так как теоретически они позволяют воздействовать на патогенетические механизмы возникших нарушений в кератиноцитах при псориазе за счёт стабилизации метаболического потенциала клетки, окислительно-востановительного статуса, регуляции митотической активности и механизмов апоптоза.

Таблица 3. Сравнительная характеристика подавления пролиферативой активности культур кератиноцитов при использовании отдельных липосомальных препаратов (по результатам включения 3Н-тимидина)

Препарат	Поражённый участок (n 8) Имп/мин.	Непоражённый участок (n 8) Имп/мин.	Уменьшение по сравнению с контролем (во сколько раз)
Контроль (до применения липосомальных препаратов)	3178±126	2750±195
Пентоксифиллин	750±85 *	750±100 *	4,2/ 3,6
Этмозин	2530±400	2200±350	1,2/1,2
Селенит натрия	980±20 *	1150±500 *	3,2/2,4
Сальбутамол	1250±180 *	1600±90 *	2,5/1,7
Кальция хлорид	2580±300	2250±200	1,2/1,2
Глутатион (OГ)	1400±100 *	1420±90 *	2,2/1,9
Пирроксан	750±70 *	800±100 *	4,2/3,4
Флуороурацил	3000±250	2500±380	1,0/1,1

*- изменения достоверны по сравнению с контролем (р<0,005)

Выбранные лекарственные средства обладают разными механизмами действия. Они хорошо известны и широко применяются парентерально для лечения сердечно-сосудистых, неврологических, аллергических, онкологических и других заболеваний, но в качестве средств для наружной терапии псориаза никогда не применялись.

Наиболее сильным ингибитором пролиферации оказался пентоксифиллин, который уменьшал пролиферативную активность кератиноцитов как из поражённого, так и непоражённого участков кожи более чем в 4,2 и 3,6 раза соответственно. Аналогичная эффективность в ингибировании пролиферации отмечена у пирроксана - в 4,2 и 3,4 раза. Далее следует селенит натрия - в 3,2 и 2,4 раза. Сальбутамол и глутатион окисленный обладали несколько менее выраженным влиянием на пролиферацию - 2,5/1,7 и 2,2/1,9 раза соответственно (р 0,005), (табл.3). Этмозин обладал крайне незначительной активностью, а хлорид кальция и флуороурацил антипролиферативной активностью практически не обладали.

Результаты влияния комбинаций липосомальных препаратов на пролиферацию культур кератиноцитов.

С целью создания комбинированного лекарственного средства в форме крема для наружной терапии псориаза проведено исследование антипролиферативного действия смесей лекарственных препаратов, предварительно включённых в липосомы, на культуры кератиноцитов, выращенных от больных псориазом. Комбинированные липосомальные смеси приготавливались из липосомальных суспензий отдельных препаратов, каждый из которых обладает выраженным самостоятельным антипролиферативным эффектом, как было показано ранее. Исследовались комбинации препаратов в различных сочетаниях на культурах выращенных как с пораженных, так и с интактных участков. Смесь № 1 - пентоксифиллин, селенит натрия, пирроксан. Смесь № 2 - пентоксифиллин, этмозин, селенит натрия. Смесь № 3 - пентоксифиллин, селенит натрия, сальбутамол, пирроксан. Смесь № 4 - пентоксифиллин, сальбутамол, пирроксан. Смесь № 5 - пентоксифиллин, селенит натрия.

Результаты полученных исследований позволяют сказать, что пролиферация кератиноцитов в культурах клеток кожи больных псориазом значительно подавлялась (р < 0,001) при использовании всех перечисленных комбинаций, однако наиболее эффективной оказалась смесь № 1, подавлявшая пролиферацию в 36 и 24 раза соответственно. Несколько уступали по активности смеси № 2 и № 3, что составило ингибирование пролиферативной активности в 23,0/18,3 и 22,6/15,0 раз по сравнению с контролем в поражённом/интактном участках кожи соответственно. Из числа исследованных несколько хуже, но достаточно эффективно подавляли рост клеток в культурах смеси №№ 4, 5, что составило 17,1/12,7 и 14,5/11,8 соответственно. При этом, как и в случае с изолированными лекарственными препаратами, захват 3Н-тимидина более активно осуществлялся кератиноцитами поражённых участков, что свидетельствует о более высокой митотической активности этих клеток. Отмечены также существенные различия между смесями в каждой группе (р < 0,05), за исключением №№ 2, 3 в культурах с поражённых участков и №№ 4, 5 в культурах, выращенных из непоражённых клеток (табл. 4).

Из полученных результатов следует, что комбинации из пентоксифиллина, селенита натрия и пирроксана (смесь № 1), а также из пентоксифиллина, селенита натрия и этмозина (смесь № 2) наиболее целесообразны для использования в наружной терапии псориаза, что вероятно связано с синергичным усилением механизмов подавления пролиферации.

Таблица 4. Сравнительная характеристика подавления пролиферативной активности культур кератиноцитов смесями липосомальных препаратов (по результатам включения 3Н-тимидина)

№ смеси	Поражённый участок (n 8) Имп/мин.	Непоражённый участок (n 8) Имп/мин.	Уменьшение по сравнению с контролем (во сколько раз)
Контроль (до применения липосомальных препаратов)	14724±96	12456±40
1	406±32 *, **	518,0±38*, **	36,2/24,0
2	639±24*	681,5±25 *, **	23,0/18,3
3	649±35*	825±34*, **	22,6/15,0
4	859±46 *, **	974,5±27*	17,1/12,7
5	1011±39 *, **	1053±34*	14,5/11,8

*- изменения достоверны по сравнению с контролем (р < 0,001)

**- изменения достоверны внутри группы (p < 0,05)

Наибольшую активность проявил пентоксифиллин вероятно потому, что его биологическое действие обусловлено влиянием на Р1 аденозиновые рецептроры, ингибированием фосфодиэстеразы (ФДЭ), что ведёт к увеличению содержания цАМФ в клетках и проявлению известного антипролиферативного эффекта этого соединения [Машковский М.Д., 1998; Дмитренко К.В., 2002; Voorhees J., 1974]. Достаточно логичным продолжением этого действия является уменьшение концентрации кальмодулина в кератиноцитах, так как этот кальций связывающий белок - одна из субъединиц ФДЭ, и снижение концентрации активированного ионизиованного кальция, через который реализуется действие фосфолипаз, а также секреция ряда хемокинов ведут как к снижению функциональной активности клеток вообще, так и пролиферативной в частности. Один из наиболее важных антипролиферативнвных эффектов пентоксифиллина, на наш взгляд, обусловлен ингибированием продукций фактора некроза опухолей (ФНО-?) [Дмитренко К.В., 2003]. ФНО-? считается одним из главных в процессе развития патохимической, гистоморфологической и клинической картины псориаза, а псориатический кератиноцит - активный продуцент этого цитокина. Являясь фактором активных кератитноцитов, моноцитов и цитотоксических лимфоцитов (Тс1) ФНО-? участвует в повреждении эндотелия [Маркушева Л.И. и соавт., 1996; Шичкин В.П., 1998; Маркушева Л.И. и соавт., 2000; Heymann W.R., 2007]. Т.о. при псориазе эндотелий капилляров сосочкового слоя дермы становится цитокин-генерирующим, вследствие чего инициируется экспрессия молекул клеточной адгезии. Сам эндотелий активно участвует в продукции цитокинов [Gottlieb A.B. et al., 2002; Кrueger J.G., 2002]. Следовательно, подавление пролиферации кератиноцитов может объясняться подавлением продукции ФНО-? в культуре клеток, как одного из главных факторов аутокринной регуляции даже в отсутствие резидентных клеток кожи. В коже больных псориазом при применении липосомального пентоксифиллина выраженный антипролиферативный эффект вероятно также обусловлен влиянием на экспрессию гена ФНО-?, не только в кератиноцитах, но в первую очередь в иммунокомпетентных клетках: КЛ, Тс1 и эндотелии сосудов [Bos J.D., 1999; Кrueger J.G., 2002; Bos J.D., 2007].

Пирроксан, являясь неселективным адреноблокатором, ингибирует пролиферацию благодаря блокированию преимущественно ?2-адренорецепторов. Биохимические механизмы действия ?-адреноблокаторов обусловлены ингибированием мембранных клеточных систем аденилатциклаза - цАМФ с последующей модуляцией соответствующих ферментных систем внутри клеток [Машковский М.Д.,1998; Сергеев П.В. и соавт.,1999]. Механизмы действия селенита натрия и его основного биологического компонента селена (Se4+) на процессы пролиферации кератиноцитов нам практически неизвестны. Есть указания на то, что большие концентрации этого иона подавляют полностью пролиферативно-митотическую активность любых клеток, включая и клетки кожи [Droge W. et al., 1998; Filomeni G. et al., 2005; Jordan P.A. et al., 2006]. Наиболее часто роль данного микроэлемента рассматривается во взаимосвязанных процессах СРО, тиол-дисульфидном обмене и функционировании системы глутатиона [Кулинский В.И. и соавт., 1990; 1993]. Учитывая известные на сегодня данные о селене, теоретически можно предположить, что он должен подавлять пролиферацию и улучшать дифференцировку клеток.

Известно, что селен улучшает процессы клеточного созревания за счёт стабилизации белков, активации тканевого дыхания, поддержания функционально активной формы цитохрома С [Скальный А.В., 2004]. Биологическая значимость селена в организме человека связана с физиологической активностью селен содержащих биологических макромолекул и его низкомолекулярных соединений. Отмечено, что в зависимости от концентраций, действие молекулярного селена на клетки проявляется снижением их митотической активности и удлинением митотического цикла. Кроме того соединения селена способствуют формированию нормального соотношения между клетками иммунной системы; связывают ионы тяжелых металлов, вследствие чего препятствуют их взаимодействию с тиоловыми группами белков и ферментов [Басоло Ф. и соавт., 1971; Isaacs J.et al., 1977]. Вероятно, совокупность данных свойств и привела к получению нами достаточно выраженного антипролиферативного эффекта.

О роли системы глутатиона в метаболизме клеток кожи известно крайне мало. Так как окисленный и восстановленный глутатионы в целом являются участниками окислительно-восстановительной системы любой клетки, донорами сульфгидрильных групп и одними из главных участников антиоксидантной защиты, то, экстраполируясь от известного, можно сказать, что глутатион окисленный стимулирует процессы дифференцировки, смещая редокс-потенциал клетки в сторону окисления [Filomeni, G., 2002]. Это ведёт к появлению протонов, свободных электронов и способствует появлению активных форм кислорода, что ингибирует пролиферативную активность кератиноцитов. ОГ обладает выраженным влиянием на активность многих энзиматичеких систем: снижает активность ферментов синтеза гликогена, гликолиза, холестерина, белков, что ведёт к подавлению митотической активности [Кулинский В.И. и соавт., 1990].

Сальбутамол - ?2-адреномиметик. Оказывает высокоселективное стимулирующие действие на ?2-клеточные аденилатциклазные адренорецепторы, что ведёт к увеличению концентрации цАМФ [Машковский М.Д., 1998]. В результате ожидался яркий антипролиферативный эффект, однако его не получили ни в одном случае. Вероятно, полученный результат связан с недостаточно представленным рецепторным аппаратом на кератиноцитах, и что более вероятно, ограниченными возможностями клеток кожи, изолированных в культуре к наработке большого количества АТФ. Поэтому, в данном случае более эффективными оказываются те лиганды, которые сохраняют цАМФ от использвания за счёт блокады ФДЭ (пентоксифиллин), чем те, которые стимулируют его выработку из АТФ (сальбутамол).

Этмозин (этмозина гидрохлорид) является производным фенотиазина и относится к фармакологической группе препаратов-антиаритмиков I класса. Используется для лечения сердечно-сосудистых заболеваний. Он оказывает выраженное мембраностабилизирующее действие за счёт подавления транспорта ионов натрия через «быстрые» натриевые каналы клеточной мембраны, что ведёт к снижению активности ферментов, участвующих в репликации ДНК, и в итоге, к снижению пролиферативной активности; снижает интенсивность поступления кальция в клетку, подавляя при этом активацию фосфолипаз, тем самым, вызывая противовоспалительный и антигистаминный эффект за счёт ингибирования липооксигеназной ферментной системы - продуцента лейкотриенов - медиаторов воспаления. [Шарапова Г.Я. и соавт., 1989; Машковский М.Д., 1998]. Применение этмозина не дало желаемого антипролиферативного эффекта в культурах кератиноцитов при его испытании как отдельно взятого препарата в липосомальной форме.

Практически аналогичная картина была отмечена при применении кальция хлорида и фторурацила. Применяемые парентерально препараты кальция оказывают свой лечебный эффект за счёт стимуляции как коркового, так и мозгового вещества надпочечников. Резкое повышение концентрации данного катиона в крови ведёт к выбросу катехоламинов, и что особенно важно - глюкокортикоидов. Как следствие - выраженный противовоспалительный и антипролиферативный эффекты. Применение препаратов кальция в виде добавления к культуре клеток таким действием не обладает.

Флуороурацил (5-фторурацил), ингибируя фермент тимидилатсинтазу, нарушает синтез ДНК и РНК [Машковский М.Д.,1998]. Именно от данного соединения мы ожидали наиболее выраженного эффекта. Тем более, что цитостатики являются часто и успешно применяемыми в схемах лечения псориаза. Лечебное действие данного препарата, возможно, обусловлено только его иммуносупрессивными свойствами.

Таким образом, результаты исследований показали, что некоторые из использованных препаратов целесообразно применять в липосомальной форме в составе наружных средств для лечения вульгарного псориаза.

В каждую из составленных комбинаций входил пентоксифиллин как обязательный компонент с наиболее выраженным антипролиферативным эффектом. Как ни странно, в составе комбинации хорошие результаты получены с использованием этмозина, который не показал индивидуальной антипролиферативной активности в отношении культур клеток. Доказательством синергичного действия препаратов является сравнительный анализ между смесями № 2 и № 5, которые отличаются только отсутствием этмозина, но при этом № 5 подавляет пролиферацию почти в 2 раза хуже, не смотря на присутствие селенита натрия.

Анализ полученных результатов видимо позволяет сказать, что антипролиферативная активность комбинаций липосомальных лекарственных препаратов наиболее выражена там, где не осуществлялось прямого воздействия на выработку цАМФ и следовательно, на энергетический статус достаточно изолированной клеточной системы. Так, смесь № 3 отличалась от № 1 наличием сальбутамола, что теоретически должно было усилить антипролиферативный эффект, однако он оказался хуже в 1,6 раза во всех группах наблюдения. Так же наличие сальбутамола в смеси № 4 при отсутствии селенита натрия ещё более ухудшило результат, что видимо, можно объяснить как отсутствием комплексного стабилизирующего действия селена на обмен белков и тканевое дыхание, так и цитостатическим эффектом данного соединения. Не исключено, что в данных условиях этот катион можно рассматривать как фактор прооксидантной системы, способствующий генерации АФК.

Результаты исследований влияния липосомальных лекарственных препаратов и их комбинаций, проведенных с использованием клеточных культур кератиноцитов показали, что:

- культуры кератиноцитов, выращенные из поражённых и непоражённых участков кожи больных псориазом обладают высокой митотической активностью и способны долгое время пролиферировать без добавления специальных ростовых факторов;

- пролиферативная активность культур кератиноцитов, выращенных с поражённых и непоражённых участков кожи, практически не отличается друг от друга;

- самоподдержание культуры кератиноцитов в среде, лишенной фактора роста, свидетельствует о том, что одно (или несколько) биологически активных веществ, стимулирующих пролиферацию клеток, продуцируется самими кератиноцитами;

- Са2+ не оказывает прямого антипролиферативного действия, а его терапевтическая эффективность вероятно обусловлена опосредованным влиянием через другие органы и системы (надпочечники, нервная, иммунная, сердечно-сосудистая системы и.т.д.);

- флуороурацил не проявляет прямого цитостатического эффекта к пролиферирующим кератиноцитам, поэтому применение цитостатиков при неосложненных формах псориаза, по-видимому, не оправдано, а их лечебное действие скорее всего обусловлено только иммуносупрессивными свойствами;

- наиболее ярким антипролиферативным действием обладают пентоксифиллин, пирроксан, селенит натрия, глутатион окисленный и сальбутамол (в порядке убывания), предварительно заключённые в лиосомальную форму;

- комбинации из липосомальных: пентоксифиллина, селенита натрия и пирроксана, а также из пентоксифиллина, селенита натрия и этмозина наиболее целесообразны для использования в наружной терапии псориаза, так как наиболее эффективно подавляют пролиферацию в культурах кератиноцитов больных псориазом;

- лабораторный метод определения чувствительности кератиноцитов больного псориазом к различным препаратам и их смесям, может быть использован не только для тестирования лекарств, влияющих на эпидермис, но и для изучения пролиферативно-дифференцировочных процессов кожи с последующим созданием новых лекарственных препаратов с целью индивидуализации и оптимизации наружной терапии.

Состояние системы свободнорадикального окисления и антиоксидантной защиты в культурах кератиноцитов больных псориазом.

1. Состояние систем СРО и АОЗ культур до воздействия липосомальными препаратами

Результаты представленные, в табл. 5, свидетельствуют о значительных изменениях состояния системы свободно-радикального окисления в культурах кератиноцитов, полученных и выращенных от больных псориазом. Прежде всего, отмечается резкое угнетение прооксидантной системы, о чём свидетельствуют результаты концентраций диеновых коньюгатов и малонового диальдегида по сравнению со здоровыми людьми. Эти показатели на пике пролиферации уменьшены по сравнению с нормой более, чем в 2 раза. (табл.5). При этом многие аналиты, характеризующие антиоксидантную систему в период активной пролиферации кератиноцитов, повышены, причём это касается как ферментов антиоксидантной защиты, так и субстратов. Мы считаем, что данные изменения свидетельствуют об изменении редокс-потенциала клеток в сторону восстановления и превалировании процессов биосинтеза над процессами катаболизма.

Изменения ферментов, обеспечивающих функционирование системы глутатиона, не подверглись столь значительным изменениям. (табл. 5).

Таблица 5. Влияние отдельных липосомальных препаратов на системы СРО и АОЗ культур кератиноцитов больных псориазом

Показатель	Контроль (n 8)	До воздействия (n 8)	После воздействия липосомальными препаратами на культуры кератиноцитов
			Пентоксифиллин (n 8)	Пирроксан (n 8)	Селенит натрия (n8)	Сальбутамол (n 8)
ДК (нмоль/г ткани)	68,16± 9,74	33,25±5,42*	74,25±6,48**	69,4±4,35**	52,7±5,79 **	64,2±3,49 **
МДА (нмоль/г ткани)	162,8±5,4	78,2±3,21*	136,4±3,65**	126,8±4,21**	144,5±3,58**	99,3±3,71**
ВГ (ммоль/г ткани)	3,46±0,21	11,23±1,22*	3,73±0,55**	3,58±0,34**	5,33±0,22***	8,91±0,31*
СГ (ммоль/г ткани)	10,34±0,33	34,7±2,34*	15,87±1,29* , **	18,9±2,51*, **	24,6±2,12*, **	28,3±2,81**
ГР (мкмоль/(мин·г белка)	96,12± 6,85	121±5,28 * (p<0,05)	101±5,33 **	104±5,76 **	93,4±4,65 **	118,7±5,87
ГП (ммоль/(мин·г белка)	2,34± 0,56	2,21±0,11	3,53±0,13 *, **	2,39±0,24	3,91±0,31 *, **	2,64±0,58
СОД (мкмоль/(мин·г белка)	188,8±16,1	275,4±13,3 *	233,8±12,3 **	205,7±16,9**	271±15,5 *	240,6±12,8*, **
Каталаза мкмоль/(мин·г белка)	36,72± 4,86	24,13±1,97*	47,0±4,08 *, **	35,22±2,26**	44,56±3,76 * , **	28,32±2,31*
ОАА (%)	36,72± 4,86	71,4±4,25*	41,4±3,86**	44,2±3,78 **	47,6±3,65**	67,3±4,58*
Гл-6ф-ДГ (мкмоль/(мин·г белка)	34,19± 4,22	52,7±4,13*	33,2±5,01**	30,8±4,65**	35,7±4,27 **	34,2±4,29**

*- различия достоверны по сравнению с контролем (р<0,001);

** - различия достоверны с результатами до воздействия (p<0,05)

Наряду с ферментами системы глутатиона, активность ферментов, принимающих участие в дисмутации активных форм кислорода (АФК) и перекиси водорода, образующихся в процессах СРО в больших количествах, изменилась более значительно. Уровень общей антиокислительной активности (ОАА) кератиноцитов в период активной пролиферации, как суммарный показатель, оказался ожидаемо высоким. Он превышал контрольную норму практически в 2 раза (р <0,05). Особое внимание обращает на себя поведение глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы. В наших исследованиях его активность увеличена на 54 % по сравнению с кожей здоровых людей. Полученные данные, прежде всего, свидетельствуют о высокой метаболической активности пролиферирующих кератиноцитов, что подтверждается не только высокой активностью Гл-6ф-ДГ, участвующей в прямом окислении глюкозы, но и в целом относительно спокойным поведением ферментов антиокислительной защиты. На наш взгляд, такое поведение системы свободнорадикального окисления может быть обусловлено изменённым редокс-потенциалом клеток, смещенным в сторону восстановления и поддерживающим высокую белковосинтетическую функцию кератиноцитов в период активной пролиферации.

...