Цитокины в современном комбинированном лечении некоторых злокачественных опухолей

Исходная активность NK-клеток была снижена у всех больных в сравнении с контрольной группой. Однако во 2 группе оно было сильнее, и более значимым, чем в первой. В то же время пропорция этих клеток с маркером CD16 была нормальной в обеих группах, что, свидетельствует об истинном снижении их функциональной активности.

Выше были приведены данные о нарушениях средних показателей пропорции отдельных субпопуляций Т-лимфоцитов у всех обследованных больных, в зависимости от наличия или отсутствия лечебного эффекта. Анализ частоты таких нарушений в группах показал, что по ряду показателей она различалась.

У больных 1 группы, исходно нормальная пропорция Т-лимфоцитов, определяемая по пан-Т-клеточным маркерам CD3 и CD5, встречалась чаще, чем при прогрессировании болезни - 54,7% и 73,7%, соответственно, в 1 группе и 34,7% и 29,4% во 2, и эти различия были статистически значимы (р=0,04 для CD3 и р=0,005 для CD5).

Напротив, в 1 группе больные со сниженным количеством CD3+, CD5+ и CD7+ клеток встречались реже, чем во 2, причем для CD5+ клеток эта разница была статистически значима (р=0,02). Хотя эти группы не различались достоверно по средним показателям пропорции CD4+ клеток, тем не менее сниженная их пропорция была достоверно реже у больных 1 группы, чем во второй: 18,9% и 44,9% соответственно (р=0,04). В 1 группе недостоверно чаще были больные с повышенным соотношением иммунорегуляторного индекса CD4+/CD8+, т.е. с превалированием субпопуляции CD4+ клеток над лимфоцитами с фенотипом CD8+. Были заметны также различия и в отношении Т-лимфоцитов, экспрессирующих маркеры, характерные для активированных клеток (HLA-DR, CD38, CD11b) - сниженная их пропорция чаще была у больных, не имевших эффекта лечения.

Снижение активности NK-клеток, достоверно чаще встречалось и было более выраженным у больных 2 группы, чем у эффективно леченных больных 70,6% и 32,1% соответственно (р=0,03). У неэффективно леченных больных чаще была повышена цитотоксичность этих клеток (р=0,03). В свою очередь, у больных 1 группы нормальная активность NK-клеток определялась в 64,3%, в то время как во второй достоверно реже - у 23,5% больных (р=0,0002).

В заключение можно отметить, что эффект лечения б-ИФН в большей степени может быть ожидаем у больных с наименее выраженными исходными нарушениями клеточного иммунитета.

Анализ иммунограмм всех больных раком почки до лечения выявил нарушения концентрации сывороточных иммуноглобулинов классов G, A и M. При этом концентрации IgG и IgA были повышены - 14,42±1,64 и 3,31±0,45 г/л при норме 12,08±0,86 и 2,26±0,2 соответственно; при этом для IgA различия были достоверны (p=0,03). Средняя же концентрация IgM оказалась достоверно сниженной - 0,9±0,09 против 1,43±0,13 в контрольной группе (р=0,01).

Однако при разделении больных на группы в зависимости от эффекта лечения оказалось, что все эти изменения были только у больных 1 группы. Во второй, концентрации иммуноглобулинов всех трех классов были ниже, чем в контроле, хотя эти различия не были статистически значимыми. Анализ частоты этих нарушений показал, что в группе эффективно леченных больных подавляющее их число имело нормальную концентрацию IgG (78,6%) и повышенную IgA (88,9%), тогда как во второй группе у всех (100%) больных были низкие концентрации IgG и IgM, а у половины больных оказалась повышенной концентрация IgA.

Анализ частоты изменений параметров иммунного статуса на фоне лечения показал, что у эффективных случаях статистически значимые изменения произошли в отношении количества активированных лимфоцитов (CD38+) и лимфоцитов, экспрессирующих молекулу CD50. Сниженное и нормальное количество CD38+ клеток отмечалось у 61,5% и 38,5%, а после лечения - у 13,3 и 60% соответственно (р<0,05), помимо этого, у 26,7% больных в этой группе оно стало даже повышенным.

Сниженное количество CD50 клеток было выявлено более чем у половины больных в обеих группах. После лечения, при наличии эффекта, оно нормализовалось и оставалось сниженным лишь у 5,3%. При отсутствии эффекта число лиц со сниженной пропорцией этих клеток хотя и уменьшалось, но в меньшей степени, чем в первой группе, составив 28,6%.

Иная картина наблюдалась у больных с прогрессированием заболевания. В этой группе сохранялось неизменным количество больных со сниженной пропорцией Т-лимфоцитов (CD3+клеток), лимфоцитов, экспрессирующих активационные маркеры и CD11b. Уменьшался, но в гораздо меньшей степени, чем в эффективных случаях, процент больных со сниженной пропорцией CD50+ клеток и не менялось число больных с низкой активностью NK-клеток.

В различной степени у больных с разными результатами лечения менялись и концентрации иммуноглобулинов в сыворотке крови. У больных, получавших лечение с клиническим эффектом концентрации иммуноглобулинов не изменились. У больных с прогрессированием заболевания повышалось исходно сниженное содержание IgG, IgA и IgM в сыворотке крови, хотя это возрастание не было статистически значимым.

4.4. Усиление Альнорином цитотоксического действия противоопухолевых лекарств: роль экспрессии гена bcl-2.

Опыты проводились на культуре клеток HeLa - дикого типа и этих же клетках, в которые с помощью ретровирусной конструкции был введен дополнительный ген bcl-2. Альнорин в концентрациях 100 и 1000МЕ/мл, которые сами по себе не токсичны для клеток, повышал цитотоксический эффект Доксорубицина, причем на клетках HeLa-bcl2 в большей степени, чем на клетках дикого типа - и 12,3 и 7,9 раза соответственно.

Большинство противоопухолевых лекарств вызывают гибель опухолевых клеток путем индукции в них апоптоза. Альнорин также усиливал чувствительность клеток к апоптозиндуцирующему действию Доксорубицина. И он также более эффективен в отношении клеток, гиперэкспрессирующих bcl-2, чем для интактных клеток HeLa.

Альнорин в дозе, в которой он сам не индуцирует апоптоз, повышает его индукцию Доксорубицином в 133,8 раза на клетках HeLa-bcl2, в то время как на клетках дикого типа только в 20 раз. Иными словами, Альнорин усиливает цитотоксичность и апоптоз-индуцирующие свойства Доксорубицина, взаимодействуя с активностью антиапоптотического гена bcl-2.

При этом он более значительно влиял на индукцию апоптоза, чем на цитотоксическое действие. Концентрация Доксорубицина, необходимая для 50%-ного цитотоксического эффекта составляла 5,35 мкг/мл на клетках HeLa дикого типа и 10,7 мкг/мл для клеток HeLa с гиперэкспрессией гена bcl-2, а для индукции 50% апоптоза - 580,25 и 1432 мкг/мл соответственно.

Мы также исследовали влияние Альнорина на цитотоксичность препаратов, применяемых при лечении меланомы - Нидрана (ACNU) и Дакарбазина (DTIC) - на клетках 4 меланом человека in vitro. Три из этих меланом оказались примерно в равной мере чувствительными к цитотоксическому действию Нидрана: его концентрации, необходимые для 50%-го цитотоксического эффекта в отношении клеток линий меланомы Mel-P, Mel-Korr и Mel-Is составили 256,35, 191,0 и 212,96 мкг/мл соответственно.

В то же время клетки меланомы Mel-Rac оказались высокорезистентнвми, их ЦД50 оказалась равной 727,0 мкг/мл, т.е. в 6,7 раза выше, чем для наименее чувствительной линии Mel-P. Добавление в культуральную среду вместе с Нидраном Альнорина в концентрациях, в которых он сам не влияет на интенсивность роста клеток (1000 МЕ/мл и 100 мкг/мл), практически не повиляло на цитотоксический эффект Нидрана в отношении чувствительных клеток меланом линий Mel-P, Mel-Korr и Mel-Is. Однако в присутствии 1000 МЕ/мл Альнорина резко возрос цитотоксический эффект Нидрана в отношении клеток резистентной линии Mel-Rac. 50% цитотоксическая доза (ЦД50) Нидрана для клеток этой линии снизилась с 727 мкг/мл до 164,4 мкг/мл. Даже 100 МЕ/мл Альнорина оказались эффективными - ЦД50 Нидрана снизилась до 189,7 мкг/мл, т.е. в 4,3 и в 4,1 раз соответственно.

Таким образом, под влиянием Альнорина в этих экспериментах ЦД50 Нидрана в отношении клеток резистентной линии Mel-Rac снизилась ниже уровня наиболее чувствительной линии Mel-Korr.

Чувствительность клеток линий меланом оказалась различной и к цитотоксическому действию Дакарбазина. Наиболее резистентными оказались клетки линий Mel-P и Mel-Rac. Альнорин повышал, хотя и в меньшей степени чувствительность этих относительно резистентных клеток к цитотоксическому действию Дакарбазина в 1,2 и 2,88 раз соответственно.

Полученные данные позволяют заключить, что фактор некроза опухолей альфа (Альнорин) оказывает терапевтический эффект при меланоме не столько путем иммуномодулирующего действия, но повышением чувствительности опухолевых клеток к цитотоксическому и апоптоз-ндуцирующему действию лекарств.

ВЫВОДЫ

1. Разработаны новые эффективные режимы применения фактора некроза опухоли (Альнорин), интерферона гамма (Ингарон), а также интерферона альфа в онкологии.

2. В результате I фазы клинического изучения отечественного рекомбинантного фактора некроза опухоли альфа (Альнорин) разработан режим рационального лечения: 5х106МЕ/день внутривенно в течение 5 дней. Основные побочные эффекты: повышение температуры, озноб, повышение артериального давления. Не отмечено кумулятивной токсичности при многократных курсах.

3. Разработан режим высокоэффективного лечения при использовании Альнорина до химиотерапии (ACNU + Дакарбазин + Цисплатин) при диссеминированной меланоме кожи. Полный + частичный эффект + длительная стабилизация - 55%. Медиана времени до прогрессирования - 11,7 мес., медиана общей выживаемости - 26 мес.

4. При комбинации Альнорина и химиотерапии отмечено увеличение цитотоксичности NK-клеток, а также исходно высокая концентрация растворимого рецептора для IL-2 и высокая пропорция лимфоцитов, экспрессирующих рецептор для IL-2.

5. Исследования in vitro показали, что Альнорин имеет не только иммунологические эффекты, определяющие его участие в противоопухолевом действии. При меланоме Альнорин снижает резистентность к ACNU и Дакарбазину, в максимальной степени в отношении опухолевых клеток с гиперэкспрессией Bcl-2.

6. Разработан режим высокоэффективного лечения с использованием интерферона гамма (Ингарон) в сочетании с химиотерапией при метастазах меланомы кожи. Полный + частичный эффект + длительная стабилизация - 74,4%. Медиана времени до прогрессирования - 9,2 мес. Медиана общей выживаемости - 15,2 мес. Показано увеличение цитотоксического потенциала NK-клеток (CD16+).

7. Новый режим прерывистого применения интерферона альфа высокоэффективен при метастазах рака почки. Полный + частичный эффект + длительная стабилизация (? 6 мес.) - 48,9% в общей группе больных. Медиана общей выживаемости - 23,3 мес.

8. Многофакторный анализ показал значение числа и размеров метастазов в легкие для достижения эффекта и прогноза. При метастазах в легкие размером ? 2 см. и их числе ? 10 полный + частичный эффект + длительная стабилизация (? 6 мес.) достигнут в 62,5% случаев. Медиана общей выживаемости - 29,9 мес. Через 5 лет и больше 24% больных этой группы не имели признаков болезни, т.е. считались излеченными.

9. Комплекс современных иммунологических исследований в период лечения дал возможность для важного практического заключения о том, что нормальные показатели (NK-клеток, CD4/CD8, продукция IL-2 и др.) высоко коррелируют с противоопухолевым эффектом интерферона альфа при метастазах рака почки.

10. Применение фактора некроза опухоли альфа, интерферона гамма и интерферона альфа определяют значительный прогресс в современном лечении некоторых злокачественных опухолей.

СПИСОК ПЕЧАТНЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. A phase II trial of IFN-б-2A and ftorafur in metastatic renal carcinoma. // J Clin Onc. 1994, v. 13, ab. 754 (with Lichinitser M., Rakhmankulova Z.).

2. Interferon-alfa-2a in lung metastases of renal cancer. // Annals of oncology, 1994, V. 5, N 8, p. 315 (with Lichinitser M., Rakhmankulova Z.).

3. Лечение легочных метастазов рака почки. // 6 Национальный конгресс по болезням органов дыхания, Новосибирск, 1996, с. 32 (соавторы: Личиницер М.Р., Рахманкулова З.П.).

4. Эффективность Реаферона при метастазах рака почки. // Проблемы клинической онкологии. Сборник статей, посвященный 50-летию профессора Зикиряходжаева Д.З. Москва-Душанбе. 1999, с. 75-77 (соавтор: Рахманкулова З.П.).

5. Клиническое изучение рекомбинантного фактора некроза опухоли.// ЕШО. Новые противоопухолевые препараты в лечении рака Москва, сент. 1999, с. 1-5 (соавторы: Личиницер М.Р., Абрамов М.Е.).

6. Follow-up results of intermittent Interferon-2A (IFN-2A) therapy of renal cancer metastases. // 10th International Congress on Anti-Cancer Treatment, Paris, France, 2000 (with Lichinitser M., Rakhmankulova Z.).

7. Прогностическое значение некоторых молекулярных биомаркеров рака почки при лечении интерфероном. // Тезисы докладов. VII Российский национальный конгресс «Человек и лекарство». Москва, 2000. (соавтор: Степанова Е.В.).

8. Иммунологические аспекты использования цитокинов в онкологии. // Медицинская иммунология, 2001, т. 3, №2, с.269 (соавторы: Кадагид-
зе З.Г., Славина Е.Г,. Черткова А.И., Абрамов М.Е.).

9. Альнорин (рекомбинатный фактор некроза опухоли альфа) в комплексной терапии меланомы. // Здравэкспо - Сибирь, Научно-практическая конференция «инновации в охране здоровья людей», тезисы участников, Новосибирск, 2001 (соавторы: Личиницер М.Р., Сандахчиев Л.С., Пустошилова Н.М., Масычева В.И., Медуницин Н.В., Авдеева Ж.И.).

10. The interferonotherapy in cancer treatment: some aspects of mechanismes of action. // Int. J Cancer, 2002, S12, p.449. (with Slavina E.G., Dzhgamad-ze N.T., Chertkova A.I., Zabotina T.N., Kadagidze Z.G.).

11. TNF-б enhances the tumor cell sensitivity to the cytotoxic and apoptosis-inducing action of antitumor drugs. // Eur.Cytokine Netw., Vol. 14, N 3, Supplement Sept. 2003, p.25 (with Chertkova A.I., Slavina E.G., Burkova A.A., Kadagidze Z.G.).

12. Сочетание лимфангиолейомиоматоза, ангиомиолипомы почки и мультилокулярной кистозной нефромы. // Архив патологии, 2004, №4, т. 66, с. 39-41. (соавторы: Соколова И.Н., Гурарий Л.Л., Казанцева И.А., Анурова О.А., Чемрис Г.Ю., Захарова Т.И., Ротин Д.Л.).

13. Современное лечение рака почки. // Здравоохранение и медтехника. - 2004. - №9. - С.32-33 (соавторы: Матвеев В.Б., Личиницер М.Р.).

14. TP, Ki-67 and Bcl-2 as prognostic factors in renal cell carcinoma. // 16th International Congress on Anti-Cancer Treatment. Paris, France, 2005, p.296 (with Stepanova E., Matveev S., Sokolova I., Chernoglazova E., Lichinitser M.).

15. Клиническое применение Альнорина при диссеминированной меланоме кожи. // Здравэкспо - Сибирь, Научно-практическая конференция «инновации в охране здоровья людей», тезисы участников. Новосибирск, 2005 (соавторы: Абрамов М.Е., Масычева В.И., Славина Е.Г., Черткова А.И., Личиницер М.Р).

16. Клиническое применение альнорина при диссеминированной меланоме кожи. // I российско-американская конференция биотехнология и онкология. Санкт-Петербург, Россия, 29-31 мая 2005 года, с. 40-41. (соавторы: Абрамов М.Е., Масычева В.И., Славина Е.Г., Черткова А.И., Личиницер М.Р.).

17. Взаимодействие противоопухолевых лекарств и цитокинов в цитотоксическом действии и индукции апоптоза в опухолевых клетках. // Российский биотерапевтический журнал. №1, т.4, 2005, с 17. (соавторы: Слави-
на Е.Г., Черткова А.И., Короткова О.В., Петренко Н.Н., Заботина Т.Н., Буракова А.А.).

18. Взаимодействие противоопухолевых лекарств и цитокинов в цитотоксическом действии и индукции апоптоза в опухолевых клетках. // Медицинская иммунология, т. 6, № 3-5, с. 251-252. (соавторы: Славина Е.Г., Черткова А.И., Короткова О.В., Заботина Т.Н., Буракова А.А.).

19. Modulation of melanoma cell sensitivity to the cytotoxicity of antitumor drugs by TNF-б and IFN-б. // European Cytokine Network, 2006, Suppl. V. 17, p. 94. (with Slavina E.G., Chertkova A.I., Korotkova O.V., Zabotina T.N., Baryshnikov A.Y., Mihaylova I., Kadagidze Z.G.).

20. Химиотерапия с предварительным введением Альнорина при диссеминированной меланоме кожи. // Профилактика и лечение злокачественных новообразований в современных условиях. Барнаул, 2007, с. 102-103. (соавторы: Абрамов М.Е., Черноглазова Е.В.).

21. Влияние экспрессии тимидин фосфорилазы, BCL-2 и Ki-67 на безрецидивную выживаемость при раке почки T1-2N0M0. // Профилактика и лечение злокачественных новообразований в современных условиях. Барнаул, 2007, с. 129-130 (соавторы: Степанова Е.В., Черноглазова Е.В., Вишневская Я.В.).

22. Прогностическое значение экспрессии тимидинфосфорилазы, BCL-2 и Ki-67 при раке почки T1-2N0M0. // Онкоурология. № 4, 2007, с. 21-25 (соавторы: Степанова Е.В., Вишневская Я.В., Черноглазова Е.В., Соколова И.Н., Матвеев В.Б.).

23. Фторафур®. Перспективы применения в современной клинической Онкологии. // Современная онкология. Т. 9. - № 1. - 2007. - C. 54-58.

24. г-Interferon (Ingaron) in combination with chemotherapy in patients with matastatic skin malanoma. // 19th International Congress on Anti-Cancer Treatment. Paris, France, 2008, p.192 (with Abramov M.E., Chernoglazova E.V., Kadagidze Z.G., Slavina E.G., Chertkova A.I.).

25. Cytotoxicity and apoptosis induction in melanoma cell lines by antitumor drugs: the effects of cytokines. // 19th International Congress on Anti-Cancer Treatment. Paris, France, 2008, p.352 (with Slavina E.G., Chertkova A.I., Korotcova O.V., Bigvava H., Borunova A.A., Morozova L.F., Petrenco N., Kadagidze Z.G.).

26. Цитотоксичность и индукция апоптоза в клеточных линиях меланом человека противоопухолевыми лекарствами: эффект цитокинов. // V-съезд онкологов и радиологов СНГ. Ташкент, 2008. 14-16 мая 2008 г. С. 63. (соавтры: Славина Е.Г., Черткова А.И., Короткова О.В., Бигвава Х.А., Борунова А.А., Морозова Л.Ф., Петенко Н.Н., Кадагидзе З.Г.).

27. г-интерферон (Ингарон) в сочетании с химиотерапией при лечении метастазов меланомы кожи. // V-съезд онкологов и радиологов СНГ. Ташкент, 2008. 14-16 мая 2008 г., с. 333. (соавторы: Абрамов М.Е., Личиницер М.Р., Черноглазова Е.В., Кадагидзе З.Г., Славина Е.Г., Черткова А.И.).

28. Химиотерапия диссеминированной меланомы кожи с включением Ингарона (г-ИФН). Клинико-иммунологическое исследование. // Российский биотерапевтический журнал, 2009, №1, с 68-75. (соавторы: Абрамов М.Е., Славина Е.Г., Кадагидзе З.Г., Черткова А.И., Черноглазова Е.В., Ротобельская Л.Е., Личиницер М.Р.).

Размещено на Allbest.ru