Размещено на http://www.allbest.ru/

На правах рукописи

03.00.07 - микробиология

14.00.15 - патологическая анатомия

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

БУГОРКОВА СВЕТЛАНА АЛЕКСАНДРОВНА НАУЧНО-МЕТОДИЧЕСКИЕ ОСНОВЫ ОЦЕНКИ ВЛИЯНИЯ ВОЗБУДИТЕЛЕЙ ХОЛЕРЫ, ЧУМЫ И ТУЛЯРЕМИИ НА АДАПТАЦИОННО-КОМПЕНСАТОРНЫЕ РЕАКЦИИ БИОМОДЕЛЕЙ

Саратов - 2008

Работа выполнена в Федеральном государственном учреждении здравоохранения «Российский научно-исследовательский противочумный институт “Микроб” (ФГУЗ РосНИПЧИ “Микроб”)

НАУЧНЫЙ КОНСУЛЬТАНТ член-корр. РАМН,

доктор медицинских наук, профессор Кутырев Владимир Викторович

ОФИЦИАЛЬНЫЕ ОППОНЕНТЫ:

член-корр. РАМН, доктор медицинских наук, профессор Ананьева Юлия Васильевна

доктор медицинских наук, профессор Богомолова Нина Викторовна

доктор медицинских наук, старший научный сотрудник Малецкая Ольга Викторовна

Ведущая организация - ФГУ «48 Центральный научно-исследовательский институт Министерства обороны Российской Федерации», г. Киров.

Защита состоится « » ___________ 2009 г. в « » часов на заседании диссертационного совета Д 208.078.01 при ФГУЗ «Российский научно-исследовательский противочумный институт «Микроб» по адресу: 410005 г. Саратов, ул. Университетская, д.46.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГУЗ «Российский научно-исследовательский противочумный институт «Микроб»

Автореферат разослан « » _____________ 2009 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор биологических наук, старший научный сотрудник А.А. Слудский

1. Общая характеристика

Актуальность проблемы. Ежегодно в мире инфекционные болезни, и в их числе особо опасные инфекции, регистрируются более чем у двух миллиардов человек [WER, 2007; ЕИКЗР, 2007]. В результате роста и развития экономической деятельности, открытия границ, миграции населения, увеличения объемов международных сообщений и торговли тенденция к глобализации инфекционных болезней будет сохраняться. Реальная потребность создания современных, надежных средств профилактики и лечения особо опасных инфекционных болезней обусловливает интерес исследователей к всестороннему рассмотрению проблемы взаимодействия микро- и макроорганизма [Smith H., 2000; Бухарин О.В. и др., 2002; Туйгунов М.М. и др., 2003; Железникова Г.Ф., 2006].

Молекулярно-биологический анализ возбудителей холеры, чумы и туляремии, являющийся основой для получения новых знаний о ключевых факторах их патогенности и вирулентности, значительно опережает исследования в области изучения различных сторон взаимодействия патогенных бактерий с макроорганизмом [Farugue S.M. et al., 2004; Zhou D. et al., 2006; Смирнова Н.И., Кутырев В.В., 2006]. Но для адекватного решения вопросов, связанных с разработкой новых и совершенствованием уже имеющихся средств и методов эффективной борьбы с особо опасными инфекционными болезнями, этого недостаточно.

Инфекционный процесс, рассматриваемый как результат взаимодействия микро- и макроорганизма, отражает состояние нарушенного баланса между уровнями экспрессии детерминант вирулентности первого и адекватностью функционирования защитных барьеров второго [Бондаренко В.М., 1999; Атауллаханов Р.И., Гинцбург А.Л., 2005; Portnoy D., 2005; Bradley C. et al., 2005]. В этом аспекте представляют интерес исследования особенностей взаимодействия организма биомоделей с возбудителем инфекции, основанные на выяснении роли молекулярных механизмов патогенности микроорганизма, приводящих к разбалансировке функционирования систем реагирования и контроля макроорганизма.

Для решения этой задачи необходимо расширение методической базы традиционного экспериментального исследования инфекционного и вакцинного процессов при работе с возбудителями особо опасных инфекционных болезней за счет внедрения морфофункционального и морфометрического анализа адаптационно-компенсаторных реакций макроорганизма на патоген. Так, для объективного суждения о состоянии функциональных систем макроорганизма при моделировании экспериментального инфекционного процесса в количественной оценке нуждаются: выраженность воспалительных и иммунных реакций, интенсивность регенеративных и некротических процессов, особенности и интенсивность гистохимических и иммуногистохимических характеристик клеток нейроэндокринной системы (НЭК), элементов мукозального гомеостаза и ряд других параметров.

Эксперименты на лабораторных животных являются важным этапом при доклиническом испытании вакцин. При этом научные основы оценки качества вакцин, несмотря на большой фактический материал, накопленный в этой области, только начинают формироваться. В то же время имеющиеся вакцины против особо опасных инфекционных болезней не лишены недостатков [Медуницын Н.В., 2004; Kabir S., 2005], а поиск диагностических и прогностических критериев их безопасности является актуальной научной проблемой, требующей всестороннего изучения.

Важное место в перечне методов доклинической оценки вакцин занимает морфологический анализ [РД 42-28-8-89; РД 42-28-10-90; СП 3.3.2.561-96; МУ 3.3.1.1113-02; МУ 3.3.1.2075-06; МУ 3.3.1.2161-07]. Оценка степени выраженности изменений в органах и тканях биомоделей при экспериментальном вакцинном процессе, базирующаяся на применении тезиса “оптимального морфофункционального соотношения” элементов системы для ее эффективной работы [Бородин Ю.И. и др., 1992; Труфакин В.А., Шурлыгина А.В., 2002], подразумевает широкое использование методов морфометрического анализа. Но многие структурные и функциональные взаимосвязи в работе системы реагирования, контроля и защиты макроорганизма (нейроэндокринной, иммунной) при вакцинном процессе, обусловленном препаратами для специфической профилактики холеры, чумы и туляремии, остаются мало изученными

В связи с этим комплексное исследование влияния возбудителей Vibrio cholerae, Yersinia pestis, Francisella tularensis с определенным набором детерминант вирулентности и иммуногенности на адаптационно-компенсаторные реакции макроорганизма особенно актуально для расширения представлений о патогенезе этих заболеваний. Разработка алгоритма проведения патоморфологического исследования экспериментального инфекционного и вакцинного процессов направлена на формирование научно-методической основы для решения важной проблемы, связанной с информативной и объективной оценкой качества вакцинных препаратов против холеры, чумы и туляремии на этапах их разработки и доклинического испытания.

Цель исследования. Совершенствование научно-методической основы оценки качества вакцинирующих препаратов против особо опасных инфекций, базирующейся на комплексном исследовании влияния возбудителей холеры, чумы и туляремии с различным набором детерминант вирулентности и иммуногенности на адаптационно-компенсаторные реакции макроорганизма.

Задачи исследования:

1. Осуществить подбор штаммов возбудителей V.cholerae, Y. pestis, F. tularensis с различной генетической характеристикой для воспроизведения экспериментального инфекционного процесса и изучить их влияние на адаптационно-компенсаторные реакции макроорганизма, определяемые по ряду морфометрических параметров.

2. Разработать алгоритм патоморфологической оценки тяжести течения экспериментального инфекционного процесса при холере, чуме и туляремии. Определить возможность его применения при использовании аппаратно-программных компьютерных комплексов.

3. Предложить морфометрические критерии для отбора штаммов V.cholerae, используемых в качестве контрольных в морфологических и иммунологических исследованиях.

4. Выявить особенности влияния холерных вибрионов О1 и О139 серогрупп на клетки APUD-системы кишечника и другие элементы кишечного «барьера» биомоделей.

5. Охарактеризовать течение инфекционного процесса в организме биомоделей, используя штаммы чумного и туляремийного микробов с различной вирулентностью. Сопоставить данные морфологического и морфометрического анализа изменений во внутренних органах подопытных животных с генетическими особенностями этих штаммов.

6. Провести морфофункциональный и морфометрический анализ адаптационно-компенсаторных реакций макроорганизма при моделировании вакцинного процесса с использованием коммерческих вакцин и экспериментальных препаратов.

7. Оценить реакцию «барьерных» структур (желудочно-кишечного тракта, лимфоидных органов, дыхательной системы) макроорганизма при введении живых коммерческих вакцин, аттенуированных и рекомбинантных штаммов возбудителей холеры, чумы и туляремии.

8. Изучить реакцию апудоцитов функционально значимых систем организма, клеток мукозального эпителия, образований эффекторной зоны иммунной системы желудочно-кишечного тракта и легких, лимфоидной системы при моделировании инфекционного процесса на фоне предварительной иммунизации биомоделей коммерческими и экспериментальными препаратами для специфической профилактики холеры, чумы и туляремии.

Научная новизна. Впервые при изучении влияния на макроорганизм штаммов возбудителей V. cholerae, Y. рestis и F. tularensis c различной генетической характеристикой разработан алгоритм проведения патоморфологических исследований экспериментального инфекционного и вакцинного процессов и определены морфометрические параметры, объективно характеризующие тяжесть течения патологического процесса у биомоделей. Впервые оценена реакция нейроэндокринных клеток (НЭК) лимфоидных органов, лимфатических структур в легких и кишечнике при особо опасных инфекциях и вакцинации против них. Подобраны морфометрические параметры для характеристики адаптационно-компенсаторных реакций макроорганизма при моделировании инфекционного процесса на фоне предварительной иммунизации против холеры, чумы и туляремии. Обоснована необходимость проведения комплексных исследований при оценке безвредности, реактогенности и иммунологической эффективности вакцин против холеры, чумы и туляремии и показаны возможности применения для этого аппаратно-программных компьютерных комплексов с целью получения стандартизированных объективных результатов. Усовершенствована научно-методическая основа оценки экспериментальных препаратов для специфической профилактики холеры, чумы и туляремии.

Впервые показана возможность применения морфометрических характеристик состояния апудоцитов кишечника, клеток эффекторной зоны иммунной системы и слизеобразующих элементов мукозального эпителия желудочно-кишечного тракта для оценки качества противохолерных вакцин и степени выраженности холерного инфекционного процесса (патент на изобретение № 2301075 «Способ оценки качества вакцинных препаратов против холеры»). Впервые предложены морфометрические критерии для отбора штаммов холерного вибриона, используемых в качестве контрольных в морфологических и иммунологических исследованиях (патент на изобретение № 2254371 «Авирулентный тест-штамм бактерий Vibrio Cholerae биовара eltor серовара Ogawa (ctxA-, tcpA-, toxR-, zot-), используемый в иммунологических, генетических исследованиях и учебном процессе»).

Практическая значимость и внедрение. Предложенный алгоритм патоморфологического исследования был применен при проведении Государственных доклинических испытаний рекомбинантного штамма V. cholerae eltor КМ 184 - кандидата в живые противохолерные вакцины (Протокол № 5 от 15.01.2001 г.)

Результаты исследований использованы в следующих документах:

- Методические указания МУ 3.3.1.2075-06 «Основные требования к вакцинным штаммам холерного вибриона», утвержденные Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко и введенные в действие с 11.07.06 г. взамен методических указаний «Основные критерии оценки вакцинных штаммов холерного вибриона», утвержденных Госкомсанэпиднадзором России от 17.10.1994 г. № 01-19/48-11;

- Методические указания МУ 3.3.1.2161-07 «Основные требования к вакцинным штаммам туляремийного микроба», утвержденные Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко и введенные в действие впервые с 01.04.07 г.;

- Методическое пособие «Моделирование холерной инфекции методом RITARD», одобренное Ученым советом (протокол № 1 от 01.02.02 г.) и утвержденное директором РосНИПЧИ «Микроб» (05.02.02 г.);

- Методические рекомендации «Оценка эффективности противохолерных вакцин по ряду морфофункциональных показателей адаптационно-приспособительной реакции биомодели к холерной инфекции», одобренные Ученым советом (протокол № 5 от 11.05.06 г.) и утвержденные директором РосНИПЧИ «Микроб» (12.05.06 г.);

- Методические рекомендации «Техника и прядок забора гистологического материала для морфометрических исследований от биомоделей, зараженных возбудителями I-II групп патогенности», одобренные Ученым советом (протокол № 3 от 17.06.08 г.) и утвержденные директором РосНИПЧИ «Микроб» (18.06.08 г.).

Научные и практически значимые результаты работы используются в лекционном курсе первичной специализации и усовершенствования врачей и биологов по особо опасным инфекциям при РосНИПЧИ «Микроб».

Опубликованные материалы исследования явились основой для написания монографий:

- «APUD-система кишечника животных при холерной инфекции, интоксикации и вакцинальном процессе».- Деп. ВИНИТИ, 2000;

- «Патоморфологические подходы к доклинической оценке холерных вакцин».- Деп. ВИНИТИ, 2002.

- «Патоморфологические аспекты доклинических испытаний вакцин против чумы, сибирской язвы и холеры».- Саратов: ЗАОПЦ «ИППОЛиТ-99», 2004.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Введение штаммов возбудителей V. cholerae, Y. pestis, F. tularensis с различной генетической характеристикой вызывает в организме биомоделей изменение морфометрических показателей, степень выраженности которых находится в зависимости от полноты набора детерминант вирулентности микроорганизма.

2. Разработанные алгоритмы проведения комплексных исследований влияния возбудителей V. cholerae, Y. pestis, F. tularensis на адаптационно-компенсаторные реакции у биомоделей при моделировании инфекционного и вакцинного процессов повышают информативность экспериментального патоморфологического исследования.

3. Предложенные морфометрические параметры позволяют отбирать штаммы V. cholerae для использования в качестве контрольных при проведении морфологических и иммунологических исследований.

4. Применение разработанных коэффициентов и индексов для учета состояния трех групп клеточных элементов в слизистой оболочке кишечника объективизирует и стандартизирует оценку качества противохолерных вакцинных препаратов на доклиническом этапе исследований

5. Морфометрические и морфофункциональные эквиваленты адаптационно-компенсаторных и иммунопатологических реакций у биомоделей характеризуют направленность процессов иммуногенеза при первичном и вторичном иммунных ответах.

6. Реакция апудоцитов функционально значимых органов биомоделей при инфекционном и вакцинном процессах отражает уровень вовлечения APUD-системы макроорганизма в процесс поддержания его гомеостаза.

7. В основе повышения объективности оценки безвредности, реактогенности и иммунологической эффективности препаратов для специфической профилактики холеры, чумы и туляремии на этапах их доклинического изучения лежит широкое применение возможностей базовых аппаратно-программных компьютерных комплексов для денситоморфометрической характеристики состояния клеток и тканей макроорганизма.

Апробация диссертационной работы. Исследования проведены в рамках плановых НИР РосНИПЧИ «Микроб» в период 1999 - 2008 г.г.: 025-99 «Изучение иммунобиологических свойств потенциально вакцинных рекомбинантных штаммов холерного вибриона, несущих гетерологические антигены» № госрегистрации 01.99.0008392; 006-3-01 «Разработка и усовершенствование унифицированных методов оценки безопасности вакцинирующих иммунобиологических препаратов против особо опасных инфекций» № госрегистрации 01.200.111501; 21-4-04 «Патоморфологические аспекты изучения нейроэндокринных механизмов в становлении противохолерного иммунитета» № госрегистрации 0120.0504666; 32-3-08 «Изучение взаимодействия возбудителей чумы, туляремии с организмом хозяина при инфекционном и вакцинальном процессе». Исследование иммуногенных и протективных свойств препаратов «теней» клеток холерных вибрионов О1 и О139 серогрупп (VCG/O1 c TCP и VCG/O1 без TCP; VCG/O139 c TCP и VCG/O139 без TCP) выполняли в рамках договора РосНИПЧИ «Микроб» с Институтом микробиологии и генетики Университета г. Вены, Австрия (1999-2000); ФЦНТП «Исследования и разработки по приоритетным направлениям развития науки и техники» на 2002-2006 годы, Блок I «Ориентированные фундаментальные исследования», раздел «Технологии живых систем», подраздел «Защита от патогенов».

Материалы диссертационной работы были представлены на: Всероссийской научно-практической конференции “Новые технологии в медицине”, 13-14 апреля 2001 г., Саратов; Общероссийской конференции с международным участием “Проблемы морфологии”, 14-16 мая 2002 г., г. Сочи; VIII Российской научно-практической конференции по проблеме “Холера”, 4-5 июня 2003 г., г. Ростов-на-Дону; ХIХ съезде физиологического общества им. И. П. Павлова, 19-24 сентября 2004 г., г. Екатеринбург; Всероссийской научно-практической конференции молодых ученых и специалистов “Окружающая Среда и здоровье”, 19-22 мая 2005 г., г. Суздаль; XXI Российской конференции по электронной микроскопии, 5-10 июня 2006 г., г.Черноголовка; VII Российском съезде врачей-инфекционистов “Новые технологии в диагностике и лечении инфекционных болезней”, 25-27 октября 2006 г., г. Нижний Новгород; VII межгосударственной научно-практической конференции «Чрезвычайные ситуации международного значения в общественном здравоохранении в рамках Санкт-Петербургского саммита «Группы восьми» и санитарная охрана территорий государств-участников Содружества Независимых Государств», 3-5 октября 2006 г., г. Оболенск; проблемной комиссии 50.04 «Холера и патогенные для человека вибрионы» Научного совета по санитарно-эпидемиологической охране территории Российской Федерации (50.00) 2000-2006 г.г.; IX съезде Всероссийского научно-практического общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов, 26-27 апреля 2007 г., г. Москва; VIII конгрессе “Современные проблемы аллергологии, иммунологии и иммунофармакологии”, 27-29 июня 2007 г., г. Москва ; VIII Межгосударственной научно-практической конференции государств-участников СНГ «Международные медико-санитарные правила и реализация глобальной стратегии борьбы с инфекционными болезнями в государствах-участниках СНГ», 25-26 сентября 2007 г., г. Саратов; на научно-практических конференциях «Итоги и перспективы фундаментальных и прикладных исследований» в институте «Микроб», 2000-2008 г.г.

Публикации результатов исследований. Основные положения диссертации изложены в 46 печатных работах, из них 15 статей в рекомендованных ВАК изданиях.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 337 листах машинописного текста, состоит из введения, 7-ми глав собственных исследований, заключения, выводов и списка использованной литературы, включающего 201 отечественный и 182 зарубежных источника. Работа иллюстрирована 89 таблицами и 47 рисунками.

2. Содержание работы

Материалы и методы исследований

Штаммы. В работе использовали 38 штаммов микроорганизмов, из них 26 штаммов V. cholerae О1 серогруппы (эльтор и классического биоваров), 4 штамма V.cholerae О139 серогруппы, 6 штаммов Y. pestis, в том числе вакцинный штамм Y. pestis EV линии НИИЭГ, 2 штамма F. tularensis, в том числе вакцинный штамм F. tularensis 15 линии НИИЭГ.

Препараты. Применяли следующие препараты: коммерческую холерную химическую бивалентную таблетированную вакцину производства РосНИПЧИ «Микроб» (серия 13); коммерческую вакцину Cholera-Impstoff (Lot: 015044.02, Exp.: 05.2000, Swiss Serum Institute); экспериментальные препараты “теней клеток” V. cholerae O1 eltor - VCG/O1 с пилями адгезии (ТСР) и без них; препараты “теней клеток” V. cholerae О139 (VCG/O139) c TCP и без них, приготовленные из штаммов V. cholerae О1 eltor cH1 и V. cholerae O139 AI-1838 (препараты любезно предоставлены доктором В. Любицем, Институт Микробиологии и генетики, Университета г. Вены, Австрия); холерную химическую вакцину, обогащенную ферментами (экспериментально-производственной серии) (РосНИПЧИ «Микроб»; живую чумную вакцину (ЖЧВ) производства ФГУЗ Ставропольского НИПЧИ; вакцину химическую чумную (ХЧВ) (экспериментально-производственной серии № 2) - препарат любезно предоставлен д.м.н. С.М. Дальвадянцем; вакцину туляремийную живую (ЖТВ) производства ФГУП «НПО «Микроген» «Омское предприятие по производству бакпрепаратов», г. Омск (серии 1, 16).

Экспериментальные животные. Работа выполнена на 123 взрослых кроликах породы шиншилла, 110 крольчатах-сосунках, 148 беспородных белых мышах, 255 морских свинках. Объектами морфологического исследования у биомоделей были внутренние органы (сердце, легкие, печень, почки, надпочечники), различные отделы желудочно-кишечного тракта (ЖКТ), лимфоидные органы - селезенка, различные группы лимфатических узлов (регионарные, контрлатеральные и отдаленные), аппендикс, пейеровы бляшки, лимфоидная ткань, ассоциированная с ЖКТ.

Методы. Для изучения культур микроорганизмов использовали общепринятые микробиологические методы. Штаммы холерных вибрионов вводили внутрикишечно крольчатам-сосункам по методу N.K. Dutta и M.K. Habbu [1955], per os белым мышам по методу S.N. Richardson [1984], а также внутрикишечно взрослым кроликам по методу W.M Spira с соавторами [1981]. Штаммы чумного и туляремийного микробов вводили подкожно морским свинкам и беспородным белым мышам.

Противохолерные вакцины вводили взрослым кроликам перорально с помощью зонда. Вакцинные штаммы Y. pestis EV линии НИИЭГ и F.tularensis 15 НИИЭГ вводили морским свинкам подкожно в правую паховую область. Аэрозольную вакцинацию проводили Y. pestis EV линии НИИЭГ морским свинкам в аспирационной дозе 5х105 ж.м.к.

При изучении чистых культур с помощью ПЦР использовали: для Y. pestis - тест-систему «ГенПест» (ТУ- 8895-005-01898109-2007, производства РосНИПЧИ «Микроб») и экспериментальную тест-систему «Мульти-Yp» (РосНИПЧИ «Микроб»); для V. cholerae - тест-систему «ГенХол - Тест-системы для выявления ДНК Vibrio cholerae (ctxA+) методом ПЦР» (ТУ 8895-006-01898109-2007, производства ФГУЗ РосНИПЧИ «Микроб»). Работу выполняли в соответствии с инструкциями к препаратам. Для выявления zot и ace генов V.cholerae использовали праймеры, предложенные A. Basu et al.(1998), параметры и условия реакции амплификации - Н.А. Давыдовой с соавторами (1999).

Иммунологические показатели после введения противохолерных вакцин определяли в сыворотках крови иммунизированных животных в различные сроки. Агглютинины выявляли по общепринятой методике, титры вибриоцидных антител устанавливали микрометодом [Benenson A.S. et al., 1968], антитела к холерному токсину, О-антигену и ферментам - в иммуноферментном анализе (ИФА) с использованием моноспецифических адсорбированных кроличьих сывороток. После введения противочумных вакцин сывороточные антитела к F1 чумного микроба определяли в трехкомпонентной реакции нейтрализации антигена (РНАГ) с диагностикумом эритроцитарным чумным иммуноглобулиновым сухим и в тесте активной защиты животных [МУ 3.3.1.1113-02].

После введения штамма - кандидата в холерные вакцины определяли количество апоптотических и пролиферирующих эукариотических клеток на импульсном проточном цитофлуориметре ICP-22 PHYWE (Германия).

Для гистологического исследования биоматериал фиксировали в 10 %-ом водном нейтральном растворе формалина и далее проводили по общепринятой в гистологии схеме обезвоживание и заливку его в парафин [Меркулов Г.А., 1969]. Из полученных парафиновых блоков на санном микротоме готовили полутонкие срезы (толщиной 4-5 мкм), которые окрашивали: гематоксилином и эозином [Лилли Р., 1969], альциановым синим и Шифф-реактивом [Пирс Э., 1962], суданом IV и осмиевой кислотой [Лилли Р., 1969], ОКГ (оранжевым-красным-голубым) [Зербино Д.Д., Лукасевич Л.Л., 1984], по методу Севки [Пирс Э., 1962], импрегнировали срезы серебром по Массону в модификации Гамперля [Саркисов Д.С., Перов Ю.Л., 1996], по Гримелиусу (1968), по Мозеру (1995), микробные клетки окрашивали по Николя [Меркулов Г.А., 1969]. Готовые гистологические препараты просматривали в световом микроскопе МБИ-15 с фотоприставкой или биологическом микроскопе Olimpus CX 31 с видеокамерой JVC.

Количество отдельных клеточных элементов (лимфоциты, нейтрофилы, эозинофилы, плазматические клетки, макрофаги, фибробласты) определяли на 100 клеток клеточного инфильтрата в 10 полях зрения правильно ориентированных срезов кишечника при увеличении Х 400. Конечный результат (среднеарифметическое значение) выражали в процентах. Количество межэпителиальных лимфоцитов (МЭЛ) тонкого кишечника и лимфоцитов покровного эпителия толстого кишечника определяли на 1000 ядер энтероцитов при увеличении Х 200. Общее количество бокаловидных клеток подсчитывали на 100 ядер эпителиоцитов в 10 повторах при увеличении Х 200, определяя их секреторный профиль по количеству клеток, дающих голубую (кислые мукополисахариды - КМПС), красную (нейтральные мукополисахариды - НМПС) или фиолетовую (смешанные формы) окраску, в 100 секреторных клетках. Количество апудоцитов определяли в 10 полях зрения правильно ориентированных срезов кишечника, лимфоидных органов (селезенка, мезентериальные лимфатические узлы, пейеровы бляшки), легочной ткани, мозгового вещества надпочечников при увеличении Х 200 - Х 400. Морфофункциональное состояние клеток оценивали по изменению интенсивности окрашивания и зоне распределения продукта секреции в клетке, выявляемых в гистохимических реакциях и подтверждаемых изменениями на электронограммах. Количество апудоцитов в состоянии различной функциональной активности определяли по формуле: Ру = Ух100/n, где Ру - процент клеток в том или ином морфофункциональном состоянии, У - количество клеток в данном морфофункциональном состоянии, n - общее число апудоцитов.

Подсчет апоптозных ядер проводили при увеличении Х 900, в 5-ти повторах, так чтобы анализу был подвергнут материал, включающий не менее 1000 клеток.

Степень активности отдельных структур лимфоидных органов и селезенки (Т- и В-зон) оценивали полуколичественным методом по 3-х балльной шкале (от 0 до 3): 0 баллов - отсутствие активности; 1 балл - слабо выраженная активность; 2 балла - умеренно выраженная активность; 3 балла- резко выраженная активность.

Состояние паренхиматозных клеток оценивали: по изменению ядерно-цитоплазматического индекса (ЯЦИ), деструктивного индекса (ДИ), определяемого по удельному весу в клеточной популяции элементов с проявлениями цитопатологии. Функциональное состояние дыхательной системы характеризовали по изменению перфузионно - вентиляционного отношения (ПВО).

Для выявления взаимосвязанной оценки отдельных звеньев гомеостаза, конкретные морфометрические параметры представляли в виде разработанных нами ассоциаций показателей в форме различных индексов.

Стрессорный индекс (Истресс.) вычисляли по формуле:

Истресс. = Шкоры / .Шмозг. ,

где Шкоры - ширина коркового, .Шмозг - ширина мозгового вещества надпочечников у исследуемой биомодели.

Коэффициент адаптации (Кадап.) вычисляли по формуле:

Кадап. = Истресс.оп . / Истресс.контр. ,

где Истресс.оп. - величина стрессорного индекса у животных опытной группы, Истресс.контр - аналогичный показатель в группе интактных контрольных животных.

Индекс регенеративной активности (ИР) вычисляли по формуле:

=

Коэффициент активности апудоцитов (КА) вычисляли по формуле:

=

где Иап - индекс активности апудоцитов определяемый по формуле:

=

Коэффициент секреторной активности (КС) вычисляли по формуле:

где Иса - индекс секреторной активности, определяемый по отношению клеток, содержащих КМПС к сумме клеток содержащих НМПС и смешанный продукт реакции, выраженная в процентах.

При выполнении морфометрического исследования строго следовали принципу соблюдения стандартных условий: забора и фиксации материала, приготовления и окраски срезов, определения учитываемых параметров.

Для морфометрической оценки интересующих характеристик использовали окулярные сетки Автандилова Автандилов Г.Г., 1990 и (или) возможности денситоморфометрической программы аппаратно-программного комплекса МЕКОС-Ц.

Препараты, приготовленные по общепринятой схеме обработки тканей для электронной микроскопии (Уикли Б., 1975), просматривали в электронном микроскопе JEM 7

Полученные результаты были статистически обработаны общепринятыми методами с вычислением средней арифметической (М), ошибки средней арифметической (m), коэффициента достоверности (р) и корреляционной зависимости(r). Графическая обработка результатов проводилась с использованием Microsoft Office Excel 2003. Морфометрические характеристики, полученные с помощью программы «Денситоморфометрия» (версия 2.1.0.0), статистически обрабатывались в рамках возможностей, предусмотренных программой.

Результаты исследований и их обсуждение

Основным показателем проявления функционирования тех или иных генов микроорганизма в макроорганизме являются изменения, возникающие в ответ на инокуляцию патогена, морфологическими эквивалентами которых можно считать развитие различных патологических или адаптационно-компенсаторных реакций.

Для исследований были отобраны типичные по родовым и видовым свойствам штаммы V.cholerae О1 серогруппы, культуры которых при внутрикишечном введении крольчатам-сосункам приводили к развитию холерогенной (вирулентные), энтеропатогенной (слабо вирулентные) реакции или вообще не вызывали видимых изменений со стороны ЖКТ биомодели (авирулентные). Методом ПЦР, в геноме, отобранных штаммов определяли наличие основных генов, связанных с вирулентностью (ctxА и tcpА) и дополнительных (zot и ace) и проводили морфометрический анализ гистологических изменений, выявляемых у зараженных ими крольчат-сосунков. Полученные количественные параметры сопоставили с особенностями генетической характеристики штаммов V.cholerae О1 серогруппы (таблица 1).

Согласно полученным данным реакция клеток APUD-системы у подопытных животных находилась в зависимости, с одной стороны, от отдела кишечника, а с другой - от особенностей фено- и генотипической характеристики штаммов холерных вибрионов, используемых для заражения, и коррелировала со степенью выраженности морфологических изменений в ЖКТ и внутренних органах биомоделей (таблица 2). Для удобства оценки степени функциональной активности апудоцитов использовали разработанный нами индекс функциональной активности (Иап). Так, Иап в тонком кишечнике крольчат, зараженных холерными вибрионами, содержащими полный набор генов патогенности, в 24 раза превышал аналогичный показатель у интактных контрольных животных. При этом наибольшее изменение Иап было характерно для введения холерных вибрионов классического биовара вирулентного штамма V. cholerae 569В. Введение холерных вибрионов штаммов, лишенных ctxА гена, также влияло на изменение Иап у крольчат, но в этом случае показатель не более чем в 3 раза превышал Иап у интактных контрольных животных (таблица 2). Штаммы с полным набором основных генов, обусловливающих их вирулентность, вызывали у подопытных животных почти 3-х кратное превышение учитываемых морфометрических параметров в почках по сравнению с интактными крольчатами, изменение в большей степени, чем в других группах, показателей функционального состояния печени (таблицы 3, 4). Причем внутри группы у животных, зараженных культурами этих штаммов, имел место определенный разброс величин определяемых показателей, позволяющий выделить среди отобранных культур штаммы, вызывающие максимально выраженные изменения у биомодели. Что касалось штаммов, лишенных ctxА гена, то среди них наибольшие изменения во внутренних органах подопытных животных вызывали V.cholerae, в геноме которых определялись гены zot и ace, кодирующие продукцию Zot и Ace токсинов.

Таким образом, на основании выявленных по результатам морфометрического анализа особенностей в реакции крольчат-сосунков на внутрикишечное введение различных по набору детерминант вирулентности холерных вибрионов были отобраны морфометрические параметры, позволяющие с большей долей достоверности характеризовать морфофункциональное состояние систем организма биомодели.

Несмотря на схожесть экспрессируемых факторов патогенности (подвижность, колонизирующая способность, токсические субстанции) у холерных вибрионов О1 и О139 серогрупп, последние имеют целый ряд особенностей. Аналогичным образом, отобрав штаммы холерных вибрионов О139 серогруппы, провели анализ морфофункциональных изменений апудоцитов и клеток эффекторной зоны иммунной системы у подопытных животных, зараженных ими.

Общая направленность ответной реакции APUD-системы кишечника биомоделей на инокуляцию холерных вибрионов заключалась в дегрануляции клеток, то есть в высвобождении того или иного количества биологически активных веществ (БАВ), принимающих непосредственное участие в патогенезе холерной инфекции. Для APUD-системы кишечника подопытных животных, зараженных холерными вибрионами О139 серогруппы, характерным было снижение количества апудоцитов и увеличение их функционального напряжения (таблица 5).

Таблица 1. Результаты внутрикишечного заражения крольчат-сосунков V. cholerae O1 в дозе 1х107 м.к.

Штаммы V.cholerae О1	Генетическая характеристика штаммов	Павшие с холерогенной реакцией (в %)	Павшие с энтеропатогенной реакцией (в %)	Оценка штаммов по холерогенной реакции
V.cholerae М1259, М1273, М1268, М674, 358, 569В, 410, 968	ctxA+, ace+,zot+, tcpA+	100	0	вирулентные
V.cholerae М1191	сtxA-, ace+, zot+, tcpA+	0	50	слабовирулентные
V.cholerae М661, М1183	сtxA-, ace+, zot+, tcpA-	0	0	авирулентные
V.cholerae 203, М1336, КМ27	сtxA-, ace-, zot-, tcpA+	0	0	авирулентные
V.cholerae М1397, М1398, М1257, М1280, М1242, КМ26	сtxA-, ace-, zot-, tcpA-	0	0	авирулентные
V.cholerae М1258, М1262, М1256, М1265	сtxA-, ace-, zot-, tcpA-		40	слабовирулентные

Таблица 2. Реакция апудоцитов кишечника крольчат-сосунков на внутрикишечное заражение V. cholerae О1 в дозе 1х107 м.к.

Группа штаммов V. cholerae О1 с генетической характеристикой	Количество штаммов	Количество апудоцитов в одном поле зрения среза кишечника (М+m)	Морфофункциональное состояние апудоцитов кишечника	Индекс активности апудоцитов (Иап)
		Тонкий кишечник	Толстый кишечник	Тонкий кишечник	Толстый кишечник	Тонкий кишечник	Толстый кишечник
				Опустошенные клетки в %)	Гистохимически активные клетки (в % )	Опустошенные клетки (в %)	Гистохимически активные клетки (в % )
ctxA+, tcpA+	8	4,69+0,53*	2,34+0,57*	78,65+11,83	6,07+3,86	36,51+5,64	22,25+5,45	6,41	1,45
ctxA-, tcpA-	12	6,02+0,87	3,77+0,73	32,99+3,42	7,46+4,25	41,39+2,45	7,22+3,07	0,76	0,98
ctxA-, tcpA+	4	6,56+0,99	3,83+0,84	31,36+3,44	8,92+4,07	40,13+6,75	7,04+2,14	0,73	0,96
Интактный контроль	-	7,92+0,98	5,13+0,64	18,92	2,13	24,95	23,78	0,27	0,95
Примечание -* достоверность р<0,05

Таблица 3. Морфометрические параметры, характеризующие состояние почек, у крольчат-сосунков при внутрикишечном заражении V. cholerae О1 в дозе 1х107 м.к.

Группа штаммов V. cholerae О1 с генетической характеристикой	Площадь почечного тельца (М+m)	Площадь сосудистого клубочка (М+m)	Суммарная площадь капилляров коры (М+m)	Суммарная площадь капилляров мозгового вещества (М+m)	Количество почечных телец на S = 317706мкм2 (М+m)	Отношение площади почечного тельца к площади сосудистого клубочка
ctxA+, tcpA+	2789,42+1096,08	1802,48+731,70*	9373,320+2684,13*	25426,01+5770,65	8,70+1,84*	1,56
ctxA-, tcpA-	1995,55+649,06	884,390+381,49	3635,900+579,500	12530,52+3029,04	11,88+3,34	2,42
ctxA-, tcpA+	2095,74+813,64	928,900+368,46	8961,29+3184,45	31867,12+8096,22*	12,79+2,55	2,32
Интактный контроль	1810,68+673,87	836,13+327,05	2978,64+975,60	19788,92+1098,24	19,8+1,24	2,17
Примечание - * достоверность р<0,05

Таблица 4. Морфометрические параметры, характеризующие состояние печени, у крольчат-сосунков при внутрикишечном заражении V. cholerae О1 в дозе 1х107 м.к.

Группа штаммов V. cholerae О1 с генетической характеристикой	Средняя площадь центральных вен печени (М+m)	Суммарная площадь печеночных капилляров (М+m)	Ядерно-цитоплазматический индекс (ЯЦИ) гепатоцитов	Количество клеток РЭС в одном поле зрения среза (М+m)
ctxA+, tcpA+	49127,53+2774,28	43682,65+17092,83	0,2	9,5+2,82*
ctxA-, tcpA-	23800,41+3110,34	61297,42+21777,73	0,3	11,43+3,12*
ctxA-, tcpA+	47814,69+27466,31	47391,91+9536,68	0,24	10,2+3,02*
Интактный контроль	27356,84+6112,05	50759,18+4043,91	0,28	29,7+3,02
Примечание -* достоверность р<0,05

Таблица 5. Реакция апудоцитов кишечника крольчат-сосунков на внутрикишечное введение холерных вибрионов О139 серогруппы

Группа штаммов V. cholerae О139 с генетической характеристикой	Количество апудоцитов в одном поле зрения среза кишечника (М+m)	Индекс активности апудоцитов (Иап)
	Тонкий кишечник	Толстый кишечник	Тонкий кишечник	Толстый кишечник
	Двенадцатиперстная кишка	Тощая кишка	Подвздошная кишка		Двенадцатиперстная кишка	Тощая кишка	Подвздошная кишка
V.cholerae МО45, РО7, 16064 (ctxA+, ace+, zot+ tcpA+)	4,43+0,8*	5,53+0,59	3,23+0,89*	2,5+0,62*	4,03	2,08	3,41	0,63
V.cholerae М62, 170 (сtxA-, ace-, zot-, tcpA-)	6,2+0,69	6,6+1,2	4,7+0,91	3,75+0,55	0,95	0,68	0,94	0,43
Интактный контроль	8,0+1,45	7,8+0,39	6,3+0,89	5,4+0,56	0,29	0,46	0,32	0,35
Примечание -* достоверность р<0,05

Так, Иап на введение ctxА+ штаммов холерных вибрионов в 14 раз превышал аналогичный показатель у контрольных животных и был выше, чем у крольчат, зараженных культурами ctxА- штаммов. У последних реакция клеток APUD-системы сводилась к умеренному функциональному напряжению элементов системы пропорциональному развивающимся адаптационно-компенсаторным процессам в органах.

Холерные вибрионы О139 серогруппы штаммов с генотипом ctxА+ zot+ace+ tcpА+ приводили к быстрой гибели подопытных животных и развитию выраженных изменений во внутренних органах близким к патологическим процессам, вызываемым вирулентными холерными вибрионами O1 серогруппы. Но в отличие от холерных вибрионов О1 серогруппы, в кишечнике подопытных крольчат наблюдали проявления воспалительного характера с превалированием пролиферативно-инфильтративных процессов над явлениями отека и дистрофического поражения энтероцитов. Эти изменения в ЖКТ протекали на фоне выраженных токсических повреждений паренхиматозных органов (почки, печень), возможно обусловленных строением патогена - наличием полисахаридной капсулы, соматического антигена О139, некоторыми отличиями в строении ЛПС микроба.

Таким образом, возможность сравнения определяемых количественных параметров позволила выявить среди отобранных штаммов холерных вибрионов как культуры, вызывающие у биомоделей наиболее выраженные типичные для холерной инфекции патоморфологические изменения, так и штаммы, не приводящие к развитию таковых.

На основании этого был предложен принцип выбора контрольных штаммов для экспериментальных исследований инфекционного и вакцинного процессов. Морфометрический анализ с применением компьютерных технологий в исследованиях применяли для повышения качества и информативности экспериментального морфологического заключения.

Использование метода RITARD для воспроизведения холеры у взрослых кроликов позволило провести мониторинг инфекционного процесса (таблица 6). Степень выраженности клинической картины болезни у животных коррелировала с интенсивностью гистологических изменений в ряде функциональных систем макроорганизма и подтверждалась результатами морфометрического анализа, причем изменения учитываемых морфометрических параметров, находились в зависимости от серогруппы холерных вибрионов, используемых для воспроизведения инфекции и носили дозозависимый характер. Так, была отмечена прямая корреляционная связь между количеством апудоцитов тонкого кишечника и величиной отека подслизистой оболочки (r=0,8) у животных, зараженных холерными вибрионами О1 серогруппы.

Содержание клеток в собственной пластинке слизистой (СПС) оболочки во всех отделах кишечника у животных, зараженных холерными вибрионами О1 серогруппы, было ниже, чем в контроле, что отражало величину выраженности отека слизистой и подслизистой оболочек у них, в то время как на введение холерных вибрионов О139 серогруппы регистрировали увеличение плотности клеточного инфильтрата в тонком кишечнике и снижение числа клеток в толстом кишечнике.

Таблица 6. Клинико-морфологическая характеристика холерного инфекционного процесса

Штамм

Число животных

СПЖ павших животных, в (ч)

Клинико-морфологическая характеристика изменений у павших/выживших животных

всего

павшие

выжившие

Диарея

Тонкий кишечник

Толстый кишечник

Объем содержимого

Характер содержимого

Состояние сосудов

Характер содержимого

Состояние сосудов

Выраженность

Длительность (ч)

V. chole- rae Р3122 О1 серогруппы

12

11

1

29,4+3,2

+++

до 30

185,5+12,9 35,6+9,18

серозное

Полнокровие сосудов брыжейки

«кашица» «орешки»

Умеренное полнокровие сосудов брыжейки

V. chole- rae Р16064 О139 се- рогруп- пы

7

7

0

27,4+2,9

+++

до 30

128,3+14,6 20,5+3,75

Серозно-слизистое

Выраженная инъекция сосудов серозной оболочки

«кашица»

Умеренное полнокровие сосудов брыжейки

Интактный контроль

3

0

3

>124

*

-

4,5+0,85

слизистое

бви

«орешки»

бви

Примечание - +++- выраженная диарея; *- отсутствие диареи; бви - без видимых изменений

То есть, ответная реакция макроорганизма на введение холерных вибрионов О139 серогруппы характеризовалась преимущественно экссудативным характером изменений в толстом кишечнике на фоне воспалительной реакции в тонком кишечнике, что подтверждалось присутствием в слизистой оболочке ПМЯЛ.

Холерные вибрионы О139 серогруппы вызывали более выраженную активацию МЭЛ в тонком кишечнике подопытных животных по сравнению с V.cholerae O1 серогруппы и оказывали значительное влияние на изменение функционального состояния бокаловидных клеток (таблица 7). Так, у всех животных этой группы имела место тенденция к увеличению числа клеток, содержащих КМПС, в то время как число клеток с секретом, представленным НМПС, резко снижалось, что указывало на снижение защитной функции слизи. Общие закономерности в реакции апудоцитов кишечника (таблица 8) как на введение холерных вибрионов как О1 серогруппы, так и О139 серогруппы сохранялись и заключались в уменьшении их количества во всех отделах кишечника на фоне их резкого опустошения и некоторого снижения синтетической активности. В целом реакция апудоцитов зависела от интенсивности развития диареи и тяжести течения заболевания у подопытных животных.

Таким образом, принцип поиска морфологических эквивалентов - маркеров заболевания и состояний реактивности макроорганизма, основанный на оценке клеточных систем защиты организма биомоделей - иммунной, нейроэндокринной и других, является перспективным направлением экспериментально-морфологического исследования патогенеза холеры. Расширение арсенала методов морфологического исследования, применяемых для учета влияния рекомбинантных штаммов холерных вибрионов на организм биомоделей за счет введения информативных и доступных к определению параметров адаптационно-компенсаторных реакций макроорганизма, позволило провести комплексное исследование холерных вибрионов О1 и О139 серогрупп: штамма V.cholerae eltor КМ184, не имеющего гена, кодирующего синтез холерного токсина (СТ), и несущего гены, детерминирующие экспрессию иммуногенной В-субъединицы СТ и фактора колонизации CFAI E.coli; штамма V. cholerae КМ182, содержащего рекомбинантные плазмиды с протективными антигенами - B-субъединицей холерного токсина и адгезином CFA/I.

В результате проведенных исследований были получены новые знания о механизмах нейроэндокринной регуляции процессов иммуногенеза - определены количественные показатели состояния нейроэндокринной системы кишечника и лимфоидных органов, в том числе лимфоидной ткани, ассоциированной с ЖКТ.

Динамика изменений морфофункционального состояния апудоцитов в кишечнике взрослых кроликов, иммунизированных V.cholerae КМ184, заключались в последовательной смене фаз функциональной активности и покоя клеток (таблица 9). Прослеживалась средней силы корреляционная связь (как прямая, так и обратная) между количеством апудоцитов в кишечнике и иммунологическими показателями в крови биомодели. Наблюдали обратную средней силы корреляционную связь ( = -0,5) между количеством НЭК в лимфоидных органах и уровнем агглютининов к V. cholerae cholerae и прямую средней силы связь ( = 0,5) между количеством НЭК и уровнем агглютининов к V. cholerae eltor.

Таблица 7. Характеристика состояния секреторных клеток ЖКТ и межэпителиальных лимфоцитов (МЭЛ) кроликов, зараженных вирулентными холерными вибрионами по методу RITARD

Штаммы	Количество секреторных клеток в поле зрения среза (М+m)	Индекс секреторной активности (Иса)	Количество межэпителиальных лимфоцитов (МЭЛ) на 100 ядер эпителиальных клеток
	Двенадцатиперстная кишка	Подвздошная кишка	Толстый кишечник	Двенадца- типерстная кишка	Подвздошная кишка	Толстый кишечник	Двенадцатиперстная кишка	Подвздошная кишка	Толстый кишечник
V. cholerae Р3122 О1 серогруппы	52,7+3,6	43,5+6,3	35,5+4,1*	1,3	1,6	3,4	43,3+11,24	68,3+7,11	38,9+5,44
V. cholerae Р16064 О139 серогруппы	68,8+4,3	47,5+6,2	60,5+5,7	6,8	12,4	9,4	51,3+4,92	94,8+14,14	60,5+5,7
Интактный контроль	59,9+7,8	47,6+3,4	84,9+5,1	0,12	0,47	0,5	32,1+6,59	76,4+15,8	46,7+14,4
Примечание - * достоверность р<0,05

Таблица 8. Морфофункциональная характеристика апудоцитов ЖКТ кроликов, зараженных вирулентными холерными вибрионами по методу RITARD

Штаммы	Количество апудоцитов в одном поле зрения среза кишечника (М+m)	Индекс активности апудоцитов (Иап)
	Двенадцатиперстная кишка	Подвздошная кишка	Толстый кишечник	Двенадцатиперстная кишка	Подвздошная кишка	Толстый кишечник
V. cholerae Р3122 О1 серогруппы	1,98+0,2*	2,4+0,61	1,4+0,64*	1,46	1,35	2,32
V. cholerae Р16064 О139 серогруппы	2,9+0,89	1,8+0,32*	2,7+0,54	2,7	1,22	1,62
Интактный контроль	3,6+0,64	3,0+0,19	3,6+1,12	0,78	0,47	0,82
Примечание - * достоверность р<0,05

Таблица 9. Реакция апудоцитов желудочно-кишечного тракта взрослых кроликов, иммунизированных V.cholerae КМ184

Показатель	Контроль I	Контроль II	Срок наблюдения после иммунизации (сутки)
			1	3	7	14	21	28
Двенадцатиперстная кишка
Количество апудоцитов в поле зрения (М+m)	5,40+0,45	7,60+0,69 *	7,20+0,4*	5,50+1,5	3,30+0,75*	5,50+0,8	2,10+0,2	3,80+0,84
Количество опустошенных клеток (%)	27,8	40,8	59,7	60	36,4	40,5	42,4	41,6
Количество гистохимически активных клеток (%)	15,9	3,9	2,8	0	21,2	2,4	0	2,6
Индекс активности апудоцитов (Иап)	0,78	0,81	1,67	1,5	1,36	0,75	0,74	0,79
Начальные отделы толстого кишечника
Количество апудоцитов в поле зрения (М+m)	2,8+0,62	3,2+1,17	3,1+1,17	3,1+0,89	2,5+0,32	4,4+1,15 *	2,0+0,61	1,8+0,41 *
Количество опустошенных клеток (%)	38	53	61,3	74,2	52	49	45	38,9
Количество гистохимически активных клеток (%)	...

Подобные документы

• Возбудители чумы, туляремии, борелиозов

  Микроб чумы при культивировании на искусственных питательных средах в условиях повышенной температуры. Течение заболевания. Морфологические и культуральные свойства возбудителя туляремии. Распространение вирусов по организму. Профилактика борелиозов.
  
  реферат [2,5 M], добавлен 15.05.2013
  

• Симптомы и течение туляремии

  Общая характеристика туляремии: главный носитель и источник, пути передачи. Инкубационный период болезни, основные симптомы, методы лечения. Меры специфической профилактики туляремии среди людей. Схема патогенеза туляремии, дифференциальная диагностика.
  
  презентация [275,7 K], добавлен 15.11.2016
  

• Характеристика туляремии

  Этиология туляремии. Классификация возбудителя болезни, специфика его циркуляции в природе. Культивирование туляремий. Пути заражения и патогенез. Клиническое проявление, сближающее туляремию с чумой. Лабораторная диагностика, способы лечения туляремии.
  
  презентация [3,5 M], добавлен 12.02.2014
  

• Лечение холеры

  Систематизация теоретических и практических знаний по лечению холеры. Лечение пациентов инфекционного профиля. Широкое распространение холеры Эль-Тор. Эпидемическая ситуация по холере в мире, ее этиология, патогенез, эпидемиология и классификация.
  
  реферат [164,9 K], добавлен 01.03.2017
  

• Возбудители бактериальных кровяных инфекций

  Общая характеристика возбудителей чумы, туляремии, боррелиозов и риккетсиозов. Основные источники инфекций, механизмы и пути их передачи. Эпидемиология и патогенез болезни Лайма. Общая характеристика эпидемического и эндемического возвратного тифа.
  
  презентация [2,0 M], добавлен 10.03.2019
  

• Эпидемии XIX века

  Эпидемия тифа в России в 1812 году. Семь пандемий холеры. Эпидемия холеры в Великобритании в 1831 году. Широкомасштабная эпидемия чумы, зародившаяся в провинции Юньнань. Одежда врачей во время чумы. Эпидемия холеры в России в период 1823-1865 годов.
  
  презентация [2,2 M], добавлен 22.12.2015
  

• Возбудители зоонозных инфекций

  Характеристика зоонозов - заболеваний, при которых источником инфекции являются животные, служащие единственным резервуаром возбудителя в природе. Возбудитель сибирской язвы. Эпидемиология и клинические особенности чумы. Факторы патогенности туляремии.
  
  презентация [3,4 M], добавлен 23.05.2013
  

• Симптомы холеры

  Холера как одно из острых инфекционных заболеваний. Описание возбудителя болезни. Определение тяжести болезни в зависимости от степени обезвоживания и понижения тургора кожи. Лабораторная диагностика, профилактика и лечение. Регидратация при холере.
  
  презентация [1003,8 K], добавлен 06.05.2014
  

• История эпидемий чумы

  Микробиологическая характеристика возбудителя чумы. Пути передачи инфекции. Клиническая картина заболевания. Эпидемиологические особенности чумы. Описания трёх пандемий чумы, которые прошли в течение двух последних тысячелетий. Чума в современном мире.
  
  реферат [2,0 M], добавлен 18.09.2013
  

• Течение пневмонии в зависимости от степени тяжести

  Понятие пневмонии как острого инфекционно-воспалительного процесса бактериальной этиологии, поражающего преимущественно респираторный отдел легочной ткани. Определение типа пневмонии, ее степени тяжести и течения. Клинические признаки заболевания.
  
  презентация [137,5 K], добавлен 08.02.2015
  

• Антропозоонозы, их эпидемиология и профилактика. Туляремия, лептоспироз, иерсиниоз, весеннее-летний энцефалит

  Инфекционные и инвазионные болезни, общие для человека и животных. Сибирская язва, бешенство: признаки, меры борьбы. Лептоспироз: эпизоотология, иммунитет, течение и симптомы у животных. Особенности профилактики туляремии. История изучения иерсиний.
  
  контрольная работа [52,2 K], добавлен 04.12.2011
  

• Диагностика и этиология чумы

  История появления и чумы. Этиология заболевания, факторы вирулентности. Стадии эпидемического процесса, патогенез и клиническая картина болезни. Диагностика и лечение, группы препаратов, применяющихся при этиотропной терапии этого инфекционного недуга.
  
  презентация [3,1 M], добавлен 27.05.2013
  

• Патофизиология инфекционного процесса. Сепсис

  Основные понятия и определения форм и вариантов течения инфекционных болезней. Общие закономерности патогенеза острого и хронического инфекционного процесса. Патогенез инфекционно-токсического шока. Возбудители сепсиса, системы иммунитета на инфекцию.
  
  презентация [238,7 K], добавлен 23.12.2013
  

• Чума

  Чумная палочка как возбудитель чумы. Эпидемия чумы в истории. Эпидемиология. Переносчики инфекции. Патогенез. Симптомы и течение болезни. Виды и формы чумы. Бактериологические и серологические исследования. Предупреждение болезни и профилактика.
  
  реферат [28,4 K], добавлен 01.06.2008
  

• Патофизиология инфекционного процесса

  Особенности возбудителя и макроорганизма. Характер и динамика тканевых изменений. Инфекционные болезни, вызываемые вирусами, риккетсиями, бактериями, грибами. Клинико-морфологическая характеристика. Осложнения при чуме, ее формы, источники заражения.
  
  контрольная работа [1,4 M], добавлен 05.04.2013
  

• Гипотермия и гипертермия

  Причины гипотермии и гипертермии. Факторы, способствующие переохлаждению и перегреванию. Патофизиологические изменения в организме в зависимости от внутренней температуры тела. Компенсаторные реакции при нарушении теплового баланса. Солнечный удар.
  
  презентация [742,7 K], добавлен 16.12.2014
  

• Лечение чумы

  История открытия возбудителя чумы, его описание. Эпидемиология заболевания. Пути заражения, механизмы развития чумы. Основные симптомы и формы чумы. Лечение, направленное на разные этапы развития патологического процесса. Способы профилактики заболевания.
  
  презентация [288,3 K], добавлен 02.12.2016
  

• Особенности течения беременности и родов при анемиях

  Причины возникновения и развития анемии беременных. Ее опасность для матери и ребенка. Определение тяжести течения заболевания по уровню гемоглобина в периферической крови. Диагностика и лечение, принципы терапии. Течение и ведение беременности и родов.
  
  курсовая работа [296,9 K], добавлен 29.01.2015
  

• Холера: описание, симптомы, лечение болезни

  Характеристика, симптомы и пути распространения холеры - острого инфекционного заболевания. Этиология и эпидемиология заболевания. Пищеварительный тракт как "входные ворота" для инфекции. Клиническая картина, диагностика, профилактика и лечение холеры.
  
  презентация [5,7 M], добавлен 07.03.2016
  

• Клиника геморрагического шока

  Стадии развития и степени тяжести геморрагического шока, его клиническая картина и патогенез. Причины острой кровопотери: различные травмы и заболевания. Компенсаторные реакции функциональных систем организма. Диагностика и лечение геморрагического шока.
  
  реферат [24,0 K], добавлен 17.10.2013
  

• главная
• рубрики
• по алфавиту
• вернуться в начало страницы
• вернуться к началу текста
• вернуться к подобным работам