Клинико-генетический и биохимический анализ болезни Паркинсона: механизмы предрасположенности, экспериментальные модели, подходы к терапии

Размещено на http://www.allbest.ru/

На правах рукописи

14.00.13 - нервные болезни

03.00.04 - биохимия

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

Клинико-генетический и биохимический анализ болезни Паркинсона: механизмы предрасположенности, экспериментальные модели, подходы к терапии

Багыева Г.Х.

Москва ? 2009

Работа выполнена в Учреждении Российской академии медицинских наук

Научном центре неврологии РАМН

Научные консультанты:

доктор медицинских наук, профессор И. А. Иванова-Смоленская доктор биологических наук Т. Н. Федорова

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Г. Н. Авакян

доктор медицинских наук, профессор А. С. Кадыков

доктор медицинских наук, профессор С.В. Пирожков

Ведущая организация:

Московский Областной Научно-исследовательский Клинический Институт им. М.В. Владимирского (МОНИКИ).

Защита диссертации состоится « » сентября 2009 г. в 12 часов на заседании Совета по защите докторских и кандидатских диссертаций Д 001.006.01 при Учреждении Российской академии медицинских наук Научном центре неврологии РАМН по адресу: 125367 Москва, Волоколамское шоссе, 80.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке НЦН РАМН.

Автореферат разослан «____» ________________ 2009 г.

Ученый секретарь Совета по защите докторских и кандидатских диссертаций Д 001.006.01, кандидат медицинских наук М. А. Домашенко

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования

Болезнь Паркинсона (БП) - одно из наиболее тяжелых и распространенных нейродегенеративных заболеваний человека, характеризующееся хроническим прогрессирующим течением, нарушением функции базальных ганглиев и тяжелой инвалидизацией больных. Лечение больных БП до настоящего времени носит симптоматический характер и не влияет на текущий процесс нейродегенерации [Голубев и др., 1999; Koller, Tse, 2004; Jenner, 2008].

Существует несколько гипотез, касающихся причин гибели дофамин-продуцирующих нейронов при БП, в их числе: генетическая предрасположенность; окислительный стресс; митохондриальная дисфункция; действие экзогенных нейротоксинов [Иллариошкин, 2008]. По современным представлениям, в патогенезе нейродегенерации при БП могут иметь значение все вышеуказанные механизмы, что дает возможность рассматривать БП как мультифакториальное страдание, которое проявляется в результате взаимодействия генетических и средовых факторов [Lee, Liu, 2008; Veidman et al., 1998].

Семейные формы БП составляют около 5?10% случаев заболевания, остальные случаи являются спорадическими [Lee, Liu, 2008; Mizuno et al., 2008]. На молекулярном уровне моногенные формы БП представляют собой генетическую патологию ряда митохондриальных белков, компонентов убиквитин-протеасомного комплекса либо белков, изменение конформации которых приводит к формированию в нейронах нерастворимых включений, что инициирует реакции окислительного стресса и апоптоза [Иллариошкин, 2003, 2008; Schiesling et al., 2008]. Роль генетики в этом процессе заключается либо в наследственных дефектах белкового гомеостаза, либо в формировании неблагоприятного метаболического фона, определяющего высокий риск нейродегенерации в определенных средовых условиях. Таким образом, мутационный анализ генов наследственных форм паркинсонизма, а также установление основных генов предрасположенности при спорадических формах заболевания представляют собой двуединую задачу, позволяющую оценить удельный вес геномных факторов в развитии БП [De Michele et al. 1995; Schiesling et al., 2008].

Из средовых факторов риска БП важнейшим является окислительный стресс с нарушением внутриклеточного баланса между образованием активных форм кислорода (АФК) и состоянием тканевой антиоксидантной защиты. Повышенный уровень АФК рассматривается как один из факторов развития многих нейродегенеративных заболеваний, а также процесса старения [Завалишин и др., 2001; Иллариошкин, 2003]. Существенным источником АФК в клетках является нарушение функций митохондрий [Halliwell, 1999; Chinnery et al., 1999]. Установлено, что в митохондриях нейронов черной субстанции, скелетных мышц и клеток крови больных БП наблюдается стойкий дефицит комплекса I дыхательной цепи [Swerdlow et al. 1998; Wooten et al. 1997]. Поэтому актуальной задачей является изучение роли окислительного стресса в механизмах повреждения митохондрий при БП. Особый интерес представляет анализ возможности обеспечения сохранности структуры и функции митохондрий с помощью природных и синтетических антиоксидантов.

Новые данные о патогенезе нейродегенерации могут быть получены при исследовании уникальной экспериментальной модели паркинсонизма у быстростареющих мышей линии SAMP1 (Senescence Accelerated Mice, Prone) . Эта модель отличается ускоренной динамикой развития возрастных изменений и четко выраженной симптоматикой в ответ на введение токсина МРТР (N-метил-4-фенил-1,2,3,6-тетрагидропиридина) [Болдырев и др., 2001, Stvolinsky et al., 2001]. Мыши SAMP представляют собой генетически устойчивую линию животных, ускоренное старение которых объясняется выраженным дисбалансом между образованием и нейтрализацией свободных радикалов и, как следствие ? множественными окислительными повреждениями биологических макромолекул в их тканях. Можно предположить, что комбинация возрастных факторов и дефектов системы антиоксидантной защиты с нарушениями обмена веществ в мозге, вызываемыми МРТР, может привести к более выраженным нейродегенеративным изменениям, что позволит использовать эту модель для более тонкого исследования патогенетических механизмов паркинсонизма [Болдырев и др., 2001].

Таким образом, на сегодняшний день не вызывает сомнений существование ряда конститутивных генетических и биохимических факторов, определяющих предрасположенность к развитию БП. Однако вопросы соотношения этих факторов, их популяционной специфичности, а также целенаправленной профилактики на основе нейропротекции разработаны в недостаточной степени.

Цель работы: клинико-экспериментальный анализ ряда молекулярно-генетических и биохимических факторов развития БП, а также разработка на этой основе новых подходов к терапии данного заболевания.

В соответствии с настоящей целью были поставлены следующие задачи:

1. Мутационный скрининг и изучение роли ряда основных генов, связанных с развитием наследственно-семейных паркинсонизма, в формировании генетической предрасположенности к спорадической БП:

· ген PRKN (паркин), локус PARK2 на хромосоме 6q25.2-27;

· ген LRRK2 (дардарин), локус PARK8 на хромосоме 12p11.2;

· ген SNCA (-синуклеин), локус PARK1 на хромосоме 4q21;

· ген GBA (глюкоцереброзидаза) в локусе 1q21.

2. Анализ клинико-генетических корреляций в случаях с идентифицированными мутациями в кандидатных генах паркинсонизма.

3. Изучение ассоциаций спорадической БП с полиморфными вариантами генов нейротрансмиттеров центральной нервной системы.

4. Моделирование паркинсонизма в эксперименте с помощью нейротоксина МРТР на линии быстро стареющих мышей SAMP, изучение у них вызванных биохимических нарушений, затрагивающих важнейшие ферментные системы митохондрий мозга.

5. Проведение сравнительного анализа параметров перекисного окисления липидов и антиоксидантных систем в клетках крови (моноаминооксидаза B, сукцинатдегидрогеназа, супероксиддисмута, карбонильные группы белков, окисленность липидного материала митохондриальных мембран) у больных БП в сопоставлении с аналогичными характеристиками у животных с экспериментальным паркинсонизмом - быстро стареющих мышей линии SAMP.

6. Изучение роли окислительного стресса в механизмах повреждения митохондрий при паркинсонизме и обеспечение их сохранности с помощью природных (карнозин) и синтетических (мексидант) антиоксидантов на модели МРТР-индуцированного паркинсонизма у быстростареющих мышей линии SAMP, а также в сочетании с антипаркинсоническими препаратами у пациентов с БП.

Научная новизна. Впервые изучена роль генов наследственно-семейных форм первичного паркинсонизма (PRKN, LRRK2, SNCA, GBA) в развитии спорадической БП у российских больных - представителей преимущественно славянских этнических групп. Установлено, что наследуемые мутации в генах паркинсонизма выявляются более чем в 10% всех случаев спорадической БП, в том числе гетерозиготные экзонные перестройки гена PRKN - у 6,5% больных, а мажорные мутации в генах LRRK2 и GBA - суммарно у 5% больных. Показан более ранний возраст манифестации БП у носителей мутаций в гене PRKN, а также аддитивное действие комбинации различных мутаций в отношении тяжести заболевания. Впервые выявлена ассоциация спорадической БП с полиморфными аллелями генов ряда нейротрансмиттерных систем ЦНС - HTR2A (cеротониновый рецептор 2A), РОМС (проопиомеланокортин) и WFS1 (везикулярный пептид вольфрамин). В работе проведено комплексное клинико-биохимическое и экспериментальное исследование состояния окислительного статуса и антиоксидантной защиты при БП и МРТР-индуцированном паркинсонизме, показана однонаправленность основных патобиохимических звеньев нейродегенеративного процесса в клинике и эксперименте на модели быстростареющих мышей линии SAMP (угнетение активности СОД, повышение уровня липидных гидроперекисей, значительное снижение суммарной активности эндогенной антиоксидантной защиты).

Практическая значимость. Выявление с высокой частотой мутаций в генах PRKN, LRRK2 и GBA у пациентов со спорадической БП принципиально меняет подходы к медико-генетическому консультированию и оценке риска болезни у членов отягощенных семей. В работе предложены и апробированы на практике методы экономного мутационного скрининга генов паркинсонизма (APEX-технология, анализ дозы гена методом ПЦР в реальном времени при гетерозиготных экзонных перестройках). По результатам проведенных исследований в клинике и эксперименте уточнены характеристики окислительного стресса при паркинсонизме и обоснована целесообразность применения ряда новых антиоксидантов в патогенетической терапии БП. Проведено сравнительное изучение эффективности антиоксидантной терапии карнозином и мексидантом при МРТР-индуцированном паркинсонизме, а также (при их комбинированном применении в сочетании с антипаркинсоническими препаратами) у больных БП.

Положения, выносимые на защиту:

1. Важным фактором развития спорадической БП являются наследуемые мутации в генах, связанных с менделирующими формами первичного паркинсонизма: в российской (преимущественно славянской) выборке пациентов со спорадической формой БП гетерозиготные мутации генов PRKN, LRRK2 и GBA выявляются более чем в 10% случаев болезни.

2. При анализе клинико-генетических корреляций установлено, что носительство мутаций в генах PRKN (паркин) и GBA (глюкоцереброзидаза) ассоциировано с более ранним дебютом клинической симптоматики, а сочетание мутаций (двойная гетерозиготность) в различных генах паркинсонизма характеризуется аддитивным эффектом в отношении тяжести течения заболевания. Мажорная мутация G2019S в гене LRRK2 обусловливает широкий полиморфизм возраста дебюта и фенотипических проявлений паркинсонизма. Высокая частота носительства данной мажорной мутации у пациентов с БП обусловлена как «эффектом основателя», так и повторными мутационными событиями de novo.

3. В исследованной популяции установлена ассоциация спорадической БП с полиморфизмами в генах HTR2A (cеротониновый рецептор 2A), РОМС (проопиомеланокортин) и WFS1 (везикулярный пептид вольфрамин), что подтверждает патогенетическую взаимосвязь данного заболевания с активностью нейропептидной и серотонинергической трансмиттерных систем головного мозга.

4. С биохимической точки зрения БП (идиопатический паркинсонизм) и экспериментальный МРТР-индуцированный паркинсонизм у быстростареющих мышей линии SAMP1 характеризуются однонаправленными изменениями, свидетельствующими об истощении системы антиоксидантной защиты и усилении свободнорадикальных процессов перекисного окисления липидов. С учетом возникающих при этом у мышей линии SAMP1 двигательных и поведенческих нарушений можно заключить, что животные с генетически ускоренным старением мозга являются наиболее адекватной моделью для изучения механизмов нейродегенеративного повреждения вещества мозга в эксперименте.

5. Окислительный стресс и его патофизиологические проявления на уровне ткани мозга быстростареющих животных с экспериментальным паркинсонизмом предотвращается курсовым введением природного антиоксиданта карнозина (протекция в отношении угнетения двигательной активности и МРТР-индуцированной мышечной ригидности, предотвращение подавления активности МАО-В и активации СОД, защита белков от окислительной модификации). У больных БП назначение карнозина сопровождается существенным усилением позитивной динамики клинических симптомов (по сравнению с группой базисной терапии), уменьшением окислительного повреждения липопротеинов крови на фоне повышения уровня эндогенной антиоксидантной защиты и сохранения активности Cu/Zn-СОД.

6. Включение в терапевтическую схему у пациентов с БП синтетического антиоксиданта мексиданта способствует нейтрализации роста липидных гидроперекисей в липопротеинах крови и повышению уровня эндогенной антиоксидантной защиты; особенно отчетлив эффект мексиданта в отношении снижения частоты выявляемых побочных эффектов леводопа-терапии. Результаты проведенных исследований являются основанием для использования природных и синтетических антиоксидантов различных классов (карнозин, мексидант) в комплексном лечении паркинсонизма.

Апробация работы. Работа апробирована и рекомендована к защите на совместном заседании сотрудников I, II, III, V неврологических, нейрохирургического и научно-консультативного отделений, отделения реанимации и интенсивной терапии, отдела исследований мозга, научно-координационного отдела, отделения лучевой диагностики, лабораторий экспериментальной и клинической нейрохимии, кардионеврологии, ультразвуковой диагностики, эпидемиологии и профилактики заболеваний нервной системы, патологической анатомии с прозектурой, клинической нейрофизиологии НЦН РАМН 13 мая 2009 г.

Результаты работы доложены на: научной конференции НИИ неврологии РАМН (2006 г); Российских национальных конгрессах «Человек и лекарство» (2004, 2005); II Украинском симпозиуме с международным участием «Экстрапирамидные болезни и возраст» (Киев, 2004); Научно-практической конференции неврологов Московской области (Ступино, 2005); V съезде Российского общества медицинских генетиков (Москва, 2005); IX Всероссийском съезде неврологов (Ярославль, 2006); Международных конгрессах по болезни Паркинсона и нарушениям движений (Рим, 2004; Новый Орлеан, 2006; Киото, 2007), XVII Всемирном конгрессе по болезни Паркинсона (Амстердам, 2007); Конференции Европейской Федерации Неврологических Обществ (Брюссель, 2007); I Национальном конгрессе по болезни Паркинсона и расстройствам движений (Москва, 2008).

Публикации. По материалам диссертации опубликованы 32 научных работы в отечественных и зарубежных изданиях.

Объем и структура диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы по теме диссертации, описания материалов и методов исследования, 3 глав с изложением полученных результатов, обсуждения, выводов и практических рекомендаций, списка литературы и приложений. Диссертация изложена на 214 страницах машинописного текста, содержит 27 таблиц и 30 рисунков. Библиографический указатель включает 314 источников, в том числе 51 работу отечественных и 263 ? зарубежных авторов.

Автор выражает искреннюю благодарность за помощь и поддержку при выполнении различных фрагментов диссертационного исследования:

§ коллективу сотрудников нейрогенетического отделения Научного центра неврологии РАМН (зав. - проф. И.А. Иванова-Смоленская), в особенности научным сотрудникам ДНК-лаборатории отделения - кандидатам мед. наук Н.И.Миклиной и Н.Ю. Абрамычевой;

§ сотрудникам лаборатории клинической и экспериментальной нейрохимии (зав. - проф. А.А. Болдырев) Научного центра неврологии РАМН;

§ сотрудникам лаборатории молекулярной генетики наследственных заболеваний (зав. - д.б.н. П.А.Сломинский) Отдела молекулярных основ генетики человека (зав. - проф., лауреат Государственной премии РФ С.А.Лимборская) Института молекулярной генетики РАН;

§ сотрудникам Института молекулярной и клеточной биологии Тартуского университета (Эстония).

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Общая характеристика обследованных больных и семей

Обследованы 369 больных с различными вариантами первичного паркинсонизма, а также 65 их клинически здоровых родственников. У 351 больных имела место спорадическая БП, а у 18 (4,9%) имелись указания на достоверное аутосомно-доминантное наследование болезни. Аутосомно-доминантный паркинсонизм рассматривался нами в качестве своеобразной группы сравнения по отношению к основной обследованной группе - спорадической форме БП. Большинство больных БП имели славянские этнические корни по одной либо обеим родительским линиям и происходили из семей, проживавших на протяжении 2-3 поколений на территории европейской части России. В исследование не включались лица с ювенильным паркинсонизмом, заболевшие на первом-втором десятилетии жизни и имевшие a priori генетическую составляющую в качестве ведущего фактора развития болезни [Загоровская и др., 2004; Mata et al., 2004]. Исключением были 9 пациентов с доказанным аутосомно-рецессивным ювенильным паркинсонизмом и выявленными ранее делециями отдельных экзонов гена PRKN (паркин, локус PARK2), образцы ДНК которых использовались в качестве позитивного контроля при разработке метода полимеразной цепной реакции (ПЦР) в реальном времени для анализа дозы гена PRKN (см. далее).

Таким образом, нами обследована невыборочная серия преимущественно спорадических случаев БП (возраст дебюта - 20-75 лет), наблюдавшихся в нейрогенетическом отделении Научного центра неврологии РАМН в 2003?2007 гг. и соответствующих общепринятыми критериям БП [Hughes et al., 1992].

Оценка тяжести состояния больных БП опиралась на стандартные количественные шкалы: 1) функциональная шкала Хен?Яра в модификации Линдвала; 2) унифицированная рейтинговая шкала оценки БП (UPDRS).

В качестве контроля при проведении генетических исследований обследованы 350 неврологически здоровых лиц (700 контрольных хромосом), соответствующих основной группе по возрастному и половому составу.

Методы исследования

Молекулярно-генетические методы исследования

Молекулярно-генетическая часть работы выполнялась на базе ДНК-лаборатории нейрогенетического отделения ННЦ РАМН и отдела молекулярных основ генетики человека Института молекулярной генетики РАН (зав. лабораторией проф. П.А. Сломинский, зав. отделом - лауреат Государственной премии РФ, проф. С.А. Лимборская). Часть исследований (оценка аллельных частот на основе APEX-технологии) проводилась совместно с Институтом молекулярной и клеточной биологии Тартуского университета (Эстония). Всего исследовано свыше 800 образцов ДНК, в том числе 434 образца ДНК больных с паркинсонизмом и более 400 образцов ДНК здоровых лиц из групп контроля.

Анализ наиболее частой мажорной мутации в гене LRRK2 (локус PARK8) - нуклеотидной замены 6055G>A в 41-м экзоне LRRK2, ведущей к замещению глицина (G) на серин (S) в белковой позиции 2019, осуществлялся методом ПЦР в реальном времени [Kachergus et al., 2005]. В части случаев БП анализ мутации LRRK2-G2019S осуществлялся с помощью стандартного сайт-специфичного SfcI-рестрикционного теста («Ферментас», Литва) в соответствии с описанным для мутации G2019S протоколом [Hernandez et al., 2005]. Для анализа гаплотипов у носителей мутации G2019S были типированы 2 микросателлитных (D12S2516, D12S2518) и 4 однонуклеотидных SNP-полиморфизма (rs7966550, rs1427263, rs11176013, rs11564148), сцепленных с локусом PARK8 на хромосоме 12q12 [Kachergus et al., 2005]. Генотипирование по 24-полиморфизму гена аполипопротеина Е (AроE) у носителей мутации LRRK2-G2019S проводилось в соответствии со стандартным протоколом [Wenham et al., 1991].

Анализ структурных перестроек в гене PRKN (паркин, локус PARK2) проводился с помощью количественного анализа дозы гена методом ПЦР в реальном времени в технологии TaqMan на приборе ANA-32 (“Syntol”, Москва). В качестве внутреннего стандарта с каждым экзоном PRKN коамплифицировался ген в-глобина. Для максимальной верификации интенсивности флюоресценции ПЦР-продуктов все образцы тестировались трижды. Отношение концентраций паркин/в-глобин подсчитывалось для всех ДНК образцов. Нормальным расценивалось соотношение от 0,7 до 1,3. Показатели ниже 0,6 или выше 1,4 расценивались как гетерозиготная делеция или дупликация определенного экзона, соответственно.

Этим же методом ПЦР в реальном времени в технологии TaqMan (амплификация с использованием немеченых праймеров в присутствии флуоресцентно меченного экзон-специфичного зонда) оценивалась копийность экзонов 4?6 гена SNCA (-синуклеин).

Анализ 5 мажорных мутаций в гене GBA (глюкоцереброзидаза), которые в ряде популяций мира ассоциированны с БП [Sato et al., 2005], проводился с помощью специфичных для каждой нуклеотидной замены рестрикционных тестов. Исследованы мутации 84insGG (2-й экзон гена), K198T (6-й экзон), R329C (8-й экзон), N370S (9-й экзон) и L444P (10-й экзон).

Анализ однонуклеотидных полиморфизмов в кандидатных генах проводился с использованием APEX-технологии (от англ.: Arrayed Primer EXtension), сочетающей в себе эффективность метода микрочипов и точность ди-дезоксисеквенирования по Сэнгеру [Kurg et al., 2000]. Проанализированы 50 однонуклеотидных полиморфизмов (SNP) в 19 генах, которые могут быть вовлечены в нейродегенеративный процесс при БП.

Гены-кандидаты и конкретные SNP были отобраны на основании их участия в нейротрансмиссии и показанного ранее для некоторых из них возможного вовлечения в патогенез БП (таблица 1).

Таблица 1. Исследованные с помощью APEX-технологии гены и однонуклеотидные полиморфизмы (SNPs).

Ген (аббревиатура)	Число SNPs	Локализация гена
Холецистокинин (CCK)	2	3p22-p21.3
Холецистокинин, A-рецептор (CCKAR)	3	4p15.1-p15.2
Холецистокинин, В-рецептор (CCK2B)	4	11p15.4
D1-дофаминовый рецептор (DRD1)	5	5q35.1
D2-дофаминовый рецептор (DRD2)	6	11q23
D3-дофаминовый рецептор (DRD3)	2	3q13.3
D5-дофаминовый рецептор (DRD5)	1	4p16.1
Тирозин-гидроксилаза (TH)	1	11p15.5
Серотониновый рецептор 1A (HTR1A)	1	5q11.2-q13
Серотониновый рецептор 1B (HTR1B)	3	6q13
Серотониновый рецептор 2A (HTR2A)	3	13q14-q21
Серотониновый рецептор 2С (HTR2C)	1	Xq24
Транспортер серотонина (SLC6A4)	1	17q11.1-q12
Триптофан-гидроксилаза 1 (TPH1)	2	11p15.3-p14
Опиоидный рецептор М1 (OPRM1)	3	6q24-q25
Опиоидный рецептор D1 (OPRD1)	2	1p36-p34.3
Проопиомеланокортин (POMC)	3	2p23.3
Проэнкефалин (PENK)	1	8q23-q24
Вольфрам-синдром 1(WFS1)	6	4p16.1

Генерация олигонуклеотидных микрочипов и ориентированных праймер-продлевающих реакций выполнялась в соответствии с описанием [Maron et al., 2005]. Считывание полиморфизмов выполнялось в программе GenoramaTM 4.1 с использованием сигнальных паттернов контрольной ДНК в качестве референсного сиквенса. Использовались также программы SNP Assistant и Statistica 6.0 (различия в распределении генотипов между больными и контролем, Р-уровень).

Моделирование экспериментального паркинсонизма на быстростареющих мышах линии SAM

Экспериментальные исследования были выполнены на 106 мышах линии SAMP1 (с ускоренным старением) и контрольной линии SAMR1. Животные были предоставлены из Университета г. Киото (проф. T.Takeda, проф. M.Hosokawa).

Для индукции паркинсонизма животным (n=18) ежедневно вводили раствор МРТР ("Sigma") внутрибрюшинно в течение 8 дней в дозе 30 мг/ кг массы тела. Второй группе животных (n=16) за 30 минут до введения МРТР вводили карнозин в течение 8 дней (внутрибрюшинно, в концентрации 100 мг/кг массы тела). В контрольную группу вошли животные (n=19), которым вместо МРТР вводили физиологический раствор. Животных декапитировали на 10-й день эксперимента. После забоя животных мозг быстро извлекали и замораживали в жидком азоте до проведения биохимических исследований.

Физиологическое состояние животных оценивали по параметрам, определяемым в стандартном тесте «Норковая камера». Тестирование проводили дважды: до начала эксперимента (для разделения животных на равноценные группы) и по окончании на 8-й день (после последнего введения МРТР), используя три параметра: вертикальная и горизонтальная двигательная активность, исследовательская активность и груминг [Sedelis et al., 2001]. Измеряли также ригидность мышц туловища, используя симптом «горбатости» (укорочение расстояния от шеи до основания хвоста, L).

Биохимические параметры измеряли в митохондриальной фракции, выделенной из коры больших полушарий животных. В соответствии с описанными протоколами [Федорова, 1999, 2003; Buss et al., 1997], в работе исследовались:

· Активность МАО-В (с использованием бензиламина как субстрата).

· Активность СОД (по подавлению скорости восстановления нитросинего тетразолия при генерации супероксидного анион-радикала).

· Количественная оценка окислительного стресса на основании хемилюминесценции (ХЛ) биологических образцов (суммарной фракции липопротеинов низкой и очень низкой плотности или тканевых гомогенатов мозга экспериментальных животных), в т.ч.: а) показатели Fe2+-индуцированной ХЛ ткани мозга; б) окисленность белков в цельном гомогенате коры мозга и в митохондриальной фракции. По амплитуде (h) быстрой вспышки ХЛ судили об исходном уровне липидных гидроперекисей в мембранной фракции мозга, по латентному периоду (ф) - об устойчивости липидов к Fe2+-индуцированному окислению (эффективность антиоксидантной защиты мембранных структур). По окончании латентного периода начинается фаза медленного нарастания интенсивности ХЛ (Н), пропорциональной количеству окисляемого материала в образце. Величина V (измеряемая как угол наклона кривой возгорания хемилюминесценции) соответствует скорости окисления липидного материала.

Клинико-биохимические исследования

Активность МАО-В измеряли в тромбоцитах крови с использованием бензиламина в качестве субстрата [Дроздов, Анохина, 1990; Gallant et al., 2000].

Активность супероксиддисмутазы Cu/Zn-СОД эритроцитах измеряли в супернатанте спектрофотометрически по скорости восстановления нитросинего тетразолиевого в присутствии смеси ксантин/ксантинооксидаза при длине волны 560 нм и температуре 25оС [Misra, Fridovich, 1972; Шалабодов, Гусева, 2001].

Количество белка в полученных образцах определяли по методу Лоури, использующему биуретовую реакцию на пептидные связи и реакцию Фолина (на тирозин и триптофан) [Практикум по биохимии МГУ, 1989].

Fe2+-индуцированная ХЛ суммарной фракции липопротеинов низкой и очень низкой плотности сыворотки крови пациентов и здоровых доноров, оценивалась стандартными методами с определением тех же кинетических параметров, указанных выше для экспериментальной части работы.

Статистические методы исследования

При проведении мутационного (полиморфного) ДНК-анализа рассчитывался показатель равновесия Харди-Вайнберга для оценки ожидаемости распределения аллелей у пациентов и в группе контроля. Для оценки ассоциаций между генотипами и клиническими характеристиками использовались методы непараметрической ранговой корреляции Спирмена.

Общий статистический анализ данных проводился с использованием пакета прикладных программ «Statistica 5.0». В случае нормального распределения и выполнения условия равенства дисперсий для сравнения средних значений непрерывных признаков в группах использовался парный критерий Стъюдента. В случае распределений, отличных от нормальных, для сопоставления групп по количественным признакам ? U-критерий Манна?Уитни. Для изучения динамических изменений использовался метод Вилкоксона для связанных выборок, в оценке достоверности некоторых получаемых различий по непараметрическим критериям применялись также методы Крускала-Уоллиса и Данна. Достоверными считали различия при р?0,05.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

1. Клинико-генетический анализ болезни Паркинсона

Одной из целей настоящей работы была оценка молекулярно-генетических факторов риска развития БП у больных с «классической» спорадической формой данного заболевания на территории европейской части России. При этом была поставлена двуединая задача: 1) определение частот мутаций в генах наследуемых форма первичного паркинсонизма (локусы PARK2, PARK8 и др.); 2) оценка роли полиморфных вариантов большого числа генов предрасположенности к БП.

Анализ наследуемых мутацийв генах первичного паркинсонизма

Мутационный скрининг гена PRKN (локус PARK2 на хромосоме 6q25.2-27, белок паркин). Гомозиготные мутации в гене PRKN (паркин) лежат в основе развития аутосомно-рецессивного ювенильного (юношеского) паркинсонизма [Lucking et al., 2000]. В последние годы, однако, показан повышенный риск развития спорадической БП у носителей мутаций гена PRKN в гетерозиготном состоянии [Mata et al., 2004], поэтому выявление даже одной мутантной по паркину хромосомы имеет большое клиническое значение. С учетом высокой частоты структурных перестроек в гене PRKN (экзонные делеции и мультипликации) [West-2002; Illarioshkin et al., 2003], при БП необходимо в первую очередь осуществлять скрининг пациентов на наличие гетерозиготных нарушений дозы гена.

Исследование дозы гена PRKN проведено у 337 пациентов с БП (мужчин - 153, женщин - 184). Средний возраст манифестации первых симптомов БП составил 46,4 ± 13,6 лет (от 20 до 75), средний возраст в момент обследования - 54,3 ± 14,5 лет (от 21 до 81). Все обследованные случаи БП были подразделены на две большие группы - ранние и поздние (согласно общепринятым критериям, условная граница возраста дебюта для «ранней» БП составляет 45 лет):

1) БП с ранним началом - возраст манифестации первых симптомов в данной подгруппе был от 20 до 43 лет (средний возраст начала болезни 35,5 ± 7,8 лет), всего 57 мужчин и 82 женщины.

2) «Классическая» БП с более поздним дебютом симптомов - от 46 до 75 лет (54,6 ± 11,8), всего 96 мужчин и 102 женщины.

При количественном анализе гена PRKN, проведенном у 139 пациентов с ранним началом БП, нами в 15 случаях (4 мужчин и 11 женщин, 10,8% от общего числа больных с ранним началом) были выявлены различные структурные перестройки в гене паркина. В 13 случаях перестройки были гетерозиготными, а в двух - гомозиготными (таблица 2). В их числе: делеции отдельных экзонов - 4 случая; делеции двух либо трех примыкающих экзонов, которые могут быть в положении cis либо trans - 6 случаев; сочетание удаленных разноэкзонных делеций - 1 случай; дупликации отдельных экзонов - 3 случая; сложная структурная перестройка в виде сочетания дупликации экзона с делециями двух удаленных экзонов - 1 случай. Общая частота экзонных перестроек в гене PRKN при БП молодого возраста составила 0,063 (19 хромосом из 302).

Средний возраст начала болезни у носителей мутаций PRKN в данной подгруппе составил 28,9 ± 7,5 лет, что статистически значимо ниже, чем в целом по данной группе паркинсонизма молодого возраста (35,5 ± 7,8 лет, р<0,05). При сопоставлении паркин-позитивной и паркин-негативной подгрупп каких-либо других различий клиники выявлено не было. Дебют симптомов у 2 носителей гомозиготной делеции (30 и 26 лет) в целом находился в рамках средних значений возраста дебюта у носителей мутаций в гене PRKN. Также не выявлено отличий клинического фенотипа у пациентов - носителей дупликаций экзонов в гене PRKN.

В подгруппе БП с поздним началом, включавшей 198 пациентов, структурные перестройки гена PRKN были выявлены нами у 7 больных - т.е. в 3,5% случаев болезни с дебютом симптомов после 45 лет (таблица 3). Все мутации были гетерозиготными экзонными делециями. В их числе: делеции отдельных экзонов - 3 случая и делеции двух-трех примыкающих экзонов - 4 случая.

Таблица 2. Выявленные структурные перестройки в гене PRKN у пациентов с ранней болезнью Паркинсона.

Возраст дебюта симптомов (годы)	Экзоны гена PRKN
	2	3	4	5	6	7	8	9	10	11	12
28
20
31
21
35
39
20
23
24
40
41
30
24
26
41

Таблица 3. Выявленные структурные перестройки в гене PRKN у пациентов с поздней болезнью Паркинсона.

Возраст дебюта симптомов (годы)	Экзоны гена PRKN
	2	3	4	5	6	7	8	9	10	11	12
57
68
50
58
54
64
59

Средний возраст манифестации болезни у носителей мутаций PRKN из группы с поздним началом БП составил 58,6 ± 6,0 лет, что достоверно не отличалось от показателей в общей группе поздней БП (54,6 ± 11,8). Как и для ранней БП, в группе поздней БП не выявлено каких-либо особенностей фенотипа болезни у паркин-позитивных пациентов по сравнению с паркин-негативными.

Таким образом, суммарная частота выявления мутаций гена PRKN у пациентов со спорадической БП составила 6,5% (22 случая из 337). В контроле ни у кого из обследованных лиц экзонных перестроек в гене PRKN не выявлено.

Нами было проведено сопоставление клинических особенностей заболевания в паркин-позитивных и паркин-негативных случаях для общей группы БП. Единственным существенным различием между группами стал возраст манифестации заболевания - более ранний при носительстве мутаций: так, у больных с выявленными мутациями в гене PRKN возраст начала заболевания варьировал от 20 до 68 лет (средний возраст 38,4 15,1 лет), а в группе больных без структурных перестроек в PRKN - от 24 до 84 лет (49,4 ± 14,2 лет) (р<0,05). Других различий между сопоставляемыми подгруппами не отмечено. Клиническая картина заболевания в обеих группах больных соответствовала изолированному леводопа-чувствительному паркинсоновскому синдрому (брадикинезия, мышечная ригидность, тремор покоя, постуральная неустойчивость), в ряде случаев сочетающемуся с дистонией и леводопа-индуцированными дискинезиями.

Интересно, что у 2 больных нами выявлена гомозиготность по мутациям в гене PRKN (см. таблицу 2), что, согласно традиционным представлениям, соответствует диагнозу аутосомно-рецессивного ювенильного паркинсонизма. Однако у этих пациентов заболевание манифестировало не в «юношеском» возрасте, а в 30 и 26 лет. Указанное наблюдение подчеркивает ограниченность понятия «ювенильный паркинсонизм» у носителей гомозиготных мутаций PRKN и позволяет согласиться с мнением ряда авторов, предлагающих для данной формы болезни более общий термин «паркин-ассоциированный паркинсонизм».

Результаты проведенной работы, показывающие высокую частоту гетерозиготных экзонных перестроек в гене PRKN, подтверждают обсуждаемую в литературе точку зрения о патогенетической значимости паркин-гаплонедостаточности для поражения базальных ганглиев больших полушарий мозга [Hilker et al., 2002; West-2002].

Анализ мажорной мутации в гене LRRK2 (локус PARK8 на хромосоме 12p11.2, белок дардарин). Ген LRRK2 имеет большое значение в развитии БП в общей популяции [Berg et al., 2005; Okubadejo et al., 2008]. С учетом сложной молекулярной организации гена, в большинстве работ мутационный скрининг ограничивался поиском наиболее частых (мажорных) мутаций, которые обусловливают основную часть известных мутационных повреждений LRRK2. Мажорная мутация G2019S встречается с частотой 0,410% в зависимости от наличия или отсутствия семейного анамнеза [Foroud, 2005]. Нами был предпринят поиск мутации G2019S в гене LRRK2 у 359 больных БП (169 мужчин и 190 женщин), включая 345 спорадических и 14 семейных (доминантных) случаев.

Рисунок 1. Результат исследования мутации G2019S в гене LRRK2.

Длинной стрелкой указан нормальный SfcI-рестрикционный фрагмент размером 228 пар оснований (п.о.), короткой стрелкой -- мутантный фрагмент 207 п.о. (мутация G2019S). M -- маркер молекулярного размера; дорожка 1 -- носитель мутации G2019S в гене LRRK2 (больная Тим.С.); дорожки 2 и 3 -- норма.

При обследовании пациентов с БП в указанной выше выборке были выявлены 4 случая гетерозиготного носительства мутации G2019S в гене LRRK2 (рисунок 1). Три носителя G2019S не имели семейного анамнеза, а один был членом семьи Нес. с четким аутосомно-доминантным наследованием БП. Таким образом, суммарная частота данной мутации составила 1,1% в общей группе обследованных пациентов с БП, 0,9% среди больных со спорадической формой БП и 7,1% среди аутосомно-доминантных случаев заболевания. Ни у кого из лиц контрольной группы (350 клинически здоровых лиц из общей популяции) мутация G2019S в гене LRRK2 выявлена не была. паркинсонизм генетический антиоксидантный кровь

Tаблица 4. Клиническая характеристика больных с идентифицированной мутацией G2019S в гене LRRK2

Боль-ной

Пол

Возр. начала (годы)

Возр. в момент обсле-дова-ния (годы)

Началь-ный симп-том

ТП

ПТ

Р

Б

ПН

Д

АС

КН

ОПЛ

ЛИД

Куч. В.

м

52

55

Д

+

+

+

+

+

+

Тим. С.

ж

39

43

Б и ТП

+

+

+

+

+

+

+

+

Нес-I-2

ж

71

72

Б и ТП

+

+

+

+

+

+

Нес-II-2

м

55

57

ТП и ПТ

+

+

+

+

+

Нес-II-3

ж

57

59

Б и Р

+

+

+

+

+

Дом. Н.

ж

28

35

ТП и Р

+

?

+

+

?

+

+

?

+

+

Примечание: TП - тремор покоя, ПT - постуральный тремор, Р - ригидность, Б - брадикинезия, ПН - постуральная неустойчивость, Д - дистония, АС - асимметрия симптомов в дебюте болезни, КН - когнитивные нарушения, ОПЛ - ответ на прием леводопы, ЛИД - леводопа-индуцированные дискинезии.

Клинические характеристики болезни у G2019S-позитивных пациентов представлены в таблице 4. В этот анализ нами были включены данные двоих пациентов из семьи Нес. с доминантным наследованием, ДНК которых была недоступна для анализа. Как видно из таблицы 4, у всех больных с мутацией LRRK2-G2019S развивался типичный леводопа-чувствительный паркинсонизм с асимметричным началом симптомов и вариабельной комбинацией брадикинезии, ригидности и тремора покоя. Более редкими проявлениями были постуральная неустойчивость, дистония, и леводопа-индуцированные дискинезии. Когнитивные и вегетативные расстройства у этих больных отсутствовали. У всех членов семьи Нес. выраженным и ранним симптомом болезни был постуральный тремор. Обращают на себя внимание различия между поколениями значений возраста начала болезни у членов этой семьи - носителей мутации LRRK2-G2019S: если у матери (I-2) болезнь началась в 71 год, то у ее детей (II-2 и II-3) возраст начала болезни был существенно моложе - соответственно, 55 и 57 лет.

Среди обследованных пациентов нами впервые был выявлен уникальный случай сочетания 2 мутаций в самостоятельных генах паркинсонизма (PRKN + LRRK2) у больной со спорадической формой БП: 1) дупликация 5-го экзона PRRN; 2) мутация G2019S в гене LRRK2. Яркой фенотипической особенностью данного случая двойной гетерозиготности явились ранее начало болезни (39 лет) и чрезвычайно резко выраженные хореобаллические леводопа-индуцированные дискинезии пика дозы. Можно предположить, что наличие 2 мутаций в разных генах явилось фактором, утяжеляющим течение болезни. Аддитивный эффект нескольких локусов с точки зрения их влияния на тяжесть клинических проявлений БП ранее был показан и для некоторых генов предрасположенности - CYP2D6 (цитохромоксидаза), PON1 (параоксоназа-1) и др. [Djuric et al., 2004].

Как видно в таблице 4, для носителей мутации LRRK2-G2019S характерна выраженная вариабельность возраста начала болезни (от 39 to 71 года). Для объяснения такой вариабельности нами был протестирован ген АроЕ - модификатор течения нейродегенеративных заболеваний [Rubinsztein et al., 1994]. В обследуемой семье все больные, независимо от возраста дебюта, явились носителями одного и того же наиболее частого в популяции генотипа АроЕ - 3/3.

Таблица 5. Анализ гаплотипов в локусе PARK8 у носителей мутации G2019S в гене LRRK2.

Маркер	Частый европейский гаплотип (Kachergus et al., 2005)	Больной Куч. В.	Больной Тим. С.	Больной Нес-II-3
rs7966550	T	T	T	T
D12S2516	254	254	254	254
rs1427263	A	A	A	C
rs11176013	G	G	G	G/A
rs11564148	A	A	T/A	T/A
D12S2518	154	154	154	154

Для оценки происхождения мутации LRRK2-G2019S у российских пациентов с БП нами в 3 случаях проведена реконструкция гаплотипов, охватывающих 6 ДНК-маркеров в локусе PARK8 Результаты реконструкции гаплотипов представлены в таблице 5. В результате было установлено, что 2 пациента являются носителями одного и того же описанного в Европе G2019S-сцепленного гаплотипа [Kachergus et al., 2005], тогда как третий больной Нес-II-3 имеет другой гаплотип, четко различающийся по маркеру rs1427263. Наши результаты свидетельствует о возможности повторных мутационных событий и существовании «горячей точки» мутаций в кодоне 2019 гена LRRK2. Следует отметить, что совсем недавно к похожему выводу пришли и A.Orr-Urtreger с соавт. (2007), которые обнаружили, что общий «европейский» гаплотип отсутствует у 3% больных - носителей мутации LRRK2-G2019S в Израиле.

Анализ мультипликаций гена SNCA (локус PARK1 на хромосоме 4q21, белок -синуклеин). С учетом значительной редкости точковых мутаций в гене SNCA [Kruger et al., 1998; Zarranz et al., 2004] и имеющихся данных об их отсутствии в российской популяции [Illarioshkin et al., 2000], в настоящей работе основной целью был анализ дозы гена SNCA, мультипликации которого были ранее выявлены в части семейных случаев БП и болезни диффузных телец Леви [Singleton et al., 2003; Farrer M. et al., 2004]. Количественный анализ гена SNCA был проведен у 53 больных БП (мужчин - 20, женщин - 33) из 40 семей с достоверным или предположительным аутосомно-доминантным типом наследования. Средний возраст обследованных на ген SNCA больных БП составил 56,2 ± 16,7 лет (от 21 до 84 лет), средний возраст начала болезни - 47,6 ± 15,0 лет (от 20 до 73 лет).

Для всех трех анализируемых экзонов гена SNCA были получены значения коэффициента -синуклеин/в-глобин, лежащие в диапазоне от 0,7 до 1,3, что говорит об отсутствии делеций и дупликаций гена SNCA в исследуемой выборке. Эти результаты согласуются с данными других авторов [Hope et al., 2004; Johnson et al., 2004; Wang et al., 2008] и свидетельствуют о том, что для России, как и для большинства других популяций мира, первичные синуклеинопатии не типичны.

Анализ мажорных мутаций в гене GBA (локус на хромосоме 1q21, белок глюкоцереброзидаза). Аутосомно-рецессивные мутации гена GBA сопровождаются развитием известной лизосомной болезни накопления - болезни Гоше, а гетерозиготные мутации в ряде изученных ранее популяций могут рассматриваться в качестве фактора риска БП [Sidranskу, 2004; Маta-2008]. Мутационный скрининг на носительство 5 мажорных мутаций в гене GBA был проведен нами у 102 больных БП (мужчин и женщин - по 51) в возрасте от 21 до 70 лет (43,6 ± 12,2 лет), возраст начала болезни от 20 до 65 лет (34,8 ± 12,2 лет).

В результате мутационного скрининга были выявлены 4 больных, являющихся гетерозиготными носителями мутаций в гене GBA: у двоих не связанных родством пациентов выявлена мутация L444P в 10-м экзоне гена GBA, а еще у двоих неродственных больных - мутация N370F в 9-м экзоне гена. Все случаи болезни - спорадические. В контрольной выборке клинически здоровых лиц мутации в гене GBA выявлены не были. Проведенный анализ не выявил каких-либо особенностей фенотипа БП у носителей мутаций в гене GBA: во всех случаях имел место леводопа-чувствительный синдром паркинсонизма, дебютировавший в 23, 32, 38 и 44 лет. Общая частота выявления мутаций в гене GBA в спорадических случаях БП в обследованной нами популяции составила 3,9%.

Один пациент с БП оказался гетерозиготным носителем мутаций в двух самостоятельных исследованных генах паркинсонизма - PRKN (делеция 4-го экзона) и GBA (L444P). В данном случае двойной гетерозиготности особенностью фенотипа было раннее начало болезни (32 года) и сочетание леводопа-чувствительного паркинсонизма с дистонией.

Таким образом, как и в популяциях США, Канады, ряда европейских стран, у больных БП славянского этнического происхождения из европейской части России мутации гена GBA являются значимым фактором риска спорадической БП.

Идентификация мутаций в генах LRRK2, PRKN и других генах первичного паркинсонизма у лиц, не имеющих семейного анамнеза, принципиально меняет подходы к медико-генетическому консультированию и профилактике повторных случаев заболевания среди родственников из группы риска. В таких семьях, в частности, становится возможной пренатальная и пресимптоматическая диагностика носительства мутации, что в будущем, при внедрении в практику эффективных методов нейропротекции, может позволить своевременно реализовать стратегию превентивной терапии с целью предотвращения заболевания или отсрочивания времени его наступления.

Оценка роли полиморфизмов генов нейротрансмиссии, в формировании генетической предрасположенности к болезни

автореферат "Клинико-генетический и биохимический анализ болезни Паркинсона: механизмы предрасположенности, экспериментальные модели, подходы к терапии" скачать

Подобные документы

• Сестринская помощь при болезни Паркинсона

  Болезнь Паркинсона - хроническое дегенеративное заболевание центральной нервной системы, обусловленное постепенным снижением образования в некоторых нейронах дофамина. Депрессивные состояния, дрожание или тремор - одни из симптомов паркинсонизма.
  
  презентация [1,9 M], добавлен 02.11.2017
  

• Болезнь Паркинсона

  Причины развития и ведущие симптомы идиопатического синдрома паркинсонизма. Признаки наличия у человека болезни Паркинсона: мышечная ригидность, гипокинезия, тремор. Назначение физиотерапевтического, лекарственного и хирургического лечения заболевания.
  
  презентация [705,5 K], добавлен 13.10.2014
  

• Болезнь Паркинсона

  Клинические проявления болезни Паркинсона. Стадии паркинсонизма по Хён и Яру. Риск развития заболевания. Основные препараты, устраняющие двигательные нарушения. Лечение с применением стволовых клеток, нейростимуляция. Сестринский уход за больным.
  
  презентация [1,1 M], добавлен 27.03.2015
  

• Болезнь Паркинсона

  Болезнь Паркинсона (паркинсонизм) как хроническое нейродегенеративное заболевание, его формы и основные симптомы болезней. Этиология и распространенность данного заболевания, механизм развития. Генетические и биохимические аспекты болезни Паркинсона.
  
  реферат [28,7 K], добавлен 19.03.2011
  

• Болезни, связанные с нарушением фолдинга белка

  Структура и функциональная роль шаперонов в фолдинге белков. Характеристика заболеваний, связанных с нарушением фолдинга белков: болезнь Альцхаймера, Прионовые болезни, болезнь Паркинсона. Лекарственная терапия и подходы к лечению болезни Паркинсона.
  
  курсовая работа [1,3 M], добавлен 11.05.2015
  

• Болезнь Паркинсона

  Определение и распространенность болезни Паркинсона - прогрессирующего нейродегенеративного заболевания. Причины возникновения заболевания: старение, наследственность, некоторые токсины. Формы болезни: смешанная, акинетико-ригидная и дрожательная.
  
  реферат [40,7 K], добавлен 06.04.2014
  

• Сестринский уход при болезни Паркинсона

  Понятие, этиология и патогенез болезни Паркинсона как прогрессирующего дегенеративного заболевания, избирательно поражающего дофаминергические нейроны черной субстанции. Принципы и методы организации лечения и ухода за больными, специфическая терапия.
  
  презентация [588,8 K], добавлен 11.04.2016
  

• Противопаркинсонические средства

  Болезнь Паркинсона: симптомы, история. Характеристика основных форм заболевания: акинетико-ригидная, ригидно-дрожательная, дрожательная. Причины развития болезни Паркинсона, анализ противопаркинсонических средств. Фармакологические свойства ингибиторов.
  
  курсовая работа [94,4 K], добавлен 04.06.2012
  

• Болезнь Паркинсона с двусторонним поражением, и дегенирацией черного вещества. Акинетико-ригидный синдром, тремор

  Акинетико-ригидный синдром в классической форме, дрожательный паралич. Патологический процесс при болезни Паркинсона является дегенеративным. Утрата меланин содержащих нейронов черного вещества. Поражение двустороннее. Этиология болезни наследственная.
  
  история болезни [21,3 K], добавлен 12.03.2009
  

• Противопаркинсонические средства

  Болезнь Паркинсона - хроническое прогрессирующее заболевание головного мозга, впервые описанное врачом Дж. Паркинсоном. Причины появления и основные симптомы болезни Паркинсона. Характеристика лекарственных препаратов для лечения данного заболевания.
  
  лекция [5,1 M], добавлен 28.04.2012
  

• История болезни. Диагноз: болезнь Паркинсона, дрожательно-ригидная форма, проградиентное течение

  Ознакомление с жалобами больного, поступившего с предварительным диагнозом - болезнь Паркинсона, дрожательно-ригидная форма. Исследование органов дыхания и пищеварения, сердечно-сосудистой, мочеполовой системы. Назначение медикаментозного лечения.
  
  история болезни [24,9 K], добавлен 18.10.2011
  

• Клинико-диагностические значение редокс-системы у больных урогенитальным хламидиозом

  Состояние иммунологической реактивности пациенток с хламидийной инфекцией. Клинические проявления урогенитального хламидиоза. Оценка системы перекисного окисления липидов эритроцитов и плазмы крови. Содержание циркулирующих иммунных комплексов у больных.
  
  диссертация [839,4 K], добавлен 09.08.2013
  

• Диффузный токсический зоб

  Болезни щитовидной железы. Роль генетической предрасположенности в развитии диффузного токсического зоба. Злокачественный экзофтальм. Тяжелая степень тиреотоксикоза. Лабораторные и инструментальные методы диагностики заболевания. Выбор метода лечения.
  
  презентация [936,1 K], добавлен 07.11.2014
  

• Содержание продуктов перекисного окисления липидов в плазме крови беременных женщин

  Роль активных форм кислорода и инициируемых ими свободнорадикальных процессов при различных патологических процессах, а так же при беременности. Содержание диеновых конъюгатов и малонового диальдегида в плазме крови у женщин в разные периоды беременности.
  
  дипломная работа [1,7 M], добавлен 15.01.2009
  

• Дисциркуляторная энцефалопатия IIст. в стадии декомпенсации на фоне гипертонической болезни. Синдром Паркинсона

  Жалобы больной, общее обследование. Состояние черепно-мозговых нервов. Двигательная активность и чувствительность. Патологические рефлексы, исследование высших корковых функций. Наличие дисциркуляторной энцефалопатии на фоне гипертонической болезни.
  
  история болезни [38,0 K], добавлен 02.03.2010
  

• Болезнь Паркинсона (дрожательно-ригидная форма)

  Болезнь Паркинсона. Тремор верхних и нижних конечностей преимущественно дистальных отделов. Клиническое обследование. Лечебная физкультура и массаж. Рентгенография шейного отдела позвоночника. Снижение памяти и внимания. Пластическая гипертония мышц лица.
  
  история болезни [32,7 K], добавлен 03.03.2009
  

• Язвенная болезнь 12-перстной кишки

  История жизни, настоящее состояние больного. Общеклинический и биохимический анализ мочи и крови. Факторы риска болезни. Медикаментозное, немедикаментозное и хирургическое лечение язвенной болезни 12-перстной кишки. Особенности профилактики заболевания.
  
  история болезни [28,3 K], добавлен 17.05.2012
  

• Синдром Вольфа-Паркинсона-Уайта

  Синдром Вольфа-Паркинсона-Уайта как один из наиболее частых причин нарушений ритма сердца, основные причины его возникновения и физиологическое обоснование. Патогенез атриовентрикулярной реципрокной тахикардии. Стратификация риска внезапной смерти.
  
  контрольная работа [248,5 K], добавлен 06.09.2009
  

• Аутоиммунные заболевания – патогенез

  Поддержание генетической однородности организма. Фиксация антител на чужеродных антигенных детерминантах бактерий. Распознавание измененной генетической информации в клетках-мутантах и запуск иммунологических реакций направленных на их уничтожение.
  
  презентация [209,9 K], добавлен 16.03.2014
  

• Синдром Вольффа-Паркинсона-Уайта

  Синдром преждевременного возбуждения желудочков. Характерные признаки синдрома Вольффа-Паркинсона-Уайта (WPW). Два типа синдрома WPW. Распространение импульса по пучку Джеймса. Характерные особенности ЭКГ при синдроме WPW. Врожденные пороки сердца.
  
  презентация [1,5 M], добавлен 13.11.2014
  

Другие документы, подобные "Клинико-генетический и биохимический анализ болезни Паркинсона: механизмы предрасположенности, экспериментальные модели, подходы к терапии"

• главная
• рубрики
• по алфавиту
• вернуться в начало страницы
• вернуться к началу текста
• вернуться к подобным работам