Иммунометаболическое и гепатопротекторное действие гликозаминогликанов, гликозидаз и витаминов при кровопотере

Результаты проведенных экспериментов позволяют считать, что иммуномодулирующее действие лизоцима при кровопотере обусловлено модификацией эритроцитов и выделением под влиянием мо-дифицированных эритроцитов хелперных цитокинов прилипающими к стеклу клетками селезенки. Наряду с этим, лизоцим опосредованно, через цитокины спленоцитов, вызывает изменение антиоксидантного статуса эритроцитов.

Кровопотеря снижала скорость реакции окисления НАДФН в ПЯЛ крови. Введение после кровопотери увеличивало скорость и НАДФН-оксидазной реакции в ПЯЛ.

Принимая во внимание данные об участии цитокинов прилипающих к стеклу клеток селезенки в реализации модулирующего влияния лизоцима на ФМА лейкоцитов, большой интерес представлял вопрос: обусловлено ли повышение скорости реакции, катализируемой НАДФН-оксидазой, при введении лизоцима, влиянием на фермент лизоцима, или этот эффект вызывают выделяющиеся под влиянием лизоцима прилипающих к стеклу клеток? Для решения этого вопроса ПЯЛ, полученные после кровопотери, экстракорпорально примировали лизоцимом или фракциями супернатантов прилипающих и неприлипающих клеток селезенки.

Установлено, что примирование лизоцимом не влияло на скорость ре-акции, катализируемой НАДФН-оксидазы. В отличие от этого, низкомолеку-лярная фракция супернатантов прилипающих к стеклу при 32-37 єС спленоцитов, полученных у КПК, получавших инъекции лизоцима, или тяжелых эритроцитов крыс, которым вводили лизоцим, увеличивала скорость НАДФН-оксидазной реакции ПЯЛ КПК. На основании полученных данных можно прийти к заключению о том, что активатором НАДФН-оксидазы ПЯЛ КПК является не лизоцим, а выделяющиеся под его влиянием цитокины клеток, прилипающих к стеклу при 32-37 °С.

Взаимосвязь иммуномодулирующих эффектов, вызываемых лизоцимом и жирорастворимыми витаминами после кровопотери. Лизоцим, филлохинон и менадион, введенные по отдельности, не влияли на показатели ФМА ПЯЛ и иммунологической реактивности. Лизоцим, введенный с филлохиноном или менадионом, повышал, но не нормализовал, ФМА нейтрофилов и иммунологическую реактивность КПК. Кровопотеря приводила к появлению в крови легких эритроцитов, обладающих иммуносупрессорной активностью. Инъекции лизоцима, филлохинона или менадиона по отдельности не влияли на свойства эритроцитов крыс, подвергнутых кровопусканию. Введение КПК лизоцима с филлохиноном или менадионом не отменяло иммуносупрессирующих свойств легких эритроцитов, но индуцировало появление иммуностимулирующей активности у тяжелых клеток.

При изучении концентрации АСТ, АЛТ, ЩФ и ОБ после кровопотери выявлено повышение исследованных показателей. Введение КПК лизоцима и лизоцима в сочетании с токоферола ацетатом не влияло, а в сочетании с ретинола ацетатом или менадионом нормализовало уровень АСТ, АЛТ, ЩФ и ОБ (табл. 8).

Таблица 8

Метаболические эффекты лизоцима и жирорастворимых витаминов у КПК

Условия опыта	1.	2	3	4	5	6
	Контроль	КПК	КПК, введение лизоцима	КПК, введение лизоцима и РА	КПК, введение лизоцима и ТА	КПК, введение лизоцима и менадиона
ТАГ	3,2±0,4	6,8±1,0*1	6,4±1,1*1	6,6±1,1*1	6,4±1,0*1	6,9±1,2*1
ХОЛ	5,8±0,3	11,5±1,2*1	12,8±1,3*1	12,3±1,4*1	11,6±1,1*1	12,7±1,2*1
ДК	3,6±0,3	6,6±0,5*1	7,1±0,7*1	4,6±0,4*1-3	4,4±0,3*1-3	6,9±0,6*1,4,5
МДА	2,4±0,1	4,3±0,3*1	4,7±0,4*1	3,5±0,2*1-3	3,3±0,2*1-3	4,6±0,4*1,4,5
АЛТ	0,8±0,1	9,0±2,3*1	8,8±2,2*1	0,9±0,2*2-3	5,4±1,3*1-4	1,2±0,2*2-5
АСТ	0,4±0,1	5,5±0,9*1	5,1±0,8*1	0,5±0,1*2-3	3,9±0,6*1-4	3,2±0,7*2-4
ЩФ	9,8±1,4	21,3±2,4*1	23,4±2,5*1	10,3±1,5*2-3	15,2±2,1*1-4	17,0±1,9*2-4
ОБ	8,3±0,9	12,3±1,3*1	11,5±1,0*1	8,6±0,8*2-3	9,0±1,0*2-3	8,7±0,9*2-4
ЛНП	23,5±2,4	54,1±4,9*1	56,3±4,2*1	46,5±4,2*1-3	40,7±3,8*1-3	33,1±2,8*1-5
ГАГ	0,23±0,02	0,54±0,06*1	0,57±0,08*1	0,49±0,09*1	0,51±0,09*1	0,34±0,05*2-5
ААП	24,7±3,3	38,8±3,1*1	35,0±4,0*1	32,8±3,5*1	34,1±3,7*1,4	22,5±2,7*2-5
АМГ	1,7±0,3	3,4±0,6*1	3,1±0,6*1	3,0±0,5*1	2,5±0,4*1,4	1,9±0,3*2,5

Исследована иммуномодулирующая активность стромы эритроцитов интактных крыс, включавших менадион и затем обработанных лизоцимом. Оказалось, что введение СВМОЛ животным, иммунизированным ЭБ, повышало ФМА мононуклеаров, стимулировало развитие ГИО и ГЗТ в большей степени, чем строма, включившая менадион, но не обработанная ферментом.

Результаты этих экспериментов дают основание считать, что менадион вызывает иммуностимулирующий эффект, проникая во внутрь фагоцитировавшей стромальную частицу клетки, в то время как действие лизоцима реализуется на уровне мембраны эритроцита, в которой эти соединения модифицируют структуру фосфолипидной матрицы и интегрированных в нее гликопротеидных молекул.

Принципиально важно было выяснить иммуномодулирующую эффективность сочетанного применения лизоцима и нафтохинонов, а также СВМОЛ в условиях вторичного иммунодефицитного состояния, вызванного кровопотерей 2 % от массы тела. Оказалось, что введение лизоцима и менадиона повышало, но не нормализовало, ФМА нейтрофилов и иммунологическую реактивность КПК. В отличие от этого, инъекции КПК СВМОЛ нормализовали ФМА ПЯЛ периферической крови, а также развитие ГИО и ГЗТ на ЭБ (табл. 9).



Таблица 9

Влияние СВМОЛ на ФМА ПЯЛ, развитие ГИО и ГЗТ у КПК

Показатели	Контроль	КПК	КПК, введение лизоцима и менадиона	КПК, инъекции СВМОЛ
	1	2	3	4
ФЧ	40,6 ± 4,1	20,3 ± 2,4*1	32,0 ± 3,5*1,2	38,7 ± 3,6*2,3
ФИ	1,7 ± 0,2	0,7 ± 0,1*1	1,2 ± 0,1*1,2	1,4 ± 0,2*2,3
НСТ-сп.	11,2 ± 0,9	7,3 ± 0,5*1	9,7 ± 0,6*1,2	10,7 ± 0,7*2
НСТ-ст.	26,5 ± 1,9	14,5 ± 0,9*1	19,2 ± 1,2*1,2	28,1 ± 1,7*2,3
АОК	21,6 ± 2,5	10,7 ± 1,2*1	15,4 ± 1,8*1,2	19,8 ± 2,2*2,3
РМЛ	4,6 ± 0,4	2,7 ± 0,3*1	3,5 ± 0,4*1,2	4,3 ± 0,4*2,3

Полученные данные дают основание считать, что иммуномодулирующая активность СВМОЛ при кровопотере опосредуется цитокинами, выделяющимися макрофагальными клетками селезенки.

Иммуномодулирующее действие лизоцима и водорастворимых витаминов при кровопотере. Крысам после кровопотери по указанной выше схеме вводили лизоцим и препараты витаминов по отдельности или в парных сочетаниях. В день последнего поступления препаратов животных иммунизировали ЭБ. Установлено, что введение лизоцима с пиридоксином или фолатом не влияло на величины показателей, характеризующих ФМА ПЯЛ и иммунологическую реактивность. Выраженный иммуномодулирующий эффект наблюдался при введении лизоцима с кобаламином (табл. 10).

При введении КПК, получавшим инъекции лизоцима супернатантов спленоцитов, прилипающих при температуре 4-10єС, установлено иммуносупрессирующее влияние на развитие ГИО, индуцированного ЭБ. Фракционирование супернатантов показало, что иммуносупрессирующей активностью обладала фракция с молекулярной массой 50-60 кД.

Введение супернатантов, прилипающих при температуре 32-37 єС вызывало иммуностимулирующие эффекты на ГИО КПК после введения лизоцима. Фракционирование показало, что иммуностимулирующие эффекты присущи фракции с молекулярной массой 10-15 кД, а гепатопротекторные - фракции с массой >100 кД. Также иммуностимулирующие эффекты установлены у фракции неприлипающих клеток с молекулярной массой 10-15 кД.

Таблица 10

Метаболические эффекты лизоцима и водорастворимых витаминов у КПК

Условия опыта	1.	2	3.	4	5	6
	Контроль	КПК	КПК, введение лизоцима	КПК, введение лизоцима и пиридоксина	КПК, введение лизоцима и фолата	КПК, введение лизоцима и кобаламина
ТАГ	3,2±0,4	6,8±1,0*1	6,6±1,1*1	6,5±0,8*1	6,7±0,8*1	6,3±1,0*1
ХОЛ	5,8±0,3	11,4±1,2*1	12,3±1,1*1	12,4±1,2*1	10,8±1,3*1	11,8±1,2*1
ДК	3,6±0,3	6,7±0,5*1	6,4±0,6*1	4,8±0,6*1	6,6±0,4*1	4,2±0,4*1-5
МДА	2,4±0,1	4,3±0,3*1	4,4±0,3*1	4,1±0,3*1	4,0±0,3*1	3,6±0,2*1-5
АЛТ	0,8±0,1	6,1±2,6*1	6,7±2,4*1	4,7±2,1*1-3	5,4±2,3*1	2,3±1,6*1-4
АСТ	0,4±0,1	4,4±0,9*1	4,1±0,8*1	3,2±0,6*1-3	3,8±0,7*1	1,6±0,5*1-4
ЩФ	9,8±1,4	25,4±2,7*1	24,6±2,2*1	17,3±2,1*1-3	18,4±2,2*1,2	11,3±1,7*1-4
ОБ	8,3±0,9	11,9±1,3*1	12,6±1,3*1	10,8±1,2*1	11,2±1,2*1	9,1±0,9*2,3
ЛНП	25,8±2,7	57,1±4,8*1	54,9±5,0*1	52,4±5,1*1	56,0±5,3*1	37,7±3,2*1-5
ГАГ	0,25±0,03	0,56±0,07*1	0,55±0,08*1	0,54±0,08*1	0,59±0,09*1	0,39±0,07*2-5
ААП	23,4±3,2	38,7±3,3*1	36,8±4,1*1	35,7±3,4*1	37,2±3,7*1	31,7±3,4*1
АМГ	1,7±0,3	3,8±0,8*1	3,6±0,9*1	3,2±0,7*1	3,4±0,9*1	2,5±0,6*1,3

Введение лизоцима с пиридоксином или фолатом не приводило к появлению в крови здоровых животных эритроцитов, обладающих иммуномодулирующими свойствами. В отличие от этого, лизоцим в сочетании с кобаламином обусловливали возникновение у тяжелых эритроцитов хелперной активности. Установлено, что введение ЭКПЛ животным, получавшим пиридоксин или кобаламин, повышало ФМА нейтрофилов, стимулировало развитие ГИО и ГЗТ в значительно большей степени, чем введение этих препаратов без ЭКПЛ. Введение ЭКПЛ крысам, получавшим фолат, не оказывало влияния на активность полинуклеаров и развитие иммунного ответа. Таким образом, лизоцим индуцировал появление хелперных свойств у эритроцитов только при введении с кобаламином (но не с пиридоксином или фолатом). Вместе с тем, ЭКПЛ повышали ФМА ПЯЛ и стимулировали развитие различных форм иммунного ответа при введении животным, получавшим пиридоксин или кобаламин (но не фолат).

Принципиально важно было выяснить, обладают ли иммуномодули-рующими свойствами эритроциты крыс, получавших лизоцим и препараты витаминов при кровопотере. Проведенные для решения этого вопроса эксперименты показали, что тяжелые эритроциты, полученные после кровопотери и введения лизоцима, приобретают выраженные иммуностимулирующие свойства. Инъекции таких эритроцитов КПК повышали функционально-метаболическую активность полинуклеаров периферической крови и усиливали или нормализовали развитие ГИО и ГЗТ на ЭБ.

Результаты проведенных исследований позволяют прийти к выводу о существенной роли тяжелых эритроцитов в реализации взаимосвязанного иммуномодулирующего действия лизоцима, пиридоксина и кобаламина. Они показывают, что введение лизоцима с кобаламином является эффективным средством иммуномодуляции при кровопотере в эксперименте и обусловливают целесообразность клинической апробации эффективности такого сочетания.

Иммунометаболические эффекты протеолитических ферментов и жирорастворимых витаминов при острой кровопотере. Протеолитические ферменты оказывают выраженное влияние на процессы фагоцитоза, являющиеся у высших организмов основной формой защиты от патогенных микробов и составной частью многих физиологических и патологических реакций. Они изменяют структуру рецепторного аппарата лимфоцитов периферической крови и лимфоидных органов и вызывают глубокие изменения клеточного метаболизма (Прокопенко Л.Г. и др., 1994). Острая кровопотеря приводит к нарушению баланса протеолитического и антипротеолитического потенциала крови. Равновесие между этими параметрами сдвигается в сторону преобладания активности антипротеолитических белков, что может стать причиной ослабления регулирующего влияния протеаз на гомеостаз и угнетения функциональной активности клеток крови, участвующих в развитии иммунологических процессов - нейтрофилов, лимфоцитов, эритроцитов и тромбоцитов (Прокопенко Л.Г. и др., 2003).

Изучение иммунометаболических эффектов, вызываемых протеолитическими ферментами и их сочетанием с жирорастворимыми витаминами при острой кровопотере показало, что введение папаина здоровым животным снижает ФМА нейтрофилов, угнетает развитие различных форм иммунного ответа, тогда как террилитин вызывает противоположные эффекты. Инъекции папаина после кровопотери не влияют на показатели иммунологических функций, а террилитин уменьшает выраженность их супрессии. Совместное введение террилитина и ретинола ацетата эффективно корригирует иммунологические функции здоровых животных, инъекции террилитина с менадионом - у животных подвергнутых кровопусканию. Иммуномодулирующие эффекты совместного применения террилитина и жирорастворимых витаминов в норме и при кровопотере опосредуются эритроцитами.

Эритроциты интактных крыс, экстракорпорально обработанные лизоцимом или террилитином при аллогенном переносе повышали ФМА нейтрофилов и стимулировали развитие различных форм иммунного ответа в норме и при острой кровопотере. Лейкоциты интактных крыс, обработанные террилитином, приобретали иммуностимулирующие свойства, а инкубированные с лизоцимом, были лишены иммунологической активности. Наиболее выраженный иммуностимулирующий эффект после острой кровопотери вызывают лейкоциты, обработанные террилитином, наименее выраженный - эритроциты, обработанные этим ферментом. Инкубация с лизоцимом или террилитином эритроцитов, полученных после кровопотери, индуцировала появление у них имумностимулирующих свойств, лейкоциты, обработанные террилитином или лизоцимом были лишены иммуномодулирующей активности.

Эритроциты, экстракорпорально обработанные лизоцимом и лейкоциты, инкубированные с террилитином приобретали свойство индуцировать выделение прилипающими к стеклу клетками селезенки факторов, стимулирующих развитие иммунного ответа, повышающих активность антиоксидантных ферментов и снижающих содержание продуктов перекисного окисления липидов в печени после кровопотери.

Экстракорпоральное воздействие менадиона повышало выраженность иммуномодулирующих свойств после инкубации эритроцитов крыс, подвергнутых кровопусканию, с лизоцимом, но не индуцировало иммуномодулирующей активности после инкубации с террилитином. Кобаламин после кровопотери не влиял на свойства эритроцитов, обработанных лизоцимом или террилитином (рис. 2)



Рис. 2 Влияние менадиона и кобаламина на эффект появления иммуномодулирующих свойств, вызываемых лизоцимом и террилитином у эритроцитов и лейкоцитов, полученных после кровопотери.

Примечание: непрерывная линия - эритроциты, прерывистая - лейкоциты. Радиус окружности - введение интактных клеток;

1 - введение клеток, обработанных лизоцимом;

2 - введение клеток, обработанных террилитином;

3 - введение клеток, обработанных менадионом;

4 - введение клеток, обработанных лизоцимом и менадионом;

5 - введение клеток, обработанных лизоцимом и менадионом.

6 - введение клеток, обработанных террилитином или менадионом

7 - введение клеток, обработанных лизоцимом и кобаламином

8 - введение клеток, обработанные террилитином и кобаламином

9. - - существенность различий относительно кровопотере с вероятностью 95%



Инкубация лейкоцитов, полученных до и после кровопотери с менадионом или кобаламином усиливала выраженность действия террилитина и не вызывала эффекта усиления в сочетании с лизоцимом.

Кобаламин повышал чувствительность эритроцитов к действию протеаз и гликозидаз, но не влиял на эффект, вызываемый ферментами после обработки ими стромы клеток. Менадион повышал чувствительность эритроцитов и их стромы к действию протеаз и гликозидаз (табл. 11).

Таблица 11

Иммуномодулирующие свойства у эритроцитов и их стромы после экстракорпоральной обработки лизоцимом, менадионом и кобаламином

№ п/п	Объект воздействия	Действующие агенты	Эффект
			ФАН	ОРН	АОК	РМЛ
1.	Эритроцит	-	42,5±4,6	22,7±2,1	23,4±2,6	4,4±0,4
2.	Строма	-	40,3±4,8	20,5±2,2	21,3±2,5	4,0±0,4
3.	Эритроцит	Лизоцим	69,4±5,7*1,2	43,5±3,3*1,2	67,2±6,8*1,2	6,6±0,8*1,2
4.	Строма	Лизоцим	60,5±5,1*1,2	34,3±2,8*1,2	59,4±5,7*1,2	6,2±0,6*1,2
5.	Эритроцит	Лизоцим, менадион	56,2±5,6*1-3	32,4±2,8*1-3	55,6±5,7*1-3	5,6±0,5*1-3
6.	Строма	Лизоцим, менадион	55,7±5,4*1-3	34,9±3,0*1-3	52,8±5,1*1-3	5,1±0,5*1-3
7.	Эритроцит	Лизоцим, кобаламин	58,0±6,1*1-3	31,5±2,4*1-3	54,0±5,2*1-3	5,7±0,6*1-3
8.	Строма	Лизоцим, кобаламин	43,7±4,5*3-7	20,9±2,7*3-7	25,8±2,9*3-7	4,6±0,4*3-7

Заключение. Результаты проведенных экспериментов позволяют предположить, что действие кобаламина опосредуется реакциями, катализируемыми ферментами цитоплазмы эритроцитов, контролирующими экспрессию белковых и углеводных структур на поверхности мембраны эритроцитов. Эффект менадиона, по-видимому, реализуется через молекулы двойного фосфолипидного слоя, состояние которого осуществляет архитектонику белковых и углеводных компонентов на мембране клеток.

Полученные результаты позволяют считать, что введение в организм протеолитических ферментов приводит к развитию сложной цепи взаимосвязанных реакций, оказывающих выраженное влияние на развитие различных форм иммунного ответа. Вероятнее всего происходит активация системы: «протеазы > модифицированные эритроциты > хелперные медиаторы макрофагов > антипротеолитические эффекты»

Результаты проведенных нами исследований выявили иммунометаболические эффекты взаимодействия гликозидаз, протеаз, жиро- и водорастворимых витаминов, реализующиеся при острой кровопотере на уровне эритроцитов. Следствием такого взаимодействия является потеря легкими эритроцитами иммуносупрессирующих свойств и приобретение тяжелыми клетками иммуностимулирующей активности.

Имеющиеся в литературе данные свидетельствуют о том, что жирорастворимые витамины вызывают свои эффекты, действуя на структуры двойного фосфолипидного слоя мембраны и интегрированных в него белков, а водорастворимые витамины оказывают влияние на активность ферментов, ассоциированных с внутренней поверхностью мембраны и растворенных в цитолизе эритроцитов (Прокопенко Л.Г. и др., 2000; Прокопенко Л.Г., Бровкина И.Л., 2003).

Учитывая это, есть основания ожидать, что гликолитические ферменты, связывая и модифицируя интегрированные в фосфолипидную матрицу гликопептидные эпитопы, оказывают преимущественное влияние на эффекты, вызываемые жирорастворимыми витаминами, а, внедряясь и модифицируя липидную основу мембраны, изменяют скорость процессов, зависимых как от жиро- так и от водорастворимых витаминов. Подтверждения этого предположения получены при изучении витамино-ферментных взаимодействий после интенсивной физической нагрузки, введения гемотропных ядов, действия на организм высокой или низкой внешней, температуры (Ласкова И.Л., 1995; Шишкова И.В., 2001; Лазарева Г.А., 2006).

Рис. 2 Схема влияния кровопотери на состояние иммунитета.

Ключевыми вопросами проблемы сочетанной ферментно- и витаминотерапии является взаимодействие ферментов и витаминов между собой и с другими соединениями при различных дозах вводимых препаратов на уровне мембран клеток, в том числе эритроцитов. В связи с этим, обосновано представление о возможной конкуренции соединений различной химической природы. Можно предположить, что на мембране эритроцитов возникает специфическое или неспецифическое взаимодействие между разными ферментами, витаминами и соединениями, накапливающимися в повышенных концентрациях в крови, а также другими применяемыми для лечения заболевании лекарственными веществами. Решение этого, принципиально важного для развития эффективной ферменто- и витаминотерапии, вопроса, требует всестороннего экспериментального и клинического изучения иммунометаболических эффектов взаимодействия ферментов и витаминов в сопоставлении с химическими изменениями крови здорового и больного человека.

ВЫВОДЫ

1. Острая 2% кровопотеря повышает показатели, характеризующие перекисное окисление липидов, снижает в эритроцитах содержание в эритроцитах макроэргических соединений и активность антиоксидантных ферментов, фагоцитарно-метаболическую активность полиморфноядерных лейкоцитов, угнетает развитие гуморального иммунного ответа и гиперчувствительности замедленного типа, индуцирует появление у легких эритроцитов иммуносупрессирующих свойств.

2. Гликозаминогликаны, выделенные из растений семейств Astraceae, Tiliaceae и Poligonaceae, при внутрижелудочном и внутримышечном введении без и после острой кровопотери стимулируют фагоцитарно-метаболическую активность нейтрофилов, развитие гуморального и клеточного иммунного ответа. Иммуномодулирующее действие при совместном применении гликозаминогликанов и препаратов жирорастворимых витаминов выражено сильнее, чем при их раздельном введении.

3. Выраженный иммуномодулирующий эффект после острой кровопотери вызывает совместное применение гликозаминогликанов животного происхождения (препарат «Дона») и водорастворимых витаминов - пиридоксина и кобаламина. В реализации иммуномодулирующего действия гликозаминогликанов, пиридоксина и кобаламина существенную роль играют эритроциты. Гликозаминогликаны сенсибилизируют эритроциты к взаимодействию с кобаламином, а пиридоксин повышает чувствительность иммуноцитов к взаимодействию с модифицированными гликозаминогликанами и кобаламином.

4. Препарат гликозаминогликана животного происхождения - «Остенил» не влияет на функционально-метаболическую активность нейтрофилов и иммунологическую реактивность в норме и после кровопотери. В сочетании с менадионом остаенил оказывает иммуномодулирующий эффект, выраженность которого ниже, чем при введении гликозаминогликана Polygonaceae с менадионом. При совместном введении после кровопотери остенила и менадиона легкие эритроциты теряют иммуносупрессирующие свойства, а тяжелые - приобретают иммуностимулирующую активность.

5. Введение после острой кровопотери N-ацетилнейраминовой кислоты уменьшает выраженность угнетения гуморального иммунного ответа и гиперчувствительности замедленного типа. N-ацетилнейраминовая кислота повышает величины метаболических маркеров иммунологической активности полиморфноядерных лейкоцитов и лимфоцитов, но не влияла на маркеры активности эритроцитов.

6. Совместное введение N-ацетилнейраминовой кислоты и препаратов жиро- или водорастворимых витаминов уменьшает выраженность иммунометаболических сдвигов, вызываемых кровопотерей. Наиболее эффективными было сочетание N-ацетилнейраминовой кислоты с ретинола ацетатом, менадионом и кобаламином. Действие N-ацетилнейраминовой кислоты и менадиона опосредовано тяжелыми эритроцитами.

7. Введение препаратов гликозидаз (лидазы или лизоцима) в норме и после острой кровопотери повышает функционально-метаболическую активность нейтрофилов, усиливает формирование гуморального иммунного ответа и гиперчувствительности замедленного типа. Иммуномодулирующий эффект лизоцима выражен сильнее, чем лидазы. Лизоцим повышает активность НАДФН-оксидазы. Эффект лизоцима опосредуется соединениями, выделяющимися прилипающими к стеклу клетками селезенки, активированными модифицированными лизоцимом тяжелыми эритроцитами.

8. Введение лизоцима после кровопотери дозозависимо оказывает антиоксидантный и гепатопротекторный эффекты. Введение лизоцима с ретинола ацетатом или токоферола ацетатом снижает содержание в крови продуктов перекисного окисления липидов. Совместное применение лизоцима с ретинола ацетатом нормализует, а с токоферола ацетатом или менадионом - снижает метаболические показатели состояния гепатоцитов. Эффект, вызываемый совместным применением лизоцима с менадионом или кобаламином, реализуется при участии тяжелых эритроцитов.

9. После кровопотери применение лизоцима в сочетании с пиридоксином и фолатом не оказывает существенного влияния на содержание в крови липидов, продуктов перекисного окисления липидов и соединений, обладающих иммунорегулирующей активностью. Лизоцим с кобаламином снижает содержание в крови продуктов перекисного окисления липидов и соединений, характеризующих состояние гепатоцитов и иммуносупрессорный потенциал крови.

10. Строма эритроцитов, с включением менадиона и обработанная гликозамином Poligonaceae или лизоцимом, в норме и после массивной кровопотери вызывает иммуномодулирующий эффект, выраженность которого выше введения свободных препаратов или стромы, взаимодействовавшей с одним из них. Влияние стромы эритроцитов, взаимодействовавшей с менадионом и гликозаминогликаном Poligonaceae или лизоцимом, опосредуется соединениями, выделяющимися прилипающими к стеклу клетками селезенки. Низкомолекулярные (10-15 кД) соединения обладают иммуномодулирующей активностью, высокомолекулярные (> 100 кД) проявляют антиоксидантные и гепатопротекторные свойства.

11. Протеолитические ферменты (папаин и террилитин) в норме и после кровопотери неодинаково влияют на иммунологические функции животных. Папаин не вызывает иммуномодулирующего эффекта, террилитин повышает фагоцитарно-метаболическую активность нейтрофилов и иммунологическую реактивность. Сочетанное применение террилитина и ретинола ацетата или менадиона вызывает более выраженный иммуномодулирующий эффект, чем раздельное введение препаратов.

12. Экстракорпоральное воздействие менадиона повышает выраженность иммуномодулирующих свойств эритроцитов крыс, подвергнутых кровопусканию, после инкубации их лизоцимом, но не влияет на иммуномодулирующую активность эритроцитов после инкубации их с террилитином. Кобаламин не влияет на свойства эритроцитов крыс с кровопотерей после обработки их лизоцимом или террилитином. Строма эритроцитов крыс, полученная после острой кровопотери реагирует на кобаламин повышением имуномодулирующей активности, индуцируемой лизоцимом и террилитином.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Результаты исследований, основные положения которых включены в монографии: «Метаболическая иммуномодуляция» (Курск, 2000); «Иммунометаболические эффекты регуляторов энергетического обмена при нарушении гомеостаза» (Курск, 2006); «Эритроцитзависимые эффекты лекарственных и физиотерапевтических средств» (Курск, 2008) могут использоваться в учебном процессе медицинских вузов с целью углубления и расширения знаний о роли эритроцитов в реализации иммунометаболического и гепатопротекторного действия препаратов гликозаминогликанов, гликозидаз и витаминов при кровопотере.

2. Материалы диссертации включены в рабочие программы кафедр фармакологии, биохимии, патофизиологии, спортивной медицины, хирургии, акушерства и гинекологии Курского, Саратовского, Самарского и Российского государственных медицинских университетов, Нижегородской государственной медицинской академии, медицинских факультетов Белгородского и Орловского государственных университетов.

3. Материалы по использованию композиций препаратов гликозаминогликанов, гликозидаз различного видового происхождения в сочетании с витаминами могут быть использованы в клинической практике после клинической апрбации для коррекции иммунометаболического статуса после кровопотери.

4. Результаты работы, выразившиеся в создании глико-витаминных препаратов могут быть использованы в производственных условиях для получения фармакологических средств, обладающих имумнометаболическими и гепатопротекторными эффектами при острой кровопотере.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Лазарева, Г.А. Иммуномодулирующее действие фитопрепаратов при острых кровопотерях / Г.А. Лазарева, В.Н. Рыбников, И.Л. Бровкина / Метаболическая иммуномодуляция / под ред. Л.Г. Прокопенко, А.И. Конопли. - Курск, 2000. - С. 199-209.

2. Прокопенко, Л.Г. Иммунометаболические эффекты, вызываемые дозозависимым кровопусканием и их коррекция стабилизаторами клеточных мембран / Л.Г. Прокопенко, Г.А. Лазарева, В.Н. Рыбников / Метаболическая иммуномодуляция / под ред. Л.Г. Прокопенко, А.И. Конопли. - Курск, 2000. - С. 180-187.

3. Рыбников, В.Н. N-ацетилнейраминовая кислота как иммуномодулятор при кровопотерях / В.Н. Рыбников, И.Л. Бровкина // Человек и его здоровье. - Курск, 2000. - Вып. 3. - С. 198-200.

4. Рыбников, В.Н. Влияние жирорастворимых витаминов на антиоксидантный и энергетический статус эритроцитов при острой кровопотере / В.Н. Рыбников, И.Л. Бровкина // Материалы IV съезда иммунологов и аллергологов СНГ «Аллергология и иммунология». - М., 2000. - Т.2, №2. - С.137.

5. Рыбников, В.Н. Иммуномодулирующее действие витамина К при острых кровопотерях / В.Н. Рыбников, А.А. Конопля // Тез докл. VII Рос. нац. конгр. «Человек и лекарство». - М., 2000. - С. 541.

6. Рыбников, В.Н. Иммуномодулирующее действие нафтохинонов при острых кровопотерях / В.Н. Рыбников, А.А. Конопля, И.Л. Бровкина / Метаболическая иммуномодуляция / под ред. Л.Г. Прокопенко, А.И. Конопли. - Курск, 2000. - С. 194-199.

7. Рыбников, В.Н. Иммуномодулирующее действие полисахаридов и N-ацетилнейраминовой кислоты при острых кровопотерях / В.Н. Рыбников, И.Л. Бровкина // Материалы IV съезда иммунологов и аллергологов СНГ «Аллергология и иммунология». - М., 2000. - Т.2, №2. - С.136.

8. Рыбников, В.Н. Нафтохиноны как иммуномодуляторы при острых кровопотерях / В.Н. Рыбников, И.Л. Бровкина // Сб. науч. тр., посвящ. 65-летию КГМУ «Актуальные проблемы медицинской науки и фармации». - Курск, 2000. - С.72-73.

9. Бровкина, И.Л. Иммуномодулирующее действие гетерополисахаридов и N-ацетилнейраминовой кислоты при острых кровопотерях / И.Л. Бровкина, В.Н. Рыбников // Сб. науч. тр. «Актуальные проблемы медицины и фармации». - Курск, 2001. - С.42.

10. Рыбников, В.Н. Влияние жирорастворимых витаминов на антиоксидантный и энергетический статус эритроцитов при острой кровопотере / В.Н. Рыбников, И.Л. Бровкина // Сб. науч. тр. «Актуальные проблемы медицины и фармации». - Курск, 2001. - С.290-291.

11. Бровкина, И.Л. Иммуномодулирующее действие гиалуронидазы и жирорастворимых витаминов в норме и при острой кровопотере / И.Л. Бровкина, В.Н. Рыбников // Курский науч.-практ. вестн. «Человек и его здоровье». - 2002. - Вып. 4. - С.8-11.

12. Бровкина, И.Л. Иммуномодулирующее действие гликолитических ферментов при токсических формах анемии и кровопотере / И.Л. Бровкина, В.Н. Рыбников // Курский науч-практ. вестн. «Человек и его здоровье». - 2002. - Вып. 4. - С.3-7.

13. Бровкина, И.Л. Иммуномодулирующее действие пиридоксина, фолата, кобаламина и гликозаминогликанов при кровопотере / И.Л. Бровкина, В.Н. Рыбников // Курский науч-практ. вестн. «Человек и его здоровье». - 2002. - Вып. 4. - С.12-19.

14. Рыбников, В.Н. Иммуномодулирующее действие гликозаминогликанов и жирорастворимых витаминов при острых кровопотерях / В.Н. Рыбников, И.Л. Бровкина // Курский науч-практ. вестн. «Человек и его здоровье». - 2002. - Вып. 4. - С.81-86.

15. Рыбников, В.Н. Иммуномодулирующее действие эритроцитов и их стромы, инкубированных с гликозаминогликанами Pоlygonaceae и менадионом, при острой кровопотере / В.Н. Рыбников, И.Л. Бровкина // Курский науч-практ. вестн. «Человек и его здоровье». - 2002. - Вып. 4. - С.87-92.

16. Рыбников, В.Н. Функционально-метаболическая активность лейкоцитов и ее коррекция лизоцимом при острой кровопотере / В.Н. Рыбников, И.Л. Бровкина // Курский науч-практ. вестн. «Человек и его здоровье». - 2002. - Вып. 4. - С.93-97.

17. Бровкина, И.Л. Пиридоксин, фолат и кобаламин как иммуномодуляторы при различных формах анемии / И.Л. Бровкина, В.Н. Рыбников // Тез. докл. X Рос. нац. конгр. «Человек и лекарство». - (7-11 апреля 2003 г., г. Москва). - М., 2003. - С.698.

18. Рыбников, В.Н. Взаимосвязь иммуномодулирующих эффектов, вызываемых лизоцимом и нафтохинонами, при острой кровопотере / В.Н. Рыбников, И.Л. Бровкина // Антибиотики и химиотерапия. - 2003. - Т.48, №5. - С.7-10.

19. Рыбников, В.Н. Иммуномодулирующее действие растительных гетерополисахаридов и жирорастворимых витаминов при острых кровопотерях / В.Н. Рыбников, И.Л. Бровкина // Материалы междунар. науч.-практ. конф. «Современные технологии фитонутрициологии в акушерстве, гинекологии и педиатрии». - (29-30 мая 2003 г., г. Москва). - М.: Изд-во РУДН, 2003. - С.330-337.

20. Рыбников, В.Н. Иммуномодулирующее действие эритроцитов и их стромы, инкубированных с менадионом и гетерополисахаридами Polygonaceae, при острой кровопотере / В.Н. Рыбников, И.Л. Бровкина, М.Г. Газазян // Антибиотики и химиотерапия. - 2003. - Т.48, №4. - С.14-18.

21. Рыбников, В.Н. Иммуномодулирующие эффекты, вызываемые лизоцимом при острых кровопотерях / В.Н. Рыбников, И.Л. Бровкина // Тез. докл. X Рос. нац. конгр. «Человек и лекарство». - (7-11 апреля 2003 г., г. Москва). - М., 2003. - С.654.

22. Бровкина, И.Л. Иммунометаболические эффекты, вызываемые лизоцимом при острой кровопотере / И.Л. Бровкина, В.Н. Рыбников // Пат. физиология и эксперимент. терапия. - 2004. - №2. - С.14-16.

23. Иммуномодулирующее действие пиридоксина, фолата и кобаламина при различных формах анемии / И.Л. Бровкина, А.А. Конопля, Б.С. Утешев, В.Н. Рыбников // Эксперимент. и клинич. фармакология. - 2004. - Т.67, №1. - С.32-36.

24. Рыбников, В.Н. Влияние лизоцима на функционально- метаболическую активность полиморфно- ядерных лейкоцитов в условиях острой кровопотери / В.Н. Рыбников, И.Л. Бровкина, Б.С. Утешев // Эксперимент. и клинич. фармакология. - 2004. - Т.67, №2. - С.45-48.

25. Рыбников, В.Н. Иммунометаболические эффекты, вызываемые N-ацетилнейраминовой кислотой при острой кровопотере / В.Н. Рыбников, И.Л. Бровкина // Антибиотики и химиотерапия. - 2005. - Т.50, №10-11. - С.24-28.

26. Лазарева, Г.А. Иммунометаболические эффекты полисахаридов различного видового происхождения / Г.А. Лазарева, И.Л. Бровкина, В.Н. Рыбников // Иммунометаболические эффекты регуляторов энергетического обмена при нарушении гомеостаза / под ред. Л.Г. Прокопенко. - Курск, 2006. - С. 245-273.

27. Рыбников, В.Н. Иммунометаболические эффекты, вызываемые N-ацетилнейраминовой кислотой, водо- и жирорастворимыми витаминами при острой кровопотере / В.Н. Рыбников, И.Л. Бровкина, Л.Г. Прокопенко // Системный анализ и управление в биомедицинских системах. - 2007. - Т.6, №3. - С.634-637.

28. Бровкина, И.Л. Экстракорпоральное иммуномодулирующее действие гидролитических ферментов и витаминов / И.Л. Бровкина, Л.Г. Прокопенко, В.Н. Рыбников // Вестн. новых мед. технологий. - 2008. - Т.XV, №2. - С.19-21.

29. Влияние гидролитических ферментов и витаминов на иммуномодулирующие свойства эритроцитов и лейкоцитов при острой кровопотере / Рыбников, И.Л. Бровкина, А.И. Лазарев, Л.Г. Прокопенко // Аллергология и иммунология. - 2008. - Т.9, №3. - С.317-318.

30. Влияние окислительно модифицированных липопротеинов на иммуносупрессирующие свойства тромбоцитов и эритроцитов при острой кровопотере / В.Н. Рыбников, И.Л. Бровкина, А.И. Лазарев, Л.Г. Прокопенко // Аллергология и иммунология. - 2008. - Т.9, №3. - С.318.

31. Имунометаболические эффекты протеолитических ферментов и жирорастворимых витаминов при острой кровопотере / А.И. Лазарев, И.Л. Бровкина, В.Н. Рыбников, Л.Г. Прокопенко // Курский науч.-практ. вестн. «Человек и его здоровье». - 2008. - №1. - С.41-47.

32. Эритроцитзависимые эффекты лекарственных и физиотерапевтических средств / А.И. Лазарев, И.Л. Бровкина, В.П. Гаврилюк, и др. - Курск: ГОУ ВПО КГМУ Росздрава, 2008. - 336 с.

ПРИНЯТЫЕ СОКРАЩЕНИЯ

ААП - б₁-антипротеаза, мкмоль/л

АГП - ацилгидроперекиси, ДD₂₃₃ на 1 мл плазмы

АЗКЦ - антителозависимая клеточная цитотоксичность

АЛТ - аланинаминотрансфереза, ммоль/ч*л

АМГ - б₂-макроглобулин, мкмоль/л

АНК - N-ацетилнейраминовая кислота

АОК - антителообразующие клетки, 10³/селезенку

АСТ - аспартатаминотрансфераза, ммоль/ч*л

АТФ - аденозинтрифосфат

БФГ - 2,3-юифосфоглицерат

ВФСС - высокомолекулярная фракция супернатантов спленоцитов

ГАГ - гликозаминогликан, г/л

ГАГ-Р - гликозаминогликан, Polygonaceae

ГЗТ - гиперчувствительность замедленного типа

ГИО - гуморальный иммунный ответ

ГР - глутатионредуктаза, мкмоль/мл эритроцитов

ДК - диеновые конъюгаты, нмоль/л

КПК - крысы после кровопотери 2% от массы тела.

ЛНП - липопротеиды низкой плотности, усл. ед.

МДА - малоновый диальдегид, мкмоль/л

НАДФН - никотинамиддинуклеотидфосфат восстановленный

НСТ-сп. - тест восстановления нитросинего тетразолия спонтанный, %

НСТ-ст. - тест восстановления нитросинего тетразолия стимулированный, %

НФСС - низкомолекулярная фракция супернатантов спленоцитов

ОБ - общий белок, г/л

ОРН - окислительный резерв нейтрофилов

ПОЛ - перекисное окисление липидов

ПЯЛ - полиморфноядерные лейкоциты

РА - ретинола ацетат

РМЛ - разница массы лимфоузлов, мг

СВМОЛ - строма, включающая менадион, обработанная лизоцимом

СОД - супероксиддисмутаза, Ед/млн. эритроцитов

СЭОГ - строма эритроцитов, обработанная гликозаминогликаном

СЭОМ - строма эритроцитов, обработанная менадионом

СЭОМГ - строма эритроцитов, обработанная менадионом и гликозаминогликаном

ТА - токоферола ацетат

ФАН - функциональная активность нейтрофилов

ФИ - фагоцитарный индекс, %

ФМА - функционально-метаболическая активность

ФЧ - фагоцитарное число (среднее количество поглощенных

частиц латекса на один фагоцит), абс.

ХОЛ - холестерин, ммоль/л

ЩФ - щелочная фосфатаза, ммоль/ч*л

ЭБ - эритроциты барана

ЭКПГ - эритроциты крыс, получавших гиалуронидазу

ЭКПЛ - эритроциты крыс, получавших лизоцим

Размещено на Allbest.ru

...