Разработка, обоснование и оценка современной биотерапии у больных солидными опухолями
Целесообразность использования высокотехнологичных методов биотерапии в комплексном лечении больных диссеминированной меланомы и раком почки. Клиническая и иммунологическая эффективность противоопухолевых вакцин. Показания к проведению вакцинотерапии.
| Рубрика | Медицина |
| Вид | автореферат |
| Язык | русский |
| Дата добавления | 17.01.2018 |
| Размер файла | 194,8 K |
Отправить свою хорошую работу в базу знаний просто. Используйте форму, расположенную ниже
Студенты, аспиранты, молодые ученые, использующие базу знаний в своей учебе и работе, будут вам очень благодарны.
Размещено на http://www.allbest.ru/
АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук
Разработка, обоснование и оценка современной биотерапии у больных солидными опухолями
специальность - 14.00.14 - онкология
14.00.36 - аллергология и иммунология
На правах рукописи
Балдуева Ирина Александровна
Санкт-Петербург 2008 г.
Работа выполнена в ФГУ «НИИ онкологии им. Н.Н. Петрова Росмедтехнологий».
Научный консультант доктор медицинских наук, профессор Моисеенко В.М.
Официальные оппоненты:
доктор медицинских наук, профессор Барышников А.Ю;
доктор медицинских наук, профессор Гершанович М.Л;
доктор медицинских наук, профессор Максимов С.Я.
Ведущая организация: Санкт-Петербургский Государственный Медицинский Университет им. акад. И.П. Павлова.
Защита состоится «____»_________________ 2008 г. в 14.00 часов на заседании диссертационного совета Д 208.052.01 ФГУ «НИИ онкологии им. Н.Н. Петрова Росмедтехнологий» (197758, г. Санкт-Петербург, Песочный-2, ул.Ленинградская, д.68).
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГУ «НИИ онкологии им. Н.Н.Петрова Росмедтехнологий».
Автореферат разослан «____»_____________________ 2008 г.
Ученый секретарь диссертационного совета д.м.н. Орлова Р.В.
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
вакцина меланома рак почка
Актуальность проблемы.
В последнее десятилетие достигнуты несомненные успехи в лечении злокачественных опухолей, в первую очередь, вследствие прогресса лекарственной терапии. Одновременно достижения молекулярной биологии, иммунологии, углубленное понимание механизмов прогрессии опухоли и взаимоотношений иммунной системы и опухоли, а также развитие биотехнологии обусловили реальные перспективы улучшения результатов лечения опухолей с помощью методов биотерапии.
Разработка методов биотерапии у больных солидными опухолями, основанных на иммунопатологических особенностях заболевания является актуальным направлением в современной клинической онкологии (Cемиглазов В.Ф. и соавт., 1996; Барышников А.Ю. и соавт., 1998; Якубовская Р.И. и соавт., 2004; Georgiev G.P. et al., 1998). Кроме того, понимание механизмов иммунной защиты, исследование причин их несостоятельности и разработка методов коррекции представляет также несомненный научный интерес (Кадагидзе З.Г. и соавт., 2004). Это связано с тем, что злокачественная опухоль в организме является своего рода моделью реакции “трансплантат против хозяина”. Неуклонный рост частоты онкологических заболеваний, низкий уровень выживаемости у больных с IV стадией, недостаточная эффективность традиционных методов лечения у этой категории больных обуславливают социальную значимость данной проблемы (Чиссов В.И. и соавт., 1998; Давыдов М.И. и соавт., 2002).
Большой научный интерес представляет изучение механизмов формирования иммунодепрессии у больных злокачественными опухолями. Способность опухоли индуцировать анергию и апоптоз иммунокомпетентных клеток свидетельствует о том, что иммунодепрессия при опухолевом росте может являться следствием негативного исхода клеточной активации (Хансон К.П. и соавт., 1996). Происходит ли это на самом деле у больных солидными опухолями, насколько подвержены нарушения иммунитета биотерапевтической коррекции, как изменение баланса цитокинов сказывается на течении заболевания, и, в том числе, на выраженности специфического противоопухолевого иммунного ответа - все это составляет тот спектр вопросов, который в настоящее время остается во многом не выясненным (Моисеенко В.М. и соавт., 1998).
Кроме того, в доступной литературе отсутствует обоснование режимов вакцинотерапии больных злокачественными опухолями, что связано с недостаточным пониманием механизмов индукции оптимального иммунного ответа на каждый опухолеассоциированный антиген. Между тем, очевидно, что эффективность этого метода во многом зависит от рационального его применения.
Таким образом, из всего вышесказанного следует, что, несмотря на колоссальные достижения фундаментальной и прогресс клинической онкологии, остается много неясного во взаимоотношении опухоли и иммунной системы организма практически на всех этапах опухолевой прогрессии. Кроме того, появляется целый спектр вопросов, связанных с воздействием различных методов современной биотерапии на это взаимоотношение, что определило цель и задачи настоящего исследования.
Цель исследования.
Повышение эффективности лечения больных солидными опухолями на основе современных высокотехнологичных методов биотерапии.
Задачи исследования:
1. Обоснование и разработка современных методов биотерапии солидных опухолей.
2. Изучение влияния на отдельные звенья иммунной системы, а также клиническую эффективность методов активной специфической иммунотерапии на основе:
· костно-мозговых предшественников дендритных клеток;
· немодифицированных опухолевых клеток с иммунологическими адъювантами;
· геномодифицированных опухолевых клеток.
3. Оценка токсичности различных методов активной специфической иммунотерапии.
4. Определение показаний и противопоказаний к проведению различных вариантов вакцинотерапии.
5. Определение места современной биотерапии в комплексном лечении больных меланомой кожи и раком почки.
Научная новизна/
В диссертационной работе впервые:
· разработана оригинальная методика активной специфической иммунотерапии на основе аутологичных костно-мозговых предшественников дендритных клеток (Патент на изобретение № 2203683 от 10.05.2003 г., Заявка на изобретение №2008115173/14, приоритет от 17.04.2008);
· изучены различные способы введения костно-мозговых предшественников дендритных клеток с иммунологическими адъювантами больным с диссеминированным опухолевым процессом;
· разработан способ иммунотерапии аутологичными опухолевыми клетками с адъювантом IL-1? (Беталейкин) больных солидными опухолями (Патент на изобретение № 2267326 от 10.01.2006);
· разработан оригинальный способ получению культур опухолевых клеток человека на полупромышленном уровне с использованием метода автоматический дезагрегации и пассирования образцов аутологичной опухоли;
· изучены и определены решающие условия успешной генотерапии больных меланомой кожи и раком почки с использованием липосомной трансфекции гена tag7.
Практическая значимость:
· Обоснована целесообразность использования высокотехнологичных методов биотерапии в комплексном лечении больных диссеминированной меланомы и раком почки.
· Оценена клиническая и иммунологическая эффективность противоопухолевых вакцин, основанных на аутологичных костно-мозговых предшественниках дендритных клеток и геномодифицированных опухолевых клетках.
· Внедрен в клиническую практику метод оценки реакции гиперчувствительности замедленного типа на вакцинный препарат и на аутологичные опухолевые клетки (“bystander effect”).
· Определен приоритет внутрикожного способа введения вакцины на основе дендритных клеток по сравнению с внутривенным введением и инъекциями в периферические лимфатические узлы.
· Обоснована целесообразность использования противоопухолевых вакцин в комбинации с иммунологическими адъювантами (интерлейкин -1, -2).
Основные положения, выносимые на защиту
1. Биотерапия с использованием вакцин - эффективный метод лечения больных солидными опухолями.
2. Разработанные оригинальные противоопухолевые вакцины на основе генетически модифицированных опухолевых клеток и костно-мозговых предшественников дендритных клеток вызывают специфический иммунный ответ, приводящий к регрессу опухоли, и могут быть рекомендованы к практическому применению.
3. Основные механизмы противоопухолевого действия вакцин связаны с нормализацией либо стимуляцией функциональной активности отдельных звеньев иммунной системы (CD3+, CD4+, CD8+ Т-лимфоцитов, CD20+ В-лимфоцитов, HLA DR+, CD25+, CD38+, CD71+, CD95+ лимфоцитов, CD16+ NK-клеток, ФГА и КонА активированных клеток).
Апробация диссертации
Основные результаты работы обсуждались на научных конференциях ФГУ «НИИ онкологии им. Н.Н. Петрова Росмедтехнологий» совместно с Кафедрой онкологии с курсом клинической радиологии и на Кафедре клинической лабораторной диагностики Cанкт-Петербургской Медицинской Академии последипломного образования.
Результаты работы были представлены на II съезде иммунологов России (г. Сочи, 1999), Европейской школе по онкологии (г. Москва, 1999), III--XI научных конференциях с международным участием «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге» (г. Санкт-Петербург, 1999--2007) III, V и IX (г. Москва, 1999, 2001 и 2006) Ежегодных Российских онкологических конференциях, I Международном конгрессе «Новые медицинские технологии» (г. Санкт-Петербург, 2001), I Всероссийской научно-практической конференции «Биотерапия рака» (г. Москва, 2002), Международной научно-практической конференции «Цитокины. Воспаление. Иммунитет» (г. Санкт-Петербург, 2002), I Всероссийской научно-практической конференции «Биотерапия рака» (г. Москва, 2002), конференции «Проблемы онкоиммунологии: научные и прикладные аспекты» (г. Киев, 2003), 14th Inter. Congress on anti-CancerTreatment (Paris, 2003), III съезда ВОГиС «Генетика в ХХI веке: современное состояние и перспективы развития» (г. Москва, 2004), межрегиональной научно-практической конференции «Комбинированные и комплексные методы лечения в онкологии» (г. Барнаул, 2004), научно-практической конференции «Современное состояние и перспективы развития экспериментальной и клинической онкологии» (г. Томск, 2004), конференции «Стволовые клетки, регенерация, клеточная терапия» (г. Санкт-Петербург, 2004), III и V съезде онкологов и радиологов СНГ (г. Минск, 2004; г. Ташкент, 2008), IV--VII Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Отечественные противоопухолевые препараты» (г. Москва, 2005--2008), научно-практической конференции онкологов СЗФО «Меланома кожи. Современное состояние диагностики и лечения» (г. Великий Новгород, 2005), I Российско-американской конференции «Биотехнология и онкология» (г. Санкт-Петербург, 2005), Российской научно-практической конференции с международным участием «Новые технологии в онкологической практике» (г. Барнаул, 2005), 6th World Congress on Melanoma (Vancouver, 2005), Congress «Мediated diseases from theory to therapy» (Moscow, 2005), научно-практической конференции онкологов СЗФО «Меланова кожи. Современное состояние диагностики и лечения» (г. Санкт-Петербург, 2005), XXXIII Meeting of the International Society for Oncodevelopmental Biology and Medicine (Rhodes, 2005), 8th International Symposium Biological Therapy of cancer from disease to targeted therapy (Dresden, 2005), Объединенном иммунологическом форуме (г. Санкт-Петербург, 2008).
Внедрение результатов работы в практику.
Результаты работы внедрены и используются в практической и научно-исследовательской работе ФГУ «НИИ онкологии им. Н.Н. Петрова Росмедтехнологий», Институте биологии гена РАН (г. Москва), Военно-медицинской академии им. С.М. Кирова (г. Санкт-Петербург), в учебном процессе кафедры онкологии с курсом клинической радиологии и кафедры клинической лабораторной диагностики Cанкт-Петербургской Медицинской Академии последипломного образования.
Структура и объем диссертации.
Работа состоит из введения, обзора литературы, 6 глав собственных исследований, заключения, выводов, практических рекомендаций, списка литературы и 9 приложений. Текст изложен на 263 страницах машинописного текста, содержит 10 таблиц и 133 рисунка. Список литературы включает 433 источника.
СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ
Материалы и методы исследования.
Работа выполнена в ФГУ «НИИ онкологии им. Н.Н. Петрова Росмедтехнологий». Исследование проводилось в период с ноября 1998 по февраль 2008 года.
В работе использовались клинические, стандартные лабораторные, биохимические, иммунологические и иммуногистохимические методы исследования больных, позволяющие оценить функциональное состояние организма, инструментальные методы, применяемые при диагностике злокачественных опухолей и метастатических образований. Все экспериментальные исследования выполнены по решению Ученого Совета ФГУ «НИИ онкологии им. Н.Н. Петрова Росмедтехнологий».
В исследование включено 322 пациента. Клиническая оценка произведена у 214 пациентов: 121 больной меланомой кожи, 78 больных раком почки, 8 больных раком предстательной железы, 5 больных колоректальным раком, 1 больной злокачественной шванномой, 1 больной немелкоклеточным раком легкого (рис. 1). 102 больных после радикального хирургического лечения или полных циторедуктивных операций и 112 пациентов после частичных циторедуктивных операций.
Рис. 1. Характеристика больных, получавших противоопухолевую вакцинотерапию
Во всех случаях диагноз заболевания был подтвержден гистологическим исследованием, а удаленные опухоли были использованы для приготовления аутологичных культур опухолевых клеток с целью дальнейшей противоопухолевой вакцинотерапии.
В исследование включено 108 женщин и 106 мужчин. Средний возраст пациентов составил 53,7 года (от 21 года до 79 лет).
Все больные подвергались предварительному обследованию для оценки степени распространенности опухоли. В результате у 112 больных была подтверждена диссеминированная стадия заболевания. Частота поражения различных органов и систем представлена на рис. 2.
Рис. 2. Частота поражения различных органов и систем у больных, получавших вакцинотерапию с лечебной целью
Для отбора больных использовали общепринятые в клинической практике критерии включения и исключения.
Критерии включения:
1. Гистологически верифицированный диагноз солидной опухоли с очагами поражения доступными для биопсии.
2. Возраст старше 18 лет.
3. Общее удовлетворительное состояние (индекс Карновского не менее 70%).
4. Ожидаемая продолжительность жизни не менее 3-х месяцев.
5. Отсутствие противоопухолевого лечения (химиотерапия, гормонотерапия, лучевая терапия, иммунотерапия) в течение последних 4-х недель или наличие явных признаков прогрессирования после их проведения.
6. Возможность визуальной или инструментальной оценки динамики изменений метастатических очагов.
7. Абсолютное содержание в периферической крови CD3+- лимфоцитов >0,8х109/л, CD4+>0,52х109/л, CD8+>0,28х109/л.
8. Согласие больного на участие в данном исследовании.
Критерии исключения:
1. Наличие метастатического поражения центральной нервной системы.
2. Активный аутоиммунный процесс.
3. Больные с одной из перечисленных инфекций: HIV, HBV, HCV.
4. Наличие признаков системной инфекции или тяжелых заболеваний сердечно-сосудистой, нервной, дыхательной или эндокринной системы.
5. Нарушение функции печени и почек (билирубин >1,5 x N, креатинин >1,5 x N).
Точкой отсчета наблюдения за больными принималась дата хирургического лечения, в том числе с целью забора образца опухоли для приготовления вакцины. Объективная оценка клинического эффекта (стандартные клинические, лабораторные, рентгенологические и ультразвуковые методы исследования) проводилась после 3-й и 6-й вакцинаций, а также каждые последующие 3 мес.
Во время исследования проведен анализ факторов, которые могли бы оказывать влияние на эффективность лечения - тип опухоли, состояние иммунной системы, цель вакцинации, количество вакцинаций. При оценке лечебного действия вакцинотерапии использованы единые критерии объективного эффекта. Критериями объективного эффекта при лечении солидных опухолей является полный или частичный регресс размеров опухоли и метастазов, а также время безрецидивной выживаемости. Статус больного на момент решения вопроса о возможности проведения паллиативной вакцинотерапии оценивался по системе ВОЗ. Степень токсичности вакцин определялась по шкале СТС NCIC (расширенная шкала ВОЗ).
При оценке показателей выживаемости период наблюдения исчислялся от даты хирургического лечения первичной опухоли или метастазов, совпадающей с забором опухолевого материала для приготовления вакцины, до даты смерти или последнего контакта с больным или родственниками. Изучение косвенного влияния вакцинотерапии на выживаемость проводили путем сопоставления выживаемости больных, получавших вакцинотерапию с паллиативной и адъювантной целью, прошедших полный (6 вакцинаций) или частичный курс лечения. В табл. 1 указаны вакцины, режимы и способы введения, разработанные и оптимизированные в ФГУ «НИИ онкологии им. Н.Н.Петрова Росмедтехнологий» с 1998 по 2008 гг.
Источником информации о больных были истории болезни и амбулаторные карты ФГУ «НИИ онкологии им. Н.Н. Петрова Росмедтехнологий», заполняемые в процессе лечения и наблюдения. Оценка иммунного статуса пациентов проводилась в лаборатории иммунологии СПб ГУЗ «Городская больница №31». После получения данных из первичной документации и текущие сведения о больных кодировались и фиксировались в специально разработанных бумажных формах и в программе Microsoft Excel персонального компьютера, представляя базу данных для каждой группы больных.
Таблица 1. Аутологичные вакцины, режимы и способы введения
|
Тип вакцины |
Количество больных |
Режим введения |
Способ введения |
|
|
Немодифицированные опухолевые клетки 106 с иммунологическим адъювантом BCG (106) |
48 |
2 введения с интервалом 14 дней, последующие 4 введения каждый 21-й день |
в/к паравертебрально в 4 точки с BCG х2 введения, без BCG - 4 введения |
|
|
Немодифицированные опухолевые клетки 106 с иммунологическим адъювантом IL-1? (60 нг) |
57 |
6 введений каждый 21-й день |
в/к паравертебрально в 3 точки с IL-1?, 4-я точка без IL-1? - контрольная. Одновременно вводили IL-1? в дозе 470 нг в переднюю брюшную стенку в 1-2 день |
|
|
Немодифицированные опухолевые клетки 106 с иммунологическим адъювантом IL-1? (60 нг) и низкими дозами циклофосфамида (300 мг) |
18 |
6 введений каждый 21-й день, циклофосфамид в день 0 |
в/к паравертебрально в 3 точки с IL-1?, 4-я точка без IL-1? - контрольная. Одновременно вводили IL-1? в дозе 470 нг в переднюю брюшную стенку двукратно (день 0 и день 1) |
|
|
Опухолевые клетки 106, трансфецированные геном tag7 - генотерапия |
54 |
6 введений каждый 21-й день Проводили пролонгированные и повторные курсы от 18 до 35 введений |
в/к паравертебрально в 3 точки геномодифицированные клетки, в 4-й точке - немодифицированные опухолевые клетки |
|
|
Дендритные клетки (3х106 кг/веса), нагруженные лизатом аутологичных опухолевых клеток без адъюванта Дендритные клетки с иммунологическим адъювантом IL-1? местно и IL-2 системно Дендритные клетки с иммуномодулирующими дозами цитостатиков |
14 2 2 |
6 введений каждые 1) 7 дней, 2) 14 или 21 день Проводили пролонгированные и повторные курсы до 13 введений |
1) в/в капельно 2) в/к паравертебрально в 7 точек, 8-я точка - контрольная (ненагруженные дендритные клетки) 3) в периферические лимфатические узлы + 1 контрольная точка (в/к паравертебрально, ненагруженные дендритные клетки) |
Для оценки сроков жизни в различных группах больных использовалась медиана выживаемости, определяемая как период времени, за который погибает половина больных исследуемой группы (Березкин Д.П., 1982), и средняя продолжительность выживания (М) с ее стандартной ошибкой (m). Для вычисления указанных критериев использовалась компьютерная программа Statistica 6.0. Графическая демонстрация осуществлена с помощью кривых Каплана-Мейера.
Методы:
1. Приготовление вакцины на основе аутологичных опухолевых клеток.
Приготовление вакцины на основе аутологичных опухолевых клеток состоит из четырех основных этапов:
1-й этап - дезагрегация образца резецированной аутологичной опухоли;
2-й этап - наращивание культуры аутологичной опухоли в условиях, соответствующих требованиям Good Laboratory Practice (GLP);
3-й этап - характеристика клеточного состава (цитологическая, иммуноцитохимическая, клоногенная и др.);
4-й этап - программное замораживание и хранение в условиях -196оС криобанка клеточных культур человека в ФГУ «НИИ онкологии им. Н.Н. Петрова Росмедтехнологий».
Дезагрегация образцов опухоли.
Для получения суспензии опухолевых клеток используют механический и ферментативный способы диссоциации опухолевой массы. Традиционно предпочтение отдают ферментативной обработке тканей, которая считается наименее травматичной для клеток. В то же время использование этого метода приводит к трудно обнаруживаемым метаболическим нарушениям, в частности, к изменению проницаемости мембран и потере ими части белков, что не вызывает немедленной гибели клеток, но приводит к торможению роста культуры in vitro (Slocum H.K. et al., 1981; Engelholm S.A. et al., 1985). Ряд специалистов применяют механический способ дезагрегации тканевых фрагментов с помощью различных ручных приемов, в том числе с использованием стеклянных гомогенизаторов. Достоинством этого подхода является его дешевизна, а ограничением - низкая жизнеспособность клеток механически травмированной солидной опухоли.
В настоящей работе мы использовали автоматизированный механический способ дезагрегации опухолевой ткани с помощью Медимашины (DAKO, Дания) (Ottosen G.L. et al., 1996) в нашей модификации.
Для этого опухолевую ткань разделяли на фрагменты 2-3 мм3, помещали в культуральную среду и Медиконы (стерильные ножи) (DAKO, Дания) и дезагрегировали в течение 10 - 60 сек. Время дезагрегации определяли для каждого случая эмпирически в связи с различиями в структурно-морфологической организации опухоли. Далее клеточную суспензию фильтровали с помощью Филконов 70 мкм и 50 мкм (DAKO, Дания), которые позволяют максимально избавиться от стромальных и клеточных конгломератов и отмывали центрифугированием при 1000 об/мин в течение 10 мин. Количество и жизнеспособность клеток определяли в камере Горяева с помощью трипанового синего. Далее клетки вводили в фиксированный объем полной питательной среды и переносили в индивидуальные культуральные флаконы.
Наращивание клеток опухоли в культуре.
Наращивание индивидуальных клеточных культур требует пристального внимания и непрерывного совершенствования технологии культивирования. Для изучения оптимального соотношения компонентов питательной среды использовали три типа сред: DMEM (Invitrogen, США), DMEM/F12 (Биолот, РФ), RPMI-1640 (Serva, ФРГ). При этом добавляли разное количество сыворотки эмбрионов крупного рогатого скота (СЭКРС): 5, 10, 20% (Биолот, РФ). Также исследовали влияние на рост опухолевых клеток кондиционированной среды культур фибробластов легких эмбриона человека, препарата трансферрин-инсулин-селен (Invitrogen, США) (конечная концентрация в среде: 5 мкг/мл, 5 мкг/мл и 5 нг/мл, соответственно). В качестве селективного агента, предотвращающего рост фибробластов, применяли 100 мкг/мл генетицина (Invitrogen, США). С целью предотвращения контаминации клеточных культур использовали 100 ед./мл пенициллина, 50 ед./мл стрептомицина или 50 мкг/мл гентамицина, 2,5 мкг/мл фунгизона (Invitrogen, США).
При наращивании первичной клеточной массы получали монослойные, суспензионные или полусуспензионные культуры, у которых в дальнейшем можно изменить адгезионные свойства, используя подложку из коллагена. При необходимости использовали культуральные флаконы, предварительно покрытые матриксом, состоящим из бычьего коллагена I типа (Sigma, США).
Эффективность добавок определяли по скорости прироста клеток. Для этого высаживали выделенные клетки по 5 х 103 на лунку в 96-луночной планшете в исследуемой питательной среде. На 3-ьи сутки производили подсчет клеток в камере Горяева.
Характеристика клеточного состава.
Проводили цитологическую и морфологическую верификацию, изучали тип роста, у части культур исследовали скорость пролиферации. Стабильно пролиферирующие культуры меланомы и рака почки в последующем тестировали на присутствие опухолеассоциированных антигенов. Для этого опухолевые клетки: 1) выращивали на стеклах; 2) фиксировали с помощью абсолютного метанола; 3) окрашивали моноклональными антителам к белкам S100, gp100, tyrosinase, MITF, MAGE1, MART/MelanA, CD63, (Novocastra, Великобритания) с помощью непрямого иммуноцитохимического метода и системы визуализации Novostain Detection Kit NCL-RTU-D (Novocastra, Великобритания). Для выявления антигенов клеток рака почки применяли моноклональные антитела NCL-RCC (Novocastra, Великобритания), специфичные к гликопротеину 200 kD, локализующегося в клетках проксимального отдела почечных канальцев и экспрессирующегося в 93% первичных опухолях почки и 84% метастатических образований, а также к CK18, CK8, Ki-67, EMA, PanCK.
Криоконсервация и хранение культур опухолевых клеток.
Опухолевые клетки каждого пациента подсчитывали в камере Горяева и криоконсервировали в дозе 106 клеток/мл в полипропиленовых стерильных криопробирках (Sarstedt, ФРГ) и криосреде, содержащей 50% питательной среды, 40% СКРС, 10% диметилсульфоксида (ДМСО) (Sigma, США). Для криоконсервации использовали метод программного замораживания клеток на приборе Computer Freezer Ice Cube 1810 SY Lab (Италия) с контролируемой скоростью охлаждения, которая составляла -1оС/мин в диапазоне от +4 оС до -40оС, и -5оС/мин в диапазоне от -40 до -120оС. Затем клетки переносили в индивидуальные контейнеры с жидким азотом (-196оС) и хранили до использования.
Для размораживания клеток пробирки помещали на 3 мин. в воду с температурой +42оС, затем разводили полной питательной средой 1:10, центрифугировали при 1000 об/мин в течение 5 мин, заменяли криосреду на полную питательную среду и рассеивали для культивирования в концентрации 2-3 х 106/мл.
Блокада пролиферации опухолевых клеток.
Для блокады пролиферации культуру опухолевых клеток в день вакцинации помещали в стерильные полипропиленовые пробирки в полной питательной среде и облучали в суммарной дозе 2000 сГр на терапевтическом аппарате «Рокус-?» Со60 1,25 mev (мощность дозы 0,99 сГр/с). Такой режим облучения полностью блокирует пролиферативную активность опухолевых клеток при сохранении синтеза белковых молекул, в том числе, специфических антигенов (Soiffer R. et al., 1998).
Контроль пролиферативной активности клеток проводили по методике оценки включения Н3 тимидина в ДНК пролиферирующих клеток. Результаты анализа проб не превышали отрицательный контроль (лизат аутологичных опухолевых клеток).
После облучения опухолевые клетки троекратно отмывали от компонентов культуральной среды в 10 мл 0,9% раствора хлорида натрия центрифугированием при 1000 об/мин в течение 10 мин каждая и приводили к концентрации 106/мл.
Обоснование числа опухолевых клеток, вводимых при вакцинации.
В подавляющем большинстве протоколов, апробированных в зарубежных клиниках, минимальное количество аутологичных опухолевых клеток, вводимых с целью вакцинации при каждой инъекции, составляет 2 х 103 клеток, а максимальной - 109 клеток.
Глубоких обоснований именно такого количества антигенного материала в специальной литературе нет, очевидно, этот эмпирически найденный диапазон соответствует тому содержанию антигенного материала в опухолевых клетках (5-15 мкг), которое необходимо для индукции полноценного иммунного ответа при внутрикожном введении.
Приготовление вакцины на основе аутологичных опухолевых клеток с иммунологическим адъювантом.
Индивидуально для каждого больного наращивали и характеризовали культуру опухолевых клеток, криоконсервировали и хранили до использования.
Приготовление вакцины на основе аутологичных опухолевых клеток с адъювантом BCG.
В день вакцинации клетки (106/клеток) (Dillman R.O. et al., 1998) размораживали, дважды отмывали в безсывороточной культуральной среде, помещали в стерильный контейнер и подвергали облучению на терапевтическом аппарате “Рокус-у” Со60 1,25 mev при 2000 сГр (мощность дозы 0,99 сГр/с. После облучения клетки трижды отмывали центрифугированием (1000 об/мин, 10 мин.) в 0,9% растворе хлорида натрия, смешивали с 106 BCG и вводили ex tempore по 0,3 мл смеси паравертебрально в межлопаточную область в 4 точки на расстоянии 3 см с образованием “лимонной корочки”. В пятую точку, а также, начиная с 3-й вакцинации, во все пять точек вводили опухолевые клетки без адъюванта. Курс вакцинотерапии состоял из 1-6 введений (в зависимости от количества полученного материала) с интервалом: 1-я и 2-я вакцинации через 2 недели, 3-я и последующие вакцинации с интервалом в 3 недели.
Приготовление вакцины на основе аутологичных опухолевых клеток с адъювантом IL-1?.
Размороженные и облученные аутологичные опухолевые клетки смешивали с 60 нг IL-1? (Беталейкин, РФ) в 1 мл 0,9% раствора хлорида натрия и вводили ex tempore по 0,3 мл паравертебрально в межлопаточную область в 3 точки на расстоянии 3 см и образованием “лимонной корочки”. В четвертую точку вводили опухолевые клетки без адъюванта. Одновременно вводили 470 нг IL-1 в 1 мл 0,9% раствора хлорида натрия подкожно в переднюю брюшную стенку с целью индукции системного иммунного ответа. Подкожное введение адъюванта повторяли на следующий день после вакцинации. Полный курс вакцинотерапии состоял из 4-6 введений (в зависимости от количества полученного материала) с интервалом 21 день. Схема вакцинации была выбрана на основании анализа опубликованных протоколов клинических исследований по аналогичным видам вакцин, режим введения адъюванта - на расчетах разработчиков препарата Беталейкин (проф. А.С.Симбирцев, ГНЦ Институт особо чистых биопрепаратов, г. Санкт-Петербург).
Приготовление вакцины на основе аутологичных опухолевых клеток, модифицированных геном tag7.
Индивидуально для каждого больного наращивали и характеризовали культуру опухолевых клеток, трансфецировали геном tag 7, криоконсервировали и хранили в криобанке клеточных культур (-196оС) до использования.
Опухолевые клетки модифицировали трансфекцией гена tag7 с использованием двух липосомных систем (Unifectin-21 и Unifectin-56), предоставленных к.х.н. А.Ю.Суровым (ИБХ РАН, Москва). Для анализа экспрессии введенных генов использовали ген -галактозидазы и зеленый флюоресцентный белок GFP, синтез продуктов которых выявляли через 24-72 часа после трансфекции. Эффективность трансфекции оценивали по соотношению окрашенных (трансфецированных) клеток, к общему количеству клеток. После определения оптимальных условий осуществляли трансфекцию опухолевых клеток геном tag 7, максимальное значение которой составило 30%, минимальное - 4%, среднее значение - 12,0 ± 6,5%.
Далее образцы тестировали на присутствие белка Tag 7 с помощью электрофореза в ДНС-ПААГ и иммуноблот-анализа.
Трансфецированные опухолевые клетки криоконсервировали и хранили в криобанке до использования. В день вакцинации 106 клеток размораживали, отмывали и облучали в выше описанных режимах.
Приготовленную вакцину вводили строго внутрикожно паравертебрально в 3 точки на расстоянии 3 см друг от друга. В 4-ю точку вводили нетрансфецированные опухолевые клетки. Курс лечения состоял из 6 введений вакцины с интервалом 21 день.
Приготовление вакцины на основе аутологичных костно-мозговых предшественников дендритных клеток (ДК).
Предшественники ДК мобилизовали из костного мозга в периферическую кровь ежедневным подкожным введением 8 мкг/кг гранулоцитарно-макрофагального колониестимулирующего фактора (GM-CSF) в течение 4-х дней с операцией афереза периферических стволовых клеток на 5-й день на автоматическом сепараторе клеток крови «COBE Spectra». Объем периферической костно-мозговой клеточной взвеси составлял около 240 мл, концентрат клеточной суспензии - 40-120 х 106/мл.
Мононуклеары (3 х 106/мл) помещали в свежую культуральную среду RPMI-1640 (Serva, ФРГ) с 2мМ L-глутамина, 5 нг/мл GM-CSF (Лейкомакс, Швейцария) или 7 нг/мл GM-CSF (Лейкин, США), 50 мг/100 мл Амикина (Чехословакия) и плоскодонные культуральные флаконы 165 см3 для суспензионных культур с вентилируемыми пробками. Культивирование проводили в безсывороточной питательной среде в течение 18 часов с целью исключения из клеточной культуры макрофагов и активации примеси тромбоцитов. Последующие 5 дней культивирования проводили в присутствии 5-10% инактивированной СЭКРС (56оС 30 мин). В дальнейшем уменьшали содержание СЭКРС и производили ее полную замену на аутологичную плазму. Весь период культивирования (12-14 дней) проводили в присутствии стабильного содержания в среде GM-CSF (5 нг/мл Лейкомакса или 7 нг/мл Лейкина). Наблюдение проводили за клетками, прикрепившимися со второго пассажа.
В результате выше описанных приемов нами была разработана методика выращивания ДК (CD11c+, CD1а+, HLA DR+, CD14-, CD3-, CD20-) из аутологичных костно-мозговых предшественников.
Активация ДК.
Нами оптимизирована разработанная методика активации костно-мозговых ДК (Патент на изобретение № 2203683 «Способ иммунотерапии костно-мозговыми дендритными клетками больных солидными опухолями» по заявке от 20.09.2001. Авторы изобретения: Моисеенко В.М., Балдуева И.А., Орлова Р.В., Семенова А.И.), которая заключалась в оценке способности к захвату нативных опухолеассоциированных антигенов ДК в присутствии TNF? и IL-1?.
Установили, что ДК при созревании и активации открепляются от пластика и легко удаляются вместе с питательной средой, незрелые ДК остаются прикрепленными или полуприкрепленными. Максимальное открепление клеток (~80%) наблюдалось при использовании лизата из 0,4 х 106/мл, TNF? (25 нг/мл) и IL-1? (30 нг/мл). Увеличение количества антигенного материала (0,8 х 106/мл, 1,6 х 106/мл, 3,2 х 106/мл) и введение в культуру ДК TNF? (50 нг/мл) или IL-1? (60 нг/мл) не влияло на их созревание и активацию. Вместе с тем использование только одного из изучаемых цитокинов потребовало увеличения количества антигенного материала до 1,6 х 106/мл. Увеличение антигенного материала до 3,2 х 106/мл не приводило к существенному различию в количестве открепляющихся от пластика ДК. Маркеры активированных ДК (HLA DRhigh, CD1alow, CD83high, CD86high ) экспрессировали 65-80% открепившихся клеток.
Нагруженные и активированные вакцинные ДК криоконсервировали и хранили в криобанке клеточных культур.
В день вакцинации клетки 3х106/кг веса пациента размораживали, отмывали и помещали в физиологический раствор с 10% раствором альбумина человека. Приготовленную вакцину вводили: 1) внутривенно капельно еженедельно, 2) внутрикожно каждый 14-й или 21-й день, 3) в периферические лимфатические узлы с интервалом 14 дней. Полный курс лечения состоял из 6 вакцинаций.
Характеристика приготовленной вакцины. Стерильность. Вакцинный препарат был стерильным. Контроль проводили после приготовления вакцины по методике, изложенной в Сборнике инструкций, утвержденных приказом Минздрава СССР от 13.01.83 г. №31.
Токсичность. Вакцинный препарат был безвреден для больного. Контроль проводили в соответствии с критериями токсичности, рекомендованными ВОЗ. Основные жизненные параметры (общее состояние, пульс, АД) измерялись через 10, 30 и 60 мин после каждой вакцинации. Особое внимание уделялось местным кожным реакциям, лихорадке, гастроинтестинальной и гематологической токсичности, а также функции печени, почек и нервной системы. В случае развития выраженных токсических реакций, которые могут угрожать жизни больных, последующие вакцинации не применялись. Больные исключались из исследования, однако, тщательное динамическое наблюдение за ними продолжалось.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
1. Оценка токсичности и клинической эффективности вакцинотерапии на основе аутологичных опухолевых клеток в сочетании с адъювантом BCG у больных диссеминированными солидными опухолями.
Лечение начинали спустя 3-6 недель после удаления первичного очага или метастазов опухоли. Шесть вакцинаций получили 16 больных из 45 (36%), 5 введений вакцины - 5 пациентов (11%), 4 введения - 15 пациентов (33%), 3 введения - 4 пациента (9%), 2 введения - 3 пациента (7%) и 1 введение аутологичной вакцины - 2 пациента (4%). Преждевременное завершение лечения у 29 больных было обусловлено прогрессированием заболевания или отсутствием необходимого количества выращенных в культуре опухолевых клеток, что препятствовало продолжению лечения.
Основным осложнением, выявленным у 3 (7%) больных, была некротизация папул в местах введения вакцины с BCG.
Полный регресс опухоли не зарегистрирован ни у одного из 20 пациентов, получавших лечебную вакцинотерапию. У 1 больной раком почки зарегистрирован частичный регресс метастазов в шейные лимфоузлы после 6 введений вакцины, продолжительность которого составила 3 месяца. Стабилизация процесса характеризовалась большой продолжительностью и наблюдалась у 10 больных (5 больных раком почки, 3 больных меланомой кожи, 1 больной раком предстательной железы, 1 больной раком легкого). Средняя продолжительность времени до прогрессирования составила 6,4 месяца (от 2 до 26 месяцев).
У больных, получавших адъювантную вакцинотерапию (n=25), средняя продолжительность безрецидивного периода составила 39,6 месяцев (от 3 до 65 месяцев). У 1 больного зарегистрировано прогрессирование заболевания после завершения курса вакцинотерапии. У 13 больных (8 больных раком почки, 3 - раком предстательной железы, 1 - меланомой кожи, 1 - раком прямой кишки) на момент анализа безрецидивный период продолжается.
При характеристике показателей выживаемости в этих двух группах больных выявлено, что медиана выживаемости пациентов, получавших вакцинотерапию с лечебной целью, составила 11,5 мес. от начала лечения, средняя продолжительность жизни 19 мес. (95% CI 10,4-27,9 мес.). Средняя продолжительность жизни больных, получавших вакцинотерапию с адъювантной целью, составила 44,2 мес. (95% CI 36,5-51,8 мес.). Медиана выживаемости не достигнута (рис. 3).
Рис. 3. Выживаемость пациентов, получавших вакцинотерапию на основе аутологичных опухолевых клеток в сочетании с BCG с адьювантной (группа 1) и лечебной целью (группа 2) (метод Каплана-Мейера)
Иммуномодулирующие эффекты вакцинотерапии, зарегистрированные в лабораторных тестах in vitro у 96% больных, проявляются в активации моноцитов, лимфоцитов, сенсибилизации CD4+ и CD8+ Т-клеток.
В то же время, иммунная система больных с диссеминированным заболеванием отвечает на злокачественный процесс неоднозначно. С одной стороны, как показывает наше исследование, увеличивается содержание антигенпрезентирующих клеток (АПК) в периферической крови, а с другой, в результате нарушений гомеостатических механизмов наблюдается снижение их функциональной активности, которое, однако, устраняется в процессе лечения.
Иммунный ответ организма на опухоль, по-видимому, мало чем отличается от реакции на какие-либо другие антигены, то есть, основными во всех случаях являются процессы регуляции иммунного ответа. В то же время, процесс регуляции - положительный или отрицательный по отношению к опухолевому росту - зависит от комплекса взаимодействующих эффекторных и регуляторных клеток. Очевидно, что для обеспечения максимальной эффективности контроля регуляторные механизмы должны воздействовать на различные субпопуляции клеток-эффекторов, вовлекаемых в иммунный ответ. Особое значение в этой регуляции играют NK-клетки.
Большинство проведенных исследований у онкологических больных показали снижение NK-активности в исследуемых группах по сравнению со здоровыми донорами, причем по данным различных авторов они выявлялись как на ранних стадиях, так и при диссеминации опухолевого процесса. С другой стороны, имеются данные об отсутствии подавления NK-активности у онкологических больных, а также данные, связывающие низкие показатели NK с плохим прогнозом заболевания.
Наши исследования показали, что у больных, получавших вакцину на основе аутологичных опухолевых клеток с адъювантом BCG c лечебной целью, содержание CD16+ NK-клеток было сниженным по сравнению с больными, вакцинированными с адъювантной целью, как до начала вакцинотерапии, так и после окончания лечения. Тенденция к увеличению этого показателя наблюдалась после 1-й, 2-й, 3-й и 6-й вакцинации со статистически значимым снижением p<0,01 после 4-й вакцинации и через три недели после 6-й вакцинации.
Разнонаправленность данных связана, по-видимому, с функциональной гетерогенностью NK популяции, а именно, с существованием известных в настоящее время пяти клеточных субтипов и блокадой созревания NK-клеток в костном мозге онкологических больных (Richards J.O. et al., 2006).
Таким образом, вакцинотерапия аутологичными опухолевыми клетками в сочетании с иммунологическим адъювантом BCG у больных солидными опухолями не сопровождается выраженными побочными эффектами, хорошо переносится больными, обладает иммуномодулирующей и клинической эффективностью.
Оценка токсичности и клинической эффективности вакцинотерапии на основе аутологичных опухолевых клеток в сочетании с адъювантом IL-1? у больных диссеминированными солидными опухолями.
Многочисленные экспериментальные исследования и отдельные клинические наблюдения свидетельствуют о перспективности использования цитокинов в качестве адъювантов. Вопрос о том, какое значение имеют цитокины в противоопухолевой вакцине, еще не решен (Ooi K.G. et al., 2006). Противоопухолевая вакцина может содержать провоспалительные цитокины (IL-1, IL-6, TNF), которые в высокой концентрации могут увеличивать ее реактогенность.
В исследовании представлены результаты клинической оценки (I/II фаза) и иммунологической эффективности активной специфической иммунотерапии с помощью вакцины на основе аутологичных опухолевых клеток в сочетании с адъювантом IL-1? у больных солидными опухолями.
В зависимости от клинического состояния больных и количества материала для вакцинации больные распределились следующим образом: 6 вакцинаций получили 17 больных (32,1%), 5 введений вакцины - 12 пациентов (22,6%), 4 введения - 12 пациентов (22,6%), 3 введения - 3 пациента (5,7%), 2 введения - 8 пациентов (15,1%) и 1 введение аутологичной вакцины - 1 пациент (1,9%).
Основным осложнением, наблюдавшимся в ходе лечения, была лихорадка, которая наблюдалась в дни введения ИЛ-1 у 19 больных (35,2%) из 54. Лихорадка 2 cт. зарегистрирована у 16 пациентов (84,2%), 1 ст. - у 3 пациентов (15,8%), сопровождалась кратковременным ухудшением самочувствия, купировалась приемом парацетамола 0,5 г. Осложнения 3-4 ст. не наблюдались. У 1 больной отмечался зуд кожи в месте введения ИЛ-1. Других побочных явлений (регионарной лимфаденопатии, изъязвлений в месте иньекций, аллергических и аутоиммунных реакций) не было.
Был зарегистрирован полный регресс у пациента 55 лет с почечно-клеточным раком почки, метастазами в легком. Стабилизация процесса наблюдалась у 10 из 20 больных (50%), получавших лечебную вакцинотерапию (3 больных раком почки, 7 больных меланомой кожи). Средняя продолжительность эффекта составила 6 месяцев (от 3 до 14 месяцев). У 6 пациентов эффект продолжается в течение 3-10 мес+. В группе пациентов, получавших адьювантную вакцинотерапию, у 21 больного (61,8%) из 34 время до прогрессирования заболевания составило в среднем 16,4 месяца (от 4,5 до 43 месяцев).
При изучении показателей выживаемости в этих двух группах больных выявлено, что медиана выживаемости пациентов, получавших вакцинотерапию с лечебной целью, составила 7 месяцев от начала лечения, средняя продолжительность жизни 8 мес. (95% CI 4,8-11,2 мес.). Медиана выживаемости больных, получавших вакцинотерапию с адьювантной целью, составила 13 месяцев от начала лечения, а средняя продолжительность жизни 14,7 мес. (95% CI 11,4-17,9 мес.) (рис. 4).
Рис. 4. Выживаемость пациентов, получавших вакцинотерапию на основе опухолевых клеток в сочетании с IL-1 с адьювантной (группа 1) и лечебной целью (группа 2) (метод Каплана-Мейера). По оси абсцисс - продолжительность жизни в месяцах
Оценку иммунологической активности препарата проводили на основе анализа показателей иммунного статуса и реакции ГЗТ, которая была зарегистрирована у 90,0% (45 из 50) первично вакцинированных пациентов.
Четверо больных не проходили иммунологическое обследование из-за тяжести состояния. Выявлены различия в динамике абсолютного содержания основных популяций и субпопуляций лимфоцитов в периферической крови больных меланомой кожи и раком почки, получавших вакцинотерапию с лечебной (1-я группа) и адъювантной целью (2-я группа), которые в большинстве случаев коррелировали с результатами лечения.
Для больных 1-й группы до лечения типичным было низкое абсолютное содержание лимфоцитов (1,42±0,66) по сравнению с 1,99±0,8 (p<0,04) у больных 2-й группы, а также CD3+, CD4+ и CD8+ Т-лимфоцитов. В процессе лечебной и адъювантной вакцинотерапии у пациентов наблюдалось: увеличение содержания лимфоцитов с 1,42±0,66 до 1,52±0,59 и 1,62±0,44 после 1-й и 3-й вакцинации у первых и с 1,99±0,8 до 2,24±0,96 и 2,2±0,82 у вторых (p<0,00 и p<0,01), а также увеличение количества CD3+, CD4+ и CD8+ Т-клеток у больных, получавших вакцину с адъювантной целью. Выраженную Т-клеточную иммунодепрессию у больных, получавших вакцину с лечебной целью, вполне можно объяснить хронической активацией иммунитета в процессе опухолевого роста и ограничением вследствие этого его компенсаторных возможностей.
В группе больных с адъювантной вакцинотерапией до лечения и последующей вакцинотерапией наблюдалось достаточно сохранное исходное содержание CD4+ и CD8+ Т-клеток, которое имело тенденцию к увеличению в процессе лечения и увеличенное содержание с 0,84±0,41 до 1,20±0,41 и с 0,55±0,29 до 0,66±0,19 после лечения, что является хорошим прогностическим фактором у этой категории больных.
В процессе вакцинотерапии аутологичными опухолевыми клетками в сочетании с адъювантом IL-1? у больных, получавших вакцину с адъювантной целью, также наблюдалось увеличение клеток, экспрессирующих HLA DR антиген, CD25, CD71 маркеры активации уже после 1-й вакцинации (с 0,46±0,31 до 0,62±0,33, c 0,17±0,16 до 0,28±0,29 и с 0,1±0,07 до 0,24±0,23, соответственно) по сравнению с низким содержанием этих клеток у больных, получавших лечебную вакцинотерапию (соответственно, 0,37±0,18 (p<0,01), 0,11±0,11 (p<0,05) и 0,14±0,15). Исключение составило количество CD38+ и CD95+ активированных клеток, которое было повышенным до лечения у больных 2-й группы.
После курса вакцинотерапии число HLA DR+ и CD25+ клеток практически вернулось к исходным величинам, в обеих группах, количество CD38+ и CD71+ клеток возросло с 0,10±0,07 до 0,68±0,56 и с 0,10 до 0,19±0,17 у больных, получавших вакцинотерапию с адъювантной целью, и CD95+ клеток с 0,09±0,09 до 0,19±0,17 у больных с лечебной целью.
Увеличенное содержание CD95+ иммунокомпетентных клеток обычно связывают с апоптозом, который вовлечен во все фундаментальные процессы иммунной системы, такие как механизм иммунного ответа, формирование иммунологической памяти, иммунологической толерантности и др. Поствакцинальный антиген-специфический иммунный ответ предполагает экспансию активированных Т-клеток и их последующую элиминацию для поддержания гомеостаза с помощью апоптоза. Вместе с тем, установлено, что некоторые CD95+ клетки образуют CD95-резистентный фенотип (экспрессируют высокий уровень Bcl-x(L) и Bcl-2), дифференцируются в клетки-памяти и образуют выраженный вторичный иммунный ответ (Fas S.C. et al., 2006).
Таким образом, поствакцинальное увеличение содержания CD95+ клеток у больных, получавших вакцинотерапию с лечебной целью, не поддается однозначной трактовке и требует дальнейшего изучения. Вместе с тем, этот показатель и представленные выше маркеры активации могут рассматриваться нами как суррогатные маркеры иммунного ответа на проводимую иммунотерапию.
Значительный интерес представило изучение динамики содержания В-клеток, основных классов иммуноглобулинов (Ig) и циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) в процессе вакцинотерапии в зависимости от цели вакцинации. Больные, получавшие вакцинотерапию с лечебной целью, часто были с распространенным опухолевым процессом, прежде леченные. Больным с начальными стадиями заболевания после операции дополнительное лечение не проводилось. Вместе с тем, в обеих группах до лечения было увеличено содержание иммуноглобулинов IgM, IgG и IgA по сравнению с контрольной группой (доноры). Ответом на вакцинотерапию у больных с лечебной целью было снижение содержания IgM после лечения с 2,37±1,49 до 1,23±0,3 по сравнению с больными второй группы (соответственно, 2,19±1,49 и 2,07±0,12 (p<0,05)) и тенденция к снижению содержания IgG и IgA.
У больных второй группы в процессе вакцинотерапии наблюдалось снижение IgA c 2,45±1,29 до 1,67±1,24 и тенденция к снижению IgM после 3-й и 4-й вакцинации, однако, оставалось увеличенным содержание IgG. Кроме того, увеличилось количество CD20+ B-клеток, отражающее активацию гуморального компонента иммунного ответа. Содержание ЦИК у этой группы больных снизилось после 2-й вакцинации и имело статистически значимые различия после 3-й и 4-й вакцинации по сравнению с больными, получавших вакцинотерапию с лечебной целью. После 5-й вакцинации и окончания лечения эти показатели практически не различались. Выявленные изменения могут свидетельствовать о снижении содержания антигенного материала в кровотоке больных, которые сочетались со снижением концентрации IgM и IgA. Кроме того, в этот период у больных, получавших вакцину с адъювантной целью, наблюдалась активация Т-клеточного звена иммунной системы, зарегистрированная по увеличению содержания CD4+ и CD8+ Т-лимфоцитов и клеток, экспрессирующих маркеры активации HLA DR, CD38 и CD71.
...Подобные документы
Клиническая картина, течение туберкулеза у больных, его диагностика у ВИЧ-положительных пациентов. Мероприятия для выделения лиц с высоким риском заболевания туберкулёзом на фоне ВИЧ-инфекции. Роль медицинской сестры в лечении больных туберкулезом легких.
реферат [162,1 K], добавлен 26.06.2017Биотерапия - лечение пациентов с онкологическими заболеваниями путем активизации защитных систем организма. Использование в клинической онкологии противоопухолевых вакцин на основе опухолевых клеток. Клиническая оценка эффективности генотерапии.
реферат [29,7 K], добавлен 14.07.2011Общие показания к назначению и методика проведения массажа. Массаж при ревматоидном артрите. Правила поведения после лечебного массажа. Массаж при деформирующих остеоартрозах: показания; методика. Основные методические указания при проведении массажа.
реферат [17,8 K], добавлен 08.11.2009Клиническое течение туберкулеза при ВИЧ-инфицировании. Лечение больных туберкулезом в сочетании с вирусом иммунодефицита человека антимикобактериальными препаратами в субмаксимальных дозах. Особенности сестринского ухода при лечении больных туберкулезом.
реферат [445,9 K], добавлен 25.03.2017Диета для восстановления здоровья у больных раком. Категории пищевых продуктов с точки зрения вреда и пользы. Методы выведения токсинов из организма. Набор продуктов, применяемый при лечении почти всех разновидностей злокачественных новообразований.
презентация [6,9 M], добавлен 25.02.2017Классификация противоопухолевых средств. Краткая характеристика препаратов. Обзор современных противоопухолевых средств. Клиническое значение препарата "Темодал" при лечении меланомы кожи. Классификация и симптоматология анемии злокачественного процесса.
курсовая работа [68,9 K], добавлен 17.12.2009Анатомические и физиологические свойства брюшины. Этиология, патогенез, клиническая классификация и диагностика перитонита, сущность основных лечебных мероприятий. Брюшной диализ в комплексном лечении общего перитонита, методы дезинтоксикации больных.
курсовая работа [121,4 K], добавлен 29.11.2013Методы современной медицинской реабилитации больных. Основные заболевания нервной системы. Показания к реабилитации демиелинизирующих и дегенеративных заболеваний. Оценка эффективности применения нейрореабилитации. Эффект двигательного восстановления.
презентация [2,0 M], добавлен 20.12.2014Область применения костной пластинки при реконструктивных операциях в ортопедии и онкологии. Краевые и тотальные дефекты как показания к костной пластинке. Апробация и оценка костной пластинки в комплексном лечении доброкачественных процессов скелета.
доклад [8,8 K], добавлен 31.03.2011Зависимость между тяжестью состояния и сроком пребывания в стационаре больных, которые были прооперированы по поводу раневого повреждения. Физиологический механизм боли при ранениях. Классификация ран. Физическая реабилитация в комплексном лечении ран.
контрольная работа [1,1 M], добавлен 09.02.2009Анализ заболевания раком легкого: этиология, патогенез, клиническая картина, психологические особенности. Особенности работы онкологического отделения. Результаты анкетирования пациентов и сестринского персонала торакального хирургического отделения.
курсовая работа [114,4 K], добавлен 16.09.2011Основные направления и подходы реабилитации больных с варикозным расширением вен средствами кинетотерапии. Показания и противопоказания к применению кинетотерапии. Оценка изменения состояния здоровья пациентов под влиянием реабилитационной программы.
курсовая работа [1,0 M], добавлен 13.05.2014Реабилитация после инфаркта миокарда как процесс поэтапного восстановления стабильного уровня здоровья и трудоспособности больного. Показания и противопоказания к проведению реабилитации. Основные классы тяжести состояния больных после инфаркта миокарда.
презентация [173,2 K], добавлен 18.12.2014Оценка состояния костно-мышечной системы. Нарушения со стороны опорно-двигательного аппарата. Рентгенологическое исследование больных. Удаление и исследование синовиальной жидкости. Общие показания к госпитализации больных с костно-мышечной патологией.
реферат [16,3 K], добавлен 11.06.2009Физиотерапия больных с хроническим панкреатитом на этапе санаторно-курортного лечения. Исследования и основные критерии оценки эффективности физических методов при заболеваниях поджелудочной железы. Принципы профилактики данных болезней и ее значение.
реферат [508,4 K], добавлен 30.06.2015Раздел физиотерапии, связанный с применением в лечении больных только тех физических методов, эффективность которых доказана в доброкачественных исследованиях. Методология доказательной физиотерапии. Алгоритм применения методов практическими врачами.
реферат [143,1 K], добавлен 23.08.2013Назначение онкологических диспансеров. Организация паллиативной терапии детей с злокачественными образованиями. Проблемы социальной реабилитации онкологических больных. Решение вопросов инвалидности больных раком комиссиями медико-социальной экспертизы.
реферат [29,1 K], добавлен 26.11.2010Структура онкологической службы. Клинические группы онкологических больных. Общие принципы лечения онкологических больных: хирургическое лечение, лучевая терапия, биотерапия. Химиотерапия как важнейший метод лечения при злокачественных опухолях.
реферат [14,0 K], добавлен 04.10.2011Характеристика направлений и методов коррекционно-восстановительной работы по преодолению афазии у больных с последствиями очаговых поражений головного мозга. Применение вспомогательных компьютерных технологий в процессе комплексной реабилитации больных.
дипломная работа [3,1 M], добавлен 30.10.2017Коррекция иммунологической реактивности. Лейкотрансфузии в комплексном лечении больных острыми инфекционными деструкциями легких. Локальная иммунокоррегирующая терапия. Устранение эндотоксикоза. Временная эндобронхиальная окклюзия и ее противопоказания.
реферат [19,3 K], добавлен 28.03.2010
