Структурная реорганизация слуховой коры при височной эпилепсии
Исследование гистофизиологии нейронов и глии, участие апоптоза в развитии феномена гипервозбудимости при эпилепсии. Особенности топохимического распределения конститутивной и индуцибельной NO-синтаз и кальций-связывающих белков в эпилептических очагах.
| Рубрика | Медицина |
| Вид | автореферат |
| Язык | русский |
| Дата добавления | 17.01.2018 |
| Размер файла | 361,3 K |
Отправить свою хорошую работу в базу знаний просто. Используйте форму, расположенную ниже
Студенты, аспиранты, молодые ученые, использующие базу знаний в своей учебе и работе, будут вам очень благодарны.
Размещено на http://www.allbest.ru/
Размещено на http://www.allbest.ru/
Автореферат
диссертации на соискание ученой степени
Структурная реорганизация слуховой коры при височной эпилепсии
03. 00. 25 - гистология, цитология, клеточная биология
доктора медицинских наук
Дудина Юлия Викторовна
Владивосток, 2008
Работа выполнена в ГОУ ВПО «Владивостокском государственном медицинском университете Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»
Научный консультант: доктор медицинских наук, профессор Мотавкин Павел Александрович
Официальные оппоненты:
доктор медицинский наук, профессор Рыжавский Борис Яковлевич
доктор медицинских наук, профессор Елисеева Екатерина Валерьевна
доктор медицинских наук Кириллов Олег Иванович
Ведущая организация: ГОУ ВПО «Ярославская государственная медицинская академия Росздрава»
Защита состоится «_________»______________2008 года в «____» часов на заседании диссертационного совета Д 208.007.01 при ГОУ ВПО «Владивостокский государственный медицинский университет Росздрава» по адресу: 690950, г. Владивосток, пр. Острякова, 2.
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Владивостокского государственного медицинского университета.
Автореферат разослан «____» _________ 2008 года.
Ученый секретарь диссертационного совета, доктор медицинских наук, профессор Рева Г.В.
Общая характеристика работы
Актуальность проблемы. Несмотря на достижения современных нейронаук остается открытым вопрос о патогенезе синдрома гипервозбудимости при эпилептическом поражении головного мозга у человека. Статистика указывает на непрерывный рост заболеваемости эпилепсией и закономерное преобладание парциальных припадков над первично-генерализованными.
Согласно данным Гехт и соавт. (2006) стандартизированная по полу и возрасту взрослого населения распространенность эпилепсии в России составляет 3,39 человек на 1000 населения. Среди выявленных пациентов 82,47% страдают фокальными синдромами эпилепсии (Мухин, Петрухин, 2005; Зенков, 2002; Henshall, 2007). При хирургическом лечении фармакорезистентных форм эпилепсий в 94,6% случаев очаг эпилептиформной активности локализуется в височной доле (Гайкова, 2001).
Механизмы эпилептогенеза в новой коре развиваются в условиях повышенной эффективности глутаматергической трансмиссии пирамидных клеток при снижении ГАМК-ергической активности тормозных интернейронов: корзинчатых клеток, клеток-канделябров и нейроглиеформных клеток (Дудина и др., 2006). Поврежденные («эпилептизированные») пирамидные нейроны генерируют сверхмощное возбуждение, которое реализуется в избыточной выработке глутамата и экстрасинаптической диффузии медиатора. В свою очередь, цитотоксическое действие возбуждающих аминокислот ведет к истощению ГАМК-ергических интернейронов, не способных ингибировать объёмный пул глутаматергической медиации (Dalby, Mody, 2001). В последние годы разработаны эффективные модели для изучения нейрофизиологических основ эпилепсии у человека. Результаты этих исследований свидетельствуют об изменении формы нейронов после генерации эпилептической активности и о разной чувствительности нейрохимических паттернов клеток к эпилептогенным веществам.
Гиперпродукция глутамата и его токсическое влияние на клетки-мишени со стороны патологически расторможенных пирамидных клеток инициируют нейродеструктивные процессы в эпилептическом очаге, которые реализуются посредством образования свободных радикалов, перекисного окисления липидов и индукции NO-синтазы. Чрезвычайно токсичным для нейронов остаются дериваты NO, особенно его недоокисленные продукты и пероксинитриты (Bao, Liu, 2003). Их накопление усиливает цитотоксические эффекты свободных радикалов с непременным развитием некроза и апоптоза нервных клеток, находящихся в зоне эпилептического повреждения. Исследование этих особенностей дает ключ к пониманию важнейших феноменов, ведущих к развитию эпилепсии.
Структурная реорганизация корковых нейронов вследствие перевозбуждения сводится к метаболическим изменениям цитоплазмы и синапсомодификации (Morris et al., 2006). Ранним признаком этого процесса является появление в дендритах включений различной степени плотности. Структурные изменения в фокусе ишемии показывают наличие неспецифических дистрофических и некротических изменений нейронов и синапсов, очаговые выпадения клеток, нейронофагии, разрежение нейропиля и глиоз. При эпилептическом статусе в височной коре крыс постоянно обнаруживается интенсивная реакция зрелых астроцитов с иммунореактивным глиальным кислым фибриллярным белком. Выработка белка является маркером раздраженных клеток, обычно сопровождается активацией трофических факторов, защищающих астроциты и нейроны от перевозбуждения и гибели (Hanbury et al., 2003; Дудина, 2003).
Протективные механизмы коры включают утилизацию глутамата глиальными клетками, индукцию нейрональной формы NO-синтазы, супероксиддисмутазы, нейротрофинов и антиапоптотических ферментов. На уровне отдельных нейронов и синапсов эти механизмы реализуются через локальную регуляцию гемодинамики, которую опосредуют нейровазальные мессенджеры и нейротрансмиттеры. Баланс нейротоксического и цитопротективного эффектов определяет избирательную устойчивость отдельных хемотипов нейронов к эпилептическому перевозбуждению и окислительному стрессу, что в перспективе может служить основой для разработки направленной фармакологической коррекций этих нарушений.
Диагностика нейронных структур, метаболизирующих NO и свободные радикалы, ведет к выяснению механизмов, возникающих при взаимодействии между синаптической медиацией определенных нейроанатомических паттернов и окислительным стрессом, что, вероятно, позволит вскрыть ключевые связи, которые развиваются в новой коре в период становления эпилептической активности. Перспективность этого направления связана также с выяснением динамики апоптоза корковых нейронов и его патогенетического значения при эпилепсии.
Целью настоящей работы является исследования гистофизиологии слуховой коры при парциальной эпилепсии и установление роли апоптоза и окислительного стресса в механизмах эпилептогенеза.
Задачи исследования:
1. Установить значение структурных изменений внутримозговых сосудов при эпилепсии.
2. Исследовать гистофизиологию нейронов и глии и участие апоптоза в развитии феномена гипервозбудимости при эпилепсии.
3. Исследовать топохимическое распределение конститутивной и индуцибельной NO-синтаз и кальций-связывающих белков в эпилептических очагах.
4. Изучить изменение активности гидролаз (кислой и щелочной фосфатазы) и оксиредуктаз (цитохромоксидазы и сукцинатдегидрогеназы) как возможно наиболее ранних признаков поражения нейронов при развитии эпилептогенеза.
5. Исследовать миелиновые волокна в зонах белого вещества, прилежащих к эпилептическому очагу.
6. На основе собственных и литературных данных обосновать патогенетическое значение структурной реорганизации слуховой коры, апоптоза и оксида азота в развитии височной эпилепсии.
Научная новизна и теоретическое значение работы:
а) впервые на материале височной коры человека проведен комплексный анализ локализации и активности ферментов, запускающих механизмы окислительного стресса и цитотоксичности от эпилептического перевозбуждения;
б) изучено состояние оксиредуктаз и гидролаз в эпилептических нейронах;
в) проведен анализ участия ГАМК/NO-ергических нейронов неокортекса в формировании судорожной реакции;
г) проведена иммуноцитохимическая диагностика кальций-связывающих белков - кальретинина, кальбиндина и парвальбумина - в височной коре крыс с каинат-индуцированной эпилепсией, установлена нейрохимическая гетерогенность ГАМК-ергических корковых нейронов и дана их детальная количественная характеристика;
д) описаны морфологические изменения внутримозговых сосудов в эпилептогенном фокусе и в зоне его проекции, а электронномикроскопическое исследование капилляров и гистохимическое выявление щелочной фосфатазы в микрососудах позволило установить характер поражения микроциркуляторного русла при парциальной эпилепсии у человека и экспериментальных животных;
е) впервые на материале головного мозга человека и крысы описана динамика апоптоза корковых нейронов при судорожном синдроме;
ж) впервые установлено наличие индуцибельной NO-синтазы в пирамидных нейронах эпилептогенного очага у человека при парциальной эпилепсии;
з) исследованы глиальные реакции серого и белого вещества головного мозга человека и крысы в проекции эпилептогенного очага.
Полученные данные позволяют дополнить существующие концепции коркового эпилептогенеза. Выявленные изменения состояния NADPH-диафоразы, индуцибельной NO-синтазы и цитохимических маркеров ГАМК-ергической нейропередачи достаточно объективно свидетельствуют о прямом и неоднозначном влиянии оксида азота на дискретные хемотипы нейронов. Данные по апоптозу поврежденных корковых нейронов у человека являются приоритетными. Результаты работы важны для обоснования закономерностей, лежащих в основе формирования эпилептического статуса и разработки препаратов его фармакологической коррекции.
Практическая ценность работы. Полученные данные о значении апоптоза и окислительного стресса в развитии височной эпилепсии могут быть использованы в различных областях медицинской науки: нейрохимии, психофармакологии, психиатрии, клинической и экспериментальной неврологии и токсикологии. Эти результаты важны для выяснения патогенетических механизмов височной эпилепсии, а также для поиска и оценки фармакологических протекторов направленного действия.
Положения, выносимые на защиту:
1. Структурные изменения при локализации эпилептогенного очага в височной доле происходят в артериях, венах и капиллярах.
2. Эпилептический очаг височной коры формируется не только в результате альтерации NO-ергических интернейронов, но и за счет повреждения пирамидных нейроцитов при индукции в них нитроксидсинтазы. Гибель нервных клеток происходит путем некроза и апоптоза.
3. При синдроме гипервозбудимости отмечается раннее статистически достоверное изменение активности гидролаз (кислой и щелочной фосфатазы) и оксиредуктаз (цитохромоксидазы и сукцинатдегидрогеназы).
4. Характер поражения NO-ергических тормозных интернейронов обусловлен содержанием в них различных кальций-связывающих белков (парвальбумина, кальретинина и кальбиндина).
5. Эпилептическое поражение сопровождается демиелинизацией аксонов белого вещества головного мозга в проекции очага гипервозбудимости.
6. Эпилептический очаг характеризуется выраженным глиозом белого и серого вещества, а астроциты экспрессируют NO-синтазу и NADPH-диафоразу.
Апробация работы. Материалы диссертационной работы доложены и обсуждены на I Тихоокеанской научно-практической конференции с международным участием, г. Владивосток, 2000; Международном симпозиуме «Сознание и наука: взгляд в будущее», г. Владивосток, 2000; конференции Института мозга РАМН «Организация и пластичность коры больших полушарий головного мозга», г. Москва, 2001; 4-ом Международном конгрессе по интегративной антропологии, г. Санкт-Петербург, 2002; Международной конференции, посвященной 150-летию со дня рождения А.С. Догеля, г. Томск, 2002; Международной научной конференции «Медико-биологические и экологические проблемы здоровья человека на Севере», г. Сургут, 2002; IV Тихоокеанской научно-практической конференции с международным участием, г. Владивосток, 2003; конференции: «Механизмы синаптической пластичности. Структурно - функциональные основы организации мозга в норме и патологии», г. Москва, 2004; I Международной научно-практической конференции «Научный потенциал мира 2004», г. Днепропетровск, 2004; Международном конгрессе по клинической патологии, Таиланд, 2005; Первом и Втором Международных Междисциплинарных Конгрессах «Достижения нейронауки для современной медицины и психологии», Судак, Крым, Украина, 2005, 2006; VIII Конгрессе Международной ассоциации морфологов, г. Орёл, 2006; IX Конгрессе Международной ассоциации морфологов, г. Бухара, Узбекистан, 2008.
Публикация результатов работы. По теме диссертации опубликовано: 1 монография и 29 статей в отечественных и международных журналах и сборниках.
Объём и структура диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов, 6 глав собственных исследований, обсуждения, заключения, выводов и списка литературы. Объём диссертации составляет 293 страницы машинописного текста. Иллюстративный материал включает 21 таблицу, 18 рисунков и 211 микрофотографий. Библиографический указатель включает 427 источников. Диссертация изложена на русском языке.
Содержание работы
Материалы и методы исследования. Экспериментальная часть работы состояла в комплексном исследовании состояния нейронов височной коры человека и крыс в условиях эпилептической гипервозбудимости и оксислительного стресса. Для этого нейроны идентифицировали в соответствии с их морфологическим типом, медиаторной и нейрохимической специализацией. Определяли изменения активности NADPH-диафоразы, индуцибельной NO-синтазы (iNOS), кальбиндина, кальретинина, парвальбумина, кислой и щелочной фосфатаз, сукцинатдегидрогеназы и цитохромоксидазы, а затем исследовали апоптотический индекс корковых нейронов в фокусах эпилептического повреждения. Топографию нейронов, полученных на срезах, обработанных гисто- и иммуноцитохимическими методами, сопоставляли с соответствующими рисунками и схемами стереотаксических и цитоархитектонических атласов (Mannen, 1988; Paxinos, Watson, 1998; Светухина, 1962) и цитоархитектонического атласа коры больших полушарий человека, изданного Институтом мозга РАМН. Мякотные волокна исследовали на фронтальных и сагиттальных срезах белого вещества головного мозга человека и крысы в проекции эпилептогенного очага. Сосудистое русло височной коры крысы и человека исследовали с помощью рутинных гистологических методик и гистохимии кислой и щелочной фосфатаз.
Основной раздел работы составили исследования, выполненные на материале 35 нелинейных крысах-самцах массой 250-300 г, содержащихся в стандартных условиях вивария и аутопсийном материале мозга четырех людей, имевших в анамнезе височную форму эпилепсии.
Животных содержали в виварии в соответствии с «Санитарными правилами по устройству, оборудованию и содержанию экспериментально-биологических клиник» (от 6.04.1993г.). Кормили в соответствии с нормами, утвержденными приказом МЗ СССР от 10.03.1996 г. № 163. Все эксперименты выполнены в соответствии правилами бережного обращения с лабораторными животными в соответствии с Приложением 4 к приказу № 755 МЗ СССР. Исследования начинали через 10-15 минут после забоя.
Образцы мозга человека получили при патологоанатомических вскрытиях трупов лиц (3-е мужчин и 1 женщина) в возрасте 63, 37, 43 и 34, лет, имевших в анамнезе височную эпилепсию (протоколы вскрытия № 391 от 17.10.06; № 187 от 21.11.06; № 189 от 23.11.06; № 93 от 02.12.2006).
Мужчина, 63 года. В анамнезе 9 лет назад тяжелая черепно-мозговая травма, в результате которой развилась симптоматическая эпилепсия с височной локализацией эпилептического очага справа (по данным ЭЭГ). Нерегулярно принимал бензонал, без эффекта. Отмечалась склонность к статусному течению заболевания. Смерть больного наступила после приема алкоголя в результате тотального геморрагического панкреонекроза, осложнившегося ферментативным и гнойно-геморрагическим перитонитом.
Мужчина, 37 лет. В течение 12 лет страдал психомоторными пароксизмами на фоне сохранного сознания, отмечались слуховые галлюцинации, явления ранее виденного, слышанного, приступы сопровождались явлениями деперсонализации и дереализации. На ЭЭГ - очаг эпилептифомной активности в височных отведениях слева. На МРТ - артериальная аневризма средней мозговой артерии слева. Смерть больного наступила в результате разрыва аневризмы и кровозлияния в левую гемисферу с прорывом в боковые желудочки.
Мужчина, 43 года. В анамнезе в 1994 году тяжелая черепно-мозговая травма с потерей мозгового вещества, ушиб головного мозга, перелом костей основания черепа. В последствии развилась битемпоральная посттравматическая парциальная эпилепсия с частыми полиморфными припадками. У врача наблюдался, лечение получал (вальпроаты). Смерть больного наступила в результате инфаркта миокарда передне-перегородочного отдела стенки левого желудочка сердца, тромбоза передней нисходящей ветви левой венечной артерии.
Количество наблюдений, выполненных различными методами
|
Серии экспериментов |
Количество наблюдений |
|||||
|
А |
Б |
В |
Г |
Д |
||
|
Контрольные животные |
5 |
|||||
|
Каинатная модель эпилептогенеза |
30 |
|||||
|
Импрегнация по методу Гольджи |
4 |
5 |
3 |
4 |
26 |
|
|
Импрегнация по методу Кахаля |
4 |
5 |
4 |
5 |
25 |
|
|
Окрашивание гематоксилином-эозином |
4 |
5 |
5 |
4 |
21 |
|
|
Окрашивание железным гематоксилином |
4 |
5 |
5 |
4 |
21 |
|
|
Окрашивание по методу Романовского-Гимза |
4 |
5 |
5 |
4 |
21 |
|
|
Окрашивание по методу Ниссля |
4 |
5 |
5 |
5 |
30 |
|
|
Окраска мякотных оболочек по Лизону и Даньелю |
4 |
5 |
2 |
5 |
25 |
|
|
Выявление дегенерирующих мякотных нервных волокон по методу Марки |
4 |
5 |
2 |
5 |
25 |
|
|
Иммуноцитохимия iNOS |
4 |
5 |
4 |
5 |
25 |
|
|
Гистохимия NADPH-d |
4 |
5 |
3 |
5 |
30 |
|
|
Гистохимия кислой фосфатазы |
5 |
25 |
||||
|
Гистохимия щелочной фосфатазы |
4 |
5 |
5 |
5 |
25 |
|
|
Гистохимия сукцинатдегидрогеназы |
5 |
25 |
||||
|
Гистохимия цитохромоксидазы |
5 |
25 |
||||
|
Иммуноцитохимия кальретинина, кальбиндина, парвальбумина |
5 |
25 |
||||
|
Иммуноцитохимическое определение апоптоза (метод TUNEL) |
4 |
5 |
5 |
5 |
30 |
|
|
Окрашивание по методу Браше |
4 |
5 |
5 |
5 |
30 |
|
|
Электронная микроскопия |
4 |
3 |
1 |
1 |
5 |
|
|
Всего |
183 |
556 |
||||
|
739 |
А - материал мозга человека с височной эпилепсией; Б - контроль: височная кора человека; В - контроль - зрительная кора человека; Г - крысы (контроль); Д - крысы с каинат-индуцированной эпилепсией.
Женщина, 34 года. С детства страдала простыми и сложными парциальными эпилептическими припадками со вторичной генерализацией. На ЭЭГ - фокус эпилептиформной активности в правой височной доле. КТ - каротидно-кавернозное соустье справа с аневризматически расширенными сосудами. Наблюдалась в поликлинике по месту жительства с диагнозом: симптоматическая (каротидно-кавернозное соустье справа с аневризматически расширенными сосудами) парциальная эпилепсия с частыми полиморфными припадками с височной локализацией эпилептического очага справа, получала вальпроаты, лечение с незначительным эффектом. В декабре 2006 года больная доставлена в стационар в тяжелом состоянии. Выражена неврологическая симтоматика. Состояние без положительной динамики. Констатирована биологическая смерть. На патологоанатомическом вскрытии обнаружено субарахноидально-паренхиматозное кровоизлияние вследствие разрыва аневризмы с образованием внутримозговой гематомы в правой височно-теменной области, размерами 10*7*14 см, с прорывом крови в правый боковой желудочек и дно IV желудочка, осложнившийся отеком и дислокацией головного мозга.
Материал мозга человека (верхняя височная извилина и поперечные височные извилины правого и левого полушарий) исследовали не позднее 3-6 часов после наступления смерти. Для контроля использовали зрительную кору больных эпилепсией и материал мозга 5 человек, погибших в результате дорожно-транспортных происшествий, полученный при судебно-медицинских вскрытиях (височная и зрительная кора). Материал мозга человека исследовали в соответствии с законом РФ о погребении и похоронном деле от 08. 12. 95. Приложение 2. ст. I2; законом РФ о трансплантации органов и (или) тканей человека. 1992; основами законодательства РФ об охране здоровья граждан. 1993; методическими рекомендациями о консервировании трупов и отдельных органов в учебных целях (утверждены МЗ СССР) / Под ред. Г. В. Ковешникова, М.Г. Привеса. МР. Санина и др. М, 1948. - 15 с.; постановлении Совмина СССР N 630 oт 10 авг. 1972 г. (о передаче трупного материала и безродных трупов из лечебных учреждений институтам для учебных и научных целей; приказом МЗ СССР N 318 от 31 марта 1981 г. (о предоставлении права больницам, психоневрологическим интернатам, домам хроников, инвалидов и престарелых передавать трупы, не востребованные в течение 72 часов после смерти, институтам для учебных и научных целей).
Формирование феномена гипервозбудимости. Формирование локальных очагов перевозбуждения корковых нейронов вызывали путем введения раствора каиновой кислоты - селективного агониста одноименных глутаматных рецепторов. Каинат оказывает проконвульсантное действие и одновременно при экзогенном подведении выступает как нейродеструктивный фактор, который потенцирует возникновение феномена цитотоксичности. Избирательное действие каината на глутаматные рецепторы реализуется в формировании стойких очагов эпилептиформной активности, которые на поведенческом уровне проявляются в виде судорог, агрессии, адипсии и афагии.
Каиновую кислоту (Sigma) вводили внутрибрюшинно в дозе 10 мг/кг каждый час до наступления эпилептического статуса. Через 1,5 часа судорожного синдрома, соответствующего статусу, крысам вводили диазепам в дозе 4 мг/кг. Животных умерщвляли через 2,5 часа, на 1, 3, 5, 7 и 21 сутки посредством передозировки эфирного наркоза. Мозг извлекали на стекло и обрабатывали для гистохимических и иммуноцитохимических исследований.
Височная (слуховая) область новой коры у крыс соответствует координатам в положении брегма от -5.3 мм до -6.3 мм. Срезы изготавливали в поперечной и сагиттальной плоскостях, принимая во внимание различную ориентацию исследуемых клеток в трехмерном пространстве коры. Морфологические изменения нейронов в очагах эпилептического повреждения изучали с помощью метода Гольджи и Кахаля. Для уточнения топологии и соматодендритной морфологии клеток, часть срезов височной коры докрашивали толуидиновым синим по методу Ниссля, гематоксилином-эозином, железным гемптоксилином и по методу Романовского-Гимза. Нейроны с препаратов, обработанных красителями, зарисовывали с помощью рисовального аппарата (camera lucida). В некоторых случаях применялась трехмерная реконструкция и компьютерное моделирование окрашенных клеток.
Рутинные гистологические методики. Для подсчета клеток в срезах ткани мозга и распределения их по слоям использовали ряд рутинных гистологических методик: окраска по Нисслю, гематоксилином-эозином, по Романовскому-Гимза, железным гематоксилином Вейгерта и метиловым зеленым по методу Браше.
Импрегнация по методу Гольджи в модификации Бюбенета. В работе использован метод Гольджи в модификации Бюбенета на кусочках ткани мозга. Головной мозг фиксировали 2 сут в 4% растворе параформальдегида. Кусочек, положенный на вату, экспонировали 2 дня в 2.5% растворе бихромата калия при 37°С. Блок обсушивали фильтровальной бумагой, споласкивали 2% раствором азотнокислого серебра и помещали в такой же раствор при температуре 37°С на 2-4 дня. По окончании импрегнации образцы обезвоживали в спиртах возрастающей концентрации и заливали в парафин. На ротационном микротоме готовили серийные фронтальные срезы толщиной 10-50 мкм. Срезы монтировали на предметные стекла и заключали в бальзам.
Импрегнация по методу Кахаля. Материал фиксировали 24 часа в 96° спирте, после чего разрезали его на кусочки толщиной 2,5-3 мм. Их импрегнировали в 1,5% растворе азотнокислого серебра 7 дней при температуре 32°С. Ополаскивали дистиллированной водой 1 мин и восстанавливали 24 часа в смеси: 1,5 г гидрохинона, 5 см3 нейтрального формалина и дистиллированной воды до 100 см3. Ополаскивали в течение 5 мин в дистиллированной воде, быстро обезвоживали в спиртах возрастающей концентрации и заливали в парафин. Готовили серийные фронтальные срезы толщиной 30-50 мкм.
Окраска мякотных оболочек по Лизону и Даньелю. Кусочки мозга фиксировпали в нейтральном формалине 1:9 3 дня, затем промывали в дистиллированной воде, погружали в 50° и 70° спирты по 1 мин. Далее образцы окрашивали в свежефильтрованном насыщенном растворе судана черного в 70° спирте 15 часов в хорошо закрытой чашке, промывали в дистиллированной воде и заключали в глицерин-желатину.
Выявление дегенерирующих мякотных нервных волокон по методу Марки. Кусочки фиксированного мозга клали на вату и помещали в большое количество жидкости Мюллера. Жидкость в первую неделю сменяли каждые 2 дня, затем каждую неделю. Продолжительность обработки составила 3 недели. Затем материал разделяли на пластинки толщиной 1-3 мм, накладывали друг на друга, а между ними прокладывали по несколько слоев фильтровальной бумаги и помещали в широкую склянку с притертой пробкой, наполненную смесью Марки (2 части жидкости Мюллера, 1 часть 1% осмиевой кислоты) на 14 дней. Материал извлекали, промывали водопроводной водой 1-2 дня, затем 3 часа в дистиллированной воде. Кусочки обезвоживали в спиртах возрастающей концентрации, заливали в парафин и готовили серийные фронтальные срезы толщиной 30 мкм.
Гистохимия NADPH-диафоразы. Гистохимическая реакция локализации активности нейрональной NADPH-d (нейрональной NOS) основана на образовании формазана в присутствии экзогенного NADPH (Hope and Vincent, 1989). Мозг разрезали на части толщиной до 5 мм и фиксировали 1 час при температуре 4°С в 4% растворе параформальдегида, приготовленном на 0,1 М Na-фосфатном буфере (рН 7,4), после чего промывали в 15% растворе сахарозы в течение 2 суток с 7-8-кратной сменой раствора. Кусочки замораживали в криостате, где изготавливали срезы толщиной 20-30 мкм, которые монтировали на предметные стекла и высушивали в токе холодного воздуха, подаваемом вентилятором. Высушенные срезы помещали в инкубационную среду и термостатировали 1 час при 37 °С. Состав инкубационной среды был следующим: 50 мМ Трис-буфер, 0,2% Тритон X-100 (Sigma), 0,8 мг/мл в-NADPH (Sigma), 0,4 мг/ мл НСТ; рН 8,0 (Hope, Vincent, 1989). После инкубации срезы 3-х-кратно промывали в дистиллированной воде, обезвоживали в спиртах и заключали в бальзам.
Интенсивность окрашивания нейроцитов соответствует активности выявляемого энзима и позволяет выделить три группы NADPH-d-позитивных клеток с высокой, умеренной и очень низкой активностью фермента.
Метод выявления щелочной фосфатазы по Гомори. Небольшие кусочки ткани фиксировали в 10%-ном нейтральном формалине 10 часов при температуре 4°С. Криостатные срезы толщиной 15-25 мкм, монтировали на предметные стекла, высушивали и инкубировали в течение 2 часов при температуре 37°С в среде следующего состава: 3%-ный натрий--глицерофосфат - 10 мл, 2%-ный веронал-натрий - 10 мл, 2%-ный CaCl2 - 20 мл, 5%-ный сульфат магния - 1 мл, дистиллированная вода - 5 мл (pH 9,4 - для выявления капилляров; рН 7,6 - для выявления фермента в нейронах).
После инкубации срезы промывали в дистиллированной воде, обрабатывали 2%-ным раствором нитрата кобальта. После повторной промывки в дистиллированной воде на срезы наносили 1%-ный раствор сульфида аммония на 20-30 сек. Затем срезы обезвоживали, просветляли в ксилоле и заключали в бальзам по общепринятой методике. Контрольные срезы для фосфатаз инкубировались в среде без в-глицерофосфата.
Метод выявления кислой фосфатазы по Гомори. Небольшие кусочки ткани фиксировали в 10%-ном нейтральном формалине 10 часов при температуре 4°С. Криостатные срезы толщиной 15-25 мкм, монтировали на предметные стекла, высушивали и инкубировали в течение 2 часов при температуре 37°С в среде следующего состава: ацетатного буфера (рН 4,7) - 12 мл, 0,1 М раствор азотнокислого свинца - 10 мл, дистиллированная вода - 74 мл, 3,2 %- ный натрий--глицерофосфат - 4 мл.
Инкубировали 24 часа в термостате при 37єС. Затем промывали в воде, далее 2 минуты в растворе сульфида натрия и снова в воде. Затем срезы обезвоживали, просветляли в ксилоле и заключали в бальзам по общепринятой методике.
Метод выявления сукцинатдегидрогеназы. Сукцинатдегидрогеназа определялась по методу Нахласа (Пирс, 1962) с НСТ при рН - 7,6. Свежезамороженные срезы инкубировались в среде по прописи Пирса. После фиксации в 10% формалине срезы заключались в глицерин-желатину. Синий осадок формазана в виде гранул свидетельствует о наличии фермента, который выявляется в цитоплазме клеток. Контрольные срезы инкубировались в среде, лишенной сукцината, или предварительно нагревались до 100°С в течение 1 минуты для инактивации фермента.
Метод выявления цитохромоксидазы. Цитохромоксидаза определялась по методу Нахласа. Использовались свежезамороженные срезы, инкубированные в парафенилендиамине с НСТ на фосфатном буфере с рН 7,4. Материал фиксировали в 10% нейтральном формалине, после чего заключались в глицерин-желатину. Реакция оценивалась по наличию гранул фиолетового или синего цвета, указывающие на активность фермента. Контрольные срезы предварительно обрабатывались горячей водой.
Иммуноцитохимия индуцибельной NO-синтазы. Локализацию активности iNOS выявляли с использованием поликлональных антител (Sigma) и набора реактивов для иммунопероксидазной реакции (Immuno-detection kit, ICN). Материал фиксировали в течение суток при 4°С в 10% нейтральном формалине. Из залитого в парафин материала готовили срезы толщиной 10 мкм. Депарафинированные срезы промывали в течение 5 минут в трис-HCl-буфере (pH 7,6) и в течение 20 минут обрабатывали смесью 50% этанола и 0,3% перекиси водорода для блокирования неспецифического фона эндогенной пероксидазы.
Срезы височной коры выдерживали в течение 3-4 ч при 4°С в 0,1 М фосфатном буфере (pH 7,4), содержащем 3% нормальную сыворотку козы и 0,25% Тритон Х-100. Затем на срезы наносили поликлональные первичные антитела против iNOS (ICN) в разведении 1:200, инкубировали в течение 48 ч при 4°С, после чего промывали в трех порциях фосфатного буфера по 5 мин в каждой смене раствора. После промывки срезы инкубировали в течение 1 ч с биотинилированными вторичными антителами против Ig кролика, выработанных у козы, в разведении 1:100 (Vector Laboratories), а затем в растворе авидин-пероксидазного комплекса (Vectastain ABC Kit, Vector Laboratories) также в течение 1 ч. Обработку заканчивали выявлением пероксидазы АВС-комплекса с помощью 0,03%-го раствора диаминобензидина и 0,001%-ой перекиси водорода в 50 мМ Трис-HCl-буфере (рН 7,4) в течение 10-20 мин. Затем срезы тщательно отмывали в фосфатном буфере, обезвоживали и заключали в бальзам по общепринятой методике. В качестве контроля из среды исключали первичные антитела, окрашивание клеток отсутствовало.
Иммуноцитохимия кальций-связывающих белков. Типологическую и нейрохимическую гетерогенность корковых нейронов изучали с помощью иммунореактивных кальций-связывающих белков кальретинина, кальбиндина и парвальбумина.
Мозг извлекали на стекло, кору разрезали на кусочки размером 1х0,5 см фиксировали в в течение 10-12 часов при 4С в смеси 2% параформальдегида и 0,2% глутаральдегида. После фиксации образцы промывали в забуференном 30% растворе сахарозы в течение 12-24 часов при 4С. Срезы толщиной 25-40 мкм изготавливали во фронтальной и сагиттальной плоскостях на замораживающем микротоме и помещали в фосфатный буфер. Иммуноцитохимическое окрашивание срезов включает несколько последовательных этапов: преинкубация, обработка в растворе первичных антител, обработка вторичными антителами и постановка иммунопероксидазной реакции.
Для преинкубации свободно плавающие срезы выдерживали в течение 3-4 часов при 4С в 0,1М фосфатном буфере (рН 7,4), содержащем 3% нормальную козью сыворотку (НКС) и 0,25% Тритон Х-100 (Serva).
Обработка первичными антителами. В работе использованы кроличьи поликлональные антисыворотки против кальретинина и кальбиндина и мышиные моноклональные антитела против парвальбумина. Сыворотки растворяли в отдельных порциях 0,1М фосфатного буфера (рН 7,4), содержащего 0,25% Тритона Х-100, 3% НКС и 0,01% азида натрия (Sigma). Срезы инкубировали при 4С, после чего промывали в трех сменах фосфатного буфера по 5 мин в каждой смене раствора.
Обработка вторичными антителами. Срезы инкубировали при комнатной температуре в течение 1 часа в 0,1М фосфатном буфере (рН 7,4), содержащем биотинилированную козью антисыворотку против IgG кролика (Vector Laboratories) в разведении 1:200 и 3% НКС, затем трехкратно промывали в фосфатном буфере.
Для проведения иммунопероксидазной реакции срезы инкубировали в течение 1 часа при комнатной температуре с комплексом авидин-биотинилированная пероксидаза хрена (Vectastain Elite ABC kit, Vector) в разведении 1:100. После инкубации срезы промывали в фосфатном буфере и помещали в среду, содержащую 0,05% раствор 3,3'-тетрагидрохлорида диаминобензидина (Sigma) на 0,1М фосфатном буфере (рН 7,4) и 0,01% перикиси водорода. Окрашивание пероксидазы хрена, как правило, происходит в течение 3-10 минут при комнатной температуре. Затем срезы тщательно отмывали в фосфатном буфере, монтировали на предметные стекла, обезвоживали и заключали в бальзам по общепринятой методике. Позитивная иммуноцитохимическая реакция характеризуется отложением в цитоплазме нейронов мелко- или грубозернистого преципитата коричневого цвета. В контрольных опытах срезы инкубировали в среде без первичных антител, в результате чего окрашивания нейронов и их отростков не наблюдалось.
Оценка апоптоза корковых нейронов: пероксидазный метод TUNEL. Апоптоз изучали с помощью иммуноцитохимического пероксидазного метода TUNEL, основанного на выявлении фрагментированных цепочек ДНК. После фиксации кусочки ткани мозга промывали в течение суток в 0,1М фосфатном буфере с 7 - 8-кратной сменой раствора, затем погружали в 30% раствор сахарозы на 0,1М фосфатном буфере. Срезы мозга толщиной 25 мкм изготавливали на замораживающем микротоме. Для выявления TUNEL-позитивных структур использовали набор реактивов Apoptag Peroxidase In Situ Apoptosis Detection Kit (Chemicon). Для блокады эндогенной пероксидазы на срезы наносили 1% раствор перекиси водорода на 3 минуты, после чего промывали дважды по 5 минут в фосфатном буфере. На срезы наносили 75 мкл выравнивающего буфера и выдерживали не менее 10-15 секунд при комнатной температуре. Далее срезы слегка подсушивали и немедленнонаносили TdT-энзим из расчета 55 мкл/5см2 и инкубировали во влажной камере 1 час при температуре 37єС. Затем на 10 минут погружали в стоп-буфер. Срезы промывали в фосфатном буфере трехкратно по 1 минуте в каждой смене раствора. Срезы снова подсушивали и наносили 65 мкл/5 см2 конъюгат анти-дигоксигенина, после чего инкубировали во влажной кмере течение 30 минут. Срезы промывали в фосфатном буфере 4 раза по 2 минуты при комнатной температуре.
Для выявления продуктов реакции срезы инкубировали в субстрате для выявления пероксидазы (VIP Substrate Kit, Vector Labs, Burlingame, USA), контролируя прцесс развития окраски под микроскопом, срезы промывали в трех сменах фосфатного буфера и монтировали на предметные стекла. Ядра клеток докрашивали метиловым зеленым по методу Браше. Обезвоживали по стандартной методике и заключали в бальзам.
Электронная микроскопия. В качестве дифференциальной диагностики некроза и апоптоза корковых клеток, а также для изучения состояния микроциркуляторного русла применялось электронномикроскопическое исследование височной коры. Кусочки коры размером 0.5Ч0.5 см фиксировали в смеси 2%-го глутаральдегида и 4%-го параформальдегида, приготовленных на 0.1 М какодилатном буфере (рН 7.3) с 5% D-сахарозой. Затем образцы обрабатывали в 1%-ном растворе четырехокиси осмия, разведенном на 0.1 М какодилатном буфере в течение 1ч, обезвоживали в спирте, ацетоне и заливали в Эпон-812.
Срезы готовили на ультратоме LKB-3, контрастировали в 2% спиртовом растворе уранилацетата. Препараты просматривали под трансмиссионным электронным микроскопом JEM-100B при увеличении от 4000 до 50000 и ускоряющем напряжении 80кВ.
Морфометрия и статистическая обработка данных. Для количественной оценки результатов исследования в каждом гистохимическом препарате выбирали срез стандартной толщины. Изображения срезов с малой кривизной поверхности височной коры вводили в компьютер с помощью камеры. Подсчет клеток и измерения площадей производили с помощью компьютера.
Препараты изучали с помощью светового микроскопа «Olimpus», в окуляр которого была вставлена сетка с равновеликими квадратами, позволяющая подсчитать все клетки избранной структуры мозга, прореагировавшими с субстратами инкубационной среды в данном срезе. Содержание позитивно окрашенных нейронов в височной коре человека и крыс определяли как разность между суммой нейронов, окрашенных по Нисслю и суммой нейронов, выявляемых при гисто- и иммуноцитохимическом окрашивании срезов. Визуализацию изображений микропрепаратов, обработанных на NADPH-d, цитохромоксидазу и сукцинатдегидрогеназу, кислую и щелочную фосфатазы получали с помощью видеосистемы, смонтированной на микроденситометре Vickers М-85 и выражали в единицах оптической плотности (ЕОП).
Цифровую обработку изображений проводили с помощью программ Corel Draw graphics suite 13.0 и Microsoft Excel 2003.
Для количественной оценки содержания апоптических клеток использовали показатели апоптического индекса (АИ), который характеризует количество TUNEL-позитивных клеток с морфологическими признаками апоптоза. АИ рассчитывают по формуле (Фильченков, Стойка, 1999):
АИ= количество апоптотических клеток *100 / общее количество клеток
Апоптотический индекс (АИ) определяли как отношение общего числа TUNEL-позитивных ядер (NTUNEL) к количеству клеток, окрашенных толуидиновым синим и имеющих видимое непикнотизированное ядро (NТ) по формуле:
АИ= NTUNEL *100 / NT
Полученные количественные показатели подвергались стандартной статистической обработке на персональном компьютере с помощью пакета прикладных программ Statgraphics 3.0 фирмы Statistical Graphics Corporation (USA). Они включали расчет среднего значения, ошибки средней и квадратичного отклонения. Оценка различий средних значений проводилась с определением t-критерия достоверности по Стьюденту. Разница между средними значениями исследованных показателей принималась достоверной с вероятностью 95% и выше. Вероятность Р < 0,5 считалась достаточной для вывода о существенности различий, полученных в результате проведенных исследований. гистофизиология нейрон гипервозбудимость эпилепсия
Линейные размеры нейронов определяли по наибольшему и наименьшему диаметру (Амунц, 1960) и классифицировали как сверхмалые (5-10/5-10 мкм), малые (11-12/5-10 мкм), средние (13-22,5/7,5-22,5 мкм) и крупные (23-30/7,5-30 мкм).
Диаметр капилляров измеряли с помощью окуляр-микрометра МОБ-1-15 при увеличении объектива х 40 в 10 полях зрения для каждого случая.
Показатель длины капилляров, или относительную плотность капилляров в единице объема вещества мозга, вычисляли по формуле неравномерного распределения капилляров в ткани (Блинков, Моисеев, 1961):
Lо = NoNг/Nв(2+4 (Nв-Nг)/3Nг)
где Lо - суммарная длина капилляров в 1 мм3 ткани, No - количество открытых концов на 1 мм2, Nг - число пересечений горизонтальных линий сетки окуляр-микрометра, Nв - число пересечений вертикальных линий сетки.
Площадь обменной поверхности капилляров в 1 мм3 ткани мозга вычисляли по формуле:
S = р d L
где р = 3,14, d - средний диаметр капилляров, L - длина капилляров в 1 мм3 головного мозга.
Для определения объема крови в капиллярном русле 1 мм3 ткани мозга использовали формулу:
V= р(d2/4) L
где р = 3,14, d - средний диаметр капилляров, L - длина капилляров в 1 мм3 головного мозга.
Количество крови, приходящееся на единицу поверхности капилляра, вычисляли по формуле:
V1= V/ S
где V - объем крови в капиллярном русле 1 мм3 ткани мозга, S - площадь обменной поверхности капилляров в 1 мм3 ткани мозга.
Результаты исследования и их обсуждение. Нами исследован аутопсийный материал мозга людей с височной эпилепсией в анамнезе. Основной симптомокомплекс заболевания проявлялся в виде простых, сложных фокальных и вторично-генерализованных судорожных припадков или их сочетания. Для исследования наиболее ранних реакций головного мозга на эпилептизацию мы использовали каинатную модель экспериментального эпилептогенеза.
Известно, что височная эпилепсия развивается по законам экспериментальной киндлинг-эпилепсии (Годухин, 2005; Зенков, 2002; Карлов, 1990; Spenser, 1998, 2007). Воспроизводимая нами повышенная судорожная готовность у крыс при введении каината является состоянием фармакологического киндлинга, в условиях которого формируется прогрессивно нарастающая и самоподдерживающаяся эпилептиформная активность во многом сходная с развитием эпилепсии у человека (Collingridge, 2003; Semyanov, Kullmann, 2000, 2001). Полученные данные свидетельствуют о патогенетической роли системы возбуждающих аминокислот в формировании повышенной судорожной готовности и цитотоксическом повреждении коры при каинатном киндлинге. Описанные изменения совпадают с повышением активности NADPH-d и экспрессией iNOS в цитоплазме нейронов, капиллярных эндотелиоцитов и астроцитарной глии (Дудина, 2003, 2005; Дудина и др., 2006).
Патологическое (эпилептогенное) действие каината опосредуется возбуждением одноименных рецепторов и воспроизводит картину эпилептиформной активности корковых нейронов. Биофизические свойства рекомбинантных каинатных рецепторов во многом похожи на свойства других подтипов глутаматных рецепторов: они быстро активируются и десенситизируются, имеют сходные проводимость одиночного канала и проницаемость для Са+ (Mayer et al., 1984; Semyanov et al., 2000). Каинатные рецепторы опосредуют возникновение медленных возбуждающих постсинаптических токов (ВПСТ) в синапсах афферентных волокон (Ito, 2001; Iriarte et al., 2006) и в некоторых тормозных интернейронах (Houser, 1991). По всей видимости, функциональное значение каинатных рецепторов связано в основном с модуляцией разрядов клеток-мишеней в условиях их перевозбуждения и/или гиперпродукции медиаторного пула возбуждающих аминокислот.
Последнее обстоятельство находит поддержку в свете фактов о диффузной трансмиссии медиаторов и модуляторной роли пресинаптических каинатных рецепторов (Semyanov, Kullmann, 2001). Подобная локализация рецепторов вызывает дополнительную деполяризацию афферентного входа и усиливает высвобождение глутамата (Scharfman, 2002; Semyanov, Kullmann, 2001). Более того, пресинаптические каинатные рецепторы способны значительно увеличивать высвобождение ГАМК (Семьянов, 2002; Dalby, Mody, 2001). Этот феномен влечет за собой повышение внеклеточной концентрации ГАМК, которая уже вторично ведет к десенситизации тонических ГАМКА-рецепторов на пирамидных нейронах и закономерному снижению эффективности их ГАМК-ергического торможения (Frerking et al., 1999). Таким образом, опосредованное каинатными рецепторами усиление ГАМК-ергической передачи в интернейронах принимает участие в подавлении ГАМК-ергического торможения пирамидных клеток. Очевидно, совокупное действие всех описанных факторов определяет повышенную возбудительную емкость корковых нейронов при запуске индуцированной каинатом эпилептиформной активности с развитием проконвульсантных и эксайтотоксических последствий.
Оценка полученных нами гистологических изменений слуховой коры человека требует исключения возрастных особенностей нервных элементов и возможных посмертных изменений. Данные литературы указывают на редукцию клеток, дегенеративные изменения в нейронах, увеличение глиального индекса и изменения в микроциркуляторном русле головного мозга в процессе старения организма (Шемяков, 2001; Шемяков, Михайлова, 2002; Черток, 1985; Фролькис, 1991). По данным Мотавкина П.А. (1962), редукция клеточных элементов к 60 годам по сравнению с 20 годами составляет 2,5%. Однако, нетрудно заметить, что пациенты с височной эпилепсией, материал мозга которых мы исследовали, в основном попадают в группу первого зрелого возраста (22-44 года). Указаний на наличие у них в анамнезе гипертонической болезни, изменения при которой сходны с таковыми при эпилепсии (Гайкова, 2001) нет. Кроме того, для контроля нами использовался как аутопсийный материал мозга больных височной эпилепсией (зрительная кора), так и материал мозга людей, полученный при судебно-медицинских вскрытиях (височная и зрительная кора). Такой двойной контроль позволил нам отличить и исключить возрастные изменения головного мозга человека и структурную реорганизацию при парциальной эпилепсии.
В изученных контрольных случаях нами отмечены умеренные морфологические изменения. В любом возрасте визулизируются единичные клетки в состоянии хроматолиза и/или гиперхроматоза с изменениями ядерного аппарата. Глиальные узелки встречаются крайне редко. В контрольных случаях атипичные клетки нами не обнаружены. И, наконец, количество измененных клеточных элементов никогда не достигало степени морфологических нарушений, обнаруженных при парциальной эпилепсии.
В своих исследованиях мозга человека мы придерживались сроков забора материала 3-6 часов, что является оптимальным временем для исключения повреждения и посмертной гибели нейронов (Мотавкин, 2003). Установлено, что при комнатной температуре в течение первых 18-24 часов нервные клетки сохраняют ту же структуру, что и непосредственно после смерти, а при хранении трупов в помещении с температурой не выше 10°С аутолитические изменения в нейронах наступают не ранее 36 часов (Мотавкин, 1962). Кроме того, мы считаем, что возможные посмертные изменения при наличии контрольного материала, который извлекался в те же сроки, могут быть исключены.
Изменения сосудистого русла при височной эпилепсии. Одним из ведущих патогенетических звеньев в развитии эпилепсии, по мнению многих авторов, выступает сосудистый фактор (Карлов, 2003; McNamara, 1994; Estrada, De Felipe, 1998; Jacobs et al., 1999; Dalby, Mody, 2001; Briellmann et al., 2002; Chang, Lowenstein, 2003; Kovesdi et al., 2007; Spenser, 1998, 2007). Разбалансировка регуляции кровоснабжения при синдроме гипервозбудимости связана со срывом ауторегуляции сосудистого тонуса (Корочкин, Михайлов, 2000; Janigro, 1999).
Каждый эпилептический приступ сопровождается изменением системной и локальной гемодинамики, что выражается в кратковременном подъеме артериального давления, массивных вегетативных и метаболических расстройствах и ведет к гипоксии и/или аноксии ткани мозга вследствие вазоспазма (Карлов, 2003; Spenser, 1998, 2007).
Нами установлено, что при височной эпилепсии у человека происходит альтерация всех звеньев кровообращения. Отмечено, что в наибольшей степени поражаются артерии в проекции эпилептогенного очага. В артериях, питающих кору, постоянно обнаруживаются явления склероза, утолщение стенок, что ведет к сокращению их просвета иногда до полной облитерации и свидетельствует о выраженном нарушении притока артериальной крови. Избыточная перфузия в первые минуты эпилептического припадка приводит к нарушению проницаемости сосудистой стенки, пропитыванию ее белками и плазмой. Явления склероза в радиальных артериях были обнаружены нами в 38% случаев. Отмечается атония и складчатость стенки артериол. Гиалиноз стенок артериол был найден в 18,7% исследованных нами препаратов.
Изменения в стенках вен принципиально не отличаются от патоморфологии артериального русла слуховой коры при данной патологии. Отмечается утолщение стенки вен, а выраженный фиброз ведет к атонии венозных сосудов с образованием глубоких складок. Часть вен значительно расширена, что свидетельствует в пользу венозного застоя.
Результаты наших исследований подтверждаются клиническими данными. Обнаружено, что в интериктальном периоде у больных эпилепсией, по данным РЭГ отмечается увеличение кровенаполнения мозга со снижением тонуса мозговых сосудов, замедление интракраниального венозного оттока. Как указывают авторы, эти нарушения могут играть роль в патогенезе эпилепсии, вызывая ишемию, нарушения метаболизма, повышая судорожную готовность мозга (Бердичевский, 1989; Евтушенко, 2006; Притыко и др., 1999).
Обращает на себя аномальная штопорообразная извитость сосудов в очаге гипервозбудимости и зоне его проекции, которая вероятно обусловлена повышением перфузионного давления, а затем его резким падением во время припадка (Сергеев и др., 2007; Spenser, 2007) и/или уменьшением объема нервной ткани, вызванной редукцией клеточных элементов.
Патоморфологические изменения мелких сосудов способствуют образованию аневризматических выпячиваний, интрамуральных и околососудистых геморрагий. В просветах сосудов обнаруживаются явления стаза. Достаточно часто мы отмечали диапедезные кровоизлияния, периваскулярный отек и очаги гибели нервной ткани, имеющих вид весьма значительных по величине полостей, которые располагались чаще очагами на фоне относительно сохранной цитоархитектоники височной коры и/или субкортикально. Гибель эндотелиоцитов подтверждается данными, полученными с помощью метода TUNEL и электронной микроскопии.
Сходную морфологическую картину поражения сосудов при эпилепсии описывают О.Н. Гайкова (2001), Б.Н. Бейн и др. (2000), С.К. Евтушенко (2006). Так при исследовании материала, полученного при открытых вмешательствах по поводу очаговой эпилепсии (преимущественно височной) у больных О.Н. Гайкова (2001) обнаружила грубые перестройки сосудистой сети мозга по гипертоническому типу, которые захватывают артерии, вены и капилляры. Кроме того, О.Н. Гайкова в 58,1% случаев отмечает наличие очагов периваскулярного разрежения нервной ткани размером 2-3 мм, которые автор квалифицирует как псевдокистозные образования (Новожилова, Гайкова, 1996, 1997).
...Подобные документы
Патогенез эпилепсии, факторы его развития, клинические особенности. Проявления эпилептических изменений личности. Социальные условия формирования психических нарушений при болезни. Молекулярно-генетические исследования неврологического заболевания.
реферат [31,6 K], добавлен 17.02.2011Клинические проявления эпилепсии. Основные признаки пароксизма. Диагностические критерии эпилепсии. Основные черты психики больных эпилепсией. Основные терапевтические средства лечения эпилепсии. Значение изучения эпилепсии для врача общего профиля.
реферат [47,6 K], добавлен 15.06.2010Характеристика эпилепсии как хронического заболевания головного мозга, её происхождение. Классификация, этиология и патогенез заболевания у лиц различных возрастных групп, принципы терапии эпилепсии. Виды эпилептических припадков, оказание первой помощи.
реферат [38,1 K], добавлен 14.08.2013Причины возникновения, способы проявления и морфологические изменения в организме при эпилепсии. Диагностирование, назначение лечения, тяжесть протекания и исход хронического полиэтиологического заболевания. Классификация эпилептических припадков.
реферат [39,4 K], добавлен 01.12.2010Клиническая картина эпилепсии у мужчин. Образование эпилептогенного очага в мозге вследствие травм или воспалительных поражений мозга. Когнитивные нарушения при эпилепсии. Показатели когнитивной сферы в зависимости от формы эпилепсии и сроков лечения.
доклад [23,3 K], добавлен 07.07.2009Понятие эпилепсии и причины ее возникновения у детей. Образование в головном мозгу скопления нейронов (эпилептического очага), которые находятся в постоянном возбуждении. Механизм возникновения, разновидности, диагностика и лечение детской эпилепсии.
реферат [24,9 K], добавлен 01.12.2013Хроническое заболевание головного мозга. Основные причины эпилепсии у детей. Судорожные, бессудорожные, атонические приступы, детский спазм. Лечение детской эпилепсии. Диета при эпилепсии. Причины возникновения эписиндрома. Основные симптомы эписиндрома.
презентация [132,1 K], добавлен 18.11.2015Идиопатические фокальные эпилепсии младенчества и детства. Семейные (аутосомно-доминантные) фокальные эпилепсии. Классификация антиэпилептических препаратов. Терапия когнитивных нарушений. Эффективность Кеппры в терапии генерализованных эпилепсий.
презентация [2,6 M], добавлен 04.12.2012Этиология эпилепсии, нарушения нормальной структуры нейронной активности, приводящие к припадкам. Психические эквиваленты эпилептического припадка, опасность необратимых изменений головного мозга. Медикаментозная и дегидратационная терапия заболевания.
курсовая работа [225,4 K], добавлен 14.01.2015Частота встречаемости и возраст начала эпилепсии, ее причины. Провокация эпилептического приступа. Выявление проблемы заболеваемости эпилепсией взрослого населения на территории Российской Федерации и нахождение возможных решений данной проблемы.
курсовая работа [1,4 M], добавлен 14.05.2015Признаки эпилептического припадка. Оказание помощи в начале приступа. Основные отличия истерического припадка от эпилептического. Понятие о снохождении или лунатизме. Особенности изменений личности при эпилепсии. Лечение неврологического заболевания.
презентация [1,4 M], добавлен 12.05.2016Международная классификация эпилепсии. Этиология, патоморфология, патогенез и методы исследования. Клиника и дифференциальный диагноз. Принципы лечения эпилепсии. Антиэпилептическое действие фенитоина. Влияние клобазама на бензодиазепиновые рецепторы.
реферат [52,2 K], добавлен 12.12.2013Диагностика и лечение резистентных и идиопатических форм эпилепсии у детей. Течение и прогноз заболевания. Систематика эпилепсии по частоте и ритмичность пароксизмов, времени их возникновения. Синдром Леннокса Гасто, детская и юношеская абсанс эпилепсия.
реферат [20,2 K], добавлен 09.11.2009Диагностика эпилептического синдрома у детей. Основные цели и варианты лечения белезни. Доброкачественные синдромы эпилепсии, методы их диагностики и терапии. Лекарственный мониторинг и выбор препарата. Хирургическое лечение и вагусная стимуляция.
презентация [977,2 K], добавлен 09.12.2013Международная классификация эпилептических припадков и синдромов. Виды приступов: первично-генерализованные и парциальные. Судорожный очаг и готовность. Диагностика и лечение заболевания. Первая помощь при судорожном и/или эпилептическом приступе.
презентация [2,7 M], добавлен 02.02.2015Основные предвестники эпилептических припадков. Судорожный спазм при столбняке. Вирус, выделяемый больными животными со слюной, как основной возбудитель бешенства. Неотложная помощь и госпитализация при эпилепсии. Особенность отравления стрихнином.
реферат [26,5 K], добавлен 12.08.2009Влияние эпилепсии и противосудорожных препаратов на плод. Врожденные пороки развития ребенка. Планирование беременности при эпилепсии. Припадки как факторы риска угрозы прерывания беременности и гипоксии плода. Послеродовый период женщин с эпилепсиями.
реферат [19,1 K], добавлен 25.11.2012Морфология апоптоза - физиологической гибели клеток в живом организме. Структура и функции белков, участвующих в его регуляции. Цитопротекторы - лекарственные средства, защищающие здоровые клетки от цитотоксического действия лекарственных препаратов.
презентация [1,5 M], добавлен 14.03.2017Ознакомление с жалобами пациента и его общим состоянием. Постановление клинического диагноза "Деменция вследствие эпилепсии. Эпилепсия с полиморфными припадками, сумеречным расстройством сознания"; назначение курса лечения и методов профилактики болезни.
история болезни [35,4 K], добавлен 10.01.2012Оценка транскрипционной активности генов синтаз оксида азота в сетчатке крыс разного возраста, оценка возможной связи развития ретинопатии с изменением генерации NO. Изменение генерации оксида азота при старении и развитии связанных с ним заболеваний.
курсовая работа [980,8 K], добавлен 27.06.2013
