Размещено на http://www.allbest.ru/

ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИЕ СПОСОБЫ КОРРЕКЦИИ РЕЗИСТЕНТНОСТИ ОРГАНИЗМА ПРИ ГНОЙНО-ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЯХ (клинико-экспериментальное исследование)

14.00.51 - «Восстановительная медицина, лечебная физкультура и спортивная медицина, курортология и физиотерапия» 14.00.16 - «Патологическая физиология»

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени

доктора медицинских наук

БЕЛОПОЛЬСКИЙ Александр Александрович

МОСКВА 2007

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении дополнительного профессионального образования

«Российская медицинская академия последипломного образования» Росздрава

Научные консультанты доктор медицинских наук, профессор Бобровницкий Игорь Петрович

доктор медицинских наук, член-корреспондент РАМН, профессор Ткаченко Сергей Борисович

Официальные оппоненты

доктор медицинских наук, профессор Радзиевский Сергей Алексеевич

доктор медицинских наук, профессор Лапшин Василий Петрович

Заслуженный деятель науки РФ, доктор медицинских наук, профессор Воложин Александр Ильич

Ведущая организация Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Российский университет дружбы народов»

Защита состоится «____»___________ 2007 г. в ___ часов на заседании диссертационного совета Д 208.060.01 в ФГУ Российском научном центре восстановительной медицины и курортологии Росздрава по адресу: 121069, г. Москва, Борисоглебский пер., д. 9.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГУ Российского научного центра восстановительной медицины и курортологии Росздрава по адресу: 121069, г. Москва, Борисоглебский пер., д. 9.

Автореферат разослан «____» ___________ 2007 г.

Ученый секретарь диссертационного Совета,

доктор биологических наук, профессор В.К. Фролков

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы

Недостаточно высокая эффективность существующих методов и способов профилактики и лечения болезней современного общества, имеющих тенденцию к хронизации, востребовала формирование нового научно-практического направления - восстановительной медицины, стратегической целью которой является восстановление функциональных резервов больного организма путем применения, преимущественно, немедикаментозных методов (Разумов А.Н., Бобровницкий И.П., 1999, 2003, 2006).

Значительный вклад в становление научно-практических основ восстановительной медицины внесли известные отечественные ученые: Анохин П.К., Баевский Р.М., Воложин А.И., Горизонтов П.Д., Дильман В.М., Казначеев С.В., Лисицин Ю.П., Меерсон Ф.З. и др.).

Основными инструментами деятельности специалистов в области восстановительной медицины являются разнообразные физико-химические немедикаментозные способы коррекции адаптивных возможностей организма человека на этапах профилактики и лечения (Миненков А.А., 2004; Орехова Э.М., 2005; Родионова В.А. и соавт., 2006).

Применительно к патофизиологическому подходу оценки субстрата болезни происходит смещение исследований в мир атомарных, квантовых и энергетических нарушений гомеостаза (Ашмарин И.П., 1999; Бурлакова Е.Б., 1999; Гаркави Л.Х., 2004; Зилов В.Г., 2000; Казначеев В.П., 1999; Подколзин А.А., 2002 и др.), поэтому актуальной проблемой продуктивного развития восстановительной медицины является разработка методических подходов к созданию новых низкоэнергетических технологий (Бобровницкий И.П., 2006), лишенных побочных эффектов, а также исследование теоретических (патофизиологических) основ повышения неспецифических механизмов резистентности и реактивности организма, обеспечивающих стойкую адаптацию организма на этапах медицинской реабилитации.

Особое значение имеют методы немедикаментозного лечения при развитии гнойно-воспалительных заболеваний (ГВЗ) и осложнений, вызываемых условно-патогенной микрофлорой, часто устойчивой к антибиотикам (Васина Т.А., 2006), на фоне иммунологической недостаточности (Земсков А.М. и соавт., 2005). Восстановительная медицина располагает разнообразным методическим и аппаратным обеспечением для физиотерапевтических методов лечения различных нозологий, в том числе ГВЗ, с помощью которых исследуются механизмы действия искусственных физических факторов на системы гомеостаза (Балабан И.Э., 1999; Берлиен Х.-П., Мюллер Г.Й. 1997; Блинков И.Л., 1999; Герцен А.В. и соавт., 2002; Готовский Ю.В., Косарева Л.В., 2000; Иванченко В.А., 1997; Илларионов В.Е., 1998; Лапшин В.П., 2005 и др.). Вместе с тем без достаточной аргументации используются дозы и мощности различных физико-химических воздействий, предположительно действующие как терапевтические (Пономаренко Г.Н., 1998; Козлов В.И. и соавт., 1993 и др.). Также нередко отсутствуют результаты экспериментально-клинической апробации предлагаемых методов, остается неясной реакция на подобные воздействия регулирующих систем организма: гуморально-эндокринной регуляции, биохимических и иммунологических систем адаптации, системы крови и др. Во многих работах нет объективной динамической оценки адаптивных реакций организма в процессе физиотерапии.

В связи с вышеизложенным особенно актуальным для прогресса клинических и теоретических основ восстановительной медицины является разработка новых и усовершенствованных методов дозозависимого применения природных, а также искусственных физических факторов; способов немедикаментозной корригирующей терапии в эксперименте и клинике, основанных на комплексной оценке состояния организма: системы крови, биохимической, иммунологической и функциональной адаптации и микробиоценоза, синергидно обеспечивающих ускоренное и полноценное восстановление функциональных резервов больного человека.

Цель исследования

Совершенствование систем диагностики, профилактики и лечения гнойно-воспалительных заболеваний и их осложнений путем патофизиологического обоснования существующих и разработки новых квантово-энергетических подходов к коррекции дисрегуляторных расстройств (гематологического, биохимического и иммунного статуса, присущих инфекционно- воспалительному процессу), используя минимальные по интенсивности низкоэнергетические физические и сверхмалые по концентрации химические воздействия, вызывающие развитие оптимальных саногенных восстановительных реакций организма.

Задачи исследования:

1. Изучить в эксперименте и патогенетически обосновать новые, а также недостаточно исследованные восстановительные технологии, основанные на лечебно-профилактическом применении средств физической коррекции функциональных резервов организма. При этом использованы: экстракорпоральное -облучение крови (ЭКОК), изолированное рентгеновское облучение крови (ИОК), ультрафиолетовое облучение (УФО) крови и ее компонентов, низкоинтенсивное инфракрасное (ИК) лазерное излучение; способы системной коррекции гомеостаза при помощи химических немедикаментозных воздействий: озонированного физиологического раствора, низкомолекулярного иммуномодулятора - хемотаксического пептида (ХП); лимфонаправленного введения в организм различных концентраций антибиотиков.

2. Определить эффективность новых технологий восстановительного лечения при применении немедикаментозной физико-химической терапии на моделях условно-патогенной инфекции у лабораторных животных.

3. Оценить степень результативности методов квантовой гемотерапии у больных с ГВЗ по показателям, отражающим состояние функционального резерва организма, включая особенности его иммунологической реактивности.

4. Патогенетически обосновать механизмы управления фармакологическим эффектом у хирургических больных в условиях проведения квантовой гемоантибиотикотерапии, лимфонаправленного введения антибиотиков и при локальном облучении зоны воспаления ИК-низкоэнергетическим лазером у подопытных животных.

5. Создать на липосомальной основе новый тип противостафилококковой вакцины и определить возможности ее использования в профилактических и лечебных целях при экспериментальном сепсисе, используя минимальные по концентрации количества иммуномодулирующего ХП.

6. Исследовать динамику восстановления функциональных резервов организма больных желчекаменной болезнью, осложненной острым калькулезным холециститом, на различных стадиях стационарного лечения и в раннем послеоперационном периоде, используя сверхмалые по концентрации количества гомеопатического препарата “Chelidonium 6”, обладающего гепато-билиарной тропностью.

7. Патофизиологически обосновать целесообразность и преимущества немедикаментозной терапии гнойно-воспалительных заболеваний и осложнений при помощи низких концентраций химических и минимальных по мощности физических факторов природного или искусственного происхождения. гнойный воспалительный заболевание расстройство

Научная новизна исследований

Впервые на интактных собаках доказано стимулирующее влияние ЭКОК при дозовой нагрузке 6-12 Гр на системы организма, ответственные за регуляцию функциональных резервов биосистемы.

Впервые установлена возможность применения ЭКОК для лечения экспериментальных кожно-мышечных гнойных ран у собак, эффективность которого основана на активизации биохимических систем регенерации, мобилизации активности факторов гуморальной неспецифической противоинфекционной защиты (ФГНЗ) и иммунологической реактивности.

Внедрен новый метод восстановительного лечения острых и хронических форм ГВЗ и их осложнений путем трансфузионной терапии изолированно облученной рентгеновскими лучами донорской крови (ИОК) человека, обеспечивающего: сокращение сроков лечения больных в стационаре; нормализацию нарушенной иммунологической реактивности и неспецифической резистентности; биохимическую адаптацию; регенерацию и оптимизацию фармакокинетических показателей антибиотиков.

Установлен дозозависимый эффект повреждающего действия УФО крови у интактных крыс и саногенный эффект УФО крови или донорской плазмы у людей с латентно протекающими ГВЗ (хронический остеомиелит, гнойный пиелонефрит, гепато-билиарная недостаточность с явлениями механической желтухи).

Впервые исследованы системные физиологические и патологические реакции у интактных крыс после чрескожного воздействия низкоэнергетическими ИК-лазерами при дозовых нагрузках от 5 до 40 мВт путем динамической оценки адаптационных возможностей организма.

На модели септического процесса у лабораторных животных определены время проведения и роль рациональной дозы квантовой терапии ИК-лазером для коррекции нарушений показателей клеточного иммунитета и гуморальных факторов неспецифической противоинфекционной защиты.

Впервые в отечественной и мировой практике разработан и научно обоснован новый метод комбинированного антимикробного лечения - лазероантибиотикотерапия, основанный на способности локально облученных лазером тканей задерживать резорбцию аппликационно нанесенных или введенных антибиотиков, успешно использованный при лечении диабетических трофических нарушений.

Выявлены дозозависимые и временные режимы использования озона, растворенного в физиологическом растворе, на интактных и инфицированных животных по показателям иммунологической и неспецифической антимикробной резистентности. Доказана иммунокорригирующая роль медицинского озона в норме и при экспериментальном сепсисе; его положительное влияние на динамику инфекционного процесса, восстановление функциональных резервов и выживаемость зараженных крыс.

Предложено новое объяснение эффективности лимфонаправленных способов антибиотикотерапии посредством транспорта препарата -гентамицина рециркулирующими лимфоцитами. Экспериментальным путем доказано преимущество лимфотропной терапии перитонита у животных, что позволило внедрить метод эндолимфатической терапии в практику лечения больных ГВЗ органов брюшной полости и рожей нижних конечностей под контролем динамики гуморального иммунитета.

Разработана в условиях эксперимента полифункциональная противостафилококковая вакцина на основе липосом. Установлен новый научный факт протективного профилактического действия ХП в свободном состоянии и в составе липосом на 100% выживаемости мышей при сепсисе. Доказано оптимальное защитное действие данного иммуномодулятора в наименьшей (1 мкг/животное) из апробированных терапевтических доз.

С позиций лечебно-информационных технологий оценивается эффективность рациональной терапии сверхнизкими концентрациями лекарственных средств при помощи динамического контроля состояния электрокожного сопротивления точек акупунктуры меридианов, коррелирующих с соответствующими органами и системами. Показано более раннее (в среднем на 7 суток) восстановление адаптационных реакций организма при сочетанной терапии гомеопатическими концентрациями лекарственного препарата с современными патогенетическими средствами лечения осложненной острым холециститом желчекаменной болезни в процессе консервативного лечения, предоперационной подготовки больных и послеоперационного восстановительного периода.

Профилактическое использование и лечебные эффекты квантовой физико-химической неспецифической терапии основываются на использовании для целей восстановительного лечения больных ГВЗ минимальных по концентрации химических и мощности воздействия физических факторов, способных обеспечить полноценную медицинскую реабилитацию без проявлений побочных реакций и осложнений.

Практическая значимость работы

Исследованы потенциальные возможности ЭКОК в процессе оптимизации лечения кожно-мышечных гнойных ран.

Разработан и внедрен в практическое здравоохранение новый метод гемоантибиотикотерапии с помощью трансфузий облученной рентгеновскими лучами донорской крови для профилактики и восстановительной терапии различных нозологических форм ГВЗ.

Доказано дозозависимое патогенное и саногенное влияние УФО крови в экспериментальных условиях и в процессе медицинской реабилитации больных с механической желтухой, хроническим остеомиелитом и гнойным пиелонефритом, которые следует учитывать при выборе данного вида квантовой терапии.

Разработан и внедрен в клинику новый комбинированный физиотерапевтический метод восстановительной медицины - лазероантибиотикотерапия септических состояний с использованием минимальных доз низкоэнергетических ИК-лазеров.

Доказана в эксперименте и внедрена в клиническую практику новая медицинская технология - озонотерапия перитонита, направленная на ускоренное восстановление физиологических резервов организма больных.

Изучены механизмы пролонгированного действия антибиотиков и роль иммунологической коррекции резистентности организма при квантовой эндолимфатической антибиотикотерапии гнойно-септических больных.

Исследована роль и определены оптимальные дозы нового иммуномодулирующего препарата - ХП в свободном состоянии и в составе липосом при развитии стафилококкового сепсиса.

Разработан алгоритм функциональной электропунктурной диагностики и комплексной терапии желчекаменной болезни, осложненной острым холециститом, с использованием сверхнизких концентраций лекарственного средства, обеспечивающих наступление более ранней (на 5-7 суток) коррекции адаптационных реакций организма и повышающих качество жизни пациентов в реабилитационном периоде.

Установлено рациональное использование в целях достижения максимального клинико-экономического эффекта более низких концентраций немедикаментозных средств химической природы и меньших по интенсивности физиотерапевтических воздействий, способных обеспечить более качественную вторичную медицинскую профилактику и лечение пиогенных инфекций.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Коррекция адаптационных возможностей организма, проводимая в целях вторичной профилактики и медицинской реабилитации больных с гнойно-воспалительными заболеваниями и их осложнениями, может эффективно осуществляться разработанными и внедренными в практическое здравоохранение физиотерапевтическими методами: в-облучением аутокрови, рентгеновским облучением донорской крови, ультрафиолетовым облучением аутокрови или донорской плазмы, локальным облучением тканей ИК-низкоэнергетическим лазером, а также использованием лимфонаправленных методов дробного введения в организм антибиотиков и немедикаментозных средств (медицинского озона, хемотаксического иммуномодулятора, гомеопатических средств).

2. Восстановление функциональных резервов организма путем использования немедикаментозных квантово-опосредованных воздействий, реализуется при помощи системы иммунологической реактивности, комплекса факторов гуморальной неспецифической резистентности организма и биохимических антиоксидантных систем адаптации и регенерации.

3. Для достижения оптимального терапевтического эффекта использованы немедикаментозные физико-химические методы воздействия, в результате применения которых наблюдаются оптимально выраженные ответные саногенетические реакции организма, направленные на оптимизацию механизмов саморегуляции функциональных систем.

4 Лечебное применение сверхмалых концентраций лекарственных средств на основе биорезонансного медикаментозного тестирования точек акупунктуры является объективным доказательством общебиологических закономерностей информационно-энергетического регулирования жизнедеятельности биосистемы в условиях нормы и патологических процессов

Внедрение результатов исследования

Основные положения диссертационного исследования используются в практической и педагогической работе клинических кафедр ГОУ ДПО Российской медицинской академии последипломного образования Росздрава, клиник Городской клинической больницы им. С.П. Боткина (Москва), поликлиники № 88 г. Москвы.

Внедрена методика рентгеновского облучения донорской крови в клинической практике (Методические рекомендации МЗ СССР, М., 1986) для лечения гнойно-воспалительной хирургической патологии; получено два авторских свидетельства на изобретение: «Способ лечения гнойно-септических больных» (1986) и «Способ лечения больных пиелонефритом с гнойно-септическими осложнениями» (1988); опубликованы монографии “Методики комбинированного лечения лазером” (1999), “Неотложная медицинская помощь” (1999) и “Лазероантибиотикотерапия” (2002), предназначенные для информирования медицинской общественности о новых медицинских технологиях.

Апробация работы

Апробация диссертационной работы проведена I Всесоюзном биофизическом съезде (Москва, 1982); на II Всесоюзной конференции “Сорбционные методы детоксикации и иммунокоррекции в хирургии” (Ташкент, 1984); на Всесоюзном симпозиуме “Низкоинтенсивные лазеры в медицине” (Москва-Обнинск, 1991); на IV Всесоюзной конференции “Применение электронно-ионной технологии в народном хозяйстве” (Москва, 1991); на I Всероссийской научно-практической конференции “Озон в биологии и медицине” (Н. Новгород, 1992); на I Московском международном конгрессе хирургов (Москва, 1995); на IV Международной конференции Европейского общества химиотерапевтов (Греция, 1996); на I Российском конгрессе по патофизиологии (Москва, 1996); на II Международной конференции “Современные технологии восстановительной медицины” (Сочи, 1999); на VI, VII и VIII Международных форумах “Новые технологии восстановительной медицины и курортологии” (Турция, 1999 и 2000; Кипр, 2001); на VIII Международном конгрессе общества адаптивной медицины (Москва, 2006), на Научно-практической конференции «Проблемные вопросы медицины критических состояний». - Н.-Новгород, 2006.

Апробация диссертации проведена на совместном заседании кафедры общей патологии и патологической физиологии и кафедры поликлинической хирургии и реабилитации ГОУ ДПО Российской медицинской академии последипломного образования Росздрава 15 февраля 2007 г. (протокол № 2).

По теме диссертации опубликованы 92 печатные научные работы, в том числе методические рекомендации, методическое пособие, 3 монографии, получено 2 авторских свидетельства на изобретение.

Объем и структура диссертации

Диссертация состоит из введения, пяти глав, заключения, выводов, практических рекомендаций и списка литературы. Работа изложена на 317 страницах машинописного текста, иллюстрирована 24 рисунками и 44 таблицами. Библиографический указатель включает 711 источников, из которых 559 работ на русском и 152 на иностранных языках.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материал и методы исследования

Материалом исследования служила кровь животных и человека, отдельные компоненты крови, кровезаменители, лимфа, моча, биологические и патологические жидкости организма, сапрофитная микрофлора человека и лабораторных животных, синтезированные липосомы и их компоненты

Клиническая часть исследований выполнена на 485 пациентах. В экспериментальной части работы были использованы лабораторные животные: собаки (56 особей); крысы белые беспородные половозрелые обоего пола (523 особи); мыши линии СВА половозрелые обоего пола (420 особей).

В опытах in vitro в разделе изучения механизмов изменения биологической активности бензилпенициллина в облученной рентгеновскими лучами крови и кровезаменителей проведено 210 экспериментов.

В процессе выполнения клинико-экспериментальных исследований были использованы современные, а также модифицированные или разработанные нами методы исследования:

- квантовая обработка крови для осуществления гемотерапии с помощью ЭКОК, ИОК, УФО;

- озонирование физиологического раствора для последующей озонотерапии;

- биотехнологические: создание иммунолипосом для вакцинопрофилактики и терапии стафилококковой инфекции;

- гематологические: общеклинический анализ крови с помощью общепринятых методов и на гемоанализаторе AVL 995 (Австрия);

- биохимические: активность ферментов пентозо-фосфатного пути окисления глюкозы в эритроцитах: Г-6-ФДГ в мкМ НАДФН/гНв в 1 мин и транскетолаза в мкМ с-7ф/гНв; содержание нуклеиновых кислот - ДНК и РНК в плазме крови в мг/л; общий белок сыворотки крови в г/л; серомукоидная фракция гликопротеидов крови в мг % в нашей модификации, белковые фракции сыворотки крови в % - иммуно- и электрофоретически; белковые и небелковые SH-группы; активность ацетилхолинэстеразы эритроцитов; интенсивность ПОЛ и активность АОС; активность гормонов (кортизол, альдостерон, инсулин радиоиммунологически; содержание средних молекул в сыворотке, а также активность ЛДГ и КФК стандартными методами;

- иммунологические: активность факторов гуморальной и клеточной неспецифической защиты: лизоцим - турбидиметрическим способом с тест-культурой Micrococcus lysodeikticus штамм 266 S, -лизины - фотоколориметрически с тест-культурой Bacillis subtilis штамм № 83, БАС - нефелометрически с тест культурой E. coli O-111, комплемент (СН⁵⁰) по 50% гемолизу; фагоцитарная активность полинуклеаров периферической крови с тест-микробом S. aureus 209P; оксидантная активность нейтрофилов в тесте восстановления нитросинего тетразолия - НСТ-тест; количество сывороточных иммуноглобулинов классов IgG, IgA и IgM методом диффузии в агар по Mancini; состояние клеточного иммунитета по содержанию Т- и В-лимфоцитов и их субпопуляций методом розеткообразования с эритроцитами барана или мыши; определение активности индуцированного иммунитета в тесте расчета АОК селезенки по методу Ерне; количество R-белков иммунохимическим методом;

- фармакологические: определение биологической активности антибиотиков в жидкостях методом диффузии в агар; количественная оценка включения антибиотика в лимфоциты крови в собственной модификации;

- фармакокинетический: распределение антибиотиков в организме при различных способах парентерального введения;

- микробиологические: идентификация возбудителей, выделенных из патологических жидкостей; моделирование стафилококкового и протейного сепсиса с учетом летальности, количественный учет микроорганизмов из гомогената внутренних органов;

- статистические: методы непараметрической статистики;

- радиологические: метод ЭКОК на установке «Перенос» с расчетом дозиметрии облучения; математический расчет терапевтической дозы рентгеновского облучения донорской крови и других биологических жидкостей;

- цитогенетические (расчет числа хромосомных аберраций клеток костного мозга облученного организма;

- морфологические (гистологическое исследование паренхиматозных органов и их сосудистой сети на окрашенных мазках);

- хирургические: методика артерио-венозного шунтирования для выполнения ЭКОК; моделирование инфицированной кожно-мышечной раны у собак и крыс и планиметрическая оценка скорости ее заживления; метод аспирационного и аспирационно-промывного дренирования раны при остеомиелите; дренирование и катетеризация лимфатических сосудов стопы для осуществления эндолимфатического подведения антибиотиков в организм; оперативные пособия в соответствии с нозологической формой заболевания;

- функциональная органометрия органов и систем (количественное измерение электрокожного сопротивления в БАТ с помощью аппарата “Старт”;

- биорезонансное тестирование in vitro и клиническое применение лекарственных препаратов в сверхнизких концентрациях.

Подробно специальные методы исследования описаны в соответствующих разделах диссертации.

Автор принимал непосредственное участие в планировании и выполнении экспериментальных и клинических иммунологических и микробиологических исследований, определении некоторых биохимических и фармакокинетических констант, динамической оценки функционального резерва больных и их лечения гомеопатическими средствами в условиях хирургического стационара и поликлиники.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

В процессе изучения ЭКОК интактных собак было выявлено, что бета-облучение крови в дозе 6-12 Гр не приводит к развитию лучевого синдрома. Наоборот, спустя 1-3 сут после сеанса облучения содержание лейкоцитов периферической крови возрастает с 9554±1452 в мкл до 15700±1936 и 15318±1846 в мкл, соответственно (Р<0,05), и остается выше нормы до 5-6 сут эксперимента. Аналогично, но в несколько более поздние сроки после ЭКОК (с 3 по 7 неделю опыта) в крови увеличивается содержание эритроцитов: в среднем на 22% (Р<0,05). На протяжении всего эксперимента в крови опытных животных значительно повышено содержание гемоглобина. С 4 сут и до конца исследования статистически значимо увеличивается показатель гематокрита (в среднем на 17%, Р<0,05). В то же время отсутствует существенная динамика изменений показателя СОЭ и серомукоида, что свидетельствует об отсутствии острофазных изменений метаболизма в организме собак с ЭКОК.

При изучении активности ряда факторов гуморальной и клеточной неспецифической резистентности организма животных после ЭКОК установлены следующие закономерности. Активность лизоцима сыворотки крови несколько снижается сразу после облучения крови (с 2,97±0,17 мкг/мл до 2,47±0,21 мкг/мл, Р>0,05) и более значимо спустя сутки (на 38%, Р<0,05). Однако, дальнейшая динамика данного показателя свидетельствует о статистически значимом и стабильном повышении данного показателя к 7-14 суткам опыта на 28% и 23%, соответственно. В последующие сроки активность лизоцима остается в пределах нормы. Еще в большей степени к 7-14 сут после облучения крови повышаются литические свойства в-лизинов крови (на 34% и 57%, соответственно, Р<0,05), оставаясь немного повышенным до конца наблюдения. Об отсутствии деструктивного влияния ионизирующего облучения крови на организм свидетельствует также стабильность комплемента (С^-Н 50 ед), активность которого на протяжении всего периода исследования остается без изменения. Пул сывороточных иммуноглобулинов, определяемых по относительному содержанию электрофоретической фракции г-глобулинов крови, на протяжении опыта также остается без изменений, что свидетельствует о стабильности иммуногенеза. Система белков сыворотки крови в целом (за исключением некоторого прироста б₁-глобулина) на протяжении всего эксперимента не претерпевает существенных изменений, что также подтверждает отсутствие радиотоксического эффекта облучения крови вне организма. Сразу после облучения происходит незначительное снижение % фагов (с 37% до 34%). К концу первой недели опыта наблюдается неуклонный прирост фагоцитирующих нейтрофилов до 46%, а к концу первого месяца - до 57% (Р<0,05). Параллельно в фагоцитах к 7 суткам возрастет количество поглощенных тест-микробов (до 4,4±0,4 кокка на фагоцит, против 3,8±0,5 микроба в исходе) и сохранение этой тенденции до окончания эксперимента (до 5,1±0,7 кокка; Р<0,05). Результаты исследования энергетических и репаративных процессов в организме собак после ЭКОК позволили установить, что активность ключевых ферментов пентозофосфатного пути расщепления глюкозы: Г-6-ФДГ и транскетолазы изменяется после облучения крови неравнозначно. Так, активация транскетолазы спустя 1 т 3 сут. опыта возрастает на 70% и 60%, соответственно (Р<0,05) и остается достоверно повышенной на 30% и 46%, соответственно до 6-7 недель эксперимента. Активность Г-6-ФДГ после ЭКОК изменяется фазно с достоверным повышением на 67% к 3 сут. опыта и снижением на 33% к 14 сут. В отдаленные сроки исследования активность этого фермента колеблется в пределах физиологической нормы. Содержание нуклеиновых кислот плазмы крови также возрастает после ЭКОК, но в разной степени: ДНК - к 4 неделе опыта на 78%, Р<0,05, в то время как содержание РНК достоверно увеличивается с 50,7±6,4 мг/л до 78,3±9,0 мг/л непосредственно после облучения (прирост составляет 54%), оставаясь повышенным в среднем на 36% (Р>0,05) до конца опыта. В облученной крови происходит изменение связывающей способности биополимеров, что подтверждается значительным (в 20-30 раз) повышением биологической активности бензилпенициллина с 1 по 7 сутки. Этот феномен в дальнейшем был учтен при разработке метода гемоантибиотикотерапии ГВЗ в клинике.

Таким образом, показано, что радиационное в-облучение крови вне организма интактных собак не вызывает выраженных деструктивных изменений со стороны крови и гуморально-клеточных реакций проявления резистентности организма, наоборот, способствует некоторой активизации ряда показателей адаптации организма.

ЭКОК у собак с экспериментальными кожно-мышечными гнойными ранами показало следующее. В течение первых 7 суток после моделирования раны развивается анемизация животных, при этом число эритроцитов снижается на 16% (Р<0,05). Облучение крови в шунте в дозе 6-8 Гр производили спустя 7 сут.; контролем служили животные с раной без ЭКОК. Из полученных данных следует, что анемия у подопытных собак выражена меньше, чем у животных без облучения крови, так как содержание эритроцитов у собак опытной группы было в среднем на 12% выше, чем у животных контрольной группы. Одновременно в течение первых 7 сут. снижается содержание гемоглобина с 17,2±0,4 г/% в исходе до 15,0±0,5 г/%; Р<0,05). Примечательно, что после ЭКОК восстановление содержания гемоглобина протекает у животных опытной группы быстрее (к 14 сут.) чем в контроле. В процессе развития гнойной раны регистрируется выраженный лейкоцитоз к 3 и 7 суткам (прирост числа лейкоцитов составляет 51% и 40%, соответственно; Р<0,05). У животных опытной группы через 3 сут после облучения крови число лейкоцитов в 3 раза превышает исходный уровень (Р<0,05), в то время как у контрольных собак прирост составляет только 50% (Р<0,05). Спустя 7 сут. после облучения крови существенных различий в содержании лейкоцитов у животных обеих групп не выявляется. Индикатор степени повреждения тканей - СОЭ остро реагирует при данной патологии, возрастая на 29% и 98%, соответственно к 3 и 7 сут. опыта (Р<0,05). Облучение крови способствует более существенной нормализации данного показателя, чем в контрольной группе (Р>0,05).

Динамика факторов гуморальной и клеточной неспецифической защиты при использовании ЭКОК в динамике заживления кожно-мышечной раны в целом характерна для острого воспалительного процесса, однако у опытных собак адаптивные изменения ФГНЗ и клеточной резистентности более выражены. Это проявляется умеренным повышением активности лизоцима, комплемента и в-лизинов (Р>0,05) на фоне стабильного уровня относительного содержания фагоцитирующих полинуклеаров после ЭКОК, что косвенно подтверждает снижение интенсивности воспаления у животных опытной группы. На 7 сут эксперимента в крови значительно увеличивается (с 21,9±3,5% до 83,7±13,3%, Р<0,05) число лимфоцитов, спонтанно образующих «розетки» с эритроцитами барана и являющихся прототипом Т-лимфоцитов человека, однако в динамике наблюдения снижение их относительного содержания в обеих группах животных было однотипным.

Показатели белково-углеводного обмена отражают состояние умеренно выраженной диспротеинемии, характерной для воспалительного процесса как у опытных, так и контрольных животных. Транзиторный иммунодефицит регистрируется в виде снижения относительного содержания г-глобулинов крови с 1 по 7 сутки опыта (с 8,4±1,3% в исходе до 5,9±1,0% и 7,3±1,0%, соответственно; Р>0,05). После облучения крови происходит значительное, но кратковременное увеличение иммуноглобулинов до 11,4±1,9% (Р>0,05). У собак с облучением крови наблюдается ускоренное заживление кожно-мышечной раны (в сроки от 3 до 7 сут. после ЭКОК ее площадь уменьшалась ежедневно в среднем на 3,8-8,1%, в то время как у контрольных животных - лишь на 2,3%). По-видимому, снижение инфицированности гнойной раны, является одной из причин снижения напряженности иммунитета и % г-глобулинов у опытных собак в более отдаленные сроки эксперимента. В пользу данного предположения свидетельствует изменение микробного пейзажа раны после облучения крови. Выявлено существенное снижение количества микробных ассоциаций: со 100% до 15% с тенденцией к выделению монокультур. Об усилении пластических процессов на фоне ЭКОК свидетельствует динамика содержания РНК, ДНК и общих сульфгидрильных групп в плазме крови. Значительное возрастание данных показателей на протяжении всего эксперимента отражает усиление окислительно-восстановительных и репаративных процессов в тканях, влияющих на заживление раны (рис 1)..

Размещено на http://www.allbest.ru/

Результаты, полученные при ЭКОК интактных собак и животных с экспериментальной гнойной раной позволили установить в целом благоприятные последствия радиационного облучения крови вне организма на процессы энергообеспечения, синтетических процессов, иммунологической реактивности и микробиологических аспектов инфекционно-воспалительного процесса. В связи с этим была разработана система квантовой гемотерапии при помощи трансфузии облученной рентгеновскими лучами донорской крови для лечения ряда нозологических форм нозокомиальной патологии. Тестом изменения биологических свойств облучаемой крови явилось определение в ней антимикробной активности бензилпенициллина. Было показано, что по мере облучения рентгеновскими лучами донорской крови наблюдается волнообразное изменение биологических свойств антибиотика, в особенности при интенсивности облучения 1 Гр и 100 Гр. Это позволило рассчитать дозовые нагрузки облучения донорской крови, исходя из объема ампулы 250 мл при ее дилюции в организме реципиента в 10, 20 и 25 раз в зависимости от массы тела и с учетом сохранения высокой активности антибиотика.

Квантовая гемотерапия гнойно-септических заболеваний (перитонита, обширных гнойных ран, хронического остеомиелита) осуществлялась с помощью трансфузии 250 мл изолированно облученной рентгеновскими лучами донорской крови на следующий день после оперативного вмешательства. Больным контрольной группы производили переливание равного объема необлученной крови доноров в те же сроки. Все больные основной группы отмечали субъективное улучшение качества жизни: самочувствия, сна, аппетита и физической активности в среднем на 2-3 сут. раньше, чем в контрольной. Заживление послеоперационной раны у больных основной группы также протекало благоприятнее. Аналогичным образом происходила нормализация температурной кривой. После трансфузии ИОК наблюдается более раннее купирование лейкоцитоза и снижение относительного количества полинуклеарных лейкоцитов к 4-м суткам в среднем с 7,0±2,5% до 1,4±0,2%, что свидетельствует об обратном развитии воспаления. Оценка cостояния естественного гуморального иммунитета, основанная на определении концентрации сывороточных иммуноглобулинов классов IgG, IgA и IgM позволила установить, что наиболее выраженный иммунодефицит по содержанию всех классов иммуноглобулинов наблюдается у больных с перитонитом (таблица 1).

Таблица 1

Динамика сывороточных иммуноглобулинов (г/л) при квантовой гемотерапии у больных перитонитом

В меньшей степени снижение концентрации сывороточных антител регистрируется у больных с обширными гнойными ранами и с хроническим остеомиелитом. Под влиянием трансфузии ИОК иммунодефицит у больных с перитонитом не только купируется, но также происходит значительное (на 44% увеличение концентрации антитоксических антител класса IgG к 7 сут. наблюдения, на 88% - подъем IgA, обеспечивающего иммунную защиту слизистых оболочек и кожи, на 3 сут. наблюдения и на 80% - увеличение содержания IgM, как первой линии защиты организма от микробных поражений. В процессе гемотерапии облученной кровью больных с обширными гнойными ранами и остеомиелитом также по сравнению с исходным уровнем повышается содержание всех классов иммуноглобулинов в крови, но в меньшей степени, чем при перитоните.

Применение ИОК в восстановительном лечении больных с язвенной болезнью желудка и двенадцатиперстной кишки после операции резекции желудка показало, что трансфузия облученной крови, производимая одномоментно с операцией не только предотвращает развитие транзиторного иммунодефицита, наблюдаемого в контрольной группе больных, которым переливали кровезаменители, но, наоборот, стимулирует гуморальный иммунитет, снижая риск возникновения послеоперационных гнойных осложнений. При исследовании базовых показателей клеточного иммунитета: Т- и В-лимфоцитов крови этих больных также выявляется иммунопротективный эффект ИОК. Относительное содержание этих видов иммунокомпетентных клеток в послеоперационном периоде было ближе к норме в опытной, чем в контрольной группе.

Комплексная терапия с использованием переливания ИОК апробирована при лечении 72 больных рецидивирующей формой рожистого воспаления, которые в зависимости от получаемого лечения были распределены на три группы сравнения: I группа - получавшие обычное комплексное лечение, включающее антибиотикотерапию; II группа - получавшие лечение, аналогичное I-й группе и дополнительно трансфузию 250 мл необлученной донорской крови; III группа - получавшие лечение, аналогичное I-й группе и дополнительно трансфузию 250 мл облученной рентгеновскими лучами донорской крови.

Преимущества лечения больных III-й группы, заключается в более ранней (в среднем в 2 раза) и значительной нормализации температурной кривой, гиперемии и отека зоны рожистого воспаления, а также скорости эпителизации булл. Значительный интерес представляет оценка иммунного статуса у данной категории больных, так как основой рецидивирования рожи считается дефект иммунной системы (таблица 2)

Таблица 2

Состояние клеточного иммунитета у больных рожей в зависимости от метода лечения

Показано, что исходное состояние иммунитета характеризуется выраженным дефицитом Т- и В-РОК, а также иммуноглобулинов сыворотки крови (таблица 3).

Таблица 3

Состояние гуморального иммунитета у больных рожей в зависимости от метода лечения

Под влиянием проводимой терапии у больных всех трех групп наблюдается частичное восстановление показателей клеточного иммунитета особенно леченых облученной кровью. В равной степени это относится к показателям уровня сывороточных иммуноглобулинов и анти-О-стрептолизина, которые исходно снижены, а затем частично восстанавливаются в процессе лечения. Установлено, что на протяжении полутора лет последующего наблюдения ни один из обследованных не предъявил жалоб на рецидив заболевания при сохранении на достаточном уровне показателей иммунореактивности. Выявлено статистически значимое увеличение относительного содержания Т-РОК с 33±3% до 55±5% (Р<0,001) спустя 3 месяца после проведенного лечения облученной кровью с сохранением Т-клеточного звена иммунитета в пределах нижней границы нормы (50±4%; Р<0,001) вплоть до 18 месяца наблюдения. Умеренно выраженное повышение относительного содержания В-РОК также сохраняется до конца срока наблюдения. Через 3 и 9 месяцев регистрируется прирост IgG с 7,4±0,5 г/л до 11,2±3,2 г/л и 18,2±0,1 г/л (Р<0,001), соответственно. В сроки от 9 до 18 месяцев мониторинга нормализуется содержание IgA (с 3,6±0,4 г/л в исходе до 4,0±0,1 г/л и 7,5±0,9 г/л; Р<0,001), соответственно. Статистически значимое снижение концентрации IgM с 2,4±0,4 г/л в исходе до нижней границы нормы (0,5±0,1 г/л) отражает отсутствие у обследованных лиц инфекционного процесса.

Таким образом, проведенные клинико-экспериментальные исследования позволили установить высокую эффективность применения метода квантовой гемотерапии для лечения ряда заболеваний гнойно-воспалительной этиологии и профилактики их развития в послеоперационном периоде, патогенетические основы которого базируются на восстановлении иммунологической реактивности и биохимической адаптации организма.

Закономерности воздействия УФО крови на системном уровне в эксперименте. Лечение заболеваний методом УФО крови известно давно, однако в литературе к моменту нашего исследования имелись лишь отдельные сообщения о механизмах данного способа квантовой терапии. В связи с этим нами на 40 половозрелых крысах-самцах линии Вистар исследовали морфо-функциональные показатели после 30 сек УФО крови из расчета 1 мл/кг массы тела в экспериментальной установке, создающей световой поток ультрафиолетового спектра с преимущественной длиной волны л=254 нм. Гистологические исследования, выполненные спустя 40 мин и 3 сут после облучения крови выявили морфологические изменения эритроцитов (анизо- и сфероцитоз), атонию сосудистых стенок легких с повышением их проницаемости, а также структуры некоторых паренхиматозных органов (печени, почек) и миокарда. Характер метаболических изменений в ранние сроки после УФО также указывает на проявление деструктивных процессов при данной мощности облучения (статистически достоверное снижение активности ферментов пентозофосфатного пути окисления глюкозы, снижение количества РНК и ДНК в плазме крови и возрастание содержания общих сульфгидрильных групп за счет SH-белковых групп. Спустя 7 сут после УФО регистрируются разнонаправленные изменения со стороны некоторых факторов клеточной иммунологической резистентности: статистически значимое подавление фагоцитоза и возрастание на 50% количества антителообразующих клеток в селезенке (Р<0,05). В отдаленные сроки наблюдения: спустя 30 и 45 сут после УФО депрессия фагоцитоза сменяется на выраженную стимуляцию (рис 2) как % фагов (с 17% до 67%; Р<0,05), так и их поглотительной способности (с 1,6 до 2,9 кокка на фагоцит; Р<0,05) с последующей нормализацией данного теста к 45 сут наблюдения. В целом, результаты морфо-функциональных исследований указывают на необходимость соблюдения физиологически адекватных режимов воздействия энергии света в ультрафиолетовом спектре излучения.

Применение УФО донорской плазмы крови у больных с механической желтухой. Плазму крови выбирали для УФО, исходя из высокой степени поляризации альбумина, являющегося основным белковым компонентом крови и обеспечивающего при этом дипольный эффект. Облучение крови осуществляли в аппарате собственной конструкции при мощности 1,2 Вт/м² и л=253,7 нм. Поглощение энергии при данном режиме равняется 108-216 Дж/м². Объем облучаемой и переливаемой плазмы крови составляет 80-100 мл из расчета 1-2 мл на кг массы тела. Саногенетический эффект данного воздействия оценивали по следующим лабораторно-клиническим показателям: содержанию холестерина, билирубина, триглицеридов, липопротеидов, активности трансаминаз, щелочной фосфатазы, интенсивности ПОЛ, клиренсу J¹³¹-бромсульфана и гуморальному звену иммунитета до и спустя 7 суток после трансфузии. Динамика сывороточных иммуноглобулинов представлена в таблице 4. Исходно увеличенная в 2,3 раза концентрация IgG после переливания облученной плазмы спускается до верхней границы нормы, что косвенно отражает

Таблица 4

Влияние трансфузии УФО плазмы крови на содержание сывороточных ммуноглобулинов у больных с печеночной недостаточностью (n=11)

обратную зависимость синтеза альбумина и г-глобулинов при печеночной недостаточности или выраженной эндогенной интоксикации. Концентрация других иммуноглобулинов в результате трансфузии не меняется, хотя низкий уровень IgM может быть связан со снижением риска инфекционных осложнений. Параклинические тесты в целом отражают восстановление функциональной активности печени, в особенности возрастание клиренса меченного бромсульфана.

Применение УФО донорской плазмы крови у больных хроническим пиелонефритом. Под влиянием трансфузии УФО плазмы 30 пациентам на 30-40% снижается исходно повышенное содержание лизоцима и комплемента, а подавленная на 20-25% активность в-лизинов возвращается к уровню нормы. Спустя сутки после трансфузии облученной плазмы у всех больных снижается до нормы исходно повышенное содержание IgG (на 65%), IgA (на 60%) и IgM (в 2,4 раза), что, наряду со значительным снижением концентрации средних молекул крови свидетельствует о прекращении инфекционно-метаболической интоксикации организма. Клиническая эффективность данного метода лечения выражается в положительном фармакоэкономическом эффекте, сокращении сроков реабилитации и снижении частоты случаев рецидивирования хронической почечной недостаточности у этих больных.

Применение УФО донорской крови в комплексном лечении больных хроническим остеомиелитом. Использовали аппарат для УФО крови «Изольда» в восстановительной терапии 184 больных хроническим остеомиелитом различной локализации. После 3-5 лечебных процедур содержание IgG и IgM снижается с верхней до нижней границы нормы, а содержание IgА остается на прежнем уровне. Респираторная активность полинуклеаров в НСТ-тесте до начала терапии была в 6 раз выше нормы, значительно снижается к 10-14 суткам, но имеет тенденцию к повторному подъему к концу срока наблюдения. Напряженность фагоцитарной активности остается в динамике лечения на исходно увеличенном уровне, но с некоторым (на 30%) возрастанием исходно сниженного индекса завершенности фагоцитоза. Повышенное до начала терапии относительное содержание В-РОК и Т-лимфоцитов нормализуется уже после 3-5 сеансов УФО. Одновременно оптимизируется соотношение субпопуляций Т-РОК в сторону увеличения содержания Т-хелперов с 32±3% до 44±3% к 21-30 суткам и снижение Т-супрессоров с 23±3% до 17±2% в эти же сроки. Следовательно, курсовое применение УФО аутокрови способствует нормализации иммунологической реактивности у больных с выраженной хронизацией воспалительного процесса. В целом, при соблюдении физиологических режимов использования энергии УФО возможно управление саногенетическим эффектом иммуномодуляции при комплексной терапии острых и хронических нозокомиальных инфекциях.

Дальнейшим развитием теории и практики квантовых методов терапии является внедрение монохроматического низкоинтенсивного лазерного облучения биосубстрата при патологических состояниях.

Влияние чрескожного лазерного облучения на заживление кожной раны у крыс. Опыты проведены на 135 крысах-самцах массой около 200 г. Моделирование раны осуществляли путем иссечения на спине кожного лоскута площадью 300 мм². Однократное лазерное воздействие на раневую поверхность выполнялось низкоэнергетическим ИК-лазером «Скаляр 1/40» в непрерывном режиме (15 сек) спустя 2 суток. Средняя мощность излучения составила 2,5 мВт (3,75х10² Дж), что является, как это было показано в предварительных опытах на интактных животных, физиологически оптимальной дозой воздействия на состояние адаптивных систем организма. Более интенсивное облучение кожи мощностью 20 и 40 мВт оказывало временное подавление активности изученных факторов гуморальной и клеточной антимикробной неспецифической резистентности. Из данных следует, что лазеротерапия раневой поверхности модифицирует защитно-приспособительные реакции организма. У животных опытной групп не только отсутствует депрессия фагоцитоза, но, наоборот, происходит нарастание содержания фагоцитов с 60% до 72% в первые сутки, а их поглотительная способность - с 2,0 до 6,5 кокков на фаг (Р<0,05). После лазероактивации раны существенно снижается количество НСТ-положительных полинуклеаров, вплоть до их отсутствия в крови к 15 суткам эксперимента, в то время как у контрольных крыс их количество составляло 30%. Аналогичные закономерности повышения адаптационных реакций проявляются со стороны факторов гуморальной неспецифической защиты: лизоцима и R-белков.