Характеристика и регуляция кардиального пейсмекерного канала If/HCN, разработка научных подходов к созданию биологических пейсмекеров

Считается, что через I_f канал осуществляется проведение тока ионов K⁺ и Na⁺. Впервые Yu X. et al. (2004) определили внутриклеточный подъем концентрации Ca²⁺, индуцированный гипердеполяризацией, который был блокирован блокаторами I_f тока Cs⁺ и затебрадином, однако до настоящего времени прямое проведение кальция через HCN канал показано не было. Нами был зарегистрирован ток в МЭ типа «один канал» с ионами Са²⁺ в растворе как с единственным носителем тока в изоформе HCN2, которая является доминантной изоформой HCN [Biel M. et al., 2002]. HCN2/I_f кальциевый ток показал небольшую амплитуду и очень низкую вероятность открытия по сравнению с K⁺-Na⁺. Перфузия с цАМФ значительно снизила среднее время его закрытия и увеличила вероятность открытия без изменения амплитуды, а уменьшение активности с селективным блокатором I_f ивабрадином подтвердило факт проведения именно Ca²⁺. В наших экспериментах был также продемонстрирован кальциевый ток через нативные I_f каналы в вентрикулоцитах неонатальных крыс и человеческих предсердных КМЦ. Несмотря на небольшую величину, кальциевый ток через HCN/I_f может иметь функциональное значение, так как было показано, что даже небольшие изменения концентрации Ca²⁺ могут влиять на транскрипцию различных белков [Benitach JP. et al., 2007] и играть патогенетическую роль в развитии некоторых заболеваний, сопровождающихся увеличением плотности тока I_f и HCN, например, при фибрилляции предсердий и сердечной недостаточности [Hoppe UC. et al., 1998; Lai L.P. et al., 1999].

Электрофизиологическая и морфологическая идентификация пейсмекероподобных клеток в эмбриональных стволовых клетках мышей

Эмбриональные стволовые клетки мышей, трансфицированные с помощью плазмид, несущих промотор гена ANP (atrial natriuretic peptide), кодирующего ген EGFP (enhanced green fluorescent protein) под контролем кардиоспецифичного промотора, культивировались в «висящих каплях» до получения так называемых эмбриональных телец (ЭТ). Флюоресценция ПНУП промотора проявлялась на 6+4 сутки (полный «возраст»: 6 суток до формирования эмбрионального тельца и 4 суток после), реже - на 6+3 в виде формирования скоплений клеток с ярким свечением. Через 24 часа после начала свечения все ареалы в ЭТ начинали сокращаться. Двухмерная планиметрическая калькуляция показала, что EGFP-позитивные участки из ЭТ на поздних стадиях развития (от 6+20 суток) составили 18±3,3% всех клеток. На всех стадиях развития ЭТ флюоресценция определялась только в сокращающихся ареалах вследствие кардиальной специфичности человеческого гена ANP.

Для дальнейшего подтверждения кардиальной природы EGFP-экспрессирующих клеток проведено иммунное окрашивание (иммуноблоттинг) ЭТ и отдельных клеток, полученных из ЭСК. Среди EGFP-позитивных клеток 91% были позитивны к антителам против б-актинина. Дополнительное окрашивание антителами, специфичными к кардиальному тропонину I, показало позитивную реакцию к 83% УЗФБ-позитивным клеткам, изолированным из 21-28- суточных ЭТ. Следовательно, иммуноцитохимическое исследование подтвердило кардиоспецифичную экспрессию гена-репортера в EGFP трансфицированных ЭСК.

Для идентификации и характеристики пейсмекерных клеток, полученных из ЭСК в период терминальной дифференцировки (6+>9 сут), проведена регистрация потенциала действия и тока I_f. I_f ток присутствовал в 74% всех EGFP-позитивных клетках со средней плотностью тока 20,4±2,0 пА/пФ при тестовом импульсе - 150 мВ (n=97).

Затем под микроскопом от ЭТ были отделены участки, в которых большая часть клеток флюоресцировала и сокращалась. После энзиматической диссоциации трипсином была изучена морфология клеток. Полученные флюоресцирующие клетки по форме можно разделить на веретенообразные, круглые и тре(много)угольные клетки (рис.6). Все веретенообразные EGFP-экспресссирующие клетки (n=22) обладали фенотипом пейсмекерных клеток. Эти веретенообразные кардиомиоциты энергично сокращались с частотой 173±14 уд/мин (табл.7.), генерировали спонтанный синусонодальный ПД, синхронный с сокращениями (потенциал покоя - 45,5±2,2 мс; медленная диастолическая деполяризация; овершут 19±3 мВ; ПДД₉₀ 111,3±1,7 мс). Все треугольные клетки показывали ПД, схожий с ПД в предсердных клетках, но с более негативным потенциалом покоя (- 68,7±2,1 мВ), более позитивными овершутами (37±1,8 мВ) и более короткой продолжительностью (ПДД₉₀ 48,0±2,1 мс). В соответствии с этими различиями по частоте сокращений и ПД все веретенообразные клетки характеризовались значительно большей плотностью I_f тока (34,5±2,4 пА/пФ при -150 мВ), более ранней активацией (от - 50 до - 60 мВ) и более быстрой кинетикой активации тока (ф 395,3±30,7 мс при - 150 мс) в сравнении с тре-/многоугольными клетками (12,8±0,7 пА/пФ при - 150 мВ; первая активация от -80 до - 90 мВ; ф 681,1±30,3 мс при - 150 мВ; p<0,001). Эти особенности I_f тока и ПД подтверждают пейсмекероподобный фенотип веретенообразных клеток.

Рис. 6 Веретенообразной (слева) и треугольной (справа) формы EGFP-позитивные клетки. Конфокальная фотография (Leica Microsystems, ФРГ)

Нами было показано, что среди КМЦ, полученных из ЭСК и экспрессирующих EGFP, можно выделить сублинии клеток c определенными морфологическим и электрофизиологическими параметрами. Наиболее распространенным типами клеток был тре(много)угольные с электрофизиологическими характеристиками предсердных клеток. Кроме того, идентифицирована сублиния клеток веретенообразной формы с пейсмекероподобным фенотипом. Помимо конфигурации потенциала действия, два вышеуказанных клеточных субтипа сильно различались по величине и кинетике тока I_f. Экспрессия EGFP под контролем кардиоспецифического промотора способствует идентификации ПК, полученных из ЭСК, по морфологическим признакам, что позволяет оптимизировать селекцию пейсмекероподобных клеток для получения биологических пейсмекеров.

Таблица 8

Электрофизиологические параметры веретенообразных и тре(много)угольных клеток

Прим.:** - p<0,01; *** - p<0,001.

Основываясь на свойствах ПД, не было обнаружено EGFP-позитивных клеток с электрофизиологическими свойствами клеток миокарда желудочков сердца.

Влияние факторов дифференцировки эндотелина-1, нейрорегулина-1 и ретиноевой кислоты на УЗФБ-ПНУП-позитивные линии в ЭСК

В ЭСК пейсмекероподобные клетки составляют лишь небольшую часть, и поэтому нами исследовано воздействие некоторых известных факторов дифференцировки ЭТ-1 [Gourdie L.G. et al., 1995], НР-1 [Renschler S., 1999] (НР-1) и РK [Oosmand M.K. et al., 2003] на концентрацию пейсмекероподобных и предсердноподобных клеток. Проведенные исследования позволили получить новые данные о функционировании и регуляции I_f/HCN канала, а также разработать перспективные направления по созданию биологических пейсмекеров. До настоящего времени не сообщалось о факторах, способствующих дифференцировке ЭСК в клетки предсердий, в частности, в клетки центральной проводящей ткани. Для тестирования эффектов эндотелина-1 (ЭТ-1) на сублинии веретенообразных и тре(много)угольных клеток нами проведено культивирование EGFP-экспрессирующих ЭТ от начала платирования в течении 14 суток в присутствии ЭТ-1 в концентрации 10^-7 моль.

При планиметрическом анализе EGFP-позитивных клеток в присутствии ЭТ-1 наблюдались изменения экспрессирующего паттерна флюоресценции в виде увеличения количества малоинтенсивных флюоресцентных областей в эмбриональных тельцах при уменьшении общей площади флюоресценции по сравнению с контролем (15,4±2,2%; n=24; p<0,05). ЭТ-1 существенно увеличил процент веретенообразных клеток (от 18,3±1,7% до 30,3±2,1%; p<0,001) и уменьшил процент тре(много)угольных клеток с 60,3±4,2% до 39,2±3,5%; p<0,001. Исходя из соотношения концентрация/ответ, концентрация эндотелина, способная увеличить долю веретенообразных (пейсмекероподобных клеток) до 50%, составила 1*10^-9. Инкубация веретенообразных и тре(много)угольных клеток в присутствии ЭТ-1 не влияла на ПД и свойства I_f тока, а также на морфологические параметры самих клеток.

Затем ЭТ инкубировали с ЭТ-1 и антагонистами эндотелиновых рецепторов А (BQ123, 10^-6 ммоль) и рецепторов В (BQ788,10^-6 ммоль). Подсчет доли клеток с различными морфологическими характеристиками показал, что оба вещества нивелировали эффекты ЭТ-1 (рис. 7). Таким образом, ЭТ-1 сдвигает дифференцировку EGFP-позитивных КМЦ, полученных из ЭСК, в направлении ПК с эндотелин-рецепторной зависимостью без изменения их электрофизиологических свойств.

Влияние ЭТ-1 на развитие кардиальной проводящей ткани подтверждено иммуноцитохимическим методом и Вестерн Блот анализом ЭТ коннексинами - маркерами проводящей системы в сердце. Экспозиция ЭТ вместе с ЭТ-1 значительно повысила интенсивность окрашивания анти-коннексин-40 - маркером ранней дифференцировки проводящей системы у мышей - в сравнении с контролем. Кроме того, инкубация эмбриональных телец с ЭТ-1 и анти-коннексином-45 - маркером мышиного синусного узла и проводящей системы - усилила концентрацию данного белка, в то время как экспрессия коннексина-43 - маркера рабочего миокарда - осталась без динамики. Эти изменения могут быть ингибированы культивированием ЭТ совместно с ЭТ-1 и антагонистами рецепторов эндотелина А BQ123 или В BQ788. С другой стороны, инкубация с ЭТ-1 и ЭТ-1 с антагонистами эндотелиновых рецепторов А и В не изменяли уровень белков коннексина-43.

Рис. 7 Эффект эндотелина-1 (ЭТ-1) и нейрорегулина-1 (НР-1) на дифференцировку ANP-EGFP-экспрессирующих эмбриональных стволовых клеток. Процент веретенообразных клеток значительно увеличился при инкубации ЭТ с ЭТ-1 в сравнении с контролем. Этот эффект нивелировался экспозицией с антагонистами эндотелиновых рецепторов А BQ123 и В BQ788. НР-1 не оказывал достоверного эффекта на дифференцировку ANP-EGFP-позитивных клеток. Эффект экспозиции комбинации ЭТ-1 и НР-1 был сравним с эффектом ЭТ-1 в отдельности (*- p<0,05)

Для изучения эффектов нейрорегулина-1 (НР-1) на электрофизиологические свойства ANP-EGFP позитивных клеток вещество добавлялось в среду в течение 14 дней с момента платирования ЭТ. В отличие от ЭТ-1, НР-1 практически не оказывал влияния на дифференцировку ANP-EGFP-позитивных клеток (концентрация веретенообразных клеток 15,1±1,6%; треугольных - 57,4±2,7%; p>0,05 в сравнении с контролем). Так же, как и при экспозиции с ЭТ-1, все веретенообразные клетки показывали свойства ПК, в то время как треугольные - предсердных клеток. НР-1 не изменил концентрацию коннексинов-40, -43 и -45 в ЭСК. Культивирование эмбриональных телец в среде, содержащей как ЭТ-1, так и НР-1, привело к схожим изменениям клеточной дифференцировки (веретенообразные клетки 28,6±3,6%; треугольные клетки 37,5%; p>0,05 в сравнении с эндотелином), а уровень протеинов при Вестерн Блот анализе был таким же, как и при культивировании клеток только с ЭТ-1.

Для тестирования время- и дозозависимости кардиальной дифференцировки от концентрации ретиноевой кислоты (РК) ЭТ культивировали при трех различных концентрациях данного вещества (10^-5, 10^-7, 10^-9 моль) в течение 1-5 суток, что соответствует от 6+1 до 6+5 дням «полного» возраста ЭСК и 6-10 (от 6+6 до 6+10 суток) после платирования. Все электрофизиологические исследования проводились на единичных клетках в «возрасте» от 14 до 16 суток.

При культивировании ЭТ-1 в среде с высокой концентрацией РК (10^-5моль) в первые 5 суток после платирования флюоресценция клеток резко снижалась или отсутствовала вовсе. Большинство ЭТ не сокращалось и прекращало развитие. На 6-10 суток происходило снижение степени флюоресценции и сократительной активности клеток в течение 3-4 суток от начала экспозиции РК. РК в концентрациях 10^-7 и 10^-9 не изменяла спонтанной активности ЭТ, независимо от продолжительности инкубации. Однако при экспозиции с РК в данных двух концентрациях в течение 1-5 суток зеленая флюоресцирующая зона значительно увеличилась в сравнении с контролем. Двухмерная планиметрическая калькуляция показала, что ANP-EGFP-позитивная зона при концентрации вещества 10^-9 ммоль составила 25,1±2,5% от ЭТ (n=48, p<0,05 против контроля), при концентрации 10^-7 ммоль - 22,2±2,5% (n=54, p<0,05 против контроля) против 16,1±1,4% в контрольной группе (n=61). Экспозиция c РК на 6-10 день развития при данных концентрациях не привела к достоверным изменениям экспрессии белка EGFP. Независимо от времени инкубации РК, в ANP-EGFP-позитивных клетках не было отмечено достоверных изменений в плотности I_f тока.

У куриц кардиальная проводящая система развивается в тесной ассоциации с формирующимися коронарными артериями, при этом было показано, что ЭТ-1 способен индуцировать дифференцировку нитей Пуркинье [Gourdie R.G. et al., 1995; Schiaffino S., 1997], однако для млекопитающих до последнего времени в развитии кардиальной системы такой устойчивой связи не было найдено. Экспозиция ЭСК с ЭТ-1 привела к увеличению доли веретенообразных клеток с пейсмекероподобными электрофизиологическими характеристиками. Использование блокаторов рецепторов к ЭТ-1 нивелировало данный эффект. Хотя для НР-1 такой связи между дифференцировкой коронарных артерий и проводящей системы в желудочках найдено не было [Carraway K.L. et al., 1995], это вещество, экспрессированное в вентрикулярные эндокардиальные клетки, вызывало формирование эктопической проводящей системы [Renscher S., 2002]. В наших исследованиях нейрорегулин также не оказывал влияния на предсердные и пейсмекероподобные клетки.

Известно, что ЧСС является независимым фактором риска смерти и сердечно-сосудистых событий [Gilman M. et al., 1993; Шальнова С.А. и соавт., 2005]. Ионный канал I_f/HCN является определяющим в автоматической импульсации синоатриального узла и, соответственно, критически важным в регуляции сердечного ритма [DiFrancesco D., 2002]. Наши исследования позволили получить основополагающие сведения о данном канале, что представляется перспективным для развития стратерии модуляции ритма сердца и лучшего понимания механизмов пейсмекерной активности.

Существующие электрокардиостимуляторы (ЭКС) обладают определенными недостатками, такими как отсутствие адаптивности к физической нагрузке, зависимость от заряда батареек и т.п. [Freudenberger RS. et al., 2005]. Проведенные исследования и полученные результаты являются необходимой предпосылкой создания биологических пейсмекеров на основе клеток, вырабатывающих I_f ток, которые будут способны замещать или работать совместно с ЭКС для более надежного и физиологического контроля ритма сердца. Одним из вариантов их создания является использование генетически модифицированных клеток, способных создавать ПД при их трансплантации в сердце [Barbutti A. et al., 2002; Cohen I. et al., 2005].

В МЭ была получена электрофизиологическая характеристика токов кардиоспецифических HCN каналов. Изоформа HCN1 показала самую быструю кинетику активации, далее следовала HCN2, и самой «медленной» изоформой оказалась HCN4. Наибольшим сходством с нативным I_f током обладала изоформа HCN2, что позволяет считать её оптимальным кандидатом для создания данного варианта биологического пейсмекера. Кроме того, было установлено, что изоформа HCN4 ответственна за отрицательный хронотропный эффект при повышении уровня внеклеточного калия.

В отличие от разрозненных и противоречивых литературных данных [Altomare C. et al., 2003; Decher N. et al.,2003], в нашем исследовании было показано модулирующее влияние в-субъединицы калиевых каналов KCNE2 на свойства всех кардиоспецифичных каналов: увеличение плотности тока в изоформах HCN1, HCN2; ускорение кинетики активации всех изоформ; увеличение экспрессии канала на поверхности кардиомиоцитов в изоформах HCN2 и HCN4. в-субъединица KCNE2 дифференцированно влияет на вероятность открытия, доступность, вероятность открытия/закрытия, но во всех изоформах увеличила амплитуду канала.

Известно, что изменения концентрации кальция, а также степень экспрессии генов HCN, могут иметь значение при некоторых заболеваниях, например, при фибрилляции предсердий и сердечной недостаточности [Cerbai E. et al., 1997; Hoppe UC., 1998]. Поэтому полученные нами доказательства тока ионов кальция через HCN2 и нативные крысиный и человеческий I_f каналы при гиперполяризующих потенциалах проливают свет на некоторые патофизиологические процессы, связанные с I_f/HCN током и функционированием пейсмекерных клеток.

Одними из самых перспективных клеток-кандидатов для создания БП являются пейсмекероподобные эмбриональные стволовые клетки [Barbutti A. et al., 2002]. Нами получены ЭСК, экспрессирующие ANP-EGFP и обладающие веретенообразной формой и пейсмекероподобным фенотипом, селекция которых только по морфологическим признакам позволит в будущем избежать дополнительного электрофизиологического тестирования при проведении трансплантации БП.

Таким образом, проведенные исследования позволили получить новые данные о функционировании и регуляции канала I_f/HCN, а также разработать перспективные направления по созданию биологических пейсмекеров.

Выводы

1. Изоформы кардиального тока I_f HCN1, HCN2 и HCN4 при трансгенной экспрессии, по данным микроэлектродных исследований, обладают различной кинетикой активации. Самая высокая скорость активации присуща изоформе HCN1, средняя - HCN2 и низкая - изоформе HCN4. Наибольшим сходством с нативным I_f обладает изоформа HCN2, что позволяет считать её оптимальным кандидатом для создания биологического пейсмекера путем трансфекции клеток-носителей при поражении синоатриального узла.

2. Основным патогенетическим механизмом отрицательного хронотропного эффекта при гиперкалиемических состояниях является увеличение в 2-4 раза амплитуды токов всех изоформ и смещение кривой активации тока в сторону отрицательных значений в изоформах HCN1 и HCN4.

3. в-субъединица калиевых каналов MiRP1 может быть использована для модификации электрофизиологических свойств биологического пейсмекеров. В исследованиях типа «вся клетка» MiRP1 увеличивает плотность тока в HCN2 и HCN4, кинетику активации всех HCN изоформ, экспрессию мембранных белков HCN2 и HCN4, а при одноканальных измерениях дифференцированно действует на вероятность нахождения каналов в открытом/закрытом состояниях, доступность, вероятность открытия и увеличивает амплитуду открытий канала всех изоформ.

4. Одним из патогенетических механизмов предсердного аритмогенеза может быть проведение тока ионов кальция в экспериментальных моделях через канал HCN2 при трансгенной экспрессии в овариальных клетках китайских хомячков, а также через канал I_f нативных крысиных и человеческих кардиомиоцитов при физиологической экстраклеточной концентрации кальция с низкими амплитудой, вероятностью открытия и проводимостью.

5. Из эмбриональных стволовых клеток получены клетки, экспрессирующие зеленый флюоресцирующий белок EGFP (enhanced green fluorescent protein) под транскрипционным контролем кардиоспецифичного промотора гена ANP (atrial natriuretic peptide) по морфологическим признакам веретенообразной формы, обладающие электрофизиологическими характеристиками пейсмекерных клеток, которые могут быть использованы при создании биологических пейсмекеров.

6. Инкубация ANP-EGFP-позитивных клеток с фактором дифференцировки эндотелином-1 направляет их дифференцировку в сторону пейсмекероподобного фенотипа и увеличивает их абсолютное и относительное количество. Нейрорегулин-1 не оказывает действие на дифференцировку предсердных кардиомиоцитов. Ретиноевая кислота способствует дифференцировке эмбриональных стволовых клеток в сторону фенотипа предсердных клеток. Для предупреждения тератогенного действия следует использовать ретиноевую кислоту в концентрации от 10^-7 до 10^-9 моль.

7. Разработаны научные подходы к созданию биологических пейсмекеров на основе изоформы HCN2, обладающей электрофизиологическими свойствами нативного канала I_f, а также ANP-EGFP-позитивных пейсмекероподобных клеток, полученных из эмбриональных стволовых клеток, для их использования при лечении сердечно-сосудистых заболеваний, в частности, синдрома слабости синусового узла.

Практические рекомендации

1. Изоформа HCN2 является оптимальной для конструирования биологических пейсмекеров, как наиболее близкая по своим характеристикам к нативному I_f току.

2. Для изучения некоторых патологических состояний, таких как электролитный дисбаланс, может быть использовано микроэлектродное исследование трансгенно трансфекцицированных изоформ HCN в овариальных клетках китайских хомячков.

3. При создании биологических пейсмекеров необходимо учитывать особенности дифференцированного действия в-субъединицы калиевых каналов MiRP1 на электрофизиологические свойства различных изоформ HCN.

4. Для создания биологических пейсмекеров при поражении синоатриального узла с помощью морфологических критериев возможно идентифицировать пейсмекероподобные клетки в эмбриональных стволовых клетках среди клеток, экспрессирующих EGFP под транскрипционным контролем кардиоспецифичного промотора. Возможно увеличение пула данных клеток in vitro при их инкубации с фактором дифференцировки эндотелином-1.

Список работ по теме диссертациий

1. Загидуллин Н.Ш. Эндотелин модулирует дифференциацию эмбриональных стволовых клеток мышей, экспрессирующих натрийуретический пептид в направлении пейсмейкерного фенотипа / Н.Ш. Загидуллин // Материалы I конференции молодых кардиологов. Москва. 2005. С. 76.

2. Загидуллин Н.Ш. Кардиальный пейсмейкерный канал I_f и способы его модуляции / Н.Ш. Загидуллин // Терапевтический архив. 2006. № 4. С. 2-9.

3. Загидуллин Н.Ш. Перспективы использования I_f блокаторов в лечении заболеваний сердечно-сосудистой системы // Consilium Medicum. 2007. № 9. С. 23-26.

4. в-субъединица KCNE2 различается в модуляции изоформ HCN канала / Н.Ш. Загидуллин, М. Брандт, Л. Мотлох [и др.] // Материалы национального конгресса кардиологов Российской Федерации. Кардиоваскулярная терапия и профилактика. Москва. 2007. С. 34.

5. Загидуллин Н.Ш. Перспективы создания биологических пейсмекеров / Н.Ш. Загидуллин, Ш.З. Загидуллин // Вестник Российской Военно-медицинской академии. 2007. № 11. С. 23-34.

6. Загидуллин Н.Ш. Возможности конструкции биологических водителей ритма сердца при поражении синусового узла / Н.Ш. Загидуллин, Ш.З. Загидуллин // Медицинский вестник Башкортостана. 2008. № 1. С. 34-39.

7. Снижение частоты сердечных сокращений при стабильной стенокардии напряжения: в-адреноблокаторы и I_f-ингибиторы / Н.Ш. Загидуллин, G. Michels, UС. Hoppe, Ш.З. Загидуллин // Клиническая фармакология и терапия. 2008. № 3, Т. 17. С. 1-6.

8. Идентификация пейсмейкерных клеток из эмбриональных стволовых клеток, экспрессирующих предсердный натрийуретический пептид / Н.Ш. Загидуллин, UC. Hoppe, N. Gassanov, F. Er // Кардиология. 2008. № 10. С. 38-44.

9. Прямые доказательства проведения кальция через HCN канал и человеческий нативный I_f канал при физиологических концентрациях ионов кальция / Н.Ш. Загидуллин, Ш.З. Загидуллин, G. Michels, UC. Hoppe. // Кардиоваскулярная терапия и профилактика. 2007. № 4., Т. 4. С. 111.

10. Электрофизиологическая характеристика кардиоспецифических изоформ I_f канала / Н.Ш. Загидуллин, Ш.З. Загидуллин, G. Michels, UC. Hoppe // Кардиоваскулярная терапия и профилактика. 2008. № 7, Т.4. С. 141-142.

11. Частота сердечных сокращений как фактор риска при остром коронарном синдроме / Н.Ш. Загидуллин, Е.О. Травникова, Ш.З. Загидуллин [и др.] // Кардиоваскулярная терапия и профилактика. 2008. № 7, Т. 4. С. 6.

12. Частота сердечных сокращений как фактор риска при остром коронарном синдроме / Е.О. Травникова, Н.Ш. Загидуллин, Ш.З. Загидуллин, Р.Х. Зулкарнеев // Мат. XVII конференции студентов и молодых ученых. Уфа, 2008. С. 34.

13. Электрофизиологическая характеристика кардиоспецифических изоформ I_f канала. Матер. национального конгресса кардиологов Российской Федерации. Москва. / Н.Ш. Загидуллин, Ш.З. Загидуллин, G. Michels, UC. Hoppe // Кардиоваскулярная терапия и профилактика. 2008. № 7, Т. 6. С. 142.

14. Прямые доказательства проведения кальция через HCN канал и человеческий нативный I_f канал при физиологических концентрациях ионов кальция / Н.Ш. Загидуллин, Ш.З. Загидуллин, G. Michels, UC. Hoppe // Материалы национального конгресса кардиологов Российской Федерации (Москва). Кардиоваскулярная терапия и профилактика. 2008. № 7, Т. 6. С. 142.

15. Загидуллин Н.Ш. Перспективы создания биологических пейсмекеров / Н.Ш. Загидуллин, А.Б. Белевитин, В.Н. Цыган // Вестник Российской Военно-медицинской академии. 2008. № 4(24). С. 29-34.

16. Загидуллин Н.Ш. Электрофизиологическая характеристика кардиоспецифических изоформ I_f канала / Н.Ш. Загидуллин, Ш.З. Загидуллин // Казанский медицинский журнал (принята к печати, № 2, 2009).

17. Endothelin induces differentiation of ANP-EGFP expressing embryonic stem cells towards a pacemaker phenotype / N. Gassanov, F. Er, N. Zagidullin, UC. Hoppe // FASEB J. 2004. № 18., Т. 14. С. 1710-2.

18. Endothelin induziert Differenzierung von ANP-EGFP experimierenden embryonalen stammzellen zum Schriftmacherphanotyp / N. Gassanov, F. Er, N.Sh. Zagidullin, UC. Hoppe // Zeitschrift Kardiolidie. 2005. №4. P. 73-74.

19. Retinoid acid-induced effects on atrial and pacemaker cell differentiation and expression of cardiac ion channels / N.Gassanov, F. Er, N.Sh. Zagidullin [et al.] // Clin. Res. Cardiol. 2007. Suppl. 1. P. 23.

20. Direct evidence for calcium-conductance of HCN channels and human native If at physiological calcium concentrations / G. Michels, M.C. Brandt, N.S. Zagidullin [et al.]. Clin. Res. Cardiol. 2007. Suppl. 1. P. 47.

21. Retinoid acid-induced effects on atrial and pacemaker cell differentiation and expression of cardiac ion channels / N. Gassanov, F. Er, N.S. Zagidullin, UC. Hoppe // Differentiation. 2008. № 9, Vol. 86. P. 971-80.

22. Direct evidence for calcium-conductance of HCN channels and human native I_f at physiological calcium concentrations / G. Michels, MC. Brandt, Zagidullin N. [et al.] // Cardiovascular Research. 2008. № 1, Vol. 78. P. 466-75.

Список сокращений

БП - биологические пейсмекеры

ДПД₉₀ - длительность 90% потенциала действия

КМЦ - кардиомиоциты

МЭ - микроэлектродные эксперименты

НР-1 - нейрорегулин-1

ОККХ - овариальные клетки китайских хомячков

ПД - потенциал действия

ПК - пейсмекерные клетки

ПП - потенциал покоя

РК - ретиноевая кислота

ЭСК - эмбриональные стволовые клетки

ЭТ - эмбриональное тельце

ЭТ-1 - эндотелин-1

ANP - atrial natriuretic peptide

EGFP - enhanced green fluorescent protein

HCN - hyperpolarization-activated cyclic nucleotide-gated channel

MiRP1 - MinK-related peptide

Размещено на Allbest.ru