Клиническая значимость ключевых маркеров ангиогенеза, апоптоза и системы активации плазминогена в сыворотке крови и опухоли больных колоректальным раком
Изучение особенностей биологического поведения опухолей. Основные факторы, отягощающие прогноз колоректального рака. Роль маркеров ангиогенеза и апоптоза в противоопухолевой терапии. Корреляция клинико-морфологических характеристик рака толстой кишки.
| Рубрика | Медицина |
| Вид | автореферат |
| Язык | русский |
| Дата добавления | 18.01.2018 |
| Размер файла | 1,8 M |
Отправить свою хорошую работу в базу знаний просто. Используйте форму, расположенную ниже
Студенты, аспиранты, молодые ученые, использующие базу знаний в своей учебе и работе, будут вам очень благодарны.
Размещено на http://allbest.ru
На правах рукописи
Автореферат
диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук
Клиническая значимость ключевых маркеров ангиогенеза, апоптоза и системы активации плазминогена в сыворотке крови и опухоли больных колоректальным раком
14.00.46 клиническая лабораторная диагностика 14.00.14 онкология
Головков Дмитрий Анатольевич
Москва 2008 г.
Работа выполнена на кафедре клинической биохимии и лабораторной диагностики ФПДО «Московский государственный медико-стоматологический университет» Росздрава
Научные консультанты:
член-корреспондент РАМН, профессор Н.Е .Кушлинский доктор медицинских наук В.В. Делекторская
Официальные оппоненты:
доктор медицинских наук Н.Ю. Полонская
доктор медицинских наук М.Н. Обушева
доктор медицинских наук, профессор Ю.А. Барсуков Ведущая организация: Московская медицинская академия им. И.М. Сеченова
Защита диссертации состоится «____»______________2008г. на заседании Диссертационного Совета Д.208.071.04 при Российской медицинской академии последипломного образования по адресу: (123995 Москва, ул. Баррикадная, д. 2/1).
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Российской медицинской академии последипломного образования (125445, г. Москва, ул. Беломорская ,19). Автореферат разослан «____»_____________208г.
Ученый секретарь Диссертационного Совета
доктор медицинских наук, профессор В.Т. Морозова
ВВЕДЕНИЕ
Актуальность проблемы. В последние годы в большинстве стран мира, в том числе и в нашей стране наблюдается рост заболеваемости колоректальным раком (Г.И.Воробьев и соавт., 2005; Hawk Е.Т. et al., 2002; Levin В. et al., 2005).
Ежегодно в мире регистрируется около 1 млн. новых случаев рака прямой и ободочной кишки (3-й по частоте показатель заболеваемости среди онкологических болезней), а умирает почти 500 тыс. человек (4-е место по показателю смертности) (Engstrom P.F., 2000; Parkin D.M. et al., 1999; В.В. Мартынюк, 2000; Н.Н. Симонов и соавт., 2000; Н.Н. Трапезников и соавт., 2000).
По прогнозу ожидается, что в XXI веке в России рак данной локализации займет первое место в структуре онкологической заболеваемости (Н.Н.Симонов и соавт., 1997; Н.А.Яицкий и соавт., 2004; Е.М.Аксель и соавт., 2004). В России ежегодно колоректальным раком заболевают 50 тыс. человек (3-е место у мужчин после рака легких и желудка и 2-е место у женщин после рака молочной железы) при ежегодной смертности, равной 35 тыс.
Метастазы являются основным фактором, отягощающим прогноз колоректального рака. Поэтому, в настоящее время проводится активный поиск дополнительных маркеров, которые предсказывают высокий риск опухолевой прогрессии (В.И. Киселев и соавт., 2005).
В настоящее время бурно развивается направление молекулярной диагностики и оценки прогноза этих опухолей, а исследование особенностей биологического поведения опухоли является в настоящее время одной из наиболее актуальных областей онкологии (А.А. Новик и соавт., 2004; Von Kleist S., 2008). Расширяются возможности иммуногистохимического выявления в клетках колоректального рака и в структурах внеклеточного матрикса особенностей экспрессии молекулярных маркеров, отражающих специфику биологической активности опухоли (В.В. Делекторская и соавт., 2008; Muller W. et al., 1998; Sarris M. et al., 2001; Ahmed F.E. et al., 2005).
Среди опухолеассоциированных протеолитических ферментов ведущую роль играет система активаторов плазминогена, представленная двумя протеазами - тканевым и урокиназным активаторами плазминогена (uРА и tPA), а также металлопротеиназная система, состоящая из 25 представителей (Н.Е.Кушлинский и соавт., 2008).
Ключевую роль в семействе металлопротеиназ играют ММР-2 и ММР-9, функция которых связана с гидролизом коллагена базальных мембран (Е.С. Герштейн и соавт., 2008). uРА и tPA превращают неактивный зимоген плазминоген в плазмин, расщепляющий фибрин и белки внеклеточного матрикса, а также активирующий ММР-2 и ММР-9.
Эти процессы способствуют разрушению базальных мембран и облегчают инвазию опухолевых клеток. При этом важную роль в опухолевой прогрессии играют и их эндогенные ингибиторы (TIMP и PAI), которые могут способствовать протеолитическому действию ферментов (Gershtein E. et al., 2007). ММР, сериновые протеазы (uPA, tPA) не только облегчают опухолевый рост, раковую инвазию и метастазирование, но и могут являться мишенью для противоопухолевой терапии и лечения метастазов (Е.С.Герштейн и соавт., 2007; Mysliwill A.G. et al., 2002; Waas E.T. et al., 2002; Gontero P. et al., 2004).
Основные белки базальных мембран (коллаген IV типа и ламинин) являются не только структурным барьером для метастатического распространения раковых клеток, но и важной функциональной единицей, участвующей в опухолевой прогрессии (Galbavy S. et al., 2002).
При этом деградирующие матрикс протеиназы не только ремоделируют архитектуру внеклеточного матрикса, но и воздействуют на различные пути передачи сигнала в клетке, усиливают ангиогенез и способствует уклонению опухоли от программы апоптоза (Г.И.Абелев и соавт., 2008).
Так, известно, что ключевым проангиогенным фактором является VEGF гликопротеин, стимулирующий пролиферацию эндотелиальных клеток. Этот фактор усиленно продуцируется также клетками ряда новообразований, способствуя неоваскуляризации опухоли и усилению проницаемости сосудов (Gershtem E.S. et al., 2006; Shin J.E. et al., 2007). Апоптоз или его отдельные элементы выполняют важные физиологические функции, при этом преодоление апоптоза является необходимым условием успешного развития опухоли (С.Г.Аббасова и соавт., 2007).
Один из механизмов, регулирующих эти процессы в опухоли, связан с активностью апоптоз специфических белков системы Fas/FasL (Bennett M.W. et al., 2001; O'Connell J. et al. 2000; Zhu Q. et al., 2005; Song E. et al., 2001). Относительно недавно получены первые клинические исследования по неоангиогенезу и Fas-зависимому апоптозу при солидных опухолях, в том числе и колоректальном раке (С.Г.Аббасова и соавт., 2007).
Показано, что повышенный уровень продукции ключевого активатора ангиогенеза VEGF и ингибитора апоптоза растворимого Fas-антигена (sFas) у больных некоторыми злокачественными новообразованиями может свидетельствовать о высоком «метастатическом потенциале» опухоли, что является неблагоприятным прогностическим фактором (А.А.Фильченков и соавт., 1999; С.М.Киселев и соавт., 2003).
Однако эти данные основаны пока на незначительном числе наблюдений. Кроме того, не изучали одновременно факторы ангиогенеза и апоптоза с использованием малоинвазивных биохимических методов исследования в сыворотке крови, что также затрудняет обсуждение представленных в литературе результатов.
Несмотря на то, что накапливается все больше данных о нарушениях нормальной экспрессии и функционирования молекулярных факторов при раке толстой кишки, их влияние на клиническое течение и прогноз заболевания изучено недостаточно. Многие вопросы, касающиеся корреляции клинико-морфологических характеристик опухоли и изменений биологических показателей, происходящих в процессе прогрессирования рака толстой кишки, нуждаются в уточнении. Этим определяется актуальность изучения молекулярных критериев, прогнозирующих агрессивность течения колоректального рака.
Цель работы. Изучение особенностей экспрессии молекулярно-биологических маркеров внеклеточного матрикса, ангиогенеза, апоптоза в опухоли, сыворотке крови больных раком толстой кишки и роли комплекса этих факторов в оценке прогноза заболевания.
Задачи исследования.
1. Изучить биохимические и иммуногистохимические особенности экспрессии ММР-9 в первичных опухолях больных раком толстой кишки и в прилежащей к опухоли непораженной слизистой оболочке.
2. Исследовать особенности экспрессии структурных компонентов базальных мембран (коллагена IV типа) в злокачественных опухолях толстой кишки.
3. Провести сравнительный анализ особенностей экспрессии ферментов внеклеточного матрикса и компонентов базальных мембран и выявить их взаимосвязь с основными клиническими и морфологическими параметрами заболевания.
4. Провести иммуноферментное определение молекулярнобиологических маркеров неоангиогенеза (VEGF) и апоптоза (sFas) в сыворотке крови больных раком толстой кишки и изучить корреляцию биохимических показателей с основными клинико-морфологическими параметрами заболевания.
Провести иммуноферментное определение содержания компонентов системы активации плазминогена (uPA, tPA, PAI-1) в опухоли больных колоректальным раком и изучить корреляцию биохимических показателей с основными клинико-морфологическими характеристиками заболевания.
Определить прогностическую значимость биохимических и иммуногистохимических особенностей экспрессии белковых маркеров у больных раком толстой кишки.
Провести статистическую обработку данных и на основании многофакторного анализа результатов исследования выделить значимые и независимые прогностические показатели при раке толстой кишки.
Научная новизна. Проведен комплексный клинический, морфологический и биохимический анализ современных молекулярно-биологических маркеров у больных раком толстой кишки, таких как протелитические ферменты и компоненты внеклеточного матрикса, факторы неоангиогенеза и апоптоза.
Обнаружена повышенная экспрессия ММР-9 в ткани опухоли больных раком толстой кишки у 48,7% пациентов. При этом, частота выявления высокой экспрессии белка достоверно повышалась до 80% у больных при метастазах в печени, при низкой степени дифференцировки опухоли (80%) и при наличии инвазии опухоли в кровеносных сосудах (82,4%).
У 57,2% больных раком толстой кишки выявлена низкая экспрессия коллагена IV типа в опухоли, причем частота выявления низкой экспрессии белка достоверно повышалась у пациентов с метастазами в печени (85%), при низкой степени дифференцировки опухоли (76%), при выраженной глубине инвазии в стенку кишки (75%), а также при наличии инвазии клеток рака в кровеносные сосуды (86,3%).
Обнаружено что уровень ключевого активатора неоангиогенеза VEGF в сыворотке крови больных раком толстой кишки был достоверно выше по сравнению с контролем.
Причем, достоверно более высокое содержание VEGF выявлено в сыворотке крови больных при местнораспространенной и IV стадии колоректального рака, тогда как концентрация VEGF у больных раком толстой кишки при I и Па стадиях опухоли не отличалась от содержания маркера у практически здоровых людей.
Содержание маркера достоверно повышалось при увеличении глубины инвазии опухоли в стенку кишки и при наличии инвазии опухоли в кровеносных сосудах.
Содержание VEGF при низкой степени дифференцировки колоректального рака было достоверно выше, чем при высокой. Одновременно с увеличением концентрации VEGF в сыворотке крови больных раком толстой кишки обнаружено достоверное повышение в опухоли уровня неблагоприятно высокой экспрессии ММР-9 и одновременно низкая экспрессия коллагена IV типа.
Впервые обнаружено, что sFas выявлялся в 2 раза чаще у больных колоректальным раком по сравнению с контролем, а его содержание в сыворотке крови практически здоровых людей было ниже, чем у больных.
При этом, уровни sFas в сыворотке крови больных раком толстой кишки зависели от стадии заболевания, хотя при I стадии не отличались от содержания маркера у практически здоровых людей. Достоверно выше было содержание sFas при значительной глубине инвазии, при наличии инвазии в кровеносные сосуды, при неблагоприятных уровнях экспрессии белков ММР-9 и коллагена IV типа.
Обнаружено, что содержание uРА и tPA в ткани опухоли больных раком толстой кишки было достоверно выше, чем в неизмененной слизистой. При этом, уровни uРА и tPA в ткани первичной опухоли зависели от ряда клинико-морфологических характеристик опухоли.
Полученные данные свидетельствуют о том, что новый подход к прогнозированию клинического течения колоректального рака основан на использовании комплексного анализа согласованных изменений экспрессии изученных молекулярно-биологических маркеров в опухоли и сыворотке крови больных с целью определения связи данных показателей с инвазивным и метастатическим потенциалом опухоли, а стало быть, и выживаемостью пациентов.
На основании исследования молекулярно-биологических характеристик колоректального рака разработаны критерии, позволяющие идентифицировать случаи с повышенным риском развития отдаленных метастазов.
Впервые при раке толстой кишки изучена корреляция между экспрессией белков базальных мембран, факторов неоангиогенеза, апоптоза, активностью матриксных металлопротеиназ и компонентов системы активации плазминогена. Изучение особенностей экспрессии белковых маркеров в опухоли и сыворотке крови больных колоректальным раком позволило уточнить некоторые патогенетические механизмы прогрессирования опухоли.
Практическая значимость. На основе анализа некоторых молекулярно-биологических характеристик опухоли определены критерии для выявления наиболее прогностически неблагоприятных случаев и предрасположенности, больных колоректальным раком к развитию метастазов.
Так, показатели общей выживаемости больных колоректальным раком при высоком уровне экспрессии ММР-9 в первичной опухоли в 3 раза достоверно ниже, чем при низкой экспрессии белка, а 5летняя безрецидивная выживаемость пациентов ниже в 1,5 раза.
Показатели общей 5-летней выживаемости больных раком толстой кишки зависели от уровня исходной концентрации ключевого активатора неоангиогенеза VEGF в сыворотке крови и при высоких его значениях (от 800 пг/мл и более), они были достоверно ниже, чем при значении VEGF менее 400 пг/мл.
При этом, высокий уровень экспрессии ММР-9 в первичной опухоли больных колоректальным раком был связан с повышенными исходными уровнями VEGF в сыворотке крови. Общая 5-летняя выживаемость больных колоректальным раком при уровнях sFas в сыворотке крови от 10 нг/мл и более была достоверно ниже. Кроме того, обнаружено, что безрецидивная выживаемость больных раком толстой кишки достоверно различалась между больными по пороговому уровню 3 нг/мг белка для иРА, 2 нг/мг белка для tPA и 2 нг/мг белка для PAI-1.
Многофакторный анализ выявил наиболее неблагоприятные сочетания маркеров при оценке общего прогноза рака толстой кишки: ММР9-коллаген IV типа, MMP-9-uPA, MMP-9-PAI-1, коллаген IV типа-PAI-l и при прогнозе отдаленных метастазов MMP-9-sFas.
Таким образом, настоящее исследование представляет практический интерес для оценки послеоперационного прогноза больных раком толстой кишки и выделения групп повышенного риска развития метастазов и рецидивов, требующих дополнительного лечения или более тщательного динамического наблюдения.
Апробация работы. Апробация диссертации проведена на совместной научной конференции с участием сотрудников кафедры клинической биохимии и лабораторной диагностики Московского государственного медико-стоматологического университета, лаборатории клинической биохимии, хирургического отделения проктологии, отдела патологической анатомии опухолей человека НИИ клинической онкологии ГУ Российского онкологического научного центра им. Н.Н.Блохина РАМН 12 июня 2008г.
Публикации. По материалам диссертации опубликовано 19 научных работ, в том числе в изданиях, рекомендуемых ВАК - 7 печатных работ.
Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 177 страницах и состоит из введения, обзора литературы, описания материала и методов исследования, 4 глав результатов собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов и практических рекомендаций. Текст иллюстрирован 58 таблицами и 23 рисунками. Указатель литературы содержит 74 работ отечественных и 186 зарубежных авторов.
Положения, выносимые на защиту:
Наиболее высокие уровни экспрессии ММР-9 выявлены в опухоли у преобладающего большинства больных раком толстой кишки при поздних стадиях заболевания, при низкой степени дифференцировки опухоли, а также при наличии инвазии карциномы в кровеносных сосудах.
При этом, общая 5-летняя выживаемость больных раком толстой кишки при высоком уровне экспрессии ММР-9 достоверно ниже, чем при низкой экспрессии белка.
Низкий уровень экспрессии коллагена IV типа достоверно чаще выявляли в опухолях у больных колоректальным раком при распространенном процессе, при низкой степени дифференцировки опухоли, при выраженной глубине инвазии опухоли в стенку кишки, а также при наличии инвазии опухоли в кровеносных сосудах. Показатели общей 5-летней выживаемости больных с низкой экспрессией коллагена IV типа в опухоли были достоверно ниже, чем при высокой экспрессии маркера.
Исходная концентрация ключевого активатора неоангиогенеза VEGF в сыворотке крови больных раком толстой кишки была достоверно выше по сравнению с практически здоровыми людьми. При этом, уровень маркера достоверно повышался в сыворотке крови больных с увеличением глубины инвазии опухоли в стенку кишки, при прорастании опухоли в кровеносные сосуды, при низкой степени дифференцировки опухоли.
Самые низкие показатели общей 5-летней выживаемости отмечены среди больных раком толстой кишки с высокими уровнями VEGF (от 800 пг/мл и более). При этом, высокий уровень экспрессии ММР-9 в первичной опухоли был связан с повышенными исходными показателями VEGF в сыворотке крови, тогда как при низких исходных значениях VEGF чаще выявляли высокую экспрессию коллагена IV типа в первичной опухоли.
Почти в 2 раза чаще sFas выявляли в сыворотке крови больных колоректальным раком, а его уровни были достоверно выше по сравнению с практически здоровыми людьми, при этом общая 5-летняя выживаемость больных раком толстой кишки при уровнях sFas в сыворотке крови от 10 нг/мл и более была достоверно ниже.
Содержание uРА и tPA в ткани опухоли больных раком толстой кишки было достоверно выше, чем в неизмененной слизистой и зависело от основных клинико-морфологических характеристик заболевания, а именно, распространенности опухолевого процесса, степени дифференцировки опухоли, глубины прорастания в стенку кишки и кровеносные сосуды.
Безрецидивная выживаемость больных колоректальным раком достоверно различалась по порогу уровню 3 нг/мг белка для uРА, 2 нг/мг белка для tPA и 2 нг/мг белка для PAI-1.
Выявлены наиболее неблагоприятные сочетания маркеров при оценке общего прогноза у больных раком толстой кишки: ММР-9/коллаген IV типа, MMP-9/uPA, MMP-9/PAI-1, коллаген IV типа/PAI-l и при прогнозе отдаленных метастазов MMP-9/sFas.
ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ
Материал и методы исследования
Общая характеристика больных раком толстой кишки. В исследование включено 187 больных раком толстой кишки в возрасте от 34 по 79 лет, проходивших обследование и лечение в ГУ РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН в период с 1986 по 2006 гг. и наблюдавшихся после окончания лечения не менее двух лет. Количество больных мужского и женского пола составило 86 (46%) и 101 (54%), соответственно, средний возраст пациентов 60,5±0,8 лет, медиана 62 года. Средний возраст больных мужчин и женщин не различался и составил 60,8±1,0 и 60,2±1,1 лет, соответственно.
Распределение больных раком толстой кишки с учетом стадии заболевания представлено в таблице 1. Как видно из данных, приведенных в таблице 1, в группе больных в IVb стадии количество пациентов мужского и женского пола было примерно равным (55 мужчин и 50 женщин), тогда как в группах пациентов с более ранними стадиями преобладали женщины. Минимальный средний возраст был характерен для больных раком толстой кишки IV стадии.
Таблица 1.
Распределение больных раком толстой кишки с учетом стадии заболевания
|
Стадия |
Кол-во |
Частота (%) |
Пол (абс.) |
Возраст, годы |
|
|
больных |
м/ж |
(М±т) |
|||
|
I |
3 |
1,6 |
0/3 |
63,3±3,0 |
|
|
Па |
9 |
4,8 |
3/6 |
64,4±1,6 |
|
|
IIb |
29 |
15,5 |
13/16 |
65,8±1,5 |
|
|
IIIa |
11 |
5,9 |
4/7 |
64,2±3,0 |
|
|
IIIb |
21 |
11,2 |
8/13 |
59,3±2,4 |
|
|
IVa |
9 |
4,8 |
3/6 |
58,8±3,2 |
|
|
IVb |
20 |
10,7 |
6/14 |
59,9±2,0 |
|
|
IVb с резекцией |
85 |
45,5 |
49/36 |
58,3±1,2 |
|
|
печени |
|||||
|
Всего: |
187 |
100 |
86/101 |
60,5±0,8 |
Все больные раком толстой кишки подвергнуты хирургическому лечению различного объема: право/левосторонняя гемиколэктомии, резекции сигмовидной, поперечно-ободочной, прямой кишки.
Отметим, что у 141 (75,4%) больного раком толстой кишки выявлены единичные и множественные регионарные метастазы в лимфатических узлах. У 98 (52,4%) пациентов были обнаружены метастазы в печени. При этом, 85 пациентам выполнена резекция печени по поводу метастазов, эти пациенты выделены нами в отдельную группу с целью анализа прогноза заболевания.
Клинико-морфологическую характеристику больных раком толстой кишки, вошедших в исследование, проводили в соответствии с Международной гистологической классификацией опухолей кишечника ВОЗ (1989). Для определения гистологического типа и варианта строения опухоли, степени ее дифференцировки, глубины инвазии в кишечную стенку, наличия сосудистой инвазии изучали парафиновые срезы, окрашенные гематоксилином и эозином. Слизеобразование оценивали с помощью окраски альциановым синим по Крейбергу. Исследовали также наличие участков некроза, лимфоидной и воспалительной инфильтрации в опухоли.
При гистологическом исследовании материала у всех больных были диагностированы аденокарциномы, которые были представлены различными вариантами строения: железистым, папиллярным, трабекулярным и солидноалвеолярным. рак опухоль маркер ангиогенез
Из 187 больных раком толстой кишки у 124 (66,3%) пациентов наблюдали железистый вариант строения опухоли, у 43 (23,0%) преобладали папиллярные структуры, у 7 (3,7%) выявлен трабекулярный вариант строения аденокарциномы, у 13 (7%) опухоль была представлена солидными или солидно-альвеолярными структурами.
Высоко дифференцированные аденокарциномы выявлены у 24 (12,8%) пациентов, умереннодифференцированные у 138 (73,8%) больных, низкодифференцированные у 25 (13,4%) пациентов.
Опухоли больных раком толстой кишки имели различную глубину инвазии в кишечную стенку: прорастание слизистого и подслизистого слоев наблюдали у 6 (3,2%) больных, врастание опухоли в мышечную оболочку у 21 (11,2%) пациента, прорастание всех слоев стенки кишки у 61 (32,6%) больного, опухоль прорастала все слои и врастала в жировую клетчатку 87 (46,5%) пациентов. Глубина инвазии была достоверно связана со стадией заболевания (р=0,0001). Прорастание опухоли в соседние органы и ткани обнаружили у 12 (6,6%) больных раком толстой кишки.
Важной клинико-морфологической характеристикой рака толстой кишки является наличие у больного инвазии опухоли в кровеносные и лимфатические сосуды. У 51 из 187 (27,3%) больных раком толстой кишки обнаружена сосудистая инвазия в первичной опухоли. Существенное повышение частоты выявления сосудистой инвазии (более чем у половины больных) обнаружено у больных раком толстой кишки при 1ПЬ и IV стадиях по сравнению с более ранними стадиями заболевания.
Слизеобразование в той или иной степени выраженности выявлено в опухолях 61 из 107 пациентов (57%), страдающих раком толстой кишки, при этом частота его обнаружения не была связана со стадией заболевания.
Методы определения иммуногистохимических маркеров. Определение иммуногистохимических показателей содержания белковых маркеров в опухоли больных раком толстой кишки проведено в лаборатории гистохимии и электронной микроскопии НИИ клинической онкологии ГУ Российского онкологического научного центра им. Н.Н. Блохина РАМН.
Таблица 2.
Характеристика антител
|
Антиген |
Антитело, |
Фирма |
Рабочее |
Функция белка |
|
|
клон |
разведение |
||||
|
ММР-9 |
Mouse mAb |
Novocastra |
1 :80 |
Фермент внеклеточно |
|
|
15W2 |
го матрикса |
||||
|
Коллаген |
Mouse mAb |
Novocastra |
1 :200 |
Компонент базальных |
|
|
IV типа |
РИМ12 |
мембран |
Иммуногистохимическое исследование белковых маркеров в опухолях больных раком толстой кишки выполняли на серийных парафиновых срезах с помощью биотин-стрептавидинового иммунопероксидазного метода с применением антител к ММР-9 и коллагену IV типа (фирма «Novocastra», Великобритания). Характеристика использованных в исследовании антител дана в таблице 2.
Для иммуногистохимического окрашивания образцы тканей рака толстой кишки и пограничных с опухолью участков слизистой оболочки толстой кишки фиксировали в 10% забуференном формалине (рН 7.2), проводили по спиртам и ксилолам, заливали в парафин и готовили серийные срезы толщиной 3-5 мкм, которые наносили на стекла с адгезивным покрытием (Polysine Menzel-Glaser).
Срезы депарафинировали и регидратировали по стандартной схеме. Для демаскировки антигенов проводили предварительную обработку парафиновых срезов в микроволновом режиме при мощности 650W 2 раза по 5' с использованием восстанавливающего раствора рН 6,0 (фирма «Dako», Дания) с перерывом 2' между процедурами для охлаждения.
Для выявления коллагена IV типа дополнительно проводилась обработка трипсином (фирма «Dako», Дания) в течение 30". Срезы инкубировали с первичными антителами на протяжении 18 часов при +4°С.
В качестве вторичных антител и пероксидазного комплекса использовали стандартный набор реагентов LSAB + Kit(фирма «Dako», Дания). Для визуализации реакции применяли раствор диаминобензидина DAB+ (фирма «Dako», Дания). Ядра клеток докрашивали гематоксилином Майера. Контрольный срез оставляли без первой инкубации.
Оценка реакции проводилась полуколичественным методом с учетом интенсивности окрашивания и количества антиген-позитивных клеток, которые в совокупности определяли уровень экспрессии белковых маркеров (высокий или низкий).
Иммуногистохимическая реакция оценивалась как негативная («-» нет реакции), слабопозитивная («+» <10% окрашенных клеток), умереннопозитивная («++» >10% клеток средней интенсивности окраски) и сильнопозитивная или сверхэкспрессия («+++» >10% клеток высокой интенсивности окраски).
Для дальнейшего сравнительного иммуногистохимического исследования опухолей выделяли два основных уровня иммунореактивности: низкий уровень, включающий опухоли с отсутствием реакции и слабопозитивной экспрессией (-/+) и высокий уровень, включающий опухоли с умеренной реакцией и сверхэкспрессией маркеров (++/+++).
Для каждого антигена оценивали тип специфического окрашивания, который зависел от локализации продукта реакции в клетках или строме опухоли. Специфическую реакцию маркеров в волокнах и клетках стромы опухолей расценивали как позитивную или негативную. Иммунореактивность коллагена IV типа выявляли по модели экспрессии белка в базальных мембранах опухолей.
Методы определения биохимических маркеров. Определение биохимических показателей активности белковых маркеров в опухоли и сыворотке крови больных раком толстой кишки проведено в лаборатории клинической биохимии НИИ клинической онкологии ГУ Российского онкологического научного центра им. Н.Н.Блохина РАМН.
Для биохимического исследования VEGF и sFas использовали образцы сыворотки крови больных раком толстой кишки, включенных в исследование, и в качестве контроля образцы сыворотки крови 60 практически здоровых людей (30 мужчин и 30 женщин) в возрасте 19-70 лет (средний возраст 61,3±8,6года).
Кровь для определения концентрации VEGF и sFas у больных РТК до начала лечения и у практически здоровых лиц брали натощак из локтевой вены с 8°° до 9°° часов утра. После свертывания крови пробирки центрифугировали при 2500xg в течение 10', сыворотку отбирали и хранили при -20°С до проведения исследования.
sFas в сыворотке крови определяли иммуноферментным методом, разработанным в Институте биоорганической химии им. М.М.Шемякина и Ю.А.Овчинникова РАН и лаборатории клинической биохимии ГУ РОНЦ им. Н.Н.Блохина РАМН (С.Г.Аббасова и соавт., 1999, 2007).
Концентрацию sFas определяли с использованием моноклональных антител против Fas SA-8 (IgGl-k); (8.8±0.6)xl07, которые сорбировали на планшетах (Linbro) в 0.05М карбонатном буфере (рН 9.6) в концентрации 5.0 мкг/мл в течение ночи при 4°С.
Для инактивации свободных центров связывания планшеты инкубировали с 1% раствором бычьего сывороточного альбумина (БСА) в фосфатно-солевом буфере (PBS) (рН7.2) 1ч при 37°С. Затем в планшеты вносили сыворотки. В качестве положительного контроля в каждый планшет вносили последовательные двукратные разведения полноразмерного рекомбинантного Fas от 40.0 до 0.15 нг/мл. Планшеты инкубировали 1.5 ч при 37°С.
После инкубации планшеты 6 раз интенсивно промывали раствором PBS, содержащим 0.1% Tween 20 («Sigma», США) (буфер для отмывки). Процедуру отмывки далее повторяли после каждой стадии теста. После отмывки в планшеты вносили биотинилированные моноклональные антитела против Fas SA-7 (IgGl-k); (9.52±1.4)хЮ8 в концентрации 12 мкг/мл в буфере для отмывки, содержащем 0.1% БСА.
Планшеты с биотинилированными антителами инкубировали 2 ч при 37°С или ночь при 4°С. Затем в планшеты вносили раствор стрептавидин-пероксидазы («Amersham») в рабочем разведении в буфере для отмывки. Планшеты инкубировали 1ч при 37°С.
Далее в планшеты вносили свежеприготовленный раствор 0.04% ортофенилендиамина в 50мМ цитрат-фосфатном буфере (рН 5.0), содержащем 0.03% перекиси водорода.
Планшеты инкубировали 15-20' при комнатной температуре до развития окраски. Реакцию останавливали добавлением в каждую лунку 50 мкл 10% серной кислоты, оптическую плотность измеряли по длине волны 492нм на спектрофотометре MR 700 Microplate Reader («Dynatech Labs»). Концентрацию sFas определяли по калибровочной кривой, соответствующей каждому планшету.
Концентрацию VEGF в сыворотке крови больных раком толстой кишки определяли иммуноферментным методом с использованием реактивов фирмы «DRG» (США).
Определение uPA, tPA, PAI-1 в опухоли проводили иммуноферментным методом с использованием наборов реактивов, разработанных в лаборатории проф. T.Benraad'a (г. Ниймеген, Нидерланды).
Кусочки опухолевой ткани доставляли на льду и сразу же подвергали гомогенизации в лаборатории клинической биохимии НИИ клинической онкологии ГУ РОНЦ им. Н.Н.Блохина РАМН. Перед гомогенизацией ткань тщательно очищали от участков некроза и жира, взвешивали, а затем измельчали и растирали в жидком азоте.
Полученный порошок переносили в центрифужные пробирки, помещенные в ледянную баню и добавляли TEDбуфер (10 мМ Трис-НС1, 1,5 мМ ЭДТА, 0,5 мМ дитиотреитол; рН 7,4), содержащий 10% глицерина (по объему), из расчета 1 мл буфера на 100мг ткани. Гомогенат центрифугировали 30' (центрифуга Optima TM-TLC, «Beckman», США). Надосадочную жидкость (цитозоль) использовали для определения концентрации белка, а аликвоты по 0,5 мл замораживали в полиэтиленовых пробирках и хранили при -70°С до определения концентрации соответствующих маркеров (не более 1 месяца).
Порядок проведения анализа был одинаков для всех наборов: по 0,1мл растворов стандартов (лунки А].2Gi-2) и разведенных цитозолей инкубировали при +4°С в течение ночи. Промывали 4 раза и добавляли в лунки по 0,1мл рабочих растворов соответствующих "фиксирующих" антител.
Инкубировали при комнатной температуре в течение 2 часов. Промывали и добавляли в каждую лунку по 0,1мл рабочего раствора детекторных антител.
Инкубировали при комнатной температуре в течение 2 часов. Промывали и добавляли в лунки по 0,1мл раствора субстрата. Инкубировали в течение 30' в темноте при комнатной температуре. Останавливали реакцию, добавляя в каждую лунку по 0,1 мл 1М H2SO4. Измеряли оптическую плотность растворов в лунках при 492/620нм. Измерения проводили на автоматическом универсальном ридере для микроплашек ELx-SOO фирмы «Bio-Tek Instruments Inc.» (США). В соответствии с инструкциями производителя, обработку результатов измерений проводили по формуле
Y^a+bX+cX,
где X концентрация анализируемого белка (нг/мл), a Y оптическая плотность при 492нм. При окончательных расчетах учитывали десятикратное разведение цитозолей и выражали концентрации анализируемых белков в нг/мг цитозольного белка.
Статистический анализ результатов исследования. Математический анализ полученных результатов проводили с использованием пакета статистических программ SPSS 7.0 for Windows и Microsoft® Office Excel 2003.
Рассчитывали среднее значение показателей, стандартную ошибку среднего, а также их медианы. Определение достоверности различий частот признаков в изучаемых группах проводили с использованием критерия %. Различия между показателями считались статистически значимыми при < 0,05.
Анализ прогностической значимости содержания маркеров и построение кривых выживаемости проводили методом Каплан-Майера [Kaplan E.L., Meier P. // J. Am. Stat. Assn. 1958. Vol.53. p.457-481]. Достоверность различий в выживаемости оценивали с помощью "Лог-ранк теста" ("Log-rank test").
Многофакторный анализ проводили методом регрессионного анализа по Сох Proportional hazard (Cox) regression model). На основе данных однофакторного анализа проведен многофакторный анализ прогностической значимости комплекса клинико-морфологических признаков с учетом показателей экспрессии биохимических и иммуногистохимических маркеров.
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
Иммуногистохимические и биохимические маркеры в опухоли и сыворотке крови больных раком толстой кишки
Содержание ММР-9 в опухоли больных раком толстой кишки. Экспрессия ММР-9 определена в первичной опухоли у 187 больных раком толстой кишки.
Больные раком толстой кишки по уровню экспрессии ММР-9 разделились примерно поровну. Так 51,3% пациентов были с низкой экспрессией ММР-9 в опухоли и 48,7% пациентов с высокой экспрессией этого белка. Накопление фермента в опухоли больных раком толстой кишки происходило в цитоплазме раковых клеток и компонентах стромы вокруг опухолевых комплексов (фибробластах, макрофагах, стенках сосудов, лейкоцитарных элементах).
Цитоплазматическая реакция высокой интенсивности часто наблюдалась в низкои умереннодифференцированных аденокарциномах толстой кишки, а редуцированная или очаговая экспрессия маркера в структурах высокодифференцированных аденокарцином.
Как правило, выявлялось гомогенное окрашивание цитоплазмы раковых клеток (рис. 1).
Интенсивность окрашивания компонентов внеклеточного матрикса не была связана со степенью дифференцировки опухоли и зависела от характера стромы и выраженности десмопластической реакции.
Экспрессия протеазы в нормальных тканях толстой кишки была слабопозитивной.
Экспрессия фермента в опухолях больных раком толстой кишки зависела от ряда клинико-морфологических характеристик заболевания.
Рис. 1. Экспрессия ММР-9 в структурах умеренннодифференцированной аденокарциномы толстой кишки (х150). Стрептавидин-биотиновый иммунопероксидазный метод. Ядра клеток докрашены гематоксилином Майера.
В таблице 3 представлены данные об экспрессии ММР-9 в опухоли больных раком толстой кишки с учетом основных клинико-морфологических признаков болезни.
Таблица 3.
Экспрессия ММР-9 в опухоли больных раком толстой кишки с учетом основных клинических признаков
|
Признак |
Градация |
Число больных |
Экспрессия ММР-9 |
Р |
||
|
+++/++ Высокая |
+/-Низкая |
|||||
|
Пол |
мужской |
86 |
46 (53,5) |
40 (46,5) |
0,5 |
|
|
женский |
101 |
50 (49,5) |
51 (50,5) |
|||
|
Возраст |
60 |
82 |
37 (45,1) |
45 (54,9) |
0,1 |
|
|
60 |
105 |
59 (56,2) |
46 (43,8) |
|||
|
Стадия |
I |
3 |
- |
3 (100) |
0,001 |
|
|
IIa |
9 |
3 (33,3) |
6 (66,7) |
|||
|
IIb |
29 |
11 (37,9) |
18 (62,1) |
|||
|
IIIa |
11 |
4 (36,4) |
7 (63,6) |
|||
|
IIIb |
21 |
6 (28,6) |
15 (71,4) |
|||
|
IVa |
9 |
3 (33,3) |
6 (66,7) |
|||
|
IVb |
20 |
16 (80) |
4 (20,0) |
|||
|
IVb с р. п. |
85 |
53 (62,4) |
32 (37,7) |
|||
|
Гистологический вариант строения опухоли |
железистый |
124 |
60 (48,4) |
64 (51,6) |
0,1 |
|
|
папиллярный |
43 |
21 (48,8) |
22 (51,2) |
|||
|
трабек-ный |
7 |
6 (85,7) |
1 (14,3) |
|||
|
солидный |
13 |
9 (69,2) |
4 (30,8) |
|||
|
Степень дифференцировки опухоли |
высокая |
24 |
7 (29,2) |
17 (70,8) |
0,001 |
|
|
умеренная |
138 |
69 (50,0) |
69 (50,0) |
|||
|
низкая |
25 |
20 (80,0) |
5 (20,0) |
|||
|
Глубина инвазии опухоли |
Р1 |
6 |
1 (16,7) |
5 (83,3) |
0,03 |
|
|
Р2 |
21 |
11 (52,4) |
10 (47,6) |
|||
|
Р3 |
61 |
24 (39,3) |
37 (60,7) |
|||
|
Р4 |
87 |
54 (62,1) |
33 (37,9) |
|||
|
Наличие инвазии опухоли в сосуды |
Да |
51 |
42 (82,4) |
9 (17,7) |
0,0001 |
|
|
Нет |
136 |
54 (39,7) |
82 (60,3) |
|||
|
Всего: |
96 (51,3) |
91 (48,7) |
Отметим, что высокая экспрессия ММР-9 выявлена достоверно чаще в опухоли пациентов при IVb стадии рака толстой кишки (в 2 раза), при солидном и солидно-альвеолярном гистологическом варианте строении опухоли (в 2 раза), при низкой степени дифференцировки опухоли (в 4 раза), при прорастании опухолью всех слоев стенки кишки и врастании в жировую клетчатку (в 1,7 раза чаще), при наличии инвазии опухоли в сосуды (в 4 раза). Таким образом, экспрессия белка ММР-9 в опухоли достоверно отражала наиболее важные клинические признаки рака толстой кишки (табл. 3).
Содержание коллагена IV типа в опухоли больных раком толстой кишки. Экспрессия коллагена IV типа определена в опухоли у 187 больных раком толстой кишки. У 42,8% больных раком толстой кишки выявлена высокая экспрессия коллагена IV типа, у 57,2% пациентов низкая экспрессия белка.
В опухолях больных раком толстой кишки коллаген IV типа был выявлен в базальных мембранах вокруг железистых раковых комплексов, а также кровеносных сосудов (рис. 2).
Рис. 2. Экспрессия коллагена IV типа в базальных мембранах вокруг железистых структур и сосудов высокодифференцированной аденокарциномы толстой кишки (х150). Стрептавидин-биотиновый иммунопероксидазный метод. Ядра клеток докрашены гематоксилином Майера.
Эпителий нормальной слизистой оболочки толстой кишки не был окрашен маркером. Экспрессия белка в части высокои умереннодифференцированных аденокарцином толстой кишки была представлена непрерывными линиями или отдельными фрагментами коллаген IV-содержащих базальных мембран.
Эпителий нормальной слизистой оболочки толстой кишки не был окрашен маркером. Экспрессия белка в части высокои умереннодифференцированных аденокарцином толстой кишки была представлена непрерывными линиями или отдельными фрагментами коллаген IV-содержащих базальных мембран. В низкодифференцированных опухолях в большинстве случаев контуры базальных мембран не выявлялись, а структуры коллагена IV типа в большом количестве присутствовали в тонких волокнах внеклеточного матрикса опухоли.
Таблица. 4.
Экспрессия коллагена IV типа в опухоли больных раком толстой кишки с учетом основных клинических признаков
|
Признак |
Градация |
Кол-во больных |
Экспрессия Coll IV |
Р |
||
|
+++ Высокая |
++ Низкая |
|||||
|
Пол |
мужской |
86 |
34 (39,5) |
52 (60,5) |
0,4 |
|
|
женский |
101 |
46 (45,5) |
55 (54,5) |
|||
|
Возраст |
60 |
82 |
40 (48,8) |
42 (51,2) |
0,1 |
|
|
60 |
105 |
40 (38,1) |
65 (61,9) |
|||
|
Стадия |
I |
3 |
3 (100) |
- |
0,005 |
|
|
IIa |
9 |
6 (66,7) |
3 (33,3) |
|||
|
IIb |
29 |
17 (58,6) |
12 (41,4) |
|||
|
IIIa |
11 |
6 (54,6) |
5 (45,5) |
|||
|
IIIb |
21 |
12 (57,1) |
9 (42,9) |
|||
|
IVa |
9 |
3 (33,3) |
6 (66,7) |
|||
|
IVb |
20 |
3 (15) |
17 (85) |
|||
|
IVb с р. п. |
85 |
30 (35,3) |
32 (64,7) |
|||
|
Гистологический вариант строения опухоли |
железистый |
124 |
62 (50) |
62 (50) |
0,04 |
|
|
папиллярный |
43 |
12 (27,9) |
31 (72,1) |
|||
|
трабек-ный |
7 |
2 (28,6) |
5 (71,4) |
|||
|
солидный |
13 |
4 (30,8) |
9 (69,2) |
|||
|
Степень дифференцировки опухоли |
высокая |
24 |
14 (58,3) |
10 (41,7) |
0,049 |
|
|
умеренная |
138 |
60 (43,5) |
78 (56,5) |
|||
|
низкая |
25 |
6 (24) |
19 (76) |
|||
|
Глубина инвазии опухоли |
1 |
6 |
5 (83,3) |
1 (16,7) |
0,1 |
|
|
2 |
21 |
11 (52,4) |
10 (47,6) |
|||
|
3 |
61 |
28 (45,9) |
33 (54,1) |
|||
|
4 |
87 |
33 (37,9) |
54 (62,1) |
|||
|
5 |
12 |
3 (25) |
9 (75) |
|||
|
Наличие инвазии опухоли в сосуды |
да |
51 |
7 (13,7) |
44 (86,3) |
0,0001 |
|
|
нет |
136 |
73 (53,7) |
63 (46,3) |
|||
|
Всего: |
96 (51,3) |
91 (48,7) |
В таблице 4 представлены данные об экспрессии коллагена IV типа в опухоли больных раком толстой кишки с учетом основных клиникоморфологических признаков заболевания. Отметим, что низкая экспрессия коллагена IV типа выявлялась достоверно чаще в опухоли пациентов при IVa и IVb стадиях заболевания (примерно в 2-5 раз), при солидном варианте гистологического строения (в 2-3 раза чаще), при низкой степени дифференцировки опухоли (в 3 раза чаще), при прорастании опухолью всех слоев стенки кишки и жировой клетчатки (в 2-2,5 раза чаще), при наличии инвазии опухоли в сосуды (в 6 раз).
Таким образом, экспрессия коллагена IV типа в опухоли достоверно отражала наиболее важные клинические признаки рака толстой кишки. При этом, слабая реактивность или отсутствие коллаген IV-содержащих базальных мембран часто сочетались с повышенной экспрессией ММР-9 в цитоплазме клеток рака толстой кишки.
Содержание VEGF в сыворотке крови больных раком толстой кишки. VEGF определен в сыворотке крови 187 больных раком толстой кишки. Содержание маркера колебалось от 100 до 1800 пг/мл, в среднем составляя 752,2±26,2 пг/мл, медиана показателя равнялась 700 пг/мл.
В группе практически здоровых людей содержание VEGF в сыворотке крови в среднем составило 311,4±18,9 пг/мл, медиана 301 пг/мл и было достоверно ниже, чем в сыворотке крови больных раком толстой кишки (р=0,0001).
Следует отметить, что содержание VEGF в' сыворотке крови больных раком толстой кишки по половому признаку не различалось и составило 735,8±38,0 пг/мл в группе мужчин и 766,1±36,3 пг/мл в группе женщин.
Анализ содержания VEGF в сыворотке крови больных раком толстой кишки с учетом стадии заболевания показал, что концентрация маркера отражает стадию опухолевого процесса (рЮ,0001) (табл. 5). При этом концентрация VEGF у больных раком толстой кишки I и Па стадии не отличалась от содержания маркера у здоровых людей и, таким образом, показатель не обладал диагностической способностью при ранних стадиях заболевания.
Таблица 5.
Содержание VEGF в сыворотке крови больных раком толстой кишки с учетом стадии заболевания
|
Стадия |
Кол-во больных |
VEGF, пг/мл (Mm) |
Пределы колебания |
Медиана, пг/мл |
|
|
I |
3 |
220,060,0 |
100,0-280,0 |
280 |
|
|
IIa |
9 |
375,939,2 |
240,0-610,0 |
380 |
|
|
IIb |
29 |
509,124,0 |
290,0-760,0 |
520 |
|
|
IIIa |
11 |
610,549,0 |
400,0-910,0 |
600 |
|
|
IIIb |
21 |
839,366,6 |
420,0-1610,0 |
810 |
|
|
IVb |
20 |
957,5102,9 |
390,0-1780,0 |
930 |
|
|
IVa |
9 |
961,1144,3 |
500,0-1690,0 |
800 |
|
|
IVb с резекцией печени |
85 |
820,137,0 |
280,0-1800,0 |
780 |
|
|
Всего: |
187 |
752,226,2 |
100-1800 |
700 |
Медиана содержания маркера достоверно повышалась при увеличении показателя местной распространенности Т (система TNM) (табл. 6).
Таблица 6.
Содержание VEGF в сыворотке крови больных раком толстой кишки с учетом показателя Т системы TNM
|
Стадия Т (TNM) |
Кол-во больных |
VEGF, пг/мл(Mm) |
Пределы колебания |
Медиана пг/мл, |
|
|
1 |
3 |
220,0±60,0 |
100,0-280,0 |
280 |
|
|
2 |
38 |
477,6±22,3 |
240,0-760,0 |
495 |
|
|
3 |
126 |
810,2±31,5 |
280,0-1800,0 |
770 |
|
|
4 |
20 |
988,5±76,7 |
500,0-1690,0 |
910 |
|
|
Всего: |
187 |
752,2±26,2 |
100-1800 |
700 |
Концентрация маркера в сыворотке крови больных раком толстой кишки повышалась по мере увеличения количества регионарных метастазов показателя N (система TNM), однако все выявленные различия не были статистически достоверными (р>0,05) (табл. 7).
При наличии у больного раком толстой кишки отдаленных метастазов в печени содержание VEGF в сыворотке крови было достоверно выше. Отметим, что у больных раком толстой кишки с отсутствием отдаленных метастазов содержание маркера могло быть высоким при значительной распространенности заболевания (показатель Т3-Т4).
Таблица 7.
Содержание VEGF в сыворотке крови больных раком толстой кишки с учетом показателя N системы TNM
|
Стадия |
Кол-во |
VEGF, пг/мл |
Пределы |
Медиана, |
|
|
N (TNM) |
больных |
(Mm) |
Колебания |
пг/мл |
|
|
0 |
46 |
672,1±59,3 |
100,0-1690,0 |
540 |
|
|
1 |
118 |
740,3±131,5 |
280,0-1800,0 |
632,5 |
|
|
2 |
14 |
939,3±74,6 |
700,0-1710,0 |
880 |
|
|
3 |
9 |
1026,7±174,4 |
780,0-1520,0 |
970 |
|
|
Всего: |
187 |
752,2±126,2 |
100-1800 |
700 |
Выявлено достоверно более высокое содержание VEGF в сыворотке крови больных раком толстой кишки в возрасте до 60 лет по сравнению с пациентами старше 60 лет (901,9±144,0 и 635,3±126,6 пг/мл, соответственно) (р=0,001), что косвенно может свидетельствовать о более агрессивном течении заболевания у пациентов моложе 60 лет.
Дисперсионный анализ содержания VEGF в сыворотке крови больных раком толстой кишки показал достоверно более высокие его значения в группе пациентов с тубулярным вариантом гистологического строения опухоли по сравнению с группой больных с солидным гистологическим вариантом (р=0,02) (табл. 8). Однако эти гистологические варианты относятся к редким, в то же время наиболее частые варианты гистологического строения опухоли не отличались достоверно по содержанию VEGF в сыворотке крови.
Достоверно выше был уровень VEGF у больных раком толстой кишки с низкой степенью дифференцировки опухоли по сравнению с группой пациентов с высокой степенью дифференцировки опухоли (табл. 9).
Содержание VEGF достоверно повышалось по мере увеличения глубины инвазии опухоли в кишечную стенку и при наличии инвазии опухоли в кровеносные сосуды (p=0,001).
Таблица 8.
Содержание VEGF в сыворотке крови больных раком толстой кишки с учетом варианта гистологического строения опухоли
|
Вариант гистологического строения опухоли |
Количество больных |
VEGF, пг/мл (Mm) |
Пределы колебания VEGF |
Медиана VEGF |
|
|
1 |
124 |
751,5±31,5 |
100,0-1800,0 |
700 |
|
|
2 |
43 |
765,1±56,8 |
290,0-1710,0 |
680 |
|
|
3* |
7 |
1067,1±178,8 |
500,0-1780,0 |
910 |
|
|
4* |
13 |
546,2±47,3 |
260,0-800,0 |
560 |
|
