Таким образом, у большинства больных раком толстой кишки (73,1%) изменение sFas в сыворотке крови происходило синхронно с изменением уровня экспрессии ММР-9 и коллагена IV типа в опухоли.

Содержание uPA, tPA и PAI-1 в ткани опухоли и неизмененной слизистой оболочке толстой кишки. Иммуноферментное определение содержания uPA проведено в ткани опухоли 187 больных раком толстой кишки. Уровни маркера в опухоли колебались от 0,17 до 8,9 нг/мг белка, составив в среднем 3,5±0,2 нг/мг белка, медиана была равна 4,0 нг/мг белка. Распределение маркера отличалось от распределения Гаусса, поэтому в качестве центральной характеристики использовали медиану.

Содержание uPA в неизмененной ткани (пограничной с опухолью слизистой оболочке толстой кишки) 35 больных раком толстой кишки составило 0,71 ±0,14 нг/мг белка, медиана 0,6 нг/мг белка. Различие содержания uPA в неизмененной и опухолевой ткани больных раком толстой кишки статистически достоверны (р=0,001).

При иммуноферментном определении tPA содержание белка в ткани опухоли 187 больных раком толстой кишки достоверно отличалось от распределения Гаусса, для анализа различий применяли непараметрические критерии, в качестве центральной характеристики показателя применяли медиану. У 89 (47,6%) больных раком толстой кишки содержание tPA в ткани опухоли не превышало 2 нг/мг белка, среднее содержание составило 4,3+0,4 нг/мг белка, медиана 2,3 нг/мг белка.

Содержание tPA в неизмененной ткани 187 больных раком толстой кишки составило 4,98±0,79 нг/мг белка, медиана 2,68 нг/мг белка. Различия содержания tPA в неизмененной и опухолевой ткани больных раком толстой кишки были статистически недостоверными (р=Ю,18). При иммуноферментном определении PAI-1 у 9 из 187 (4,8%) больных раком толстой кишки маркер не был выявлен, у 54 (28,9%) его содержание не превышало 0,5 нг/мг белка.

Таким образом, у трети обследованных пациентов содержание маркера было невысоким, либо белок полностью отсутствовал в ткани опухоли. Среднее содержание PAI-1 у 178 больных раком толстой кишки составило 1,6±0,1 нг/мг белка, медиана 1,9 нг/мг белка. Содержание PAI-1 в неизмененной ткани 35 больных раком толстой кишки составило 0,99±0,1 нг/мг белка, медиана 0,61 нг/мг белка. Различия содержания PAI-1 в неизмененной и опухолевой ткани больных раком толстой кишки были статистически достоверными (р=0,001).

Выявлена корреляционная зависимость высокой степени тесноты связанности между содержанием uPA, tPA и PAI-1 в ткани опухоли больных раком толстой кишки (г=0,76; рЮ,001).

Содержание компонентов системы активации плазминогена в опухоли больных раком толстой кишки с учетом клинико-морфологических признаков заболевания. Оценили содержание основных компонентов системы плазминогена в опухоли больных раком толстой кишки с учетом клинико-морфологических признаков заболевания.

При изучении содержания компонентов системы активации плазминогена с учетом возраста больных раком толстой кишки выявлено достоверно более высокое их содержание в опухоли больных в возрасте до 60 лет по сравнению с группой пациентов от 60 лет и старшее, что косвенно может указывать на более агрессивное течение заболевания у пациентов моложе 60 лет.

Наибольший интерес для практикующих врачей представляет изучение связи показателей системы активации плазминогена в опухолевой ткани больных раком толстой кишки со стадией заболевания. Выявлено достоверное повышение uPA при увеличении местной распространенности заболевания (Т) более чем в 10 раз, при наличии отдаленных метастазов (М) - более чем в 4 раза.

Обнаружено повышение tPA при увеличении местной распространенности опухолевого процесса (показатель Т), при наличии отдаленных метастазов (М). Выявлено достоверное повышение PAI-1 в первичной опухоли больных раком толстой кишки при увеличении местной распространенности процесса (Т) более чем в 3 раза, при наличии регионарных метастазов (N) примерно в 2 раза и отдаленных метастазов (М) более чем в 3 раза.

Степень дифференцировки опухоли была достоверно связана с содержанием активатора плазминогена uPA в ткани опухоли больных раком толстой кишки. При низкой степени дифференцировки опухоли содержание uPA и PAI-1 в опухоли было наибольшим, однако достоверные различия обнаружены только для uPA.

Гистологический вариант строения опухоли не был достоверно связан с содержанием компонентов системы активации плазминогена в ткани опухоли больных раком толстой кишки.

Содержание uPA и PAIбыло наибольшим в опухолях с преобладанием железистого варианта строения.

Все показатели системы активации плазминогена в опухоли больных раком толстой кишки были высокодостоверно связаны с одним наиболее важным клинико-морфологических фактором заболевания глубиной инвазии опухоли в кишечную стенку (р<0,001).

Обнаружено, что при наличии инвазии опухоли в кровеносные сосуды содержание uPA и PAI-1 также достоверно повышается.

Наличие слизеобразования, участков некроза, лимфоидной и воспалительной инфильтрации в опухоли не изменяло достоверно показатели содержания компонентов системы активации плазминогена в опухоли больных раком толстой кишки.

Связь содержания компонентов системы активации плазминогена с экспрессией ММР-9 и коллагена IV типа в опухоли больных раком толстой кишки. При неблагоприятных (высоких) уровнях экспрессии ММР-9 содержание uPA в ткани опухоли было достоверно выше, чем при благоприятных (табл. 12).

Таблица 12.

Содержание компонентов системы активации плазминогена в опухоли больных раком толстой кишки с учетом уровня экспрессии ММР-9

Показатель	Уровень экспрессии ММР-9
	Высокий +++/++	Низкий +/-
	N	Mm (медиана)	Пределы колебания	N	Mm (медиана)	Пределы колебания
uPA *	96	4,10,2 (4,3)	0,17-8,9	91	2,90,3 (1,6)	0,17-8,6
tPA *	96	5,30,5 (4,9)	0,14-22,1	91	3,30,5 (0,2)	0,14-19,4
PAI-1 *	49	1,90,1 (2,1)	0,05-3,6	129	1,30,1 (1,3)	0,05-3,5

Примечание: *p=0,01.

Таблица 13.

Содержание компонентов системы активации плазминогена в опухоли больных раком толстой кишки с учетом экспрессии коллагена IV типа

Показатель	Уровень экспрессии коллагена IV типа
	Высокий +++/++	Низкий +/-
	N	Mm (медиана)	Пределы колебания	N	Mm (медиана)	Пределы колебания
uPA *	96	2,90,3 (1,5)	0,17-8,2	91	3,90,2 (4,1)	0,17-8,9
tPA *	96	3,50,5 (0,2)	0,14-19,4	91	4,90,5 (4,0)	0,14-22,1
PAI-1 *	49	1,30,1 (1,2)	0,05-3,5	129	1,80,1 (2,0)	0,05-3,6

Примечание: *p=0,01.

При неблагоприятных (низких) уровнях экспрессии коллагена IV типа содержание компонентов системы активации плазминогена также было достоверно выше (табл. 13).

Связь содержания компонентов системы активации плазминогена в опухоли уровнями белков VEGF и sFas в сыворотке крови больных раком толстой кишки. Обнаружены корреляционные зависимости средней степени тесноты связанности между содержанием VEGF в сыворотке крови и иРА в опухоли (г=0,51; р=0,001), а также между VEGF и PAI-1 (г=0,42; р=001). Важно отметить, что данная корреляционная зависимость выявлена только в группе больных раком толстой кишки III-IV стадий заболевания.

Содержание sFas в сыворотке крови не было связано с показателями содержания компонентов системы активации плазминогена в ткани опухоли больных раком толстой кишки.

Подводя итоги настоящему разделу исследования, следует отметить, что показатели компонентов системы активации плазминогена, определенные в ткани опухоли больных раком толстой кишки, тесно взаимосвязаны между собой, отражают основные клинико-морфологические характеристики рака толстой кишки, но не обладают достаточной информативностью при начальных стадиях заболевания. При этом при поздних (III-IV) стадиях заболевания выявлена корреляционная зависимость между компонентами системы активации плазминогена и белковыми маркерами: ММР-9, коллаген IV типа и VEGF.

Отдаленные результаты лечения с учетом содержания иммуногистохимических и биохимических маркеров

Отдаленные результаты лечения проанализированы у 187 больных раком толстой кишки. Обследованные пациенты прослежены от 2 до 6 лет от начала проводимого лечения. Из 187 пациентов в течение 1-го года наблюдения после лечения умерло 20 (10,7%) больных, на 2-м году жизни 29 (15,5%) больных.

Медиана общей выживаемости больных раком толстой кишки составила 76,7±11,3 мес., то есть примерно 6 лет. 5-летняя общая выживаемость составила 57,6+4,1%. Анализ функции риска смерти у больных раком толстой кишки показал, что наибольший риск обнаружен в первый год после проведенного лечения, в последующие 5 лет риск смерти неуклонно снижался.

Общая выживаемость больных раком толстой кишки достаточно хорошо изучена. В таблице 14 приведены краткие данные по общей выживаемости больных раком толстой кишки, включенных в настоящее исследование (в общей группе и с учетом наиболее важных клинико-морфологических признаков, достоверно связанных с отдаленными результатами лечения).

Так, стадия заболевания была достоверно связана с отдаленными результатами лечения больных раком толстой кишки (р=0,0001). У пациентов в I-IIb стадиях 5-летняя общая выживаемость была 84,5% и выше, а медиана не была достигнута на 5-летнем сроке наблюдения.

Существенно снижались показатели общей выживаемости у больных при IIIa стадии (около половины больных умерло в течение 5-лет после проведенного лечения). Медиана длительности жизни после проведенного лечения в данной группе больных составила 34,7 мес. (около 3-х лет), а у пациентов в IVb стадии всего 14,4 мес., то есть чуть более одного года.

Отметим, что при выполнении резекции печени больным раком толстой кишки в IVb стадии медиана выживаемости увеличивалась примерно в 4 раза и приближалась к 5 годам, а 5-летняя общая выживаемость была сопоставима с выживаемостью больных при 1ПЬ стадии.

Вариант гистологического строения опухоли не был достоверно связан с отдаленными результатами лечения больных раком толстой кишки (р=0,1), а степень дифференцировки опухоли была достоверно связана с отдаленными результатами лечения больных раком толстой кишки (р=0,0002). Так, в группе больных с низкой степенью дифференцировки опухоли медиана выживаемости составила 20,1 мес., а 5-летняя общая выживаемость 11,2±9,2%.

Отдаленные результаты лечения больных раком толстой кишки достоверно ухудшались при увеличении глубины инйазии опухоли в кишечную стенку (р=0,0001). Так, при наибольшей глубине инвазии, при прорастании опухолью всех слоев стенки кишки и врастании в жировую клетчатку медиана общей выживаемости составила всего 33,3 мес., а 3-х летняя выживаемость 38,1±14,7%.

Высокодостоверно различалась общая выживаемость больных раком толстой кишки при наличии и отсутствии инвазии опухоли в кровеносные и лимфатические сосуды (р=0,0001). Медианы выживаемости и 5-летняя выживаемость различались в этих группах более чем в 5 раз.

Таблица 14.

Общая выживаемость больных раком толстой кишки

Клинический признак	Градация признака	N	Медиана выживаемости, мес.	Общая выживаемость, %
				1-летняя	3-летняя	5-летняя
Вся группа	187	76,711,3	89,32,3	70,23,4	57,64,1
Стадия р=0,0001	I+IIa	3	Не достигнута	100	100	-
	IIb	29	Не достигнута	100	92,15,3	84,58,8
	IIIa	11	Не достигнута	100	90,09,5	53,317,6
	IIIb	21	Не достигнута	100	80,48,8	-
	IVa	9	34,7	77,813,9	4013,4	-
	IVb	20	14,4	6011	208,9	-
	IVb с рез.печени	85	54,9	88,23,5	62,75,3	47,16,2
Вариант гистологического строения опухоли	1	124	82,4	91,92,4	71,44,1	60,84,8
	2	43	Не достигнута	83,75,6	63,57,6	52,39,4
	3	7	22,8	57,118,7	28,617,1	0
	4	13	Не достигнута	76,911,9	57,718,8	55,419,1
Степень дифференцировки опухоли	Высокая	24	Не достигнута	95,84,1	87,17,0	64,811,0
	Умеренная	138	83,0	89,92,6	72,03,9	61,54,8
	Низкая	25	20,1	68,09,3	30,69,8	11,29,2
Глубина инвазии опухоли в кишечную стенку	Слиз./подслизистый	6	Не достигнута	100	100	-
	Мышечн.	21	Не достигнута	95,24,6	90,26,6	78,912,1
	Все слои	61	Не достигнута	95,12,8	81,45,1	65,97,3
	Жировая клетчатка	87	50,6	81,64,2	55,95,4	45,85,8
Инвазия в сосуды	Есть	51	18,9	68,66,5	24,56,4	14,46,1
	Нет	136	96,0	95,61,8	85,03,1	71,94,6

Пол и возраст больных раком толстой кишки, наличие слизеобразования, участков некроза, лимфоидной и воспалительной инфильтрации в опу-холи не были достоверно связаны с отдаленными результатами лечения больных раком толстой кишки.

Обнаружено, что медиана общей выживаемости при неблагоприятной высокой экспрессии ММР-9 была в 3 раза меньше, а 5-летняя общая выживаемость в 3,1 раза меньше, чем при благоприятной низкой его экспрессии.

Таким образом, данный белок при иммуногистохимическом определении в опухоли больных раком толстой кишки обладает выраженной прогностической способностью.

Выявлено, что медиана и 5-летняя общая выживаемость при неблагоприятной низкой экспрессии коллагена IV типа в опухоли была почти в 3 раза меньше, чем при благоприятной высокой его экспрессии. Таким образом, данный белок при иммуногистохимическом определении в ткани опухоли больных раком толстой кишки также обладает выраженной прогностической способностью.

Проанализировали отдаленные результаты лечения больных раком толстой кишки с учетом содержания VEGF в сыворотке крови. Больные разделены на 3 группы:

1) группа уровень VEGF в сыворотке крови менее 400 пг/мл;

2) группа уровень VEGF от 400 до 800 пг/мл;

3) группа уровень VEGF 800 и более пг/мл.

Отметим, что у пациентов со значениями VEGF, равными 400-600 пг/мл и 600-800 пг/мл, отдаленные результаты лечения были сходны и эти пациенты были объединены в одну группу.

Убедительно доказано, что исходные уровни VEGF в сыворотке крови достоверно связаны с отдаленными результатами лечения больных раком толстой кишки (р=0,019).

Так, неблагоприятными следует считать уровни VEGF в сыворотке крови выше 400 пг/мл (5-летняя общая выживаемость снижается в 1,3 раза) и, особенно, выше 800 пг/мл (5-летняя общая выживаемость снижается почти в 2 раза).

Таким образом, содержание VEGF в сыворотке крови, определенное до начала лечения, может являться фактором прогноза и учитываться при выборе объема и методов лечения больных раком толстой кишки.

Кроме того, показано, что исходный уровень sFas в сыворотке крови больных раком толстой кишки выше 10 нг/мл также является высокоинформативным неблагоприятным фактором прогноза заболевания.

Рис. 3. Общая выживаемость больных раком толстой кишки с учетом содержания tPA в ткани опухоли.

Обнаружено, что низкие (менее 0,85 нг/мг белка) уровни uРА в ткани опухоли больных раком толстой кишки, соответствующие его содержанию в неизмененной ткани, можно считать прогностически благоприятными. Отметим, что наиболее часто такие уровни выявляли в опухоли больных при 1-ПЬ стадиях (31 пациент из 36, 86,1%) и реже у больных с III стадией (10 из 32, 31,3%), у больных IV стадии низкие значения uРА в опухоли не были выявлены.

Показано, что высокие (более 2 нг/мг белка) уровни tPA в ткани опухоли больных раком толстой кишки можно считать прогностически благоприятными (рис. 3).

Обнаружено, что медиана общей выживаемости больных раком толстой кишки при неблагоприятных значениях PAI-l (>0,5нг/мг белка) составила немного более 3-х лет, а количество пациентов, проживших 5 лет, сократилось в 1,7 раза по сравнению с больными с благоприятными низкими значениями PAI-1 (<0,5 нг/мг белка) в ткани опухоли, соответствующими значениям маркера в неизмененной слизистой.

Многофакторным анализом обнаружено, что из 7 изучаемых показателей независимыми факторами прогноза можно считать ММР-9, коллаген IV типа и uРА.

Следует также отметить, что только у 6 (3,2%) больных раком толстой кишки все исследованные биохимические маркеры были неблагоприятными, при этом медиана выживаемости в данной группе пациентов составила 37,9 месяцев. У 6 (3,2%) больных все исследованные маркеры были благоприятными.

Среди наиболее неблагоприятных сочетаний следует выделить:

высокие значения ММР-9 с низким значением коллагена IV типа (74 пациента, 39,6%; медиана 23,5 мес., 5-летняя выживаемость 15,7±5,5%);

высокие значения ММР-9 с высоким значением иРА (80 пациентов, 42,8%; медиана 22,0 мес., 5-летняя выживаемость 20,1±5,9%);

высокие значения ММР-9 с высоким значением PAI-1 (75 пациентов, 40,1%, медиана 22,0 мес., 5-летняя выживаемость 17,3±5,7%);

высокие значения коллагена IV типа с высоким значением PAI-1 (82 пациентов, 43,9%, медиана 26,4 мес., 5-летняя выживаемость 25,8±5,9%).

Эти сочетания можно рекомендовать для применения в клинической практике с целью определения индивидуального прогноза клинического течения рака толстой кишки.

Тканевые и сывороточные маркеры у больных раком толстой кишки и риск развития метастазов в печени

Наиболее частой причиной смерти больных раком толстой кишки является прогрессирование заболевания в виде метастазов в печени. Развитие метастазов в печени оценено у 187 больных раком,толстой кишки. Из 187 пациентов в течение 1-го года наблюдения после лечения метастазы в печени развились у 24 (12,8%) больных, на 2-м году жизни у 19 (10,2%) пациентов.

Медиана безрецидивной выживаемости больных раком толстой кишки составила 84,7±3,1 мес. 5-летняя общая выживаемость составила 63,8±4,8%.

Анализ функции риска развития метастазов в печени у больных раком толстой кишки показал, что наибольший риск обнаружен в первые два года после проведенного лечения, в последующие 3 года риск развития метастазов был существенно ниже и вновь возрастал только на 7 году наблюдения.

В таблице 15 приведены данные по выживаемости без метастазов больных раком толстой кишки, включенных в настоящее исследование (в общей группе и с учетом наиболее важных клинических признаков, достоверно связанных с отдаленными результатами лечения).

Так, стадия заболевания была достоверно связана с безрецидивной выживаемостью больных раком толстой кишки (р=0,01). При этом у больных при I-IIIa стадиях 3-летняя безрецидивная выживаемость составила 100%. Существенно снижались показатели безрецидивной выживаемости у больных при 1ПЬ стадии (5-летняя безрецидивная выживаемость снижалась до 69,7±14,6%).

В группе больных раком толстой кишки в IVb стадии с резекцией печени по поводу единичных метастазов опухоли медиана безрецидивной выживаемости была минимальной (33,7 мес.), а 5-летняя безрецидивная выживаемость составила 29,9±9,5%.

Таблица 15.

Безрецидивная выживаемость больных раком толстой кишки с учетом основных клинико-морфологических признаков опухолевого процесса

Клинический признак	Градация признака	N	Медиана выживаемости, мес.	Безрецидивная выживаемость, %
				1-летняя	3-летняя	5-летняя
Вся группа	187	84,73,1	86,02,6	70,33,7	63,84,8
Стадия р=0,01	I+IIa	12	Не достигнута	100	100	-
	IIb	29	Не достигнута	100	100	100
	IIIa	11	Не достигнута	100	100	-
	IIIb	21	Не достигнута	89,27,2	75,411,8	69,714,6
	IVa	9	Не достигнута	82,610,5	74,116,1	-
	IVb	20	Не достигнута	82,19,4	70,112,7	-
	IVb с рез.печени	85	33,7	77,04,6	46,46,1	29,99,5
Степень дифференцировки опухоли	высокая	24	Не достигнута	91,75,6	77,98,8	64,98,8
	умеренная	138	84,6	87,12,9	71,94,2	60,510,9
	низкая	25	46,1	71,310,0	50,512,6	-
Глубина инвазии	слизист.	6	Не достигнута	100	100	-
	мышечн.	21	Не достигнута	95,04,9	94,25,0	94,05,1
	все слои	61	Не достигнута	86,44,5	81,45,1	65,97,3
	жир.клет.	87	62,1	80,24,4	62,06,0	48,87,9
Инвазия в сосуды	есть	51	34,0	74,66,5	43,511,4	30,416,7
	нет	136	86,4	88,82,7	74,63,9	68,95,1

Вариант гистологического строения опухоли не был достоверно связан с показателем безрецидивной выживаемости больных раком толстой кишки (р=0,7). Так, 3-летняя безрецидивная выживаемость составила в группах больных с опухолями железистого, папиллярного, тубулярного и солидноальвеолярного строения рака толстой кишки 69,9±14,6%, 69,9±7,7%, 66,7±19,2% и 72,4±12,% соответственно.

Выявлена сильная тенденция к различию в показателях безрецидивной выживаемости больных раком толстой кишки в группах с различной степенью дифференцировки опухоли (р=0,08). Так, в группе больных раком толстой кишки с низкой степенью дифференцировки опухоли медиана безрецидивной выживаемости составила 20,1 мес., а 5-летняя безрецидивная выживаемость составила 11,2±9,2%.

Большая глубина инвазии опухоли в кишечную стенку достоверно ухудшала безрецидивную выживаемость больных раком толстой кишки (р=0,02). Так, при наибольшей глубине инвазии, при прорастании всех слоев стенки кишки и врастании опухоли в жировую клетчатку, 5-летняя безрецидивная выживаемость составила 48,817,9%.

Достоверно различалась безрецидивная выживаемость у больных раком толстой кишки при наличии и отсутствии инвазии опухоли в кровеносные и лимфатические сосуды (р=0,01). Так, медиана безрецидивной выживаемости в группе больных с наличием сосудистой инвазии не достигала 3-х лет, а показатель 5 -летняя безрецидивной выживаемости составил 30,4±16,7%.

Рис. 4. Безрецидивная выживаемость больных раком толстой кишки с учетом уровня экспрессии ММР-9 в опухоли.

Пол, возраст больных раком толстой кишки, наличие слизеобразования, участков некроза, лимфоидной и воспалительной инфильтрации в опухоли не были достоверно связаны с безрецидивной выживаемостью больных раком толстой кишки.

На рисунке 4 представлены данные безрецидивной выживаемости больных раком толстой кишки с учетом экспрессии ММР-9 в ткани опухоли (р=0,001). Так, медиана безрецидивной выживаемости при неблагоприятной (высокой) экспрессии ММР-9 в опухоли была в 1,5 раза, а 5-летняя в 1,7 раза меньше, чем при благоприятной (низкой) экспрессии маркера. Таким образом, данный белок при иммуногистохимическом определении в опухоли больных раком толстой кишки обладает способностью прогнозировать развитие метастазов в печени.

Показатели безрецидивной выживаемости при неблагоприятно низкой экспрессии коллагена IV типа в ткани опухоли были почти в 3 раза ниже, чем при благоприятно высоком уровне его экспрессии. Однако, данный белок при иммуногистохимическом определении в опухоли больных раком толстой кишки обладает недостаточно выраженной прогностической способностью относительно раненного развития метастазов в печени.

Показано, что исходные уровни VEGF в сыворотке крови высокодостоверно связаны с безрецидивной выживаемостью больных раком толстой кишки (р=0,0001). Неблагоприятными следует считать уровни VEGF в сыворотке крови более 800 пг/мл, когда показатель 5-летней выживаемости снижается в 2,7 раза, а медиана времени выявления метастазов в печени составила чуть более 2-х лет. Таким образом, содержание VEGF в сыворотке крови, определенное до начала лечения, может служить фактором прогноза безрецидивной выживаемости и учитываться при выборе объема и методов лечения у больных раком толстой кишки.

Получены высокодостоверные различия в показателях безрецидивной выживаемости больных раком толстой кишки с учетом исходных уровней sFas в сыворотке крови (р=0,0001). Показано, что содержание sFas более 10 нг/мл в сыворотке крови больных раком толстой кишки также является высокоинформативным неблагоприятным фактором прогноза у этой категории пациентов относительно развития метастазов в печени.

Также выявлено, что уровни uРА в ткани опухоли больных раком толстой кишки менее 3,0 нг/мг белка можно считать благоприятными в оценке прогнозе риска развития отдаленных метастазов. Высокие (более 2 нг/мг белка) уровни tPA в ткани опухоли больных раком толстой кишки следует считать прогностически благоприятными относительно развития метастазов в печени. Анализ связи содержания PAI-1 в ткани опухоли больных раком толстой кишки с развитием отдаленных метастазов показал высокодостоверные различия по пороговому уровню маркера равному 2,0 нг/мг белка (р=0,0001). Медиана безрецидивной выживаемости больных раком толстой кишки при неблагоприятных значениях PAI-1 (<2,0 нг/мг белка) составила немного более 2-х лет. Следовательно, высокие значения PAI-1 (более 2,0 нг/мг белка) в ткани опухоли следует считать благоприятным прогностиче-ским фактором относительно развития метастазов в печени у больных раком толстой кишки.

Многофакторным анализом обнаружено, что из 7 изученных нами показателей независимыми факторами прогноза следует считать ММР-9, sFas и иРА. Среди наиболее неблагоприятных сочетаний маркеров у больных раком толстой кишки необходимо выделить: высокие значения экспрессии ММР-9 в первичной опухоли с высокими исходными уровнями sFas в сыворотке крови (71 пациента, 39,6%, медиана 24,9 мес., 5-летняя безрецидивная выживаемость 21,2±15,4%). Сочетание выше указанных маркеров следует рекомендовать в клинической практике для определения индивидуального прогноза течения рака толстой кишки.

ВЫВОДЫ

При иммуногистохимическом исследовании в 48,7% опухолей толстой кишки выявили высокий (неблагоприятный) уровень экспрессии ММР-9, при этом частота выявления высокой экспрессии маркера в опухоли достоверно повышалась: при IVb стадии заболевания (80,0%), при низкой степени дифференцировки опухоли (80,0%), при наличии инвазии опухоли в кровеносные сосуды (82,4% больных).

Выявлено достоверное снижение показателей выживаемости среди больных раком толстой кишки с высокими уровнями экспрессии ММР-9 в опухоли по сравнению с низким содержанием фермента: общая 5-летняя выживаемость примерно в 3 раза, а безрецидивная выживаемость в 1,5 раза.

Обнаружили низкий (неблагоприятный) уровень экспрессии коллагена IV типа в опухоли 57,2% больных раком толстой кишки, при этом частота выявления низкой экспрессии белка достоверно повышалась: при IVb стадии заболевания (85,0%), при низкой степени дифференцировки опухоли (76,0%), при большой глубине инвазии опухоли в кишечную стенку с прорастанием всех слоев и врастанием в жировую клетчатку (75,0%), при наличии инвазии опухоли в сосуды (86,3% больных).

Показатель общей 5-летней выживаемости больных раком толстой кишки был достоверно ниже (примерно в 3 раза) при низкой экспрессии коллагена IV типа в опухоли, по сравнению с пациентами с высокой экспрессией маркера, а безрецидивная 5-летняя выживаемости достоверно не различалась между этими группами больных.

Обнаружен, достоверно высокий исходный уровень ключевого активатора неоангиогенеза VEGF в сыворотке крови больных раком толстой кишки (медиана 700 пг/мл) относительно группы контроля (медиана 301 пг/мл), при этом концентрация маркера достоверно повышалась: при IV стадии заболевания по сравнению с I и Па стадиями (показатели не отличались от группы контроля), при низкой степени дифференцировки опухоли по сравнению с высокой, при увеличении глубины инвазии опухоли в кишечную стенку, достигая максимальных значений при врастании в жировую клетчатку и при наличии инвазии опухоли в сосуды.

Показатели выживаемости больных раком толстой кишки достоверно снижались при высоких исходных уровнях VEGF в сыворотке крови (800 пг/мл и более) по сравнению с низкими его значениями (менее 400 пг/мл), а общая 5-летняя выживаемость составила 46,2±6,2% и 80,1±9,1%, соответственно, при этом 5-летняя безрецидивная выживаемость снизилась в 2,5 раза.

Наряду с увеличением концентрации VEGF в сыворотке крови больных раком толстой кишки обнаружено достоверное повышение в опухоли уровня неблагоприятно высокой экспрессии ММР-9 и одновременно низкая экспрессия коллагена IV типа.

Обнаружено более частое выявление sFas в сыворотке крови больных раком толстой кишки (57,8%) по сравнению с практически здоровыми людьми (28,6%), а содержание маркера было достоверно выше у больных (медиана 9,1 нг/мл), чем в контроле (медиана 0,9 нг/мл). При этом показатели sFas были тесно связаны с основными клинико-морфологическими характеристиками болезни и достоверно повышались при неблагоприятной высокой экс-прессии белков ММР-9 и низкой экспрессии коллагена IV типа в опухоли (медианы 10,4 и 10,0 нг/мл, соответственно).

При высоком исходном уровне sFas в сыворотке крови больных раком толстой кишки (10 нг/мл и более) выявлены достоверно низкие показатели выживаемости: общая 5-летняя выживаемость составила 37,6±7,1% (медиана 25,4 мес.), а безрецидивная (медиана 18,0 мес.).

Содержание активатора плазминогена урокиназного типа (uРА) и его ингибитора (PAI-1) в ткани опухоли больных раком толстой кишки было достоверно выше, чем в неизмененной слизистой оболочке толстой кишки. Их уровни достоверно повышались: при IV стадии болезни, при низкой степени дифференцировки опухоли и ее прорастании всех слоев стенки кишки, при наличии инвазии опухоли в сосуды, а также при неблагоприятно высоких уровнях экспрессии ММР-9 и низком содержании коллагена IV типа.

Общая 5-летняя выживаемость больных раком толстой кишки достоверно уменьшалась: при значениях uРА в ткани опухоли более 0,85 нг/мг белка (47,8±4,7%, медиана 58,9 мес.); при значениях PAI-1 более 0,5 нг/мг белка (44,3±5,0%, медиана 39,1 мес.), при значениях tPA менее 2 нг/мл (44,1±5,4%, медиана 38,8 мес.). Безрецидивная выживаемость больных раком толстой кишки достоверно различалась при пороговых значениях маркеров, которые составляли: для uРА 3 нг/мг белка; для tPA 2 нг/мг белка; для PAI-1-2 нг/мг белка.

Установлены наиболее значимые комбинации маркеров, сочетания которых указывают на: неблагоприятный прогноз общей выживаемости -- ММР9/коллаген IV типа, MMP-9/uPA, MMP-9/PAI-1, коллаген IV типа/PAI-l; высокий риск развития отдаленных метастазов MMP-9/sFas.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

На основе анализа некоторых молекулярно-биологических характеристик опухоли определены критерии для выявления наиболее прогностически неблагоприятных случаев и предрасположенности больных колоректальным раком к развитию метастазов. Так, показатели общей выживаемости больных колоректальным раком при высоком уровне экспрессии ММР-9 в первичной опухоли в 3 раза достоверно ниже, чем при низкой экспрессии белка, а 5летняя безрецидивная выживаемость пациентов ниже в 1,5 раза. Показатели общей 5-летней выживаемости больных раком толстой кишки зависели от уровня исходной концентрации ключевого активатора неоангиогенеза VEGF в сыворотке крови и при высоких его значениях (от 800 пг/мл и более) они были достоверно ниже, чем при значении VEGF менее 400 пг/мл. При этом, высокий уровень экспрессии ММР-9 в первичной опухоли больных колоректальным раком был связан с повышенными исходными уровнями VEGF в сыворотке крови. Общая 5-летняя выживаемость больных колоректальным раком при уровнях sFas в сыворотке крови от 10 нг/мл и более была достоверно ниже. Кроме того, обнаружено, что безрецидивная выживаемость больных раком толстой кишки достоверно различалась между больными по пороговому уровню 3 нг/мг белка для uРА, 2 нг/мг белка для tPA и 2 нг/мг белка для PAI-1. Многофакторный анализ выявил наиболее неблагоприятные сочетания маркеров при оценке общего прогноза рака толстой кишки: ММР9-коллаген IV типа, MMP-9-uPA, MMP-9-PAI-1, коллаген IV типа-PAI-l и при прогнозе отдаленных метастазов MMP-9-sFas.

РАБОТЫ, ОПУБЛИКОВАННЫЕ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Делекторская В.В., Перевощиков А.Г., Головков Д.А., Кушлинский Н.Е. Иммуногистохимическое исследование экспрессии Е-кадгерина, в-катенина и CD44v6 в клетках первичного рака толстой кишки и его метастазов // Архив патологии. - 2005. - том 67, №6 c.34-38.

2. Делекторская В.В., Перевощиков А.Г., Головков Д.А., Кушлинский Н.Е. Экспрессия молекул клеточной адгезии Е-кадхерина, -катенина и CD-44v6 в первичных опухолях и метастазах аденокарциномы толстой кишки // БЭБМ. 2005. том 139, №6. с.675-679.

3. Делекторская В.В., Перевощиков А.Г., Головков Д.А., Кушлинский Н.Е. Экспрессия молекул клеточной адгезии в первичных опухолях и метастазах рака толстой кишки // Материалы Российской научно-практической конференции с международным участием «Новые технологии в онкологии» (Барнаул, 7-8 июня 2005 г.). - Барнаул. - 2005. с.219-220.

4. Делекторская В.В., Перевощиков А.Г., Головков Д.А., Кушлинский Н.Е. Экспрессия молекул клеточной адгезии в метастазах аденокарциномы толстой кишки // В материалах VI Всероссийского съезда онкологов (Ростов-на-Дону, 9-14 октября 2005г.). Ростов-на-Дону 2005. с.303.

5. Делекторская В.В., Перевощиков А.Г., Головков Д.А. Экспрессия молекулярно-биологических факторов прогноза и метастазирования при раке толстой кишки // В материалах II Международной конференции «Молекулярная медицина и биобезопасность» (Москва, 20-21 октября 2005г.). М. 2005. с.115.

6. Делекторская В.В., Перевощиков А.Г., Головков Д.А., Кушлинский Н.Е. Прогностическая значимость молекул межклеточной адгезии при раке толстой кишки // В материалах XIII Российского национального конгресса «Человек и лекарство» (Москва, 3-7 апреля 2006г.). М. 2006. с.116.

7. Делекторская В.В., Перевощиков А.Г., Головков Д.А., Гольдберг В.Е., Кушлинский Н.Е. Иммуногистохимическое исследование межклеточных и клеточно-матриксных взаимодействий в аденокарциномах толстой кишки // Сибирский онкологический журнал. - 2006. № 3(19). с.99.

8. Делекторская В.В., Перевощиков А.Г., Головков Д.А. Прогностическая значимость молекул межклеточной адгезии при раке толстой кишки // В тезисах международной научно-практической конференции «Ведущий многопрофильный госпиталь страны: основные функции, достижения и направления развития» (Москва, 1-2 июня 2006г.) // Вопросы клинической онкологии и онкогематологии. М. 2006. том 1-2, №6. с.169.

9. Делекторская В.В., Перевощиков А.Г., Головков Д.А. Значение системы межклеточной и клеточно-матриксной адгезии в метастазирующих аденокарциномах толстой кишки // В материалах Российской научно-практической конференции с международным участием: «Современные методы лечения онкологических больных: достижения и неудачи» (Барнаул, 4-5 июля 2006г.). - Барнаул. -2006. с.182-183.

10. Делекторская В.В., Перевощиков А.Г., Головков Д.А., Кушлинский Н.Е. Молекулярные маркеры инвазии и метастазирования при раке толстой кишки // В материалах IV съезда онкологов и радиологов СНГ (Баку, 28 сентября 1 октября 2006г.). - Баку. - 2006. с.41.

11. Делекторская В.В., Перевощиков А.Г., Головков Д.А., Кушлинский Н.Е. Особенности экспрессии матриксных металлопротеиназ в аденокарциномах толстой кишки и их метастазах // В материалах Х Российского онкологического конгресса (Москва, 21-23 ноября 2006г.). М. 2006. с.217.

12. Делекторская В.В., Перевощиков А.Г., Головков Д.А. Молекулы межклеточной адгезии как факторы инвазии и метастазирования при раке толстой кишки // Молекулярная медицина. 2007. №1 с.50-54.

13. Делекторская В.В., Перевощиков А.Г., Головков Д.А., Кушлинский Н.Е. Прогностическая значимость экспрессии матриксных металлопротеиназ в аденокарциномах толстой кишки и их метастазах // БЭБМ. 2007. - том 143, №4. с.434-438.

14. Делекторская В.В., Перевощиков А.Г., Головков Д.А. Роль компонентов базальных мембран в процессе метастазирования аденокарцином толстой кишки // В материалах XIV Российского национального конгресса «Человек и лекарство» (Москва, 16-20 апреля 2007г.). - М. 2007. - с.85.

15. Делекторская В.В., Перевощиков А.Г., Головков Д.А., Кушлинский Н.Е. Влияние матриксных металлопротеиназ на инвазивно-метастатический потенциал клеток рака толстой кишки // В материалах XIV Российского национального конгресса «Человек и лекарство» (Москва, 16-20 апреля 2007г.). - М. 2007. - с.85-86.

16. Герштейн Е.С., Короткова Е.А., Щербаков А.М., Пророков В.В., Головков Д.А., Кушлинский Н.Е. Матриксные металлопротеиназы 7 и 9 и их тканевые ингибиторы 1 и 4 типа в опухолях и плазме крови больных раком толстой кишки // БЭБМ. 2007. - том 143, №4. с.438-442.

17. Делекторская В.В., Кушлинский Н.Е., Головков Д.А. Молекулярные маркеры инвазии и особенности прогноза рака толстой кишки // Тезисы докладов в материалах XV Российского национального конгресса «Человек и лекарство» (Москва, 14-18 апреля 2008г.). М. 2008. с.395.

18. Делекторская В.В., Головков Д.А., Кушлинский Н.Е. Прогностическая значимость содержания белка nm23 в опухолях больных раком толстой кишки // Вопросы биологической медицинской и фармацевтической химии.-2008.-№5.-с.35-41.

19. Делекторская В.В., Головков Д.А., Кушлинский Н.Е. Иммуногистохимические, биохимические и ультраструктурные особенности метастазирующих аденокарцином толстой кишки // Клиническая лабораторная диагностика.-2008.-№9.-с.19-20.

СПИСОК УСЛОВНЫХ СОКРАЩЕНИЙ

ИЛ интерлейкин

ИФА иммуноферментный анализ

ИГХ иммуногистохимическое исследование

КРР колоректальный рак

НК натуральные киллеры

МА моноклональные агонистические антитела

ПКГ программированная клеточная гибель

РТК рак толстой кишки

ЦТЛ цитотоксические лимфоциты

VEGF фактор роста эндотелия сосудов

FasL Fas-лиганд

sFas растворимый Fas

uPA активатор плазминогена урокиназного типа

tPA активатор плазминогена тканевого типа

PAI-1 ингибитор активатора плазминогена 1 типа

MMP-9 - матриксная металлопротеиназа 9

TIMP тканевой ингибитор металлопротеиназ

Размещено на Allbest.ru

...