Клеточная трансплантация при лечении хронической сердечной недостаточности
Технологии оценки резервов функциональной устойчивости клеток иммунной системы периферической крови больных хронической сердечной недостаточности. Мононуклеарные клетки аутологичного костного мозга - метод коррекции сократительной функции миокарда.
| Рубрика | Медицина |
| Вид | автореферат |
| Язык | русский |
| Дата добавления | 24.01.2018 |
| Размер файла | 122,6 K |
Отправить свою хорошую работу в базу знаний просто. Используйте форму, расположенную ниже
Студенты, аспиранты, молодые ученые, использующие базу знаний в своей учебе и работе, будут вам очень благодарны.
Размещено на http://www.allbest.ru
Размещено на http://www.allbest.ru
Введение
Современная статистика заболеваемости населения показывает, что хроническая сердечная недостаточность (ХСН), возникающая чаще всего в результате острого инфаркта миокарда, остается одной из главных проблем здравоохранения всех экономически развитых стран мира, причем в XXI столетии прогнозируется дальнейший рост численности таких больных [Hunt et al. 2005].
По данным американской ассоциации кардиологов в 2005 г. в США насчитывалось около 5 млн. человек с ХСН, тогда как по прогнозам к 2050г количество таких больных возрастет до 16 млн. человек [Robbins, 1998]. В России исследование «Эпоха» показало, что клинические признаки ХСН имеют более 8,2 млн. человек [Беленков Ю.Н. и др 2003].
В настоящее время для профилактики и лечения сердечной недостаточности используются 3 группы методов [Kirklin, Young , 2002], которые обеспечивают:
1 - профилактику тромбозов и торможение развития атеросклероза путем применения диеты, медикаментозной терапии и пропаганды здорового образа жизни;
2 - ограничение зоны повреждения и сохранения функциональной активности работоспособной зоны миокарда путем медикаментозной терапии (антиаггреганты, в-блокаторы, ингибиторы ангиотензин превращающего фермента (АПФ)) и оперативного лечения (баллонная коронарная ангиопластика, операция аортокоронарного шунтирования);
3 - замену несостоятельности сократительной функции сердца путем трансплантации сердца или имплантации искусственных аналогов левого желудочка.
Однако перечисленные методы не могут в полной мере снизить рост заболеваемости и обеспечить адекватную социальную адаптацию этих больных.
В связи с этим в последние годы получило развитие новое направление регенерационной терапии, направленное на стимуляцию регенерации миокарда путем возмещения дефицита функционально-активной ткани и/или стимуляции ее компенсаторной гипертрофии, а также стимуляции ангиогенеза с помощью современных клеточных технологий.
Трансплантация в миокард мышечных клеток - фетальных кардиомиоцитов [Sakai et al. 1999; Ю.Л. Шевченко 1999], скелетных миобластов [Atkins et al. 1999; Taylor et al. 1998; Reinecke et al. 2000], а также гладкомышечных клеток [Yoo et al. 2000, Li et al. 1996] не подтвердила заместительного механизма регенерационного действия этих клеток, но позволила выдвинуть концепцию биорегуляторного воздействия пептидов, продуцируемых трансплантированными клетками.
Именно поэтому предметом пристального изучения стали возможности восстановительной регенерации миокарда с помощью доступных и легитимных аутологичных стволовых и прогениторных клеток костного мозга (ККМ).
В настоящее время эти клетки, преимущественно клетки гемопоэтической фракции ККМ, используются для лечения острой [Straer et al. 2001-2003; Schachinger et al. 2004; Assmus et al. 2003] и хронической [Perin et al. 2004; Patel et al. 2004; Lian Ru 2006] сердечной недостаточности.
Улучшение насосной функции сердца после терапии аутологичными мононуклеарными ККМ авторы связывают преимущественно с обновленной продукцией в организме больных проангиогенных и антиапоптических цитокинов [Kinnaird et al., 2004; Dimmeler et al., 2004; Kocher et al., 2001], с регуляцией воспаления и иммунной модуляцией [Dewald et al., 2005; Thum et al., 2005], с улучшением внутриклеточной регенерации кардиомиоцитов и повышением их устойчивости к апоптозу [Minatoguchi et al., 2004; Trial et al., 2004; Chazaud et al., 2003], а также с их влиянием на пролиферацию кардиомиобластов [Anversa, 2004].
Между тем, наряду с позитивной оценкой применения ККМ у больных с ХСН в последние годы появились исследования, которые отрицают возможность улучшения сократительной функции левого желудочка у таких больных при использовании аутологичных мононуклеарных клеток костного мозга.
Отсутствие позитивного эффекта от применения аутологичных ККМ авторы этих исследований связывают с изменением состава и свойств стволовых и прогениторных ККМ больных под влиянием различных тяжелых сопутствующих заболеваний [Rota et al., 2006; Award et al., 2006; Rauscher et al., 2003; Karra et al., 2005; Messina, 2006; Lehrke et al., 2006; Gina et al., 2006; Sata, 2006; Epstein et al., 2004].
Создается впечатление, что в практике лечения ХСН разные исследователи применяют ККМ с разными и даже противоположными свойствами.
Для выяснения причин отсутствия у отдельных категорий больных позитивного эффекта от введения мононуклеарных (МНК) ККМ, мы предположили, что при ХСН как хроническом заболевании [Гольдберг Е.Д. и др. 2006] на фоне системного воспаления [Шевченко О.П. и др. 2005], и сопутствующего вторичного иммунодефицита различной степени выраженности [Ермакова Л.П., 2001], а также хронической гипоксии у больных формируется функциональная недостаточность самих гемопоэтических и иммунорегуляторных клеток КМ, которую необходимо диагностировать и корригировать до использования клеток КМ (мононуклеарной фракции клеток) в качестве терапевтического средства.
ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ.
Разработать методы диагностики и коррекции функциональной активности клеток костного мозга для обеспечения стабильного позитивного эффекта клеточной трансплантации на сократительную функцию сердца и качество жизни у больных с хронической сердечной недостаточностью.
Для достижения поставленной цели были сформулированы следующие задачи:
1. Изучить возможность применения мононуклеарных клеток (МНК) аутологичного костного мозга в качестве эффективного вспомогательного метода коррекции сократительной функции миокарда и повышения качества жизни у больных с хронической сердечной недостаточностью; выявить факторы, препятствующие реализации этих эффектов.
2. Выявить нарушения функционального состояния МНК костного мозга и их взаимосвязь с дисфункцией клеток иммунной системы периферической крови, развивающейся у больных ХСН.
3. Разработать метод индивидуальной оценки резервов функциональной устойчивости клеток иммунной системы периферической крови больных ХСН и предложить тест для прогнозирования клинической эффективности трансплантации аутологичных клеток костного мозга.
4. Разработать и применить метод индивидуального подбора иммунномодуляторов для восстановления функциональной активности иммунной системы больных ХСН (клеток костного мозга и периферической крови), обеспечивающей реализацию позитивного клинического эффекта трансплантации ККМ.
5. Показать возможность оптимизации клинического эффекта трансплантации аутологичных ККМ у больных ХСН путем 2-х этапного восстановления иммуно-биорегуляторной активности ККМ перед трансплантацией: за счет осуществления медикаментозной коррекции иммунного статуса больных in vivo и последующей активации функционального состояния МНК костного мозга in vitro при их культивировании.
6. Установить клиническую эффективность трансплантации аутологичных клеток костного мозга у больных с терминальной стадией хронической сердечной недостаточности.
7. Изучить влияние интраоперационной интрамиокардиальной трансплантации клеток костного мозга на частоту и тяжесть развития послеоперационных иммунозависимых осложнений.
НАУЧНАЯ НОВИЗНА.
Научное исследование было проведено в рамках государственного контракта № 02.435.11.3019 от «02»сентября 2005г «Использование стволовых клеток костного мозга для подержания функции сердца и поджелудочной железы» и выполнено по заказу Минздравсоцразвития РФ (регистрационный номер 0120.0 800279).
Впервые показано, что у больных с ХСН, нуждающихся в хирургической коррекции сократительной функции миокарда, состояние иммунной системы характеризуется не только вариабельными формами апоптотического иммунодефицита, но также снижением функциональной активности мононуклеарной фракции клеток костного мозга, что предопределяет отсутствие клинического эффекта от применения клеток костного мозга.
Установлено, что способность мононуклеарных клеток костного мозга к колониеобразованию находится в прямой зависимости от содержания CD25 и в обратной зависимости от содержания СD95 лимфоцитов в периферической крови.
На основании сопоставления интенсивности продукции активных форм кислорода (АФК) нативными лейкоцитами крови без и при добавлении ингибитора цАМФ фосфодиэстеразы был предложен критерий, так называемый индекс стимуляции (ИС), для прогнозирования адаптационных резервов иммунной системы и оценки пригодности клеток костного мозга для целей клеточной терапии. Установлено, что у здоровых людей численное значение ИС больше 1.0, при выраженной патологии ИС становится меньше 1.0. Было предложено использовать индекс стимуляции для оценки степени тяжести иммунодефицита в организме, а также для подбора иммунокорректоров и контроля эффективности проводимой иммунокорригирующей терапии. Новизна указанных разработок подтверждена положительными решениями о выдаче 5 патентов (положительные решения от 7.05.2007, 29.08.2007, 28.09.2007, 03.08.2007, 03.12.2007).
Установлено, что при значении ИС<0.6 и необходимости выполнения хирургической операции у больных возникает опасность возникновения тяжелых иммунозависимых осложнений в виде инфекционно-септических и органных дисфункций вплоть до развития полиорганной недостаточности.
Показано, что наиболее выраженная коррекция сократительной функции миокарда и улучшение качества жизни больных при использовании клеточной терапии достигается путем сочетанного предварительного применения индивидуально подобранной иммунокорригирующей терапии in vivo и культивирования выделенных клеток в питательных средах ex vivo перед введением их в миокард. При сочетанном применении этих процедур создаются оптимальные условия для восстановления биорегуляторной функции клеток костного мозга и клеток периферической крови, что создает условия для полной реализации регенерационных эффектов иммунной системы, как важнейшей интегративной системы регуляции гомеостаза.
Культивирование клеток костного мозга без предшествующей иммунокоррекции позволяет повысить их функциональную активность, что сопровождается изменением фенотипического состава клеток и продукцией цитокинов в культуральную среду. Однако регуляторные эффекты таких клеток после трансплантации являются недостаточными особенно у больных с выраженным иммунодефицитом.
Однократный курс иммунокоррекции без последующей трансплантации клеток, также не позволяет добиться выраженной и пролонгированной коррекции функции миокарда у больных ХСН.
Интраоперационное использование аутологичных ККМ как после культивирования, так и после культивирования в сочетании с иммунокоррекцией оказывает выраженное иммуномодулирующее действие, что проявляется снижением иммунозависимых осложнений в послеоперационном периоде, таких как гнойно-септические осложнения и полиорганная недостаточность даже при наличии инфекционно-септического анамнеза.
ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ РАБОТЫ.
Создана медицинская технология лечения больных ХСН с помощью МНК аутологичного костного мозга. Технология предусматривает контроль степени иммунной дизрегуляции в организме больных, предварительное проведение иммунокоррекции индивидуально подобранными препаратами in vivo и последующее культивирование клеток костного мозга ex vivo. Такая технология предварительной подготовки ККМ позволяет повысить сократительные свойства миокарда (увеличение ФИ и снижение КДО и КСО), а также улучшить качество жизни больных ХСН (индекс MLHFQ) и повысить их физическую активность (индекс DASI).
Предложен метод оценки степени иммунной дизрегуляции, основывающийся на определении активности лейкоцитарной суспензии в хемилюминесцентном тесте, отражающем состояние суммарных адаптационных резервов организма у больных с ИБС и ХСН. Этот показатель назван индексом стимуляции, величина его коррелирует с уровнем иммунодефицита и поэтому может использоваться для быстрой диагностики иммунной дизрегуляции. Этот показатель использован также для индивидуального подбора иммунокорректоров и контроля эффективности терапии иммуномодуляторами. Установлено, что при ИС<0.6 у больного прогнозируется выраженный иммунодефицит, сопровождающийся опасностью развития инфекционных осложнений и отсутствием эффекта от клеточной терапии. Именно таким больным должна заблаговременно проводится курсовая иммунокорригирующая терапия.
При проведении у больного полного комплекса подготовки иммунной системы и клеток костного мозга эффективность клеточной терапии достоверно повышается и сохраняется в течение 6 месяцев. Безопасность клеточной терапии позволяет рекомендовать повторные курсы клеточной терапии у больных ХСН для восстановления и поддержания сократительной функции миокарда.
Интраоперационное введение клеток костного мозга снижает летальность кардиохирургических больных и частоту развития иммунозависимых послеоперационных осложнений, а также способствует гладкому течению госпитального периода.
Положения, выдвигаемые на защиту.
1. Трансплантация аутологичных клеток костного мозга достоверно повышает сократительную функцию миокарда и улучшает качество жизни у больных хронической сердечной недостаточностью, только после предварительного осуществления коррекции иммунной дизрегуляции в организме и последующего культивирования in vitro клеток костного мозга.
2. Использование индекса стимуляции позволяет оценивать адаптационные резервы организма и может быть использован для индивидуального подбора иммунокоррегирующих препаратов.
3. Интрамиокардиальное введение клеток костного мозга во время операции аортокоронарного шунтирования достоверно снижает частоту развития послеоперационных инфекционных осложнений и летальность больных с хронической сердечной недостаточностью.
1. Характеристика клинического материала и использованных методов исследования у больных с хронической сердечной недостаточностью
миокард сердечный иммунный мононуклеарный
Для решения поставленных задач нами с 2002 по 2007 гг. проводились исследования по нескольким направлениям, сгруппированным в таблице 1.
Первоначально у 154 больных с ИБС и ХСН различной степени тяжести нами было проведено развернутое исследование иммунного статуса и сопоставление его показателей с фенотипическими и функциональными характеристиками мононуклеарных клеток аутологичного костного мозга.
На основании клинических и лабораторных исследований лейкоцитарной взвеси, полученной у 250 кардиохирургических больных, была разработана методика и тесты, позволяющие оценивать адаптационные резервы организма и тем самым прогнозировать эффективность применения аутологичных клеток костного мозга для лечения ХСН.
На основании клинических и лабораторных данных, полученных у 107 больных с ИБС и ХСН был разработан и применен метод индивидуального подбора иммунокорректоров, что обеспечивало повышение функциональной иммунорегуляторной активности всех клеток иммунной системы, в том числе и клеток костного мозга (КМ).
Оценка клинической эффективности лечения больных ИБС с ХСН с помощью мононуклеарных клеток (МНК) аутологичного КМ была проведена у 148 больных; у 89 (29+60) из этих больных проводили интрамиокардиальную трансплантацию МНК КМ во время операции аортокоронарного шунтирования (АКШ) без и с проведением иммунокоррекции. Контролем служили 50 больных с АКШ без ККМ. У 15 больных с АКШ (без трансплантации ККМ) изучено влияние предварительной (1 курс) иммунокоррекции на сократительную функцию миокарда.
У 59 (42+17) больных проводили динамическое наблюдение за восстановлением функции миокарда после интракоронарного введения МНК.
8 больных вошли в так называемую группу «пилотных исследований», которые положили начало работе по применению ККМ у больных ИБС с ХСН в клинике (у 4 больных были проведены интракоронарные инфузии и у 4 больных МНК вводили интрамиокардиально) и позволили установить безопасность метода клеточной терапии, а также расширить его изучение в клинике.
Отдельный раздел работы был посвящен оценке влияния трансплантации МНК на частоту развития иммунозависимых послеоперационных осложнений у больных, перенесших операцию АКШ (50 больных).
Контролем этой группы исследований служили 475 больных с АКШ без трансплантации МНК.
Таблица 1. Общий объем исследований, проведенных для повышения эффективности терапии больных с ХСН аутологичными ККМ
|
Серия исследования |
Группа исследования |
Больные с АКШ или протезированием клапанов сердца |
Больные с коронарографией или ангиопластикой |
Всего |
|
|
1. Изучение иммунного статуса кардиохирургических больных и сопоставление показателей с характеристиками МНК КМ. |
- |
95 |
59 |
154 |
|
|
2. Разработка методики и тестов для прогнозирования резервов индивидуальной устойчивости организма к стрессорному воздействию |
- |
250 |
0 |
250 |
|
|
3. Отработка метода индивидуального подбора иммунокорректоров |
- |
107 |
0 |
107 |
|
|
4. «Пилотные исследования» влияния ККМ у больных ХСН |
Ведение ККМ интракоронарно |
- |
4 |
8 |
|
|
Введение ККМ интрамиокардиально |
4 |
- |
|||
|
5. Применение МНК у больных ХСН |
Применение культивированных МНК интракоронарно |
42 |
- |
71 |
|
|
Применение культивированных МНК интрамиокардиально |
- |
29 |
|||
|
Применение иммунокоррекции и культивированных МНК интракоронарно |
17 |
- |
77 |
||
|
Применение иммунокоррекции и культивированных МНК интрамиокардиально |
- |
60 |
|||
|
Больные с АКШ без ККМ (контроль) |
50 |
- |
50 |
||
|
Больные с АКШ без ККМ (с иммунокоррекцией) |
15 |
- |
15 |
||
|
6. Влияния ККМ на частоту развития иммунозависимых п/о осложнений |
Больные АКШ +ККМ |
50 |
- |
50 |
|
|
Больные с АКШ без ККМ (контроль) |
475 |
- |
475 |
||
|
Всего исследований |
1257 |
В целом результаты проведенной работы основываются на анализе результатов клинического и лабораторного исследования 869 кардиохирургических больных, у которых было проведено 1257 исследований.
Поиск путей оптимизации терапии аутологичными ККМ был выполнен у 156 больных, клиническая характеристика которых представлена в таблице 2.
Таблица 2. Клиническая характеристика больных, отобранных на трансплантацию МНК аутологичного костного мозга. (n=156)
|
Параметр |
Численные значения |
|
|
Возраст |
51 + 3,2 |
|
|
Количество ИМ |
1,6+0,6 |
|
|
ФК ХСН по NYHA |
2,5+0,3 |
|
|
ФК стенокардии |
3+0,3 |
|
|
ББИ (безболевая ишемия) |
15% |
|
|
Длительность ИБС,мес. |
25+11 |
|
|
Длительность ХСН,мес. |
14+3 |
|
|
Индекс DASI, баллы |
35,7+3,8 |
|
|
Артериальная гипертония, |
61% |
|
|
Синусовый ритм |
100 % |
|
|
Наджел. экстрасистолы |
26 % |
|
|
Жел. экстрасистолы |
14 % |
|
|
в- блокаторы |
100% |
|
|
Диуретики |
32% |
|
|
Кор. ангиопластика |
9% |
|
|
Включение в лист на ТС |
16 |
При сравнении численных значений исходных параметров клинического состояния этих больных и больных, наблюдаемых в контрольной группах (без терапии ККМ) не было выявлено достоверных различий.
Методы клинического обследования кардиохирургических больных.
Обследование больных проводилось по утвержденному протоколу, включающему перечень общеклинических и специальных методов исследования.
Методы оценки кардиологического статуса больных включали: электрокардиографические, эхокардиографические, доплер-эхокардиографические исследования; зондирование правых и левых отделов сердца; коронарографию; рентгеноконтрастную вентрикулографию; радиоизотопные исследования сердца и внутрисердечные исследования, которые выполнялись по специальной программе, включающей ретроградную катетеризацию правых и левых отделов сердца с регистрацией кривых внутриполостного давления.
Функциональный класс стенокардии оценивали по классификации Канадской ассоциации кардиологов [Захаров В.Н., 2001]; функциональный класс хронической сердечной недостаточности - по Международной (Нью-Йоркской) классификации кардиологов [Ольбинская Л.И., Сизова Ж.М., 2001].
Физическую активность и качество жизни больных оценивали по:
6-минутному тесту; индексу физической активности (The Duke Activity Status Index-индекс DASI) в баллах и показателю качества жизни больных ХСН (Minnesota Living with Heart Failure Questionnaire - MLHFQ) в баллах.
Иммунологическое обследование больных (крови и костного мозга) проводили с использованием стандартных тестов, рекомендованных ВОЗ, в соответствии с разработанной схемой иммунологического обследования, адекватной для диагностики типа и степени вторичной иммунной недостаточности [Manchini et al., 1965; Новиков Д.К. 1996; Фрейдлин И.С. 1986; Ершов Ф.И. 1996; Пинегин Б.В., Ярилин В.А., 2001].
Контроль частоты возникновения послеоперационных иммунозависимых осложнений у больных, включал оценку следующих показателей:
Общую летальность (ЛЕТ); частоту развития послеоперационных инфекционных осложнений (ПИО); летальность, ассоциированную с инфекцией (ЛАИ); тяжесть инфекции (ТИ), которая рассчитывалась, как отношение количества больных, умерших от инфекции, к общему числу больных с инфекционными осложнениями; развитие полиорганной недостаточности (ПОН).
Индивидуальный подбор иммуномодуляторов для кардиохирургических больных осуществляли с помощью метода люминолзависимой хемилюминесценции (ХЛ) лейкоцитарной суспензии in vitro [Владимиров Ю.А., Шерстнев М.П. 1989] при инкубации ее с иммуномодуляторами.
Для проведения иммунокоррекции были использованы следующие препараты:
Полиоксидоний, ООО «Иммафарма» (Москва), по 6 мг в\м 1 раз в день в течение 10 дней; Имунофан, НПП «Бионокс» (Москва), по 1 мл 0, 005% р-р в/м, 1 раз в день в течение 10 дней; Циклоферон, ООО «НТФФ Полисан» (Санкт-Петербург), по 2 мл (250 мг) в/м 1 раз в день 10 дней; Реаферон, ЗАО «Вектор-Медика» (Россия), по 1 млн. МЕ в/м 1 раз в два дня 10 дней; Т-активин ОАО «БИОМЕД» (Россия), по 4-5 мкг/кг (0,04- 0,05 мл/кг) 1 раз в день подкожно 1 раз в день 5-7 дней; Тимоген, «НПО Микроген» (Россия), по 100 мкг в/м 1 раз в день в течение 10 дней.
Иммуномодуляторы назначались по стандартным схемам, рекомендованным в аннотациях к препаратам.
Технология получения, подготовки и применения аутологичных клеток КМ для трансплантации.
Технологический процесс включал: получение костномозговой взвеси клеток из подвздошной кости под местной анестезией в условиях операционной; выделение и культивирование клеток костного мозга (ККМ) в асептических условиях в ламинарном боксе с использованием чашек Петри и посевом клеток в концентрации 2,5-3*106 кл/мл сроком на 5-7 суток; подготовку взвеси аутологичных ККМ для трансплантации больному.
Трансплантацию МНК в миокард осуществляли строго по показаниям с учетом регламентированных абсолютных и относительных противопоказаний.
Обработка материала и статистический анализ проводился с помощью программы обработки данных “Cтатистка 6.0” (США, 2002г.), средствами которой выполнялось также графическое представление данных. Все расчеты выполнялись автоматически на компьютере с процессором Pentium 4 в среде Windows XP Professional., c использованием функции статистического анализа базы данных программы “Статистика 6,0” (США, 2002).
2. Результаты исследования
Особенности показателей иммунного статуса у больных ХСН.
У всех больных ХСН (n=154), которые поступили на лечение, в том числе с применением ККМ, было проведено полное обследование крови на иммунный статус, наиболее значимые результаты представлены в таблицах 3 и 4 и рис. 1.
Таблица 3. Характеристика популяционного состава лимфоцитов у больных с ХСН
|
Иммунологические показатели, % |
Здоровые доноры, n=25 |
Больные ХСН, (n=154), У |
Группа больных ХСН |
|||
|
<N |
N |
>N |
||||
|
Лейкоциты, кл/мкл |
6646±451 |
6830±552 |
3614±210* |
6749±254 |
9215±422* |
|
|
(15%) |
(61%) |
24% |
||||
|
Лимфоциты |
32,54,8 |
25,1±4,2 |
15,32,7* |
30,54,4 |
44,64,8* |
|
|
(62%) |
(7%) |
(31%) |
||||
|
Т-лимф. (CD3+) |
67,54,6 |
57,9±6,6 |
42,24,5* |
65,23,5 |
79,64,7* |
|
|
(58%) |
(8%) |
(34%) |
||||
|
Т-хел. (CD4+) |
43,13,7 |
35,9±4,8 |
27,74,4* |
42,52,5 |
55,54,6* |
|
|
(68%) |
(14%) |
(18%) |
||||
|
Т-цит. (CD8+) |
25,13,6 |
20,3±4,8 |
13,54,2* |
27,14,8 |
39,64,3* |
|
|
(68%) |
(10%) |
(22%) |
||||
|
NK-кл. (CD16+) |
13,91,6 |
17,5±3,5 |
6,72,7* |
13,52,0 |
26,65,0* |
|
|
(20%) |
(42%) |
(38%) |
||||
|
В-лим. (CD20+) |
10,11,5 |
6,7±3,5 |
6,12,0* |
10,21,2 |
14,22,2* |
|
|
(84%) |
(10%) |
(6%) |
Обозначения: * - достоверное различие по сравнению с группой здоровых доноров крови (р<0,05); в скобках указан % больных, включенных в группу, от общего числа больных ХСН.
<N - группа больных со сниженными значениями исследуемого показателя; >N - группа больных с повышенными значениями исследуемого показателя; N - группа больных с нормальными значениями исследуемого показателя.
Таблица 4. Показатели функциональной активности Т-клеток крови у больных с ХСН
|
Иммунологические показатели, % |
Здоровые доноры, n=25 |
Больные ХСН, (n=154), У |
Группа больных ХСН |
|||
|
<N |
N |
>N |
||||
|
HLA DR+ кл. |
11,53,5 |
13,5±3,3 |
5,23,2* |
13,12,0 |
26,94,4* |
|
|
(19%) |
(65%) |
(16%) |
||||
|
IL2-R(CD25+) |
3,21,6 |
2,91,1 |
1,30,4* |
3,81,0 |
8,12,2* |
|
|
(60%) |
(25%) |
(15%) |
||||
|
CD 71+ |
3,00,5 |
3,70,2 |
1,40,7* |
3,50,8 |
8,83,2* |
|
|
(25%) |
(60%) |
(15%) |
||||
|
CD 95+ |
13,1±3,1 |
17,52,2 |
7,2±2,7* |
13,9±3,3 |
25,3±3,9* |
|
|
(17%) |
(40%) |
(43%) |
Распределив всех больных в группы, различающиеся между собой по степени отклонения исследуемых показателей от нормы, нам удалось выделить те варианты отклонения показателей популяционного состава лимфоцитов и функциональной активности Т-лимфоцитов, которые были наиболее типичны для больных ХСН, поступивших на лечение в кардиохирургическую клинику (рис. 1).
Рис. 1. Распределение больных ХСН по группам (в %) в зависимости от численных значений показателей клеточного звена иммунитета. Белая часть столбиков - больные со сниженным значениями показателей; черная часть столбиков - больные с повышенными значениями показателей; серая часть столбиков - больные с нормальным значением показателей
Мы установили, что у преобладающего большинства больных ХСН выявляется: снижение (или тенденция к снижению) общего числа Т-клеток (CD3+) в периферической крови (у 58% больных) на фоне относительной (%) и абсолютной (х109) лимфопении; снижение числа Т-хелперов (CD4+) (у 68% больных) и цитотоксической фракции CD8+-клеток (у 68% больных); повышение фракции NK-клеток (CD16+) у 38% больных; снижение В-лимфоцитов (CD20+) у 84% больных.
У 16% больных с прогрессирующей формой ХСН отмечается повышение количества активированных Т-клеток (HLA DR+), а также клеток, экспрессирующих рецептор к ИЛ-2 (CD25+кл) и CD71+; но у значительного числа обследованных пациентов, т.е. у 19%, 60% и 25% соответственно выявлено снижение этих показателей ниже принятой нормы; установлено также повышение готовности Т-клеток к активационному апоптозу более чем у 43% (CD95+-клетки с экспрессией FAS-R).
Среди показателей гуморального звена свыше 50% больных имели повышенный уровень ЦИК в крови; более 80% кардиологических больных имели сниженные значения фагоцитарного числа и фагоцитарного индекса.
Результаты проведенных исследований крови позволили заключить, что больные ХСН имеют признаки общего вариабельного иммунодефицита по клеточному звену со снижением фагоцитарной активности нейтрофилов. Полагая, что выявленные изменения иммунного статуса должны найти отражения в изменении популяционного состава ККМ этих больных нами было проведено сравнительное исследование миелограммы больных и здоровых доноров костного мозга. Было установлено, что миелограммы этих двух сравниваемых групп достоверно не различались. В тоже время при фенотипической характеристике свежевыделенных МНК КМ больных было установлено снижение CD25 клеток по сравнению со здоровыми донорами КМ. Кроме того, была установлена сильная прямая корреляционная зависимость между количеством CD25 клеток в крови и числом колониеобразующих единиц МНК КМ после их культивирования (r=0,72), а также сильная обратная корреляционная зависимость между количеством CD95 клеток крови и числом колониеобразующих единиц МНК КМ этих больных (r=-0,59).
Результаты приведенного исследования позволили нам сделать предположение, что у больных ИБС с резкой дисфункцией иммунной системы и сопутствующим снижением функциональной активности ККМ - эффект от терапевтического применения мононуклеарных клеток аутологичного костного мозга будет снижен или отсутствовать.
На основании полученных данных можно заключить, что:
- для прогнозирования результатов терапии аутологичных МНК у больных ХСН должен быть разработан и использован информативный метод, основывающийся на предварительной индивидуальной оценке общих адаптационных резервов организма по состоянию биологической реактивности клеток иммунной системы;
- под контролем разработанного биологического теста должен быть разработан метод повышения адаптационных резервов организма, в том числе иммунной системы и костного мозга, что позволит повысить биологические регуляторные возможности аутологичных клеток КМ для эффективной терапии ХСН.
Разработка метода прогнозирования адаптационных резервов и индивидуальной устойчивости организма к стрессорному воздействию у больных с ХСН.
Описание выполнения способа прогнозирования адаптационных резервов.
В качестве клеточной модели использовали лейкоциты крови (ЛК), устойчивость которых к стрессорному повреждению оценивали in vitro в хемилюминесцентном тесте. Критерием устойчивости служил индекс стимуляции (ИС) ядросодержащих клеток под действием ингибитора ц-АМФ фосфодиэстеразы (иФДЭ) (10-карбоксиметил-9-акриданон), способствующего повышению уровня ц-АМФ в клетке.
Для определения ИС использовали две кюветы - контрольную и опытную, куда вносили по 40*103 ЛК. В опытную кювету дополнительно вносили 1 мкл раствора иФДЭ (12,5% р-р). В контрольную ячейку вносили 1 мкл раствора Хэнкса. Обе кюветы инкубировали в термостате в течение 60 мин при 37оС, после чего проводили запись кривых хемилюминесцентной реакции (ХЛР) клеток в контрольной и опытной кюветах с использованием хемилюминометра «Хемилюминометр -2001/01» (Россия) в комплексе с компьютером IBM-PC при температуре счетной камеры 37оС, в течение 15 мин, после добавления активатора образования активных форм кислорода - PMA (форбол-12-миристат-13-ацетат).
Суммарную продукцию (S) активных форм кислорода (АФК) ядросодержащими клетками вычисляли как площадь под кривой ХЛР отдельно в контрольной и опытной пробах. Затем, рассчитывали ИС, как отношение площади ХЛР в опытной и контрольной пробах (ИС=Sингибитор /Sконтроль), для нивелирования индивидуальных отклонений в продукции АФК у разных больных (рис. 2).
Рис. 2. Запись кривых ХЛР для расчета индекса стимуляции
Для выявления связи тяжести нарушения кинетических характеристик кривых ХЛР ЛК с уровнем адаптационных резервов организма нами проводилась также количественная оценка состояния иммунного статуса.
Оценка индивидуальной устойчивости больных к стрессу - проводилась на ЛК 250 больных, которым выполнялись реконструктивные операции на сердце (аортокоронарное шунтирование, протезирование клапанов сердца). Контролем служили исследования устойчивости ЛК 25 клинически здоровых доноров.
Проведенное исследование показало, что ХЛР ЛК на инкубацию с ингибитором у здоровых доноров и у больных с тяжелыми хроническими заболеваниями сердца имеет достоверные количественные и качественные различия.
Добавление к клеткам ингибитора у здоровых доноров повышало продукцию АФК, тогда как у больных с тяжелой хронической патологией сердца наоборот снижало ее по сравнению с контролем. Нарастание тяжести клинического состояния больных приводило к практически полному ингибированию продукции АФК при добавлении ингибитора.
Было отмечено, что больные, у которых в послеоперационном периоде развились послеоперационные осложнения имели в предоперационном периоде резко сниженный ИС, который колебался от 0,01 до 0,6. Выбрав за реперную точку ИС=0.6 и разбив всех оперированных больных по группам в зависимости от исходного значения ИС, мы отметили (таблица 6), что при ИС>0,6 процесс выздоровления больных шел достоверно быстрее, опасность развития осложнений (инфекционно- септические, органные дисфункции) была достоверно ниже, чем у больных с исходном значением ИС <0,6.
Нами было отмечено (таблица 5), что у больных с ИС <0.6 после перенесенной операции достоверно снижается уровень лимфоцитов, преимущественно СД4+ лимфоцитов, относящихся к Т- клеточной популяции.
Таблица 5. Показатели хемилюминесцентной реакции и клеточного звена иммунной системы у кардиохирургических больных до и на 7 сутки в зависимости от значений ИС в предоперационном периоде
|
Показатель |
Здоровые доноры (n=25) |
Кардиохирургические больные |
||||
|
ИС<0.6 (n=104) |
ИС>0.6 (n=146) |
|||||
|
До операции |
После операции |
До операции |
После операции |
|||
|
S, (103/у.е.) |
352,155,2 |
277,115,9 |
151,133,2* |
333,011,1+ |
240,230,3*+ |
|
|
ИС |
2,500,31 |
0,570,04 |
0,080,02* |
0,860,08+ |
0,440,10*+ |
|
|
Лейк. кл/мкл |
6646±451 |
6850±854 |
10750±450* |
6920±655 |
9840±955 |
|
|
Лимф., % |
32,54,8 |
20,32,3 |
14,42,6* |
27,12,1 |
25,43,3+ |
|
|
Т-лим.,% |
67,54,6 |
56,23,1 |
44,51,1* |
63,31,1 |
58,21,2+ |
|
|
Т-хел.,% |
43,13,7 |
35,14,2 |
30,01,1* |
41,32,7 |
37,33,2+ |
|
|
Т-цит.,% |
25,13,6 |
22,23,5 |
14,13,1 |
20,32,2 |
21,12,1+ |
|
|
В-лим.,% |
10,11,5 |
6,41,1 |
6,32,1 |
6,91,7 |
6,52.2 |
|
|
NK-лим.,% |
13,91,6 |
15,12,2 |
13,11,4 |
18,92,0 |
16,11,3 |
|
|
CD71+, % |
3,00,5 |
3,81,4 |
7,2±2,3* |
3,12,3 |
6,4±1,1* |
*- достоверно, по сравнению с исходным уровнем (р<0,05).
+ - достоверно, по сравнению с группой ИС<0,6 (р<0,05).
Сопоставление результатов клинического наблюдения и лабораторных исследований позволяет придти к заключению, что степень исходного снижения ИС и других показателей ХЛР прогнозирует не только опасность развития и тяжести иммунозависимых осложнений в послеоперационном периоде, но и степень дисфункции иммунной системы.
Рассматривая ИС в качестве показателя адаптивных резервов устойчивости организма мы полагали, что подбор иммуномодуляторов и контроль медикаментозно регулируемого восстановления сниженных адаптационных резервов организма с помощью иммунокорректоров также должен осуществляться путем динамического измерения ИС, который, по сути, отражает резервы клеток иммунной системы к продукции АФК.
Пути восстановления биорегуляторной активности клеток аутологичного костного мозга у больных ХСН.
Оценка эффективности иммунокоррекции в организме при индивидуальном подборе иммуномодуляторов методом хемилюминесценции.
В исследование были включены пациенты, у которых была выполнена кардиологическая операция (АКШ или протезирование клапанов сердца) и которые нуждались в проведении иммунокоррекции (на основании анализа результатов клинического и лабораторного обследования больных). Все больные были разделены на две группы:
В I-ю - основную группу - были включены пациенты, получавшие курсовую терапию подобранным иммуномодулятором (10 инъекций), который в ХЛ-тесте был определен, как предпочтительный препарат (n=53) для иммунокоррекции.
Препаратом выбора считали иммуномодулятор, индекс стимуляции лейкоцитов которым был больше 1,1.
Во II-ю группу - сравнения были включены пациенты, также получавшие курсовую терапию иммуномодулятором (10 инъекций), который назначался произвольно при выявлении отклонений в иммунограмме без специального подбора (n=54).
Препараты у больных каждой группы назначались в средне терапевтических суточных дозах, указанных в аннотациях.
Результаты изменения лейкоцитарной формулы и показателей клеточного звена иммунитета, наступающие при индивидуально подобранной и произвольно назначенной иммунокоррекции, представлены в таблице 6 и таблице 7.
Таблица 6 Динамика показателей лейкоцитарной формулы крови у больных при проведении иммунокоррекции на основе индивидуального подбора и произвольного назначения иммуномодулятора (ИМ)
|
Показатель, % |
Здоровые доноры (контрольная группа) (n=25) |
Индивидуальный подбор ИМ (группа I) (n=53) |
Произвольное назначение ИМ (группа II) (n=54) |
|||
|
Исходные значения |
Через 14 дней после начала лечения |
Исходные значения |
Через 14 дней после начала лечения |
|||
|
Лимфоциты |
32,56,8 |
16,7±2,2* |
30,0±2,0+ |
17,3±1,6* |
24,2±1,9+ |
|
|
Нейтр. (с/я) |
60,5 ±1,6 |
61,0±2,8 |
62,3±2,6 |
60,5±2,3 |
59,3±1,9 |
|
|
Нейтр. (п/я) |
4,5±1,1 |
11,1±0,7* |
6,1±1,3+ |
12,2±2,5* |
9,0±1,4* |
|
|
Моноциты |
2,9±0,5 |
7,3±1,7* |
2,6±0,5 + |
7,3±0,6* |
4,6±0,8+ |
|
|
Базофилы |
0,8±0,1 |
0,1±0,2 |
0,1±0,2 |
0,2±0,4 |
0,1±0,4 |
|
|
Эозинофилы |
2,9±0,4 |
3,2±0,5 |
2,1±0,6 |
3,2±0,6 |
3,8±0,6 |
* - достоверное различие со здоровыми донорами (р<0,05)
+ - достоверное различие с исходным уровнем (р<0,05)
Из таблиц видно, что предварительный индивидуальный подбор ИМ in vitro способствовал развитию у больных достоверно более благоприятных изменений ряда исследуемых показателей: в лейкоцитарной формуле наступало достоверное снижение палочкоядерных нейтрофилов, в иммунограмме - повышение уровня лимфоцитов, Т-лимфоцитов и их основных субпопуляций, В-лимфоцитов. Уменьшались признаки воспалительной реакции (снижение HLA-DR) и нормализовался уровень CD25 лимфоцитов. При этом нормализация клеточного звена проходила с нарастанием пролиферативной способности лимфоидных клеток (CD71+).
Таблица 7. Динамика показателей клеточного звена иммунитета у кардиологических больных при курсовом проведении иммунокоррекции на основе индивидуального подбора (основная группа) и произвольного назначения (группа сравнения) иммуномодуляторов
|
Показатель, % |
Здоровые доноры (контроль) (n=25) |
Индивидуальный подбор ИМ (группа I) (n=53) |
Произвольное назначение ИМ (группа II) (n=54) |
|||
|
Исходные значения |
Через 14 дней после начала лечения |
Исходные значения |
Через 14 дней после начала лечения |
|||
|
Лейк., кл/мкл |
6646±451 |
10218±675* |
8705±675*+ |
10358±567* |
7850±555* |
|
|
Лимфоциты,% |
32,5±6,8 |
16,7±2,2* |
30,0±2,0+ |
17,3±1,6* |
24,2±1,9*+ |
|
|
Т-лим. (CD3) |
67,5±4,6 |
50,2±4,3* |
69,8±2,5+х |
49,5±4,1* |
58,4±4,4 |
|
|
Т-хел. (CD4) |
43,9±3,7 |
34,4±3,1* |
45,5±1,4+х |
33,4±3,4* |
40,1±5,1 |
|
|
Т-цит.(CD8) |
25,1±3,6 |
16,1±2,5* |
25,7±2,0+х |
17,0±2,2* |
18,7±1,2* |
|
|
В-лим.(CD20) |
10,1±1,5 |
6,9±1.9* |
8,6±0,9 + |
6,1±2,0* |
6,3±1,1* |
|
|
NK-кл (CD16) |
13,9±1,6 |
13,8±1,4 |
16,5±2,0 |
11,7±2,9 |
19,5±2,9*+ |
|
|
HLA-DR |
11,5±3,5 |
13,0±1,1 |
15,7±1,7 |
16,8±2,5 |
17,6±2,1* |
|
|
CD25-кл |
3,2±1,6 |
2,0±0,1 |
6,6±0,9*+ |
1,9±1,1 |
2,8±1,2 |
|
|
CD71 |
3,0±0,5 |
6,6±1,7* |
11,0±2,8* + |
3,1±1,2 |
8,7±2,0* |
|
|
СD 95 |
13,1±3,1 |
15,0±2,8 |
8,3±2,9+ |
17,2±2,7 |
16,9±3,3 |
* - достоверное различие по сравнению со здоровыми донорами (р<0,05);
Х - достоверное различие с группой сравнения (р<0,05);
+ - достоверное различие по сравнению с исходным уровнем (р<0,05);
Таким образом, проведенное исследование показало, что индивидуальный подбор иммунокорректоров больным ХСН существенно и достоверно повышает иммунорегуляторные свойства клеток крови этих больных по сравнению с произвольным назначением иммунокорригирующих препаратов.
Повышение функциональной активности клеток костного мозга при проведении иммунокоррекции.
Использовав для оценки адекватности иммунокоррекции разработанный нами показатель - индекс стимуляции (ИС) в хемилюминесцентном тесте мы сопоставили содержание клеток CD25+, CD95+ и количество колониеформирующих единиц (КОЕ) в свежевыделенных МНК костного мозга у больных с ИС <1.0 и больных, у которых ИС стал >1.0, через 14 суток после иммунокоррекции (рис. 3).
Рис. 3. Влияние значений ИС лейкоцитарной взвеси периферической крови на взаимозависимые показатели функциональной активности МНК костного мозга (колониеобразующие единицы) у больных ХСН с ИС <1 (черный столбик); восстановление ИС>1 (черно-белый столбик); здоровые доноры (белый столбик)
Результаты измерения содержания CD25 и CD95 в крови, а также число колониеформирующих единиц в мононуклеарной фракции КМ подтвердили, что медикаментозная иммунокоррекция является эффективным способом повышения функциональной активности ККМ.
Культивирование мононуклеарных клеток костного мозга in vitro - дополнительный способ повышения их функциональной активности.
Проведенные исследования позволили установить, что культивирование МНК КМ in vitro всегда изменяет фенотипический состав клеток (рис. 4) и этот факт мы стали рассматривать как доказательство изменения функциональных характеристик клеток в процессе культивирования.
Рис. 4. Фенотипический состав мононуклеарной фракции клеток костного мозга двух больных до и после культивирования. Темные столбики - до культивирования; Светлые столбики - после культивирования
Вместе с тем мы отметили, что характер и выраженность возникающих изменений у разных больных различна и коррелирует с исходным значением ИС ЛК крови этих больных и клиническим эффектом после их применения.
Так у больного с тяжелой ХСН (рис. 4Б) клинический эффект на применение аутологичных культивированных клеток был слабо выраженным и этот эффект соответствовал ИС <1.0. У другого больного, также с ХСН (рис. 4 А), ККМ отреагировали на культивирование резким увеличением практически всех популяций клеток, а после применения этих клеток у больного был получен отчетливо выраженный позитивный клинический эффект (ИС его лейкоцитов был > 1.0).
У больного с позитивной клинической реакцией на введение ККМ, наступали не только отчетливые количественные изменения в популяционном составе клеток, но и резко увеличивалось в культуральной среде содержание TGF-в и G-CSF. У больного с отсутствием выраженной позитивной реакции на введение аутологичных ККМ - накопление цитокинов в культуральной среде было незначительным также как невыраженными были изменения в фенотипическом составе клеток после культивирования (рис. 5).
Рис. 5. Интенсивность накопления цитокинов в культуральной среде (за 5 суток культивирования) мононуклеарными клетками костного мозга, оказывающих различный клинический эффект при их аутологичном применении. Светлые столбики- позитивный клинический результат (ИС >1.0); черные столбики - клинический эффект отсутствовал, ИС ?1.0
Результаты проведенного исследования позволили нам признать пригодность хемилюминесцентного метода и процедуры культивирования клеток для прогнозирования функциональных (адаптационных) резервов иммунной системы больных (в том числе МНК КМ), а также возможность повышения этих резервов с помощью медикаментозной иммунокоррекции в организме больного и в меньшей степени путем предварительного культивирования МНК КМ in vitro.
Влияние культивированных мононуклеарных клеток аутологичного костного мозга на показатели сократительной функции сердца и качество жизни больных ХСН (I этап исследования).
Интракоронарное введение культивированных клеток костного мозга в миокард.
Анализ результатов интракоронарного применения ККМ без хирургической коррекции был выполнен в двух группах больных ХСН. В 1-ю группу были включены больные, внесенные в лист ожидания трансплантации сердца (n=13), т.е. имели терминальную стадию поражения миокарда. Среди них было 3 больных с ишемической кардиомиопатией (ИКМП) и 10 больных с дилатационной кардиомиопатией (ДКМП). Этим больным интракоронарно вводили 150-500*106 МНК аутологичного КМ однократно (n=11) или многократно (n=2) (3-4 раза) в тех же дозах.
Во вторую группу было включено 29 больных с ИКМП, причем у 25 из них был поставлен диагноз ИБС с постинфарктным кардиосклерозом и ХСН (ФК II-IV по NYHA); у 4 больных - ИБС с рефрактерной стенокардией (ФК II-IV по NYHA). Эти больные получали интракоронарно ту же дозу клеток, что и в I группе, но всегда однократно.
Как в первой, так и во второй группе больных проводилась традиционно используемая медикаментозная терапия миокарда, без его хирургической реваскуляризации. В 1-й группе уже через 2 месяца после введения ККМ отчетливо позитивно менялись клиническое состояние, качество жизни и индекс физической активности (таблица 8).
Таблица 8. Изменение показателей клинического состояния больных, ожидающих пересадку сердца до и через 2 мес. после интракоронарной трансплантации аутологичных МНК костного мозга, n=13
|
Показатель |
До введения МНК КМ М±м |
Через 2 мес. после введения МНК КМ М±м |
Значение p (по критерию Манна-Уитни) |
|
|
Индекс физической активности DASI,баллы |
21,7±6,1 |
38,2±7,6 |
0,002 |
|
|
Качество жизни, MLHFQ, баллы |
76,2±12,4 |
46±11,4 |
0,0025 |
|
|
Проба с 6-минутной ходьбой, м |
150±76 |
315±52 |
0,03 |
Примечание: индекс DASI - более высокие показатели соответствуют более высокой физической активности. Индекс MLHFQ - более высокие показатели соответствуют менее высокому качеству жизни.
Однако, позитивная динамика указанных показателей сохранялась не более 2-3 мес., после чего требовались повторные интракоронарные инфузии клеток, которые позволили 2 больным с ДКМП в течение 2 лет дождаться трансплантации донорского сердца. Во II группе больных влияние клеточной терапии на показатели функции сердца оценивали через 6 месяцев после трансплантации, причем первоначально при оценке результатов клеточной терапии не учитывались исходные индивидуальные характеристики больного и прежде всего исходный ИС лейкоцитов крови, отражающий функциональную активность используемых ККМ. В результате при такой оценке достоверного улучшения показателей функции миокарда нами не было обнаружено.
Проведя корреляционный анализ между показателями насосной функции сердца - конечным диастолическим и систолическим объемами (КДО и КСО) через 6 месяцев после трансплантации с одной стороны и исходной функциональной активностью клеток костного мозга (Индекс стимуляции), возрастом больного, длительностью СН, количеством вводимых клеток, показателями Т- клеточного звена иммунной системы, показателями функциональной активности лимфоцитов периферической крови с другой стороны - нами было выявлено существование сильной корреляционной связи в следующих 6 парах (таблица 9).
Таблица 9. Факторы, влияющие на ремоделирование ЛЖ у больных с ИБС через 6 мес. после интракоронарного введения МНК КМ
|
Корреляционные пары |
Spearman R |
p-level |
|
|
Длительность СН - ДКСО ЛЖ 6 мес. |
0,73 |
0,04 |
|
|
Длительность СН - ДФИ ЛЖ 6мес. |
-0,40 |
0,049 |
|
|
Индекс стимуляции - ДКДО ЛЖ 6 мес. |
-0,78 |
0,0005 |
|
|
Индекс стимуляции - ДКСО ЛЖ 6 мес. |
-0,59 |
0,008 |
|
|
Индекс стимуляции - ДDASI мес. |
0,45 |
0,04 |
|
|
Индекс стимуляции - ДУО ЛЖ 6 мес. |
0,58 |
0,01 |
Примечание: Д - дельта изменения показателя, %, рассчитывалась по Ребровой О.Ю. (2002).
Установив значимость ИС в реализации терапевтического эффекта введенных МНК на миокард мы для выявления результатов клеточной терапии разделили всех этих больных на две подгруппы: с ИС <1 и ИС>1 (таблица 10).
Таблица 10. Значения параметров сократительной функции сердца и индекса физической активности у больных ХСН через 6 мес. после интракоронарного введения культивированных клеток костного мозга в зависимости от значений ИС лейкоцитов крови больных
|
Параметры |
Больные ИБС |
|||
|
Исходный ИС<1 (n=11) |
Исходный ИС>1 (n=18) |
p Манна-Уитни |
||
|
Д КДО ЛЖ, %, 6 мес. |
1,2±4.1 |
-9,1±5.1 |
0,049 |
|
|
Д ФИ ЛЖ, %, 6 мес. |
7,1±4.9 |
10,2±8.7 |
0,12 |
|
