Синтез, свойства и биологическая активность продуктов взаимодействия 1,2,4-триазолов с тииранами

С целью изучения взаимосвязи «структура - активность» в ряду производных тиетанилазолилсульфанилуксусных кислот нами были синтезированы соли, эфиры, гидразиды и арилметилиденгидразиды 2-[1-(тиетан-3-ил)бензимидазолил-2-сульфанил]уксусной кислоты (схема 10).



Схема 10

Реакции триазола 2.84 с 3-5-кратным мольным избытком первичных и вторичных алифатических аминов проводят при кипячении в н-бутаноле в течение 3-10 ч. 5-Аминозамещенные 3-бром-1-(тиетан-3-ил)-1,2,4-триазолы (2.97, 2.99, 2.101, 2.102, 2.148 - 2.152) образуются с выходом 25-98% (схема 11).

Схема 11

В спектрах ЯМР ¹Н 5-аминопроизводных 2.97, 2.99, 2.101 содержатся характерные сигналы протонов тиетанового цикла и фрагментов соответствующих аминов. Сохранение симметричного тиетанового цикла подтверждается также спектром ЯМР ¹³С 5-пиперидинилзамещенного 2.99, в котором содержатся два сигнала с химическими сдвигами 34,18 и 52,75 м.д., принадлежащие атомам углерода S(CH₂)₂- и NCH-групп. Смещение сигнала атома углерода С⁵ триазольного цикла в область слабых полей на 18,7 м.д. по сравнению с аналогичным сигналом тиетанилтриазола 2.84 подтверждает замещение атома брома в положении С⁵ триазольного цикла.

В продолжение изучения химических свойств триазола 2.84 нами исследовано его взаимодействие с гидразингидратом. Установлено, что при кипячении соединения 2.84 с 5-кратным мольным избытком гидразингидрата в н-бутаноле в течение 1 ч образуется 3-бром-5-гидразино-1-(тиетан-3-ил)-1,2,4-триазол (2.153) с выходом 75% (схема 11). При взаимодействии 5-гидразинотриазола 2.153 с 1,1-кратным мольным избытком ароматических карбонильных соединений получают его арилметилиденпроизводные (2.154 - 2.163) с выходом 43 -94% (схема 11).

Строение синтезированных 5-гидразино- и 5-арилметилиденгидразинотриазолов подтверждено ИК-, ЯМР ¹Н-, ¹³С- и масс-спектрами. Наличие только одного набор сигналов остатка карбонильного соединения в ЯМР ¹Н- и ¹³С-спектрах арилметилиденгидразинотриазолов, нерасщепленность синглета NH-группы свидетельствуют о присутствии только одного стерически более выгодного Е-изомера.

С целью изучения взаимосвязи «структура - активность» в ряду синтезированных 5-арилметилиденгидразинотиетанилазолов нами были синтезированы 2-арилметилиденгидразины 1-(тиетан-3-ил)бензимидазола (схема 12), среди которых найдены биологически активные соединения.

Схема 12

6. Синтез и свойства 5-замещенных 3-бром-1-(1-оксотиетан-3-ил)-1,2,4-триазолов

Исследование реакционной способности 3,5-дибром-1-(тиетан-3-ил)-1,2,4-триазола 2.84 показало, что тиетановый цикл устойчив к действию O-, S- и N-нуклеофилов. Увеличение степени окисления атома серы тиетанового цикла приводит к повышению электрофильных свойств последнего и, следовательно, к уменьшению его устойчивости к действию нуклеофилов.

Нами исследованы реакции окисления 3-бром-1-(тиетан-3-ил)-1,2,4-триазолов, содержащих в положении С⁵ бром, алкокси-, фенокси-, этилсульфанил- и фенилсульфанильные группы, а также фрагмент пиперидина. В качестве окислителя использовался пероксид водорода в среде ледяной уксусной кислоты.

Установлено, что оптимальными условиями окисления тиетанилтриазолов 2.84, 2.85, 2.87, 2.93, 2.95, 2.99, 2.103, 2.104 2.106 - 2.109 являются проведение реакции при комнатной температуре в среде ледяной уксусной кислоты с 2-кратным мольным избытком 37% раствора пероксида водорода (схема 13). Для окисления 5-этилсульфанил- и 5-фенилсульфанил-3-бром-1-(тиетан-3-ил)-1,2,4-триазолов 2.110 и 2.112 используют 4-кратный мольный избыток пероксида водорода. 5-Замещенные 3-бром-1-(1-оксотиетан-3-ил)-1,2,4-триазолы (2.169, 2.171-2.180) и 3,5-дибром-4-(1-оксотиетан-3-ил)-1,2,4-триазол (2.170) образуются с выходом 19-82% (схема 13).

Схема 13

Окисление тиетанового цикла до тиетан-1-оксидного с образованием цис- и транс-изомеров подтверждается данными ЯМР-спектроскопии. В ЯМР ¹Н спектрах соединений 2.169 - 2.172, 2.174, 2.176, 2.180 сигналы протонов тиетан-1-оксидного цикла удвоены. Сигналы протонов NCH- и одной S(CH₂)-группы цис-тиетан-1-оксидного цикла смещены в область слабых полей в среднем на 0,38 и 0,29 м.д., а второй S(CH₂)-группы- в область сильных полей на 0,12 м.д. относительно сигналов аналогичных групп тиетанового цикла. Для транс-изомеров оксотиетанилтриазолов характерно смещение сигналов протонов двух S(CH₂)-групп в область слабых полей на 0,63 и 0,08 м.д., а NCH-группы - в область сильных полей на 0,86 м.д. относительно сигналов соответствующих протонов тиетанового цикла. В ряду 5-замещенных 3-бром-1-(1-оксотиетан-3-ил)-1,2,4-триазолов преобладающим является цис-изомер.

Образование тиетан-1-оксидного подтверждается также ЯМР ¹³С-спектром соединения 2.169, в котором сигналы атомов углерода S(CH₂)₂ группы смещены в область слабых полей по сравнению с неокисленным тиетановым циклом и регистрируются при 56,56 м.д. (цис-) и 58,98 м.д. (транс-). Кроме того, цис-расположение связей S=O и N-CH сдвигает сигнал атома углерода NCH-группы цис-изомера в область слабых полей на 8 м.д. (51,16 м.д.) по сравнению с аналогичным сигналом углеродного атома транс-изомера (43,07 м.д.).

Продолжая изучение химических свойств продуктов тииран-тиетановой перегруппировки, нами исследованы реакции 3,5-дибром-1-(1-оксотиетан-3-ил)-1,2,4-триазола 2.169 со спиртами, тиогликолевой кислотой и аминами. Установлено, что реакции соединения 2.169 с алкоголятами натрия приводят к осмолению реакционной смеси и образованию продуктов, которые не удалось идентифицировать.

В результате реакции триазола 2.169 с тиогликолевой кислотой при кипячении в этаноле в присутствии калия гидроксида получают 2-[3-бром-1-(1-оксотиетан-3-ил)-1,2,4-триазолил-5-сульфанил]уксусную кислоту, которая хорошо растворима в воде и выделена в виде калиевой (2.183) и натриевой солей (2.184) с выходом 69 и 60% (схема 14). При нагревании соли 2.183 в среде этанола в присутствии концентрированной серной кислоты получают этиловый эфир (2.185) с выходом 60% (схема 14).

Схема 14

Реакции триазола 2.169 с избытком первичных и вторичных алифатических аминов проводят в н-бутаноле (схема 15).

Схема 15

В результате нуклеофильного замещения атома брома в положении С⁵ триазольного цикла образуются 5-аминозамещенные 3-бром-1-(1-оксотиетан-3-ил)-1,2,4-триазолы (2.180, 2.186 -2.192) с выходом 36-92%, и сохраняется тиетан-1-оксидный цикл (схема 15). Соединение 2.180, синтезированное реакцией оксотиетанилтриазола 2.169 с пиперидином идентично образцу, полученному окислением 3-бром-1-(тиетан-3-ил)-5-(пиперидин-1-ил)-1,2,4-триазола 2.99.

Реакцией оксотиетанилтриазола 2.169 с гидразингидратом получают 3-бром-5-гидразино-1-(1-оксотиетан-3-ил)-1,2,4-триазол (2.193) с выходом 41 % (схема 15). 5-Арилметилиденгидразино-3-бром-1-(1-оксотиетан-3-ил)-1,2,4-триазолы (2.194 - 2.200) образуются при взаимодействии гидразина 2.193 с ароматическими альдегидами и кетонами с выходом 68-100 % (схема 15).

Строение синтезированных соединений подтверждено ИК, ЯМР ¹Н-, ¹³С- и масс-спектрами. В спектрах ЯМР ¹Н 5-аминопроизводных 2.180, 2.186 наблюдаются характерные сигналы протонов цис- и транс-изомеров тиетан-1-оксидного цикла и фрагментов соответствующих аминов. Преобладающим является цис-изомер.

Спектры ЯМР ¹Н и ¹³С 5-арилметилиденгидразинов 3-бром-1-(1-оксотиетани-3-ил)-1,2,4-триазола содержат один набор сигналов тиетан-1-оксидного цикла, который по значению химических сдвигов протонов находится в цис-конфигурации, и фрагмента гидразона, что свидетельствуют о присутствии только одного стерически более выгодного Е-изомера относительно C=N связи.

7. Синтез и свойства 1-(1,1-диоксотиетан-3-ил)-1,2,4-триазолов и 3-замещенных тиетан-1,1-диоксидов

Согласно литературным данным тиетан-1,1-диоксиды могут быть получены реакциями тиетанов или тиетан-1-оксидов с избытком окислителей, например, надкислот или пероксида водорода в среде уксусной кислоты.

Нами исследованы реакции окисления 1-(тиетан-3-ил)- и 1-(1-оксотиетан-3-ил)-3-бром-1,2,4-триазолов, содержащих в положении С⁵ бром, алкокси-, фенокси-, этилсульфанил- и фенилсульфанильные группы.



Схема 16

Реакции окисления тиетанилтриазолов 2.83-2.85, 2.87, 2.90, 2.93, 2.95, 2.103 - 2.110, 2.112 проводят 10-кратным мольным избытком 37% раствора пероксида водорода в среде ледяной уксусной кислоты при кипячении 0,5-1 ч. 1-(1,1-Диоксотиетан-3-ил)-1,2,4-триазол (2.201), 3,5-дибром-4-(1,1-диоксотиетан-3-ил)-1,2,4-триазол (2.203), 5-замещенные 3-бром-1-(1,1-диоксотиетан-3-ил)-1,2,4-триазолы (2.202, 2.204 -2.216) образуются с выходом 16 - 96% (схема 16). Соединения 2.209, 2.211, 2.213,2.215, 2.216 получают также окислением соответствующих оксотиетанилпроизводных 2.174, 2.176, 2.178, 2.181, 2.182 с выходом 61-78% (схема 16).

Окисление тиетанового цикла до тиетан-1,1-диоксидного подтверждают данные ЯМР ¹Н-, ¹³С и ИК-спектроскопии. В ЯМР ¹Н спектрах диоксотиетанилтриазолов наблюдается характерное смещение сигналов протонов двух S(CH)₂ - групп тиетандиоксидного цикла в область слабых полей на 1,3 и 0,8 м.д., сигнала протона NCH - группы - в область сильных полей на 0,1 м.д. относительно сигналов соответствующих сигналов протонов тиетанилтриазолов.

В спектре ЯМР ¹³С соединения 2.202 наблюдается разнонаправленное смещение сигналов атомов углеродов тиетан-1,1-диоксидного цикла: сигнал атомов углерода S(CH₂)₂ -группы смещен в слабопольную область на 37,5 м.д., а сигнал атома углерода NCH-группы - в сильнопольную область на 14,7 м.д..

Нами изучены химические свойства диоксотиетанилтриазолов в реакциях с О-, S- и N-нуклеофилами.

Реакции 3,5-дибром-1-(1,1-диоксотиетан-3-ил)-1,2,4-триазола 2.202 с первичными, вторичными и третичными спиртами проводят при нагревании с эквимольным количеством алкоголята натрия в соответствующем спирте в течение 0,5 ч (схема 17). В случае соединения 2.224 реакцию проводят при кипячении реагентов в 1,4-диоксане. Установлено, что образуются 3-алкокситиетан-1,1-диоксиды (2.217 - 2.224) с выходом 20 - 90% и триазол 2.5.

Схема 17

По-видимому, при взаимодействии 3,5-дибром-1-(1,1-диоксотиетан-3-ил)-1,2,4-триазола 2.202 с алкоксид-ионом происходит элиминирование тиет-1,1-диоксида, который вступает в реакцию присоединения спиртов по Михаэлю с образованием 3-алкокситиетан-1,1-диоксидов.

Нами установлено, что при взаимодействии триазола 2.202 с фенолятами натрия, в среде бензола или низших спиртов происходит элиминирование тиетандиоксидного цикла, и образуются 3-арилокситиетан-1,1-диоксиды (2.236 - 2.239) с выходами 57 - 79% (схема 17). 3-Фенокситиетан-1,1-диоксид 2.236, синтезированный реакцией триазола 2.202 с фенолятом натрия, идентичен образцу, полученному окислением 3-фенокситиетана пероксидом водорода в среде ледяной уксусной кислоты.

В случае реакции триазола 2.202 с 2,4-дихлорфенолом нами неожиданно выделен 3-бром-5-(2,4-дихлорфенокси)-1-(1,1-диоксотиетан-3-ил)-1,2,4-триазол (2.213), который не дает депрессии температуры плавления пробы смешения с образцом соединения 2.213, полученным окислением соответствующего тиетанилтриазола 2.208, а их ИК-спектры полностью совпадают.

Образование 3-алкокси- и 3-арилокситиетан-1,1-диоксидов подтверждается данными ЯМР ¹Н- и ¹³С-спектроскопии. В спектрах ЯМР ¹³С 3-алкокситиетан-1,1-диоксидов 2.218, 2.222 отсутствуют сигналы атомов углерода 1,2,4-триазольного цикла, и содержатся сигналы атомов углерода S(CH₂)₂-группы тиетандиоксидного цикла около 71 м.д. и ОСН-группы при 58 м.д..

В ЯМР ¹Н-спектрах тиетан-1,1-диоксидов 2.217 - 2.224, 2.236 - 2.239 регистрируются сигналы протонов тиетан-1,1-диоксидного цикла и сигналы протонов заместителе по положению С³. Например, в спектре ЯМР ¹Н соединения 2.236 регистрируются три мультиплета ароматических протонов в интервалах 6,78 - 6,87, 7,02 - 7,11 и 7,29 - 7,39 м.д..

Нами также изучены реакции 5-замещенных 3-бром-1-(1,1-диоксотиетан-3-ил)-1,2,4-триазолов 2.204, 2.206, 2.208-2.216 с алкоголятами натрия (схема 18). Установлено, что при взаимодействии с этилатом натрия происходит элиминирование тиетандиоксидного цикла, и образуются 3-алкокси- (2.225 - 2.227), 3-арилокси- (2.228 - 2.233), 3-этилсульфонил- и 3-фенилсульфонил-5-бром-1Н-1,2,4-триазолы (2.234, 2.235) с выходами 20 - 80% и 3-этокситиетан-1,1-диоксид 2.218. Реакции 5-изо-пропокси- и 5-фенокси-3-бром-1-(1,1-диоксотиетанил-3)-1,2,4-триазолов с изо-пропилатом или трет-бутилатом натрия также приводят к образованию 3-замещенных 5-бром-1Н-1,2,4-триазолов.



Схема 18

В ЯМР ¹Н-спектрах соединений 2.226, 2.234 отсутствуют сигналы протонов тиетан-1,1-диоксидного цикла. В ИК-спектрах соединений 2.225 - 2.233 отсутствуют полосы поглощения валентных колебаний связей SO₂, и появляется группа полос в области 2889 - 3294 см^-1, принадлежащая валентным колебаниям ассоциированной N-H связи.

Реакции диоксотиетанилтриазола 2.202 с этилтиолятом или фенилтиолятом натрия также приводят к элиминированию тиетан-1,1-диоксидного цикла и образованию 3-этилсульфанил- (2.240) или 3-фенилсульфанилтиетан-1,1-диоксидов (2.241) с выходом 79 и 95% (схема 19).

Схема 19

Окислением соединений 2.240, 2.241 пероксидом водорода синтезируют 3-сульфонильные производные (2.267, 2.268) с выходом 52 и 49% соответственно (схема 19). В спектре ЯМР ¹³С соединения 2.268 отсутствуют сигналы атомов углерода 1,2,4-триазольного цикла, и регистрируются сигналы атомов углерода тиетандиоксидного цикла и углеродных атомов бензольного кольца.

Однако реакция с тиогликолевой кислотой протекает по положению С⁵ триазольного цикла с образованием 2-[3-бром-1-(1,1-диоксотиетан-3-ил)-1,2,4-триазолил-5-сульфанил]уксусной кислоты (2.242) (схема 19).

Кислота 2.242 реагирует со щелочами и аминами сообразованием соответствующих водорастворимых солей (2.243 - 2.252, схема 19). При нагревании кислоты 2.242 со спиртами в присутствии концентрированной серной кислоты получают эфиры (2.253 - 2.256) с выходом 70 - 86% (схема 19). Реакцией этилового эфира 2.254 с гидразингидратом получают гидразид 2-[3-бром-1-(1,1-диоксотиетан-3-ил)-1,2,4-триазолил-5-сульфанил]уксусной кислоты (2.257), из которого синтезируют 5-арилметилиденгидразиды (2.258 - 2.266).

Строение синтезированных соединений 2.240 - 2.265 доказано данными ЯМР ¹Н и ИК-спекроскопии.

С целью изучения взаимосвязи «структура - активность» нами были синтезированы соли, эфиры, гидразиды и арилметилиденгидразиды 2-[1-(1,1-диоксотиетан-3-ил)бензимидазолил-2-сульфанил]уксусной кислоты (схема 20).



Схема 20

В продолжение исследования устойчивости тиетан-1,1-диоксидного цикла к действию нуклеофильных реагентов нами изучены реакции диоксотиетанилтриазола 2.202 с аминами, гидразингидратом и NH-азолами.

Установлено, что при нагревании триазола 2.202 с избытком первичных и вторичных алифатических аминов в н-бутаноле происходит нуклеофильное замещение атома брома по положению С⁵ триазольного цикла. 5-Аминозамещенные 3-бром-1-(1,1-диоксотиетан-3-ил)-1,2,4-триазолы (2.282 - 2.286) образуются с выходом 29 - 95 % (схема 21). Взаимодействие триазола 2.202 с гидразингидратом приводит к образованию 3-бром-5-гидразино-1-(1,1-диоксотиетан-3-ил)-1,2,4-триазола (2.287) с выходом 82% (схема 21). Продуктов элиминирования тиетан-1,1-диоксидного цикла не обнаружено.

Строение синтезированных 5-амино- и 5-гидразинозамещенных 1,2,4-триазолов 2.282 - 2.287 подтверждено ИК-, ЯМР ¹Н- и ¹³С- спектрами, а также реакциями 5-гидразинотриазола 2.287 с ароматическими альдегидами и кетонами. Арилметилиденгидразины (2.298 - 2.306) образуются с выходом 28 - 85% (схема 21).



Схема 21

В спектрах ЯМР ¹Н соединений 2.280, 2.281 содержат сигналы протонов тиетан-1,1-диоксидного цикла и заместителей в положении С⁵. Например, в спектре соединения 2.281 регистрируются сигналы протонов фрагмента пиперидина в виде двух мультиплетов в области сильных полей в интервалах 1,50 - 1,90 м.д. [(СН₂)₃] и 2,95 - 3,22 м.д. [N(CH₂)₂]. Спектры ЯМР ¹³С соединений 2.281, 2.287, 2.304 подтверждают сохранение тиетан-1,1-диоксидного цикла и замещение атома брома по положению С⁵ триазола.

Установлено, что нагревание триазола 2.202 с эквимольным количеством натриевых солей азолов в среде трет-бутанола приводит к элиминированию тиетан-1,1-диоксидного цикла и образованию продуктов диоксотиетанилирования - N-(1,1-диоксотиетан-3-ил)азолов (2.201, 2.204, 2.281, 2.290 - 2.295) (схема 22).

В случае имидазола, 1,2,4-триазола, бензимидазола, 2-бензилбензимидазола реакции диоксотиетанилирования протекают по положению N¹ азолов с образованием 1-(1,1-диоксотиетан-3-ил)азолов (2.201, 2.290 - 2.292) с выходом 32 - 86%.



Схема 22

В случае 1,3-диметилксантина и 8-бензиламино-1,3-диметилксантина 2.7 диоксотиетанилирование протекает по положению N⁷ пурина. 1,3-Диметил-7-(1,1-диоксотиетан-3-ил)-3,7-дигидро-1Н-пурин-2,6-дионы (2.293, 2.294) образуются с выходом 46 и 87% соответственно. Характеристики соединения 2.294 совпадают с литературными данными.

Диоксотиетанилирование 5-бром-3-этокси-1Н-1,2,4-триазола 2.225 протекает региоспецифично по положению N² триазольного цикла. Образцы соединения 2.204, полученного данным способом, и окислением 3-бром-1-(тиетан-3-ил)-5-этокси-1,2,4-триазола, идентичны. В случае 5-бром-3-(пиперидин-1-ил)-1H-1,2,4-триазола (2.308) реакция протекает по положениям N¹ и N² триазольного цикла с образованием смеси региоизомерных 3-бром-5-(пиперидин-1-ил)- (2.281) и 5-бром-3-(пиперидин-1-ил)-1-(1,1-диоксотиетанил-3)-1,2,4-триазолов (2.295) в соотношении 1 : 2 (схема 22).

Структура синтезированных N-(1,1-диоксотиетан-3-ил)азолов подтверждена данными ЯМР ¹Н-спектров, в которых регистрируются характерные сигналы протонов тиетан-1,1-диоксидного цикла и фрагментов азолов. Например, в спектре ЯМР ¹Н соединения 2.290 в слабопольной области наблюдаются два уширенных синглета при 7,19, 7,68 м.д. и триплет с центром при 7,30 м.д. с интенсивностями в 1Н каждый, принадлежащие протонам имидазольного цикла.

В спектре ЯМР ¹Н смеси изомерных соединений 2.281 и 2.295 наблюдается удвоение сигналов протонов тиетандиоксидного цикла и фрагмента пиперидина. Мультиплет протонов группы N(CH₂)₂ остатка пиперидина 3-пиперидинилизомера 2.295 регистрируется на 0,3 м.д. в более слабопольной области по сравнению с аналогичным сигналом 5-пиперидинилизомера 2.281. Мультиплет протона NCH-группы тиетан-1,1-диоксидного цикла 3-пиперидинилизомера 2.295 регистрируется на 0,1 м.д. в более слабопольной области по сравнению с аналогичным сигналом 5-пиперидинилизомера 2.281.

Для удобства проведения биологических испытаний синтезированы водорастворимые соли соединений 2.291 и 2.292 с хлористоводородной кислотой (2.297, 2.298).

С целью исследования применимости реакции диоксотиетанилирования для синтеза различных N-(1,1-диоксотиетан-3-ил)гетероциклов нами исследовано взаимодействие шестичленных насыщенных гетероциклов - морфолина и пиперидина - с 3,5-дибром-1,2,4-триазолом в присутствии трет-бутилата натрия. Установлено, что нагревание реагентов в мольном соотношении 3 : 1 : 1,1 приводит к элиминированию тиетан-1,1-диоксидного цикла и образованию 4-(1,1-диоксотиетан-3-ил)морфолина (2.288) и 1-(1,1-диоксотиетан-3-ил)пиперидина (2.289) с выходом 33 и 26 % соответственно (схема 22).

Отсутствие сигналов атомов углерода 1,2,4-триазольного цикла в спектре ЯМР ¹³С соединения 2.288 подтверждает образование 4-(1,1-диоксотиетан-3-ил)морфолина.

Установленные ранее закономерности взаимодействия 5-замещенных 3-бром-1-(1,1-диоксотиетан-3-ил)-1,2,4-триазолов с алкоголятами натрия использованы нами для получения труднодоступных 3-аминозамещенных 5-бром-1Н-1,2,4-триазолов. При нагревании 5-аминозамещенных 2.280 - 2.283 с этилатом натрия образуются 3-аминозамещенные 5-бром-1Н-1,2,4-триазолы (2.307 - 2.310) с выходом 69 - 95% (схема 23). Однако при замене этилата на трет-бутилат натрия кроме соединения 2.308 образуется также продукт изомеризации - 5-бром-1-(1,1-диоксотиетан-3-ил)-3-(пиперидин-1-ил)-1,2,4-триазол 2.295 (схема 23), структура которого подтверждена данными ЯМР-спектров. В спектре ЯМР ¹³С соединения 2.295 отсутствует смещение сигнала атома углерода С⁵ (127,38 м.д.), а регистрируется смещение сигнала атома углерода С³ (166,23 м.д.) триазольного цикла в область слабых полей на 26 м.д. по сравнению с аналогичными сигналами 3,5-дибром-1-(1,1-диоксотиетан-3-ил)-1,2,4-триазола 2.202, что свидетельствует о наличие фрагмента пиперидина в положении С³.

Схема 23

9. Предпосылки к доклиническому изучению и практическому применению синтезированных соединений

Впервые синтезированные производные 2-бром-5,6-дигидротиазоло[3,2-b]-1,2,4-триазола, производные 3-бром-1,2,4-триазола, содержащие тиетановый, тиетан-1-оксидный, тиетан-1,1-диоксидный циклы, в том числе 5-амино-, 5-алкокси-, 5-арилокси-, 5-арилметилиденгидразинозамещенные, производные 2-(3-бром-1,2,4-триазолил-5-сульфанил)уксусных кислот, а также 3-алкокси-, 3-арилокси- и 3-азолилтиетан-1,1-диоксиды исследованы с целью определения возможных путей их практического применения.

Предварительный прогноз возможного фармакологического действия синтезированных соединений в Интернет - версии компьютерной системы PASS показал, что производные 1,2,4-триазола и тиетан-1,1-диоксида с большой вероятностью должны проявлять психотропную, антибактериальную, противогрибковую активности, влиять на реологические свойства крови, а также являться субстратами монооксигеназной системы.

С учетом полученных данных у синтезированных производных 1,2,4-триазола, тиетан-1,1-диоксида и бензимидазола исследовали влияние на микросомальную активность печени и психотропную активность (на кафедре фармакологии № 1 с курсом клинической фармакологии ГОУ ВПО «БГМУ Росздрава» под руководством д.м.н. Никитиной И.Л.), гемореологическую активность (на кафедре фармакологии ГОУ ВПО «Волгоградский государственный медицинский университет» под руководством член-корр. РАМН, д.м.н., проф. Спасова А.А.), антиагрегационную и антикоагуляционную активности (на кафедре биологической и биоорганической химии ГОУ ВПО «БГМУ Росздрава» под руководством к.фарм.н. Тимирхановой Г.А.), противомикробную активность (на кафедре микробиологии ГОУ ВПО «БГМУ Росздрава» под руководством д.м.н., проф. Булгакова А.К.), антиоксидантную и кардиотоническую активности (на кафедре фармацевтической химии ГОУ ВПО «БГМУ Росздрава» под руководством к.фарм.н. Мещеряковой С.А.), а также определяли параметры острой токсичности.

В результате изучения влияния 22 производных 1,2,4-триазола и 23 производных бензимидазола на микросомальную активность печени установлено, что в ряду 1,2,4-триазолов наиболее активным индуктором МОС является 5-(пиперазин-1-ил)-3-бром-1-(тиетан-3-ил)-1,2,4-триазол 2.151, который уменьшает длительность гексеналового сна мышей-самцов независимо от используемой дозы в среднем на 30% и пропорционально увеличивает количество цитохрома Р450. Из производных бензимидазола МОС-индуцирующим действием обладают в дозе 50 мг/кг дигидрохлорид гидразида 2-[1-(тиетанил-3)-бензимидазолил-2-сульфанил]уксусной кислоты 2.142, гидрохлорид 2-гидразино-1-(тиетан-3-ил)бензимидазола 2.164, моноэтаноламмониевая соль 2-[1-(тиетанил-3)бензимидазолил-2-сульфанил]уксусной кислоты 2.137, и моноэтаноламмониевая соль 2-[1-(1,1-диоксотиетанил-3)бензимидазолил-2-сульфанил]уксусной кислоты 2.270, а наиболее активными индуктором МОС является гидразид 2-[1-(1,1-диоксотиетанил-3)бензимидазолил-2-сульфанил]уксусной кислоты 2.273, для которого определена широта МОС-модулирующего эффекта.

Установлено, что острая токсичность соединения 2.151 при внутрибрюшинном введении белым мышам составляет 180 мг/кг, соединения 2.273 при внутрижелудочном введении более 900 мг/кг, и они относятся к IV классу опасности.

Результаты изучения влияния новых производных 1,2,4-триазола и бензимидазола на микросомальную активность печени входят в базу данных для компьютерного анализа зависимости “структура - активность”, созданную сотрудниками лаборатории компьютерных исследований № 1 ГУ «Научно-исследовательский технологический институт гербицидов и регуляторов роста растений с опытно-экспериментальным производством» АН РБ.

Антидепрессивную активность 57 синтезированных соединений определяли в тестах принудительного плавания (Forced Swim Test - FST) и подвешивания за хвост (Tail suspension test - TST). Проведенный скрининг выявил разнонаправленное влияние синтезированных соединений на показатели иммобилизации и индекс депрессивности (ИД). Ряд соединений статистически значимо снижает время иммобилизации или ИД в тесте принудительного плавания - изопропиловый эфир 2-[3-бром-1-(1,1-диоксотиетан-3-ил)-1,2,4-триазолил-5-сульфанил]уксусной кислоты (2мг/кг) 2.256, арилметилиденгидразиды 2-[3-бром-1-(1,1-диоксотиетан-3-ил)-1,2,4-триазолил-5-сульфанил]уксусной кислоты 2.258, 2.259, 2.263, 2.266. В тоже время производные тиетан-1,1-диоксида характеризуются однонаправленным статистически значимым снижением длительности иммобилизации и ИД в тесте принудительного плавания: 3-метокситиетан-1,1-диоксид 2.217, 3-(2-изо-пропил-5-метилфенокси)тиетан-1,1-диоксид 2.239 и 3-фенилсульфонилтиетан-1,1-диоксид 2.268, для которых проведены углубленные исследования антидепрессивной активности в сравнении с флуоксетином. Установлено, что соединения 2.217, 2.239 и 2.268 при однократном введении оказывают стабильный статистически значимый антидепрессивный эффект - снижают длительность иммобилизации и индекс депрессивности, тогда как флуоксетин уменьшает только длительность иммобилизации. При ежедневном двухнедельном введении соединений 2.217, 2.239 и 2.268 и препарата сравнения внутрибрюшинно в минимально эффективной дозе 2 мг/кг установлено, что все исследуемые соединения и флуоксетин достоверно уменьшают ИД (в 1,9 - 2 раза). Острая токсичность соединений 2.217, 2.239, 2.268 при их внутрибрюшинном введении в 1,7 - 12,6 раза ниже токсичности флуоксетина (LD50 87,5 мг/кг), что относит их к классу малотоксичных или практически нетоксичных соединений. По средней эффективной дозе (ED50) соединения 2.217, 2.239 и 2.268 сравнимы с флуоксетином, но превосходят последний по широте терапевтического действия в 9,7; 1,9; и 11,4 раза соответственно.

В тесте «открытое поле» установлено, что соединения 2.217, 2.239, 2.268 не проявляют психостимулирующего или психоседативного действия.

В настоящее время соединениями 2.217, 2.239 и 2.268 проходят углубленные фармакологические как высокоэффективные антидепрессанты.

Результаты исследования антидепрессивной активности новых производных 1,2,4-триазола и тиетан-1,1-диоксида входят в базу данных «структура - антидепрессивная активность», созданную сотрудниками кафедры фармакологии № 1 с курсом клинической фармакологии БГМУ под руководством д.м.н. Никитиной И.Л. и д.х.н. Тюриной Л.А. (Научно-исследовательский технологический институт гербицидов и регуляторов роста растений, г. Уфа). Ими при участии автора проведен компьютерный анализ зависимости антидепрессивной активности от структуры и дизайн потенциальных антидепрессантов в ряду 1,2,4-триазолов и тиетан-1,1-диоксидов.

Для изучения «связи - структура» в ряду производных 1,2,4-триазола и тиетан-1,1-диоксида была использована компьютерная система SARD-21. Определен решающий набор признаков для антидепрессивной активности (табл.1), который правильно распознает 80% структур массива обучения и характеризуется хорошим качеством прогноза.

На базе SARD-21 был осуществлен прогноз для 55 новых производных триазола и тиетан-1,1-диоксида, которые не входили в обучающий массив. В результате прогноза были отобраны соединений 2.217, 2.239, 2.268 и 2.258, которые проявили антидепрессивную активность.

Таблица 1 Решающий набор признаков для антидепрессивной активности

Структурные фрагменты	Информативность
{(>CH-)-(-O-)}\/{(>CH-)-(>C=C<)}\/{(-CH3) -I}	0,558
{(>CH-)-(-O-)}\/{(>CH-)-(>C=C<)}\/{(-CH2het) -(>N-)}	0,558
{(>CH-)-(-O-)}\/{(>CH-)-(>C=C<)}\/{(-CH2het) -I }	0,558
{(>CH-)-(-O-)}\/{(>CH-)-(>C=C<)}\/{(>N-)-(>C=O)}	0,558
{(>CH-)-(-O-)}\/{(>CH-)-(>C=C<)}\/{(>C=O) -(>C=C<)}	0,558
{VI}#{VII}#{(>C=O)}	0,143
{(-CH3)}\/{(>C<)}\/{(-NH-)}	0,023
{(-N=C<)-(-N=C<)}#{(-CH3)-(>CH-)}#{(>CH-)-(-S-)}	-0,333
{(-N=C<)-(Br)}#{(-CH3)-(>CH-)}#{(>CH-)-(-S-)}	-0,333
{(>CH-)-II}#{(-CH3)-}#{(-NH-)-(-N=C<)}	-0,392
{(>CH-)-(>N-)}#{(-CH3)-}#{(-NH-)-(-N=C<)}	-0,392
{(-CH2het-)-(>C=O)}#{(-O-)-V}#{(-CH2het-)-(>SO2)}	-0,395
{(-S-)-II}#{(-CH3)-}#{(-O-)-II}	-0,395
{(>C=O)}#{(>S=O)}#{(-O-)}	-0,404
{(-S-)}#{(-O-)}#{V}	-0,450
{(>N+<)}#{Na}#{(>CH-)}	-0,506
{(-CH2het-)}#{Na}#{(-Hhet)}	-0,558

Примечание: \/ - знак дизъюнкции; # - знак строгой дизъюнкции;

В результате изучения влияния 31 нового производного 1,2,4-триазола и тиетан-1,1-диоксида на агрегацию эритроцитов установлено, что наибольшую гемореологическую активность проявляют моноэтаноламмониевая 2.247 и диэтаноламмониевая соли 2-[3-бром-1-(1,1-диоксотиетан-3-ил)-1,2,4-триазолил-5-сульфанил]уксусной кислоты 2.248, которые по показателю ЭК₂₀ превосходят препарат сравнения пентоксифиллин в 1,7 и 3,1 раза соответственно. По величине условного терапевтического индекса соединения 2.247, 2.248 превосходят пентоксифиллин в 54,07 и 6,93 раза соответственно.

Изучено влияние 28 новых производных 1,2,4-триазола, тиетан-1,1-диоксида и бензимидазола на агрегацию тромбоцитов. Калиевая соль 2-[3-бром-1-(тиетан-3-ил)-1,2,4-триазолил-5-сульфанил]уксусной кислоты 2.113 в концентрации 1 ммоль/л проявляет антиагрегационный эффект, превосходящий по активности пентоксифиллин примерно в два раза. Острая токсичность соединения 2.113 при внутрибрюшинном введении мышам составляет 900 мг/кг, что в 3,7 раза меньше по сравнению с пентоксифиллином.

Из производных бензимидазола наибольшую активность сравнимую с препаратом сравнения - ацетилсалициловой кислотой проявляет дигидрохлорид гидразида 2-[1-(тиетан-3-ил)-бензимидазолил-5-сульфанил]уксусной кислоты 2.142, который в концентрации 1 ммоль/л уменьшает агрегацию тромбоцитов в среднем на 50%. Соединение 2.142 при введении на высоте АДФ-индуцированной агрегации в течение 5 мин приводит к дезагрегации 15,2% первоначально существующих агрегатов тромбоцитов.

Из 11 новых производных 1,2,4-триазола антикоагуляционной активностью в конечной концентрации 1мг/мл обладает калиевая соль 2-[3-бром-1-(тиетан-3-ил)-1,2,4-триазолил-5-сульфанил]уксусной кислоты 2.113, которая увеличивает показатель активированного частичного тромбопластинового времени (АЧТВ) на 63% и по активности превосходит гепарин.

Определена противомикробная активность 88 производных дигидротиазолотриазола, тиетанилтриазола и тиетан-1,1-диоксида. Антибактериальную активность в концентрации 1,57 мг/мл проявляют (2-гидроксифенил)метилиденгидразид 2.258 и (5-бром-2-гидроксифенил)метилиденгидразид 2-[3-бром-1-(1,1-диоксотиетан-3-ил)-1,2,4-триазолил-5-сульфанил]уксусной кислоты 2.259, в концентрации 6,25 мг/мл - 2-бром-5-пиперидинилметил-5,6-дигидротиазоло[3,2-b]триазол 2.46 и 3-этокситиетан-1,1-диоксид 2.218, который проявляет также противогрибковую активность в концентрации 0,75 мг/мл.

Исследование кардиотонической активности производных 1,2,4-триазола проведенное спектрофотометрическим методом свидетельствует о возможной слабой кардиотонической активности соединения 2.242.

Определена антиоксидантная активность 18 солей тиетансодержащих 2-(3-бром-1,2,4-триазолил-5-сульфанил)уксусных кислот по способности исследуемых веществ ингибировать аутоокисление адреналина до адренохрома in vitro. Наиболее активно в концентрации 0,1 ммоль/л и 0,05 ммоль/л ингибируют аутоокисление адреналина калиевая 2.113 ( на 26,9 и 16,8%), натриевая 2.114 (на 22,5 и 26,2% ) и трисаммониевая соли 2-[3-бром-1-(тиетан-3-ил)-1,2,4-триазолил-5-сульфанил]уксусной кислоты 2.115 (на 41,2 и 32,3%) и трисаммониевая соль 2-[3-бром-1-(1,1-диоксотиетан-3-ил)-1,2,4-триазолил-5-сульфанил]уксусной кислоты 2.245 (на 21,7 и 21,7%), активность которых превышает активность препарата сравнения - аскорбиновой кислоты (на 6,8 и 4,9%).

Ряд новых производных 1,2,4-триазола представляет интерес в качестве органических реактивов, а разработанные новые стратегии синтеза 3-замещенных тиетан-1,1-диоксидов могут использоваться для синтеза других производных.

Для защиты NH-группы гетероциклов предложен тиетановый цикл, устойчивый к действию кислот, оснований, нуклеофилов и электрофилов, и позволяет проводить дальнейшую модификацию молекулы N-тиетанилгетероциклов.

На некоторые перспективные органические реактивы и биологически активные вещества разработана нормативная документация. Лабораторные регламенты на производство разработаны на 3,5-дибром-1-(тиетанил-3)-1,2,4-триазол (ЛР 01963597-59.03-10), 3,5-дибром-1-(1,1-диоксотиетанил-3)-1,2,4-триазол (ЛР 01963597-59.04-10), калиевую соль 2-[3-бром-1-(тиетанил-3)-1,2,4-триазолил-5-сульфанил]уксусной кислоты (ЛР 01963597-59.06-10), 3-метокситиетан-1,1-диоксид (ЛР 01963597-59.05-10), диэтаноламмониевую соль 2-[3-бром-1-(1,1-диоксотиетанил-3)-1,2,4-триазолил-5-сульфанил]уксусной кислоты (ЛР 01963597-59.07-10). Технические условия разработаны на 3,5-дибром-1-(тиетан-3-ил)-1,2,4-триазол «чистый» (ТУ-2631-001-01963597-2010), 3,5-дибром-1-(1,1-диоксотиетан-3-ил)-1,2,4-триазол «чистый» (ТУ-2631-002-01963597-2010). Разработан проект ФС на субстанцию диэтаноламмониевой соли 2-[3-бром-1-(1,1-диоксотиетанил-3)-1,2,4-триазолил-5-сульфанил]уксусной кислоты, проявляющей гемореологические свойства.

ВЫВОДЫ

1. В результате проведенных систематических исследований реакций 1,2,4-триазолов с тииранами определены закономерности, определяющие направление реакций и строение конечных продуктов, разработаны пути синтеза 1-(тииран-2-илметил)-1,2,4-триазолов, 2-бром-5,6-дигидротиазоло[3,2-b]-1,2,4-триазолов, 1-(тиетан-3-ил)-1,2,4-триазолов, 1-(1-оксотиетан-3-ил)-1,2,4-триазолов, 1-(1,1-диоксотиетан-3-ил)-1,2,4-триазолов и 3-замещенных тиетан-1,1-диоксидов, установлены закономерности «структура - активность» в ряду синтезированных соединений, создана теоретическая и экспериментальная база получения высокоэффективных биологически активных веществ.

2. Реакции 1,2,4-триазолов с «модельным» тиираном, содержащим легко уходящую группу, идут неизбирательно по положениям N¹ и N² триазольного цикла с образованием региоизомерных продуктов, соотношение которых зависит от характера заместителей в положениях С³ и С⁵ триазольного цикла. При взаимодействии 3,5-дибром-1,2,4-триазола с монофункциональными тииранами образуются 5-замещенные 2-бром-5,6-дигидротиазоло[3,2-b]-1,2,4-триазолы. Реализован новый способ аннелирования дигидротиазольного цикла к триазолам, содержащим легко уходящие группы, основанный на взаимодействии последних с монофункциональными тииранами.

3. Реакции 1,2,4-триазолов с 2-хлорметилтиираном идут по положениям N¹, N² и N⁴ триазольного цикла с образованием региоизомерных продуктов, структура которых зависит от природы применяемого растворителя, характера заместителей в положениях С³ и С⁵ триазольного цикла и соотношения реагентов. Установлено, что в среде ацетона при использовании реагентов в мольном соотношении 1 : 0,5-1 образуются региоизомерные 2,3^/5^/-тризамещенные 5-(1,2,4-триазол-1-илметил)-5,6-дигидротиазоло[3,2-b]-1,2,4-триазолы, а при увеличении избытка 2-хлорметилтиирана до 3-5-кратного выделяются также промежуточные 3,5-дизамещенные 1-(тииран-2-илметил)-1,2,4-триазолы. В водной среде протекает тииран-тиетановая перегруппировка, в результате которой образуются региоизомерные N-(тиетан-3-ил)-1,2,4-триазолы в различных соотношениях.

4. В результате исследования реакций 3,5-дибром-1-(тииран-2-илметил)-1,2,4-триазола с аминами, фенолами, тиофенолом и азолами разработан перспективный метод синтеза 5-замещенных 2-бром-5,6-дигидротиазоло[3,2-b]-1,2,4-триазолов. Предложен механизм реакций тиирана на основе триазола с нуклеофилами, включающий первоначальное образование тиолят-аниона и последующую реакцию нуклеофильного замещения легко уходящих групп с образованием 5,6-дигидротиазоло[3,2-b]-1,2,4-триазолов.

5. Установлено, что в результате окисления 1-(тиетан-3-ил)-1,2,4-триазолов в среде ледяной уксусной кислоты пероксидом водорода в зависимости от избытка реагента и температуры проведения реакции образуются 1-(1-оксотиетан-3-ил)- или 1-(1,1-диоксотиетан-3-ил)-1,2,4-триазолы.

6. В результате систематического исследования реакций 5-замещенных 3-бром-1-(тиетан-3-ил)-, 3-бром-1-(1-оксотиетан-3-ил)- и 3-бром-1-(1,1-диоксотиетан-3-ил)-1,2,4-триазолов с нуклеофильными реагентами установлено, что направление взаимодействия зависит от степени окисления атома серы тиетанового цикла и природы нуклеофила. Показана устойчивость тиетанового цикла к действию O-, S- и N-нуклеофилов, а тиетан-1-оксидного - к действию S- и N-нуклеофилов. Установлено, что в данных реакциях нуклеофильному замещению подвергается атом брома по положению С⁵ триазольного цикла. Разработан эффективный метод синтеза 5-замещенных 3-бром-1-(тиетан-3-ил)- и 3-бром-1-(1-оксотиетан-3-ил)-1,2,4-триазолов. Установлены закономерности взаимодействия 5-замещенных 3-бром-1-(1,1-диоксотиетан-3-ил)-1,2,4-триазолов с нуклеофилами, которое, в основном, протекает с элиминированием тиетан-1,1-диоксидного цикла в случае O- и S-нуклеофилов и с замещением атома брома по положению С⁵ триазольного цикла в случае N-нуклеофилов.

7. Показано, что при взаимодействии 3,5-дибром-1-(1,1-диоксотиетан-3-ил)-1,2,4-триазола с алкоголятами, фенолятами, тиолятами щелочных металлов и натриевыми солями азолов протекает элиминирование тиетан-1,1-диоксидного цикла, и образуются 3-замещенные тиетан-1,1-диоксиды и 3,5-дибром-1Н-1,2,4-триазол. Предложен механизм данной реакции, включающий элиминирования тиет-1,1-диоксида и последующее присоединение нуклеофила. Установлено, что при взаимодействии 3,5-дибром-1-(1,1-диоксотиетан-3-ил)-1,2,4-триазола с 2,4-дихлорфенолом, тиогликолевой кислотой, аминами и гидразингидратом протекает нуклеофильное замещение атома брома по положению С⁵ триазольного цикла. Разработаны эффективные методы синтеза 3-замещенных тиетан-1,1-диоксидов и 5-замещенных 3-бром-1-(1,1-диоксотиетан-3-ил)-1,2,4-триазолов. Разработан метод диоксотиетанилирования гетероциклов реакциями 3,5-дибром-(1,1-диоксотиетан-3-ил)-1,2,4-триазола с гетероциклами в присутствии трет-бутилата натрия.

8. Апробировано применение тиетановой защиты для синтеза труднодоступных или неизвестных ранее 3-замещенных 5-бром-1Н-1,2,4-триазолов; метод основан на введении тиетанового цикла в положение N¹ триазола, проведении реакций по положению С⁵ и последующем удалении тиетановой защиты после окисления до тиетан-1,1-диоксидной реакцией с этилатом натрия.

9. Методами ИК-, ЯМР ¹Н и ¹³С-спектроскопии и масс-спектрометрии исследованы спектральные характеристики и доказано строение синтезированных региоизомерных соединений. Обнаружена и изучена цис- и транс-изомерия 1-(1-оксотиетан-3-ил)-1,2,4-триазолов. Доказано, что гидразиды и илиденгидразиды 2-(триазолил-5-сульфанил)уксусных кислот существуют в виде двух стереоизомеров относительно гидразидной C-N связи.

10. Проведенный фармакологический скрининг выявил среди синтезированных соединений вещества с выраженной антидепрессивной, гемореологической, антиагрегационной, антиоксидантной активностью, а также влияющие на микросомальное окисление в печени. Установлены некоторые закономерности зависимости структура - активность в ряду синтезированных соединений. Методом компьютерного анализа рассчитан и определен решающий наборы признаков, необходимый для антидепрессивной активности.

11. Углубленные фармакологические испытания проходят 3-метокситиетан-1,1-диоксид, 3-(2-изо-пропил-5-метилфенокси)тиетан-1,1-диоксид и 3-фенилсульфонилтиетан-1,1-диоксид, проявляющие выраженную антидепрессивную активность и калиевая соль 2-[3-бром-1-(тиетан-3-ил)-1,2,4-триазолил-5-сульфанил]уксусной кислоты, проявляющая антиагрегационную и антикоагуляционную активность. Рекомендованы к углубленным фармакологическим исследованиям моноэтаноламмониевая и диэтаноламмониевая соли 2-[3-бром-1-(1,1-диоксотиетан-3-ил)-1,2,4-триазолил-5-сульфанил]уксусной кислоты, обладающий выраженной гемореологической активностью. 3-Бром-5-(пиперазин-1-ил)-1,2,4-триазол рекомендован к углубленным испытаниям как индуктор микросомальных оксидаз печени.

12. Разработаны лабораторные регламенты на производство 3 биологически активных субстанций и 2 новых органических реактивов, применяемых в синтезе биологически активных соединений. На 2 органических реактива разработаны технические условия. Для диэтаноламмониевой соли 2-[3-бром-1-(1,1-диоксотиетан-3-ил)-1,2,4-триазолил-5-сульфанил]уксусной кислоты разработан проект фармакопейной статьи.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ ДИССЕРТАЦИИ ИЗЛОЖЕНО В СЛЕДУЮЩИХ ПУБЛИКАЦИЯХ

1. Approach to prediction of acute toxity for chemical compounds using SAR system (abstract) /L. Tjurina, T. Solominova, S. Kirlan … E. Klen // From molecular to Integrative Pharmacology: XIIIth International Congress of Pharmacology (26-31 July 1998 Munchen, Germany) - 1998. - C.438.

2. Поиск ингибиторов микросомальной ферментной системы в ряду оригинальных азольных производных /Н.А. Никитин, И.Л. Никитина, И.В. Багманова, Е.Э. Клен //Здравоохранение Башкортостана -2000. - № 2. - С. 198-199.

3. Клен, Е.Э. Исследование реакций тииранов с 1,2,4-триазолами / Г.Ф. Исхакова // Вопросы теоретич. и практич. медицины: материалы республ. конференции т.1. - Уфа: Изд. БГМУ, 2000. - С.51.

4. Исхакова, Г.Ф. Исследование реакции 3,5-дибром-1,2,4-триазола с эпитиохлоргидрином /Е.Э. Клен // Вопросы теоретич. и практич. медицины: материалы республ. конф. т.2. - Уфа: Изд. БГМУ, 2001. - С.83.

5. Изучение связи «структура - активность», прогноз и дизайн производных азолов как модуляторов активности МФС / Э.Ф. Токунова, Л.А. Тюрина, Е.Э. Клен [и др.] // Химия и биологическая активность азотистых гетероциклов и алкалоидов: материалы Первой международной конференции, (Москва, 9-12 октября 2001г.)- Т.2. - М., 2001. - С. 306.

6. Синтез и иммунотропная активность производных (бензимидазолил-2-тио)уксусных кислот, содержащих тиетановый цикл / Ф.А. Халиуллин, Е.К. Алехин, Е.Э. Клен [и др.] // Химико-фармацевтический журнал. - 2001. -Т.35, № 1. - С.12 - 15.

7. Зависимости «строение - активность» модуляторов микросомальной ферментной системы. Сообщение 1. Исследование ингибиторов / Э.Ф. Токунова, О.В. Тюрина, Н.А. Никитин, И.Л. Никитина, Е.Э. Клен [и др.] // Химико-фармацевтический журнал. - 2001. - Т.35, № 6. - С.41-45.

8. Зависимости «строение - активность» модуляторов микросомальной ферментной системы. Сообщение 11. Исследование индукторов / Н.А. Никитин, И.Л. Никитина, Ф.А. Халиуллин… Е.Э. Клен, Л.А. Тюрина // Химико-фармацевтический журнал. - 2001. -Т. 35, № 6. - С.46-49.

9. Исхакова, Г.Ф. Синтез 3,5-дибром-1-(тиетанил-3)-1,2,4-триазола / Е.Э. Клен // Здравоохранение Башкортостана. - 2001- № 8. - С.231-232.

10. Исхакова, Г.Ф. Синтез 5-аминозамещенных 1,2,4-триазолов, содержащих тиетановый цикл / Е.Э. Клен // Вопросы теоретич. и практич. медицины: Материалы республ. конференции. - Уфа: Изд. БГМУ, 2002.- С.170.

11. Исхакова, Г.Ф. Синтез 3,5-дибром-1-(1,1-диоксотиетанил-3)-1,2,4-триазола / Е.Э. Клен, Ф.А. Халиуллин // Науки о человеке: сборник статей. Третий международный конгресс молодых ученых и специалистов. - Томск: 2002. - С.217-218.

12. Клен, Е.Э. Реакции тииранов с гетероциклами - новое направление синтеза биологически активных соединений / Ф.А. Халиуллин, Г.Ф. Исхакова // Науки о человеке: сборник статей. Третий международный конгресс молодых ученых и специалистов. - Томск:, 2002. - С.220.

13. Синтез и биологические свойства арилметиленгидразидов (бензимидазолил-2-тио)уксусных кислот, содержащих тиетановый цикл / Е.Э. Клен, Ф.А. Халиуллин, И.Л. Никитина [и др.] // Химико-фармацевтический журнал. - 2002. - Т.36, № 11. - С. 18 - 20.

14. Клен, Е.Э. Элиминирование тиетанового цикла в ряду гетероциклов / Г.Ф. Исхакова, Ф.А. Халиуллин //Химические реактивы, реагенты и процессы малотоннажной химии: материалы XV Международной научно-техническая конференции «Реактив-2002».- Уфа: гос. изд. научно-тех. литер. «Реактив», 2002. - Т.1. - С. 19 - 20.

15. Новые илиденпроизводные 1,2,4-триазола как потенциальные антимикробные средства / Е.Э. Клен, Ф.А. Халиуллин, Г.Ф. Исхакова, А.К. Булгаков // Новые информационные технологии в медицине, биологии, фармакологии и экологии: мат. XI междунар. конф. и дискус. научн. клуба. IT + ME^/ 2003 - Украина, Крым, Ялта-Гурзуф, 2003. - С. 94-95.

16. Поиск веществ с МОС-модулирующей активностью на основе реакций тииранов с азотистыми гетероциклами / И.Л. Никитина, Е.Э. Клен, Е.К. Алехин, Ф.А. Халиуллин // Проблемы создания новых лекарственных средств: Мат. IV Всеросс. науч. семинара и молод. научн школы «Химия и медицина» - Уфа: Гилем, 2003. С. 36 - 37.

17. Клен, Е.Э. Синтез 5-алкоксипроизводных 3-бром-1,2,4-триазола, содержащих тиетановый цикл / Ф.А. Халиуллин, Г.Ф. Исхакова //Химические реактивы, реагенты и процессы малотоннажной химии: материалы XVII Международная научно-технической конференции «Реактив-2004» Т.2- Уфа: Гос.изд. научно-тех.литер. «Реактив» , 2005 - С.68 -72.

18. Багаутдинова, Л.Ф. Синтез аминопроизводных 5,6-дигидротиазоло[3,2-b]-1,2,4-триазола / Е.Э. Клен // «Медицинская наука - 2004»: материалы Республиканской конференции молодых ученых РБ. - Уфа: Изд-во БГМУ, 2004. - С.28-29.

19. Синтез и антиоксидантная активность солей 2-(3-бром-1,2,4-триазолил-5-тио)уксусных кислот, содержащих тиетановый цикл в различных степенях окисления серы / Е.Э. Клен, С.А. Мещерякова, Ф.А. Халиуллин, Н.Н. Макарова // Фармация XXI века: материалы IV Межрегиональная научно-практ. конф. -Новосибирск, 2004. - С.112-115.

20. Клен, Е.Э. Исследование реакций 3,5-дибром-1-(тиетанил-3)-1,2,4-триазолов с аминами / Г.Ф. Исхакова, Ф.А. Халиуллин // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сборник научных трудов. Пятигорск: Изд. ПГФА, 2004, вып.59. - С.175-176.

21. Мещерякова, С.А. Антиоксидантная активность производных 2-(бензимидазолил-2-тио)уксусных кислот, содержащих тиетановый цикл /Е.Э. Клен, Ф.А. Халиуллин // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сборник научных трудов. Пятигорск: Изд. ПГФА, 2004, вып.59. - С.199-200.

22. Изучение гемореологической активности аминозамещенных производных диметилксантина и тиазолобензимидазола / А.А. Спасов, Л.В. Науменко, Н.В. Арькова … Е.Э. Клен // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сборник научных трудов. Пятигорск: Изд. ПГФА, 2005, вып.60. - С.422-423.

...