Экспериментально-теоретическое обоснование создания лекарственных средств на основе липофильных фракций растительного сырья, сочетающих противовоспалительное и антиоксидантное действие с бактерио- и фунгистатической активностью

Жом плодов черной смородины

Маслянистая вязкая жидкость травянисто-зеленого цвета со специфическим запахом и приятным вкусом.

Шрот семян тыквы

Маслянистая прозрачная жидкость желто-зеленого цвета, имеющая приятный специфический "тыквенный" запах и горький вкус. В процессе хранения возможно образование осадка светло-желтого цвета.

Физико-химические свойства сверхкритического диоксида углерода способствуют извлечению из растительного сырья в значительных количествах БАВ, сочетающих противовоспалительную и антиоксидантную активность, в частности, полиненасыщенных жирных кислот (ПНЖК), токоферолов, каротиноидов. Исследованные СО ₂-экстракты растительного сырья содержат биологически активные эссенциальные ПНЖК, такие как линолевая, -линоленовая, -линоленовая (таблица 7).

Таблица 6. Основные разделы спецификаций для контроля качества СО₂-экстрактов растительного сырья

Таблица 7. Качественный и количественный состав жирных кислот СО₂-экстрактов растительного сырья

* - олеиновая (цис-9-октадеценовая) и петрозелиновая (цис-6-октадеценовая) кислоты суммарно.

Прогнозируемая терапевтическая эффективность изученных СО ₂-экстрактов растительного сырья связана с физиологической активностью содержащихся в них ПНЖК и антиоксидантов. Известно, что линолевая и линоленовая кислоты за счет наращивания углеродной цепи могут превращаться в арахидоновую кислоту. Таким образом, ПНЖК изученных СО ₂-экстрактов можно считать заменителями арахидоновой кислоты, являющейся структурным элементом фосфолипидов плазматических мембран. Особенности строения -изомера линоленовой кислоты, содержащейся в СО ₂-экстракте жома плодов черной смородины, позволяют непосредственно включаться в каскад арахидоновой кислоты, обусловливая тем самым ее основной биологический эффект, как универсального предшественника большой группы медиаторов - эйкозаноидов, обладающих широким спектром фармакологической активности. Учитывая функциональный синергизм содержащихся в СО₂-экстрактах растительного сырья БАВ, которые сочетают противовоспалительную и антиоксидантную активность, можно прогнозировать терапевтический эффект при использовании СО ₂-экстрактов и лекарственных средств на их основе для профилактики и лечения заболеваний, обусловленных, в частности, патологическим метаболизмом кислорода вследствие образования его активных форм.

В результате проведенных микробиологических исследований была впервые выявлена бактериостатическая активность СО ₂-экстрактов семян винограда культурного, жома плодов черной смородины, а также СО ₂-экстракта шрота семян тыквы в отношении Staphylococcus aureus. Кроме того, указанные СО ₂-экстракты обладают фунгистатической активностью в отношении Candida albicans. Также впервые выявлена фунгистатическая активность СО ₂-экстрактов плодов кориандра посевного, укропа пахучего и травы полыни горькой в отношении наиболее распространенных возбудителей дерматомикозов человека, а именно Microsporum canis и Trichophyton rubrum (таблица 8).

Таблица 8. Бактериостатическая и фунгистатическая активность (мкг/мл) СО₂-экстрактов растительного сырья

Микробиологический контроль показал отсутствие Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa и энтеробактерий в 1 г и отсутствие Salmonella в 10 г каждого из исследуемых СО2-экстрактов растительного сырья. Общее число аэробных бактерий и общее число грибов для всех изученных СО 2-экстрактов равно нулю. Так как в ходе исследования было впервые выявлено или подтверждено антимикробное действие СО 2-экстрактов растительного сырья, для получения достоверных результатов анализа микробиологической чистоты применялись специальные методы нейтрализации антимикробного действия СО 2-экстрактов. Например, вводились неспецифические инактиваторы в питательные среды или изменялось соотношение количества СО 2-экстракта и питательной среды.

Известно, что в этиологии ряда воспалительных заболеваний, например, неспецифических воспалительных заболеваний органов мочеполовой системы, приоритетная роль принадлежит комбинированной инфекции, которая представляет ассоциативное взаимодействие неспорообразующих анаэробных микроорганизмов, неспецифической грамотрицательной и грамположительной микробной флоры. Микстинфекция является серьезной проблемой, так как в ряде случаев потенцирует патогенность каждого из возбудителей. В ходе проведенного исследования была выявлена бактериостатическая и фунгистатическая активность СО ₂-экстрактов растительного сырья в отношении наиболее распространенных возбудителей, идентифицирующихся при сочетанных инфекциях половой сферы. СО ₂-экстракты в концентрации 250-1000 мкг/мл обладают бактериостатической активностью в отношении Staphylococcus aureus и проявляют фунгистатичекую активность в отношении дрожжеподобных грибов рода Candida, в частности в отношении наиболее распространенного вида Candida albicans, вызывающего кандидозный кольпит. Для СО ₂-экстракта плодов кориандра посевного характерно также бактериостатическое действие в отношении Escherichia coli (1:250).

Оценка безопасности использования СО 2-экстрактов проводилась в соответствии с Федеральным законом № 86-ФЗ "О лекарственных средствах", Руководством по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических средств и международными правилами, предъявляемыми к фармакологическим и токсикологическим исследованиям лекарственных средств. Исследование токсичности показало отсутствие токсического эффекта СО 2-экстрактов при использовании в экспериментальных концентрациях.

Результаты исследования СО 2-экстрактов растительного сырья являются экспериментально-теоретической базой для создания лечебно-профилактических лекарственных препаратов природного происхождения, сочетающих противовоспалительное и антиоксидантное действие с бактерио- и фунгистатической активностью. С учетом особенностей ПСК и изученных свойств, СО 2-экстракты растительного сырья целесообразно использовать в качестве основных компонентов мягких лекарственных форм, в частности, суппозиториев и мазей. Предварительные результаты доклинических испытаний служат основой для достоверного выявления, оценки и доказательства прогнозируемой терапевтической активности в ходе отдаленных клинических исследований лекарственных препаратов на основе СО 2-экстрактов растительного сырья, сочетающих противовоспалительное и антиоксидантное действие с бактерио- и фунгистатической активностью.

Разработанные спецификации для контроля качества СО 2-экстрактов позволяют достоверно и объективно установить подлинность изученных объектов и выявить потенциальные фальсификации или несоответствия ПСК Государственным стандартам качества лекарственных средств, получаемым из растительного сырья.

ТЕХНОЛОГИЧЕСКИЕ ОСНОВЫ ПОЛУЧЕНИЯ ФАРМАКОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ КОНСТИТУЕНТОВ РАСТИТЕЛЬНОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ ДЛЯ ПРОИЗВОДСТВА МЯГКИХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ФОРМ.

В контексте решения проблемы лекарственной полипрогмазии целесообразным представляется изыскание средств и способов получения из отечественных видов ЛРС и пищевых растительных источников конституентов, содержащих комплекс фармакологически активных веществ, в частности, для производства мягких лекарственных форм (суппозиториев и мазей).

Известно, что жирное масло плодов растений семейства Сельдерейные содержит комплекс БАВ, обеспечивающих не только широкий спектр его фармакологической активности, но также обусловливающих возможность выделения твердых липофильных фракций (ТЛФ). Данные ТЛФ с нашей точки зрения могут быть использованы в качестве конституентов суппозиторных или мазевых основ растительного происхождения. Кроме того, растения семейства Сельдерейные являются широко культивируемыми в России, что представляет значимый фактор, влияющий на себестоимость конечного продукта. В середине XX века отечественными исследователями были проведены изыскания в области получения суппозиторной основы, представляющей собой твердую часть жирного масла плодов растений семейства Сельдерейные, близкую по консистенции и температуре плавления к маслу какао - классической суппозиторной основе (И.М. Фефер, 1953; Е.Н. Зарайская, Г.В. Макарова, 1955; М.Н. Бушкова, 1957). Однако длительность и многостадийность процесса получения твердой части из жирного масла плодов растений семейства Сельдерейные являлась причиной потери термолабильных БАВ, таких как каротиноиды, токоферолы, фосфолипиды, и обусловливала в конечном итоге получение твердой фракции, представляющей собой в основном ацилглицерины цис-6-октадеценовой (петрозелиновой) кислоты.

С целью упрощения процесса извлечения ТЛФ из плодов растений семейства Сельдерейные и увеличения содержания в них комплекса нативных БАВ нами проведены изыскания по выбору селективного экстрагента и разработке оптимального технологического способа.

Для получения ТЛФ использовали фармакопейные виды растений семейства Сельдерейные - плоды фенхеля обыкновенного (Foeniculum vulgare Mill.), укропа пахучего (Anethum graveolens L.) и кориандра посевного (Coriandrum sativum L.). Изыскание селективного экстрагента для извлечения ТЛФ из плодов растений семейства Сельдерейные проведено на примере малополярных органических растворителей и их смесей, наиболее широко используемых в качестве экстрагентов липофильных фракций из ЛРС и пищевых растительных источников.

ТЛФ получали из плодов растений семейства Сельдерейные с влажностью не более 2,5 %, измельченных до размера частиц, проходящих через сито с диаметром отверстий 0,5 мм, циркуляционной экстракцией малополярными органическими растворителями или их смесями в аппарате Сокслета в течение 2,5-3 часов при соотношении сырье: экстрагент - 1: 3-5. Указанные значения влажности, степени измельчения сырья, времени экстракции и соотношения сырье: экстрагент обеспечивают оптимальный выход липофильной фракции из плодов растений семейства Сельдерейные (А.Н. Фетисова с соавт., патент РФ 2147890, 2000). Экстрагент из полученной мисцеллы отгоняли на роторно-вакуумной испарительной установке при значениях величин температуры и давления, характерных для использованных в эксперименте органических растворителей и их смесей. Продукт высушивали в сушильном шкафу до постоянной массы при температуре 40-45^оС.

Экстракция липофильных фракций из масличного растительного сырья, как правило, проводится малополярными растворителями или их смесями с последующим удалением экстрагента; в каждом конкретном случае необходимо подобрать селективный экстрагент, обеспечивающий оптимальный выход БАВ. При этом условия удаления экстрагента не должны оказывать деструктивного влияния на выделяемый комплекс БАВ. Кроме того, в соответствии с поставленной исследовательской задачей, экстрагент должен обеспечивать выделение ТЛФ из плодов растений семейства Сельдерейные, обладающих необходимыми структурно-механическими свойствами для производства мягких лекарственных форм.

Результаты проведенных исследований по выбору оптимального экстрагента показали, что гексан является селективным экстрагентом для получения ТЛФ из плодов растений семейства Сельдерейные. Экстракция гексаном обеспечивает получение ТЛФ, характеризующихся структурно-механическими свойствами, которыми в соответствии с ГСКЛС должны обладать мазевые или суппозиторные основы. Из таблицы 9 следует, что попытка использования других малополярных органических растворителей (бензин "Нефракс", хлороформ, метанол) и/или их смесей не приводит к достижению исследовательской цели. Только использование гексана в качестве экстрагента для получения ТЛФ из плодов растений семейства Сельдерейные при соотношении сырье: экстрагент - 1: 3-5 позволяет упростить технологический процесс и увеличить содержание в целевом продукте нативных БАВ.

Таким образом, поставленная исследовательская задача решалась способом, заключающемся в том, что ТЛФ получают из плодов растений семейства Сельдерейные с влажностью не более 2,5 %, измельченных до размера частиц, проходящих через сито с диаметром отверстий 0,5 мм, экстракцией гексаном в аппарате Сокслета в течение 2,5-3 часов при соотношении сырье: экстрагент - 1: 3-5 (рис. 1).

Предлагаемый технологический способ извлечения ТЛФ из плодов растений семейства Сельдерейные, по сравнению с прототипом, позволяет исключить стадии кристаллизации и переэтерификации. Кроме того, использование в качестве экстрагента гексана позволяет упростить процесс очистки и, в целом, технологическую схему получения продукта (А.Н. Фетисова с соавт., патент РФ 2318867, 2008).

Таблица 9. Выбор селективного экстрагента для получения ТЛФ из плодов растений семейства Сельдерейные (на примере плодов фенхеля обыкновенного)

Рис. 1. Технологическая схема получения твердой липофильной фракции из плодов растений семейства Сельдерейные (А.Н. Фетисова с соавт., патент РФ 2318867, 2008)

Широкое применение гексана пищевыми и фармацевтическими производствами объясняется его стабильностью, высокой экстрагирующей способностью в отношении БАВ липофильной природы, малой потерей при испарении, более хорошими органолептическими свойствами шрота, остающегося после экстракции и использующегося в качестве кормовой добавки в животноводстве. Кроме того, имеются сведения, что для большинства органических растворителей характерна особенность экстракции афла- и микотоксинов, концентрирующихся в шроте. Исключением в данном контексте является гексан.

Гексан, по сравнению с другими малополярными органическими растворителями, имеет узкий интервал температуры кипения, что обусловливает возможность создания щадящего температурного режима на стадии удаления экстрагента. В представленном исследовании отгон экстрагента из мисцеллы проводился на роторно-вакуумной испарительной установке при давлении 150 мм рт. ст. и температуре 30^оС. Известно, что указанные условия обеспечивают оптимальную полноту удаления гексана из экстракта, полученного на основе масличного растительного сырья. ГЖХ анализ показал отсутствие остаточных количеств гексана в экспериментальных образцах ТЛФ плодов растений семейства Сельдерейные. Это позволяет сделать вывод о соответствии ТЛФ плодов растений семейства Сельдерейные, получаемых по предложенной технологии, требованиям отечественных и международных стандартов качества, предъявляемым к экстрактам, извлекаемым из ЛРС экстракцией органическими растворителями, по показателю "содержание остаточных количеств растворителя".

Выход ТЛФ зависит от родовой принадлежности исходного растительного сырья (плоды фенхеля обыкновенного - 4,87±0,22 %; плоды укропа пахучего - 4,18±0,19 %; плоды кориандра посевного - 4,67±0,21 %) и составляет не менее 4 % в пересчете на абсолютно сухое сырье. Полученные из плодов растений семейства Сельдерейные предложенным способом ТЛФ имеют показатели состава и качества, соответствующие требованиям ГСКЛС, предъявляемым к мягким лекарственным формам. Показатели состава и качества ТЛФ, полученной из плодов фенхеля обыкновенного предлагаемым способом, представлены в таблице 10 в сравнении с прототипом (И.М. Фефер, 1953). ТЛФ содержат помимо специфичной для растений семейства Сельдерейные петрозелиновой кислоты, которая обусловливает необходимые для конституентов мазевых и суппозиторных основ структурно-механические характеристики, также комплекс БАВ природного происхождения, обладающих антиоксидантной и противовоспалительной активностью. ТЛФ, полученные из плодов растений семейства Сельдерейные циркуляционной экстракцией гексаном в соответствии с разработанной технологической схемой, по показателям состава и качества могут быть рекомендованы в качестве конституентов растительного происхождения при производстве мазей или суппозиториев из отечественного сырья.

Разработанная технологическая схема позволяет упростить процесс получения ТЛФ из плодов растений семейства Сельдерейные, а также увеличить содержание в продукте нативного сбалансированного комплекса биологически активных веществ, обладающих антиоксидантным и противовоспалительным действием - каротиноидов, токоферолов, фосфолипидов. Предлагаемая технологическая схема получения ТЛФ природного происхождения обеспечивает не только оптимальный выход БАВ, но и способствует получению стабильного целевого продукта, содержащего минимальное количество балластных веществ, способных негативно влиять на качество мягких лекарственных форм, приготовленных с их использованием. Предложенный способ получения ТЛФ из плодов растений семейства Сельдерейные обеспечивает рациональное применение отечественных сырьевых запасов лекарственных растений и позволяет провести замены импортных суппозиторных или мазевых основ растительного происхождения.

липофильная фракция лекарственная растительное

Таблица 10. Сравнительная характеристика показателей состава и качества ТЛФ, полученной из плодов фенхеля обыкновенного предлагаемым способом и способом-прототипом

ОБНАРУЖЕНИЕ ПОТЕНЦИАЛЬНЫХ ФАЛЬСИФИКАЦИЙ И НЕДОБРОКАЧЕСТВЕННОЙ ПРОДУКЦИИ СРЕДИ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ РАСТИТЕЛЬНОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ, ИМЕЮЩИХ НЕСПЕЦИФИЧНЫЙ СОСТАВ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ

Общие аспекты выявления фальсификатов и недоброкачественной продукции среди лекарственных средств, изготовленных из масличного растительного сырья.

Актуальной проблемой современного рынка фармацевтической и парафармацевтической продукции в Российской Федерации является рост производства, распространения и использования фальсифицированных лекарственных препаратов и БАД. Значительное количество фальсифицированной и низкокачественной продукции выявляется среди ассортимента лекарственных препаратов и БАД природного происхождения, в частности изготовленных на основе масличного ЛРС. Увеличение доли фальсифицированных лекарственных средств является серьезной медико-социальной проблемой, связанной с угрозой здоровью населения страны и оборачивающейся многомиллионными убытками для государственной казны и частных производителей. В соответствии с разработанным ВОЗ "Планом действий по борьбе с фальсифицированными лекарственными средствами" определение ПСК лекарственных средств является одной из основных составляющих процесса выявления фальсифицированной и низкокачественной продукции среди препаратов и БАД, изготовленных из масличного ЛРС.

В настоящем исследовании на основании собственных эмпирических изысканий обоснованы принципиальные подходы и критерии обнаружения потенциальных фальсификаций и недоброкачественной продукции среди препаратов и БАД, изготовленных из масличного растительного сырья.

В качестве модельных объектов для разработки критериев и обоснования принципов выявления недоброкачественной продукции и потенциальных фальсификаций были выбраны БАД масло семян тыквы, тыквин, витадиойл, масло зародышей пшеницы, препарат тыквеол, имеющие неспецифичный состав БАВ, в частности, ацилглицеринов жирных кислот.

Увеличение доли фальсифицированной и недоброкачественной продукции на отечественном фармацевтическом рынке обусловливает процесс изменения системы контроля качества лекарственных средств, связанный с необходимостью проверки большого количества образцов при сравнительно высокой стоимости фармакопейных анализов. В данном аспекте ВОЗ рекомендует использовать упрощенные тесты, так называемые методы скрининговой оценки.

Одним из простейших методов скрининговой оценки потенциальной фальсификации является визуальный контроль внешнего вида препарата или БАД. Проведенный нами анализ объектов исследования по показателю "Описание" (таблица 11) показал, что в целом препарат тыквеол, БАД тыквин, масло семян тыквы, витадиойл и масло зародышей пшеницы соответствуют по данному показателю требованиям ГСКЛС, предъявляемым к лекарственным средствам, изготовленным из семян тыквы и зародышей пшеницы. Однако изученные серии БАД масло семян тыквы имеют характерный запах масла семян подсолнечника, что может являться потенциальной фальсификацией данной БАД, декларируемой производителем как "масло семян тыквы, полученное из семян фармакопейных видов тыкв методом холодного прессования и представляющее собой маслянистую жидкость от зеленовато-коричневого до красно-коричневого цвета с характерным запахом и вкусом".

Таблица 11. Характеристика исследованных серий препарата тыквеол, БАД масла семян тыквы, витадиойл и БАД масло зародышей пшеницы по показателю "Описание"

Обнаружение в препарате или БАД, изготовленном из масличного растительного сырья, примеси других жирных масел сходных по составу ТАГ жирных кислот является трудной задачей, не всегда приводящей к однозначным решениям. Особую сложность представляет обнаружение примеси масла семян подсолнечника в препаратах и БАД масла семян тыквы и масла зародышей пшеницы даже с использованием хроматографических методов идентификации жирных кислот, так как жирнокислотный состав ТАГ указанных масел представлен неспецифичными жирными кислотами: пальмитиновой (C16:0), стеариновой (C18:0), олеиновой (C18:1) и линолевой (C18:2). В данном случае для подтверждения выводов, полученных при первоначальной скрининговой оценке, приходится прибегать к расширенному фитохимическому исследованию в соответствии с утвержденными ГСКЛС методами анализа препаратов и БАД, изготовленных из масличного растительного сырья.

Проведенный фитохимический анализ препарата тыквеол, БАД тыквин, масло семян тыквы, витадиойл и масло зародышей пшеницы свидетельствует о том, что объекты исследования по основным показателям состава и качества идентичны, и в целом соответствуют требованиям, предъявляемым ГСКЛС к качеству лекарственных средств, изготовляемых из семян тыквы и зародышей пшеницы (таблица 12, 13).

Таблица 12. Показатели состава и качества препарата тыквеол и БАД масла семян тыквы исследованных серий

Таблица 13. Показатели состава и качества БАД витадиойл и масло зародышей пшеницы исследованных серий

Однако препарат и БАД масла семян тыквы исследованных серий не соответствуют требованиям ГСКЛС по показателю "Индекс окисленности". Индекс окисленности является одним из основных показателей доброкачественности лекарственных средств, изготовленных из масличного растительного сырья. Увеличение индекса окисленности свидетельствует о протекающих в жирных маслах процессах окисления ненасыщенных жирных кислот пероксикислотами с образованием соответствующих эпоксидов. Так, для препарата тыквеол значение индекса окисленности превышает верхний нормируемый предел на 1 %, для БАД тыквин - на 5 %, для БАД масло семян тыквы - на 10 %. Поэтому можно сделать вывод о недоброкачественности препарата и БАД масла семян тыквы исследованных серий. БАД тыквин также не соответствует требованиям ГСКЛС по показателю "суммарное содержание каротиноидов", данный показатель для БАД тыквин меньше нижнего нормируемого предела на 8,8 %, что согласуется с высоким значением индекса окисленности данной БАД.

Возросший уровень ятрогенных влияний на организм человека, в том числе при применении лекарственных препаратов и БАД, изготовляемых из ЛРС, связывается с увеличением выпуска фальсифицированной продукции. Производство фальсифицированных лекарственных средств из масличного растительного сырья может включать введение в жирное масло для усиления фармакологического воздействия препарата или БАД веществ синтетического происхождения, в том числе синтетических аналогов витаминов - альфа-токоферола ацетата и ретинола пальмитата. При производстве фальсифицированного препарата или БАД из масличного растительного сырья производителем не указывается в соответствующем стандарте качества содержание в лекарственном средстве добавок синтетических аналогов витаминов.

ВЭЖХ позволяет достоверно идентифицировать введение синтетических аналогов витаминов при производстве лекарственных препаратов и БАД из масличного растительного сырья и выявить фальсифицированную продукцию. Проведенный ВЭЖХ анализ показал отсутствие добавок синтетических аналогов витаминов - альфа-токоферола ацетата и ретинола пальмитата в исследованных сериях объектов (рис. 2).

I II

Рис. 2. Общий вид хроматограмм, позволяющих идентифицировать ретинола пальмитат (I) и альфа-токоферола ацетат (II) в препаратах и БАД, получаемых из масличного растительного сырья (на примере БАД витадиойл): А - общий вид хроматограммы стандартного образца ретинола пальмитата (I) или альфа-токоферола ацетата (II); Б - общий вид хроматограммы образца БАД витадиойл

Идентификация жирных масел, имеющих неспецифичный состав глицеринов жирных кислот, не всегда приводит к однозначным решениям, в связи с этим, идентификация жирных масел должна основываться главным образом на различии количественного состава их жирных кислот и глицеринов. Для скрининговой оценки лекарственных средств, получаемых из масличного ЛРС, может быть использован расчет количественного состава жирных кислот и их глицеринов на основании значений числа омыления, кислотного числа жирного масла и содержания неомыляемых веществ. Рассчитанный на основании полученных экспериментальных значений числа омыления, кислотного числа и содержания неомыляемой фракции состав жирных кислот и глицеринов объектов исследования в совокупности с результатами их скрининговой оценки позволяет идентифицировать препарат тыквеол и БАД тыквин как жирное масло семян тыквы, а также допустить потенциальную фальсификацию БАД масло семян тыквы, связанную с наличием в ней примеси масла семян подсолнечника. Известно, что средняя относительная молекулярная масса жирных кислот масла семян подсолнечника составляет 283. Как показано в таблице 14, средняя относительная молекулярная масса ацилглицеринов БАД масло семян тыквы превышает соответствующий показатель для препарата тыквеол и БАД тыквин на 4,2 %, а средняя относительная молекулярная масса жирных кислот соответственно выше на 4,6 %.

Таблица 14. Теоретический состав жирных кислот и глицеринов лекарственных средств, изготовленных из масличного растительного сырья, имеющего неспецифичный состав ацилглицеринов жирных кислот

Согласно техническим условиям БАД витадиойл представляет собой смесь масла семян тыквы и масла зародышей пшеницы. При производстве данной БАД регламентируется содержание масла семян тыквы не более 80 % и масла зародышей пшеницы не менее 20 % по объему. Масло семян тыквы и масло зародышей пшеницы имеют практически идентичный жирнокислотный состав. Кроме того, в указанных маслах отсутствуют какие-либо сопутствующие вещества, типичные только для одного из масел. Органолептические особенности в смесях жирных масел весьма трудно распознаваемы, в особенности, если они неясно выражены, и если одно из жирных масел находится в смеси в небольшом количестве. Однако сопоставление рассчитанного состава жирных кислот и глицеринов БАД витадиойл с препаратом и БАД масла семян тыквы и БАД масло зародышей пшеницы позволяет идентифицировать витадиойл как смесь соответствующих жирных масел (таблица 14).

Выявление фальсифицированной и недоброкачественной продукции среди препаратов и БАД, изготовленных из масличного растительного сырья, является комплексной проблемой, обусловленной в первую очередь сложностью идентификации жирных масел, имеющих неспецифичный состав глицеринов жирных кислот и характеризующихся отсутствием каких-либо специфичных сопутствующих веществ. Кроме того, целесообразность увеличения частоты и масштабов проверок определяет необходимость снижения роста издержек при проведении скрининговой оценки. При этом издержки, связанные с проведением скрининговой оценки, следует соотносить с вероятностью проявления ятрогенной патологии, т.е. с возможностью возникновения более значимых медицинских, социальных и экономических проблем, обусловленных применением фальсифицированных или недоброкачественных препаратов и БАД.

С нашей точки зрения для достоверного выявления фальсифицированной и недоброкачественной продукции среди препаратов и БАД, изготовленных из масличного растительного сырья, имеющего неспецифичный состав глицеринов жирных кислот и характеризующихся отсутствием каких-либо специфичных сопутствующих веществ, методы скрининговой оценки должны, во-первых, включать определение основных ПСК, представленных в таблицах 12 и 13. Предложенные методы скрининговой оценки экспериментальных значений основных показателей состава и качества препаратов и БАД, изготовленных из масличного ЛРС, не являются трудоемкими и дорогостоящими, включают в основном фармакопейные методики и являются базой для теоретического расчета состава жирных масел. Во-вторых, скрининговая оценка на основании расчетов состава жирных масел с использованием их основных показателей состава и качества может являться достоверным и объективным методом идентификации и выявления фальсифицированной продукции среди лекарственных средств, получаемых из масличного ЛРС, имеющего неспецифичный жирнокислотный состав и характеризующегося отсутствием специфичных сопутствующих веществ (таблица 14).

Вышеизложенные подходы являются экспериментально-теоретической базой выявления потенциальных фальсификаций и недоброкачественной продукции среди препаратов и БАД, изготовленных из масличного растительного, имеющего неспецифичный состав БАВ. Для достоверного и объективного обнаружения фальсификатов и недоброкачественной продукции среди указанной категории препаратов и БАД оптимальная последовательность процедур должна включать следующие этапы:

1. Органолептический анализ;

2. Определение основных ПСК (плотность, показатель преломления, число омыления, кислотное число, йодное число, индекс окисленности, содержание неомыляемых веществ, суммарное содержание каротиноидов в пересчете на бета-каротин);

3. Расчет состава жирных кислот и глицеринов на основании эмпирических ПСК.

Расчет состава жирных кислот и глицеринов в оценке качества лекарственных средств.

В настоящем исследовании на основании эмпирических ПСК препаратов и БАД, изготовленных из масличного ЛРС, разработана методика расчета состава жирных кислот и глицеринов, которая, как было показано выше, может быть использована для скрининговой оценки потенциальных фальсификаций и выявления недоброкачественной продукции среди указанной группы лекарственных средств.

1. Рассчитывают среднюю относительную молекулярную массу ацилглицеринов (ММГ), используя эмпирические значения числа омыления (ЧО) лекарственных средств, изготовленных из масличного ЛРС, по формуле:

ММГ = ,

где 56110 относительная молекулярная масса гидроксида калия;

3 - коэффициент пересчета на ТАГ;

ЧО - число омыления образца.

2. Рассчитывают среднюю относительную молекулярную массу жирных кислот (ММЖК) по формуле:

ММЖК = ,

где ММГ - средняя относительная молекулярная масса ацилглицеринов;

3 - коэффициент пересчета на ТАГ;

38 - относительная молекулярная масса углеводородной части глицерина.

3. Рассчитывают содержание свободных жирных кислот (СЖК) в процентах, используя эмпирические значения кислотного числа (КЧ) лекарственных средств, изготовленных из масличного ЛРС, по формуле:

СЖК = ,

где ММЖК - средняя относительная молекулярная масса жирных кислот;

56110 - относительная молекулярная масса гидроксида калия;

КЧ - кислотное число образца.

4. Рассчитывают содержание ацилглицеринов (САГ) в процентах, используя эмпирические значения содержания неомыляемых веществ (СНВ) (в процентах) в лекарственных средствах, изготовленных из масличного ЛРС, по формуле:

САГ = (100 - СЖК - СНВ),

где СЖК - содержание свободных жирных кислот, %;

СНВ - содержание неомыляемых веществ в образце, %.

На основании эмпирических ПСК был рассчитан состав жирных кислот и глицеринов объектов исследования (таблица 14) в соответствии с описанной выше последовательностью расчета. Известно, что состав жирных кислот в липофильных фракциях масличного ЛРС постоянен. В тоже время количественное содержание отдельных жирных кислот в разных образцах одной и той же липофильной фракции (жирного масла), полученной из конкретного ЛРС, может изменяться, но чаще всего в незначительных пределах. Различия в составе и количестве жирных кислот липофильных фракций растительного сырья отражаются на удельном расходе реагентов, затрачиваемых на соответствующие реакции. Для доброкачественного лекарственного средства, полученного из масличного ЛРС, удельный расход реагентов, выраженный соответствующими показателями (число омыления, кислотное число, содержание неомыляемых веществ, содержание свободных жирных кислот), изменяется в сравнительно небольших постоянных пределах. Кроме того, значения числа омыления и кислотного числа непосредственно связаны с жирнокислотным составом лекарственных средств, изготовленных из масличного ЛРС. Следовательно, совокупность таких ПСК, как число омыления, кислотное число и содержание неомыляемых веществ, позволяет проводить идентификацию лекарственных средств, изготовленных из масличного ЛРС.

Расчет состава жирных кислот и глицеринов лекарственных средств растительного происхождения, имеющих неспецифичный состав БАВ, производится на основании трех эмпирических ПСК - числа омыления, кислотного числа и содержания неомыляемых веществ, и позволяет достоверно и объективно идентифицировать соответствующий препарат или БАД, выявить потенциальную фальсификацию или недоброкачественную продукцию.

ВЫВОДЫ

1. На основании апостериорных сопоставительных экспериментальных исследований липофильных фракций, полученных из 7 родов растительного сырья экстракцией сверхкритическим диоксидом углерода и неполярными органическими растворителями, разработана аутентичная система спецификаций для контроля качества СО 2-экстрактов, как новых лекарственных средств природного происхождения, сочетающих противовоспалительное и антиоксидантное действие с бактерио- и фунгистатической активностью. Предварительные результаты доклинических испытаний, в ходе которых доказано бактериостатическое и фунгистатическое действие, микробиологическая чистота, отсутствие в экспериментальных дозах токсического эффекта СО 2-экстрактов, являются основой для достоверного выявления, оценки и доказательства прогнозируемой терапевтической активности в ходе отдаленных клинических исследований лекарственных препаратов на основе СО 2-экстрактов растительного сырья.

2. Разработана технология получения фармакологически активных конституентов растительного происхождения для производства мягких лекарственных форм, основанная на выделении твердых липофильных фракций из плодов растений семейства Сельдерейные с использованием селективного экстрагента. Эмпирически доказано, что предложенная технологическая схема обеспечивает выход стабильного целевого продукта, содержащего сбалансированный комплекс биологически активных веществ, сочетающих противовоспалительное и антиоксидантное действие. Разработанный способ получения твердых липофильных фракций из плодов растений семейства Сельдерейные способствует рациональному применению отечественных сырьевых запасов лекарственных растений и позволяет провести замены импортных суппозиторных или мазевых основ растительного происхождения.

3. Обоснованы принципиальные подходы и разработаны критерии обнаружения недоброкачественной продукции и потенциальных фальсификаций среди препаратов и биологически активных добавок, изготовленных из масличного растительного сырья. Предложенные методы скрининговой оценки показателей состава и качества препаратов и БАД, изготовленных из масличного ЛРС, базируются на использовании общедоступных сертифицированных методик, соответствующих рекомендациями ВОЗ.

4. Разработана методика эмпирического расчета состава жирных кислот и глицеринов объектов растительного происхождения, предназначенная для скрининговой оценки доброкачественности растительного сырья, лекарственных средств и биологически активных добавок липофильной природы, имеющих неспецифичный состав биологически активных веществ, в частности ацилглицеринов жирных кислот.

5. В результате проведенных изысканий сформирована экспериментально-теоретическая база для создания лечебно-профилактических лекарственных средств природного происхождения, сочетающих противовоспалительное и антиоксидантное действие с бактерио- и фунгистатической активностью. Предложенная аутентичная система разработки и спецификации лекарственных средств на основе липофильных фракций растительного сырья позволяет достоверно обнаружить потенциальные фальсификации или несоответствия требованиям, предъявляемым Государственными стандартами качества к оценке и валидации технологии производства лекарственных средств природного происхождения.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Фетисова А.Н. Современный подход к исследованию лекарственного растительного сырья и получаемых на его основе лекарственных средств // Сборник трудов "Лекарственные растения Ботанического сада"....