Размещено на http://www.allbest.ru/

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации

на соискание ученой степени доктора фармацевтических наук

ИННОВАЦИОННАЯ РАЗРАБОТКА КОМБИНИРОВАННЫХ ГЛАЗНЫХ КАПЕЛЬ НА БАЗЕ ИНФОРМАЦИОННЫХ ТЕХНОЛОГИЙ

Жилякова Елена Теодоровна

Москва 2008

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Белгородский государственный университет Федерального агентства по образованию»

Научный консультант: доктор фармацевтических наук, профессор

Степанова Элеонора Федоровна

Официальные оппоненты: доктор фармацевтических наук

Гузев Константин Сергеевич

доктор фармацевтических наук, с.н.с.,

Петров Александр Юрьевич

доктор фармацевтических наук, профессор

Краснюк Иван Иванович

Ведущая организация Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Башкирский государственный медицинский университет Федерального агентства по образованию» (г. Уфа).

Защита состоится «____» ___________ 2009 г. в ______ часов на заседании Диссертационного совета Д 212.203.19 при Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Российский университет дружбы народов Федерального агентства по образованию» (117198, г. Москва, ул. Миклухо-Маклая д.8, корп.1).

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке Государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Российский университет дружбы народов Федерального агентства по образованию» (117198, г. Москва, ул. Миклухо-Маклая, д.6).

Автореферат разослан «__________» ______________________ 2009 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета,

доктор фармацевтических наук,

доцент В.В.Дорофеева

1. Общая характеристика работы

Актуальность проблемы:

Рост количества глазных заболеваний определяется многими факторами, в том числе неблагоприятной экологической обстановкой, техногенными воздействиями, нагрузкой на орган зрения, которая возрастает по мере развития цивилизации. Наибольшее число встречающихся офтальмологических заболеваний - конъюнктивиты, катаракта, глаукома. Катаракта является одной из основных причин слепоты в мире. Число подобных патологий составляет около 17 млн человек. Основным методом восстановления зрения при катарактах является микрохирургия глаза, в которой достигнуты большие успехи. Однако, несмотря на определенные преимущества этого метода, он остается небезопасным, так как, его применение способно увеличивать число послеоперационных осложнений. Кроме того, высокая стоимость операции и возможные ее ограничения обосновывают и стимулируют развитие терапевтических методов лечения катаракт.

Все лекарственные препараты для глазной практики представляют собой особую группу лекарственных средств. Это определяется рядом причин социального, медицинского и фармацевтического характера: исключительной ролью органа зрения в обеспечении уровня и качества жизни человека; особой сложностью и специфичностью анатомических, биофизических и физико-оптических механизмов зрения; возможностью и необходимостью лекарственного воздействия на передний отдел глаза; строгими требованиями к качеству и безопасности офтальмологических лекарственных форм; существенными технологическими трудностями при разработке составов и технологий и их внедрении в производство, связанными с достаточно узкой номенклатурой активных фармакологических субстанций и вспомогательных веществ, разрешенных для введения в глаз; высокими требованиями к показателям рН и изотоничности. В наибольшей степени этим требованиям отвечают глазные капли (ГК). Максимальный терапевтический эффект проявляют комбинированные ГК, однако, мировой рынок этих лекарственных форм составляет всего около 30% от общего числа ГК, а на Российском рынке преимущественно присутствуют «дженерические» ГК.

Учитывая вышесказанное, проблема разработки составов, технологий, оригинальных комбинированных ГК и внедрение их в производство, представляется актуальной.

В то же время, сложность и длительность реализации этапа разработки составов ГК обусловлена тем, что проблема их создания является многокритериальной и предполагает применение таких процедур отбора обоснованных составов, которые позволяют согласовать и сочетать различные требования к ним. Проблема существенно осложняется вариабельностью возможных сочетаний в лекарственной форме действующих и вспомогательных веществ и необходимостью исследований большого количества модельных смесей.

В настоящее время вопросы прогнозирования в научных технологических и экономических исследованиях достаточно многоплановы и объемны. Для фармацевтической технологии наибольший интерес представляют методологические схемы и блоки предопределяющего характера, разработанные в Пятигорской фармацевтической академии (Кузнецовым А.В.), Екатеринбургской медицинской академии (Гавриловым А.С.), Волгоградском медицинском университете (Ганичевой Л.М.), выполненные с использованием значительного числа экспериментальных данных. Методологические схемы разработки составов и технологий, предложенные в этих работах рассматривают определенный класс лекарственных форм. При этом методологические подходы к исследованию и производству глазных лекарственных форм вообще не изучались. Поэтому конструирование системы прогнозирования составов глазных капель с целью оптимизации производства этой группы лекарственных форм - вполне актуально. Тем более, что современная наука позволяет использовать в данном исследовании компьютерные технологии.

Цель и задачи исследования:

Целью настоящего диссертационного исследования является создание методологии разработки и дальнейшего изучения глазных капель с помощью прогнозирующих компьютерных технологий, моделирование и внедрение основных составов комбинированных глазных капель антикатарактального действия.

Настоящая цель детализирована с помощью следующих задач.

Задачи исследования:

· Разработать методологию формирования составов ГК с использованием метода анализа иерархий в форме Саати.

· Создать компьютерную базу данных, активных фармакологических субстанций, применяемых для лечения глаукомы и катаракты, и вспомогательных веществ, применяемых при создании ГК.

· Разработать процедуру выбора состава модельных растворов ГК с примененим метода парных сравнений.

· Использовать метод анализа иерархий при разработке составов ГК на основе таурина, цианокобаламина и карнозина для лечения и профилактики катаракты.

· Разработать нормы качества для предложенных лекарственных форм.

· Провести комплекс фармакологических исследований - изучение специфической активности и токсичности, на примере одного из разработанных составов с целью подтверждения его рациональности.

· Разработать и обосновать оптимальные технологические схемы производства ГК с таурином, цианокобаламином и карнозином и дать необходимые производственные рекомендации.

· Разработать проект необходимой нормативной документации предложенных ГК.

· Провести исследования, подтверждающие возможность применения метода анализа иерархий для корректировки традиционных составов ГК.

Научная новизна и теоретическая значимость работы.

С использованием прогнозирующего метода анализа иерархий разработаны комбинированные ГК с таурином и цианокобаламином, с таурином и карнозином антикатарактального действия.

Прогнозирование целесообразности выбора составов ГК с акцентом на доминирующие вспомогательные компоненты выполнено с применением метода парных сравнений в форме Саати, впервые использованного в фармацевтической технологии.

Сконструирована оригинальная компьютерная база данных, включающая ассортимент лекарственных и вспомогательных компонентов для глазных капель и их физико-химические свойства, позволяющая автоматизировать поиск необходимой информации по заданным характеристикам.

Впервые на основе проведенного прогнозирования с применением метода парных сравнений в форме Саати разработана технология комбинированных ГК двух составов.

Предложен новый эффективный вспомогательный компонент для глазных капель - пролонгатор - декстран низкомолекулярный, установлены его оптимальные технологические характеристики.

На основании результатов проведенных экспериментально- теоретических исследований впервые сконструирована методологическая блок-схема создания и производства, комплексных ГК для лечения и профилактики катаракты.

Разработанные нормы качества на состав ГК таурина с цианокобаламином, вошли в проект ФСП на препарат.

Оригинальность и новизна одного из разработанных составов ГК подтверждена патентом РФ № 2295331 от 20.03.2007 года.

Разработанная в результате исследований база данных зарегистрирована в ОФАП: свидетельство № 9683 от 22 декабря 2007года

Создана «Программная система поддержки принятия решений при разработке лекарственных средств», патент РФ №2008614212 от 3.09.08 года.

Практическая значимость работы.

Результаты, полученные в ходе экспериментально-теоретических исследований свидетельствуют о возможностях и перспективности использования метода анализа иерархий в создании ГК различного фармакологического действия. Разработанные глазные капли эффективны в эксперименте при лечении катаракты.

Разработан проект ФСП на антикатарактальные комбинированные ГК для фармацевтического предприятия ОАО «Фармстандарт - Лексредства» (г. Курск), который принят к рассмотрению и включен в план перспективного внедрения.

Разработан проект опытно-промышленного регламента для фармацевтического предприятия ОАО «Фармстандарт - Лексредства» (г. Курск) на глазные капли таурина с цианокобаламином (протокол рассмотрения № 3/3480 от 18.09.08).

Проведены опытно-промышленные наработки лекарственного препарата на базе фармацевтического предприятия ОАО «Фармстандарт-Лексредства» (г. Курск) (акт технологической апробации от 14.09.08).

Полученные данные по гармонизации требований к глазным каплям в соответствии с Европейской фармакопеей учтены при составлении общей фармакопейной статьи на глазные капли Фармакопеи Х11 выпуска (акт внедрения №. 04.09.2008).

Фрагменты диссертационной работы внедрены в учебный процесс кафедры фармации Белгородского государственного университета (акт внедрения № 1.09.2007) и приняты для повседневной работы лабораторией технологии лекарственных средств НИИ фармации ММА им. И.М.Сеченова (акт внедрения № 01.09.2008). Методика анализа глазных капель Цитарин апробирована в лаборатории фармацевтической химии НИИ фармации ММА им. И.М.Сеченова (акт внедрения № 04.09.08.).

На защиту выносятся:

· Результаты разработки методологических подходов моделирования составов ГК при помощи метода анализа иерархий.

· Результаты разработки электронной базы данных лекарственных и вспомогательных веществ для информационного обеспечения процесса создания ГК.

· Результаты исследований по изучению декстрана низкомолекулярного в качестве вспомогательного вещества в составах ГК - пролонгатора и загустителя.

· Результаты разработки технологии получения комбинированных ГК с таурином и витамином В₁₂, таурином с карнозином.

· Результаты фармакологической оценки комбинированных ГК с таурином и витамином В₁₂.

· Результаты конструирования методологической схемы производства ГК разработанных составов.

· Результаты обоснования и разработки технологической схемы производства ГК, предложенного состава.

· Результаты разработки норм качества для предложенного состава ГК таурина с цианокобаламином.

· Результаты исследований применения метода анализа иерархий для модификации традиционных составов ГК.

Конкретное участие автора в получении научных результатов

Основная часть исследований (85% общего объема) выполнена лично автором диссертационной работы. Разработка состава ГК, с таурином и цианокобаламином, его опытно-промышленная наработка на фармацевтическом предприятии ОАО «Фармстандарт-Лексредства» проводилась совместно с ассистентом кафедры фармации Новиковой М.Ю. под непосредственным руководством автора данной диссертационной работы. Фармакологические исследования проведены в лаборатории доклиничеких испытаний НИИ экологической медицины Курского государственного медицинского университета под руководством д.м.н, профессора М.В. Покровского. Электронные микрофотографии частиц таурина, карнозина и декстрана сделаны в Центре коллективного пользования БелГУ.

Апробация работы.

Основные положения диссертационной работы представлены на Международных конференциях: Международном научно-практическом семинаре «Оптимизация создания лекарственных препаратов» (Белгород, 1999), Международной научно-практической конференции «Нетрадиционные и редкие растения, природные соединения и перспективы их использования» (Белгород, 2006), ХХ Международной научной конференции «Математические методы в технике и технологиях» (Ростов-на-Дону, 2007), Разработка, исследование и маркетинг новой продукции (Пятигорск, 2008), Международный конгресс «Человек и лекарство» (Москва, 2008), российско-немецком научном семинаре «Перспективы и риски использования наноматериалов в природных и технических системах» (г. Белгород, 2008).

Публикации.

Основное содержание диссертации представлено в 36 опубликованных работах. Диссертация состоит из введения, 8 глав и заключения, изложена на 300 страницах машинописного текста компьютерного набора, содержит 75 таблиц и 38 рисунков. В список литературы включено 300 библиографических источников, из которых 118 - зарубежных авторов.

2. Основное содержание работы

«Методология обоснования выбора состава ГК с использованием компьютерных информационных технологий». Предложена методология применения компьютерных технологий для информационного обеспечения процесса разработки ГК на основе электронной базы данных активных фармакологических субстанций и вспомогательных веществ.

Обоснованием целесообразности использования предлагаемого подхода служит необходимость сокращения процессов создания лекарственных средств и повышения их эффективности за счёт применения современных информационных технологий поддержки принятия решений на основе отбора и обработки знаний. Разработанная методология служит инструментом прогнозирования и обоснования составов ГК.

При обосновании выбора состава с использованием метода анализа иерархий важной процедурой является разработка критериев отбора вспомогательных веществ. Формирование указанных критериев не является формальной процедурой, так как приходится учитывать различные требования, предъявляемые к ГК. Возникает необходимость в определении интегральной оценки предпочтительности того или иного варианта, то есть комплексировании сравнений по различным критериям. Поэтому одним из центральных вопросов является разработка собственно процедуры такого комплексирования, начиная с обоснования метода проведения сравнений альтернатив и завершая оцениванием относительных важностей самих выбранных критериев. При этом процедура парных сравнений производится на основе физико-химических характеристик сравниваемых компонентов. При выборе состава ГК использовалась иерархическая процедура поддержки принятия решений, что важно для последовательности этого выбора. Иерархическое представление процедуры выбора альтернатив изображено на рисунке 1.



Рис.1. Иерархическое представление процедуры выбора альтернатив

Необходимые расчеты всех характеристик были проведены с учетом доминанты вычисления - создания глазных капель антикатарального действия. По результатам экспертных оценок заполнялась матрица парных сравнений, представленная в таблице 1.

Таблица 1. Структура матрицы парных сравнений

	=1
		1
			1
				1

Символы А_1, А₂, А₃, А_N - наименования сравниваемых вариантов возможного выбора (критериев или альтернативных веществ), с_1к - оценки отношений соответствующих соотношению значений силы cсравниваемых вариантов. Для заполнения матрицы парных сравнений использовали определённый набор суждений о степенях превосходств одних альтернатив перед другими. Суждения и численные значения степеней превосходств приведены в табл. 2.

Таблица 2. Шкала суждений и количественных значений их силы в методе Саати

№п\п	Суждение (Высказывание)	Значение силы (m)
1	Сравнимы	1
2	Промежуточное превосходство между «Сравнимы» и «Превосходит»	2
3	Превосходит	3
4	Промежуточное превосходство между «Превосходит» и «Значительно превосходит»	4
5	Значительно превосходит	5
6	Промежуточное превосходство между «Значительно превосходит» и «Существенно превосходит»	6
7	Существенно превосходит	7
8	Промежуточное превосходство между «Существенно превосходит» и «Абсолютное превосходство»	8
9	Абсолютное превосходство	9

При парных сравнениях в соответствующие клетки помещаются числа из последнего столбца таблицы 2 согласно следующей схеме.

В случае если альтернатива А₁ превосходит альтернативу А₂ и степень превосходства выражается суждением с номером (левый столбец табл. 2), в соответствующую клетку матрицы парных сравнений помещается число с_12=К, и наоборот осуществляется присвоение с₂₁₌1/_К, когда признано, что альтернатива А₂ в той же степени превосходит альтернативу А₁.

Интегральная оценка весомостей альтернатив на основе парных сравнений произведена по формуле:

.

Для информационного обеспечения процессов разработки ГК составлена соответствующая база данных. Схема представлена на рис. 2

Рис. 2. Схема баз данных информационного обеспечения

Информационное обеспечение было реализовано средствами АССЕS. Сконструированная база данных имеет следующее содержание:

· Области применения;

· Способы действия;

· Действующие вещества.

· Вспомогательные вещества: консерванты; стабилизаторы; растворители.

«Обоснование выбора вспомогательных веществ лекарственной формы на основе таурина с витамином В₁₂» Применяемые в настоящее время лекарственные препараты для профилактики и лечения катаракты делят на две группы, исходя из механизма их фармакологического действия: участвующие в электролитном обмене и влияющие на метаболические процессы. Последняя группа более эффективна, но малочисленна. Поэтому разработка комплексного лекарственного препарата в форме ГК на основе отечественной активной фармакологической субстанции таурин позволит расширить ассортимент этой важнейшей группы фармакотерапевтических офтальмологических средств. Широкое применение в офтальмологии таурин нашел в виде 4% раствора - монопрепарата. Одним из его недостатков является отсутствие репаративного действия, которое необходимо при длительном использовании ГК, так как его применение в виде частых инстилляций приводит к механическому раздражению слизистой оболочки глаза. Более широкое и эффективное использование таурина возможно при его сочетании с лекарственными веществами репаративного действия, а также за счет увеличения длительности его контакта ЛВ со слизистой глаза или роговицей.

Решение этих вопросов возможно с использованием сочетания таурина с цианокобаламином (витамином В₁₂). Увеличение длительности терапевтического эффекта таурина при одной инстилляции можно достигнуть путем добавления в лекарственную форму загустителей. Исследований по данному направлению до настоящего времени не проводилось.

Для проведения исследований по созданию комбинированных ГК для профилактики и лечения катаракты были применены компьютерные технологии для отбора состава ГК с применением метода анализа иерархий. При разработке составов ГК при помощи этого метода, необходимо было определить критерии готовой лекарственной формы. В общей фармакопейной статье (ГФХ1 издания) на ГК, указаны свойства этой лекарственной формы. Гармонизированные требования к ГК в соответствии с Европейской, Британской и Американской фармакопеями позволили конкретизировать свойства ГК и выделить следующие критерии:

Критерий 1. «Пролонгирующий эффект». Длительность лечения таких заболеваний как глаукома и катаракта вызывает необходимость в частых инстилляциях ГК 6-8 раз в сутки. Поэтому вопрос пролонгирования ГК - первостепенный в их технологии, а пролонгирующий эффект может быть использован как критерий 1.

Критерий 2. «Изогидричность (pH)» Это фармакопейный показатель, определяющий во многом комфортность лечения, значение рН ГК должно быть постоянным в допустимых пределах, что свидетельствует о стабильности раствора. Наиболее предпочтительная область значения рН 5,5-9,0.

Критерий 3. «Растворимость» Важнейший критерий, также характеризующий многие технологические свойства ГК.

Критерий 4. «Стоимость» Показатель, характеризующий качество жизни больного.

Сравнение критериев и интегральные весомости представлены в табл. 3.

Таблица 3. Сравнения критериев для выбора вспомогательных веществ

Критерии	Пролонгирующий эффект	Изогидричность (рН)	Растворимость	Стоимость	Весомости
Пролонгирующий эффект	1,00	2,00	2,00	3,00	0,41
Изогидричность (рН)	0,50	1,00	2,00	3,00	0,29
Растворимость	0,50	0,50	1,00	3,00	0,20
Стоимость	0,33	0,33	0,33	1,00	0,10

Из таблицы 3 следует, что интегральная весомость критерия 1 превосходит весомости остальных критериев, что подчеркивает его значимость и для выбора состава и для создания технологической схемы.

В таблице 4 представлены данные по выбору пролонгатора-загустителя, полученные при сравнении растворов конкретных вспомогательных веществ: декстрана, натрия карбоксиметилцеллюлозы (NaКМЦ), глицирама, поливилпирролидона (ПВП).

Таблица 4. Сравнения пролонгаторов-загустителей с точки зрения критерия «Пролонгирующий эффект»

Загустители	Декстран 5%	NaКМЦ 1%	Глицирам 0,1%	ПВП 15%	Весомости
Декстран 5%	1	3	1	3	0,589
NaКМЦ 1%	0,33	1	0,33	1	0,007
Глицирам 0,1%	1	3	1	2	0,393
ПВП 15%	0,33	1	0,5	1	0,011

Из таблицы 4 следует, что предпочтение нужно отдать раствору декстрана 5% (интегральная весомость 0,589).

В таблице 5 содержатся сравнительные данные по выбору пролонгатора-загустителя с точки зрения критерия 2.

Данные таблицы 5 показывают, что с точки зрения критерия «Изогидричность» наиболее предпочтительным является раствор прологатора-загустителя декстрана (интегральная весомость 0,852).

В таблице 6 представлены результаты сравнения пролонгаторов- загустителей с позиций критерия 3. Из данных таблицы 6 видно, что с точки зрения критерия «Растворимость» наибольшее предпочтение имеет раствор пролонгатора - загустителя декстрана.

Таблица 5. Сравнения пролонгаторов-загустителей с точки зрения критерия «Изогидричность»

Загустители	Декстран 5%	NaКМЦ 1%	Глицирам 0,1%	ПВП 15%	Весомости
Декстран 5%	1,00	2,00	2,00	3,00	0,852
NaКМЦ 1%	0,50	1,00	1,00	2,00	0,071
Глицирам 0,1%	0,50	1,00	1,00	2,00	0,071
ПВП 15%	0,33	0,50	0,50	1,00	0,006

Таблица 6. Сравнения пролонгаторов-загустителей с точки зрения критерия «Растворимость»

Загустители	Декстран 5%	NaКМЦ 1%	Глицирам 0,1%	ПВП 15%	Весомости
Декстран 5%	1,00	3,00	3,00	1,00	0,585
NaКМЦ 1%	0,33	1,00	0,50	0,33	0,004
Глицирам 0,1%	0,33	2,00	1,00	0,50	0,021
ПВП 15%	1,00	3,00	2,00	1,00	0,390

В таблице 7 представлены результаты сравнения пролонгаторов- загустителей с позиций критерия «Стоимость».

Таблица 7. Сравнения пролонгаторов-загустителей с точки зрения критерия «Стоимость»

Загустители	Декстран 5%	NaКМЦ 1%	Глицирам 0,1%	ПВП 15%	Весомости
Декстран 5%	1,00	0,11	0,5	0,17	5,0E-05
NaКМЦ 1%%	9,00	1,00	9,00	2,00	0,947
Глицирам 0,1%	2	0,11	1,00	0,33	0,0004
ПВП 15%	6,00	0,50	3	1,00	0,053

Анализируя данные таблицы 7, установлено, что с точки зрения критерия «Стоимость» пролонгатор-загуститель NaКМЦ в силу дешевизны существенно превосходит все остальные

Далее вычисляли интегральные весомости с учетом всех используемых критериев сравниваемых пролонгаторов-загустителей для лекарственной формы на основе действующих веществ «таурин+ витамин В₁₂»: их значения приведены в таблице 8. Наибольшее значение имеет весомость пролонгатора-загустителя декстран, которому и следует отдать предпочтение с учетом всех критериев лекарственной формы.

Таблица 8. Интегральные весомости пролонгаторов-загустителей с учетом всех критериев

Интегральная весомость	Загуститель
0,530	Декстран 5%
0,111	Натрия карбоксиметилцеллюлоза 1%
0,353	Глицирам 0, 1%
0,006	ПВП 15%

Далее проводили выбор консерванта для глазных капель таурина с цианокобаламином. В качестве ведущих критериев установлены: сила действия консерванта, его рН, раствормость в воде, стоимость.

Критерий 1. «Сила действия» консерванта является важным показателем. Согласно общей статье «Глазные капли» ГФХ1 издания, эта лекарственная форма должна быть полностью стерильна, в том числе и на протяжении всего процесса ее применения. Добиться стерильности в процессе производства можно, в случае обеспечения полной асептики. Сохранение стерильности ГК в процессе использования их пациентом, осуществляется введением консервантов.

Критерий 2. «Изогидричность рН», также является фармакопейным и определяет «рабочую» область эффективности консерванта. Кроме того, этот показатель важен для создания комфортности использования глазных капель больными. Особенное значение комфортность приобретает, когда применение лекарственного средства производится на протяжении длительного времени, как при лечении катаракты.

Критерий 3. «Растворимость». Критерий 4. «Стоимость»

В таблицах 9 и 10 приводятся результаты вычислений на основе парных экспертных оценок с использованием метода анализа иерархий весомостей критериев и интегральных весомостей по всем критериям сравниваемых консервантов.

Таблица 9. Сравнения критериев для отбора консервантов

Критерии	Сила действия	Стоимость	рН	Растворимость	Весомости
Сила действия	1,00	4,00	3,00	2,00	0,471403
Стоимость	0,25	1,00	0,33	0,50	0,096225
рН	0,33	3,00	1,00	0,50	0,179094
Растворимость	0,50	2,00	2,00	1,00	0,253278

Данные таблицы 9 показывают, что наибольшей весомостью обладает критерий «Сила действия» - значение 0,471403.

Таблица 10. Интегральные весомости консервантов с учетом всех используемых критериев

Интегральные весомости	Консерванты
0,133	хлорбутанол
0,271	Нипагин нипазол
0,557	БАХ
0,039	Борная кислота

Как видно из таблицы 10, наибольшим интегральным значением с точки зрения всех критериев обладает бензалкония хлорид.

Прогнозирующие исследования позволили сформировать качественный состав рассматриваемой композиции: таурин, цианокобаламин, декстран низкомолекулярный, бензалкония хлорид.

Таурин -- 2-аминоэтансульфоновая кислота (Н₂N--CH₂--CH₂--SO₃H, ) -- природное соединение, которое ошибочно относят к аминокислотам.На рисунке 3 представлена электронная микрофотография таурина.

Цианокобаламин трудно растворим в воде, растворы устойчивы при рН 4,0-6,0. При наработке препаратов, содержащих цианокобаламин, следует соблюдать асептические условия, так как микрофлора инактивирует витамин.



Рис. 3. Электронная микрофотография частиц таурина

Декстран низкомолекулярный медленно растворяется, поэтому для снижения затрат времени на изготовление капель предлагается его измельчать. Декстран, в основном имеет овальную форму частиц, и процесс растворения происходит достаточно долго, в течение 1-го часа. Чтобы увеличить растворимость декстрана и сократить время его растворения проводили измельчение его на шаровой вибрационной мельнице.

Рис. 4. Электронная микрофотография частиц декстрана, измельченного в течение 5 минут

Измельченный в течение 5 минут декстран представлен на рисунке 4. Широкий разброс размеров частиц декстрана сказывается на его растворении. Растворение декстрана, измельченного в течение 5 минут при помощи магнитной мешалки занимает 50-60 минут. Распределение размеров частиц декстрана, измельчаемого в течение 5-ти минут представлено на рисунке 6.

Из рисунка 6 видно, что 52,7% составляет фракция до 10 мкм, 25,5% - фракция с размером частиц от 10,1 мкм до 20,1 мкм; 14,5% -фракция от 20,1 до 30 мкм и от 1 до 4,5% фракция крупных частиц от 40 до 60 мкм. Однако, в результате измельчения форма частиц в основном не изменялась.

Рис. 6. Распределение частиц декстрана по размерам после 5 минут измельчения

На рисунке 7 представлено распределение частиц декстрана, измельчаемого в течение 15 минут.



Рис.7. Распределение частиц декстрана по размерам после 15 минут измельчения

Как видно из рисунка 7, изменения в размерах частиц декстрана практически не произошло, однако, как видно, из рисунка 8, в измельчаемом образце появились разломы и трещины, изменилась форма частиц декстрана, что должно способствовать активизации процесса растворения.

Рис.8. Электронная микрофотография частиц декстрана, измельченного в течение 15 минут

Дальнейшее измельчение декстрана проводилось в течение 30 минут. Данные распределения частиц декстрана по размерам представлены на рисунке 9. Как видно из рисунка 9, резко увеличилась в количественном отношении фракция частиц с размером от 10,1 до 20,0 мкм, (44%) и резко уменьшилась фракция с размером частиц до 10 мкм (8%), кроме того, увеличились фракции от 40,1 до 50 мкм и появилась фракция от 60,1 до 70 мкм (4% и 2% соответственно).

Рис. 9. Распределение частиц декстрана по размерам после 30 минут измельчения

При этом время растворения измельченного декстрана увеличилось до 50 минут. Это можно объяснить тем, что мелкие частицы агломерировались в крупные образования, что видно на рисунке 10.

В таблице 11 приведен анализ распределения частиц декстрана по группам, в зависимости от их размера при различных режимах измельчения.



Рис.10. Электронная микрофотография частиц декстрана, измельченного в течение 30 минут

Таблица 11. Распределение частиц декстрана низкомолекулярного по размеру при различных режимах измельчения

		доля, %
группа	размер частиц, мкм	5 мин	15 мин	30 мин
1	до 10	52,7	53,2	8
2	от 10,1 до 20	25,5	20,8	44
3	от 20,1 до 30	14,5	14,6	20
4	от 30,1 до 40	4,5	8,4	17
5	от 40,1 до 50	1,8	2	5
6	от 50,1 до 60	1	1	4
7	От 60,1 до 70			2

На рисунке 11 показано влияние процесса измельчения на размер частиц декстрана во времени. Увеличение срока измельчения до 30 минут удлиняет временя растворения декстрана до 50 минут за счет образования агломератов, сформировавшихся из наиболее мелких фракций.



Рис. 11. Влияние процесса измельчения декстрана на размер частиц в зависимости от режима измельчения

На основании проведенных исследований для получения комбинированных ГК на основе таурина и витамина В₁₂ предлагается использовать загуститель декстран низкомолекулярный, который для уменьшения времени растворения до 10 минут необходимо измельчать в течение 15 минут.

Окончательный состав разрабатываемого препарата следующий.

Таурин40,0 г

(ФС 42-12107-02)

Цианокобаламина0,25 г

(ФС 42-3604-98)

Бензалкония хлорид0,10 г

в пересчете на безводный

(ВФС 42-3156-98)

Декстан 4000050,0 г

(ФС 42-2023-99)

Воды для инъекцийдо 1000 мл

(ФС 42-2619-97)

При этом общая рассчитанная осмолярность раствора равна 298,9 мОсм. Как видно, осмотическое давление ингредиентов, входящих в состав глазных капель таурина с витамином В₁₂ вполне соответствует физиологическому, поэтому, этот состав не нуждается в дополнительном изотонировании. Теоретические расчеты подтверждены инструментальным определением этого показателя.

Разработка показателей качества глазных капель с турина и цианокобаламином

Основными действующими компонентами препарата является таурин и цианокобаламин (витамин В₁₂). В соответствии с требованиями ГФ XI издания к глазным лекарственным препаратам в разработанную ФСП включены стандартные показатели качества: описание, подлинность, прозрачность, рН, сопутствующие примеси (2-аминоэтанол), стерильность, количественное определение, упаковка, маркировка. Мы проводили изучение этих показателей для разработанного состава ГК.

Определение подлинности цианокобаламина проводили методом спектрофотометрии в диапазоне от 320 до 600 нм. Установлено, что раствор дает максимумы поглощения при 332 ± 2 нм, 360 ± 2 нм, 520 ± 3 нм и 552 ± 3 нм, характерные для цианокобаламина. Другие компоненты препарата в этом диапазоне не имеют поглощения, и не мешают проведению теста. Дополнительно, подлинность цианокобаламина определяли методом ТСХ.

Подлинность бензалкония хлорида проверяли реакцией с раствором соли Рейнеке, что характерно для четвертичных аммониевых групп. Далее было уделено внимание показателям, характеризующим ГК как лекарственную форму: прозрачности и рН, а также контролю на механические включения и стерильность.

Определение сопутствующих примесей 2-аминоэтанола проводили методом ТСХ по методике аналогичной методике используемой для контроля субстанции таурина, с использование предварительно подготовленных хроматографических пластинок «Сорбфил ПТСХ А» или с использованием пластинок “Silica gel 60” производства фирмы Мерк. Предел обнаружения пятна 2-аминоэтанола составляет около 0,03 - 0,04 мкг.

Количественный анализ проводили применительно к 3 основным составляющим ГК - таурину, цианокобаламину, бензалкония хлориду. При этом были использованы: метод кислотно-основного титрования в нашей модификации - определение точки эквивалентности проводили потенциометрически; метод спектрофотометрии при 550 нм, и двухфазное титрование. Выполненные аналитические исследования позволили установить нормы качества для разрабатываемого лекарственного препарата: содержание таурина: 0,0380- 0,0420г/мл; цианокобаламина 0,000225-0,000275 г/мл; бензалкония хлорида 0,000085 -0,000115 г/мл, а также определить стабильность образцов исследуемого состава в течение 24 месяцев. Результаты представлены в таблице 12 и 13.

Таблица 12. Результаты наблюдения стабильности образцов ГК на протяжении 24 месяцев таурина с цианокобаламином

Показатели качества	Сроки наблюдения, мес.
	6	12	15	18	24
Прозрачность	Раствор должен быть прозрачным
1.12.01.06	прозрачный	прозрачный	прозрачный	прозрачный	прозрачный
2.12.01.06	прозрачный	прозрачный	прозрачный	прозрачный	прозрачный
3.13.01.06	прозрачный	прозрачный	прозрачный	прозрачный	прозрачный
4.13.01.06	прозрачный	прозрачный	прозрачный	прозрачный	прозрачный
5.13.01.06	прозрачный	прозрачный	прозрачный	прозрачный	прозрачный
Цветность	Раствор должен быть розового цвета, не интенсивнее эталона 5в
1.12.01.06	Соответствует	Соответствует	Соответствует	Соответствует	Соответствует
2.12.01.06	Соответствует	Соответствует	Соответствует	Соответствует	Соответствует
3.13.01.06	Соответствует	Соответствует	Соответствует	Соответствует	Соответствует
4.13.01.06	Соответствует	Соответствует	Соответствует	Соответствует	Соответствует
5.13.01.06	Соответствует	Соответствует	Соответствует	Соответствует	Соответствует
Изогидричность (рН)	5,5-6,5
1.12.01.06	5,80	6.35	5,65	5,62	5,72
2.12.01.06	5,79	5,66	6,30	5,89	5,73
3.13.01.06	6,00	5,66	5,81	5,79	6,00
4.13.01.06	5,79	5,79	5,80	5,73	5,95
5.13.01.06	5,78	5,73	5,80	6,40	5,82

В таблице 13 представлены соответствующие метрологические характеристики.

Таблица 13. Метрологические характеристики количественного определения действующих компонентов ГК таурина с цианокобаламином

ЦИАНОКОБАЛАМИН, серии (1.12.01.06-5.13.01.06)
Сроки наблюдения (мес)	6	12	15	18	24
Среднее значение	0,00025	0,000251	0,000251	0,000251	0,000251
Среднеквадратичная ошибка среднего арифметического (Sx)	0,000000937	0,00000144	0,00000812	0,00000086	0,000000812
Абсолютная ошибка для данной доверительной вероятности (S2)	0,00000257	0,00000398	0,00000226	0,00000239	0,00000226
Относительная погрешность результатов измерений Е%	1,02	1,58	0,89	0,95	0,89
БЕНЗАЛКОНИЯ ХЛОРИД, серии (1.12.01.06-5.13.01.06)
Сроки наблюдения (мес)	6	12	15	18	24
Среднее значение	0,000098	0,0000999	0,000099	0,000099	0,000092
Среднеквадратичная ошибка среднего арифметического (Sx)	0,0000008	0,0000004	0,0000002	0,0000007	0,00000054
Абсолютная ошибка для данной доверительной вероятности (S2)	0,00000222	0,00000111	0,0000055	0,00000215	0,00000162
Относительная погрешность результатов измерений Е%	2,26	1,11	0,55	2,17	1,63

Ошибка единичного определения с 95% вероятностью методики количественного анализа таурина, цианокобаламина и бензалкония хлорида в ГК Цитарин не превышает 1,034, 1,580 и 2,260 соответственно.

Результаты проведенных технологических, физико-химических исследований позволили сформировать оптимальную технологическую схему производства ГК таурина с цианокобаламином («Цитарин»). Схема, представленная на рисунке 12, в целом, является традиционной в плане своей структуры и объема. Технологическими особенностями данного производственного процесса является определенная последовательность растворения основных ингредиентов, что следует соблюдать и при масштабировании этих этапов. Растворение ингредиентов в реакторе начинается с полного растворения цианокобаламина, которое контролируется визуально. В технологическом процессе выделяется стадия (ТП-4.1)- приготовление раствора бензалкония хлорида, производимая отдельно, так как этот консервант обладает гигроскопическими свойствами. Одновременно происходит измельчение декстрана низкомолекулярного на шаровой вибрационной мельнице на стадии (ВР-4). Фильтрация раствора ГК таурина с цианокобаламином осуществляется через мембранные фильтры «Миллипор» с размером отверстий 0,22 мкм. Стерильность разрабатываемых глазных капель может быть достигнута как стерилизующей фильтрацией, так и тепловой стерилизацией при температуре 121°С и давлении 1,1 мПа в течение 8 минут. Установлено, что оба метода стерилизации не влияют на стабильность препарата.

Дальнейшие исследования были посвящены подтверждению разработанной прогнозирующей методологии. В частности были проведены поисковые исследования по разработке глазных капель на основе сочетания действующих веществ «таурин + карнозин». При этом ставилась цель создать условия для усиления метаболического действия обоих действующих веществ, сохранив индивидуальные качества таурина и максимально использовать сильные антиоксидантные свойства карнозина.



Рис. 12. Технологическая схема производства ГК Цитарин

«Разработка и обоснование состава композитных глазных капель на основе таурина с карнозином».

Выбор в качестве одного из объектов сочетания вещества карнозин обусловлен универсальностью его фармакологического действия на офтальмологические патологии, включая катаракту и глаукому, также синдром сухого глаза.В настоящее время пока не известны примеры использования карнозина в сочетании с таурином для создания комбинированных офтальмологических лекарственных препаратов в форме капель, так что настоящая композиция - оригинальна. Поэтому для выбора оптимального состава вспомогательных веществ для данной композиции мы использовали разработанную методологию экспертных оценок на основе анализа иерархий, взяв в качестве критериев сравнения, использованных для ГК «Цитарин». Обобщенные результаты выбора пролонгаторов-загустителей и консервантов, а также рассчитанные их интегральные весомости представлены в таблице 14.

Таблица 14. Интегральные весомости загустителей и консервантов

Результирующие весомости	Пролонгатор	Результирующие весомости	Консервант
0,399981	ГПМЦ 0,3%	0,347333	Тиомерсал
0,216453	ПВС 3%	0,173374	Нипагин-нипазол
0,176241	ПВП 15%	0,380367	БАХ
0,224769	Декстран 10%	0,130961	Хлорбутанол

Результаты таблицы 14 свидетельствуют в пользу выбора в качестве пролонгатора-загустителя гидроксипропилцеллюлозы, а в качестве консерванта бензалкония хлорида.

«Фармакологические исследования ГК «Цитарин».

Результаты сравнительного исследования комбинированных ГК «Цитарин» и ГК «Тауфон», на модели селенитовой катаракты выявили значительное антикатарактальное действие «Цитарина», данные представлены в таблице 15.

Таблица 15. Результаты антикатарактальной активности глазных капель «Цитарин» и «Тауфон»

№ п/п	Контроль (не леченные животные)	Глазные капли «Цитарин», по 1 капле 3 раза в день	Глазные капли «Тауфон», по 1 капле 3 раза в день
	Левый глаз	Правый глаз	Левый глаз	Правый глаз	Левый глаз	Правый глаз
1	4	4	1	1	3	2
2	3	3	2	1	2	2
3	4	3	2	2	2	2
4	3	4	2	2	2	2
5	4	4	2	3	3	3
6	4	4	2	2	3	3
7	4	4	1	1	3	3
8	4	4	1	2	3	3
9	3	4	3	2	2	3
10	4	4	2	3	2	2
Среднее	3,70±0,15	3,80±0,13	1,70±0,16	1,90±0,20	2,50±0,17	2,50±0,17
Среднее	3,75±0,10#	1,80±0,13*	2,50±0,11*

Как видно из данных представленных в таблице 15, применение как ГК «Цитарин», так и глазных капель «Тауфон» приводит к значительному уменьшению выраженности помутнения хрусталика при моделировании селенитовой катаракты.

При сравнении между собой эффекта от применения ГК «Цитарин» и ГК «Тауфон» обнаружено, что суммарная степень поражения обоих глаз при применении «Цитарина» - 1,80±0,13 имеет в 1,5 раза более низкое значение, чем при применении «Тауфона» - 2,50±0,11. При оценке переносимости тканями глаза глазных капель на основании визуальной оценки выраженности гиперемии и отека конъюнктивы век при применении ГК «Цитарин» и «Тауфон» видимых признаков раздражающего действия не обнаруживалось.

Таким образом, применения в качестве фармакотерапевтического средства для лечения катаракты ГК «Цитарин» на модели селенитовой катаракты оказалось более эффективным, чем применение ГК «Тауфон». В первую очередь, данный эффект мы связываем с комбинированным воздействием таурина и витамина В₁₂ в составе «Цитарина», что оказывает комплексное воздействие на характер повреждений наблюдаемых при селенитовой катаракте. Кроме того, наличие в составе ГК «Цитарин» антисептика - бензалкония хлорида позволяет применять данные глазные капли и при риске развития инфекционного поражения при различных повреждениях глаза, которые также могут спровоцировать и развитие катаракты. Фармакологические эффекты витамина B₁₂, при местном применении, способствуют более быстрому устранению последствий гематом и кровоизлияний, еще больше расширяет спектр возможного применения. Действие ГК «Цитарин» в первую очередь обусловлено комбинированным составом, в который помимо таурина входят витамин В₁₂, декстран и бензалкония хлорид, что позволило без уменьшения эффективности в отношении терапевтического эффекта при моделировании катаракты расширить область возможного их применения; учитывая, что таурин широко применяется при лечении открытоугольной глаукомы, а, в свою очередь, катаракта из-за длительности и частоты инстилляций может явиться следствием противоглаукомной терапии, разработанные ГК «Цитарин» возможно использовать в лечении глаукомы, обеспечивая при этом профилактику катаракты.

«Оптимизация составов глазных капель на основе метода анализа иерархий»

Для подтверждения разработанной методологии на основе МАИ нами были выбраны 4 состава ГК непролонгированного действия, проведено изучение их физико-химических характеристик, процедуры принятия решения с целью оптимизации состава и изучение их биофармацевтических характеристик модифицированного состава лекарственных форм. Физико-химические характеристики ГК, выбранных нами представлены в таблице 16.

Как видно из таблицы 16, ни один состав не обладает пролонгированным действием, так как их динамическая вязкость по значению близка к вязкости слезной жидкости (1,02-1,93сП).

Таблица 16. Физико-химические характеристики непролонгированных ГК

№ п/п	Название препарата	Производитель	Состав	Физико-химические свойства

Подобные документы

• Изготовление и проведение обязательных видов внутриаптечного контроля глазных лекарственных форм

  Требования, предъявляемые к глазным каплям, офтальмологическим растворам и внутриаптечным заготовкам. Изготовление глазных капель растворением лекарственных и вспомогательных веществ. Органолептический, физический и химический контроль капель.
  
  курсовая работа [462,9 K], добавлен 27.02.2017
  

• Изготовление и производство глазных лекарственных форм

  Анализ закономерностей промышленного и аптечного изготовления глазных лекарственных форм. Требования, предъявляемые к глазным каплям, офтальмологическим растворам и внутриаптечным заготовкам. Технология производства глазных капель; контроль качества.
  
  дипломная работа [1017,6 K], добавлен 06.04.2015
  

• Анализ и сертификация лекарственных препаратов, выпускаемых в виде лекарственных форм с жидкой дисперсной средой

  Фармацевтическая технология и классификация лекарственных форм; совершенствование их составов и способов изготовления. Контроль качества глазных капель и примочек растворов для инъекций, суспензий и эмульсий для внутреннего и наружного применения.
  
  курсовая работа [58,8 K], добавлен 26.10.2011
  

• Использование ВЭЖХ в анализе антибиотиков

  Состав жидкостного хроматографа. Детекторы и устройства для сбора данных. Применение высокоэффективной жидкостной хроматографии в анализе антибиотиков. Оценка препарата Рулид, Азитромицин с ее помощью. Расчет концентрации антибактериальных глазных капель.
  
  курсовая работа [128,2 K], добавлен 05.01.2014
  

• Анестезия при офтальмологических операциях

  Внутриглазное давление как способ поддержания нормальной формы глаза. Хирургические операции, сопровождающиеся нарушением целостности оболочек глазного яблока. Системное действие глазных капель. Поддержание анестезии и интраоперационный мониторинг.
  
  реферат [23,0 K], добавлен 03.01.2010
  

• Понятие стерилизации, ее основные методы

  Классификация методов стерилизации, их выбор. Исследование методов стерилизации инъекционных препаратов и глазных капель, содержащих вещества из различных химических групп, выпускаемых фармацевтическими предприятиями в России и ближнем зарубежье.
  
  курсовая работа [452,1 K], добавлен 06.08.2013
  

• Контроль качества лекарственных форм

  Должностные обязанности провизора аналитика. Анализ лекарств, изготавливаемых в аптеках по рецептам (на примере глазных капель). Алгоритм внутриаптечного контроля различных лекарственных форм. Требования к условиям хранения взрыво- и огнеопасных веществ.
  
  отчет по практике [318,0 K], добавлен 12.02.2015
  

• Болезни глаз

  Симптомы амблиопии, блефарита, близорукости, глаукомы, дальнозоркости, катаракты, кератоконуса, конъюнктивита. Мушки в глазах. Виды и степень астегматизма, его причины. Лечение глазных заболеваний: оптическая коррекция зрения, рефракционная хирургия.
  
  презентация [1,9 M], добавлен 27.05.2014
  

• Характеристика ушных лекарственных средств

  Строение слухового анализатора. Анализ состава и технологии приготовления ушных капель как экстемпорального производства, так и промышленного. Действие ушных капель на основе прополиса. Обзор классификации ушных препаратов и анатомического строения уха.
  
  курсовая работа [31,6 K], добавлен 15.02.2012
  

• Наследственные заболевания глаз

  Наследственная патология органа зрения при аутосомно-рецессивном и аутосомно-доминантном типе наследования. Врождённые катаракты, нистагма, мнимый и истинный анофтальм. Глиома сетчатки глаза. Предупреждение врожденных и наследственных глазных заболеваний.
  
  презентация [3,9 M], добавлен 27.03.2012
  

• Жизнь и деятельность Владимира Петровича Филатова

  Краткая биография В.П. Филатова. Учеба в Московском университете. Защита диссертации по офтальмологии. Работа в Одесском научно-исследовательском центре глазных болезней. Разработка метода пересадки роговицы. Создание учения о биогенных стимуляторах.
  
  презентация [6,5 M], добавлен 19.06.2017
  

• Фармакотерапия глазных болезней

  Новые лекарственные средства для лечения бактериальных и хламидийных конъюнктивитов. Наноносители лекарственных веществ в офтальмологии, методика биорегулирующей терапии. Опыт применения мягких лечебных контактных линз с высоким содержанием воды.
  
  курсовая работа [100,6 K], добавлен 30.11.2015
  

• Результаты оценки структуры послеоперационных осложнений при лечении катаракты

  Использование новейших хирургических технологий и современной аппаратуры при лечении катаракты. Оценка глазного статуса у пациентов. Прогнозирование ранних послеоперационных осложнений при одномоментном лечении катаракты и открытоугольной глаукомы.
  
  статья [20,3 K], добавлен 18.08.2017
  

• Капли в нос

  Анатомо-физиологические особенности строения носа. Капли в нос, их характеристика и требования, предъявляемые к их качеству. Безрецептурные лекарственные препараты для сиптоматического лечения ринита. Экстемпоральные прописи капель для носа, проверка доз.
  
  курсовая работа [45,8 K], добавлен 21.03.2011
  

• Лечение глаукомы

  Основные направления медикаментозного и хирургического лечения глаукомы. Средства, улучшающие отток внутриглазной жидкости. Механизм действия гипотензивных препаратов для лечения заболевания. Принципы терапии острого приступа закрытоугольной глаукомы.
  
  презентация [928,4 K], добавлен 17.12.2013
  

• Заболевания носа и околоносовых пазух

  Причины, симптомы и течение, лечение и профилактика ринита, катарального ринита, хронического гипертрофического насморка. Формы синуситов (гайморит, фронтит, этмоидит) и особенности их лечения. Алгоритм закапывания капель в нос взрослому и ребенку.
  
  презентация [518,2 K], добавлен 30.05.2016
  

• Деструкция стекловидного тела глаза

  Характеристика нетрадиционных методов лечения деструкции стекловидного тела глаза, причиной которой является нарушение синтеза коллагена и дефицит витаминов и минералов. Особенности профилактики глазных заболеваний: осанка, правильное дыхание, питание.
  
  топик [16,5 K], добавлен 14.03.2010
  

• Анализ ассортимента интраназальных лекарственных препаратов в аптеке

  Классификация и характеристика интраназальных лекарственных препаратов в аптеке. Исследование совместимости и стабильности экстемпоральных капель для носа. Перспективные лекарственные формы для лечения острого инфекционного или аллергического ринита.
  
  курсовая работа [503,7 K], добавлен 22.02.2017
  

• Влияние низкочастотных акустических колебаний на остеорепарацию длинных трубчатых костей при комбинированных радиационно-механических поражениях

  Особенности репаративной регенерации костной ткани после изолированного перелома кости и при комбинированных радиационно-механических поражениях. Способы оптимизации остеорепарации. Репаративная регенерация костной ткани. Методы лечения переломов.
  
  курсовая работа [1,1 M], добавлен 11.04.2012
  

• Профилактика близорукости у детей младшего школьного возраста средствами фитнесс-технологий

  Причины, проблема профилактики близорукости и других заболеваний глаз у детей школьного возраста. Упражнения для снятия усталости глаз. Гимнастика для глаз, игры и упражнения с речитативом. Упражнения для глаз на растягивание и укрепление глазных мышц.
  
  реферат [25,0 K], добавлен 22.09.2010
  

• главная
• рубрики
• по алфавиту
• вернуться в начало страницы
• вернуться к началу текста
• вернуться к подобным работам