Характеристика интерферон-альфа-индуцированных дендритных клеток и их терапевтический потенциал в лечении онкологических и инфекционных заболеваний

33 7*

174 17*

2303 518 * #

31 8 * #

Аллостимуляторная активность (ИВ)

24 3,9

8 0,9*

22 8,7#

Th1-стимулирующая активность(ИВДК)CD3+IFNг+

5,2 0,9

1,1 0,2*

2,0 0,4*#

Th2-стимулирующая активность (ИВДК)CD3+IL-4+

1,3 0,2

3,5 0,4*

2,4 0,5*

Продукция в СКЛ(ИВ) - IFNг

- IL-4

22 3,1

2,0 1,0

3,4 0,9*

4,6 2,2*

13,3 3,1*

5,4 2,0*#

Апоптоз CD16CD56

4.2 0,6

21,5 3,8

-

Примечание: данные представлены в виде средних значений (M±SE), ИВДК - индекс влияния ДК, * - достоверность различий показателей по сравнению со здоровыми женщинами, # - достоверность различий по сравнению с физиологической беременностью, (pu <0,05, u- критерий Вилкоксона-Манна-Уитни).

По сравнению с небеременными женщинами ДК беременных отличались меньшим содержанием CD83+ - и CD25+- клеток, сниженной продукцией IFN- и повышенной - IL-4, меньшей аллостимуляторной активностью, отсутствием способности индуцировать генерацию IFN-г продуцирующих Т-клеток и продукцию IFN-г и повышенной способностью индуцировать IL4-продуцирующие клетки и секрецию IL-4. Следует отметить, что одним из интересных проявлений толерогенной активности ДК беременных была их способность индуцировать апотоз активированных NK-клеток, что, видимо, объясняет снижение количества этих клеток при беременности. По сравнению с физиологической гестацией ДК беременных с ГА характеризовались нормальной экспрессией CD83- и CD25, более высокой продукцией IFN- и низкой - IL-4, сохранной аллостимуляторной активностью и, наряду с Th2-стимуляторной активностью, индуцировали возрастание числа IFN-г продуцирующих клеток и секрецию IFN-г в СКЛ (табл. 11).

Эффект ДГЭАС на экспрессию поверхностных маркеров оценивался в культурах ДК, генерируемых из периферической крови женщин с физиологической беременностью. Добавление ДГЭАС в культуры ДК на этапе дозревания (совместно с LPS) приводило к значимому возрастанию доли CD1a+, CD83+ и CD25+ ДК (таблица 12) , усилению аллостимуляторной активности (9354±1916 в присутствии ДГЭАС против 4640±1007 в отсутствие гормона) и индуцировало появление Th1-стимулирующей активности.

Примечание: данные представлены в виде средних значений (M±S.E); *рU<0,05, **рU<0,01 - достоверность различий по сравнению с ДК, полученными в стандартных условиях (U- критерий Вилкоксона-Манна-Уитни)

Таблица 12

Влияние дегидроэпиандростерона сульфата на дифференцировку и созревание ИФН-ДК беременных женщин

СD маркер (%)	В отсутствие ДГЭАС (n=10)	В присутствии ДГЭАС (10-6М)
		В течение всего периода генерации ДК (n=10)	На стадии дозревания ДК (n=10)
CD83	17,0 ± 2,4	17,5 ± 2,8	21,5 ± 3,1**
CD1а	4,1 ± 0,3	4,9 ± 0,7	6,3 ± 0,8*
CD11с	18,4 ± 2,8	19,6 ± 3,0	19,3 ± 3,0
CD123	21,6 ± 3,4	23,0 ± 3,8	21,5 ± 4,1
CD14	14,3 ± 2,2	12,8 ± 1,9	14,4 ± 2,2
CD25	8,8 ± 2,2	9,4 ± 1,6	12,0 ± 2,1*

Так, концентрация IFN-г в культурах СКЛ, индуцированных ДГЭАС-модифицированными ДК более чем в 2 раза превышала таковую в культурах СКЛ, индуцированных интактными ДК (344±160 против 144±90 пг/мл; (n=14); рU <0,05), т.е. гормон индуцировал свойства, характерные для ДК беременных с ГА. Обработка ДК ДГЭАС приводила также к ослаблению проапоптогенной активности ИФН-ДК, т.е. их способности индуцировать апоптоз CD16+CD56+ клеток (с 4,1±0,7 до 21,1±5,0%; pU<0,05). Аналогичным образом ДГЭАС влиял и на ДК доноров, т.е. стимулировал созревание ДК и усиливал их Th1-стимуляторную активность. Тем не менее, ДК беременных обладали большей чувствительностью к стимулирующему эффекту гормона. Так, в культурах ДК доноров ДГЭАС практически не влиял на аллостимуляторную активность (18780 ± 1190 имп/мин в отсутствие ДГЭАС против 19910 ± 1870 имп/мин в присутствии ДГЭАС) и не менял баланса цитокинов.

Полученные данные свидетельствуют о том, что ДГЭАС может оказывать иммуностимулирующий эффект опосредованно через ДК, индуцируя их дифференцировку/созревание, усиливая Th1 стимуляторную активность и подавляя способность индуцировать апоптоз NK-клеток.

Следующий этап работы был посвящен клинической апробации ИФН-ДК в лечении больных ЗОГМ и хроническими вирусными инфекциями (ХВГВ и герпесвирусная инфекция). Клинические испытания безопасности и эффективности иммунотерапии (ИТ) с использованием ИФН-ДК были проведены на базе ФГУ НИИТО Росмедтехнологий в период с 2003 до 2007 гг в соответствии с разработанным протоколом, утвержденным Учеными советами Института клинической иммунологии и ФГУ НИИТО Росмедтехнологий (протокол № 1, апрель 2003 г) и одобренным локальным этическим комитетом. Клинические испытания проводились в дизайне пилотного контролируемого нерандомизированного исследования с историческим контролем. Основным критерием эффективности служило развитие антигенспецифического противоопухолевого иммунного ответа, дополнительным - улучшение показателей выживаемости и качества жизни. ИТ как дополнение к оперативному лечению и радиотерапии проводилась 32 пациентам (основная группа). Группу сравнения (исторический контроль) составил 91 пациент, которые получали хирургическое лечение и радиотерапию. ИТ включала курс адоптивной иммунотерапии (2-кратное локорегиональное введении лимфокин-активированных киллерных клеток и цитотоксических Т-клеток в ложе удаленной опухоли) и курс вакцинотерапии (6 подкожных инъекций ДК, нагруженных опухолевыми антигенами, в дозе 5-10х106/введение с кратностью вакцинаций - 1 раз в 2 недели в сочетании с подкожным введением Ронколейкина в дозе 250000 МЕ). Проводимая терапия характеризовалась хорошей переносимостью, поскольку не вызывала выраженных цитокиновых реакций и ухудшения общемозговой симптоматики, а также каких-либо осложнений, связанных с интрацеребральным введением клеток и вакцинацией пациентов.

Таблица 13

Индукция антиген-специфического ответа в процессе вакцинации дендритными клетками больных злокачественными глиомами

	До вакцинации	После трех вакцинаций	После шести вакцинаций
Спонтанная пролиферация	425 ± 74	321 ± 88	666 ± 145
Опухолевый АГ 0,01 мг/мл	663 ± 154 (1,65 ± 0,4)	363 ± 121 (1,3 ± 0,3)	5170 ± 1507 * (10,9 ± 4,9)

Примечание: представлены средние значения пролиферативного ответа (имп/мин) МНК больных (n=10) на специфический опухолевый антиген. В скобках - индексы влияния (отношение индуцированной антигеном пролиферации к спонтанной пролиферации), *- рU<0,05 - достоверность различий по сравнению с состоянием до начала вакцинаций (U - критерий Вилкоксона-Манна-Уитни).

При этом ИТ с использованием ИФН-ДК сопровождалась индукцией антигенспецифического иммунного ответа. Об этом свидетельствовало существенное возрастание пролиферативного ответа МНК на опухолевые антигены после 3, и особенно после 6 вакцинаций (табл. 13). Кроме того, развитие иммунного ответа подтверждалось появлением положительной кожной пробы на опухолевые антигены в реакции ГЗТ. Так, исходно кожная проба на ОА была отрицательной у всех 25 обследованных пациентов. В то же время после 3 и 6 иммунизаций положительная кожная проба регистрировалась у 7 (28%) и 16 (64%) пациентов, соответственно. При этом значительных различий среди пациентов с опухолями Grade IV и Grade III не наблюдалось. При статистическом анализе показателей выживаемости в сравниваемых группах оказалось, что относительное количество выживших больных в основной группе к исходу 12, 24 и 36 мес. было достоверно выше, чем в группе сравнения (65,6%, 50%, 37% против 48,4%, 23%, 7,7%, соответственно). Анализ кривых выживаемости у пациентов с глиобластомой и анапластической астроцитомой показал, что выживаемость больных, получивших ИТ, в обеих группах была достоверно выше, чем у больных при проведении стандартного лечения (рис.4). Показатель продолжительности жизни больных глиомами Grade III составил в основной группе 30,7±3,1 мес, что значимо превышало таковую в группе сравнения (20,0±2,3; р ч2=0,01). Средняя продолжительность жизни в основной группе больных Grade IV составила 12,8±1,9 мес, что также значимо превышало аналогичный показатель в группе исторического контроля (7,2±0,28 мес; р=0,002). При сравнении показателей качества было установлено, что при равных исходных значениях индекса Карновского показатели качества жизни через 6, 12 и 24 мес. в основной группе были достоверно выше (84 ± 1,4; 86 ± 1,6; 91 ± 2,3 балла), чем в группе сравнения (66 ± 1,6; 66 ± 1,8 и 61 ± 3,7 баллов, соответственно).

Рисунок 4. Показатели выживаемости (мес) больных глиомами

А - Grade III- Основная группа - пунктирная линия, группа сравнения сплошная линия. Достоверность различий кривых - р=0,001. Б - Grade IV. Достоверность различий кривых - р=0,009

Таким образом, ИТ больных ЗОГМ с использованием ИФН-ДК показала хорошую переносимость и отсутствие побочных токсических реакций, а также возможность индуцировать иммунный ответ, что ассоциировалось с улучшением показателей выживаемости и качества жизни пациентов

Апробация ДК-вакцин у больных хроническими вирусными инфекциями была проведена в дизайне открытых проспективных пилотных исследований с контролем «до-после» в группе 9 пациентов хроническим вирусным гепатитом В (ХВГВ) и 7 больных с герпесвирусной инфекцией в соответствии с протоколами (протокол № 6 от 26 сентября 2006 г. для ХВГВ и протокол № 9 от 11 декабря 2007 г. для герпесвирусной инфекции). Отбор больных и лечение проводились на базе отделения иммунологии Клиники Института клинической иммунологии СО РАМН в период с сентября 2006 по ноябрь 2008 г. Основным критерием эффективности лечения у больных гепатитом служило прекращение репликации вируса, дополнительными - нормализация биохимических показателей и индукция антигенспецифического ответа. У больных герпесвирусной инфекцией основным критерием эффективности являлось удлинение межрецидивного периода после завершения 2-х курсов ИТ, дополнительным - индукция антигенспецифического ответа. Иммунотерапия включала два курса: первый состоял из 4-6 вакцинаций ИФН-ДК, нагруженными рекомбинантными вирусными антигенами (HВsAg - вакцинальный АГ «Энджерикс В» Смит-Кляйн-Бичем-Биомед, Бельгия и рекомбинантный антиген вируса герпеса -HSV1gD, соответственно) c 2-недельным интервалом. Второй курс - 4-6 вакцинаций с кратностью 1 раз в месяц. Количество ДК на одну вакцинацию составляло 5х106 клеток.

В группе больных с ХВГВ к моменту завершения исследования 2 из 9 больных гепатитом имели полный стабильный ответ (прекращение репликации вируса и нормализация биохимических показателей), у 3 пациентов отмечалось временное прекращение репликации вируса, сопровождающееся устойчивой нормализацией биохимической активности. ИТ сопровождалась достоверным усилением антигенспецифического ответа, который сохранялся повышенным до 6 мес после завершения терапии. При этом у больных не отмечалось усиления биохимической активности, а также исходно сохранной митогенной реактивности или реактивности к IL-2 (табл. 14).

Таблица 14

Динамика пролиферативного ответа МНК больных ХВГВ на HВs-антиген

	Пролиферативная активность (имп/мин)
	МНК(0)	МНК(АГ+)	МНК(IL2+)	МНК(IL2+АГ)	КонА(15 мкг/мл)
До лечения	272±65	354±109	2624±532(	3632±881	34379±6071
После 1 курса ИТ	296±51	424±51	2406±541	4393±82	40185±6525
После 2 курса ИТ	183±98	695±220*	2892±892	3506±934	36830±7689
Через 6 мес.п/е ИТ	215±96	956±289*	2987±789	3870±987	39879±8950

Примечание: данные представлены в виде средних значений пролиферативного ответа (М±SE) МНК больных ХВГВ в отсутствие антигена (МНК0), в присутствии АГ- МНК(АГ+), интерлейкина-2 в дозе 100 Ед/мл МНК(IL2+) и сочетания стимулов МНК(IL2+АГ), *-достоверность различий по отношению к МНК(0), рU<0,01, U-критерий Вилкоксона-Манна-Уитни

Как известно, стандартная противовирусная терапия у больных ХВГВ не всегда позволяет достичь прекращения репликации вируса и нормализации биохимических показателей. С этой точки зрения активация специфического иммунного ответа с помощью иммунизации ДК, нагруженными HВs-антигеном, может рассматриваться в качестве дополнительной стратегии противовирусной терапии.

У больных герпесвирусной инфекцией ИТ с использованием ДК сопровождалась достоверным увеличением межрецидивного периода за время лечения (9 мес) и 6-месячного срока последующего наблюдения. При анализе клинической эффективности у больных герпесвирусной инфекцией было показано достоверное уменьшение числа обострений на фоне лечения (4,0±0,7 против 5,93±0,48 эпизодов до лечения; рU<0,05) и в течение последующих 6 месяцев наблюдения (2,4±0,97; рU<0,05). Соответственно, межрецидивный период на фоне терапии возротал до 81,6±13,8 дней, и в период 6 мес наблюдения после терапии составил 67,1±16,2 дня, что было достоверно выше соответствующего показателя до лечения (18,7±3,2; pU<0,05) При этом у 3 пациентов после лечения не было зарегистрировано ни одного обострения, а у остальных 4-х обострения протекали более мягко, с меньшей площадью высыпаний и менее выраженной интоксикацией. Исследование антигенспецифического и митогениндуцированного пролиферативного ответа в культурах МНК больных показало, что исходно пациенты с герпесвирусной инфекцией характеризовались сниженным уровнем Кон-А стимулированной пролиферации и отсутствием реактивности при стимуляции вирусным антигеном. Проведение ИТ сопровождалось достоверным усилением антигенспецифического ответа, который сохранялся повышенным до 6 мес после завершения терапии. Кроме того, у больных отмечалось значимое усиление исходно сниженной митогенной реактивности на конканавалин А (табл. 15).

Примечание: данные представлены в виде средних значений пролиферативного ответа (М±SE) МНК больных герпесвирусной инфекцией в отсутствие (МНК0) и в присутствии АГ - МНК(АГ+), *-достоверность различий, рU<0,05, U-критерий Вилкоксона-Манна-Уитни

Таблица 15

Динамика пролиферативного ответа МНК больных на HSV1gD антиген и конканавалин А

	Пролиферативная активность (имп/мин)
	МНК(0)	МНК(АГ+)	МНК(КонА+)
До лечения	198 ± 44	208,1 ± 44	12314 ± 1840
После 1 курса ИТ	167 ± 45	932,0 ± 280*	16444 ± 2861
После 2 курса ИТ	150 ± 27	598 ± 222*	25979 ± 4453*
Через 6 мес после ИТ	208 ± 43	1196 ± 552*	64450 ± 18050*

Таким образом, ИТ хронических вирусных инфекций с использованием ДК позволяет уменьшить число рецидивов и, соответственно, увеличить продолжительность безрецидивного периода, а также снизить тяжесть рецидивов, что сопряжено с активацией специфического и неспецифического иммунного ответа.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Проведенное исследование позволило охарактеризовать ДК, генерируемые в условиях замены интерлейкина-4 интерфероном-, причем впервые сравнить ИФН-ДК и ИЛ4-ДК, активированные LPS. Полученные результаты продемонстрировали, что ИФН-ДК имеют отличительные особенности, ряд из которых делает эти клетки привлекательными для клинического использования. ИФН-ДК сохраняют промежуточный по степени зрелости фенотип и высокую эндоцитарную активность, характеризуются более высокой цитокинсекреторной, Тh1/Тh2-стимулирующей и цитотоксической активностью против опухолевых клеток, в том числе, ассоциированной с экспрессией молекулы TRAIL. Исследование ИФН-ДК при патологии показало, что ИФН-ДК, генерируемые у больных с онкологическими и инфекционными заболеваниями могут существенно отличаться по фенотипическим и функциональным свойствам, в частности, приобретать толерогенную/супрессорную активность, обусловленную повышенной продукцией IL-10, снижением Th1- и усилением Th-2 стимуляторной активности. Эти изменения наиболее выражены у пациентов злокачественными лимфомами, хроническим вирусным гепатитом С и больных туберкулезом легких со сниженным антигенспецифическим ответом. Исследование влияния различных иммуноактивных препаратов на функции ДК показало, что обработка ДК в культуре in vitro интерлейкином-2, комплексом провоспалительных цитокинов, двуцепочечной ДНК, полиоксидонием значимо усиливала аллостимуляторную активность ДК у больных со злокачественными лимфомами и туберкулезом легких, а также цитотоксическую активность ДК у больных онкологического профиля. Эти данные обосновывают принципиальную возможность коррекции дисфункций ИФН-ДК у больных с онкопатологией и инфекционными заболеваниями. Кроме того, было показано, что ИФН-ДК являются мишенями гормональной регуляции и опосредуют иммуностимулирующий эффект ДГЭАС, повышенный уровень которого у беременных с гиперандрогенией обусловливает снижение толерогенного потенциала ДК, характерного для физиологической беременности. Итогом работы стала апробация иммунотерапии на основе ИФН-ДК в лечении больных злокачественными опухолями головного мозга и хроническими вирусными инфекциями. Использование ДК-вакцин характеризовалось хорошей переносимостью и приводило к индукции специфического иммунного ответа, что сопровождалось улучшением показателей качества жизни/выживаемости у больных со злокачественными внутримозговыми опухолями; прекращением репликации вируса/нормализации биохимической активности при хроническом вирусном гепатите В и увеличением продолжительности безрецидивного периода при хронической герпесвирусной инфекции, что обосновывает возможность и перспективность использования ИФН-ДК в качестве клеточной основы при создании индивидуальных лечебных вакцин.

ВЫВОДЫ

1. По сравнению с LPS-активированными ИЛ4-ДК популяция генерированных in vitro ИФН-ДК характеризуется более высоким содержанием клеток, экспрессирующих CD14, СD11c/CD123 и TRAIL и меньшим количеством CD83+ клеток, что в совокупности с высокой эндоцитарной активностью ИФН-ДК свидетельствует об их промежуточной степени зрелости и более выраженном цитотоксическом потенциале.

2. ИФН-ДК обладают более высокой, чем ИЛ4-ДК, цитокин-продуцирующей активностью (продукция IFN-г, IL-2, IL-1в, TNF-б, IL-10, IL-5, MCP-1 и G-CSF), более активно индуцируют генерацию CD3+IFNг+ Т-клеток и способны активировать CD3+IL4+ Т-клетки, что обусловливает их высокий потенциал в индукции/регуляции иммунного ответа.

3. ИФН-ДК более эффективно ингибируют пролиферацию TRAIL-резистентных опухолевых клеток HEp-2 и обладают большей цитотоксической активностью против TRAIL-чувствительных клеток Jurkat, что свидетельствует о более высоком противоопухолевом потенциале этих ДК по сравнению с ИЛ4-ДК. При этом отсутствие прямой взаимосвязи между цитотоксической и цитостатической активностью ИФН-ДК указывает на возможное вовлечение различных механизмов в реализацию данных эффектов.

4. В отсутствие стимуляции LPS ИФН-ДК обладают более высокой способностью к индукции регуляторных Т-клеток, о чем свидетельствует более высокое содержание не только CD4+Foxp3+ , но и CD8+FохP3+ и CD4+IL-10+ Т-клеток в культурах СКЛ, индуцированных ИФН-ДК. После активации LPS ИФН-ДК теряют способность индуцировать CD4+Foxp3+ Т-клетки и в одинаковой с ИЛ4-ДК степени индуцируют генерацию CD8+FохP3+ и CD4+IL-10+ Т-лимфоцитов, что свидетельствует о схожей толерогенной/супрессорной активности активированных ДК.

5. ИФН-ДК у больных с онкопатологией характеризуются увеличением доли незрелых/промежуточной степени зрелости и уменьшением зрелых ДК; повышением продукции IL-10 и уменьшением - IFN-г; снижением аллостимуляторной активности, ослаблением Th1- или возрастанием Th2-стимуляторной активности, а также уменьшением цитотоксической активности, что свидетельствует о задержке дифференцировки/созревания ДК и снижении способности ДК активировать/опосредовать реакции клеточного иммунитета. При этом спектр и выраженность указанных изменений при различных нозологических формах онкологических заболеваний варьирует от минимальных до выраженных.

6. ИФН-ДК при HBV-инфекции сходны с таковыми у доноров, тогда как у больных HCV-инфекцией, ЦП (независимо от природы вируса) и туберкулезом легких характеризуются признаками задержки дифференцировки/созревания, смещением баланса в сторону продукции Th2-цитокинов и усилением Th2-стимуляторной активности, что указывает на снижение способности ДК активировать реакции клеточного иммунитета при данных патологиях.

7. ИФН-ДК при физиологической беременности характеризуются признаками незрелости, смещением баланса в сторону продукции Th2-цитокинов, снижением аллостимуляторной- в сочетании с усилением Th2-стимуляторной активности и наличием цитотоксической активности против CD56+CD16+ NK-клеток, тогда как у беременных с надпочечниковой гиперандрогенией не отличаются по количеству зрелых/активированных ДК от таковых у небеременных женщин и обладают сохранной аллостимуляторной-/Th1-стимулирующей активностью, что свидетельствует о толерогенных/супрессорных свойствах ДК при физиологической гестации и потери этой активности на фоне повышенного уровня ДГЭАС при надпочечниковой гиперандрогении.

8. ДГЭАС в культурах in vitro стимулирует созревание ИФН-ДК, продукцию IFN-г и TNF-б и Th1-стимуляторную активность ДК и подавляет их проапоптогенную активность против CD56+CD16+ NK-клеток, что свидетельствует об участии ДГЭАС в гормональной регуляции ДК и его возможной роли в изменении свойств ИФН-ДК у беременных с надпочечниковой гиперандрогенией.

9. Интерлейкин-2, комплекс провоспалительных цитокинов, двуцепочечная ДНК и полиоксидоний усиливают in vitro аллостимуляторную активность ДК больных злокачественными лимфомами и туберкулезом легких и цитотоксическую активность ИФН-ДК против TRAIL-резистентных опухолевых клеток у больных злокачественными глиомами и лимфомами, что обосновывает принципиальную возможность коррекции функциональной активности ДК у больных с онкопатологией и инфекционными заболеваниями.

10. Иммунотерапия на основе ИФН-ДК у больных ЗОГМ сопровождается индукцией специфического иммунного ответа (усилением пролиферативного ответа МНК и появлением реакции ГЗТ в ответ на опухолевые антигены). Отсутствие выраженных побочных реакций, улучшение показателей качества жизни и выживаемости свидетельствует о безопасности и клинической эффективности ДК вакцин в лечении больных с онкопатологией.

11. Использование вакцин на основе ИФН-ДК в качестве монотерапии у больных HBV- и герпесвирусной инфекцией характеризуется хорошей переносимостью, приводит к индукции антиген-специфического иммунного ответа и сопровождается прекращением репликации вируса/нормализацией биохимической активности при ХВГВ (соответственно, в 22 и 55% случаев) и удлинением межрецидивного периода у пациентов с герпесвирусной инфекцией.

12. ИФН-ДК могут быть использованы в качестве новой технологической платформы для создания индивидуальных дендритноклеточных вакцин с целью генерации эффективного антигенспецифического иммунного ответа у больных онкологическими и инфекционными заболеваниями.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Хонина Н.А., Центнер М.И., Леплина О.Ю., Тихонова М.А., Ступак В.В., Никонов С.Д., Черных Е.Р., Останин А.А. Характеристика и механизмы иммунных нарушений у больных со злокачественными опухолями головного мозга //Вопросы онкологии.- 2002.- Т. 48, № 2.- С. 196-201.

2. Черных Е.Р., Ступак В.В., Центнер М. И., Хонина Н. А., Леплина О. Ю., Тихонова М.А., Никонов С.Д., Останин А.А. Комбинированная иммунотерапия в лечении злокачественных опухолей головного мозга //Медицинская иммунология.- 2002.- Т. 4, № 4/5. - С. 583-592.

3. Черных Е.Р., Леплина О.Ю., Тихонова М.А., Сычева Н.В., Останин А.А., Козлов Ю.П., Никонов С.Д., Ступак В.В. Новые клеточные технологии иммунотерапии в лечении злокачественных глиом головного мозга//Мат. Всероссийской научно-практической конференции «Многопрофильная больница: проблемы и решения», Ленинск-Кузнецкий - 2003. - С. 306-307.

4. Останин А.А., Центнер М.И., Хонина Н.А., Леплина О.Ю., Шевела Е.Я., Никонов С.Д., Ступак В.В., Черных Е.Р. Антигенспецифическая иммунотерапия в комплексном лечении больных со злокачественными опухолями головного мозга//Вопросы онкологии.- 2003. - Т. 49, № 2.- С. 170-175.

5. Крючкова И.В., Лисуков И.А., Кулагин А.Д., Сизикова С.А, Гилевич А.В, Леплина О.Ю., Черных Е.Р., Козлов В.А. Опыт использования талидомида и вакцины на основе аутологичных дендритных клеток у больного с рецидивом множественной миеломы после аутологичной трансплантации стволовых кроветворных клеток//Abstracts of Russian-Norwegian Conference in Hematology. Saint-Petersburg. - 2003. - P.48-50.

6. Леплина О.Ю., Хонина Н.А., Останин А.А., Центнер М.И., Ступак В.В., Никонов С.Д., Черных Е.Р. Комбинированная иммунотерапия в лечении злокачественных глиом головного мозга//Отчет ИКИ СО РАМН, Hовосибирск. - 2003. - С. 97-101.

7. Леплина О.Ю., Ступак В.В., Хонина Н.А, Центнер М.И., Козлов Ю.П., Останин А.А, Черных Е.Р. Ретроспективный анализ эффективности комбинированной иммунотерапии в комплексном лечении злокачественных глиом головного мозга//Материалы VII международного симпозиума «Новые технологии в нейрохирургии»- Санкт-Петербург. - 2004. - С. 172.

8. Черных Е.Р., Ступак В.В., Центнер М.И., Хонина Н.А., Леплина О.Ю., Тихонова М.А., Никонов С.Д., Останин А.А. Эффективность комбинированной иммунотерапии в комплексном лечении злокачественных глиом головного мозга//Сибирский онкологический журнал. - 2004. - № 2/3.- С. 85-88.

9. Ступак В.В., Леплина О.Ю., Тихонова М.А., Останин А.А., Козлов Ю.П., Никонов С.Д., Черных Е.Р. Опыт использования частично-зрелых дендритных клеток в лечении больных злокачественными глиомами головного мозга //Вопросы онкологии. - 2004. - № 3-4. - С. 107-109.

10. Ступак В.В., Леплина О.Ю., Тихонова М.А., Останин А.А., Козлов Ю.П., Никонов С.Д., Черных Е.Р. Возможность генерации и клиническое использование вакцин на основе частично-зрелых дендритных клеток у больных злокачественными опухолями головного мозга // Тезисы докладов на 16-ом Пленуме Ассоциации нейрохирургов России, Екатеринбург. - 2004. - С. 101-102.

11. Леплина О.Ю., Центнер М.И., Шевела Е.Я., Тихонова М.А., Останин А.А., Козлов Ю.П., Ступак В.В., Черных Е.Р. Фенотипическая и функциональная характеристика антигенпрезентирующих клеток при злокачественных глиомах //Материалы XIII Всероссийской научно-практической конференции «Нейроиммунология», Санкт-Петербург. - 2004.- №2. - С. 60.

12. Леплина О.Ю., Ступак В.В., Шевела Е.Я., Тихонова М.А., Центнер М.И., Козлов Ю.П., Останин А.А., Черных Е.Р. Эффективность комбинированной иммунотерапии в комплексном лечении злокачественных глиом головного мозга//Материалы XIII Всероссийской научно-практической конференции «Нейроиммунология», Санкт-Петербург. - 2004.- №2. - С. 110.

13. Леплина О.Ю., Ступак В.В., Шевела Е.Я., Тихонова М.А., Центнер М.И., Козлов Ю.П., Останин А.А., Черных Е.Р. Характеристика антигенпрезентирующих клеток у больных злокачественными глиомами//14-ая научно-практическая конференция врачей «Актуальные вопросы современной медицины», Новосибирск. - 2004. - С. IX-9-10.

14. Черных Е.Р., Леплина О.Ю., Останин А.А., Никонов С.Д., Ступак В.В., Козлов Ю.П. Способ иммунотерапии злокачественных опухолей головного мозга//Патент на изобретение №2262941, приоритет от 05.01.2004 г.

15. Леплина О.Ю., Тихонова М.А., Козлов Ю.П., Ступак В.В., Никонов С.Д, Останин А.А., Черных Е.Р. Частично-зрелые дендритные клетки как потенциальная основа для индукции противоопухолевого ответа у больных злокачественными глиомами//Медицинская иммунология. - 2005. - Т. 7. - № 4. - С .365-374.

16. Леплина О.Ю., Сахно Л.В., Тихонова М.А., Никонов С.Д., Жданов О.А., Останин А.А., Черных Е.Р. Характеристика частично-зрелых дендритных клеток у больных туберкулезом легких//Цитокины и воспаление. - 2005.- Т.4., № 2.- С. 86 (Материалы Всероссийского научного симпозиума «Цитокины, стволовая клетка, иммунитет», Новосибирск. 2005 г).

17. Леплина О.Ю, Сахно Л.В., Тихонова М.А., Жданов О.А., Никонов С.Д., Останин А.А., Черных Е.Р. Дендритные клетки в лечении прогрессирующих форм туберкулеза легких//Тезисы Всероссийской научно-практической конференции «Дни иммунологии в Сибири», Красноярск.- 2005.- С. 132-133.

18. Леплина О.Ю., Тихонова М.А., Козлов Ю.П., Ступак В.В., Останин А.А., Черных Е.Р. Генерация частично зрелых дендритных клеток и их использование в лечении злокачественных глиом головного мозга// Материалы конференции «Клинические и фундаментальные проблемы клеточных биотехнологий». Новосибирск. - 2005.- С. 19-20.

19. Леплина О.Ю., Тихонова М.А., Козлов Ю.П., Ступак В.В., Останин А.А., Черных Е.Р. Дендритные клетки в комбинированной иммунотерапии злокачественных глиом головного мозга//Научный отчет ГУНИИКИ СО РАМН. - Новосибирск. - 2006. - С. 256-259.

20. Крючкова И.В., Кулагин А.Д., Сизикова С.А., Денисова В.В., Гилевич А.В., Леплина О.Ю., Черных Е.Р., Лисуков И.А. Иммунотерапия с использованием дендритных клеток у больных множественной миеломой после аутологичной трансплантации периферических стволовых клеток//Научный отчет ГУНИИКИ СО РАМН, Новосибирск. - 2006. - С. 253-256.

21. Леплина О.Ю., Тихонова М.А., Сахно Л.В., Распай Ж.М., Никонов С.Д., Старостина Н.М., А.А.Останин, Черных Е.Р. Фенотипическая характеристика дендритных клеток при различных патологиях //Медицинская иммунология. - 2006. - Т.8. - №2-3. - С. 420-421. («Материалы 10 всероссийского научного форума» Дни иммунологии в Санкт-Петербурге»).

22. Сахно Л.В., Леплина О.Ю., Тихонова М.А, Распай Ж.М., Никонов С.Д., Жданов О.А., Останин А.А., Черных Е.Р. Фенотипические особенности дендритных клеток у больных туберкулезом легких//Материалы Всероссийской научно-практической конференции «Дни иммунологии в Сибири, Красноярск - 2006 - С. 79-81.

23. Леплина О.Ю., Тихонова М.А, Козлов Ю.П., Ступак В.В., Останин А.А., Черных Е.Р. Характеристика дендритных клеток у больных злокачественными глиомами головного мозга//Материалы Всероссийской научно-практической конференции «Дни иммунологии в Сибири, Красноярск. - 2006 - С. 97-99.

24. .Leplina O.Yu, Tikhonova M.A.,.Kozlov Yu.P, Stupak V.V., Ostanin A.A., Chernykh E.R. Dendritic cells in the combined immunotherapy of malignant brain gliomas//«International conference Basic Science for Biotechnology and Medicine» - Novosibirsk, Russia - 2006. - P. 38

25. Леплина О.Ю., Ступак В.В, Козлов Ю.П., Пендюрин И.В., Никонов С.Д., Тихонова М.А., Сычева Н.В, Останин А.А, Черных Е.Р. IFNб-индуцированные дендритные клетки в лечении больных злокачественными глиомами головного мозга//Клеточные технологии в биологии и медицине. - 2007. - № 2. - С. 92-98.

26. Леплина О.Ю., Тихонова М.А., Козлов Ю.П., Ступак В.В., Останин А.А., Черных Е.Р. Характеристика IFNб-индуцированных дендритных клеток у больных злокачественными глиомами головного мозга//Бюллютень СО РАМН. - 2007.- (№2) Т.124. - С. 27-33.

27. Ступак В.В., Козлов Ю.П., Пендюрин И.В., Леплина О.Ю., Тихонова М.А., Останин А.А., Черных Е.Р. Применение дендритных клеток в комплексной иммунотерапии больных злокачественными глиомами головного мозга// Материалы всероссийской научно-практической конференции «Поленовские чтения», Санкт-Петербург. - 2007 . - С. 246.

28. Черных Е.Р., Леплина О.Ю., Ступак В.В., Козлов Ю.П., Пендюрин И.В., Останин А.А. IFN-б-индуцированные дендритные клетки в лечении больных злокачественными глиомами головного мозга.//Медицинская иммунология. - 2007. - Т.9. - №. 2-3. - С. 290-291. (Материалы 11 всероссийского научного форума «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге»).

29. Леплина О.Ю., Ступак В.В., Козлов Ю.П., Пендюрин И.В., Останин А.А., Черных Е.Р. Иммунотерапия злокачественных опухолей головного мозга.// BULLETIN of the International Scientific Surgical Association. - 2007. - V. 2(№1) - P.75-77.

30. Леплина О.Ю., Тихонова М.А., Старостина Н.М., Григорьева А.Е., Останин А.А., Черных Е.Р. Фенотипические и функциональные свойства дендритных клеток у больных хроническими вирусными гепатитами и циррозом печени// Медицинская иммунология. - 2007. - Т.9. - №. 2-3. - С.233-234. (Материалы 11 всероссийского научного форума «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге»).

31. Сахно Л.В., Распай Ж.М., Леплина О.Ю., Тихонова М.А., Курганова Е.В., Никонов С.Д., Жданов О.А., Останин А.А., Черных Е.Р. Функциональные свойства IFN-б -индуцированных дендритных клеток у больных туберкулезом легких// Медицинская иммунология. - 2007. - Т.9. - №. 2-3. - С.245-246. (Материалы 11 всероссийского научного форума «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге»).

32. Леплина О.Ю., Григорьева А.Е., Тихонова М.А., Cтаростина Н М., Останин А.А, Черных Е.Р. Генерация дендритных клеток у больных хроническими вирусными гепатитами и циррозами печени//Материалы III Международной конференции «Фундаментальные науки - медицине», Новосибирск. - 2007. - С.38.

33. Леплина О.Ю., Тихонова М.А., Григорьева А.Е., Старостина Н.М., Останин А.А., Черных Е.Р. Характеристика дендритных клеток у больных хроническими вирусными гепатитами и гепатитами с исходом в цирроз// Омский научный вестник - 2007 - №3 - С. 97. (Материалы межрегиональной научно-практической конференции « Дни иммунологии в Сибири»).

34. Распай Ж.М., Сахно Л.В., Леплина О.Ю., Никонов С.Д., Жданов О.А., Черных Е.Р. Интерферон-б -индуцированные дендритные клетки в лечении больных туберкулезом легких //Омский научный вестник - 2007 - №3 - С. 117 (Материалы межрегиональной научно-практической конференции «Дни иммунологии в Сибири»).

35. Насонова Г.В., Леплина О.Ю., Тихонова М.А., Крючкова И.В., Сергеевичева В.В., Лисуков И.А., Останин А.А.. Черных Е.Р. Свойства IFN-б- индуцированных дендритных клеток у больных злокачественными лимфомами//Омский научный вестник - 2007 - №3 - С. 242 (Материалы межрегиональной научно-практической конференции «Дни иммунологии в Сибири»).

36. Леплина О.Ю., Ступак В.В., Козлов Ю.П., Пендюрин И.В., Останин А.А., Черных Е.Р. Иммунотерапия злокачественных опухолей головного мозга// Bulletin of the International Scientific Surgical Association.- 2007.- Vol. 2, N 1.- P.75-77.

37. Сахно Л.В., Леплина О.Ю., Тихонова М.А., Распай Ж.М., Гилева И.П., Никонов С.Д., Жданов О.А., Останин А.А., Черных Е.Р. Характеристика дендритных клеток, генерируемых в присутствии интерферона -б у больных туберкулезом легких//Проблемы туберкулеза. - 2007. - №3 - С.42-46.

38. Сахно Л.В., Леплина О.Ю., Распай Ж..М., Тихонова М..А., Курганова Е.В., Гилева И.П., Никонов С.Д., Жданов О.А., Останин А.А., Черных Е.Р. Функциональные свойства IFN-б-индуцированных дендритных клеток у больных туберкулезом легких// Медицинская иммунология. - 2008.- Т. 10, № 2-3.- С. 151-158.

39. Леплина О.Ю., Насонова Г.В, Тихонова М.А., Крючкова И.В., Лисуков И.А., Останин А.А., Черных Е.Р. Характеристика IFNб-индуцированных дендритных клеток у больных злокачественными лимфомами//Гематология и трансфузиология. - 2008 - №3- C. 24-29.

40. Chernykh E, Stupak V., Leplina O., Shevela E., Pendurin I., Nikonov S., Ostanin A. Dendritic cell-based immunotherapy for patients with malignant glioma// Bone Marrow Transplantation. - 2008. - V.41. - S.1. - P. 161

41. Черных Е.Р, Курганова Е.В., Леплина О.Ю, Сахно Л.В, Тихонова М.А, Останин А.А. Дегидроэпиандростерон сульфат усиливает дифференцировку и созревание дендритных клеток//Российский иммунологический журнал. - 2008. - Т.2 (11). - №2-3. - С. 126.

42. Хонина Н.А., Селедцова Н.В., Леплина О.Ю., Пасман Н.М., Черных Е.Р. Иммуномодулирующее влияние дегидроэпиандростерона сульфата на функции дендритных клеток беременных//Российский иммунологический журнал. - 2008. - Т.2 (11), №2-3. - С. 299.

43. Леплина О.Ю., Тихонова М.А., Сахно Л.В., Курганова Е.В., Останин А.А., Черных Е.Р. Влияние дегидроэпиандростерона сульфата на генерацию и свойства IFN-б-индуцированных дендритных клеток//Сибирский медицинский журнал. - 2008. - №3. - С. 101-102.

44. Leplina O.Yu., Stupak V.V., Pendurin I.V., Nikonov S.D., Ostanin A.A. Chernykh E.R Dendritic cell immunotherapy of malignant gliomas // Abstractbook EHRLICH II -2nd World Conference on Magic Bullets Celebrating the 100th Anniversary of the Nobel Prize Award to Paul Ehrlich. - Nьrnberg, October 3-5 - 2008 - P.178.

45. Леплина О.Ю., Тихонова М.А., Сахно Л.В., Тыринова Т.В., Останин А.А., Черных Е.Р. Эффект дегидроэпиандростерона сульфата на созревание и функциональные свойства ИНФ-б-индуцированных дендритных клеток// Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 2009. - Т.147. - №7. - С. 80-85.

46. Леплина О.Ю., Тихонова М.А., Борисова А.Е., Старостина Н.М., Останин А.А., Черных Е.Р., Козлов В.А. Фенотип и функции дендритных клеток у больных хроническими вирусными гепатитами//Медицинская иммунология. - 2009. - Т.2/3. - С. 191-196..

47. Леплина О.Ю., Насонова Г.В., Тихонова М.А., Крючкова И.В., Лисуков И.А., Останин А.А, Черных Е.Р. «IFNб-индуцированные дендритные клетки у больных множественной миеломой»//Сибирский онкологический журнал. - 2009. - №6(36). - С.37-43..

48. Леплина О.Ю., Селедцова Н.В., Тихонова М.А., Сахно Л.В., Хонина Н.А., Останин А.А., Пасман Н.М., Черных Е.Р. Эффект дегидроэпиандростерона сульфата на Тh1/Th2-стимуляторную активность дендритных клеток// Вестник НГУ. - 2009. - Т.7. - №2. - С.3-8.

49. Черных Е.Р., Селедцова Н.В., Леплина О.Ю., Тихонова М.А., Тыринова Т.В., Курганова Е.В., Хонина Н.А., Останин А.А., Пасман Н.М. Дендритные клетки как возможные регуляторы иммунной перестройки при беременности //Медицинская иммунология. - 2009. - Т. 11, № 6.- С. 541-548.

50. Черных Е.Р., Леплина О.Ю., Ступак В.В., Пендюрин И.В., Никонов С.Д., Тихонова М.А., Останин А.А. Клеточные технологии в лечении злокачественных глиом головного мозга//«Клеточные технологии. Теоретические и прикладные аспекты», Сборник трудов под ред. Козлова В.А., Сенникова С.В., Черных Е.Р., Останина А.А.- Новосибирск: Наука, 2009.- С. 240-276.

51. Черных Е.Р., Леплина О.Ю., Тыринова Т.В., Тихонова М.А., Ступак В.В., Мишинов С.В., Пендюрин И.В., Останин А.А. Опухоль-ингибирующая активность интерферон-б индуцированных дендритных клеток у здоровых доноров и больных злокачественными опухолями головного мозга//Материалы конференции «Поленовские чтения», Санкт-Петербург. - 2010. - С. 295.

52. Леплина О.Ю., Тыринова Т.В., Тихонова М.А., Ступак В.В., Мишинов С.В, Пендюрин И.В., Останин А.А. Черных Е.Р. Противоопухолевая активность интерферон-индуцированных дендритных клеток у здоровых доноров и больных с опухолями головного мозга //Медицинская иммунология. - 2010. - Т.12- №3. - С. 199-206.

53. Черных Е.Р., Леплина О.Ю., Тыринова Т.В., Тихонова М.А., Сахно Л.В., Останин А.А. Участие дегидроэпиандростерона сульфата и прогестерона в регуляции толерогенной активности интерферон-б- индуцированных дендритных клеток в культуре in vitro//Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 2011. - Т.151. - №2. - С. 168-171.

54. Леплина О.Ю., Тихонова М.А, Насонова Г.В., Мишинов С.В., Ступак В.В., Крючкова И.В.,Останин А.А, Черных Е.Р. Характеристика функциональной активности интерферон-индуцированных дендритных клеток у здоровых доноров и больных злокачественными заболеваниями//Цитокины и воспаление. - 2010. - Т.9. - №3. - С. 78 .

55. Тыринова Т.В,.Леплина О.Ю,.Мишинов С.В, Ступак В.В., Пендюрин И.В., Останин А.А., Черных Е.Р. Цитотоксическая активность IFN-б-индуцированных дендритных клеток у здоровых доноров и больных опухолями головного мозга// Цитокины и воспаление. - 2010. - Т.9. - №3. - С.80 .

56. Черных Е.Р., Леплина О.Ю., Селедцова Н.В., Тихонова М.А., Останин А.А., Пасман Н.М. Участие дендритных клеток в реализации иммуномодулирующего эффекта дегидроэпиандростерона у беременных с надпочечниковой гиперандрогенией// Цитокины и воспаление. - 2010. - Т.9. - №3. - С.82 .

57. М.А.Тихонова, О.Ю.Леплина, Н.И.Борисенкова, А.А.Останин, Е.Р.Черных. Возможность использования 4-цветной цитофлюориметрии для количественного определения циркулирующих дендритных клеток в периферической крови здоровых доноров// Цитокины и воспаление. - 2010. - Т.9. - №3. - С.73 .

58. Tyrinova T.V., Leplina O.Yu., Mishinov S.V., Stupak V.V., Pendyurin I.V., Ostanin A.A., Chernyckh E.R. Cytotoxic activity of IFN-б-indused dendritic cells in healthy donors and patients with brain gliomas//DC2010: Forum on Vaccine Science -11-th international Simposium on Dendritic Cells in Fundamental and Clinical Immunology -26-30 Sept. 2010 - Lugano, Switzeland- Poster Sesion Abstract. - P05-030.

59. Леплина О.Ю, Желтова О.И., Борисова А.Е.. Старостина Н.М, Останин А.А., Черных Е.Р. Вакцины на основе дендритных клеток в лечении герпетической инфекции// Вестник Уральской медицинской академической науки. - 2011. - №2/2 (35). - С. 38-39.

60. Сахно Л.В., Тихонова М.А., Леплина О.Ю., Тыринова Т.В., Никонов С.Д., Жданов О.А., Останин А.А., Черных Е.Р. Роль PD-1/B7-H-1-сигнального пути в нарушении антигенспецифического ответа у больных туберкулезом легких// Иммунология. - 2011. - Т.32. - С.89-93. .

61. Насонова Г.В., Леплина О.Ю., Тихонова М.А., Крючкова И.В., Останин А.А., Черных Е.Р. Экспрессия B7-H1 на IFN-б-индуцированных дендритных клетках у больных злокачественными лимфомами//Материалы всероссийской научно-практической конференции «Дни иммунологии в Сибири», Абакан. - 2011.- С.101-103.

62. Тыринова Т.В., Леплина О.Ю., Тихонова М.А., Останин А.А., Черных Е.Р. Влияние дегидроэпиандростерона сульфата и прогестерона на цитотоксическую активность интерферон-альфа-индуцированных дендритных клеток в культуре in vitro// Материалы всероссийской научно-практической конференции «Дни иммунологии в Сибири», Абакан. - 2011. - С. 214-216.

63. Мишинов С.В., Черных Е.Р., Леплина О.Ю., Тыринова Т.В., Тихонова М.А., Останин А.А., Ступак В.В., Пендюрин И.В. Анализ взаимосвязи выживаемости больных и цитотоксической активности интерферн-альфа-индуцированных дендритных клеток при внутримозговых опухолях// Российский нейрохирургический журнал. - 2011. - Т.III., специальный выпуск, - С.324-325 (Материалы конференции «Поленовские чтения», Санкт-Петербург).

64. Леплина О.Ю., Тыринова Т.В., Тихонова М.А, Останин А.А., Черных Е.Р. Сравнительная характеристика дендритных клеток, генерируемых в присутствии ИЛ-4 и ИФН-// Материалы 8-й отчетной конференции НИКИ СО РАМН, Новосибирск. - 2011. - С. 38-39.

Размещено на Allbest.ru

...