Патоморфологический анализ карциносаркомы Walker 256: влияние общей гипертермии и противоопухолевых агентов (мелатонина и циклофосфана) на опухолевый рост

Патоморфологические изменения перевиваемой карциносаркомы Walker 256 после воздействия мелатонина. После воздействия МТ объем опухоли через 3 сут возрастал в 5,8 раза (до 14,5±1,5 см³), через 7 и 14 сут - снижался (до 17,6±1,7 и 26,4±4,1 см³) по сравнению со «спонтанным» ростом. Показатель ТРО, начиная с 7-х суток эксперимента, возрастал и сохранялся на том же уровне до конца эксперимента (31 и 30%).

На протяжении всего эксперимента митотическая активность клеток карциносаркомы под действием МТ снижалась, в большей степени на 3-и и 7-е сутки - в 1,5 раза. Объемная плотность дистрофически измененных опухолевых клеток после воздействия МТ возрастала в 1,8 и 1,7 раза соответственно на 3-и и 7-е сутки эксперимента.

Через 3 - 7 сут после воздействия МТ отмечалось усиление структурированности опухолевого узла: по периферии узла светлые клетки образовывали псевдофолликулярные структуры (гнездные, гроздьевидные скопления), в центре - преобладали более мономорфные клетки, среди которых располагались темные клетки, иногда образовывавшие тяжи. Опухоль была хорошо васкуляризирована; сосуды были полнокровными. В опухолевом узле регистрировались многочисленные мелкие очаги некроза, что обусловливало снижение объемной плотности паренхимы карциносаркомы по сравнению со спонтанным развитием опухоли. При воздействии МТ наблюдалось также усиление апоптотической гибели опухолевых клеток; апоптотический индекс возрастал соответственно в 9,3; 6,4 и 3,3 раза по сравнению с данным показателем при «спонтанном» росте карциносаркомы. К 14-м суткам в опухоли различались сформированные утолщенные соединительнотканные септы, которые разделяли опухоль на псевдофоликуллярные структуры. Вокруг опухолевого узла образовывалась соединительнотканная капсула, которая была разрыхленной, отечной. В этой зоне формировались многочисленные лимфатические сосуды синусоидного типа, в которых регистрировались опухолевые клетки. В этот же срок наблюдался значительный лизис мышечных волокон.

По данным ультраструктурного анализа, на протяжении всего эксперимента в карциносаркоме присутствовали 2 типа опухолевых клеток, чаще на 4-й и 5-й стадиях дифференцировки. К 14-м суткам появлялись опухолевые клетки на 3-й стадии дифференцировки.

Такая морфологическая картина была характерна для всех выбранных схем противоопухолевой терапии с включением МТ. Включение МТ в схемы противоопухолевой терапии обусловлено его антиоксидантной активностью и способностью ингибировать спонтанный и индуцированный опухолевый рост (Martins E. et al., 1998; Anisimov V.N. et al., 2006). Кроме того, проведенное исследование позволяет полагать, что МТ является индуктором морфогенетических процессов, способствуя изменению архитектоники опухоли (формированию псевдофолликулярной структуры).

Через 3 сут после введения МТ регистрировалась выраженная гетерогенность эндотелиоцитов кровеносных капилляров: одни клетки выглядели набухшими, деструктурированными, другие - отличались конденсированной, электронно-плотной цитоплазмой. Через 7 и 14 сут эти ультраструктурные изменения эндотелиоцитов сохранялись. В выстилке кровеносных капилляров, наряду с эндотелиальными клетками, к концу эксперимента появлялись и опухолевые клетки. После введения МТ в эндотелиоцитах происходило снижение объемной плотности митохондрий (к 14-м суткам - на 45%); концентрация крист в них снижалась на 46%. Уменьшалась также объемная плотность микропиноцитозных везикул (люминальных - на 46, 42 и 40%; цитоплазматических - на 57, 49 и 51%, базальных - на 48, 51 и 34%). Достоверно снижалась численная плотность митохондрий. Объемная плотность гранулярной цитоплазматической сети снижалась на протяжении всего эксперимента (в большей степени на 3 сутки - на 63%). Численные плотности прикрепленных и свободных рибосом также были уменьшены на протяжении всего эксперимента (в большей степени на 14-е сутки - соответственно на 70 и 71%).

Патоморфологические изменения перевиваемой карциносаркомы Walker 256 после сочетанного воздействия общей гипертермии и циклофосфана. После сочетанного воздействия ОГ и ЦФ объем опухолевого узла, начиная с 7-х суток и до конца эксперимента, значительно уменьшался (соответственно в 3,4 и 16,9 раза по сравнению со «спонтанным» ростом, составляя 7,4±0,9 и 2,2±0,4 смі). Показатель ТРО, начиная с 7-х суток эксперимента, возрастал к концу эксперимента и составил 94%.

На 3-и сутки эксперимента после сочетанного воздействия ОГ и ЦФ опухолевый узел был представлен преимущественно мономорфными клетками, по периферии - светлыми клетками, образовывавшими псевдофолликулярные структуры. Через 7 сут, так же как и после воздействия только ЦФ, в опухолевом узле практически отсутствовали светлые клетки, преобладали мелкие саркоматозные вытянутые клетки. По периферии опухолевого узла отмечался значительный отек, переход крупных опухолевых клеток в асцитное состояние. Такие значительные изменения архитектоники опухолевого узла исчезали к 14-м суткам. В этот срок карциносаркома имела вновь такое же строение, как и через 3 сут после сочетанного воздействия ОГ и ЦФ: по периферии доминировали псевдофолликулярные (псевдожелезистые) структуры из светлых клеток, в центре располагались более мономорфные клетки. Небольшие очаги некроза были рассеяны по всей толще опухолевого узла. Во все сроки отмечалась хорошая васкуляризация опухолевого узла; сосуды были в основном полнокровными.

Митотический индекс снижался на 3-и и 7-е сутки опыта в 1,5 и 1,6 раза (соответственно до 23,1±0,9 и 23,1±0,9‰, p<0,01) по сравнению со «спонтанным» ростом, но к 14-м суткам незначительно возрастал.

Объемная плотность дистрофически измененных опухолевых клеток при сочетанном воздействии ОГ и ЦФ была увеличена в 2,5; 2,3 и 1,8 раза соответственно через 3, 7 и 14 сут эксперимента. Объемная плотность паренхиматозного компонента на протяжении всего эксперимента достоверно снижалась (соответственно в 1,3; 1,3 и 1,2 раза) по сравнению со «спонтанным» ростом. Это было сопряжено с увеличением объемной плотности очагов некрозов, начиная с 7-х суток эксперимента. Значительно возрастал также апоптотический индекс (в 10,3, 6,2 и 3,4 раза через 3, 7 и 14 сут после воздействий).

По данным ультраструктурного анализа, через 3 сут эксперимента отмечалась деструкция митохондрий и расширение цистерн гранулярной цитоплазматической сети в опухолевых клетках 1-го и 2-го типов 5-й стадии дифференцировки. В опухолевых клетках на 5-й стадии дифференцировки присутствовали многочисленные вторичные лизосомы, что отражало усиление катаболических процессов. Через 7 сут после сочетанного воздействия ОГ и ЦФ в опухолевом узле выявлялись малодифференцированные и средней стадии дифференцировки опухолевые клетки 1-го и 2-го типов. К концу эксперимента встречались опухолевые клетки 1-го и 2-го типов на разных стадиях дифференцировки

Через 3 и 7 сут после сочетанного воздействия ОГ и ЦФ в эндотелиоцитах кровеносных капилляров, расположенных по периферии опухолевого узла, происходило усиление электронной плотности цитоплазмы; наблюдалась деструкция митохондрий. Регистрировались новообразованные кровеносные капилляры. Через 14 сут в эндотелиальной выстилке кровеносных капилляров появлялись эндотелиоциты с большим содержанием органелл белкового синтеза. Однако практически не определялись микропиноцитозные везикулы.

В эндотелиоцитах происходило снижение объемной плотности митохондрий на 28, 33 и 41%; микропиноцитозных везикул: люминальных - на 55, 49 и 46%, цитоплазматических - на 35, 42 и 45%, базальных - на 45, 56 и 64%, соответственно через 3, 7 и 14 сут эксперимента. Концентрация крист митохондрий также была снижена на протяжении всего срока эксперимента соответственно на 50, 58 и 54% по сравнению со «спонтанным» развитием опухоли. Численные плотности свободных и прикрепленных рибосом снижались на протяжении всего эксперимента, но в большей степени на 7-е сутки (соответственно на 56 и 62%). Объемная плотность гранулярной цитоплазматической сети была уменьшена на протяжении всего эксперимента, но в большей степени на 3-е сутки (на 44%).

Патоморфологические изменения перевиваемой карциносаркомы Walker 256 после сочетанного воздействия общей гипертермии и мелатонина. После сочетанного воздействия ОГ и МТ объем опухолевого узла, начиная с 3-х суток, изменялся волнообразно: на 3-и сутки - в 5,7 раза превышал контрольный уровень (14,4±1,8 см³); на 7-е сутки - уменьшался в 2 раза (12,5±1,0 см³) по сравнению со «спонтанным» ростом; на 14-е сутки - вновь возрастал практически до контрольного уровня контроля (35,3±14,2 см³). Показатель ТРО, к 7-м суткам эксперимента достигал 51%. К концу эксперимента показатель ТРО снижался (6%), но достоверно отличался от контроля.

На протяжении всего эксперимента опухоль была представлена псевдофолликулярными структурами, расположенными по периферии и образованными большими «светлыми» клетками (часто вакуолизированными); в центральной зоне располагались более мономорфные клетки, «темные» клетки встречались редко. К 14-м суткам были выявлены сформированные утолщенные соединительнотканные септы, которые разделяли опухоль на псевдофоликуллярные структуры. Во все сроки наблюдались полнокровие сосудов и мелкоочаговый некроз опухолевых клеток, который обусловливал снижение объемной плотности паренхиматозного компонента. Установлено также увеличение апоптотического индекса, который к 14-м суткам был выше контрольного значения в 3,8 раза. Одновременно воздействие ОГ и МТ вызывало снижение митотического индекса через 3, 7 и 14 сут соответственно в 1,7; 1,5 и 1,4 раза по сравнению со «спонтанным» ростом.

По данным ультраструктурного анализа, через 3 сут после воздействия ОГ и МТ по периферии опухолевого роста выявлялись 2 типа опухолевых клеток, находившихся преимущественно 1-й и 2-й стадиях дифференцировки с сохранной цитоплазмой и структурой ядра. Через 7 сут в малодифференцированных клетках карциносаркомы Walker 256 отмечали структурные признаки развивающегося апоптоза. Однако по периферии опухолевого роста располагались опухолевые клетки 1-го и 2-го типов на 4-й и 5-й стадиях дифференцировки и в состоянии митоза. Через 14 сут после воздействия ОГ и МТ во многих опухолевых клетках, находившихся на разных стадиях дифференцировки, отмечались ультраструктурные признаки апоптоза. По периферии опухолевого узла располагались опухолевые клетки 1-го и 2-го типов на 3-й и 4-й стадиях дифференцировки.

Через 3 и 7 сут после сочетанного воздействия ОГ и МТ происходило усиление электронной плотности эндотелиоцитов кровеносных капилляров, в то же время в эндотелиальной выстилке присутствовали набухшие и деструктурированные эндотелиоциты. Через 14 сут происходило истончение эндотелиальной выстилки кровеносных капилляров, расположенных по периферии опухолевого роста. Сохранялись электронно-плотные и деструктурированные формы эндотелиоцитов.

После сочетанного воздействия ОГ и МТ в эндотелиоцитах происходило снижение (на 35%) объемной плотности митохондрий и концентрации крист в них (в большей степени на 7-е сутки - на 52%). Заметно снижалась объемная плотность микропиноцитозных везикул: люминальных - на 28, 48 и 45%, цитоплазматических - на 41, 43 и 40%, базальных - на 47, 55 и 38%. Достоверно снижались численные плотности свободных и прикрепленных рибосом, а также объемная плотность гранулярной цитоплазматической сети.

Патоморфологические изменения перевиваемой карциносаркомы Walker 256 после сочетанного воздействия циклофосфана и мелатонина. Объем опухолевого узла после сочетанного воздействия ЦФ и МТ, начиная с 7-х суток эксперимента, уменьшался в 12,3 и 15,6 раза (до 2,1±0,2 и 2,4±1,5 см³, p<0,05) по сравнению со «спонтанным» ростом. Показатель ТРО, начиная с 7-х суток эксперимента, возрастал на 92 и 94% по сравнению с контролем.

Через 3 сут после сочетанного воздействия ЦФ и МТ отмечались выраженные некротические изменения опухолевых клеток: в одних зонах - диффузные, в других - очаговые; по периферии отмечался распад ткани. В структуре опухолевого узла преобладали псевдофолликулярные образования, в центральных зонах - скопления мономорфных эозинофильных клеток. К 7-м суткам происходило значительное изменение строения и архитектоники опухолевого узла: в нем практически исчезали «светлые» клетки, значительная часть опухоли была представлена вытянутыми саркоматозными клетками, инфильтрирована лимфоцитами. Встречавшиеся между этими клетками мышечные волокна подвергались литическим превращениям и резорбции. Через 14 сут происходила реверсия фенотипа опухоли: опухолевый узел вновь был образован преимущественно «светлыми» клетками, которые образовывали псевдофолликулярные структуры, располагавшиеся по периферии, в центре опухоли - скопления мономорфных эозинофильных клеток с небольшими очагами некроза. Митотический индекс был ниже соответственно в 1,8; 1,8 и 1,4 раза через 3, 7 и 14 сут после воздействия по сравнению с контрольной группой.

Увеличение объемной плотности очагов некрозов после сочетанного воздействия ЦФ и МТ сопровождалось снижением объемной плотности паренхимы опухоли. Во все сроки эксперимента возрастал апоптотический индекс опухолевых клеток (наиболее значительно на 14-е сутки - в 5,7 раза).

По данным ультраструктурного анализа, на протяжении всего эксперимента в карциносаркоме присутствовали малодиффенцированные клетки обоих типов, в то же время встречались опухолевые клетки 2-го типа на 5-й стадии дифференцировки с большим содержанием вторичных лизосом и деструкцией, что свидетельствовало о развитии в них деструктивных процессов.

Через 3 сут после воздействия сочетания ЦФ и МТ в кровеносных капиллярах отмечалось набухание эндотелиоцитов, разволокнение базальной мембраны, отек периваскулярных пространств. Цитоплазма эндотелиоцитов содержала большое количество органелл белкового синтеза - цистерн гранулярной цитоплазматической сети, прикрепленных и свободных рибосом.

Через 7 сут после воздействия сочетания ЦФ и МТ наблюдалась гетерогенность эндотелиоцитов кровеносных капилляров: в эндотелиальной выстилке присутствовали как новообразованные, деструктивно измененные эндотелиоциты. Цитоплазма новообразованных эндотелиоцитов содержала большое количество органелл белкового синтеза - цистерн гранулярной цитоплазматической сети, прикрепленных и свободных рибосом. В некоторых эндотелиоцитах были значительно расширены цистерны гранулярной цитоплазматической сети. Отмечалось набухание и деструкция эндотелиоцитов. Присутствовали также клетки с повышенной электронной плотностью. В просвете капилляров наблюдались опухолевые клетки.

Через 14 сут после воздействия ЦФ и МТ на периферии опухолевого роста встречались эндотелиоциты с хорошо развитой гранулярной цитоплазматической сетью, большим количеством прикрепленных и свободных рибосом. Встречались также набухшие и электронно-плотные эндотелиоциты.

После сочетанного воздействия ЦФ и МТ на протяжении всего эксперимента и в большей степени на 3-и сутки происходило снижение объемной плотности митохондрий эндотелиоцитов на 28% по сравнению со спонтанным развитием опухолевого процесса (8,2±0,2%). В связи с набуханием органелл концентрация крист митохондрий была снижена на протяжении всего срока эксперимента, в большей степени на 14-е сутки - на 48% по сравнению со спонтанным развитием опухоли (8,5±0,3). Объемная плотность микропиноцитозных везикул уменьшалась также на протяжении всего срока эксперимента: люминальных - на 32, 41 и 34%, цитоплазматических - на 57, 50 и 51%, базальных - на 51, 53 и 36% соответственно. Достоверно снижалась численная плотность митохондрий. Объемная плотность гранулярной цитоплазматической сети была снижена на протяжении всего эксперимента, в большей степени на 3-и сутки (18,3±0,2%). Численные плотности прикрепленных и свободных рибосом также были уменьшены на протяжении всего эксперимента, в большей степени на 14-е сутки - на 76 и 69% (42,5±1,7 и 35,4±1,8).

Патоморфологические изменения перевиваемой карциносаркомы Walker 256 после сочетанного воздействия общей гипертермии, циклофосфана и мелатонина. Объем опухолевого узла после сочетанного воздействия ОГ, ЦФ и МТ значительно снижался - в 22,6 и 18,0 раз, начиная с 7-х и до 14-х суток (соответственно до 1,1±0,1 и 2,1±0,5 см³), по сравнению со «спонтанным» развитием. Показатель ТРО, начиная с 7-х суток эксперимента, увеличивался на 96 и 94% по сравнению с контролем.

Через 3 сут после сочетанного воздействия ОГ, ЦФ и МТ опухолевый узел по периферии был представлен псевдофолликулярными структурами, в центральных зонах - скоплениями эозинофильных клеток с выраженным полиморфизмом ядер. В некоторых случаях отмечалось разрыхление периферических участков с переходом полиморфных опухолевых клеток в асцитное состояние. Небольшие очаги некроза опухолевых клеток были рассеяны по толще карциносаркомы. Через 7 сут после сочетанного воздействия происходила выраженная редукция «светлых» клеток в опухолевом узле, особенно по периферии, преобладающей была популяция мелких веретеновидных клеток. Отмечалось развитие фиброза вдоль сосудов. Через 14 сут в результате формирования массивных очагов некроза опухолевые узлы были разделены на несколько фрагментов, в каждом из которых возникали очаги опухолевого роста с присущей карциносаркоме Walker 256 гистоархитектоникой. По периферии образовавшихся компактных фрагментов располагались псевдофолликулярные структуры из «светлых» клеток, в центре - относительно мономорфные эозинофильные клетки; в некоторых участках встречались скопления и тяжи из «темных» саркоматозных клеток. Во все сроки наблюдения отмечалось выраженное полнокровие сосудов.

Митотический индекс был в 1,8; 1,7 и 1,6 раза ниже, чем в соответствующие сроки «спонтанного» роста опухоли. Объемная плотность паренхиматозного компонента карциносаркомы Walker 256 через 3, 7 и 14 сут после воздействия ОГ, ЦФ и МТ была уменьшена соответственно в 1,3; 1,4 и 1,3 раза по сравнению с соответствующими фазами развития опухоли без воздействий. Объемная плотность некрозов опухолевых клеток в данной группе возрастала во все сроки эксперимента. Апоптотический индекс опухолевых клеток был достоверно выше на протяжении всего эксперимента, чем при «спонтанном» развитии опухолевого узла, но особенно через 14 сут (13,8±0,6‰, p<0,05).

По данным ультраструктурного анализа, через 3 сут после сочетанного воздействия ОГ, ЦФ и МТ в карциносаркоме Walker 256 присутствовали как малодифференцированные опухолевые клетки 1-го типа, так и деструктивно измененные клетки 2-го типа, в которых отмечалось накопление липидных включений. Через 7 сут процессы деструкции, апоптотической трансформации опухолевых клеток 1-го и 2-го типов усиливались. Одновременно сохранялся пул неповрежденных опухолевых клеток обоих типов. Через 14 суток после воздействия ОГ, ЦФ и МТ ультраструктурные изменения опухолевых клеток обоих типов были аналогичны таковым через 3 сут.

Через 3 и 7 сут после сочетанного воздействия ОГ, ЦФ и МТ возрастала электронная плотность эндотелиоцитов кровеносных капилляров, расположенных по периферии опухолевого роста. Отмечались истончение эндотелиальной выстилки, фрагментация клеток, появление фрагментов эндотелиальных клеток в просветах капилляров. Через 14 сут регистрировалась структурно-функциональная гетерогенность эндотелиоцитов кровеносных капилляров, расположенных по периферии опухолевого узла: одни эндотелиоциты были деструктурированными, набухшими, другие - отличались усилением электронной плотности и содержанием вакуолей. Практически не определялись микропиноцитозные везикулы. Контакты между эндотелиальными клетками были неплотными. Описанные изменения кровеносных сосудов при развитии опухолевого процесса отражают как реорганизацию существующих сосудов, так и их новообразование.

После сочетанного воздействия ОГ, ЦФ и МТ на протяжении всего эксперимента и в большей степени на 7-е и 14-е сутки снижалась объемная плотность митохондрий и концентрация крист митохондрий. Объемная плотность микропиноцитозных везикул также уменьшалась: люминальных - на 32, 48 и 56%, цитоплазматических - на 47, 54 и 53%, базальных - 40, 56 и 62%, по сравнению со «спонтанным» развитием опухоли. Достоверно снижались численные плотности свободных и прикрепленных рибосом. Объемная плотность гранулярной цитоплазматической сети снижалась через 3 и 7 сут соответственно на 54 и 46%, но через 14 сут данный показатель возрастал на 22% по сравнению с контрольным уровнем.

Иммуногистохимический анализ экспрессии белков семейства Bcl-2 в карциносаркоме Walker 256 в условиях спонтанного развития и при воздействии общей гипертермии и цитостатиков. Цитотоксическое действие большинства противоопухолевых препаратов реализуется через индукцию апоптоза, вне зависимости от конкретного механизма действия каждого из них (Владимирская Е.Б. и др., 1997). Апоптоз рассматривается в качестве одного из факторов, сдерживающих рост опухоли на ранних стадиях развития. По данным ряда исследований, Bcl-2, Bcl- X_L и Bax могут принимать участие в формировании ионно-проводящих пор в липидном бислое митохондрий, образуя для этого димеры или олигомеры (Schlesinger P.H. et al., 1997). Считается, что при определенных обстоятельствах, в частности, при развитии оксидативного стресса, возможны значительное падение и/или потеря мембранного потенциала митохондрий, которые могут носить необратимый характер. В результате этих изменений возможен выход цитохрома с из межмембранного митохондриального пространства в цитозоль, его связывание с апоптоз-активирующим фактором-1 (Apaf-1) и формирование комплекса с каспазой-9 (Lesnicar H., Budihna М., 1989), которая, в свою очередь, запускает каскад протеолитических реакций и активирует другие каспазы. Несмотря на то, что Bcl-2 и Bax могут образовывать гетеродимеры и нейтрализовать действие друг друга через непосредственное взаимодействие, по-видимому, оба белка могут также модулировать функции митохондрий и развитие апоптоза независимо друг от друга (Belzacq A.-S. et al., 2003).

В последнее время показано, что белки семейства Bcl-2 могут принимать участие в реализации других механизмов апоптотической гибели клеток, не зависимых от высвобождения цитохрома с из митохондрий (Zecchin K.G. et al., 2007). Установлено также, что Bcl-2 может реализовать свои цитопротекторные свойства через усиление экспрессии сурвивина, ингибирование аккумуляции р53 и р38МАРК (Kumar P. et al., 2007). При этом гиперэкспрессия Bcl-2 связана с усилением малигнизации и метастазирования некоторых опухолей за счет индукции генной экспрессии матриксной металлопротеиназы-2 (Choi J. et al., 2005).

При «спонтанном» развитии карциносаркомы Walker 256 не было выявлено достоверных различий между уровнем экспрессии белков Bcl-2 и Bax (табл. 3). Уровень экспрессии Bad был достоверно выше, чем Bcl-2 и Bax соответственно в 1,6 и 1,7 раза.

Важное значение для характеристики пролиферативной активности клеток, их выживаемости и возможностей индукции апоптоза имеет оценка отношения Bcl-2/Bax. По современным представлениям, соотношение Bcl-2/Bax является ключевым фактором в регулирования апоптоза. Белки Bcl-2 и Bax находится в состоянии постоянного динамического равновесия, они образуют как гомо-, так и и гетеродимеры, что может приводить к развитию апоптоза клеток (Chinaiyan A.M., 1996). Считается, что низкое отношение Bcl-2/Bax может обусловливать развитие апоптоза, в то время как при высоких показателях может отмечаться устойчивость клеток к апоптотическим стимулам (Vaskivuo T.E. et al., 2002). Через 5 сут спонтанного развития карциносаркомы Walker 256 отношение Bcl-2/Bax составляло 1,04, а отношение Bcl-2/Bad - 0,61. Ранее было показано, что высокий уровень Bcl-2/Bax предотвращает митохондрии от повреждения, но это не исключает другого механизма развития апоптоза (Zecchin K.G. et al., 2007).

Таблица 3. Экспрессия белков семейства Bcl-2 в перевиваемой карциносаркоме Walker 256 после воздействия общей гипертермии, мелатонина и циклофосфана (M±m)

Группа	Сутки	Bcl-2, %	Bax, %	Bad, %
Трансплантация клеток карциносаркомы Walker-256 в мышцу бедра («спонтанный» рост, контроль)	5-е	19,86 ± 1,52	19,13 ± 2,05	32,59 ± 1,81
Трансплантация клеток карциносаркомы Walker-256 в мышцу бедра и воздействие общей гипертермии	7-е	13,06 ± 1,48*	71,52 ± 4,49*	68,06 ± 3,58*
	14-е	8,91 ± 1,41*	33,47 ± 1,59*	70,58 ± 1,95*
Трансплантация клеток карциносаркомы Walker-256 в мышцу бедра и воздействие мелатонина	7-е	5,93 ± 1,49*	36,09 ± 2,56*	35,00 ± 2,57
	14-е	5,04 ± 0,54*	12,97 ± 1,41	9,28 ± 1,47*
Трансплантация клеток карциносаркомы Walker-256 в мышцу бедра и воздействие циклофосфана	7-е	18,92 ± 1,73	28,56 ± 2,73	21,62 ± 0,99*
	14-е	23,07 ± 1,76	25,54 ± 1,71	16,12 ± 1,16*
Трансплантация клеток карциносаркомы Walker-256 в мышцу бедра и воздействие общей гипертермии в сочетании с мелатонином и циклофосфаном	14-е	9,34 ± 1,63*	29,19 ± 2,55*	70,51 ± 2,48*
Трансплантация клеток карциносаркомы Walker-256 в мышцу бедра и воздействие мелатонина в сочетании с циклофосфаном	14-е	3,03 ± 0,34*	25,45 ± 0,73	24,91 ± 3,17
Примечание. * - р < 0,05 по сравнению со «спонтанным» развитием опухоли.

При воздействии ОГ на протяжении всего эксперимента резко возрастал уровень экспрессии промоторов апоптоза Bax и Bad, инициирующих программируемую клеточную смерть в присутствии ингибиторов каспаз. Уровень экспрессии Bad через 7 и 14 сут после воздействия ОГ был выше уровня при «спонтанном» развитии опухоли соответственно в 2,1 и 2,2 раза. Экспрессия проапоптогенного белка Bax через 7 и 14 сут была также выше соответствующего показателя в контроле соответственно в 3,7 и 1,7 раза. Уровень экспрессии антиапоптогенного белка Bcl-2 после ОГ был ниже на протяжении всего эксперимента, чем у животных со «спонтанным» развитием опухоли, в большей степени на 14-е сутки эксперимента (в 2,23 раза). Отношение Bcl-2/Bax через 7 сут эксперимента снижалось до 0,18, а Bcl-2/Bad - до 0,19, т.е. эти отношения были уменьшены на 83 и 69% по сравнению со «спонтанным» ростом опухоли. Через 14 сут отношение Bcl-2/Bax составляло 0,27, а Bcl-2/Bad - 0,13, т.е. эти отношения были уменьшены соответственно на 74 и 79%.

Однократное введение ЦФ существенно не влияло на экспрессию антиапоптогенного белка Bcl-2 на протяжении всего эксперимента, хотя через 7 сут отмечалось незначительное снижение интенсивности окрашивания срезов. Одновременно выявлено увеличение уровня экспрессии проапоптогенного белка Bax через 7 и 14 сут эксперимента - соответственно на 49 и 34%. Экспрессия проапоптогенного белка Bad была достоверно ниже, чем в контрольной группе, особенно на 14-е сутки, - соответственно в 1,5 и 2,0 раза (см. табл. 3). При этом экспрессия Bax и Bad была выше, чем Bcl-2 соответственно на 51 и 14% через 7 сут эксперимента. Через 14 сут экспрессия Bcl-2 и Bax существенно не различалась, в то время как экспрессия Bad была снижена по сравнению с Bcl-2 на 30%. Отношение Bcl-2/Bax через 7 сут эксперимента уменьшилось до 0,66, через 14 сут оно возросло до 0,90, приближаясь к контрольному уровню. Отношение Bcl-2/Bad через 7 сут эксперимента равнялось 0,88, через 14 сут - 1,43.

Ежедневное введение МТ вызывало значительное снижение уровня экспрессии Bcl-2 - соответственно в 3,4 и 3,9 раза через 7 и 14 сут при сравнении с контролем (см. табл. 3). Отмечалось как уменьшение количества позитивно окрашенных клеток, так и интенсивности окрашивания отдельных клеток. На 7-е сутки эксперимента возрастала экспрессия проапоптогенных белков Bax и Bad. Особенно значительно увеличивалась экспрессия Bax - на 89% при сравнении с контрольной группой. К 14-м суткам происходило снижение экспрессии проапоптогенных белков: Bax - на 32%, Bad - на 72% при сравнении с контрольной группой и соответственно в 2,78 и 3,77 раза при сравнении с показателями через 7 сут. Отношение Bcl-2/Bax через 7 сут эксперимента существенно уменьшалось и составляло 0,16, через 14 сут оно возрастало до 0,39, но было значительно меньше, чем при спонтанном развитии опухоли. Отношение Bcl-2/Bad также было значительно уменьшенным через 7 сут эксперимента - 0,17, через 14 сут оно повышалось, но оставалось уменьшенным по сравнению с контролем - 0,54.

При сочетанном воздействии ЦФ и МТ на протяжение всего эксперимента происходило снижение в 6,6 раза уровня экспрессии белка Bcl-2 по сравнению с контролем. При этом выявлялась значительная гетерогенность опухолевых клеток по содержанию Bcl-2. Однако уровни экспрессии проапоптогенных белков Bax и Bad достоверно не отличались от контрольного уровня. В отличие от Bcl-2 проапоптогенные белки Bax и Bad более равномерно распределялись по ткани опухоли. Отношения Bcl-2/Bax и Bcl-2/Bad при сочетанном воздействии ЦФ и МТ достигали самых низких значений через 14 сут эксперимента - 0,12.

При сочетанном воздействии ЦФ и МТ с ОГ на протяжении всего эксперимента было выявлено снижение в 2,1 раза уровня экспрессии белка Bcl-2 по сравнению с контролем. Уровни экспрессии проапоптогенных белков Bax и Bad после сочетанного применения ОГ, ЦФ и МТ достоверно возросли в 1,5 и 2,2 раза, соответственно. Отношение Bcl-2/Bax через 14 сут эксперимента равнялось 0,32, а Bcl-2/Bad - 0,13, т.е. эти отношения были уменьшены соответственно на 69 и 79%.

Полученные данные свидетельствуют о значительном снижении экспрессии антиапоптотического белка Bcl-2 и усилении экспрессии проапоптотических белков Bax и Bad в опухолевых клетках карциносаркомы Walker 256 после введения ЦФ и МТ как в качестве моноагентов, так и в сочетании друг с другом и с ОГ. Через 14 сут после воспроизведения ОГ, введения ЦФ и МТ и сочетания этих воздействий происходило уменьшение отношения Bcl-2/Bax, наиболее значительно после сочетанного применения ЦФ и МТ (на 88%). Отношение Bcl-2/Bad также снижалось через 14 сут после данных воздействий, кроме ЦФ, наиболее существенно - после ОГ, ЦФ и МТ и сочетания ОГ, МТ и ЦФ - на 79%. Корреляционный анализ выявил сильную отрицательную связь между величиной отношений Bcl-2/Bax и Bcl-2/Bad и величиной апоптотического индекса (соответственно r = -0,81 и r = -0,61). Выявленная взаимосвязь позволяет считать, что изменение экспрессии и соотношений проапоптогенных и антиапоптогенного белков в клетках карциносаркомы Walker 256 индуцирует их апоптотическую гибель.

Метастатический потенциал карциносаркомы Walker 256 в динамике опухолевого роста и после воздействия общей гипертермии, циклофосфана и мелатонина. Одной из патобиологических характеристик карциносаркомы Walker 256 является ее склонность к метастазированию, преимущественно в регионарные по отношению к месту ее трансплантации лимфатические узлы. При определении интенсивности метастазирования рассчитывали частоту метастазирования опухоли, которую определяли как отношение числа животных с метастазами в подвздошных и паховых лимфатических узлах к общему количеству крыс в группе.

По данным проведенного светооптического исследования, карциносаркома Walker 256 метастазирует по гематогенному и лимфогенному типу. В динамике развития опухолевого узла, начиная с 7-х суток эксперимента в подвздошных и паховых лимфатических узлах, были обнаружены метастазы, их частота составляла 28,6±1,7%. К 14-м суткам частота метастазирования значительно возрастала и составляла 85,7±3,8%.

Воздействие ОГ вызывало усиление метастазирования. Метастазы определялись в подвздошных лимфатических узлах начиная с 3-х суток от момента воздействия (16,7±0,9%), с 7-х суток и до конца эксперимента частота метастазов возрастала соответственно в 2,3 и 1,2 раза (соответственно до 66,7±1,5 и 100% при сравнении с контрольной группой). Цитостатическая терапия ЦФ существенно подавляло метастазирование: метастазы выявлялись только к 14-м суткам после воздействия с частотой 20,0±0,6%. После воздействия МТ метастазы в лимфатических узлах выявлялись через 7 и 14 сут с частотой соответственно 16,7±0,7 и 25,0±1,7%, то есть реже в 1,7 и 3,4 раза, чем при «спонтанном» развитии опухоли. При сочетании МТ с ОГ метастазы выявлялись только через 14 сут с частотой 50,0±2,8%. После воздействия МТ, ЦФ и ОГ метастазы также регистрировались только через 14 сут эксперимента с частотой 28,6±2,0%.

Сочетанное использование ЦФ с МТ или ОГ приводило к полному отсутствию метастазирования на протяжении всего эксперимента

Полученные результаты свидетельствуют о наиболее выраженном антиметастатическом эффекте ЦФ и его сочетаниях с МТ и ОГ.

Синдром кахексии при спонтанном развитии карциносаркомы Walker 256 и действии общей гипертермии и цитостатиков. Карциносаркома Walker 256 относится к модельным опухолям, обусловливающим развитие синдрома анорексии/кахексии, который, в свою очередь, ассоциирован с высокой смертностью в результате катаболизма белков скелетных мышц (Tisdale M.J., 2001; Bennani-Baiti N., Walsh D., 2009).

В условиях естественного роста карциносаркомы Walker 256 масса тела крыс (без учета опухолевого узла) снижалась к 19-м суткам с момента трансплантации на 19%. Через 14 сут после воздействия ОГ отмечено наиболее значительное уменьшение массы тела животных - на 160%, далее заметное снижение массы тела было выявлено после сочетанного воздействия ОГ и МТ (на 27%) и МТ (на 18%). После сочетанного воздействия ОГ, ЦФ и МТ или ЦФ с МТ масса тела крыс снижалась по сравнению с контрольной группой всего лишь на 6 - 8%, что свидетельствовало об отсутствии потери мышечной массы.

В настоящее время описаны некоторые особенности данной опухоли, касающиеся протеолитической активности и выработки медиаторов неопластической кахексии (Yano C.L. et al., 2008; Rebeca R. et al., 2008). При добавлении в культуру миотрубочек C2C12 молекул протеолиз-индуцирующего фактора (PIF), выделенного из асцитной жидкости крыс-носителей карциносакромы Walker 256, было выявлено снижение синтеза белка и усиление его деградации в миотрубочках, сопровождавшиеся их ретракцией (Yano C.L. et al., 2008). Окислительный стресс также рассматривается в качестве одного из триггеров сигнальной трансдукции для активации протеосомальной системы и окисления протеинов (Guarnier F.A. et al., 2010).

По данным проведенного нами патоморфологического анализа карциносаркомы Walker 256, трансплантированной в мышцу бедра, мышечные волокна не только подвергались значительным литическим повреждениям в опухолевом узле, но и активной инвазии опухолевых клеток в мышечные волокна с резорбцией саркоплазмы.

Прооксидантная и антиоксидантная активности сыворотки крови в динамике развития карциносаркомы Walker 256. Согласно современным представлениям, свободные радикалы играют важную роль как в инициации канцерогенеза (вызывая модификацию ДНК), так и промоции опухолевого роста, когда инициированная клетка постепенно приобретает фенотипические черты злокачественной клетки (Зенков Н.К. и др., 2001).

Общая ПОА сыворотки крови интактных крыс составила 0,28±0,003 усл. ед. В динамике развития карциносаркомы Walker 256 ПОА сыворотки крови во все сроки наблюдения достоверно превышала среднее контрольное значение. Через 5 сут развития карциносаркомы Walker 256 ПОА сыворотки крови была максимальной и составляла 0,56±0,01 усл. ед., что в 2,3 раза превышало контрольный уровень (p<0,05). К 7-м и 14-м суткам наблюдения ее средние значения превышали контроль соответственно в 1,6 и 1,5 раза, составляя в среднем 0,38±0,005 и 0,33±0,004 усл. ед. (p<0,05).

В результате определения вторичных, стабильных продуктов ПОЛ в динамике развития карциносаркомы Walker 256 был выявлен примерно одинаковый характер изменений в содержании малонового диальдегида (МДА) и диеновых конъюгатов (ДК) в крови крыс. Уровень МДА в сыворотке крови крыс контрольной группы в среднем составил 0,06±0,004 нМ/мл. Через 5 сут развития карциносаркомы Walker 256 уровень МДА в сыворотке крови крыс достоверно возрастал до 0,077±0,006 нМ/мл (p<0,05). Однако на 7 сутки его содержание было ниже контроля, а к 14-м суткам наблюдения - соответствовало контролю (соответственно 0,039±0,015 и 0,056±0,005 нМ/мл).

Уровень ДК в сыворотке крови крыс контрольной группы составил 0,39±0,028 нМ/мл. К 5-м суткам развития карциносаркомы Walker 256 уровень ДК в сыворотке крови крыс достоверно возрастал до 0,44±0,015 нМ/мл (p<0,05), в последующем - постепенно снижался. Содержание ДК на 7-е сутки развития карциносаркомы Walker 256 составило 0,41±0,046 нМ/мл, а к 14-м суткам не отличалось от контрольных величин (0,38±0,025 нМ/мл). Эти данные свидетельствуют о том, что на ранних сроках развития карциносаркомы Walker 256 ПОА сыворотки крови крыс значительно повышается, что свидетельствует об активации реакций ПОЛ.

Общая АОА сыворотки крови интактных крыс равнялась 9,6±0,08 усл. ед. В динамике развития карциносаркомы Walker 256 общая АОА сыворотки крыс во все сроки наблюдения была достоверно ниже, чем у крыс контрольной группы. На 5-е сутки общая АОА сыворотки крови была ниже контрольных величин в 1,3 раза (7,38±0,06 усл. ед., p<0,05). К 7-м и 14-м суткам общая АОА сыворотки крови крыс с карциносаркомой Walker 256 была ниже контроля соответственно в 2,4 и 1,6 раза (4,0±0,03 и 6,0±0,05 усл. ед., p<0,05).

Для оценки баланса в системе «про-/антиоксиданты» были произведены расчеты коэффициента соотношения (К_С) между показателями ПОА и АОА сыворотки крови крыс. В группе интактных крыс К_С ПОА и АОА сыворотки крови составил 2,48±0,03 усл. ед. В динамике развития карциносаркомы Walker 256 К_С ПОА и АОА сыворотки крови значительно превышала контрольные цифры. Через 5, 7 и 14 сут К_С ПОА и АОА сыворотки крови крыс соответственно составили 7,42±0,09, 9,53±0,11 и 5,56±0,07 усл. ед. Эти данные свидетельствуют о смещении баланса в системе «про-/антиоксиданты» в сторону прооксидантов, что говорит о развитии окислительного стресса в организме животных.

Прооксидантная и антиоксидантная активности сыворотки крови крыс с карциносаркомой Walker 256 при воздействии циклофосфаном. Через 3 сут после введения ЦФ интактным крысам ПОА сыворотки крови превышала контроль в 1,25 раза (p<0,05), а к 7-м и 14-м суткам постепенно снижалась: через 7 сут ПОА сыворотки крови была в 1,4 раза (p<0,05) выше, чем в контроле, а через 14 сут - практически не отличалась (табл. 4).

Таблица 4. Прооксидантная активность сыворотки крови (усл. ед.) после воздействия общей гипертермии, циклофосфана и мелатонина на крыс с карциносаркомой Walker-256 (М±m)

Группа	Сроки исследования (сутки)
	3-и	7-е	14-е
Интактные крысы после введения циклофосфана	0,35±0,005*	0,32±0,004	0,29±0,004
Трансплантация карциносаркомы Walker 256 после введения циклофосфана	0,64±0,008*/**	0,43±0,006*/**	0,38±0,005*/**
Интактные крысы после введения мелатонина	0,31±0,004	0,36±0,005*	0,26±0,003
Трансплантация карциносаркомы Walker 256 после введения мелатонина	0,60±0,008*/**	0,31±0,004	0,33±0,004*
Интактные крысы после воздействия общей гипертермии	0,26±0,003	0,36±0,005*	0,29±0,004
Трансплантация карциносаркомы Walker 256 после воздействия общей гипертермии	0,79±0,01*/**	0,52±0,007*/**	0,36±0,005*
Контроль (интактные крысы)	0,28±0,003
Примечание. * - значения, достоверно отличающиеся от контрольных крыс; ** -значения, достоверно отличающиеся от соответствующей группы интактных крыс.

При введении ЦФ крысам с карциносаркомой Walker 256 ПОА сыворотки крови возрастала к 3-м суткам наблюдения в 2,7 раза (p<0,05). Менее выраженное повышение ПОА сыворотки сохранялось через 7 и 14 сут. На фоне умеренного повышения ПОА сыворотки крови через 3 сут после введения ЦФ происходил незначительный рост уровня МДА к 7 суткам, что, вероятно, связано с цитостатическим действием препарата с активацией реакции ПОЛ. Так, на 3-и сутки после введения ЦФ уровень МДА в сыворотке крови крыс практически не менялся и составлял 0,061±0,003 нМ/мл (в контроле - 0,06±0,004 нМ/мл). К 7-м суткам после введения ЦФ в крови крыс уровень МДА достоверно повышался до 0,067±0,002 нМ/мл, а к 14-м суткам - напротив, снижался до 0,041±0,005 нМ/мл.

На 3-и и 7-е сутки после введения ЦФ крысам с карциносаркомой Walker 256 уровень МДА в крови животных практически не отличался от контрольного. Однако при сравнении с крысами с карциносаркомой Walker 256, которым не вводили ЦФ, выявлено снижение уровня МДА на 3-и сутки после введения цитостатика с последующим ростом его содержания к 14-м суткам наблюдения (до 0,079 ± 0,008 нМ/мл). В отличие от МДА уровень ДК при введении крысам с карциносаркомой Walker 256 ЦФ значительно возрастал, особенно, на 3-и и 7-е сутки наблюдения. В эти сроки средние величины ДК составили соответственно 0,7±0,014 и 0,69±0,06 нМ/мл.

Прооксидантная и антиоксидантная активности сыворотки крови крыс с карциносаркомой Walker 256 при воздействии мелатонином. При введении мелатонина (МТ) интактным крысам ПОА сыворотки крови умеренно возрастала к 3 и 7 суткам наблюдения соответственно в 1,3 и 1,5 раза (p<0,05), а к концу эксперимента (14 сутки) - достигала контрольного уровня (см. табл. 4).

На 3 сутки после введения МТ крысам с карциносаркомой Walker 256 ПОА сыворотки крови увеличивалась и в 2,5 раза превышала данные контроля. Затем наблюдалось снижение ПОА сыворотки крови у этих крыс. Через 7 и 14 сут после введения МТ крысам с карциносаркомой Walker 256 ПОА сыворотки крови была выше контроля соответственно в 1,3 и 1,4 раза. На 3 сутки после введения МТ интактным крысам уровень МДА в сыворотке крови достоверно возрастал до 0,088±0,017 нМ/мл (в контроле 0,06±0,004 нМ/мл) (p<0,05). К 7-м суткам после введения МТ уровень МДА в сыворотке крови нормализовался (0,058±0,003 нМ/мл), а к 14-м суткам наблюдения достигал 0,084±0,002 нМ/мл. Такая же динамика изменений концентрации МДА была выявлена при введении МТ крысам с карциносаркомой Walker 256. При этом стоит отметить, что при введении МТ крысам с карциносаркомой уровень МДА на 14-е сутки наблюдения был достоверно выше (0,076 ± 0,007 нМ/мл, p<0,05), чем у животных с опухолью без введения МТ.

В отличие от МДА при введении МТ интактным животным происходило снижение уровня ДК в сыворотке крови. Через 3, 7 и 14 сут после введения МТ средние уровни ДК соответственно составили 0,24±0,005; 0,33±0,013 и 0,31±0,003 нМ/мл (в контроле - 0,39 ± 0,028 нМ/мл) (p<0,05). На 3-и и 7-е сутки после введения МТ крысам с карциносаркомой Walker 256 уровень ДК в сыворотке крови животных практически не изменялся. Однако к 14-м суткам опыта после введения МТ у крыс с карциносаркомой Walker 256 уровень ДК в сыворотке крови значительно возрастал до 0,69±0,017 нМ/мл (p<0,01).

Прооксидантная и антиоксидантная активности сыворотки крови крыс с карциносаркомой Walker 256 при сочетанном воздействии циклофосфана и мелатонина. На 3-и и 7-е сутки после введения МТ и ЦФ крысам с карциносаркомой Walker 256 уровень ДК в сыворотке крови животных практически не изменялся. Однако к 14-м суткам опыта после введения препаратов уровень ДК в сыворотке крови значительно возрастал.

В отличие от ДК уровень ПОА снижался. Через 3 и 14 сут после сочетанного введения МТ и ЦФ этот показатель соответственно составил 0,57±0,007 и 0,33 ± 0,004 усл. ед. (в контроле - 0,28±0,003 усл ед) (p<0,05). Возможно, это обусловлено не только снижением содержания МДА, но и влиянием МТ, обладающего выраженным антиоксидантным действием (Анисимов В.Н. и др., 2000).

Прооксидантная и антиоксидантная активности сыворотки крови крыс с карциносаркомой Walker 256 при воздействии общей гипертермии и ее сочетания с циклофосфаном и мелатониноном. При оценке влияния ОГ на ПОА сыворотки крови крыс с карциносаркомой Walker 256 было установлено, что этот показатель возрастал к 3-м суткам эксперимента в 2,8 раза (p<0,05) (см. табл. 4). При этом ПОА сыворотки крови также была достоверно выше, чем у интактных животных, подвергавшихся ОГ (p<0,05). Подобное, но менее выраженное повышение ПОА сыворотки крови сохранялось через 7 и 14 сутк после ОГ у крыс с карциносаркомой Walker 256.

Под влиянием ОГ у интактных крыс через 7 сут достоверно повышалось на 46,7% содержание МДА (до 0,088±0,014 нМ/мл, p<0,05) по сравнению с контролем (0,060 ± 0,004 нМ/мл) и на. 57,1% - по сравнению с 3-ми сутками опыта (0,056±0,007 нМ/мл). Через 14 сут концентрация МДА у интактных животных после воздействия ОГ была на 51,7% выше контрольного значения (0,091±0,004 нМ/мл, p<0,05).

У крыс с карциносаркомой Walker 256 после воздействия ОГ концентрация МДА в сыворотке крови на протяжении всего эксперимента была выше в 3,4 и 3,3 раза, на 76,7% (соответственно 0,203±0,034, 0,200±0,026 и 0,106±0,010 нМ/мл, p<0,05), чем в контроле.

После воздействия ОГ у интактных животных происходило достоверное (на 39,2, 27,7 и 30,5%) снижение концентрации ДК в сыворотке крови (соответственно до 0,237±0,018; 0,282±0,005 и 0,271±0,005 нМ/мл, p<0,05) при сравнении с контролем (0,390±0,028 нМ/мл). Воздействие ОГ у животных с карциносаркомой Walker 256 приводило к повышению концентрации ДК на 56,1, 44,0% и в 2,0 раза соответственно через 3, 7 и 14 сут опыта (до 0,370±0,019; 0,406±0,012 и 0,555±0,02 нМ/мл, p<0,05) по сравнению с интактными крысами. При этом на 14-е сутки опыта уровень ДК в сыворотке крови становился достоверно выше контрольного уровня.

После введения ЦФ и действия ОГ уровень ПОА и ДК в сыворотке крови крыс с карциносаркомой Walker 256 имел тенденцию к росту через 3 сут с последующим снижением к 14-м суткам эксперимента относительно контроля. В то же время концентрация МДА в сыворотке крови крыс с карциносаркомой Walker 256 не претерпевала существенных изменений. При сочетанном воздействии ОГ и МТ было обнаружено, что изучаемые параметры (ПОА, МДА и ДК) у крыс с карциносаркомой Walker 256 значимо не отличались от таковых в контроле. При сочетанном воздействии ОГ, ЦФ и МТ установлено достоверное увеличение в 1,9 раза содержания ДК в сыворотке крови у крыс с карциносаркомой Walker-256 к 14-м суткам эксперимента (p<0,05). Но при этом уровни ПОА и МДА значимо не отличались от данных контрольной группы (p>0,05).

Применение ОГ и ее сочетание с введением ЦФ и МТ приводило к разнонаправленному изменению содержания продуктов ПОЛ в сыворотке крови крыс с карциносаркомой Walker 256 как в сторону понижения, так и повышения их содержания. При этом общий уровень ПОА сыворотки крови имел тенденцию к снижению, что может быть связано с особенностями реагирования молекулярных систем, определяющих потенциал АОА сыворотки крови у экспериментальных животных.

При анализе динамики общей АОА сыворотки крови при действии ОГ, а также введении крысам с карциносаркомой Walker 256 ЦФ и МТ была обнаружена разная направленность изменений данного параметра (табл. 5). Через 3 сут после введения ЦФ интактным крысам АОА сыворотки крови превышала контрольные цифры в 1,3 раза (p<0,05), затем к 7-м и 14-м суткам постепенно снижалась.

патоморфогенез карциносаркома walker противоопухолевый

Таблица 5. Антиоксидантная активность сыворотки крови (усл. ед.) при воздействии циклофосфана, мелатонина, общей гипертермии крысам с карциносаркомой Walker 256 (М±m)

Группы	Сроки исследования (сутки)
	3-и	7-е	14-е
Интактные крысы после введения циклофосфана	12,48±0,10*	10,56±0,09	8,64±0,07
Трансплантация карциносаркомы Walker 256 после введения циклофосфана	11,52±0,09*	8,73± 0,07	12,48 ±0,10*/**
Интактные крысы после введения мелатонина	14,40 ± 0,12*	14,02±0,11*	10,08±0,08
Трансплантация карциносаркомы Walker 256 после введения мелатонина	12,48±0,10*	14,60±0,10*	11,52±0,09*
Интактные крысы после воздействия общей гипертермии	12,48±0,10*	11,52±0,09*	12,00±0,10*
Трансплантация карциносаркомы Walker 256 после воздействия общей гипертермии	14,40±0,12*	16,32±0,13*/**	13,44±0,11*
Контроль (интактные крысы)	9,60±0,08
Примечание. * - p<0,05 по сравнению с контролем; ** - p<0,05 по сравнению с соответствующей группой интактных крыс.

При введении ЦФ крысам с карциносаркомой Walker 256 АОА сыворотки крови возрастала к 3-м суткам в 1,2 раза по сравнению с интактным контролем, но также была достоверно выше, чем у крыс с опухолью (7,38±0,06 усл. ед., p<0,05). Подобное повышение АОА сыворотки сохранялось у крыс с карциносаркомой Walker 256 до 14-х суток после введения ЦФ (p<0,05). При введении МТ интактным крысам АОА сыворотки крови возрастала к 3-м и 7-м суткам соответственно в 1,5 и 1,46 раза (p<0,05), а к 14-м суткам - достигала контрольного уровня.

На 3-и и 7-е сутки после введения МТ крысам с карциносаркомой Walker 256 АОА сыворотки крови животных увеличивалась в 1,3 и 1,5 раза по сравнению с контролем (p<0,05). Через 14 сут АОА немного снижалась, но превышала контрольное значение в 1,2 раза (p<0,05). При сочетанном введении МТ и ЦФ крысам с карциносаркомой Walker 256 было установлено значимое повышение уровня АОА сыворотки крови животных с 3-х по 14-е сутки (соответственно с 10,56±0,09 до 14,40±0,12 усл. ед., p<0,05).

Однократная ОГ приводила к увеличению на 3-и сутки АОА сыворотки крови интактных крыс в 1,3 раза (p<0,05) по сравнению с контролем. Высокие уровни АОА в данной экспериментальной группе сохранялись и на 7 - 14-е сутки эксперимента (p<0,05). Аналогичная закономерность прослеживалась и в группе крыс с карциносаркомой Walker 256, подвергнувшихся действию ОГ: через 3, 7 и 14 сут АОА сыворотки крови крыс была выше, чем в контроле соответственно в 1,5; 1,7 и 1,4 раза (p<0,05).

Сравнивая сочетанное действие ОГ, МТ и ЦФ на уровень общей АОА сыворотки крови крыс с карциносаркомой Walker-256 необходимо отметить, что данный показатель снижался к 14 суткам эксперимента. Через 3 и 7 сут АОА сыворотки крови крыс с карциносаркомой Walker 256 после сочетанного воздействия ОГ, МТ и ЦФ равнялась соответственно 17,28±0,14 и 20,16±0,16 усл. ед,, к 14-м суткам она приближалась к контрольным данным 14,40±0,12 усл. ед. (в контроле - 9,60±0,08 усл. ед., p<0,05).

При оценке баланса в системе «про-/антиоксиданты» с помощью коэффициента соотношения (К_С= ПОА/АОА сыворотки крови) обнаружено, что у контрольных крыс К_С в среднем составил 2,48±0,03 усл. ед. (табл. 6).

Таблица 6. Коэффициент соотношения ПОА/АОА (усл. ед.) сыворотки крови крыс с карциносаркомой Walker-256 при введении циклофосфана, мелатонина и действии общей гипертермии (М±m)

Группы	Сроки исследования (сутки)
	3-и	7-е	14-е
Интактные крысы после введения циклофосфана	2,81±0,034	3,07±0,037*	3,31±0,040*
Интактные крысы после введения мелатонина	2,15±0,026	2,55±0,031	2,60±0,031
Интактные крысы после воздействия общей гипертермии	2,10±0,025	3,10±0,037*	2,38±0,029
Трансплантация карциносаркомы Walker 256 после введения циклофосфана	5,59±0,067*/**	4,92±0,059*/**	3,06±0,037
Трансплантация карциносаркомы Walker 256 после введения мелатонина ...

Подобные документы

• Применение мелатонина в стоматологии

  Действия мелатонина в зубном развитии и применение при кариесе. Применение мелатонина в качестве противовоспалительного средства в полости рта при пародонтозе, инфекции герпеса, кандидозе. Цитотоксичность и генотоксичность стоматологических материалов.
  
  реферат [43,8 K], добавлен 22.09.2016
  

• Гипертермия у детей

  Понятие гипертермии в медицине как перегревания организма, накопления в нем избыточного тепла. Красная белая гипертермия у детей: лечебные мероприятия. Защитная реакция организма с помощью гипертермии. Лечение гипертермии - терапия основной болезни.
  
  презентация [928,3 K], добавлен 23.11.2014
  

• Патофизиология опухолевого роста

  Распространение опухоли в природе, в фило- и онтогенезе. Онкогенные вирусы, классификация, структура, пути распространения. Значение наследственных факторов в развитии опухолей. Биологические особенности, профилактика и терапия опухолевого роста.
  
  лекция [33,8 K], добавлен 16.05.2009
  

• Принципы лекарственной терапии злокачественных опухолей

  Общие принципы химиотерапии. Факторы определения показаний для ее применения. Оценка характера опухолевого процесса. Стандарты определения эффекта лечения (ВОЗ). Ожидаемая эффективность терапии. Описание некоторых методик. Основы химиоэмболизации.
  
  презентация [734,1 K], добавлен 19.11.2014
  

• Злокачественные новообразования как медико-социальная проблема

  Анализ заболеваемости злокачественными новообразованиями у населения г. Давлеканово. Статистика рака, причины его появления. Классификация нарушений тканевого роста. Злокачественные и доброкачественные опухоли. Факторы противоопухолевой резистентности.
  
  реферат [110,1 K], добавлен 14.11.2010
  

• Принципы общей терапии в дерматологии

  Основные принципы лечения дерматологических больных. Основы терапии кожных болезней. Коррекция механизмов течения и развития патологического процесса, выявленных нарушений со стороны органов. Проведение патогенетической и симптоматической терапии.
  
  презентация [30,4 K], добавлен 21.01.2016
  

• Диагностика и лечение рака нижнеампулярного отдела прямой кишки

  Эпидемиология рака прямой кишки. Диагностические исследования заболевания. Применения предоперационной термолучевой терапии (гипертермии) в плане комбинированного лечения. Виды оперативных вмешательств. Динамика безрецидивной выживаемости у больных.
  
  презентация [682,1 K], добавлен 04.06.2014
  

• Алгоритм рациональной диагностики и лечения при гипертермии у детей раннего возраста

  Гипертермический синдром как неспецифическая защитно-приспособительная реакция организма, характеризующаяся повышением температуры тела при заболеваниях. Показания к проведению жаропонижающей терапии и профилактика судорог у детей раннего возраста.
  
  презентация [101,5 K], добавлен 17.09.2016
  

• Неингаляционные методы общей анестезии

  Исследование основных видов внутримышечной общей анестезии, наилучшим средством которой является кетамин. Отличительные черты перорального и ректального метода общей анестезии. Методы проведения электромедикаментозной и электроакупунктурной аналгезии.
  
  реферат [31,5 K], добавлен 27.04.2010
  

• Передне-верхний вывих правого бедра

  Признаки передне-верхнего вывиха правого бедра. Умеренная боль в области тазобедренного сустава при попытке сесть, невозможность самообслуживания. Устранение вывиха под общей анестезией. Конгруэнтность суставных поверхностей. Скелетное вытяжение с грузом.
  
  история болезни [27,2 K], добавлен 23.04.2011
  

• Исследование влияния фракции низкомолекулярных пептидов, полученных из кордовой крови, на развитие экспериментальной язвенной болезни у 3-х месячных крыс

  Развитие экспериментальной язвенной болезни (ЯБ) желудка у 3-х месячных самцов крыс линии Вистар. Клиническое исследование сыворотки крови животных после формирования ЯБ желудка. Действие фармакологического препарата актовегин на заживление ЯБ желудка.
  
  курсовая работа [125,2 K], добавлен 08.09.2011
  

• Фармацевтическая химия противоопухолевых препаратов

  Направления развития терапии злокачественных опухолей. Классификация противоопухолевых препаратов. Методика идентификации препаратов. Противоопухолевые антибиотики, гормональные средства, антагонисты гормонов и средства растительного происхождения.
  
  дипломная работа [1,0 M], добавлен 21.08.2011
  

• Противораковые вакцины

  Иммунная система против рака. Понятие врожденного и приобретенного иммунитета. Главные элементы активной противоопухолевой защиты: цитотоксические Т-лимфоциты. Рассмотрение некоторых противоопухолевых вакцин: флюиды Вильяма Коли, пицибанил, иммуцин.
  
  презентация [370,7 K], добавлен 06.12.2015
  

• Врожденный вывих бедра у детей

  Исследование факторов риска дисплазии тазобедренного сустава у новорожденных. Изучение основных симптомов дисплазии и врожденного вывиха бедра. Диагностика и принципы современного консервативного лечения у младенцев. Осложнения врожденного вывиха бедра.
  
  презентация [3,1 M], добавлен 06.04.2016
  

• Травма бедра

  Классификация переломов бедра. Переломы бедра у детей. Открытые повреждения тазобедренного сустава. Переломы диафиза бедра. Переломы головки бедренной кости, шейки бедра, проксимального конца бедренной кости. Осложнения при переломах шейки бедра.
  
  реферат [22,7 K], добавлен 26.06.2009
  

• Анестезия при неотложных операциях в абдоминальной хирургии

  Проведение общей анестезии при неотложных хирургических заболеваниях. Задачи анестезиологического обеспечения. Участие анестезиолога в предоперационной подготовке больных. Сочетанное применение общей, проводниковой или местной инфильтрационной анестезии.
  
  презентация [91,9 K], добавлен 04.10.2016
  

• Гипотермия и гипертермия

  Причины гипотермии и гипертермии. Факторы, способствующие переохлаждению и перегреванию. Патофизиологические изменения в организме в зависимости от внутренней температуры тела. Компенсаторные реакции при нарушении теплового баланса. Солнечный удар.
  
  презентация [742,7 K], добавлен 16.12.2014
  

• Роль медицинской сестры с высшим образованием в работе врача общей практики

  Влияние семьи и ее здоровья на демографическую политику. Анализ семейного состава врачебного участка, оценка состояния здоровья семей и получаемой ими медицинской помощи. Функциональные обязанности и клинические навыки медицинской сестры общей практики.
  
  дипломная работа [363,8 K], добавлен 15.02.2012
  

• Трансплантации сердца

  Первая пересадка сердца животного человеку. Показания, противопоказания к трансплантации. Требования к донору сердца. Индукция терапии в предоперационном периоде. Включение искусственного кровообращения. Хирургический доступ, соединение крупных сосудов.
  
  презентация [355,5 K], добавлен 13.11.2014
  

• Термические поражения

  Описание системы терморегуляции организма. Различные виды ее нарушения, связанные с тепловым воздействием: судороги, тепловое истощение, удар, гипертермия, их симптомы и лечение. Другие причины возникновения гипертермии помимо тепловой экспозиции.
  
  реферат [19,2 K], добавлен 15.06.2009
  

• главная
• рубрики
• по алфавиту
• вернуться в начало страницы
• вернуться к началу текста
• вернуться к подобным работам