Характеристика иммунного статуса при патологиях желудочно-кишечного тракта и других вторичных иммунодефицитных состояниях и пути их коррекции (клинико-экспериментальное исследование)

1

Размещено на http://www.allbest.ru/

АКАДЕМИЯ НАУК РЕСПУБЛИКИ УЗБЕКИСТАН

ИНСТИТУТ ИММУНОЛОГИИ

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени

доктора медицинских наук

ХАРАКТЕРИСТИКА ИММУННОГО СТАТУСА ПРИ ПАТОЛОГИЯХ ЖЕЛУДОЧНО-КИШЕЧНОГО ТРАКТА И ДРУГИХ ВТОРИЧНЫХ ИММУНОДЕФИЦИТНЫХ СОСТОЯНИЯХ И ПУТИ ИХ КОРРЕКЦИИ (клинико-экспериментальное исследование)

АСКАРОВ Тахир Аскарович

Ташкент - 2007

Работа выполнена в Институте иммунологии Академии Наук Республики Узбекистан

Научный консультант: доктор медицинских наук

Арипова Тамара Уктамовна

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук

Разикова Ильмира Саъдуллаевна

доктор медицинских наук, профессор

Бабаходжаев Сирожиддин Насырович

доктор медицинских наук

Абдурахманов Мамур Мустафаевич

Ведущая организацияИнститут иммунологии МЗ Российской Федерации

Защита диссертации состоится «_____»_____________2007 г. в_____час. на заседании Специализированного совета К 015.89.01 при институте Иммунологии Академии наук Республики Узбекистан по адресу: г. Ташкент, ул. Я. Гулямова, 74.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института иммунологии Академии наук Республики Узбекистан.

Автореферат разослан «____»_____________________2007 года.

Ученый секретарь

специализированного совета,

к.м.н. Камалов З.С.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Наиболее часто вторичные иммунодефициты возникают при вирусных (Svensson A. et al., 2005) и бактериальных инфекциях (Мицура В. М. с соавт., 2003; Ботерашвили Н. М., 2004), глистных и протозойных болезнях, при злокачественных новообразованиях (Davis I. D., 2000; Pavis H. et. al., 2002; Малашенко С. В. с соавт., 2003; Zhou J. et al., 2005), при хронических длительно текущих заболеваниях инфекционной и неинфекционной природы (Гриневич В. Б. с соавт., 1998; Пешко А. В., 2000; Chen X. Y. et al., 2002), при нарушениях питания, при длительном применении химиопрепаратов, иммунодепрессантов, под действием ионизирующей радиации и иммунотоксинов, при продолжительных стрессорных воздействиях (Малашенкова И. К. с соавт., 1997), при патологии обмена веществ, при эндокринных нарушениях (Дьяченко С. С. с соавт., 1975; Алимходжаева П. Р. с соавт., 1995), при травмах, операциях, ожоговой болезни (Махмудов К. Х., 1994; Медников Р. В. с соавт., 2003; Шукуров С. И., 2005), нарушениях системы кровообращения (Кашаева Л. Н. с соавт., 2005). Кроме того, иммунодефициты могут быть связаны с возрастом - это дети раннего возраста (Баранцева И. Б., 2003), у которых наблюдается незрелость иммунной системы и люди старшего возраста, у которых происходит постепенное угнетение иммунных реакций организма.

Клинические проявления вторичных иммунодефицитов разнообразны и проявляются 4-мя основными синдромами: а) инфекционный; б) аллергический; в) аутоиммунный; г) иммунопролиферативный.

Несмотря на то, что различными авторами усовершенствуются методы и тактика проводимой базовой терапии заболеваний, эффективность лечения остается на достаточно низком уровне. Во многих случаях причиной этих особенностей развития, течения и исхода заболеваний являются определенные нарушения в функционировании иммунной системы.

Степень изученности проблемы: Вопросам медикаментозной иммунотерапии посвящена работа А. В. Караулова с соавт. (2000). Классификация и принципы применения иммуномодуляторов приведены в сообщениях Р. М. Хаитова с соавт., (2000) и Д. К. Новикова с соавт. (2002). В настоящее время общее число иммунотропных препаратов, используемых в различных странах, превышает 400 наименований.

Большая группа иммуномодуляторов получена из растительного сырья (Аминов С. Н. с соавт. 2003; Кодиров О. Ш. с соавт., 2004; Алиев Х. У., с соавт., 2005; Олимов Н. К., 2005; Барам Н.И. с соавт., 2005).

Основным источником получения иммуноактивных веществ являются органы и ткани разных видов животных, микроорганизмов и т.д. (Курбанова М. М. с соавт., 1997; Колбаев И. Б., 1997; Колбаев И. Б., 1997; Александров В. В. с соавт., 2000; Салиева Л. М. с соавт., 2001). Как известно, ткани и яды змей содержат биологически активные вещества различной химической природы. Установлено, что дизентегрин ядов обладает противораковым эффектом (Yang R. S. et al., 2005). Одним из способов специфической терапии является использование антител человека (Gavilondo I. V. et al., 2000).

Таким образом, вещества, выделенные из разных биологических объектов, способны регулировать нарушения в иммунной системе при патологических состояниях.

Одной из актуальных задач иммунофармакологии является разработка новых препаратов. Основными требованиями, которые предъявляются к иммуномодулирующим препаратам, являются: наличие иммуномодулирующих свойств; высокая эффективность; безопасность и безвредность; отсутствие противопоказаний; отсутствие привыкания; отсутствие побочных эффектов; отсутствие канцерогенных эффектов; отсутствие индукции иммунопатологических реакций; не должны вызывать чрезмерной сенсибилизации и не потенцировать ее у других лекарственных средств; должны легко метаболизироваться и выводиться из организма; не должны вступать во взаимодействие с другими препаратами и при этом обладать высокой совместимостью с ними.

Вместе с тем, известные иммуномодуляторы неполноценны по своей эффективности и по ряду других свойств, определяющих их безвредность, удобства применения, экономичность и т.д. Наиболее приемлемыми и адекватными для организма человека являются природные, естественные иммунокорректоры, основу которых составляют вещества, принимающие участие в регуляции иммунных процессов в организме животных и человека. Например, пролактин обладает иммуномодулирующим эффектом у животных при стрессовом состоянии (Немирович-Данченко Е. А., 2003).

Учитывая вышесказанное, актуальной проблемой клинической иммунологии является разработка новых иммунокорригирующих веществ на основе местного сырья.

Связь диссертационной работы с тематическими планами НИР: Диссертационная работа входит в план НИР Института иммунологии Академии наук Республики Узбекистан.

Цель работы. Изучить влияние новых биопрепаратов природного происхождения на иммунный статус в норме и при вторичных иммунодефицитных состояниях в эксперименте и клинике.

Задачи исследования.

1. Изучить влияние Лакто Флора на специфические и неспецифические факторы иммунитета у интактных животных.

2. Исследовать эффект биопрепаратов на пролиферацию и дифференцировку кроветворных стволовых клеток.

3. Изучить эффект биопрепаратов на иммунный статус при вторичных иммунодефицитах (язва желудка, острый токсический гепатит, гемолитическая анемия, ожоговая болезнь, гормонинодуцированный иммунодефицит, опухолевый рост, возрастной иммунодефицит).

4. Изучить эффект биопрепаратов на гематологические показатели у иммунодефицитных животных.

5. Изучить эффект биопрепарата на иммунный статус больных раком желудка. флор иммунитет биопрепарат

6. Изучить клинический эффект биопрепарата у больных с язвой желудка и двенадцатиперстной кишки.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Экспериментально установлено, что биопрепарат Лакто Флор обладает свойством стимулировать специфические иммунные реакции не только в целостном организме in vivo, но и при прямом контакте in vitro с иммунокомпетентными клетками. Важным моментом является непосредственное воздействие Лакто Флора и экстракта почки кур на пролиферацию и дифференцировку кроветворных стволовых клеток, что обуславливает повышение иммунологической реактивности организма за счет количественного повышения разных популяций и субпопуляций лимфоцитов и усиления их функциональной активности.

2. Лакто Флор обладает иммуномодулирующим эффектом при экспериментальных вторичных иммунодефицитных состояниях, вызванных химическими веществами или физическими факторами, мишенями для которых являются отдельные органы (желудок, печень) или системы (кроветворная, иммунная); при иммунодефицитах, возникающих в процессе опухолевого роста и раннем постнатальном онтогенезе.

3. Экспериментальные и клинические исследования показывают необходимость назначения препарата Лакто Флор при формировании предраковых пограничных состояний (язвенная болезнь желудка и язвенная болезнь двенадцатиперстной кишки). Включение его в комплексное специфическое лечение дает выраженный клинико-иммунологический эффект.

4. При экспериментальном опухоленосительстве и у больных раком желудка Лакто Флор способствует восстановлению иммунологической отвечаемости на антигенное воздействие, а также сдвигов в показателях клеточного и гуморального иммунитета.

Научная новизна исследования.

1. Впервые проведены комплексные исследования по изучению влияния биологически активных веществ природного происхождения на специфические и неспецифические факторы иммунитета на различных экспериментальных моделях вторичных иммунодефицитных состояний и в клинике. Установлено, что препарат Лакто Флор, выделенный из молозива коров, обладает свойством в несколько раз повышать иммунологическую отвечаемость организма на антигенное воздействие у разных видов животных при его введении в индуктивную фазу или на пике иммунного ответа. Обнаружена способность данного вещества отменять феномен конкуренции антигенов в иммунном ответе. Препарат оказывает стимулирующий эффект на антителообразование в системе in vitro. Лакто Флор и экстракт почки кур стимулируют пролиферацию кроветворных стволовых клеток и активируют их дифференцировку в эритроидном, гранулоцитарном и мегакариоцитарном направлениях. Лакто Флор стимулирует фагоцитарную активность лейкоцитов крови у интактных мышей.

2. Установлено, что при экспериментальной язве желудка, остром токсическом гепатите, гемолитической анемии, ожоговой болезни, иммунодефиците, вызванном гидрокортизоном, опухолевом процессе и в раннем постнатальном онтогенезе Лакто Флор способствует восстановлению иммунологических, гематологических нарушений и повышению процессов фагоцитоза. При язве желудка препарат устраняет отставание в росте крыс, повышает содержание сиаловых кислот, гексоз и гексозаминов в слизистой желудка.

3. Установлено, что у больных раком желудка под воздействием препарата Лакто Флор восстанавливаются показатели клеточного и гуморального иммунитета.

4. Выявлено, что при непосредственном эндоскопическом воздействии Лакто Флора на зону поражения желудка у больных людей с язвенной болезнью желудка и язвенной болезнью двенадцатиперстной кишки происходит заметное улучшение клинической симптоматики, уменьшается зона поражения и существенно сокращаются сроки лечения.

Практическая значимость.

Результаты экспериментальных и клинических исследований показывают перспективность применения препарата Лакто Флор не только в качестве адаптогенного средства при лучевой и химиотерапии онкологических больных, но и при терапии вторичных иммунодефицитных состояний различной этиологии, в частности при поражении печени, анемиях, ожоговых травмах.

Учитывая способность Лакто Флора оказывать полисистемное (иммунная и кроветворная система, неспецифические факторы защиты) воздействие на организм (после соответствующих доклинических испытаний и решения Фармакологического комитета), его можно рекомендовать для назначения в качестве дополнительного средства в комплексе специфических лечебных мероприятий при той или иной форме вторичного иммунодефицитного состояния.

Реализация результатов исследования.

Результаты, полученные в настоящем исследовании, внедрены в работу Научного центра онкологии и радиологии МЗ РУз, стационара центральной поликлиники строителей. Материалы, опубликованные в методических рекомендациях, внедрены в деятельность Городского онкологического диспансера и в научную деятельность клинического отделения Института иммунологии АН РУз.

Апробация работы.

Материалы диссертационной работы были представлены и обсуждены на конференции « Актуальные вопросы аллергологии и иммунологии» (Ташкент, 2003), на II Всемирном конгрессе по иммунопатологии и аллергии (Москва, 2004), V съезде педиатров Узбекистана (Ташкент, 2004), на научно-практической конференции, посвященной 70-летию НИИ санитарии, гигиены и проф. заболеваний « Актуальные проблемы гигиены, санитарии и эколо-гии» (Ташкент, 2004), научной конференции «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге» (СПб, 2005), на межлабораторной апробации в Институте иммунологии (2006), научном семинаре в Ташкентском педиатрическом медицинском институте (2006), межвузовском семинаре при Институте иммунологии АН РУз (2006).

Публикации. По теме работы опубликованы 1 монография, 13 журнальных статей, 7 тезисов, 3 методические рекомендации и один токсикологический паспорт на препарат.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 267 страницах компьютерного текста, cодержит 37 таблиц, 22 рисунка и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, 6 глав собственных исследований, заключения, выводов, практических рекомендаций и списка литературы, включающего 345 источников: 156 на русском языке и 189 - на других языках.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ ДИССЕРТАЦИИ

В первой главе «Обзор литературы» приводится описание иммунной системы и иммунодефицитных состояний, способов коррекции иммунодефицитов, классификации иммуномодулирующих средств и принципов их применения.

Во второй главе «Материал и методы исследования» приводится описание объектов и методик, использованных в работе.

Исследования проведены на 20 донорах, 30 больных раком желудка, 60 больных язвой желудка и 12 перстной кишки, из которых 30 больных получали общепринятое лечение и 30 на фоне общепринятого лечения дополнительно получали препарат Лакто Флор.

Нами использованы следующие методы исследования: выделение лимфоцитов из периферической крови (Boyum, 1968) на градиенте фиколл-веро-графин, определение субпопуляционного состава лимфоцитов с помощью моноклональных антител CD3, CD4, CD8, CD16, CD19 (производство ООО Сорбент, РФ, Москва), определение концентрации иммуноглобулинов A, M, G по Манчини стандартным методом радиальной иммунодиффузии.

Мононуклеарные клетки из периферической крови получали путем выделения с помощью фиколл-верографина плотностью 1,077 г/мл по методу Boyum (1968).

Число клеток подсчитывали в камере Горяева общепринятым методом и доводили концентрацию лимфоцитов до 2·10⁶ в 1 мл. Жизнеспособность лимфоцитов определяли в тесте с трипановой синью (0,1%).

Оценку состояния иммунной системы проводили по экспрессии CD - дифференцировочных антигенов. Определяли следующие маркеры иммунокомпетентных клеток: CD3 - Т-лимфоциты, CD4 - Т-хелперы/индукторы, CD8 - Т-супрессоры/цитоксические лимфоциты, CD19 - В-лимфоциты, CD16 - естественные киллеры. Экспрессию рецепторов CD проводили в реакции розеткообразования с помощью моноклональных антител производства ООО Сорбент, Россия (Москва).

Стабилизацию эритроцитов человека I (0) группы Rh- проводили по методу Вайнбах (1980).

Функциональное состояние В- системы иммунитета оценивали путем определения сывороточных иммуноглобулинов основных классов IgG, IgA, IgM с помощью набора моноспесифических сывороток против IgG, IgA, IgM производства НИИ ЭМИЗ им. Гамалеи (РФ; Москва) по методу Manchini (1969).

В экспериментах использовали 224 белых беспородных мышей 2-3 месячного возраста массой 20-22 г, 15 белых беспородных мышей одномесячного возраста, 64 мышей линии BALB/c, 24 мышей линии СВА, 147 белых беспородных крыс массой 120-220 г. Животные содержались на стандартном рационе вивария.

Количество АОК в селезенке определяли на 5-е сутки после иммунизации животных методом локального гемолиза в агарозе по N. Jerne и A. Nordin (1963).

Для индукции феномена антигенной конкуренции мышам предварительно в качестве доминантного антигена вводили эритроциты лошади (ЭЛ) в дозе 1·10⁹ и через 4-е дня вводили ЭБ в дозе 2·10⁸ (иммунизирующий антиген). Спустя 4 дня определяли число АОК в селезенке (Петров Р. В. с соавт., 1983).

Определение иммунных розеткообразующих клеток (иРОК) в селезенке проводили по M. Jondal et al. (1972).

Изучение фагоцитарной активности лейкоцитов проводили с помощью частиц латекса (диаметр 1-1,5 мкм) Определяли 3 показателя фагоцитоза: 1. Фагоцитарный индекс (ФИ) - процент фагоцитрующий лейкоцитов; 2. Фагоцитарное число (ФЧ) - среднее число поглощенных частиц латекса на один лейкоцит; 3. Фагоцитарная емкость (ФЕ) - количество частиц латекса, поглощенных лейкоцитами, содержащимися в 1 мкл крови.

Эндогенные колонии определяли следующим образом. Мышей облучали в сублетальной (6,5 Гр) дозе и на 9 сутки подсчитывали число колоний на поверхности селезенки (Till, McCulloch, 1963). В условиях данной модели колонии в селезенке формируются из селезеночных стволовых клеток, сохранившихся после сублетального облучения.

Для определения экзогенных колоний мышей облучали в летальной (8,5 Гр) дозе и трансплантировали сингенные клетки костного мозга в дозе 5·10⁴. Затем на 8 сутки после облучения мышей забивали, извлекали селезенки и подсчитывали число колоний на их поверхности (Till, McCulloch, 1961).

Для проведения гистологических исследований готовили следующие растворы и краски: 1) фиксатор Буэна; 2) квасцовый гематоксилин по Каррачи; 3) эозин.

В селезенке при микроскопии выявляли следующие типы колоний:

а) эритроидные колонии - скопления эритробластов; б) гранулоцитарные колонии - скопление юных, палочкоядерных, сегментоядерных лейкоцитов; в) мегакариоцитарные колонии - скопление четырех и более мегакариоцитов.

Язву желудка вызывали двумя способами. В первой модели использовали 34 белых беспородных крыс массой 150-180 г. Язву желудка у них вызывали с помощью аппликации на слизистую желудка уксусной кислоты по методу S. Okabe (1971). Через 5 дней крыс однократно внутривенно иммунизировали ЭБ в дозе 2·10⁸ и спустя еще 5 дней проводили иммунологические и гематологические исследования.

Во второй модели хроническую язву желудка у крыс создавали способом, предложенным В. А. Вертелькиным и соавт. в модификации Л. А. Лосева с соавт. с помощью металлической пластинки, выдержанной в жидком азоте.

У крыс определяли следующие показатели: а) определение прироста массы тела за 1 сутки. Прирост массы тела выражали в г/день; б) определение содержание углеводных компонентов слизистой оболочки желудка.

Содержание сиаловых кислот в суспензии слизистой желудка определяли по методу Л. И. Линевик. Расчеты производили по калибровочной кривой, и результаты выражали в мкг на относительную массу желудка (ОМЖ). Содержания гексоз и гексозаминов в слизистой желудка определяли по методу А. Готтшалка.

Острый токсический гепатит (ОТГ) у мышей вызывали с помощью гепатотропного яда - четыреххлористого углерода (CCL₄), который вводили ежедневно подкожно в течение 3-х дней в виде 20 % масляного раствора по 0,2 мл (Петров Р.В. с соавт., 1984).

Гемолитическую анемию вызывали с помощью солянокислого фенилгидразина (Петров Р. В. с соавт., 1984). Препарат вводили внутрибрюшинно в дозе 30 мг/кг ежедневно в течение 3-х дней.

Ожоговую болезнь вызывали с помощью термического воздействия (Петров Р. В. с соавт., 1984).

Гормониндуцированный иммунодефицит вызывали с помощью гидрокортизона, который вводили в течение 3-х суток в дозе 125 мг/кг.

Для моделирования опухолевого роста мышам линии BALB/с подкожно в область бедра вводили суспензию опухолевых клеток штамма «Акатон» (0,3-0,5 мл). Через 10 дней их иммунизировали ЭБ и еще через 4-дня проводили иммунологические и гематологические исследования.

В серии опытов использовали белых беспородных мышей-сосунков, которым на 7-е сутки после рождения подкожно вводили препарат Лакто Флор в дозе 1,5 мг/кг в объеме 0,1 мл. Процедуру повторяли через 1 неделю. Контрольная группа не получала препарат. В возрасте 1 месяц мышей иммунизировали ЭБ в дозе 10⁸ и спустя 5 суток определяли число АОК в селезенке.

Препарат Лакто Флор получают из молозива коров на ранних сроках лактации. Содержит белки с мол. массой от 0,5 до 140 кД. В составе препарата имеется альфа лактальбумин, альфа-, бета- и гаммаглобулины. Препарат рекомендован к использованию в медицинской практике в качестве лекарственного средства для уменьшения побочного действия и усиления эффективности лучевой и химиотерапии злокачественных новообразований.

Экстракт почки кур (ЭПК) получали по методу А. А. Батырбекова с соавт. (патент №164 РУз, 1993).

Тактивин является коммерческим иммуномодулирующим препаратом, который получают из тимуса крупнорогатого скота (Россия). В наших исследованиях использован в качестве препарата сравнения.

Цифровые данные подвергнуты статистической обработке с вычислением средней арифметической (M), ее ошибки (m) и определением достоверности полученных результатов с вероятностью 95%.

Результаты и их обсуждение.

Иммунная система представляет одну из важнейших защитных систем организма в онто- и филогенезе (Голик В. П., 1995; Баскаков А. В., 2002). Подробные сведения о строении иммунной системы приведены в работах А. А. Ярилина (1999), А. А. Тотоляна с соавт. (2000), И. С. Фрейдлина с соавт. (1998, 1999, 2000, 2001), П. Г. Назарова (2001), Е. И. Змушко с соавт. (2001). Функциональное состояние разных типов иммуноцитов, дендритных клеток представлены в работах (Vidricaire G. et al., 2005; Seth N. et al., 2005; Mann J. et al., 2005).

Нарушение работы иммунной системы при различных патологических состояниях диктует необходимость проведения иммунокорригирующих мероприятий. В наших исследованиях изучались иммунотропные свойства природного препарата Лакто Флор, выделенного из молозива коров, и в некоторых экспериментах экстракта, полученного из почек кур.

В третьей главе нами проведены исследования по изучению эффекта биопрепарата на индуктивную стадию иммунного ответа. Известно, что антигены бывают тимусзависимые и тимуснезависимые (Butler J. E. et al., 2005). В наших исследованиях использовали тимусзависимый антиген - эритроциты барана (ЭБ). Установлено, что при иммунизации ЭБ и однократном введении Лакто Флора в дозах 1,5 и 15,0 мг/кг в 1,5 и 2,9 раза соответственно повышается число АОК в селезенках. У мышей, получавших Т-активин, иммунный ответ повышается в 1,9 раза. Полученные данные свидетельствуют, что однократное введение Лакто Флора в индуктивную фазу антителогенеза существенно повышает продукцию АОК в селезенках. Причем по иммуностимулирующей активности Лакто Флор превосходит Т-активин.

По данным Р. В. Петрова и А. А. Михайловой (1973), взаимодействие клеток может происходить на уровне «зрелых» антителопродуцентов, т.е. на пике иммунного ответа. По их мнению, в органах иммунной системы после введения антигена не все потенциальные АОК вырабатывают антитела к различным антигенам. Часть из них заблокирована и не способна продуцировать антитела. Предполагается, что блокирование АОК происходит в результате воздействия на них Т-супрессоров или медиаторных факторов с супрессивной активностью. Если удается снять блок с этих «молчащих» АОК, то они активно начинают синтез антител.

Исходя из вышесказанного, мы провели исследования, в которых Лакто Флор вводили на 4-е сутки после иммунизации ЭБ, т.е. за сутки до постановки опыта. Предполагалось ответить на вопрос: способен ли биопрепарат на пике иммунного ответа отменять блокирование части АОК и запускать в них процессы синтеза иммуноглобулинов против ЭБ. Если за сутки до забоя ввести Лакто Флор в дозе 1,5 мг/кг, то иммунный ответ повышается в 2,1 раза. Следовательно, биопрепарат снимает блок с «молчащей» популяции АОК, вовлекая их в процесс антителообразования. Другого объяснения нет, поскольку в течение суток, после введения биопрепарата, исключается возможность пролиферации и образования новых антителосекретирующих клеток. Прирост происходит за счет включения в процессы антителообразования «резервных» АОК.

Обнаружена прямая зависимость между дозой биопрепарата и его иммуностимулирующей активностью. Лакто Флор в дозе 15 мг/кг в 3,9 раза повышает число АОК в селезенках. Инъекция Т-активина стимулирует антителообразование в 2 раза.

Сравнение результатов, полученных в продуктивной стадии иммуногенеза, показывает, что при этом прирост АОК более выражен, чем при введении биопрепаратов в индуктивную фазу антителообразования. Установлено, что Лакто Флор превосходит по иммуностимулирующей активности Т-активин, как в индуктивную, так и в продуктивную фазу антителогенеза. Это говорит о том, что при введении препаратов в начальных стадиях антителогенеза не исключается возможность формирования популяции «молчащих» АОК, которые накапливаются в лимфоидных органах. Инъекция Лакто Флора на пике иммунного ответа вызывает разблокирование супрессированных АОК и они включаются в антителообразование. Таким образом, Лакто Флор является, в известном смысле, конкурентом супрессорных факторов, субстратом для которых являются антителосекретирующие клетки.

Следующим этапом наших исследований было изучение эффекта Лакто Флора на иммунный статус у другого вида лабораторных животных - крыс. В индуктивную фазу иммунного ответа Лакто Флор в дозах 1,5 и 15,0 мг/кг достоверно в 2 и 4 раза, а Т-активин в 1,9 раза стимулировали процессы антителообразования; в продуктивную фазу Лакто Флор в этих же дозах повышал иммунный ответ в 2,2 и 3,5 раза соответственно, а Т-активин в 2,1 раза. Отсюда следует, что иммуностимулирующий эффект Лакто Флора в большей степени проявляется у крыс, чем у мышей.

У крыс ответная реакция на биопрепараты не зависит от момента их введения в организм. У мышей стимулирующий эффект биопрепаратов в большей степени проявлется в продуктивной стадии иммуногенеза.

Далее были проведены исследования по изучению эффекта Лакто Флора на феномен конкуренции антигенов в иммунном ответе. Для этого мышам сначала вводили эритроциты лошади (ЭЛ) (доминантный антиген) и через 4-е дня - ЭБ в дозе 2·10⁸ (иммунизирующий антиген). Спустя 4-е дня определяли число АОК к ЭБ.

Лакто Флор в дозе 15 мг/кг и Т-активин в дозе 0,5 мг/кг вводили однократно внутривенно, либо с ЭЛ (в 1-й день), либо с ЭБ (4-й день). В группе животных, которым до иммунизации ЭБ ввели другой антиген (ЭЛ), антителообразование снизилось в 4,4 раза. Таким образом, доминантный антиген (ЭЛ) препятствовал формированию полноценного иммунного ответа к ЭБ.

Введение Лакто Флора вместе с ЭЛ в 3,5 раза повышает иммунный ответ по сравнению с супрессированными мышами. Данный показатель достоверно не отличается от контрольных значений. Иначе говоря, Лакто Флор способствует полной отмене феномена конкуренции между двумя антигенами.

Аналогичное свойство обнаружено у Т-активина. Под его действием число АОК увеличилось в 2,5 раза. Однако этот уровень достоверно был ниже контроля (P<0,01).

Показано, что Лакто Флор, введенный одновременно с иммунизирующим антигеном (ЭБ), способствовал 4-х кратному повышению иммунного ответа. Т-активин повышал число АОК в 3 раза. Полученные результаты свидетельствуют, что оба биопрепарата обладают свойством отменять феномен конкуренции антигенов, однако по активности Лакто Флор превосходит Тактивин. При этом более выраженный эффект у препаратов проявляется при введении с иммунизирующим антигеном.

На основании полученных данных можно сделать вывод, что Лакто Флор способен отменять феномен конкуренции при последовательном введении двух антигенов. Данное свойство биопрепарата можно использовать при иммунизации несколькими антигенами, например, поливакцинами для формирования выраженного иммунитета ко всем компонентам вакцинного препарата.

Следующим этапом наших исследований было изучение эффекта Лакто Флора на фагоцитарную активность лейкоцитов периферической крови интактных мышей.

Установлено, что Лакто Флор обладает свойством стимулировать процессы фагоцитоза у интактных мышей. При этом в большей степени повышается ФЕ и ФИ, а ФЕ не изменяется. Повышение числа фагоцитирующих клеток, очевидно, связано с их миграцией из внутренних органов в кровяное русло. Дополнительный прирост фагоцитирующих клеток, возможно, происходит за счет стимулирования фагоцитирующих свойств лейкоцитов или их созревания. Известно, например, что под действием компонентов бактериальной стенки происходит созревание макрофагов (Ильинская А. Н. с соавт., 2005).

Представляло интерес изучить какой эффект могут оказывать биопрепараты на популяцию АОК в системе in vitro. Культивирование спленоцитов с Лакто Флором в дозах 1,5 и 15 мкг/мл повышало число АОК в 1,2 и 1,6 раза, соответственно, а с Т-активином - в 1,3 раза (P<0,01). Таким образом, Лакто Флор, и в меньшей степени Т-активин обладают свойством стимулировать антителообразование в системе in vitro у интактных мышей. При этом стимулирующий эффект биопрепарата зависит от его дозы.

Далее был изучен эффект Лакто Флора на пролиферативные свойства кроветворных стволовых клеток на двух экспериментальных моделях. В первой модели мышей линии BALB/c облучали в дозе 6,5 Гр и вводили им препарат Лакто Флор в дозах 1,5 и 15,0 мг/кг, а также экстракт, полученный из почек кур (ЭПК) в дозе 1,0 мг/кг. Во второй модели мышей линии CBA облучали в летальной дозе 8,5 Гр и вводили им сингенные клетки костного мозга и препараты в указанных дозах.

Введение сублетально облученным мышам Лакто Флора в дозах 15,0 и 1,5 мг/кг в 1,8 и 2,5 раза соответственно повышает число колоний на поверхности селезенок. Аналогичная активность в отношении КОЕ обнаружена у ЭПК.

Во второй модели установлено, что введение вместе с костномозговыми клетками Лакто Флора в дозах 15,0 и 1,5 мг/кг в 1,6 и 2,6 раза соответственно стимулирует пролиферативные свойства кроветворных стволовых клеток. В группе мышей, получавших ЭПК в дозе 1,0 мг/кг, образуется в 2,4 раза больше макроколоний, чем в контроле. Следовательно, Лакто Флор обладает способностью стимулировать пролиферативные свойства эндогенных и экзогенных кроветворных стволовых клеток.

Следующим этапом было изучение влияния биопрепаратов на пролиферацию и дифференцировку кроветворных стволовых клеток на вышеописанных двух экспериментальных моделях. При введении Лакто Флора в дозе 15,0 мг/кг сублетально облученным мышам BALB/c общее число микроколоний возрастает в 1,4 раза. При этом число эритроидных колоний повышается в 1,4 раза (Р0,05), гранулоцитарных - 1,3 раза (Р0,05) и мегакариоцитарных - 1,7 раза (Р0,05). Более выраженная стимуляция пролиферации стволовых клеток обнаружена при введении Лакто Флора в дозе 1,5 мг/кг. Общее число микроколоний увеличивается в 2,1 раза. Число эритроидных, гранулоцитарных и мегакариоцитарных колоний возрастает в 2, 1,9 и 4 раза соответственно. При введении ЭПК число эритроидных, гранулоцитарных и мегакариоцитарных колоний возросло в 2,1, 1,8 и 4 раза, соответственно.

Таким образом, изученные вещества обладают свойством влиять на пролиферацию и дифференцировку кроветворных стволовых клеток. При этом Лакто Флор и ЭПК обладают способностью одновременно стимулировать дифференцировку кроветворных стволовых клеток в эритроидном, гранулоцитарном и мегакариоцитарном направлениях, причем в последнем случае происходит более сильная стимуляция.

Во второй модели экзогенного клонирования стволовых клеток установлено, что у мышей, получавших Лакто Флор в дозе 15,0 мг/кг, общее число микроколоний возрастает в 1,4 раза. При этом число эритроидных колоний достоверно возрастает в 1,4 раза, а гранулоцитарных и мегакариоцитарных - в 1,5 раза (Р0,05). Инъекция Лакто Флора в дозе 1,5 мг/кг оказывает более выраженный стимулирующий эффект на экзогенное колониеобразование. Общее число микроколоний повышается в 2,1 раза, а количество эритроидных и гранулоцитарных колоний достоверно увеличивается в 1,9 и 2,3 раза соответственно. Число мегакариоцитарных колоний недостоверно повышается в 3,5 раза. Схожие результаты получены при введении летально облученным мышам ЭПК. Его активность соответствует таковой Лакто Флора при дозе 1,5 мг/кг.

Таким образом, на основании полученных данных можно сделать вывод, что Лакто Флор и ЭПК обладают способностью влиять на пролиферацию и дифференцировку кроветворных стволовых клеток. Мишенями для этих веществ являются как селезеночные (эндогенные), так и костномозговые (экзогенные) кроветворные стволовые клетки.

В четвертой главе приводятся данные исследования по изучению биопрепарата на модели язвы желудка. У крыс с ЯЖ формируется выраженный вторичный иммунодефицит: число АОК в селезенках в 4,1 раза ниже, чем в контрольной группе. У животных, получавших Лакто Флор в дозах 1,5 и 15 мг/кг, количество АОК повысилось в 1,7 и 3,6 раза соответственно. У животных с ЯЖ, получивших Т-активин, иммунный ответ к ЭБ усиливался в 1,9 раза.

Нами было изучено общее число клеток в центральных и периферических органах иммунитета у крыс с ЯЖ, получавших биопрепараты.

У крыс с ЯЖ число тимоцитов снижается в 1,9 раза, а под воздействием Лакто Флора в дозе 1,5 мг/кг их количество несколько (в 1,2 раза) повышается (Р<0,001). При введении Лакто Флора в дозе 15,0 мг/кг число тимоцитов повышается в 1,6 раза, а при инъекции Т-активина - в 1,3 раза.

Полученные результаты свидетельствуют о способности препарата Лакто Флор в определенной степени восстанавливать общее количество клеток тимуса у крыс с ЯЖ.

Установлено, что у крыс с ЯЖ количество КЛУ снижается в 1,7 раза. У животных с ЯЖ, получавших Лакто Флор в дозе 1,5 мг/кг, число КЛУ несколько повышается (Р<0,001), а при дозе 15 мг/кг возрастает в 1,5 раза и достоверно не отличается от контроля. Происходит полная нормализация клеточного состава в лимфатических узлах. Под воздействием Т-активина число КЛУ возрастает в 1,3 раза. Полученные данные говорят о высокой чувствительности КЛУ к стимулирующему действию биопрепаратов.

У крыс с ЯЖ число клеток в КМ снижается в 1,5 раза. Лакто Флор в дозе 1,5 мг/кг не оказывает влияния на число костномозговых клеток, а в дозе 15 мг/кг - в 1,4 раза повышает их число. Данный показатель достоверно не отличается от нормативных значений. Схожие результаты наблюдаются при назначении крысам с ЯЖ Т-активина.

На основании полученных данных можно сделать заключение, что Лакто Флор способствует восстановлению общего количества клеток в централь-ных и периферических органах иммунитета у крыс с ЯЖ, по активности он превосходит Т-активин.

Далее были проведены исследования по изучению эффекта биопрепаратов на показатели периферической крови крыс с ЯЖ.

Установлено, что назначение Лакто Флора крысам с ЯЖ способствует нормализации уровня эритроцитов и лейкоцитов в периферической крови животных, очевидно, за счет их перераспределения в организме.

Следующим этапом исследований было изучение влияния Лакто Флора на розеткообразующие свойства лимфоцитов иммунизированных ЭБ крыс с ЯЖ. Число иРОК у них снижалось в 2,2 раза. Под воздействием Лакто Флора в дозах 1,5 и 15,0 мг/кг их число возрастало в 1,3 и 1,9 раза соответственно, а при инъекции Т-активина - в 1,4 раза. Полученные данные свидетельствуют о способности Лакто Флора стимулировать процессы розеткообразования, вероятно, за счет повышения экспрессии рецепторов на поверхности иммуноцитов, реагирующих с ЭБ.

Важным показателем, отражающим состояние факторов неспецифической защиты организма, является фагоцитарная способность лейкоцитов крови. Установлено, что у крыс с ЯЖ ФИ снижается в 1,5 раза. При введении Лакто Флора в дозах 1,5 и 15 мг/кг ФИ достоверно увеличивается в 1,2 и 1,4 раза соответственно, а при введении Т-активина - в 1,3 раза.

У крыс с ЯЖ ФЧ снижается в 1,4 раза. Т-активин и Лакто Флор в дозе 15 мг/кг в 1,4 раза повышают ФЧ. При ЯЖ ФЁ угнетается в 3,8 раза. Лакто Флор в дозе 1,5 мг/кг повышает этот показатель в 1,5 раза, а при дозе 15 мг/кг - в 1,3 раза. Т-активин стимулирует показатель ФЁ в 2,2 раза.

Таким образом, можно сделать заключение, что Лакто Флор и в меньшей степени Т-активин обладают свойством стимулировать угнетенные процессы фагоцитоза у крыс с ЯЖ.

Следующим этапом исследований было изучение влияния биопрепаратов на антителообразование в системе in vitro у крыс с ЯЖ. Инкубирование спленоцитов крыс с ЯЖ с Лакто Флором в дозе 1,5 мкг/мл незначительно увеличивает число АОК, а при дозе 15 мкг/мл их количество повышается в 1,9 раза. Под воздействием Т-активина число АОК увеличилось в 1,4 раза. На основании полученных данных можно сделать заключение, что Лакто Флор обладает свойством стимулировать антителообразование в системе in vitro.

Комплексные исследования, проведенные на крысах с ЯЖ, свидетельствуют о способности Лакто Флора корригировать нарушения в иммунной и кроветворной системах, стимулировать фагоцитарную активность лейкоцитов. Эффект биопрепарата проявляется как в системе in vivo, так и в системе in vitro при непосредственном контакте с иммуноцитами.

Полученные данные свидетельствуют о комплексном воздействии Лакто Флора на иммуно- и гемопоэз, а также процессы фагоцитоза при ЯЖ.

Проведенные нами исследования по изучению изменения массы тела экспериментальных животных показали, что у лапаротомированных крыс на 7 сутки экспериментальной ЯБЖ наблюдается прирост массы тела, равный 1,29±0,09 г/сутки. На 14 и 21 сутки прирост массы составляет 0,93±0,04 и 0,85±0,04 г/сутки соответственно.

При ЯБЖ наблюдали значительное снижение массы тела животных. Так, на 7 и 14 сутки значения прироста массы животных были отрицательными (т.е. животные «худели» по сравнению с исходным состоянием) и составляли - 1,21±0,02 и 0,93±0,03 г/сутки. Только на 21 сутки наблюдали положительный прирост массы, который составлял 0,23±0,06 г/сутки и был ниже контроля на 73%.

При лечении препаратом сравнения (Т-активином) на 7 и 14 сутки, аналогично группе без лечения, наблюдали значительное «похудание» животных, хотя степень похудания оказалась менее выраженной, чем у крыс без лечения. Так, на 7 и 14 сутки прирост массы тела был отрицательным и равнялся 0,84±0,06 и 0,04±0,05 г/сутки соответственно. На 21 сутки наблюдали значительное повышение прироста массы тела. Он равнялся 0,45±0,05 г/сутки и превышал это значение у крыс без лечения на 95,7%, хотя по сравнению с контрольной величиной оставался ниже на 47,1%.

При лечении Лакто Флором в дозе 1,5 мг/кг массы тела на 7 сутки наблюдали менее значительнее «похудание» не только по сравнению с группой без лечения, но и с группой, леченной Т-активином. Однако в отличие от Т-активина это значение «похудания» у крыс, леченных Лакто Флором в дозе 1,5 мг/кг массы тела, сохранилось и на 14 сутки. Только на 21 сутки прирост массы тела оказался положительным, равнялся 0,39±0,05 г/сутки и был выше на 69,6% по сравнению с группой без лечения, статистически значимо не отличаясь от группы, леченной Т-активином.

При лечении Лакто Флором в дозе 15 мг/кг массы тела только на 7 сутки ЯБЖ наблюдали отрицательное значение прироста массы тела. Он равнялся всего 0,11±0,02 г/сутки. На 14 и 21 сутки патологии в этой группе в отличие от остальных экспериментальных групп наблюдали положительный прирост массы тела, который составил 0,17±0,02 и 0,72±0,03 г/сутки соответственно. При этом на 14 сутки он все еще был ниже контроля на 81,7%, а на 21 сутки - всего на 15,3%.

Таким образом, полученные результаты свидетельствуют о положительном влиянии биопрепарата на прирост массы тела. Наибольшую эффективность в устранении отставания в росте животных с ЯБЖ можно добиться при применении дозы Лакто Флора в 15 мг/кг массы тела.

Изучение размеров язвы у крыс с экспериментальной ЯБЖ показало, что лечение Т-активином через 7 суток не приводило к статистически значимому уменьшению размеров язвы. Однако при лечении Лакто Флором как в дозе 1,5 мг/кг, так и 15 мг/кг массы тела наблюдали снижение размеров язвенного поражения на 32,1%. На 14 сутки ЯБЖ наблюдалось уменьшение размеров язвы на 18,7%, также как и при лечении Т-активином. При лечении Лакто Флором в дозе 1,5 мг/кг массы тела размеры язвенной зоны были меньше на 39,6%, а при дозе 15 мг/кг - на 35,4%. И, наконец, на 21 сутки ЯБЖ размеры язвенного поражения желудка крыс, леченных Т-активином, не отличались от таковых группы без лечения, тогда как у группы, леченной Лакто Флором, они были ниже на 44,4% по сравнению с нелеченной группой.

Таким образом, на основании полученных результатов можно заключить, что препарат Лакто Флор в отличие от Т-активина значительно ограничивает размеры язвенного поражения желудка как при дозе 1,5, так и 15 мг/кг массы тела.

Проведенные нами исследования показали, что уже на 7 сутки ЯБЖ у крыс наблюдается резкое снижение содержания сиаловых кислот в слизистой желудка. Так, оно оказалось ниже нормального и контрольного показателей на 70,2 и 70,4% соответственно. На 14 и 21 сутки течения ЯБЖ содержание сиаловых кислот было снижено соответственно на 51,8 и 38,5% по сравнению с нормальными и на 47,3 и 43,8% по сравнению с контрольными значениями.

Экспериментальное лечение Т-активином в течение 7 суток приводило почти к 2 кратному увеличению содержания сиаловых кислот в слизистой желудка. На 14 сутки оно было увеличено на 58,1% по сравнению с группой без лечения, практически не отличаясь при этом от контрольных величин. На 21 сутки лечения Т-активином содержание сиаловых кислот в слизистой желудка оставалось статистически значимо повышенным по сравнению с группой без лечения на 19,4%. При этом оно все же было статистически значимо ниже контрольного и интактного значений на 32,9 и 26,6% соответственно.

Экспериментальная терапия Лакто Флором в дозе 1,5 мг/кг массы тела на 7 сутки приводила к повышению содержания сиаловых кислот в слизистой желудка на 103,5% по сравнению с нелеченной группой. При этом оно оставалось ниже значений контроля и нормы на 39,7 и 39,3% соответственно. Его повышение на 24,3% по сравнению с группой, леченной Т-активином, оказалось статистически незначимым. На 14 день лечения повышение содержания сиаловых кислот по сравнению с нелеченной группой составляло 65,9%. При этом оно оказалось по сравнению с нормой статистически значимо ниже на 20,2% и практически не отличалось от контрольной группы и группы, леченной Т-активином. И, наконец, на 21 сутки лечения Лакто Флором в дозе 1,5 мг/кг массы тела содержание сиаловых кислот было выше на 54,8% не только по сравнению с группой без лечения, но и на 29,6% выше по сравнению с группой, леченной Т-активином. Значения содержания сиаловых кислот на данный срок исследования практически не отличались от контроля и нормы.

При лечении животных в течение 7 суток Лакто Флором в дозе 15 мг/кг массы тела наблюдали статистически значимое повышение содержания сиаловых кислот на 92,3% по сравнению с нелеченной группой. При этом оно оказалось ниже контроля и нормы на 40,3 и 42,6% соответственно и статистически значимо не отличалось от таковых значений в группах, леченных Т-активином и Лакто Флором в дозе 1,5 мг/кг массы тела. На 14 сутки лечения повышение содержания сиаловых кислот по сравнению с нелеченной группой составило 73,3%. В данный срок исследования оно было ниже только по сравнению с нормой на 16,7% и не отличалось от значений контрольной группы и групп, леченных Т-активином и Лакто Флором в дозе 1,5 мг/кг массы тела. На 21 сутки лечения содержание сиаловых кислот оказалось выше контрольных значений на 39,9% и значений, наблюдаемых в группе лечения Т-активином на 17,2%. При этом оно все же оставалось ниже контрольного и интактного значений на 21,3 и 14,0% соответственно.

Таким образом, результаты исследований свидетельствуют об эффективности Лакто Флора в повышении содержания сиаловых кислот в слизистой желудка крыс с ЯБЖ. Причем его терапевтический эффект даже несколько превышает эффект такого известного препарата, как Т-активин.

Изучение содержания гексоз в слизистой желудка показало, что оно также, как и сиаловые кислоты, снижается по сравнению с нормой и контролем во все сроки ЯБЖ. Так, на 7 сутки оно оказалось ниже нормального и контрольного показателей на 57,3 и 47,7% соответственно. На 14 и 21 сутки течения ЯБЖ содержание гексоз было сниженным соответственно на 30,3 и 26,1% по сравнению с нормальными и на 26,6 и 27,5% по сравнению с контрольными значениями.

Экспериментальное лечение Т-активином в течение 7 суток приводило к увеличению содержания гексоз в слизистой желудка на 42,3%. Несмотря на это, оно было все же ниже контроля и нормы на 25,5 и 39,2% соответственно. На 14 сутки оно было увеличено на 26,5% по сравнению с группой без лечения, практически не отличаясь при этом от контрольных и нормальных величин. На 21 сутки лечения Т-активином содержание гексоз в слизистой желудка оказалось статистически значимо сниженным по сравнению с контрольными и интактными значениями на 18,1 и 16,6% соответственно и практически не отличалось от таковых значений группы без лечения (повышение на 13% по сравнению с группой без лечения оказалось статистически незначимым).

Экспериментальная терапия Лакто Флором в дозе 1,5 мг/кг массы тела на 7 сутки приводила к повышению содержания гексоз в слизистой желудка на 74,9% по сравнению с нелеченной группой. Повышение его содержания на 22,9% по сравнению с таковыми значениями группы, леченной Т-активином, оказалось статистически незначимым. Содержание гексоз в данный срок исследований, оказалось ниже значений нормы на 25,3% и статистически значимо не отличалось от контрольных значений. На 14 день лечения повышение содержания гексоз по сравнению с нелеченной группой составило 20,6%. При этом оно оказалось статистически значимо ниже по сравнению с нормой на 15,9% и практически не отличалось от контрольной группы и группы, леченной Т-активином. И, наконец, на 21 сутки лечения Лакто Флором в дозе 1,5 мг/кг массы тела содержание гексоз оказалось выше, чем у группы без лечения и группы, леченной Т-активином, на 40,4 и 24,3% соответственно. При этом значение содержания гексоз в данный срок исследования поднялось до уровня контроля и нормы.

При лечении животных в течение 7 суток Лакто Флором в дозе 15 мг/кг массы тела наблюдалось статистически значимое повышение содержания гексоз на 46,5% по сравнению с нелеченной группой. При этом оно оказалось ниже контроля и нормы на 23,3 и 37,5% соответственно и статистически не отличалось от значений групп, леченных Т-активином и Лакто Флором в дозе 1,5 мг/кг массы тела. На 14 сутки лечения Лакто Флором в дозе 15 мг/кг массы тела содержание гексоз оказалось на уровне нелеченной группы. При этом оно было ниже значений нормы, контроля и групп, леченных Т-активином и Лакто Флором в дозе 1,5 мг/кг массы тела на 29,9, 26,2, 20,5 и 16,6% соответственно. На 21 сутки лечения содержание гексоз оказалось на уровне значений группы без лечения и значений, наблюдаемых в группе лечения Т-активином. При этом оно оставалось ниже значений интактной, контрольной и группы лечения Лакто Флором в дозе 1,5 мг/кг массы тела на 21,1, 22,6 и 24,0% соответственно.

Таким образом, результаты исследований свидетельствуют об эффективности Лакто Флора в повышении содержания гексоз в слизистой желудка. Коррегирующий эффект Лакто Флора в данном случае более выражен в малых дозах и превышает эффект препарата сравнения (Т-активина).

Изучение содержания гексозаминов в слизистой желудка показало, что оно также как сиаловые кислоты и гексозы, снижается по сравнению с нормой и контролем во все сроки ЯБЖ. Так, на 7 сутки оно оказалось ниже нормальных и контрольных показателей на 51,6 и 47,1% соответственно. На 14 и 21 сутки течения ЯБЖ содержание гексозаминов было сниженным соответственно на 29,7 и 19,9% по сравнению с нормальными и на 28,8 и 30,3% по сравнению с контрольными значениями.

Экспериментальное лечение Т-активином ни в одном случае не приводило к статистически значимому изменению содержания гексозаминов в слизистой желудка. На 7, 14 и 21 сутки лечения оно оставалось ниже нормы на 40,1, 17,1 и 17,1%, а по сравнению с контролем на 34,5, 16,0 и 27,9% соответственно.

Экспериментальная терапия Лакто Флором в дозе 1,5 мг/кг массы тела на 7 сутки приводила к повышению содержания гексозаминов в слизистой желудка на 53,2% по сравнению с нелеченной группой. При этом оно оказалось выше значений группы, леченной Т-активином, на 23,7% и ниже контроля и нормы на 19,0 и 25,8% соответственно. На 14 день лечения содержание гексозаминов не отличалось от их уровня в нелеченной группе и в группе, леченной Т-активином. При этом оно оказалось статистически значимо ниже по сравнению с нормой и контролем на 20,0 и 19,0% соответственно. И, наконец, на 21 сутки лечения Лакто Флором в дозе 1,5 мг/кг массы тела содержание гексозаминов оказалось выше, чем у группы без лечения и группы, леченной Т-активином, на 35,2 и 30,6% соответственно. Значения содержания гексозаминов в данный срок исследований были на уровне контроля и нормы.

При лечении животных в течение 7 суток Лакто Флором в дозе 15 мг/кг массы тела наблюдалось статистически значимое повышение содержания гексозаминов на 39,5% по сравнению с нелеченной группой. При этом оно оказалось ниже контроля и нормы на 26,2 и 32,5% соответственно и статистически значимо не отличалось от значений групп, леченных Т-активином и Лакто Флором в дозе 1,5 мг/кг массы тела. На 14 сутки лечения Лакто Флором в дозе 15 мг/кг массы тела содержание гексозаминов статистически значимо не отличалось от значений ни одной из изученных групп. На 21 сутки лечения содержание гексозаминов оказалось на уровне значений группы без лечения и значений, наблюдаемых в группе лечения Т-активином. При этом оно оставалось ниже значений интактной, контрольной и группы лечения Лакто Флором в дозе 1,5 мг/кг массы тела на 21,6, 31,9 и 27,7% соответственно.

Таким образом, результаты исследований свидетельствуют об эффективности Лакто Флора в повышении содержания гексозаминов в слизистой желудка крыс с ЯБЖ. Коррегирующий эффект Лакто Флора и в данном случае аналогичен случаю с гексозами, более выражен в малых дозах и несколько превышает эффект препарата сравнения Т-активина.

В пятой главе приводятся результаты исследований эффекта биопрепарата на иммуногенез при остром токсическом гепатите и гемолитической анемии - на моделях вторичных иммунодефицитов.

Острый токсический гепатит вызывали с помощью четыреххлористого углерода (ССL₄). У мышей с ОТГ в селезенке формируется в 5,5 раза меньше АОК, чем в контроле. Инъекция иммунодефицитным мышам Лакто Флора в дозе 1,5 и 15 мг/кг в 2,1 и 4,5 раза соответственно повышает число АОК. Т-активин в 2,2 раза повышает число АОК в селезенках мышей с ОТГ, т.е. в той же степени, что и Лакто Флор в дозе 1,5 мг/кг.

...