Влияние витаминов А, Е, С и Р на липидпероксидацию, плазменное содержание маркеров взаимодействия тромбин-фибриноген и толерантность к тромбину

Размещено на http://www.allbest.ru/

На правах рукописи

03.00.04 - биохимия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени

кандидата медицинских наук

ВЛИЯНИЕ ВИТАМИНОВ А, Е, С и Р НА ЛИПИДПЕРОКСИДАЦИЮ, ПЛАЗМЕННОЕ СОДЕРЖАНИЕ МАРКЕРОВ ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ ТРОМБИН-ФИБРИНОГЕН И ТОЛЕРАНТНОСТЬ К ТРОМБИНУ

(экспериментальное исследование)

Миневцев Сергей Васильевич

Тюмень - 2006

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении Высшего профессионального образования «ТЮМЕНСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ МЕДИЦИНСКАЯ АКАДЕМИЯ РОСЗДРАВА»

Научный руководитель: доктор медицинских наук, профессор Шаповалов Петр Яковлевич

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Камилов Фэликс Хусаинович

доктор медицинских наук, профессор Ральченко Ирина Викторовна

Ведущее учреждение: ГОУ ВПО «Омская государственная медицинская академия»

Защита состоится 2006 г. в 9:00 часов на заседании диссертационного Совета Д 212.274.07 в Тюменском государственном университете по адресу: 625003, г. Тюмень, ул. Пирогова, 3.

С диссертацией можно ознакомиться в читальном зале библиотеки Тюменского государственного университета

Автореферат разослан 2006 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор биологических наук, профессор Е.А.Чирятьев

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования. С середины прошлого столетия взгляд на витамины, как средства профилактики и лечения гиповитаминозов, сменился представлением о них, как о соединениях, участвующих в течении обменных процессов и определяющих устойчивость организма [Б.А.Лавров, 1957; В.В.Ефремов, 1964; М.И.Смирнов, 1974], что расширило область их применения. Наряду с состояниями, вызванными дефицитом витаминов, их используют в терапии многих заболеваний, в частности, сопровождающихся, нарушениями гемостаза. В последние десятилетия обращено внимание на эффективность витаминов при гемостатических нарушениях, сопряженных с оксидативным стрессом. Особенно эффективными оказались витамины, обладающие антиоксидантными свойствами [С.Л. Галян, 1993; В.Г.Соловьев, 1997; А.А.Вакyлин, 1998; А.Ш.Бышевский и др. 1994-2005; Loscialpo, 1959; Pool, 1962 и др.]. Большая часть исследований касается связи с гемостазом витаминов-антиоксидантов [И.Е. Попова, И.А.Мухачева, 1998; Е.А.Винокурова, 1999; В.Г.Соловьев, 1997; А.В.Соловьева, 1999; Т.П.Шевлюкова, 2000: С.Л.Галян и др., 2003; П.Я.Шаповалов и др. 2005; Н.Н.Зороастрова, 2006]. Сравнивая данные 40-60 гг. о влиянии некоторых витаминов на гемостаз без учета их антиоксидантных свойств с сообщениями трёх последних десятилетий, мы не нашли сведений, которые позволили бы сопоставить влияние витаминов А, Е, С и Р порознь и в сочетаниях на гемостаз со степенью их влияния на интегральный показатель состояния гемостаза, отражающий способность организма реагировать на повышение уровня тромбина в кровотоке - на толерантность к тромбину. Отсутствуют и сведения о влиянии витаминов на интенсивность непрерывного внутрисосудистого свертывания крови (НВСК) - величины обратной толерантности к тромбину [А.Ш.Бышевский и др., 2003-2006]. Это определило интерес к вопросам, не изучавшимся до настоящего времени или едва затронутым в ранее опубликованных работах и позволило сформулировать направление нашего исследования.

Цель исследования - в опытах на животных изучить влияние витаминов А, Е, С, Р (порознь и сочетано в дозах, адекватных лечебным) и комплексных препаратов, содержащих эти витамины, на интенсивность липидпероксидации (ЛПО), антиоксидантный потенциал (АОП), плазменное содержание маркеров взаимодействия тромбин-фибриноген (ВТФ) и толерантность к тромбину, с тем, чтобы оценить их эффективность в качестве средств воздействия на интенсивность внутрисосудистого свертывания крови при гипероксидации.

Задачи исследования. Для достижения цели намечено следующее: 1. Изучить в опытах на животных влияние витаминов А, Е, С и Р порознь в дозах, адекватных лечебным, на содержание в тромбоцитах первичных и вторичных липидпероксидов и антиоксидантный потенциал. 2. Одновременно изучить в тех же условиях плазменное содержание маркеров взаимодействия тромбин-фибриноген. 3. На высоте изменений скорости ЛПО и АОП определить у животных, получающих исследуемые витамины, а также комплексы, их содержащие, толерантность к тромбину. 4. Повторить опыты пп. 1-3, вводя животным витамины А и Е, А и С в сочетании по два, по три и по четыре, компливит, содержащий все перечисленные витамины, а также селмевит, содержащий кроме того, селен. 5. Сопоставить графически степень изменений ЛПО и АОП со степенью изменений плазменного уровня маркеров ВТФ и толерантностью к тромбину.

Научная новизна. 1. Анализ данных литературы позволил установить, что среди коагулоактивных витаминов преобладают те из них, которые в соответствие с особенностями структуры могут играть роль ловушек свободных радикалов, или выступать в качестве протекторов энзимов, молекула которых содержит сульфгидрильные группы.

2. Установлено, что в условиях эксперимента витамины А, Е, С и Р, вводимые порознь в дозах, адекватных (эквивалентных) лечебным, в небольшой степени повышают антиоксидантный потенциал и снижают интенсивность взаимодействия тромбин-фибриноген в кровотоке, т.е. интенсивность непрерывного внутрисосудистого свертывании. На фоне гипероксидации, вызываемой введением прооксиданта, этот эффект становится выразительнее.

3. Показано, что по степени влияния на липидпероксидацию и на интенсивность внутрисосудистого свертывания крови в физиологических условиях и на фоне оксидативного стресса витамины ранжированы следующим образом: Е > А > С > Р.

4. Впервые показано, что в сочетаниях по два наблюдается выраженная в разной степени неполная суммация их влияния на липидпероксидацию, внутрисосудистое свертывание крови и толерантность к тромбину: А+Е > Е+С > Е+Р > А+С+ А+ Р > С+Р, а в сочетаниях по четыре или по три: А+Е+С+Р > А+Е+С = А+Е+Р > Е+С+Р > А+С+Р. 5. Установлено, что ограничение липидпероксидации витаминами А, Е, С или Р, вводимыми порознь и в различных сочетаниях, сопровождается пропорциональным снижением содержания плазменных маркеров ВТФ и повышением толерантности к тромбину. 6. Поливитаминные препараты компливит и селмевит, включающие, наряду с другими, витамины А, Е, С и Р, в дозах, адекватных лечебным, влияют в том же направлении, но несколько более выражено. витамин липидпероксидация антиоксидантный внутрисосудистый

Практическая значимость работы. 1.Так как витамины А, Е, С и Р в сочетаниях, а также компливит или селмевит оказывают влияние на липидпероксидацию, антиоксидантный потенциал и взаимодействие тромбин-фибриноген, следует при их использовании при гипероксидации для ограничения скорости внутрисосудистого свертывания крови, следует учитывать специфические особенности отдельных витаминов, т.е. при конкретном заболевании предпочитать ту или иную комбинацию витаминов. 2. При наблюдении за состоянием организма при заболеваниях, сопровождающихся гипероксидацией и одновременно ускорением внутрисосудистого свертывания крови, желательно контролировать состояния ЛПО и АОП в тромбоцитах.

На защиту вынесены следующие основные положения:

1. Витамины Е, А, С и Р порознь в дозах, адекватных лечебным, снижают интенсивность перекисного окисления липидов и повышают антиоксидантный потенциал в тромбоцитах, уменьшают плазменное содержание маркеров ВТФ и повышают толерантность животных к тромбину, что особенно выражено на фоне воздействия, ускоряющего липидпероксидацию. 2. Ранжировка витаминов по силе эффекта такова: Е > А > С > Р. Наиболее эффективны сочетания, включающие витамины Е+А, затем Е+С или Е+Р и сочетание А+С или А+Р. В сочетаниях по три или по четыре эффективность повышается: Е+А+С+Р > Е+А+С = Е+А+Р > А+С+Р. 3. Изменения плазменного содержания маркеров взаимодействия тромбин-фибриноген в изученных экспериментальных ситуациях пропорциональны изменениям скорости ЛПО и обратнопропорциональны степени изменения антиоксидантного потенциала в тромбоцитах. Изменения толерантности к тромбину противоположны по направлению изменениям скорости липидпероксидации и сдвигам в содержании маркеров взаимодействия тромбин-фибриноген. 4. Компливит и селмевит значительнее, чем витамины Е, А, С, Р и их сочетания ограничивают ЛПО, повышая АОП и толерантность к тромбину (более эффективен селмевит, видимо, за счет присутствия селена).

Апробация и публикации. Фрагменты работы доложены на Межрегиональной научно-практической конференции биохимиков Урала, Поволжья и Западной Сибири (Самара, 2005), региональной научно-практической конференции «Экологическое образование и здоровый образ жизни» (Сургут, 2005), работа в целом рассмотрена на заседании Тюменского отделения Общества биохимиков (Тюмень, 2005) и Тюменского регионального отделения РАЕ (Тюмень, 2006). Результаты исследований отражены в 9 публикациях: 5 статей в журнале «Медицинская наука и образование Урала», тезисы докладов региональной научно-практической конференции «Экологическое образование и здоровый образ жизни» (г. Сургут), 2 главы в книгах «О роли щитовидной железы в регуляции гемостаза» (Москва: Медицинская книга, 2006) и «Витамины, внутрисосудистое свертывание крови и липидпероксидация» (Москва: Медицина, 2006).

Структура и объем работы. Диссертация изложена на 130 страницах формата А4, фактические данные представлены в 12 таблицах, результаты графического анализа - 15 рисунков. Работа включает «Введение», «Обзор литературы» и разделы «Материалы и методы исследований», «Результаты исследований», «Обсуждения результатов и заключение», «Выводы», а также список использованной литературы(309 источников).

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Эксперименты проведены на нелинейных белых крысах-самцах (504 особи массой 17516 г). За 4-5 дней до опыта животных с обычного рациона (злаки, овощи, сено) переводили на рацион вязкой консистенции (100 г/кг массы тела, каша из смеси ячменной и овсяной круп с растительным маслом). Витамины и ацетат свинца вводили утром с Ѕ суточной порции рациона. После поедания этой части в кормушки вносили остаток, что обеспечивало полное потребление исследуемых добавок.

Выбор крыс связан с тем, что воздействия на гемостаз изучали чаще на этих животных [Б.А.Кудряшов, 1975; С.Л.Галян, 1993, В.Г.Соловьев, 1997; П.Я.Шаповалов, 2000]. На них же изучали влияние на гемостаз воздействий, модифицирующих ЛПО [П.Я.Шаповалов, 2000-2003; А.Ш.Бышевский и др. 2000-2006; Т.П.Шевлюкова, 2000; В.В.Юдин, 2002]. Формируя группы, учитывали индивидуальные колебания изучавшихся показателей - значения у не должны превышать 5-6% от средневзвешенной (М) в изучаемом ряду (обычно 6-7 особей в группе). Эффекты сезона и метеоусловий исключали вводя контроль в каждую серию опытов. Пробы крови брали из яремной вены в шприц со стабилизирующим раствором, соблюдая гемостазиологические правила [В.П.Балуда и др., 1980], наркоз - диэтиловый эфир. В плазме крови определяли маркеры ВТФ. При их выборе ориентировались на данные литературы [З.С.Баркаган, А.П.Момот, 1999; В.П.Скипетров и др., 1999; Д.М.Зубаиров, 2000; И.Н.Бокарев, 2001а, б, в; 2002; Е.А.Матейкович, 2004, 2005; Н.К.Вереина и др., 2005]: 1.Содержание растворимых комплексов мономерного фибрина (РКМФ) - по описанию [А.П.Момот и др., 1999]; 2. Содержание продуктов деградации фибрина (ПДФ) - показатель интенсивности фибринолиза, усиливающегося при ускорении ВТФ - определение по описанию [А.Ш.Бышевский и др. 1991]; 3. Содержание D-димеров - показатель интенсивности фибринолиза, косвенно отражающий скорость ВТФ (метод латексной агглютинации с моноклональными антителами к D-димерам - набор «D-dimer test» фирмы Roche [З.С.Баркаган, А.П.Момот, 1999]). 4. Содержание ф. Р3, уровень которого в плазме растет при ускорении НВСК потому, что контакт тромбин-тромбоциты, вызывает деструкцию плазматических мембран тромбоцитов. Определения - по разнице показателей АВР в нормальной и бестромбоцитной плазме [Rabiner & Groder в описании В.П.Балуды и др., 1980]. 5.АВР определяли по описанию [Г.Н.Детинкина и др. 1984 а, б]; 6. Ф.Р4 плазмы определяли по разнице во времени между свертыванием в системе (нормальная обедненная тромбоцитами плазма+0,14М NaCl + гепарин + тромбин) и системе (нормальная обедненная тромбоцитами плазма + такая же прогретая исследуемая плазма + гепарин + тромбин) [В.П.Балуда и др., 1980]. 7. Плазменную концентрацию фибриногена, реагирующего на тромбин - величину, зависимую от интенсивности ВТФ - по описанию [А.Ш.Бышевский, В.Мохнатов, 1969].

Для оценки толерантности к тромбину использовали недавно разработанный способ [А.Ш.Бышевский и др., 2003], включающий такие операции: 1. Раствор тромбина (активность 25 с по времени свертывания 0.2% раствора фибриногена) вводят в яремную вену фиксированной крысы после её пробуждения от наркоза (1 мл/кг массы тела); 2.Через 30 мин после инъекции тромбина из яремной вены другой стороны берут пробу крови (0.9 мл в шприц с 0.1 мл 3.8% раствора трехзамещенного цитрата натрия); 3.В плазме крови определяют содержание свертываемого тромбином фибриногена.

Степень изменение содержания фибриногена - мера толерантности к тромбину. Специфичность результата определена тем, что фибриноген - основной субстрат тромбина [А.Ш.Бышевский и др., 1990; Д.М.Зубаиров, 2000], и тем, что изменения содержания фибриногена, реагирующего на тромбин, зависят от состояния систем, ответственных за выживание организма при гипертромбинемии [Б.А.Кудряшов, 1960; В.П.Балуда и др., 1994; Д.М.Зубаиров, 2000].

Расчет выполняли по формуле, включающей концентрацию фибриногена в плазме интактных крыс (исходная концентрация), и его концентрацию через 0.5 ч после введения тромбина (остаточная концентрация):

D = {1- [(Ск - Со) : Ск]} х 100,

где D - остаточная концентрация фибриногена, %; Ск - концентрация ФГ у крыс, которым тромбин не вводили (%); Со - концентрация ФГ (%) у крыс, которым ввели тромбин после изучающегося воздействия.

Остаточную концентрацию фибриногена у крыс, которым тромбин ввели без предварительных воздействий, принимали за 100-процентную толерантность к тромбину, и устанавливали изменение толерантности в % (при данном воздействии) по формуле

Х% = (Do : Dк) х 100,

где X - толерантность к тромбину ( %), Do - остаточная концентрация фибриногена (%) у крыс, подвергавшихся воздействию, Dк - остаточная концентрация (%) у крыс, не подвергавшихся изучаемому воздействию (контроль).

Тромбоциты выделяли и отмывали по описанию [А.Б.Самаль и др., 1990]. Липиды экстрагировали 100-кратным избытком смеси (1:1) гептана и изопропилового спирта. Содержание ДК устанавливали по оптической плотности ( - 232 нм) фазы, их содержащей. Содержание ТБК-продуктов определяли флуорометрически по интенсивности флуоресценции ( возбуждения 510 нм, флуоресценции - 535 нм) [В.Н.Ушкалова и др., 1987] с помощью флуориметра “Биан 130”.

Как прооксидант вводили ацетат свинца, в малой степени изменяющий гемостаз у здоровых животных, но изменяющий ЛПО и АОП [С.Л.Галян, 1993; В.Г.Соловьев, 1997; Р.Г.Алборов, 2004]. Дозы и сроки введения свинца (выбраны на основании ранее полученных данных) - 50 мг/кг в виде ацетата свинца [И.В.Ральченко, 1998]. Об АОП судили по скорости окисления (СО) и периоду индукции (ПИ). В совокупности эти показатели характеризуют АОП [В.Н.Ушкалова и др., 1987].

Изучали эффект, вызываемый лечебными дозами витаминов, точнее - дозами, адекватными (или эквивалентными) лечебным: величину суточной потребности крысы в витамине множили на частное от деления суточной лечебной дозы человека на его суточную потребность. Этот приём используют при изучении влияния витаминов на гемостаз [А.Ш.Бышевский, 1966, 1978; В.В.Баканская, 1980; В.Г.Соловьев, 1993; С.Л.Галян, 1997; П.Н.Шараев, 2004; Е.А. Матейкович, 2005]. Основанием для определения дозы, адекватной лечебной, служит то, что для крыс потребность в витаминах изучена, а в качестве лечебной дозы используется эквивалент лечебной дозы у человека, для которого известны и суточная потребность, и лечебная доза. На основании такого расчета суточная лечебная доза для витамина А - 1,8, витамина Е - 1,5, витамина С - 450, витамина Р - 200 мг на кг массы тела. При изучении сочетаний, каждый из витаминов входил в сочетание в количестве, адекватном лечебной дозе. Лечебные дозы для официнальных препаратов компливита и селмевита рассчитывали по витамину А - в суточной дозе препарата для крыс содержалось 1,8 мг витамина А.

Некоторые детали отдельных экспериментов приведены при их описании.

Результаты, выраженные количественно, анализировали приёмами вариационной статистики для малых рядов наблюдений, вычисляя среднюю арифметическую (М), среднюю ошибку средней арифметической (m) и среднеквадратическое отклонение (у). Достоверность отличий оценивали по доверительному коэффициенту Стьюдента (t) и степени вероятности (р). Сопоставляя интенсивные показатели, использовали альтернативное варьирование, рассчитывая те же величины. Различия оценивали как достоверные при величине р < 0,05. В работе приведены величины М и m. Графический анализ данных проводили в системе Microsoft Graf (приложение MS Word 98).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Влияние витаминов А, Е, С и Р на ЛПО и АОП в тромбоцитах и плазменное содержание маркеров ВТФ изучали в серии опытов, включавшей 5 групп по 21 особи: группа 1-я - контроль, группы 2-я, 3-я, 4-я и 5-я получали витамины А, Е, С или Р 1 раз в сутки. На 10, 20 и 30-й день у крыс брали пробы крови. Как следует из данных табл. 1, в физиологических условиях витамины-антиоксиданты в малой мере снижают интенсивность ЛПО и повышают АОП в тромбоцитах, что сопровождается достоверным, но не небольшим снижением содержания маркеров ВТФ в плазме крови.

Таблица 1 - Состояние ЛПО и АОП в тромбоцитах, плазменное содержание маркеров ВТФ у крыс, получавших витамины в дозах, адекватных лечебным (верхняя строка-10, вторая сверху - 20 и третья сверху - 30 дней, n в группе - 7х3 = 21)

Обозначения здесь и в остальных таблицах: ДК - диеновые конъюгаты, ТБК - продукты, реагирующие с тиобарбитуровой кислотой, ПИ - период индукции, СО - скорость окисления, *-ФГ - фибриноген, ЛП - липид, ПДФ - продукты деградации фибрина, РКМФ - растворимые комплексы мономерного фибрина, D-Д - Д-димеры

Так как сдвиги, выявленные на 20-й день введения витаминов, сохранялись на том же уровне ещё и на 30-й день, в последующих экспериментах мы отбирали пробы крови после длившегося 20 дней введения витаминов.

Влияние вводимых порознь витаминов на толерантность к тромбину исследовали в эксперименте, проведенному по схеме, аналогичной описанной в преамбуле к табл. 1, отбирая пробы крови однократно на 20-й день от начала опыта. В табл. 2 видно, что введение витамина А или витамина Е привело к достоверному повышению толерантности к тромбину соответственно на 12 и на 18%.

Таблица 2 - Толерантность к тромбину (в %) у крыс, получавших витамины в дозах, адекватных лечебным, в течение 20 дней (n - 7 в группе)

*-Разница между повышением толерантности у крыс, получавших витамины А или Е, несущественна. Введение витаминов С или Р вызвало неподтверждаемую статистически тенденцию роста толерантности к тромбину.

Состояние ЛПО и АОП в тромбоцитах, плазменное содержание маркеров ВТФ и толерантность к тромбину на 20-й день введения витаминов А, Е, С или Р на фоне гипероксидации изучали на крысах (по 14 в группе) тех же кондиций. Пробы брали на 20-й день (дозы прежние). Различие: одновременно с витаминами животные подопытных групп получали ежедневно свинец (50 мг/кг) в виде ацетата. Контрольных групп было две - одна дополнений к рациону не получала (контроль I), вторая - получала свинец (контроль II). В плазме крови семи крыс определяли показатели состояния гемостаза, ЛПО и АОП, у остальных - толерантность к тромбину.

Из данных табл. 3 следует, что введение свинца ускорило ЛПО (рост содержания липидпероксидов) и снизило АОП (укорочение ПИ и рост СО). Это сопровождалось ростом содержания маркеров ВТФ (фф. Р3 и Р4, ПДФ, РКМФ и D-димеров в плазме), что свидетельствует об ускорении в кровотоке ВТФ, т.е. об ускорении НВСК. Подтверждение этому - снижение концентрации фибриногена.

У крыс, которые на фоне свинца получали витамин А, уменьшены сдвиги показателей состояния ЛПО и АОП.

Таблица 3 - Состояние ЛПО и АОП в тромбоцитах, плазменное содержание маркеров ВТФ и толерантность к тромбину на 20-й день введения витаминов А, Е, С или Р одновременно со свинцом (n - 6 в группе)

Обозначения: как к табл. 1; Т. к ТР. - толерантность к тромбину; знак * - достоверное отличие от контроля I, знак + - от контроля II.

У крыс, получавших свинец+витамин Е, степень уменьшения заметнее. У крыс, получавших витамин С или Р ограничения менее значительны, чем у 2-й и 3-й групп.

Витамин А ограничил прирост бьльшей части маркеров ВТФ. Ещё заметнее это у крыс, получавших витамин Е. Изменения невелики и примерно одинаковы у крыс, получавших витамины С или Р. Степень снижения толерантности к тромбину, вызываемой свинцом, наименее значительна на фоне витамина Е, затем витамина А, витаминов С или Р (в примерно одинаковой мере).

Таким образом, по влиянию на ЛПО и АОП витамины мало разнятся (в дозах, адекватных лечебным) при отсутствии дополнительных воздействий. По степени влияния на ЛПО и АОП на фоне прооксиданта те же витамины располагаются в последовательности: Е > А > С или Р (витамины С и Р в примерно равной степени ограничивают сдвиги, вызванные свинцом).

ЛПО и АОП в тромбоцитах, плазменное содержание маркеров ВТФ и толерантность к тромбину на 20-й день введения витаминов А, Е, С или Р в сочетаниях.

А. Крысы получали все возможные сочетания по два витаминов А, Е, С и Р, не подвергаясь дополнительным воздействиями. На 20-й день взяты пробы крови.

Из данных табл. 4 и 5 видно, что в комбинации по два витамины заметнее, чем каждый из них порознь, ограничивают ЛПО и повышают АОП (снижение содержания ДК, ТБК-продуктов и СО заметнее, чем при введении витаминов порознь - сопоставьте данные таблиц 4 и 5 с данными табл. 1). Снизилось и содержание маркеров ВТФ.

Толерантность к тромбину при введении сочетаний витаминов растет заметнее, чем при раздельном введении. Наиболее выражена суммация эффектов у сочетания Е+А.

Сочетания Е+С, Е+Р и А+Р или А+С, а также С+Р в меньшей мере суммируют эффекты.

Таблица 4 - Состояние ЛПО и АОП в тромбоцитах, плазменное содержание маркеров ВТФ и толерантность к тромбину на 20-й день введения витаминов А+ Е, А+С, А+Р и Е+С (n - 7)

Обозначения: как к табл. 1; Т. к ТР. - толерантность к тромбину; знак * - достоверное отличие от контроля

Таблица 5 - Состояние ЛПО и АОП в тромбоцитах, плазменное содержание маркеров ВТФ и толерантность к тромбину на 20-й день введения витаминов Е+Р и С+Р (n - 7 и 7)

Обозначения: как к табл. 1; Т. к ТР. - толерантность к тромбину; знак * - достоверное отличие от контроля

В. По той же схеме на 20-й день после первого введения витаминов изучали влияние следующих сочетаний: витамины А+Е+С, А+Е+Р, Е+С+Р, А+С+Р и А+Е+С+Р (каждый из них в дозе, адекватной лечебной).

Из данных табл. 6 видно (при сопоставлении с таблицами 4 и 5), что во всех сочетаниях по три ограничение скорости ЛПО и изменения АОП (сдвиги ДК, ТБК, ПИ и СО) более выражены, чем при сочетаниях по два. Это наиболее заметно при сочетаниях Е+А+С и Е+А+Р.

Однако наиболее выраженный эффект найден у животных, которым вводили сочетание из четырех витаминов (А+Е+С+Р).

Таким же было влияние сочетаний по три на содержание маркеров взаимодействия тромбин-фибриноген: сочетание Е+А+С и Е+А+Р эффективнее других, однако, и в этом случае наиболее эффективно сочетание из четырёх витаминов.

В совокупности данные таблиц 1-6 позволяют отметить, что витамины А, Е, С и Р на фоне физиологической нормы сравнительно слабо тормозят ЛПО, и повышают АОП.

Под воздействием витаминов намечаются позитивные сдвиги и со стороны НВСК, оцениваемого по уровню маркеров ВТФ, который, хотя и в малой мере, снижается одновременно со снижением интенсивности ЛПО и ростом АОП. Толерантность к тромбину, напротив, растет.

Таблица 6 - Состояние ЛПО и АОП в тромбоцитах, плазменное содержание маркеров ВТФ и толерантность к тромбину на 20-й день введения витаминов А, Е, С и Р в сочетаниях по три или четыре (n - 7 и 7)

Обозначения: как к табл. 1; Т. к ТР. - толерантность к тромбину; знак * - достоверное отличие от контроля

На фоне воздействия, ускоряющего ЛПО и снижающего АОП (введение свинца), эффект витаминов заметнее - они сдерживают рост ЛПО и ограничивают снижение АОП, вызываемые свинцом, что сопровождается сдерживанием ускорения НВСК, сопровождающего гипероксидацию.

Снижение толерантности к тромбину сопровождает ускорение ВТФ при интенсификации ЛПО, а рост толерантности к тромбину происходит при снижении скорости ЛПО, вызываемой исследуемыми витаминами.

Сочетания витаминов А, Е, С и Р по два, по три и особенно по четыре влияет на содержание маркеров ВТФ и толерантность к тромбину существеннее, чем каждый из них порознь.

Принимая во внимание это положение, а также тот факт, что на фоне гипероксидации эффект витаминов становится заметнее, мы провели эксперименты, рассматриваемые ниже.

Состояние ЛПО и АОП в тромбоцитах, плазменное содержание маркеров ВТФ и толерантность к тромбину на 20-й день введения витаминов А, Е, С или Р в различных сочетаниях одновременно с прооксидантом свинцом. Опыты этой серии из-за большого числа подопытных групп проведены в два этапа - 1) эффекты сочетаний витаминов по два, 2) по три и по четыре. Как группу сравнения (эффекты витаминов, вводимых порознь на фоне свинца), использовали результаты опытов, представленных в табл. 3 - значения определявшихся показателей в контрольных группах табл. 3 (Контроль I и Контроль II) близки найденным в описываемых ниже экспериментах. Свинец, как и ранее, вводили ежедневно (50 мг/кг) с суточной порции рациона в виде ацетата, витамины в сочетаниях - каждый в дозе, адекватной лечебной.

Эффект сочетаний витаминов по два (табл. 7 и 8) на фоне прооксиданта значительнее, чем их эффект в отсутствии прооксиданта (сопоставить с табл. 4).

Эффект сочетания Е+А с витаминами С или Р не намного выше, чем эффект сочетания А+Е (сопоставить с табл. 3).

Сочетание витаминов Е+А действует заметнее, чем эти же витамины порознь,это подтвеждается в опытах без использования пероксиданта.

Таблица 7 - Состояние ЛПО и АОП в тромбоцитах, плазменное содержание маркеров ВТФ и толерантность к тромбину на 20-й день введения витаминов А+ Е, А+С, А+Р и Е+С одновременно со свинцом (n - 7 и 7 в группе)

Обозначения: как к табл. 1; Т. к Т. - толерантность к тромбину; знак * - достоверное отличие от контроля I, знак + - от контроля II.

Таблица 8 - Состояние ЛПО и АОП в тромбоцитах, плазменное содержание маркеров ВТФ и толерантность к тромбину на 20-й день введения витаминов Е+Р или С+Р одновременно со свинцом (n - 7 и 7 в группе)

Обозначения: как к табл. 1; Т. к Т. - толерантность к тромбину; знак * - достоверное отличие от контроля I, знак + - от контроля II.

Результаты экспериментов с введением на фоне свинца сочетаний витаминов по три и по четыре, представлены в табл. 9.

Здесь видно, что в сочетаниях по три витамины влияют на все показатели чуть заметнее, чем в сочетаниях по два. Особенно это касается результатов эксперимента с введением сочетания четырёх витаминов - заметнее ограничены сдвиги липидпероксидации и показателей состояния антиоксидантного потенциала, вызываемые введением прооксиданта, так и сдвиги содержания маркеров взаимодействия тромбин-фибриноген, заметно увеличивающиеся при введении прооксиданта. То же относится и к изменению интегрального показателя - толерантности к тромбину.

В итоге можно заметить, что сочетания витаминов А и Е весьма заметно ограничивают изменения ЛПО и АОП, а также изменения ВТФ и толерантности к тромбину, возникающие под влиянием прооксиданта. Дополнение этого сочетания витаминами С или Р несколько усиливает названный эффект, что становится ещё более заметным при использовании сочетания всех четырёх витаминов.

Таблица 9 - Состояние ЛПО и АОП в тромбоцитах, плазменное содержание маркеров ВТФ и толерантность к тромбину на 20-й день введения витаминов А, Е, С и Р в сочетаниях по три или по четыре одновременно со свинцом (n - 7 и 7 в группе)

Обозначения: как к табл. 1; Т. к Т. - толерантность к тромбину; знак * - достоверное отличие от контроля I, знак + - от контроля II.

ЛПО и АОП в тромбоцитах, плазменное содержание маркеров ВТФ и толерантность к тромбину на 20-й день введения официнальных антиоксидантов компливита и селмевита одновременно с прооксидантом свинцом и без него.

А. Вначале крысам вводили компливит или селмевит в составе обычного рациона питания. Суточная доза обоих витаминных комплексов - 1.8 мг/кг (по витамину А). В связи со сравнительно недавним применением этих препаратов приводим их состав:

Таблица 10 - Состав компливита и селмевита в пересчете на 1 таблетку

На 20-й день опытов обнаружено, что введение компливита (табл. 11) замедлило ЛПО, снизив содержание ДК, ТБК и повысило АОП (удлинение ПИ и рост СО) в тромбоцитах.

Таблица 11 - Состояние ЛПО и АОП в тромбоцитах, плазменное содержание маркеров ВТФ у крыс, получавших ежедневно компливит или селмевит в дозах, содержащих 1.8 мг витамина А на кг массы тела

Обозначения: как к таблицам 1 и 2

Одновременно наблюдалось достоверное снижение содержания всех определявшихся маркеров ВТФ - фф. Р3 и Р4, ПДФ, РКМФ и D-димеров. Степень изменения показателей несколько выше той, которую находили при введении комбинации витаминов А+Е+С+Р. Заметне...